CN108699596A

CN108699596A - 检测、定位和监测水工建筑物渗漏和泄漏的方法

Info

Publication number: CN108699596A
Application number: CN201680078700.XA
Authority: CN
Inventors: 王珠银; 申明霞; 蒋林华
Original assignee: Hunan Zhongsheng Whole Peptide Biochemical Co Ltd
Current assignee: Hunan Zhongsheng Whole Peptide Biochemical Co Ltd
Priority date: 2016-01-26
Filing date: 2016-01-26
Publication date: 2018-10-23
Also published as: EP3390670A4; EP3390670A1; US20210214788A1; WO2017128041A1

Abstract

本发明涉及一种高灵敏度检测、定位和监测水利工程中液体渗漏和泄漏的改进方法，所述方法，包括：利用DNA序列作为探针，跟踪水利工程中液体的渗漏和泄漏；捕捉所述探针，然后通过聚合酶链式反应(PCR)等酶法将所述探针扩增100万倍以上，以生成检测信号；通过酶扩增，即使单分子DNA探针也可被检测到，从而实现了高灵敏度的检测。所述改进方法适用于水利工程中液体渗漏和泄漏的检测、定位和监测；所述改进方法还可用于如跟踪地下水、地下水径流以及其他液体的流动等。本发明中还描述了其他相关的方法。

Description

检测、定位和监测水工建筑物渗漏和泄漏的方法

技术领域

本发明涉及一种高灵敏度检测、定位和监测水利工程中液体渗漏和泄漏的改进方法。该方法，包括：利用DNA序列作为探针，跟踪水利工程中液体的渗漏和泄漏。捕捉探针，然后通过聚合酶链式反应(PCR)等酶法将探针扩增100万倍以上，以生成检测信号。通过酶扩增，即使单分子DNA探针也可被检测到，从而实现了高灵敏度的检测。该改进方法适用于水利工程中液体渗漏和泄漏的检测、定位和监测。该改进方法还可用于如跟踪地下水、地下水径流以及其他液体的流动等。

背景技术

水坝和水库等水利工程是有益于现代社会的重要资产，并且在人类社会发展中发挥着重要作用(环境署2007年年报《英国大坝事故报告》)。水坝和水库具有供水、水力发电、灌溉、排水和防洪等重要用途(阿曼达·布兰妮《水坝与水库概览》；http：//geography.about.com/od/waterandice/a/damsreservoirs.htm)。然而，水坝和水库也具有巨大破坏性，可造成巨大破坏和生命损失。导致灾难性事故的一个主要原因与大坝和水库的渗水和管道失控有关，渗水和管道失控将对大坝的稳定性造成威胁(AIH Malkawi和MAl-Sheriadeh《大坝渗漏问题的评估与修复》)。研究实例：《卡夫林大坝》；工程地质学报，2000，56(3-4)：335-345。因此，早期检测发现水利工程中出现的渗漏和泄漏对防止其恶化，避免大坝发生灾难性事故非常重要。

过去，盐、颗粒物、染料和荧光染料等多种物质曾被用作示踪剂来跟踪水流径或检测大坝渗漏问题，但是，它们有一个共同缺点，那就是灵敏度不够并且所需数量通常巨大。

后来，由于放射性易于进行检测，且可发射放射线的放射性物质的需求量相对较少，因而，放射性同位素被用作了示踪剂(《化学：普通化学、有机化学和生物化学导论》(第1.0版)第11.4节放射线同位素的用途)。在天然气生产中，放射线示踪剂曾被成功用于判断水力压裂产生的裂缝的位置(里斯·约翰·C《石油环境控制工程》，1976年，海湾专业出版社)。

虽然，现在在许多不同领域中均普遍采用放射线同位素作为有效的示踪剂，但是，放射线同位素作为示踪剂使用时还存在一些缺陷。其中的一些缺陷包括安全隐患、放射线废物的生成、生物毒性以及放射线衰变导致信号随时间消减等。此外，放射线同位素所需的生产、运输、使用和处理成本也是一个问题。

