CN108697691A - 法布雷病治疗剂、外用镇痛剂以及出汗增进剂 - Google Patents

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Abstract

本发明的一实施方式的法布雷病治疗剂、外用镇痛剂、以及出汗增进剂包含雷帕霉素或雷帕霉素衍生物。

Description

法布雷病治疗剂、外用镇痛剂以及出汗增进剂
技术领域
本发明涉及一种法布雷病治疗剂、外用镇痛剂以及出汗增进剂。
背景技术
法布雷病是一种遗传性疾病，由于先天性缺失溶酶体酶即α-半乳糖苷酶(α-Gal)，而导致其底物即三己糖基神经酰胺(GL-3)或半乳糖二糖基神经酰胺(GL-2)、血型B型糖脂等在非还原性末端具有半乳糖的糖脂贮积在溶酶体内，进而贮积在以血管内皮细胞、心肌细胞、神经节细胞为首的各种细胞，从而表现出与全身脏器有关的各种临床症状。
由于因GL-3等的贮积而使脏器受损，因而会出现心功能障碍、肾功能障碍、伴随有疼痛的神经症状、血管角化瘤、角膜混浊等各种症状。
因此，还会产生被认为是由皮肤或汗腺等附属器官的异常引起的法布雷病的症状。例如，出汗异常。尤其是在儿童患者的情况下，出汗减少会导致郁热或热性惊厥，并有导致脑病等重病的倾向。
普通的镇痛剂对治疗法布雷病的疼痛的效果很小。
血管角化瘤(angiokeratoma)是这种病症的代表性皮肤病变之一，经常发生在全身，变严重时，微小的刺激就会出血，且止血通常很困难。进而，也有出血部成为细菌等感染途径的例子。
作为对法布雷病的治疗，一直以来使用从外部补充缺失的酶的酶替代疗法(ERT)(非专利文献1)。
在专利文献1中，指出了TFEB磷酸化抑制剂对溶酶体贮积症的效果。并使用一般培养细胞来研究了含有雷帕霉素的各种化合物对溶酶体或与溶酶体相关分子带来的影响，但是记载了与Torin 1等其他化合物相比，雷帕霉素在除去贮积物方面效果很低。
专利文献2中记载了使用含有西罗莫司(雷帕霉素)的外用药对结节性硬化症进行治疗。专利文献3中记载了雷帕霉素能抑制发汗。
另外，非专利文献2中记载了神经纤维瘤患者口服雷帕霉素(西罗莫司)时镇痛效果不明确并且今后需要进一步研究。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本公表专利公报“特表2014-511391号(2014年5月15日公表)”
专利文献2：国际公开第2012/105521号刊(2012年8月9日公开)
专利文献3：国际公开第2015/199248号刊(2015年12月30日公开)
非专利文献
非专利文献1：Genetics and Molecular Biology,35,4(suppl),947-954(2012)
非专利文献2：Neuro Oncol.2015 Apr；17(4):596-603
发明内容
发明要解决的问题
以往用于治疗法布雷病的ERT，对法布雷病患者的症状，尤其是皮肤病变，没能获得充分效果。
本发明的一形态是鉴于所述现有的问题点而做出的，其目的在于，提供一种法布雷病治疗剂，能有效治疗法布雷病的症状，包括对以往治疗有抵抗性的皮肤病变及神经症状。
本发明的其他形态的目的在于，提供一种有效治疗疼痛的外用镇痛剂。
本发明的另一其他形态的目的在于，提供一种有效治疗出汗减少的(使出汗增加)治疗剂。
用于解决问题的手段
本发明人鉴于所述课题进行了锐意研究，结果发现雷帕霉素以及雷帕霉素衍生物作为法布雷病治疗剂是有效的，含有雷帕霉素以及雷帕霉素衍生物的外用药具有镇痛剂的效果，以及雷帕霉素以及雷帕霉素衍生物具有出汗增进剂的效果，并完成了本发明。
(1)一种法布雷病治疗剂，含有从由雷帕霉素以及雷帕霉素衍生物构成的组中选择出的至少一者作为有效成分。
(2)根据(1)所述的法布雷病治疗剂，所述雷帕霉素衍生物为从由依维莫司、替西罗莫司、42-(二甲基亚膦酰)雷帕霉素以及佐他莫司构成的组中选择出的至少一者。
(3)根据(1)或(2)所述的法布雷病治疗剂，其为外用药。
(4)根据(1)～(3)中任一项所述的法布雷病治疗剂，用于治疗法布雷病的皮肤病变。
(5)一种外用镇痛剂，含有从由雷帕霉素以及雷帕霉素衍生物构成的组中选择出的至少一者作为有效成分。
(6)根据(5)所述的外用镇痛剂，所述雷帕霉素衍生物为从由依维莫司、替西罗莫司、42-(二甲基亚膦酰)雷帕霉素以及佐他莫司构成的组中选择出的至少一者。
(7)一种出汗增进剂，含有从由雷帕霉素以及雷帕霉素衍生物构成的组中选择出的至少一者作为有效成分。
(8)根据(7)所述的出汗增进剂，所述雷帕霉素衍生物为从由依维莫司、替西罗莫司、42-(二甲基亚膦酰)雷帕霉素以及佐他莫司构成的组中选择出的至少一者。
(9)根据(7)或(8)所述的出汗增进剂，用于治疗无汗症或少汗症。
发明的效果
本发明的一形态具有治疗法布雷病的各种症状的效果、缓解及减轻疼痛的效果、以及针对少汗症或无汗症增进出汗的效果。
本发明的一实施方式的法布雷病治疗剂能够治疗在法布雷病患者的全身的脏器、组织中发生的病变。尤其作为包含皮肤病变(例如四肢疼痛、出汗减少、血管角化瘤)的法布雷病的症状的治疗剂很有效。如果将本发明的一实施方式的法布雷病治疗剂用作外用药，则对局部病变(例如皮肤病变)的治疗尤其有效。
本发明的一实施方式的法布雷病治疗剂、外用镇痛剂以及出汗增进剂能够直接涂抹在病变部，因而不需要像ERT那样频繁就诊，使用简单且能够较高地保持有效成分在病变部的浓度。
本发明的一实施方式的法布雷病治疗剂以及外用镇痛剂可以是局部制剂的形态，因而即使在病变部存在高浓度的有效成分，血液中的有效成分浓度也保持地较低，对生物体的不利影响(例如副作用)小，能够进行安全的治疗。
附图说明
图1中的(a)是示出雷帕霉素在野生型小鼠中的镇痛效果的图表。(a-1)表示对热刺激的镇痛效果，(a-2)表示对压力刺激的镇痛效果。图1中的(b)是示出雷帕霉素在野生型小鼠中的抑制发汗效果的图表。
图2中的(a)是示出雷帕霉素在野生型小鼠的汗腺中对活性型mTOR(p-mTOR)的表达的抑制效果的荧光染色图像。图2中的(b)是示出雷帕霉素在野生型小鼠的汗腺中对活性型mTOR(p-mTOR)的表达的抑制效果的蛋白质印迹的结果。
图3中的(a)是示出法布雷病模型小鼠的疼痛的阈值比野生型小鼠低(到逃避为止的时间比野生型小鼠短)的条形图。图3中的(b)是示出法布雷病模型小鼠中出汗减少的症状的条形图。图3中的(c)是示出在法布雷病模型小鼠的汗腺中促进了活性型mTOR(p-mTOR)的表达的荧光染色图像。
图4中的(a)是示出通过将雷帕霉素施用(投放、给药)给法布雷病模型小鼠来增加了疼痛阈值(到逃避为止的时间延长)的条形图。图4中的(b)是示出通过将雷帕霉素施用给法布雷病模型小鼠来增加了出汗的条形图。图4中的(c)是示出因施用雷帕霉素而在法布雷病模型小鼠的汗腺中抑制了p-mTOR的表达的荧光染色图像。
图5中的(a)是将法布雷病患者的血管角化瘤进行了苏木精-伊红染色后的染色图像。图5中的(b-1)是示出实施ERT前的血管角化瘤患部中的、p-mTOR的表达的荧光染色图像。图5中的(b-2)是示出实施了ERT后的血管角化瘤患部中的、p-mTOR的表达的荧光染色图像。在ERT治疗前后均示出了p-mTOR的表达。图5中的(c)是示出8年期间实施了ERT的血管角化瘤患部随时间变化的图像。
图6中的(a)是示出给野生型小鼠涂抹了雷帕霉素外用药时的镇痛效果的条形图。图6中的(b)～(d)是表示给健康人涂抹了雷帕霉素外用药时的镇痛效果的折线图。实线示出涂抹了0.4％雷帕霉素的结果，虚线示出仅涂抹了主剂的结果。
