CN108578700B

CN108578700B - 一种用于糖尿病患者种植体骨整合的药物靶标

Info

Publication number: CN108578700B
Application number: CN201810381378.9A
Authority: CN
Inventors: 汪林; 刘洪臣; 白阳
Original assignee: Chinese PLA General Hospital
Current assignee: Chinese PLA General Hospital
Priority date: 2018-04-25
Filing date: 2018-04-25
Publication date: 2021-04-30
Anticipated expiration: 2038-04-25
Also published as: CN108578700A

Abstract

本发明公开了一种用于糖尿病患者种植体骨整合的药物靶标，所述药物靶标为ZNF774。本发明公开了一种药物组合物，该药物组合物包括ZNF774的促进剂。本发明还公开了一种利用ZNF774筛选促进糖尿病患者种植体骨整合的候选药物的方法。

Description

一种用于糖尿病患者种植体骨整合的药物靶标

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种用于糖尿病患者种植体骨整合的药物靶标，具体的所述靶标为ZNF774。

背景技术

随着人民生活水平的提高以及生活方式的改变，糖尿病患病率逐年增加，中老年人患有糖尿病时又多同时伴有牙列缺损或缺失，渴望受惠于牙种植技术。人工高种植牙技术在我国已经开展了十余年，已经成为牙列缺损或缺失常用的修复方法之一，尤其是牙列远中游离端的缺失牙修复时更是首选。种植体骨结合是种植牙成功的基础，然而诸多研究证实糖尿病导致骨愈合延迟，影响了牙种植体植入的成功率，甚至将糖尿病列为种植牙手术的禁忌症之一。

胰岛素被认为是体内能量代谢的主要调控者，其主要作用在肝脏、肌肉及脂肪组织，控制着蛋白质、糖、脂肪三大营养物质的代谢和贮存。糖尿病患者血糖控制不佳或胰岛素抵抗易引起种植体植入后创口愈合延迟，牙种植体骨结合不良(Tatarakis N,KinneyJS,Inglehart M,Braun TM,Shelburne C,Lang NP,Giannobile WV,and Oh TJ.Clinical,microbiological,and salivary biomarker profiles of dental implant patientswith type 2diabetes.Clin Oral Implants Res.2014；25(7):803-812)。动物研究已经证实糖尿病大鼠通过胰岛素治疗后，种植体骨结合较未进行胰岛素治疗的糖尿病大鼠而言要更为正常但明显低于正常大鼠(Han Y,Zhang X,Lingling E,Wang D,and LiuH.Sustained local delivery of insulin for potential improvement of peri-implant bone formation in diabetes.Sci China Life Sci.2012；55(11):948-957)，提示糖尿病如果控制不佳会影响种植体骨整合界面形成。还有一些学者发现胰岛素治疗能够提高骨形成和矿化的正常水平(Liu EY,Wactawski-Wende J,Donahue RP,Dmochowski J,Hovey KM,and Quattrin T.Does low bone mineral density start in post-teenageyears in women with type 1diabetes？Diabetes Care.2003；26(8):2365-2369)。本课题组前期研究已经证实将生理浓度的胰岛素局部应用于糖尿病大鼠拔牙窝处能促进新骨形成，加速拔牙窝愈合(CN201010274107.7)。但是目前对于胰岛素的作用机制尚不清楚。本申请基于胰岛素促进骨整合的特征，研究在其中起重要作用的分子，为进一步阐明胰岛素调控骨稳态影响的信号通路研究奠定理论基础，为日益增多的糖尿病患者牙种植体骨结合不良的研究提供理论依据，同时为促进种植体的骨愈合提供新的思路。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种与糖尿病患者种植体骨整合相关的基因标志物，通过改变基因的表达水平，可以影响种植体骨愈合。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明ZNF774在制备促进糖尿病患者种植体骨整合中的药物组合物中的应用。