因此，仍然需要一种更安全、更具经济效益且灵敏度更高的跟踪方法来检测、定位和监测水利工程中出现的液体渗漏和泄漏。本发明的实施例即涉及这种灵敏性和安全性更高的水利工程液体渗漏和泄漏的检测、定位和监测方法。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种新的利用序列特异性核酸作为示踪剂来对液

体流动进行高灵敏度跟踪的方法。

本发明的一个目的是提供一种高灵敏度检测、定位和监测水利工程中液体渗漏和泄漏的方法。该方法，包括：(i)设计一个特定长度的特异性DNA序列；(ii)生产和将含该DNA序列的核酸用作探针，并将探针置于水利工程中的适当位置；(iii)从可能含有探针的特定位置采集样品；(iv)利用酶扩增法扩增样品中的探针；以及(v)测定样品中探针的数量或拷贝数，以分析水利工程中液体的渗漏和泄漏。

本发明的另一个目的是提供一种高灵敏度跟踪地下水或地下水径流流动的方法。该方法，包括：(i)设计一个特定长度的特异性DNA序列；(ii)生产和将含该DNA序列的核酸用作探针，并将探针置于地下水或地下水径流的适当位置；(iii)从可能含有探针的特定位置采集样品；(iv)利用酶扩增法扩增样品中的探针；以及(v)测定样品中探针的数量或拷贝数，对地下水或地下水径流的流动进行分析。

本发明的又一个目的是提供一种高灵敏度跟踪液体流动的方法。该方法，包括：(i)设计一个特定长度的特异性DNA序列；(ii)生产和将含该DNA序列的核酸用作探针，并将探针置于液体的适当位置；(iii)从可能含有探针的特定位置采集样品；(iv)利用酶扩增法扩增样品中的探针；以及(v)测定样品中探针的数量或拷贝数，对液体的流动进行分析。

本发明的再另一个目的是提供一种高灵敏度有效跟踪液体流动的方法。该方法，包括：(i)设计多个特定长度的特异性DNA序列；(ii)生产和将含这些DNA序列的核酸用作探针，并将探针置于液体的不同位置；(iii)从可能含有探针的特定位置采集样品；(iv)利用酶扩增法扩增样品中的探针；以及(v)测定样品中探针的数量或拷贝数，对液体的流动进行分析。

本发明还有一个目的是提供一种利用序列特异性核酸作为示踪剂来对液体流动进行高灵敏度跟踪的替代方法。与其他需要存在许多原子或分子才能进行检测的示踪剂不同，DNA示踪剂可通过酶扩增法将DNA序列单分子有效扩增100万倍以上，使其易于进行检测。因此，将DNA分子用作示踪剂时，可达到很高的灵敏度。换言之，将DNA分子用作示踪剂时，可实现单分子灵敏度水平的检测，而这将显著降低示踪剂的使用量。该方法的另一个优点在于可同时使用多个不同长度的DNA序列，从而进一步提高跟踪效率。

本发明的其他目的体现在原始权利要求中。本公开的实施例在下面的附图和说明书中有详细描述。结合说明书、附图和权利要求，本发明的其他特征、目的和优点将变得显而易见。

附图说明

通过结合附图将可更好地理解本发明的上述发明内容和下述详细说明。为了对本发明进行说明，附图中示出了当前优选的实施例。然而，应当理解的是，本发明并非仅限于所提供的附图。

在图中，

图1是根据本发明实施例的DNA示踪剂的DNA序列示意图；

图2是含DNA示踪剂的DNA序列的DNA载体的示意图；

图3是聚合酶链式反应流程图；以及

图4是通过聚合酶链式反应检测DNA分子的示意图。

具体实施方式

除非另有定义，否则本说明书中使用的所有技术和科学术语均具有本发明所属技术领域中普通技术人员所公知的相同含义。本说明书中提及的所有出版物和专利均通过引用并入本文中。