图7中的(a)是在野生型小鼠的肉垫中将神经元染色后的染色图像。图7中的(b)是在法布雷病模型小鼠的肉垫中将神经元染色后的染色图像。图7中的(c)是示出在给野生型小鼠和法布雷病模型小鼠涂抹了雷帕霉素后(24小时后)，BDNF(脑源性神经营养因子)在血液中的浓度的图表。通过施用雷帕霉素，法布雷病模型小鼠的血液中的BDNF增加。图7中的(d)是示出野生型小鼠的背根神经节的神经元因BDNF而伸长的显微镜图像。
图8中的(a)是示出钙离子流入人神经母细胞瘤衍生细胞(SK-N-MC)内的图像。分别是野生型细胞(左上)、施用了雷帕霉素的野生型细胞(右上)、α-gal A敲除细胞(左下)以及施用了雷帕霉素的α-gal A敲除细胞(右下)的结果。图8中的(b)是表示钙离子流入未处理细胞、α-gal A敲除细胞以及对照细胞的随时间变化的图表。图8中的(c)是表示钙离子流入施用了雷帕霉素的未处理细胞、施用了雷帕霉素的α-gal A敲除细胞、以及施用了雷帕霉素的对照细胞的随时间变化的图表。
图9是示出向野生型小鼠以及法布雷病模型小鼠施加热刺激时的大脑活性的MRI图像。分别是未治疗的小鼠(左侧)以及施用了雷帕霉素的小鼠(右侧)的结果。
图10中的(a)是表示中枢神经的神经细胞的正常状态的模型图。图10中的(b)是表示在法布雷病患者中流入中枢神经的神经细胞的钙离子变得过量的推定作用机制的模型图。图10中的(c)是表示在本发明的一形态中雷帕霉素(西罗莫司)的推定作用机制的模型图。
具体实施方式
本发明不限定于以下所说明的实施方式，能够在权利要求书所示的范围内进行各种变更。将不同的实施方式或实施例中分别公开的技术手段适当组合而得的实施方式或实施例也包含在本发明的技术范围内。
在本说明书中，除非另有说明，否则表示数值范围的“A～B”意指“A以上且B以下”。
本发明的一实施方式的法布雷病治疗剂、外用镇痛剂以及出汗增进剂是用于获得法布雷病的治疗效果、镇痛效果、或者出汗增进效果的药剂，含有从由雷帕霉素以及雷帕霉素衍生物构成的组中选择出的至少一者作为有效成分。
雷帕霉素以及雷帕霉素衍生物以往也用作其他疾病的治疗，临床上的安全性已得到确认。因此，本实施方式的法布雷病治疗剂以及外用镇痛剂的安全性很高。
所述雷帕霉素衍生物没有特别限定，但是，可列举出例如依维莫司(Everolimus)、替西罗莫司(Temsirolimus)、42-(二甲基亚膦酰)雷帕霉素(Ridaforolimus，42-O-(Dimethoxyphosphinyl)rapamycin)以及佐他莫司(Zotarolimus)。众所周知，它们具有与雷帕霉素的基本架构几乎相同的基本架构，且具有与雷帕霉素相当的生理活性。因此，这些雷帕霉素衍生物也与雷帕霉素同样地，能够作为本发明的一实施方式的有效成分使用。
从制备外用药的观点而言，在上述中，优选使用雷帕霉素，已经确认雷帕霉素与由于分子量大且具有水溶性而通常被认为难以经皮吸收的依维莫司等相比，更能经皮吸收。
本发明的一实施方式的法布雷病治疗剂、外用镇痛剂以及出汗增进剂不仅可以用于人类，还可以用于非人类哺乳动物。作为非人类哺乳动物，例如，可列举出除人类外的哺乳类。作为除人类外的哺乳类，例如，可列举出牛、野猪、猪、羊、山羊等偶蹄类、马等奇蹄类、小鼠(mouse)、大鼠(rat)、仓鼠、松鼠等啮齿类、兔子等兔形目、狗、猫、鼬等食肉类等。另外，这些非人类动物不限定于家畜或伴生动物(供玩赏的动物)，也可以是野生动物。
(I)法布雷病治疗剂
本发明的一实施方式的法布雷病治疗剂可用于治疗法布雷病患者中发作的各种症状。作为法布雷病的症状，例如，可列举出皮肤病变、神经症状、肾功能降低、心脏功能降低、眼部症状(角膜病变等)、耳部症状(听力损失等)、以及消化器官症状(腹泻以及腹痛等)。
在本说明书中，“治疗”是指获得了治疗效果的行为。治疗效果是指，包含预防效果以及医疗效果的概念，例如，具有以下的类型中所包含的效果。
(1)与没有施用治疗剂的情况相比，能够防止与疾病相关的1个以上症状的发作，或者降低了发作的风险。
(2)与没有施用治疗剂的情况相比，能够防止与疾病相关的1个以上症状的复发，或者降低了复发的风险。
(3)与没有施用治疗剂的情况相比，能够防止出现与疾病相关的1个以上症状的迹象，或者降低了出现该迹象风险。
(4)与没有施用治疗剂的情况相比，能够降低与疾病相关的1个以上症状的严重程度(使症状缓解)，或者使症状消失。
(5)与没有施用治疗剂的情况相比，能够防止与疾病相关的1个以上症状的严重程度的增加或进展(防止症状的加重)。
(6)与没有施用治疗剂的情况相比，能够降低与疾病相关的1个以上症状的严重程度的增加速度或者进展速度(缓解症状的加重)。
本发明的一实施方式的法布雷病治疗剂能够适合用于法布雷病的皮肤病变的治疗(例如，医疗或预防)。因此，本发明的一实施方式的法布雷病治疗剂可以是法布雷病医疗剂或者法布雷病预防剂。
在本说明书中，在用语“法布雷病的皮肤病变”中，除了一般皮肤病变外，还包含皮肤及其周边组织的疼痛(例如四肢疼痛、肢端感觉异常)、出汗减少、无汗以及血管角化瘤等症状。
本发明的一实施方式的法布雷病治疗剂可适合用于法布雷病的皮肤病变中的皮肤及其周边组织的疼痛、出汗减少、无汗、血管角化瘤的治疗。
以往，发明人发现了雷帕霉素具有抑制发汗效果(参照专利文献3)。然而令人惊讶的是，在法布雷病中，相反地，雷帕霉素具有促进出汗的效果。
本发明的一实施方式的法布雷病治疗剂的施用途径不受限制，也可以是口服、经皮肤、经肠道、经静脉、经粘膜等任何施用途径。因此，本发明的一实施方式的法布雷病治疗剂可是内服药、外用药、注射剂、栓剂、吸入剂等形态。本发明的一实施方式的法布雷病治疗剂优选为外用药或内服药的形态，更优选为外用药的形态。
任何形态都能够有效治疗法布雷病。如果是外用药的形态，则容易治疗生物体的局部的法布雷病的病变(例如皮肤病变)。另一方面，如果是内服药的形态，则容易治疗生物体的全身的法布雷病的症状(例如内脏疾病及皮肤病变)。如果局部施用外用药，则能够较高地保持病变部的有效成分的浓度并获得所期望的效果，进而药物较少向血液中转移从而副作用小。因此，从安全性的观点来看，优选为外用药。
以下，首先对外用药形态的法布雷病治疗剂进行具体说明，接着再对内服药形态的法布雷病治疗剂进行具体说明。
(I-A)外用药
以下，对外用药形态的法布雷病治疗剂进行说明。
作为外用药，可列举出凝胶剂、软膏剂、贴剂、巴布剂、搽剂、洗剂、以及乳膏剂(Creams)等。凝胶剂与软膏剂等相比，有效成分容易被皮肤组织吸收，可以说是更优选的剂型。
本发明的一实施方式的外用药所含有的有效成分的量没有特别限定。从通过抑制有效成分向血液中转移并将皮肤组织中的有效成分的浓度提高到治疗有效浓度来抑制全身性的副作用并获得治疗效果的观点出发，优选以下的浓度。
以外用药的总重量为基准，所述有效成分的浓度的下限可以为0.01重量％以上、0.02重量％以上、0.03重量％以上、0.04重量％以上、0.05重量％以上、0.06重量％以上、0.07重量％以上、0.08重量％以上、0.09重量％以上、0.1重量％以上。
以外用药的总重量为基准，所述有效成分的浓度的上限可以为1.0重量％以下、0.9重量％以下、0.8重量％以下、0.7重量％以下、0.6重量％以下、0.5重量％以下、0.4重量％以下、0.3重量％以下、0.25重量％以下、0.2重量％以下。
以外用药的总重量为基准，所述有效成分的浓度例如优选为0.01～1.0重量％，更优选为0.02～0.9重量％，更优选为0.03～0.8重量％，更优选为0.04～0.7重量％，更优选为0.05～0.6重量％，更优选为0.06～0.5重量％，更优选为0.07～0.4重量％，更优选为0.08～0.3重量％，更优选为0.09～0.25重量％，最优选为0.1～0.2重量％。此外，这些范围的下限值可以为0.05重量％。另外，雷帕霉素或者雷帕霉素衍生物的量可以为0.4～0.8重量％。
外用药所包含的雷帕霉素或者雷帕霉素衍生物的量的上限值没有特别限定，但是例如，优选上限值为0.8重量％，更优选上限值为0.4重量％。