进一步，所述药物组合物包括ZNF774的促进剂。

进一步，促进剂为增加ZNF774基因表达、增强ZNF774表达功能、和/或增强ZNF774表达产物活性的试剂。

进一步，所述试剂为含有能编码功能性ZNF774蛋白的核酸的试剂、ZNF774蛋白的激活剂、含有ZNF774蛋白质的试剂。

进一步，所述糖尿病是II型糖尿病。

本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括ZNF774功能性表达的促进剂，和/或药学上可接受的载体。

本发明提供了一种筛选促进糖尿病患者种植体骨整合的候选药物的方法，步骤包括：

用待筛选物质处理表达或含有ZNF774基因或其编码的蛋白的体系；和

检测所述体系中ZNF774基因或其编码的蛋白的表达或活性。

其中，若所述待筛选物质可增加ZNF774基因或其编码的蛋白的表达或活性，优选显著降低，(如高20％及以上，较佳的高50％及以上；更佳的高80％及以上)，则表明该待筛选物质是促进糖尿病患者种植体骨整合的候选药物。

在本发明中，所述体系包括(但不限于)：细胞体系、亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系。

在本发明中，所述的步骤还包括：对获得的候选药物进行进一步的细胞实验和/或动物试验，以从候选药物中进一步选择促进糖尿病患者种植体骨整合的物质。

本发明提供了如上所述的方法在筛选促进糖尿病患者种植体骨整合的候选药物中的应用。

本发明的优点和有益效果：

本发明首次发现了ZNF774基因与糖尿病患者种植体骨整合相关，通过增加ZNF774的表达水平，可以促进种植体骨整合，为糖尿病患者牙种植骨结合提供新的促进方法。

附图说明

图1是QPCR检测ZNF774基因的过表达。

具体的实施方式

本发明经过广泛而深入的研究，通过高通量方法，检测施用和未施用胰岛素的基因的表达水平，发现其中具有明显差异的基因，探讨其与种植体骨整合之间的关系。通过测序及分析，本发明首次发现了胰岛素组ZNF774显著性上调。实验证明，促进ZNF774的表达水平，能够有效的促进巨噬细胞的杀菌效果，为牙种植的骨结合提供了新的促进方法。

在本发明中，ZNF774包括野生型、突变型或其片段。在本发明的具体实施例中，一种代表性ZNF774基因的的核苷酸序列如目前国际公共核酸数据库GeneBank中ZNF774(NM_001004309.2)所示。本发明的ZNF774核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。

促进剂和药物组合物

基于本发明的发现，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含ZNF774的促进剂。

所述的ZNF774的促进剂是指任何可提高ZNF774基因或表达产物稳定性、上调ZNF774的表达、增加ZNF774的有效作用时间或促进ZNF774基因的转录的物质，这些物质均可用于本发明，作为对于上调ZNF774基因的表达有用的物质，从而可用于促进骨整合。

作为本发明的一种优选方式，所述的ZNF774的促进剂是一种含有ZNF774的表达载体。所述的表达载体通常还含有启动子、复制起点和/或标记基因等。

本领域的技术人员熟知的方法能用于构建本发明所需的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等。所述的表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如卡拉霉素、庆大霉素、潮霉素、氨苄青霉素抗性。

在本发明中，是本领域已知的各种载体，如市售的载体、包括质粒、粘粒、噬菌体、病毒等。表达载体向宿主细胞中的导入可以使用电穿孔法、磷酸钙法、脂质体法、DEAE葡聚糖法、显微注射、病毒感染、脂质体转染、与细胞膜透过性肽的结合等周知的方法。

术语“宿主细胞”包括原核细胞和真核细胞。常用的原核宿主细胞的例子包括大肠杆菌、枯草杆菌等。常用的真核宿主细胞包括酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞。较佳地，该宿主细胞是真核细胞，如CHO细胞、COS细胞等。

在本发明中，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体，包括(但不限于)稀释剂、粘合剂、表面活性剂、致湿剂、吸附载体、润滑剂、填充剂、崩解剂。