本发明的实施例涉及利用序列特异性核酸作为示踪剂来对液体流动进行高灵敏度跟踪的方法。在一个方面，本发明涉及利用序列特异性核酸作为示踪剂来使检测灵敏度显著提高。例如，本发明提供了一种改进的跟踪方法，凭借该方法，即使是样品中的DNA单分子也可通过聚合酶链式反应(PCR)等酶扩增法检测到。

本说明书中使用的术语“DNA”、“探针”、“示踪剂”、“核酸”、“载体”、“质粒”、“酶”、“液体”、“聚合酶链式反应(PCR)”、“渗漏”、“泄漏”、“管道”及”信号“具有广义上的涵义。

在一个通用方面，本发明涉及一种高灵敏度检测、定位和监测水利工程中液体渗漏和泄漏的方法。该方法，包括：(i)设计一个特定长度的特异性DNA序列；(ii)生产和将含该DNA序列的核酸用作探针，并将探针置于水利工程中的适当位置；(iii)从可能含有探针的特定位置采集样品；(iv)利用酶扩增法扩增样品中的探针；以及(v)测定样品中探针的数量或拷贝数，以分析水利工程中液体的渗漏和泄漏。

在另一个通用方面，本发明涉及一种高灵敏度跟踪地下水或地下水径流流动的方法。该方法，包括：(i)设计一个特定长度的特异性DNA序列；(ii)生产和将含该DNA序列的核酸用作探针，并将探针置于地下水或地下水径流的适当位置；(iii)从可能含有探针的特定位置采集试样；(iv)利用酶扩增法扩增试样中的探针；以及(v)测定试样中探针的数量或拷贝数，对地下水或地下水径流的流动进行分析。

在另一方面，本发明涉及一种高灵敏度跟踪液体流动的方法。该方法，包括：(i)设计一个特定长度的特异性DNA序列；(ii)生产和将含该DNA序列的核酸用作探针，并将探针置于液体的适当位置；(iii)从可能含有探针的特定位置采集试样；(iv)利用酶扩增法扩增试样中的探针；以及(v)测定试样中探针的数量或拷贝数，对液体的流动进行分析。

本发明的实施例涉及作为DNA探针或示踪剂的特定长度的特异性DNA序列。例如，如图1所示，可将一个含有特定序列的210个碱基对(bp)DNA的载体用作DNA探针或示踪剂。与无法扩增的传统探针或示踪剂相比，该DNA探针可通过酶扩增法扩增100万倍以上，使其易于进行检测。如图4所示，用一对引物通过PCR扩增载体的特异性DNA序列，之后可观测到一条清楚的DNA片段，这标明存在DNA示踪剂。

在本发明的一个实施例中，DNA探针或示踪剂包括核酸类中的一种，例如，包括但不限于选自单链DNA、双链DNA、环状单链DNA、环状双链DNA和质粒等。

本发明包括上述实施例的修改形式，以进一步提高核酸探针或示踪剂，这对本领域技术人员而言是显而易见的。这些修改包括但不限于：在核酸碱基上添加一个或多个化学基团；为核酸末端添加一个或多个化学基团；以及用硫代磷酸取代磷酸盐等。例如，可用硫原子取代DNA骨架的磷酸二酯键氧原子，并且得到的经修饰过的DNA表现出核酸酶抗性，从而使其具有更好的稳定性。

用作示踪剂的DNA序列包括核酸类中的一种，例如，包括但不限于选自自然界中存在的核酸、人工序列以及人工序列和自然界中存在的核酸的组合，这对本领域技术人员而言是显而易见的。