生物体的每单位表面积的、雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的每日的施用量没有特别限定。
所述施用量的下限可以为每日0.0001mg/cm2以上、0.0002mg/cm2以上、0.0005mg/cm2以上、0.001mg/cm2以上、0.002mg/cm2以上、0.003mg/cm2以上。
所述施用量的上限可以为每日2mg/cm2以下、1mg/cm2以下、0.5mg/cm2以下、0.05mg/cm2以下、0.04mg/cm2以下、0.03mg/cm2以下。
所述施用量例如优选为0.0001～2mg/cm2，优选为0.0002～1mg/cm2，更优选为0.0005～0.5mg/cm2，更优选为0.001～0.05mg/cm2，更优选为0.002～0.04mg/cm2，进一步优选为0.003～0.03mg/cm2。将上述的量的雷帕霉素或雷帕霉素衍生物，1日施用(通过涂抹等)1次或者1日分多次施用即可。换言之，优选本发明的一实施方式的外用药能够实现上述的施用量。
作为外用药的制备方法，可列举出以下的方法。(i)可以通过将含有雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的溶液凝胶化来制备凝胶剂。(ii)可以通过将软膏主剂与雷帕霉素或雷帕霉素衍生物混合来制备软膏剂。(iii)贴剂、巴布剂、搽剂、洗剂以及乳膏剂可以根据公知的方法来制备。
以下，对凝胶剂以及软膏剂进行具体说明。
(I-A-1)凝胶剂
如上述那样，本发明的一实施方式的法布雷病治疗剂可以是将含有雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的溶液凝胶化而得的凝胶剂。
将含有雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的溶液凝胶化时，使用凝胶化诱导剂将该溶液凝胶化即可。作为凝胶化诱导剂，例如，可列举出羧乙烯基聚合物、羧甲基纤维素、氢氧化铝、膨润土(Bentonite)等。
羧乙烯基聚合物的具体结构没有特别限定，可以使用卡波普(Carbopol)(注册商标)、HIVISWAKO(注册商标)、AQUPEC(注册商标)。从作为外用药涂抹时良好的质地的观点出发，在这些产品中，优选卡波普(注册商标)934P NF或者卡波普(注册商标)980。
例如，使用卡波普(注册商标)时，首先，在含有雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的溶液中添加卡波普(注册商标)。进而，通过添加pH调节剂(例如三羟甲基氨基甲烷、三醇胺)，将所述溶液的pH调节为中性。由此，能够诱导所述溶液的凝胶化。
本发明的一实施方式的凝胶剂优选含有醇(alcohol)。通过含有醇，能够使凝胶剂所包含的有效成分有效地被皮肤组织吸收，从而到达患部。作为醇的例子，可列举出乙醇以及异丙醇。从使有效成分更有效地被皮肤组织吸收的观点出发，优选乙醇。
所述醇的量没有特别限定，为能够充分溶解雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的量即可。例如，所述醇的重量可以是雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的重量的100～300倍，也可以是120～250倍。以外用药的总重量为基准时，醇量优选为20重量％以上。更优选为30重量％以上，进一步优选为40重量％以上。如果醇量为60重量％以下，则醇不会从制剂中过量蒸发，能够以稳定的有效成分浓度保存(保管)制剂。因此，更优选醇量为50重量％左右(45～55％)。
由于含有足以使有效成分充分溶解的醇量，能够更有效地使有效成分被皮肤组织吸收。由于醇的量越多，越能使有效成分充分溶解，因而只要为50重量％以下，就能够更有效地被皮肤组织吸收。
凝胶剂所含有的所述凝胶化诱导剂的量没有特别限定，为足以使含有雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的溶液充分凝胶化的量即可。
凝胶剂所包含的凝胶化剂的量没有特别限定，为足以使含有雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的溶液充分凝胶化的量即可。凝胶剂所含有的凝胶化剂的量，例如，以凝胶剂的总重量为基准，可以为1.5重量％以上。更具体而言，以凝胶剂的总重量为基准，可以为1.5～20重量％、1.5～15重量％、1.5～10重量％、1.5～5重量％或者1.5～2.5重量％。
凝胶剂所包含的pH调节剂(中和剂)的量没有特别限定，可以根据溶剂以及凝胶化剂的量适当地设定。凝胶剂所包含的pH调节剂的量，例如，以凝胶剂的总重量为基准，可以为0.5～5.0重量％、0.5～2.5重量％或者0.5～1.0重量％。
例如，作为诱导凝胶化的成分，当使用凝胶化诱导剂(卡波普(注册商标)等)和pH调节剂(三羟甲基氨基甲烷等)时，对于凝胶化诱导剂的量，以外用药的总重量为基准，例如为1.6重量％，对于pH调节剂的量，以外用药的总重量为基准，例如可以为0.4重量％、0.6重量％或者0.8重量％。当然，本发明不限定于所述的比率。
凝胶剂中，还可以含有除了上述的有效成分、溶剂(醇)、凝胶化剂以及pH调节剂(中和剂)以外的其他成分。作为所述其他成分，例如，可列举出水溶性高分子、水、以及除雷帕霉素或雷帕霉素衍生物以外的药效成分。
作为所述水溶性高分子，例如可列举出聚乙二醇、淀粉、甲基纤维素、羟丙基纤维素(HPC)、聚乙烯醇、聚乙烯基甲基醚以及聚乙烯吡咯烷酮等。
如果凝胶剂中含有羟丙基纤维素，则能够提高该凝胶剂的黏性。也就是说，能够使凝胶剂难以从皮肤剥离。
凝胶剂所含有的所述其他成分的量没有特别限定，但是，例如，以凝胶剂的总重量为基准，可以为50重量％以下，也可以为40重量％以下，还可以为30重量％以下，还可以为20重量％以下，还可以为10重量％以下。
凝胶剂所含有的雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的量没有特别限定。但是，从同时实现通过抑制有效成分向血液中转移来防止全身性的副作用以及通过将皮肤组织中的有效成分的浓度提高至治疗有效浓度来获得治疗效果的观点出发，优选以下的浓度。
以凝胶剂的总重量为基准，雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的量的下限可以为0.01重量％以上、0.02重量％以上、0.03重量％以上、0.04重量％以上、0.05重量％以上、0.06重量％以上、0.07重量％以上、0.08重量％以上、0.09重量％以上、0.1重量％以上。
以凝胶剂的总重量为基准，雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的量的上限可以为1.0重量％以下、0.9重量％以下、0.8重量％以下、0.7重量％以下、0.6重量％以下、0.5重量％以下、0.4重量％以下、0.3重量％以下、0.25重量％以下、0.2重量％以下。
以凝胶剂的总重量为基准，雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的量例如优选为0.01～1.0重量％，更优选为0.02～0.9重量％，更优选为0.03～0.8重量％，更优选为0.04～0.7重量％，更优选为0.05～0.6重量％，更优选为0.06～0.5重量％，更优选为0.07～0.4重量％，更优选为0.08～0.3重量％，更优选为0.09～0.25重量％，最优选为0.1～0.2重量％。此外，这些范围的下限值可以为0.05重量％。另外，雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的量可以为0.4～0.8重量％。