其中，稀释剂如乳糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、水等；粘合剂如淀粉、预胶化淀粉、糊精、麦芽糖糊精、蔗糖、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯比咯烷酮、海藻酸及海藻酸盐、黄原胶、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素等；表面活性剂如聚氧化乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠、硬脂酸单甘油酯、十六烷醇等；致湿剂如甘油、淀粉等；吸附载体如淀粉、乳糖、斑脱土、硅胶、高岭土和皂粘土等；润滑剂如硬脂酸锌、单硬脂酸甘油酯、聚乙二醇、滑石粉、硬脂酸钙和镁、聚乙二醇、硼酸粉末、氢化植物油、硬脂富马酸钠、聚氧乙烯单硬脂酸酯、单月桂蔗糖酸酯、月桂醇硫酸钠、月桂醇硫酸镁、十二烷基硫酸镁等；填充剂如甘露醇(粒状或粉状)、木糖醇、山梨醇、麦芽糖、赤藓糖、微晶纤维素、聚合糖、偶合糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖、糊精、淀粉、海藻酸钠、海带多糖粉末、琼脂粉末、碳酸钙和碳酸氢钠等；崩解剂如交联乙烯吡咯烷酮、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基甲基、交联羧甲基纤维素钠、大豆多糖等。

本发明中的药物组合物还可以包括稳定剂、杀菌剂、缓冲剂、等渗剂、螯合剂、pH控制剂及表面活性剂等添加剂。

其中，稳定剂包括人类血清蛋白、L-氨基酸、糖及纤维素衍生物。L-氨基酸还可以包括甘氨酸、半胱氨酸及谷氨酸中的任意一个。糖类包括单糖，例如葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖等；糖醇，例如甘露醇、纤维醇、木糖醇等；二糖，例如蔗糖、麦芽糖、乳糖等；多聚糖，例如葡聚糖、羟丙基淀粉、硫化软骨素、透明质酸等及它们的衍生物。纤维素衍生物包括甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素及羟甲基纤维素钠。表面活性剂包括离子或非离子表面活性剂，例如聚氧化乙烯烷基酯、山梨聚糖单酰基酯、脂肪酸甘油酯。添加剂缓冲剂可以包括硼酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、谷氨酸及相应的盐(它们的碱金属或碱性稀土金属盐，例如钠盐、钾盐、钙盐及镁盐)。等渗剂包括氯化钾、氯化钠、糖及甘油。螯合剂包括乙二胺四乙酸钠及柠檬酸。

本发明所述药物组合物可口服给药、非胃肠道给药、通过吸入喷雾给药、局部给药、直肠给药、鼻给药、颊给药、阴道给药或通过植入的贮药装置给药。优选口服给药或注射给药。本发明药物组合物可含有任何常用的无毒可药用载体、辅料或赋形剂。

本发明的药物导入组织或者细胞的方式可以分为体外或者体内的方式。体外方式包括将含有ZNF774基因或ZNF774蛋白质促进剂的药物导入细胞中，再将细胞移植或回输到体内。体内方式包括直接将含有ZNF774基因或者ZNF774蛋白质抑制物的药物注入体内组织中。

候选药物的筛选

用待筛选物质处理表达或含有ZNF774基因或其编码的蛋白的培养体系；和

检测所述体系中ZNF774基因或其编码的蛋白的表达或活性。

其中，如果实验组中的ZNF774的表达水平显著高于对照组，则说明该待筛选的物质为ZNF774的候选药物。

所述培养体系包括(但不限于)细胞体系、亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系(如动物模型，优选非人哺乳动物的动物模型，如鼠、兔、羊、猴等)等。