核酸探针可通过以下方法中的一种制备，例如，该方法包括但不限于：化学合成、扩增子PCR扩增、限制性核酸内切酶消化和质粒制备等，这对本领域技术人员而言是显而易见的。

核酸探针尺寸可在20bp至1000bp以上，这对本领域技术人员而言是显而易见的。

根据图3中所示实施例，质粒DNA(环状双链DNA)也可被用作探针或示踪剂。

在上述实施例中，本领域技术人员应当理解，质粒可通过细胞培养，如，任意规模大小的细菌培养进行制备，以提供数微克乃至数千克的DNA探针。

在上述实施例中，本领域技术人员应当理解，质粒探针或示踪剂可利用多对可能存在的引物通过PCR进行检测。

在上述实施例中，本领域技术人员应当理解，可同时使用多个核酸探针或示踪剂，然后利用多对可能存在的引物通过PCR进行检测。

在本发明的另一个实施例中，核酸探针或示踪剂可通过酶法扩增，从而实现高灵敏度检测。酶法包括但不限于热循环法和等温法等。

在上述实施例中，本领域技术人员应当理解，热循环法可包括但不限于：PCR、实时PCR、多重PCR、单分子PCR(SM-PCR)、降落PCR和梯度PCR等。

在上述实施例中，本领域技术人员还应当理解，等温法包括但不限于：链置换扩增、自主序列复制、滚环扩增、环介导等温扩增和依赖解旋酶的扩增等。

在上述实施例中，本领域技术人员应当理解，酶扩增法中的DNA含量与样品中核酸探针的拷贝数量是成比例的，因此，酶扩增中的DNA含量可用于对流体的流动进行分析和测定。

在上述实施例中，本领域技术人员还应当理解，样品中的核酸探针可被捕获、富集或浓缩，以进一步增加检测灵敏度。例如，捕捉或浓缩方法包括但不限于：乙醇沉淀、磁珠结合和膜结合等。

虽然对本发明的多个实施例进行了描述，但是，应当注意的是，对这些具体实施例的描述仅仅是为了对本发明构思的原理进行说明。因此，可在不脱离本发明的精神和范围的情况下对本公开实施例做各种修改，对本领域技术人员而言是显而易见的。

以下具体示例将对本发明的本质做进一步说明，但是，需要理解的是，本发明并不仅限于这些示例。

示例

按照以下标准程序制备pUC57质粒(如图2中所示)：在LB培养基中培养pUC57DNA重组的大肠杆菌，并按照制造商说明书用Qiagen小量提取试剂盒(Qiagen)制备质粒。用洗脱缓冲液(10mM Tris，1mM EDTA，pH 8.0)洗脱质粒DNA，并通过260nm处的OD吸收值获得DNA浓度。

图4是通过聚合酶链式反应检测DNA分子的示意图。pUC57载体被用作使用正向引物(Pf：GGTGATGACGGTGAAAACCTC)和反向引物(Pr：TTTCTCCTTACGCATCTGTGC)的PCR扩增模板。PCR的操作步骤如下：在94℃下，变性1个循环5分钟；以下步骤40个循环：在94℃下，变性30秒；在60℃下，退火30秒；在72℃下，延伸30秒；最后在72℃下，延伸1个循环5分钟。然后，每个PCR样品中各取5μl PCR反应液与1μl 6X上样缓冲液混合，并进行2％琼脂糖凝胶电泳。观察到一条清晰的、约210bp的DNA条带(泳道1和泳道2)。泳道M为DNA分子标记。

pUC57质粒的DNA序列为：TCGCGCGTTTCGGTGATGACGGTGAAAACCTCTGACACATGCAGCTCCCGGAGACGGTCACAGCTTGTCTGTAAGCGGATGCCGGGAGCAGACAAGCCCGTCAGGGCGCGTCAGCGGGTGTTGGCGGGTGTCGGGGCTGGCTTAACTATGCGGCATCAGAGCAGATTGTACTGAGAGTGCACCATATGCGGTGTGAAATACCGCACAGATGCGTAAGGAGAAAATACCGCATCAGGCGCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAATTCGAGCTCGGTACCTCGCGAATGCATCTAGATATCGGATCCCGGGCCCGTCGACTGCAGAGGCCTGCATGCAAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGACGTCTAAGAAACCATTATTATCATGACATTAACCTATAAAAATAGGCGTATCACGAGGCCCTTTCGTC。

序列表

<110> 湖南中晟全肽生化有限公司

<120> 检测、定位和监测水工建筑物渗漏和泄漏的方法

<130> 18NJ2V0190068

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

ggtgatgacg gtgaaaacct c 21

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

tttctcctta cgcatctgtg c 21

<210> 3

<211> 2710

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

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attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 300