凝胶剂所包含的雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的量的上限值没有特别限定，但是，例如，优选上限值为0.8重量％，更优选上限值为0.4重量％。
如果为上述的量，则能够有效地治疗所述法布雷病的症状，并且在法布雷病治疗剂的安全性方面表现优异。
生物体每单位表面积的凝胶剂的涂抹量的下限可以为0.001g/cm2以上、0.002g/cm2以上、0.003g/cm2以上、0.004g/cm2以上、0.005g/cm2以上。
生物体的每单位表面积的凝胶剂的涂抹量的上限可以为0.01g/cm2以下、0.009g/cm2以下、0.008g/cm2以下、0.007g/cm2以下、0.006g/cm2以下。
生物体的每单位表面积的凝胶剂的涂抹量没有特别限定，但可以为0.001～0.01g/cm2、0.002～0.009g/cm2、0.003～0.008g/cm2、0.004～0.007g/cm2、0.005～0.006g/cm2。
以该涂抹量每天或每2～3天涂抹一次该凝胶剂即可。优选每天涂抹。每天涂抹时，优选每天涂抹1～3次，更优选每天涂抹2～3次，最优选每天涂抹2次。
另外，优选根据年龄、施用部位、皮肤的厚度等，调整适合的制剂中的浓度以及施用次数。例如，在幼儿的薄皮肤或腋下等，可以每天涂抹1～3次0.05～0.2％的浓度的凝胶剂。另外，在手掌、脚掌等，可以每天涂抹1～2次0.2～0.8％的凝胶剂。
以下示出了凝胶剂的更具体的组成的一个例子，但是本发明不限定于该组成。此外，如果为下述构成，能够进一步提高雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的法布雷病治疗效果。另外，如果为下述构成，则通过更少量的雷帕霉素或雷帕霉素衍生物获得所期望的效果，因而能够减轻对生物体的不利影响。
除雷帕霉素或雷帕霉素衍生物外，凝胶剂还可以包含卡波普(注册商标)934P NF、水、醇(例如乙醇或异丙醇等，优选乙醇)、以及三羟甲基氨基甲烷。
此时，雷帕霉素或雷帕霉素衍生物、卡波普(注册商标)934P NF、水、醇、以及三羟甲基氨基甲烷的重量的比可以为，雷帕霉素或雷帕霉素衍生物：卡波普(注册商标)934PNF：水：醇：三羟甲基氨基甲烷＝(0.5～2)：16：490：(450～500)：6。
所述比可以为，雷帕霉素或雷帕霉素衍生物：卡波普(注册商标)934P NF：水：醇：三羟甲基氨基甲烷＝(0.5～2)：16：490：(480～490)：6；也可以为，雷帕霉素或雷帕霉素衍生物：卡波普(注册商标)934P NF：水：醇：三羟甲基氨基甲烷＝2：16：490：486：6。
(I-A-2)软膏剂
如上述那样，本发明的一实施方式的法布雷病治疗剂可以是在软膏中含有雷帕霉素或雷帕霉素衍生物而得到的软膏剂。
作为主剂，可列举出例如蜡类(例如白蜂蜡、羊毛脂、巴西棕榈蜡、鲸蜡等天然蜡、褐煤蜡等矿物蜡、合成蜡等)、石蜡类(例如液体石蜡、固体石蜡等)、凡士林(例如白凡士林、黄凡士林等)等。
主剂的量没有特别限定，但是，例如，以软膏剂的总重量为基准，可以为10重量％以上，也可以为20重量％以上，还可以为30重量％以上，还可以为40重量％以上，还可以为50重量％以上，还可以为60重量％以上，还可以为70重量％以上，还可以为80重量％以上，还可以为90重量％以上。
软膏剂中可以含有除雷帕霉素或雷帕霉素衍生物以外的其他成分。作为该其他成分，例如，可列举出上述的(I-A-1)中记载的成分。
除了雷帕霉素或雷帕霉素衍生物外，软膏剂还可以含有碳酸亚丙酯、固体石蜡以及白凡士林。另外，软膏剂除了含有碳酸亚丙酯、固体石蜡以及白凡士林外，还可以进一步含有液体石蜡。另外，软膏剂除了含有碳酸亚丙酯、固体石蜡、白凡士林以及液体石蜡外，还可以进一步含有白蜂蜡。
此时，雷帕霉素或雷帕霉素衍生物、碳酸亚丙酯、固体石蜡、白凡士林、液体石蜡以及白蜂蜡的重量的比可以为，雷帕霉素或雷帕霉素衍生物：碳酸亚丙酯：固体石蜡：白凡士林：液体石蜡：白蜂蜡＝(0.3～10)：(50～59.4)：(30～45)：(895)：(0～10)：(0～5)。其中，在所述比中，有效成分、碳酸亚丙酯、固体石蜡以及液体石蜡的总量为105。
进而，具体地，所述比可以为下述的比率1、2、3。
(比率1)雷帕霉素或雷帕霉素衍生物：碳酸亚丙酯：固体石蜡：白凡士林：液体石蜡：白蜂蜡＝2：58：30：895：10：5
(比率2)雷帕霉素或雷帕霉素衍生物：碳酸亚丙酯：固体石蜡：白凡士林：液体石蜡：白蜂蜡＝2：58：45：895：0：0
(比率3)雷帕霉素或雷帕霉素衍生物：碳酸亚丙酯：固体石蜡：白凡士林：液体石蜡：白蜂蜡＝2：58：35：895：10：0。
将上述的比率1与比率2比较时，以比率1制备的外用药比以比率2制备的外用药的透明度高且能够减少外用药表面上存在的水的量。
将上述的比率1与比率3比较时，以比率1制备的外用药比以比率3制备的外用药更顺滑，且能够减少外用药的表面上存在的水的量。
软膏剂所包含的雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的量没有特别限定。但是，从同时实现通过抑制有效成分向血液中转移来防止全身性的副作用以及通过将皮肤组织中的有效成分的浓度提高至治疗有效浓度来获得治疗效果的观点出发，优选以下的浓度。
以软膏剂的总重量为基准，雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的量的下限可以为0.01重量％以上、0.02重量％以上、0.03重量％以上、0.04重量％以上、0.05重量％以上、0.06重量％以上、0.07重量％以上、0.08重量％以上、0.09重量％以上、0.1重量％以上。
以软膏剂的总重量为基准，雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的量的上限可以为1.0重量％以下、0.9重量％以下、0.8重量％以下、0.7重量％以下、0.6重量％以下、0.5重量％以下、0.4重量％以下、0.3重量％以下、0.25重量％以下、0.2重量％以下。
以软膏剂的总重量为基准，雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的量例如优选为0.01～1.0重量％，更优选为0.02～0.9重量％，更优选为0.03～0.8重量％，更优选为0.04～0.7重量％，更优选为0.05～0.6重量％，更优选为0.06～0.5重量％，更优选为0.07～0.4重量％，更优选为0.08～0.3重量％，更优选为0.09～0.25重量％，最优选为0.1～0.2重量％。此外，这些范围的下限值可以为0.05重量％。另外，雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的量可以为0.4～0.8重量％。
软膏剂所包含的雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的量的上限值没有特别限定，但是例如优选上限值为0.8重量％，更优选上限值为0.4重量％。
如果为上述的量，能够有效地治疗所述法布雷病的症状，并且在法布雷病治疗剂的安全性方面也表现优异。
生物体的每单位表面积的软膏剂的涂抹量的下限可以为0.001g/cm2以上、0.002g/cm2以上、0.003g/cm2以上、0.004g/cm2以上、0.005g/cm2以上。
生物体的每单位表面积的软膏剂的涂抹量的上限可以为0.01g/cm2以下、0.009g/cm2以下、0.008g/cm2以下、0.007g/cm2以下、0.006g/cm2以下。