当将通过本发明的筛选方法分离的化合物作为药物施用于人或其它哺乳动物，其包括但不限于小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猫、犬、羊、猪、牛、猴子、狒狒、黑猩猩时，分离的化合物可以直接施用，或者可以利用已知的药物制备方法配制成各种剂型。例如，根据需要，所述药物可以作为糖衣片剂、胶囊剂、酏剂和微胶囊口服施用；或者用水或任何其它药物可接受的液体配制成无菌溶液或悬浮液，以注射剂的形式非口服施用。例如，可以将化合物以一般接受的药物施用方式所需的单位剂型(unit dose)、与药学可接受的载体或介质混合在一起，所述载体或介质包括但不限于无菌水、生理盐水、植物油、乳化剂、悬浮剂、表面活性剂、稳定剂、调味剂、赋形剂(excipient)、媒介物(vehicle)、防腐剂、粘合剂等。根据这些制剂中有效成分的含量，可以获得在指定范围内的合适的给药量。

文件、文章的使用

在本说明书中包括的对文件、法规、物质、装置、文章或类似物的任何讨论仅是为了提供本发明的上下文。不能认为是承认任何或所有这些内容，形成现有技术基础的一部分，或是在本申请的优先权日之前在中国或其他地方与本发明相关的领域中的公知常识。为了更清晰地理解本发明，参考下面的附图和实施例描述优选的实施方式。

下面结合具体的实施例进一步说明本发明，本发明的实施例仅用于解释本发明，并不意味着限制本发明的保护范围。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1胰岛素促进创口愈合实验

1、THP-1细胞的培养

细胞培养于完全培养基(含RPMI1640：FBS：链霉素双抗＝90：10：1，未加B巯基乙醇)中，培养条件为37℃，5％CO₂，日常传代操作为一般情况下细胞生长良好时吸取培养液至新的培养瓶，增加新的培养基；隔天离心传代，1000rpm离心3min，去掉旧的培养基后用1×的PBS液洗涤1次，然后1000rpm离心3min，增加新的培养基继续传代。

2、PMA诱导THP-1细胞分化

培养单核细胞株THP-1细胞，传至第3代，以5×10⁶/孔将THP-1细胞接种于12孔板，培养于含10％胎牛血清、1％谷氨酰胺、1％青链霉素的RPMI1640培养基中，使用60μg/L乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)处理THP-1细胞48h后，洗涤细胞并更换培养基，观察细胞形态，细胞由悬浮状态变为贴壁状态，形态上则由圆形逐渐平铺开来，并呈现变形虫样，表明细胞已由单核细胞向巨噬细胞进行转化。

3、细胞吞噬功能检测

巨噬细胞的培养：在每升RPMI1640培养基中另外添加无菌葡萄糖粉末0.969g配置含16.5mmol/L葡萄糖的高糖培养基，将细胞于含10％FBS的高糖RPMI1640培养基中，在37℃，5％CO₂的培养箱中进行培养。

胰岛素处理方法：在细胞超净台中，将胰岛素与完全培养基混合，按实验要求浓度依次加入细胞孔内。

待THP-1单核细胞诱导成巨噬细胞后用PBS冲洗2次，充分悬浮细胞计数，将0.5mL细胞(5×10⁶/mL)与牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)50μL(5×10⁶CFU/mL)混合，在不同浓度胰岛素(0,5,50,100,200,500,1000ng/mL)条件下37℃孵育60min，以平板接种法计算杀菌率，记录杀菌率。

4、ROS产生水平检测

使用氧化还原敏感的荧光探针DCFH-DA测定ROS的生成。按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10μM。细胞收集后悬浮于稀释好的DCFH-DA中，细胞浓度为1×10⁶/mL，37℃细胞培养箱内孵育20min。每隔3-5min颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分除去未进入细胞内的DCFH-DA。将THP-1与细菌在不同浓度胰岛素(0,5,50,100,200,500,1000ng/mL)存在条件下共孵育30min，收集细胞检测荧光强度差异(使用488nm激发波长，525nm发射波长)。