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atacgagccg gaagcataaa gtgtaaagcc tggggtgcct aatgagtgag ctaactcaca 600

ttaattgcgt tgcgctcact gcccgctttc cagtcgggaa acctgtcgtg ccagctgcat 660

taatgaatcg gccaacgcgc ggggagaggc ggtttgcgta ttgggcgctc ttccgcttcc 720

tcgctcactg actcgctgcg ctcggtcgtt cggctgcggc gagcggtatc agctcactca 780

aaggcggtaa tacggttatc cacagaatca ggggataacg caggaaagaa catgtgagca 840

aaaggccagc aaaaggccag gaaccgtaaa aaggccgcgt tgctggcgtt tttccatagg 900

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ccgaccctgc cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag cgtggcgctt 1080

tctcatagct cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc caagctgggc 1140

tgtgtgcacg aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt 1200

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agtatatatg agtaaacttg gtctgacagt taccaatgct taatcagtga ggcacctatc 1680

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tcacgctcgt cgtttggtat ggcttcattc agctccggtt cccaacgatc aaggcgagtt 2040

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aatgccgcaa aaaagggaat aagggcgaca cggaaatgtt gaatactcat actcttcctt 2520

tttcaatatt attgaagcat ttatcagggt tattgtctca tgagcggata catatttgaa 2580

tgtatttaga aaaataaaca aataggggtt ccgcgcacat ttccccgaaa agtgccacct 2640

gacgtctaag aaaccattat tatcatgaca ttaacctata aaaataggcg tatcacgagg 2700

ccctttcgtc 2710

Claims

1.一种高灵敏度检测、定位和监测水利工程中液体渗漏和泄漏的综合方法，所述方法，包括：利用DNA序列作为探针，捕捉所述探针并通过酶扩增法扩增所述探针。

2.一种高灵敏度检测、定位和监测水利工程中液体渗漏和泄漏的方法，所述方法，包括：(i)设计一个特异性DNA序列；(ii)使用含所述DNA序列的核酸作为探针，并将所述探针置于水利工程中的适当位置；(iii)采集可能含有所述探针的样品；(iv)利用酶扩增法扩增所述样品中的探针；以及(v)测定所述样品中探针的数量或拷贝数，以分析水利工程中液体的渗漏和泄漏。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，用作探针的所述DNA序列为存在于自然界中的序列。

4.根据权利要求2所述的方法，其中，用作探针的所述DNA序列为自然界中不存在的人工序列。

5.根据权利要求2所述的方法，其中，用作探针的所述DNA序列为天然序列与人工序列的组合。

6.根据权利要求2所述的方法，其中，含用作探针的DNA序列的所述核酸为双链核酸。

7.根据权利要求2所述的方法，其中，含用作探针的DNA序列的所述核酸为单链核酸。

8.根据权利要求2所述的方法，其中，含用作探针的DNA序列的所述核酸为化学合成核酸。

9.根据权利要求2所述的方法，其中，含用作探针的DNA序列的所述核酸为经过化学修饰的核酸。

10.根据权利要求2所述的方法，其中，含用作探针的DNA序列的所述核酸为线性核酸。

11.根据权利要求2所述的方法，其中，含用作探针的DNA序列的所述核酸为环状核酸。

12.根据权利要求2所述的方法，其中，含用作探针的DNA序列的所述核酸通过聚合酶链式反应(PCR)等酶法制成。

13.根据权利要求2所述的方法，其中，含用作探针的DNA序列的所述核酸最初由宿主细胞生成，所述宿主细胞选自细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞、真菌细胞、哺乳动物细胞和植物细胞。

14.根据权利要求2所述的方法，其中，所述酶扩增法为聚合酶链式反应(PCR)等热循环法。

15.根据权利要求2所述的方法，其中，所述酶扩增法为等温滚环扩增和多重置换扩增等等温扩增法。

16.根据权利要求2所述的方法，其中，多个DNA序列被同时用作跟踪水利工程中液体渗漏和泄漏的示踪剂。