生物体的每单位表面积的软膏剂的涂抹量没有特别限定，但是可以为0.001～0.01g/cm2、0.002～0.009g/cm2、0.003～0.008g/cm2、0.004～0.007g/cm2、0.005～0.006g/cm2。
以该涂抹量每天或每2～3天涂抹一次该软膏剂即可。优选每天涂抹。每天涂抹时，优选每天涂抹1～3次，更优选每天涂抹2～3次，最优选每天涂抹2次。
另外，优选根据年龄、施用部位、皮肤的厚度等，调整适合的制剂中的浓度以及施用次数。例如，在幼儿的薄皮肤或腋下等，可以每天涂抹1～3次0.05～0.2％的浓度的软膏剂。另外，在手掌、脚掌等，可以每天涂抹1～2次0.2～0.8％的软膏剂。
软膏剂可以根据公知的方法制造。以下，对制造方法的一例进行说明。
例如，可以使用高速搅拌机(HomoMixer)(例如PRIMIX株式会社制造)或万能搅拌机(例如株式会社DALTON制造)来制备。当主剂在室温下为固体时，将主剂加热至成为液体，将液体状的主剂与溶解有有效成分的溶液混合即可。更具体而言，在室温下将固体即各种成分(例如，蜡类、石蜡类、凡士林等)加热至熔点以上(例如70℃)而熔解，向该熔解物添加溶解有有效成分的溶液并搅拌。然后，一边搅拌一边将该混合物冷却至接近室温(例如40℃)，从而能够制造软膏剂。
作为另一种方法，将所有主剂在70℃～80℃下熔解，使用自转公转搅拌机(株式会社新基(THINKY)制造)，在搅拌模式下，以800rpm搅拌30分钟，接着以1000rpm搅拌5分钟，接着以2000rpm搅拌1分钟(15℃)。然后，在所述主剂中加入溶解有有效成分的溶液，进而以1000rpm搅拌1分钟，接着以2000rpm搅拌1分钟(不冷却)，从而能够制备分散有含有有效成分的极细粒子的、质量更好的软膏剂。
当软膏剂含有上述的其他成分时，也可以制备将有效成分与其他成分溶解于所期望的溶剂中的溶液，在该溶液中添加主剂，添加以后的工序按照上述的方法制备软膏剂即可。
(I-B)内服药
以下，对内服药的形态的法布雷病治疗剂进行说明。
在内服药的形态的法布雷病治疗剂的情况下，可以通过将公知的用于内服药的成分与雷帕霉素或雷帕霉素衍生物混合，制备法布雷病治疗剂。
1服内服药所包含的雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的量没有特别限定，可以根据施用对象适当设定。
成人每日的雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的施用量的下限可以为0.1mg以上、0.2mg以上、0.4mg以上、0.8mg以上、1mg以上、2mg以上。
成人每日的雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的施用量的上限可以为010mg以下、9mg以下、8mg以下、7mg以下、6mg以下、5mg以下、4mg以下。
例如成人每日的雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的施用量优选为0.1～10mg，优选为0.1～9mg，优选为0.2～8mg，优选为0.4～7mg，优选为0.8～6mg，更优选为1～5mg，更优选为2～4mg。
如果为上述的量，则能够有效地治疗法布雷病。
内服药的剂型没有限定，例如可列举出片剂、胶囊、粉剂、分散剂、糖浆等。
(II)外用镇痛剂
本发明的一实施方式的外用镇痛剂治疗的疼痛没有特别限定，但是可列举出神经性疼痛、法布雷病引起的疼痛、腰痛、炎症、癌症、以及其他原因引起的疼痛。此处，外用镇痛剂是指外用药的形态的镇痛剂。
作为本发明的一实施方式的外用镇痛剂能发挥效果的伴随有疼痛的疾病，可列举出例如神经纤维瘤、带状疱疹、三叉神经痛、腰痛。另外，能够对用公知的外用镇痛剂不起镇痛效果的疼痛发挥效果，并减轻对生物体的负担。
例如，当神经纤维瘤卷进坐骨神经等主要神经并生长了时，用外科手段将其切除对生物体的负担会很大且并不现实。换言之，存在用外科手段无法治疗神经纤维瘤的疼痛的情况。另一方面，如果是外用药的话，则能够减轻对生物体的负担。
作为本发明的一实施方式的外用镇痛剂的实施方式，可列举出上述的法布雷病治疗剂的外用药的实施方式。即，可列举出上述的“(I)法布雷病治疗剂”一栏(更具体而言，“(I-A)外用药”、“(I-A-1)凝胶剂”以及“(I-A-2)软膏剂”一栏)中记载的实施方式。
(III)出汗增进剂
本发明的一实施方式的出汗增进剂所治疗的对象是出汗减少的患者或不出汗的患者等。例如，可列举出无汗症或少汗症。作为其他例子，可列举出法布雷病。也包含局部部位不出汗或者汗量少的局限性无汗症、少汗症。对于在皮肤的大范围不出汗或者汗量少的无汗症或少汗症，不能够调节体温，夏季体温容易上升，冬季容易变成低体温。在婴儿期，经常出现伴随发烧的痉挛或癫痫，并且存在发生急性脑病的情况。
以往，本发明人发现雷帕霉素具有抑制发汗效果。但令人惊讶的是，在出汗减少的状态下，相反地，雷帕霉素具有促进出汗的效果。
作为本发明的一实施方式的出汗增进剂的实施方式，可列举出上述的法布雷病治疗剂的实施方式。即，可以使用上述的“(I)法布雷病治疗剂”、“(I-A)外用药”、“(I-A-1)凝胶剂”、“(I-A-2)软膏剂”、“(I-B)内服药”中记载的实施方式。
推定的作用机制
以下，基于图10对雷帕霉素或雷帕霉素衍生物发挥上述效果的推定作用机制进行说明。此外，此处所说明的推定作用机制是用于帮助理解本发明的例示，不对本发明的范围作任何限制。
在正常的状态下，在中枢神经的神经细胞中，mTORC1直接活化AMPAR从而促进钙的摄取，与此同时，从结果来看，也会促进AMPAR活化后紧接着产生的NMDAR的活化，从而促进钙离子流入神经细胞内。另一方面，钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(CaMKII)还通过增加NMDAR的平均开放时间促进钙离子流入神经细胞内。同时，mTORC1通过抑制CaMKII的磷酸化来调节神经细胞的活化(图10(a))。
在法布雷病患者的中枢神经的神经细胞中，贮积的糖脂中的一种即三己糖基神经酰胺(Gb3)或球状神经酰胺(globotriaosylsphingosine)Gb3(Lyso-Gb3)通过增加神经细胞的NMDAR的平均开放时间，促进钙离子流入神经细胞内。因此，在法布雷病患者中，钙离子过量流入神经细胞内(图10(b))。
如上所述，在法布雷病患者中，由于钙离子过量流入神经细胞内，因而通过施用雷帕霉素，抑制mTORC1的作用并抑制钙离子的流入，与此同时，促进CaMKII的磷酸化，并促进细胞质内过量贮积的钙离子的减少。另外，由促进CaMKII的磷酸化引起的、未磷酸化的CaMKII的存在量的减少，抑制了钙离子借由NMDAR的流入，促进了细胞质内钙离子的减少(图10(c))。因此，认为对法布雷病患者施用雷帕霉素是有效的。另外，如能够根据图10理解的那样，通过其他mTORC1抑制剂也可以期待达到同样的效果。
实施例
制造例：含有雷帕霉素的凝胶剂的制备
制备了含有各种浓度的雷帕霉素的凝胶剂。作为具体的方法，将西罗莫司(雷帕霉素)添加到乙醇中进行溶解之后，进而添加水(具体地，注射用水)并进行混合从而制备了混合溶液。在所述混合溶液中添加卡波普(注册商标)(具体地，卡波普(注册商标)934P NF)并进行混合从而制备了均匀的悬浊液。在所述悬浊液中添加中和剂(具体地，三羟甲基氨基甲烷)并进行混合，从而制备了凝胶剂。
此外，1g所述凝胶中除雷帕霉素以外的成分为，16mg的卡波普(注册商标)934PNF、490mg的水、480～490mg的乙醇以及6mg的三羟甲基氨基甲烷。
更具体而言，通过以下的制造例1、2及比较制造例1的组成，制备了凝胶剂。
制造例1：含有0.4重量％的雷帕霉素的凝胶(全部重量100g)
雷帕霉素 0.4g
乙醇 48.4g
注射用水 49g
卡波普(注册商标)934P NF 1.6g
三羟甲基氨基甲烷 0.6g。
制造例2：含有0.8重量％的雷帕霉素的凝胶(全部重量100g)
雷帕霉素 0.8g
乙醇 48g
注射用水 49g
卡波普(注册商标)934P NF 1.6g
三羟甲基氨基甲烷 0.6g。
比较制造例1：不含有雷帕霉素的主剂凝胶
乙醇 48.4g
注射用水 49g
卡波普(注册商标)934P NF 1.6g
三羟甲基氨基甲烷 0.6g。
以下，除非另有说明，否则在本实施例中使用的数值“X％雷帕霉素凝胶”的记载意指“含有X重量％的雷帕霉素的凝胶”。
实施例1：雷帕霉素外用药对野生型小鼠的效果的确认
在施用了雷帕霉素的野生型小鼠中，进行了以下关于对疼痛刺激的感知及出汗量的实验。
[试验方法1-1]
将0.4％雷帕霉素凝胶或主剂凝胶分别涂抹在各3只野生型小鼠的后爪的足底部。
接着，将每只小鼠置于加热至60℃的热板上，并测量了到小鼠到回避疼痛为止的时间。
另外，对各3只野生型小鼠分别施加压力，并测量了回避疼痛时的压力。具体地，在每只小鼠的后爪的足底部使用Ugo Basile公司制造的VonFrey式痛觉测量装置施加压力，并逐渐增加该压力，测量了回避时的压力。
(试验结果1-1)
图1中的(a)示出了涂抹了0.4％雷帕霉素凝胶的野生型小鼠(左)、以及涂抹了主剂凝胶的野生型小鼠(右)的、到回避疼痛为止的时间以及回避时的压力进行了比较的图表。(a-1)表示对热刺激的反应，(a-2)表示对压力刺激的反应。通过涂抹含有雷帕霉素的凝胶，野生型小鼠的到回避疼痛(热刺激)为止的时间显著延长了。另外，野生型小鼠的回避疼痛(压力刺激)时的压力显表现出增加的倾向。
[试验方法1-2]
对野生型小鼠的出汗量进行了测量并对汗腺组织中的mTOR活性进行了观察。
[用碘淀粉法测量出汗量]
将0.4％雷帕霉素凝胶、0.8％雷帕霉素凝胶、或主剂凝胶分别涂抹于各3只野生型小鼠。60分钟后，通过将美托咪定(Domitor)、布托啡诺(butorphanol)以及多美康(Dormicum)注射入每只小鼠的腹腔内来施加了全身麻醉。进而，向每只小鼠施用了作为出汗刺激的乙酰胆碱。
接着，根据公知的碘淀粉法(Iodine-starch method)，测量了出汗量的变化。首先，在每只小鼠的后爪的足底部，涂抹了溶解有碘乙醇溶液和淀粉的矿物油。然后，在每只小鼠的后爪的足底部的皮下，注射了毛果芸香碱盐酸盐(50μg/20μL/只)。注射完5分钟后，观察每只小鼠的后爪的足底部，数出了后爪的足底部(更具体而言，足底部的肉垫中存在的汗腺)出现的黑点的数量。此外，该黑点是通过碘淀粉反应呈阳性的部位。
[通过抗体染色观察活性型mTOR]
将0.4％雷帕霉素凝胶或主剂凝胶分别涂抹于每3只野生型小鼠。将每只小鼠的汗腺组织用针对活性型mTOR的抗体染色，并确认了mTOR的活化状态。
通过向小鼠的腹腔内给每1kg小鼠体重注射0.3mg的美托咪定、5mg的布托啡诺以及4mg的多美康，给小鼠施加了全身麻醉。
接着，在磷酸缓冲液(Phosphate Buffered Saline)中，溶解发挥出汗刺激功能的乙酰胆碱(pilocarpine hydrochloride'Junsei Chemical,Co.,Ltd.Tokyo,Japan)，从而制备了刺激用溶液(乙酰胆碱的浓度：50μg/μL)。
在施加了全身麻醉的小鼠的后爪的皮下，注射了10μL的所述刺激用溶液。注射完2分钟后，收集各小鼠的后爪的皮肤样品，并将该皮肤样品包埋在OCT复合物(Lab-TekProducts,Illinois,USA)内。从所述OCT复合物制备5μm厚的切片，并根据公知的荧光染色法对该切片进行了染色。
用于荧光染色法的第一抗体是抗磷酸化mTOR(Ser2448)(anti-phospho-mTOR(Ser2448))(1：50，Cell Signaling Technology,Tokyo,Japan)。此外，抗磷酸化mTOR(anti-phospho-mTOR)是识别mTOR蛋白质的氨基末端第2448位的丝氨酸被磷酸化后的状态的抗体。即，是识别被活化的mTOR蛋白质的抗体。另外，用于荧光染色法的第二抗体是连结有Alexa Fluor 488的市售的第二抗体(赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher))。同时，用Hoechst 33342对上述切片进行染色，并对切片内的细胞核进行了染色。用BZ-8000显微镜(Keyence)观察了荧光染色的图像。
[通过蛋白质印迹法观察活性型mTOR]
将含有0.4％雷帕霉素凝胶或者主剂凝胶分别涂抹在各3只野生型小鼠的后爪的足底部。对每只小鼠的汗腺组织用蛋白质印迹法确认了汗腺组织所包含的活性型mTOR的量。
通过向小鼠的腹腔内给每1kg小鼠体重注射0.3mg的美托咪定、5mg的布托啡诺以及4mg的多美康，给小鼠施加了全身麻醉。
接着，在磷酸缓冲液(Phosphate Buffered Saline)中，溶解发挥出汗刺激功能的乙酰胆碱(毛果芸香碱盐酸盐，Junsei Chemical,Co.,Ltd.Tokyo,Japan)，从而制备了刺激用溶液(乙酰胆碱的浓度：50μg/μL)。
在施加了全身麻醉的小鼠的后爪的皮下，注射了10μL的所述刺激用溶液。在注射完2分钟后，收集各小鼠的后爪的皮肤样品，并对该皮肤样品进行蛋白质印迹法。
在蛋白质印迹法中，使用Cell Signaling Technology(CST)公司的兔抗pmTOR(Rabbit anti-pmTOR)抗体作为第一抗体，并使用HRP标记的抗兔IgG抗体(HRP-bindingAnti-rabbit IgG antibody)抗体作为第二抗体。
(试验结果1-2)
在图1的(b)中示出了“通过碘淀粉法测量出汗量”的试验结果。
在图1的(b)中，从左侧开始依次示出了涂抹了主剂凝胶、0.4％雷帕霉素凝胶、0.8％雷帕霉素凝胶的小鼠上的黑点数。通过涂抹含有雷帕霉素的凝胶，并且取决于所含有的雷帕霉素浓度，野生型小鼠的出汗量显著减少。
图2的(a)中示出了“通过抗体染色观察活性型mTOR”的试验结果。
从图2中的(a)可以看出，将活性型mTOR的染色图像与细胞核的染色图像重叠起来(参照重叠图像(Merge))进行了观察。根据该结果，确认了活性型mTOR的染色图像不是将细胞外基质等进行非特异性染色的背景(background)，而是将细胞内的活性型mTOR进行特异性染色的像。进而，从图2中的(a)可以清楚地看出，在使用了雷帕霉素凝胶时，活性型mTOR的染色强度比使用了主剂凝胶时的染色强度低。也就是说，在使用了雷帕霉素凝胶时，很明显活性型mTOR的量比使用了主剂凝胶时的量少。
图2中的(b)示出了“通过蛋白质印迹法观察活性型mTOR”的试验结果。
从图2中的(b)也可以清楚地看出，在使用了雷帕霉素凝胶时，活性型mTOR(p-mTOR)的量比使用了主剂凝胶时的量少。
实施例2：法布雷病模型小鼠的症状的确认
在法布雷病模型小鼠中，进行了以下关于疼痛刺激的感知及出汗量的实验。此外，作为法布雷病模型小鼠，使用了购自杰克逊实验室的敲除了α-gal的小鼠(B6；129-Gla tm1Kul/J)。
[试验方法2-1]
准备了野生型小鼠以及法布雷病模型小鼠各3只。
此外，就之后的实验工序而言，以与上述的“试验方法1-1”中的、将每只小鼠置于加热至60℃的热板上并测量小鼠到回避疼痛为止的时间的实验相同的程序进行。
(试验结果2-1)
图3中的(a)示出了将野生型小鼠(左)以及法布雷病模型小鼠(右)的到回避疼痛为止的时间进行了比较的图表。在法布雷病模型小鼠中，存在到回避疼痛为止的时间缩短的倾向。
[试验方法2-2]
对野生型小鼠以及法布雷病模型小鼠的出汗量进行了测量，并分别观察了汗腺组织中的活性型mTOR。
(通过碘淀粉法测量出汗量、以及通过抗体染色观察活性型mTOR)
准备野生型小鼠以及法布雷病模型小鼠各3只，并测量了出汗量。另外，对野生型小鼠以及法布雷病模型小鼠中的汗腺组织用针对活性型mTOR的抗体进行了染色，确认了mTOR的活化状态。
此外，在本实验中，以与上述的“通过碘淀粉法测量出汗量”以及“通过抗体染色观察活性型mTOR”相同的程序进行。
(试验结果2-2)
图3中的(b)示出了将野生型小鼠中的黑点数(左)与法布雷病模型小鼠中的黑点数(右)进行了比较的图表。法布雷病模型小鼠与野生型小鼠相比，出汗量显著减少(p＝0.0122)。
图3中的(c)示出了野生型小鼠、以及法布雷病模型小鼠中的汗腺的荧光染色图像。染色较浓的部位是活性型mTOR较多地表达的部位。从所述荧光染色图像中，发现在法布雷病模型小鼠的汗腺组织中，活性型mTOR比野生型小鼠的汗腺组织中表达得更多。
实施例3：雷帕霉素外用药对法布雷病模型小鼠的效果的确认
在施用了雷帕霉素的法布雷病模型小鼠中，进行了以下关于疼痛刺激的感知以及出汗量的实验。
[试验方法3-1]
将0.4％雷帕霉素凝胶或主剂凝胶分别涂抹在各3只法布雷病模型小鼠的后爪的足底部。
此外，就之后的实验工序而言，以与上述的“试验方法1-1”中的、将每只小鼠置于加热至60℃的热板上并测量小鼠到回避疼痛为止的时间的实验相同的程序进行。
(试验结果3-1)
图4中的(a)是将涂抹了主剂凝胶的法布雷病模型小鼠(左)、和涂抹了0.4％雷帕霉素凝胶的法布雷病模型小鼠(右)的到回避疼痛为止的时间进行了比较的图表。在涂抹了含有雷帕霉素的凝胶的法布雷病模型小鼠中，因法布雷病而缩短的到回避疼痛为止的时间表现出延长的倾向。
[试验方法3-2]
对涂抹了主剂凝胶或雷帕霉素凝胶的法布雷病模型小鼠的出汗量进行了测量，并分别观察了每只小鼠的汗腺组织的mTOR活性。
(通过碘淀粉法测量出汗量以及通过抗体染色观察活性型mTOR)
将主剂凝胶或0.4％雷帕霉素凝胶分别涂抹在各3只法布雷病模型小鼠的后爪的足底部，并测量了出汗量。另外，将每只小鼠的汗腺组织用针对活性型mTOR的抗体进行染色，确认了mTOR的活化状态。
此外，本实验以与上述的“通过碘淀粉法测量出汗量”以及“通过抗体染色观察活性型mTOR”相同的程序进行。
(试验结果3-2)
图4中的(b)示出将涂抹了主剂凝胶的法布雷病模型小鼠中的黑点数(左)与涂抹了0.4％雷帕霉素凝胶的法布雷病模型小鼠中的黑点数(右)进行了比较的图表。在涂抹了雷帕霉素凝胶的法布雷病模型小鼠中，因法布雷病而减少的出汗量表现出增加的倾向。
图4中的(c)示出涂抹了主剂凝胶的法布雷病模型小鼠和涂抹了0.4％雷帕霉素凝胶的法布雷病模型小鼠的汗腺的染色图像。染色较浓的部位是活性型mTOR较多地表达的部位。如图4中的(c)所示，发现通过涂抹雷帕霉素凝胶，在法布雷病模型小鼠的汗腺组织中，抑制了mTOR的活化。
实施例4：法布雷病患者的血管角化瘤中的mTOR的表达的确认
观察了法布雷病患者的血管角化瘤中的mTOR的活化状态、以及法布雷病的以往的治疗方法即ERT对血管角化瘤的影响。此外，在本试验中的ERT中，将阿加糖酶β(agalsidaseβ)用作酶，具体的治疗方法遵循通常的施用量。
[试验方法]
将法布雷病患者的包含血管角化瘤患部的皮肤的部分用抗p-mTOR抗体染色，并确认了mTOR的活化状态。
(试验结果)
图5中的(a)示出法布雷病患者的血管角化瘤的染色图像。在法布雷病患者的血管角化瘤中，观察到角质层轻度肥厚和真皮乳头层中充满红细胞的毛细血管显著扩张。
图5中的(b)中示出了实施ERT前(b-1)以及实施了ERT后(b-2)的法布雷病患者的血管角化瘤中的p-mTOR、以及细胞核(Ho)的荧光染色图像。从图5中的(b-1)可以看出，在实施ERT前的法布雷病患者的血管角化瘤中，mTOR为活化状态。从图5的(b-2)可以看出，在实施了ERT后的法布雷病患者的血管角化瘤中，mTOR仍然为活化状态。
图5中的(c)是示出实施了ERT后的法布雷病患者中的、血管角化瘤的病状转变的一系列照片。如图5中的(c)所示，很明显ERT对血管角化瘤的治疗没有奏效。
此外，在本实施例的法布雷病患者中，血液中的GL3值以及蛋白尿是正常的，并且心血管及脑血管等中没有疾病。
实施例5：雷帕霉素外用药对野生型小鼠的镇痛效果的确认
在施用了雷帕霉素的野生型小鼠中，进行了以下关于疼痛刺激的感知的实验。
[试验方法]
准备了在后爪的足底部涂抹了0.8％雷帕霉素凝胶或主剂凝胶、或者未涂抹任何药物的野生型小鼠各3只。
此外，之后的实验工序以与上述的“试验方法1-1”中的、将每只小鼠置于加热至60℃的热板上并测量小鼠到回避疼痛为止的时间的实验相同的程序进行。
(试验结果)
图6中的(a)示出将从左开始依次为涂抹了0.8％雷帕霉素凝胶涂抹、主剂凝胶涂抹、未涂抹任何药物的野生型小鼠的、到回避疼痛为止的时间进行了比较的图表。通过涂抹雷帕霉素凝胶，到回避疼痛为止的时间延长了。
试验6：雷帕霉素外用药对健康人的镇痛效果的确认
在施用了雷帕霉素的健康人中，进行了以下关于疼痛刺激的感知的实验。
[试验方法]
在被检查者的皮肤的一部分(手掌的前腕边界部)涂抹了0.4％雷帕霉素凝胶后，在涂抹了雷帕霉素凝胶的部位施加电流，测量了被检查者感觉到的最小电流值。此外，具体地，使用感知/痛觉定量分析装置PainVision PS-2100(尼普洛株式会社)，按照该装置附带的步骤进行了本试验。
(试验结果)
图6中的(b)～(d)示出了测量的感觉到疼痛的最小电流的结果。从该图表中发现，雷帕霉素外用药还降低了人类对疼痛刺激的阈值。
实施例6：施用雷帕霉素对末梢神经的效果
通过免疫染色观察了野生型小鼠以及法布雷病模型小鼠的皮肤(肉垫)中脊髄背根神经节的神经细胞的分布。另外，确认了施用雷帕霉素对法布雷病模型小鼠的脊髄背根神经节的神经细胞的效果。
[试验方法6-1]
切除野生型小鼠以及法布雷病模型小鼠的肉垫作为样品，并在10％甲醛中固定24小时。接着，将所述样品包埋在石蜡中，并制备了切片。
将所述切片浸入无血清蛋白块(Protein Block,Serum Free、Dako制造)30分钟，以阻断所述切片所包含的非特异性抗原。接着，将所述切片在4℃下与第一抗体一起培养一夜。然后，将所述切片与第二抗体一起在室温下培养60分钟。此时所使用的第一抗体和第二抗体的组合是，(1)兔抗泛神经元标记物PGP9.5(rabbit anti-pan-neuronal markerPGP9.5、Sigma制造)和Alexa Fluor 554山羊抗兔IgG(H+L)(Alexa Fluor 554 Goat Anti-rabbit IgG(H+L)、Life technology制造)、或者(2)含抗β-III微管蛋白的抗体稀释液(anti-Beta III Tubulin in antibody diluent、Dako制造)和FITC兔抗鸡IgG(FITCrabbit anti-chicken IgG、Life technology制造)。(1)用于染色所有神经细胞，(2)用于染色轴突。
最后，用Hoechst 33342(稀释500倍、Invitrogen制造)将所述切片的细胞核染色。用显微镜(BZ-X710、KEYENCE制造)观察染色后的切片，并拍摄了染色图像。
(试验结果6-1)
图7中的(a)示出野生型小鼠的肉垫的皮肤组织的免疫染色图像，图7中的(b)示出法布雷病模型小鼠的肉垫的皮肤组织的免疫染色图像。通过将这些图像的脊髄背根神经节神经细胞的形态进行比较，可以看出在法布雷病小鼠的脑组织中，神经细胞的轴突变短。
[试验方法6-2]
将野生型小鼠及法布雷病模型小鼠分别分成3组。对于每一组，涂抹了仅主剂、含有2％雷帕霉素的凝胶、或者含有1％扶他林的凝胶，24小时后进行了采血。测量了血液中的BDNF浓度。
(试验结果6-2)
法布雷病模型小鼠的血液中的BDNF浓度显著增加(图7(c))。
[试验方法6-3]
将野生型小鼠的背根神经节细胞(DRG细胞)从20周龄的小鼠分离。将分离的背根神经节神经细胞，首先用含有30％Percoll的Ham’s 12(Ham’s 12containing 30％Percoll)提取之后，使用加入了2mM的GlutaMax1、2％的不含维生素A的B-27(2％B-27w/o Vitamin A)、5ng/mL的BDNF重组蛋白无载体(recombinant BDNF carrier free)、以及10ng/mL的重组人类β-NGF无载体(recombinant human-beta NGF carrier free)的Gibco Neurobasal-A培养基(Gibco制造)，在37℃下培养了2日。然后，更换为添加了2mM的GlutaMax1、2％的不含维生素A的B-27(2％B-27w/o Vitamin A)、10μM的维生素A酸(Retinoic Acidn)、以及100ng/mL的重组人类β-NGF无载体(recombinant human-beta NGF carrier free)的培养基后，用显微镜(BZ-X710、KEYENCE制造)比较并观察轴突的伸长，并拍摄了显微镜图像。
(试验结果6-3)
图7中的(d)示出了施用BDNF后的显微镜图像。如所述显微镜图像所示，通过施用BDNF，在野生型小鼠的DRG细胞中观察到了轴突的伸长。由此得到了启示，即，雷帕霉素的施用借由BDNF而对法布雷病的治疗有效。
实施例7：施用雷帕霉素对钙离子流入细胞内的抑制
使用野生型的人神经母细胞瘤衍生细胞(SK-N-MC)以及敲除了α-galA的SK-N-MC，确认了施用雷帕霉素对钙离子流入细胞内的抑制效果。此外，敲除了α-galA的SK-N-MC可被视为法布雷病的模型细胞。
[试验方法]
使用钙试剂盒Fura-2(Calcium Kit-Fura2、同仁化学研究所制造)测量了细胞内的钙水平。
首先，敲除了α-galA的SK-N-MC移植到35mm培养皿中。24小时后，在含有Fura2-AM的上样缓冲液(具体的组成为：0.04％的普兰尼克F-127、1.25mM的丙磺舒以及5mg/L的Fura2-AM)中，在37℃下培养1小时，再放入记录介质(recording medium)。
用磷酸缓冲液(PBS)清洗细胞2次后，向培养皿倒入含有1.25mM丙磺舒(Probenecid)的记录缓冲液(Recording buffer)(包含于Calcium Kit-Fura2、同仁化学研究所制造)。然后，将培养皿置于显微镜(DIAPHOT300、尼康制造)的载物台上。
使分别含有1mM、5mM或10mM的谷氨酸的记录缓冲液与细胞接触，使用AQUACOSMOS/RATIO(日本滨松光子学株式会社制造)测量了510nm的荧光强度。此时，激发波长设为340nm及380nm，将(激发波长为340nm时的荧光强度/激发波长为380nm时的荧光强度)作为细胞内的钙浓度。
(试验结果)
图8中的(a)示出了示出钙离子流入细胞内的影像图像。分别是野生型细胞(左上)、施用了雷帕霉素的野生型细胞(右上)、α-gal A敲除细胞(左下)以及施用了雷帕霉素的α-galA敲除细胞(右下)的结果。均是与1mM的谷氨酸接触后的结果。从这些图可以看出，与野生型细胞相比，α-gal A敲除细胞的钙离子的流入量更多。进而，还发现通过施用雷帕霉素，在野生型细胞中钙离子的流入量增加，在α-gal A敲除细胞中钙离子的流入量降低。
图8中的(b)以及(c)示出了示出钙离子流入细胞内的随时间变化的图表。(b)是未施用雷帕霉素情况下的结果，(c)是施用了雷帕霉素情况下的结果。该图表显示了通过向α-gal A敲除细胞施用雷帕霉素显著降低了钙离子流入细胞内。此外，在两图表中，将未处理的SK-N-MC、以及使用对照质粒(Control plasmid)进行了敲除操作的SK-N-MC(control)用作对照。
实施例8：通过MRI确认施用雷帕霉素的效果
通过锰造影(Manganese contrast)MRI确认了野生型小鼠以及法布雷病模型小鼠的脑中的、感知热及疼痛的部位的活性。
[试验方法]
首先，将氯化锰(MnCl2)施用于野生型小鼠以及法布雷病模型小鼠的腹腔内。具体地，连续3天以30mg/kg的用量向腹腔内施用50mM氯化锰的生理盐水(0.9％氯化钠的水溶液)溶液。
第4天，使用11.7T竖孔Bruker Avance II成像系统(vertical-bore BrukerAvance II imaging system、Bruker Biospin制造)以及定制的15mm直径发射/接收量射频(RF)线圈(custom-made 15-mm diameter transmit/receive volume radio frequency(RF)coil、m2m imaging制造)，进行了MRI扫描。此时，用异氟醚(Abbott Laboratories制造)麻醉小鼠，并用生理监测系统(physiological monitoring system、SAInstruments,Inc.制造)监测呼吸信号。另外，通过使温水流入温暖垫(warming pad)来继续维持体温。
此外，在4天的实验期间，根据下表的计划，进行氯化锰的施用、雷帕霉素的施用、热刺激、MRI的造影。体内的锰离子随钙离子移动，然后会保留2周左右，因此通过用MRI检查锰离子的分布，可确定钙离子的流入。
[表1]
第1天 第2天 第3天 第4天
MnCl2 ○ ○ ○
热刺激 ○ ○ ○
雷帕霉素 ○ ○ ○
MRI ○
所得的数据是通过OsiriX Lite解析获得。
(试验结果)
图9示出了MRI的结果。根据该图，在未治疗的法布雷病模型小鼠中，感知热及疼痛的部位的活性上升。但是，在施加热刺激前经皮施用了雷帕霉素的法布雷病模型小鼠中，所述部位的活性降低，变成了未治疗的野生型小鼠程度。
产业上的可利用性
本发明例如能够用于治疗法布雷病。

Claims (9)

1.一种法布雷病治疗剂，其特征在于，
含有从由雷帕霉素以及雷帕霉素衍生物构成的组中选择出的至少一者作为有效成分。
2.根据权利要求1所述的法布雷病治疗剂，其特征在于，
所述雷帕霉素衍生物为从由依维莫司、替西罗莫司、42-(二甲基亚膦酰)雷帕霉素以及佐他莫司构成的组中选择出的至少一者。
3.根据权利要求1或2所述的法布雷病治疗剂，其特征在于，
其为外用药。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的法布雷病治疗剂，其特征在于，
用于治疗法布雷病的皮肤病变。
5.一种外用镇痛剂，其特征在于，
含有从由雷帕霉素以及雷帕霉素衍生物构成的组中选择出的至少一者作为有效成分。
6.根据权利要求5所述的外用镇痛剂，其特征在于，
所述雷帕霉素衍生物为从由依维莫司、替西罗莫司、42-(二甲基亚膦酰)雷帕霉素以及佐他莫司构成的组中选择出的至少一者。
7.一种出汗增进剂，其特征在于，
含有从由雷帕霉素以及雷帕霉素衍生物构成的组中选择出的至少一者作为有效成分。
8.根据权利要求7所述的出汗增进剂，其特征在于，
所述雷帕霉素衍生物为从由依维莫司、替西罗莫司、42-(二甲基亚膦酰)雷帕霉素以及佐他莫司构成的组中选择出的至少一者。
9.根据权利要求7或8所述的出汗增进剂，其特征在于，
用于治疗无汗症或少汗症。
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