5、结果

1)胰岛素对巨噬细胞杀菌率的影响结果如表1所示，杀菌率随着胰岛素浓度的增加而增加，当胰岛素浓度为200ng/ml，杀菌率达到最高，之后，随着胰岛素浓度的增加，杀菌率逐渐降低。

表1胰岛素对巨噬细胞杀菌率的影响(

n＝3)

2)胰岛素随高糖条件下THP-1细胞ROS含量的影响结果如表2所示，ROS的含量随着胰岛素浓度的增加而增加，当胰岛素浓度为200ng/ml时，达到最大值。

表2胰岛素对高糖条件下TPH-1细胞ROS含量的影响

上述结果说明，胰岛素能够促进中性粒细胞的吞噬能力，从而进一步促进创口愈合。

实施例2筛选与骨整合相关的基因

1、细胞的培养

1)THP-1细胞的培养步骤同实施例1；

2)PMA诱导THP-1细胞分化步骤同实施例1；

3)胰岛素处理巨噬细胞步骤同实施例1，采用胰岛素的浓度为200ng/ml。

2、RNA的提取

1)细胞的收集

去除细胞培养液，用PBS缓冲液迅速洗净一次，除去PBS缓冲液，贴壁细胞可以用细胞刮刀收集。收集的细胞转移到1.5mL的RNase-free的EP管中，每组细胞取3管作为平行样。

2)向EP管中加入TRIzol裂解液，使细胞完全溶于TRIzol中充分裂解；

3)将裂解液转移至1.5mL无RNA酶的无菌离心管中，加入200μl氯仿，剧烈震荡混匀15s，室温孵育5min，4℃，12000rpm离心15min；

4)小心取出后，将水层小心吸取转移至另一个离心管中，加入0.5ml异戊醇，轻柔震荡混匀，室温孵育10min，4℃，12000rpm离心15min；

5)轻轻移弃上清，防止吸去沉淀，加入l mL 75％乙醇，悬浮沉淀，4℃，7500rpm离心5min，重复一次；

6)轻轻移弃上清，尽量洗净，防止吸去沉淀，室温下空气干燥，使乙醇挥发；

7)加入20μl～30μl DEPC水，上机检测RNA浓度及A260/A280。其比值应维持在1.8～2.0之间，并记录RNA浓度。

8)RNA样品的质量分析

利用Nanodrop2000对所提取的RNA浓度和纯度进行检测，琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性，Agilent2100测定RIN值。浓度≥200ng/μl，OD260/280介于1.8～2.2之间。

3、去除rRNA

使用Ribo-Zero试剂盒除去总RNA中的核糖体RNA。

4、构建cDNA文库

利用利用Illumina的Truseq RNA sample Prep Kit进行cDNA文库的构建，具体操作按说明书进行。

5、上机测序

Illumina Hiseq x-ten第二代高通量测序技术对mRNA进行测序，具体操作按说明书进行。

6、高通量转录组测序数据分析

对测序结果进行生物信息学分析，用SeqPrep和Sickle对reads的5’和3’段进行trim，trim掉质量<20的碱基，并且删掉N大于10％的reads，利用TopHat v1.3.1进行RNA-seq读段定位，通过cuffquant定量mRNA的表达量并标准化输出，利用cuffdiff检测差异表达，当p值<0.05，|log2(Fold_change)normalized|>1时，认为mRNA显著差异表达。

7、结果

测序结果如图1所示，ZNF774在胰岛素处理组中显著上调，log₂(Fold_change)约为20倍，P值为0.0233，差异具有统计学意义，提示ZNF774的过表达有利于巨噬细胞有效的杀菌。

实施例3ZNF774基因的过表达

1、细胞培养及分化步骤同实施例1

2、转染

1)转染前细胞的处理

转染前一天，6孔培养板上种3～5×10⁵个细胞/孔，在无抗生素培养基中培养一天，于转染前换成无血清培养基。

2)基因过表达载体的构建

根据GeneBank中ZNF774序列合成特异的PCR扩增引物，引物序列如下：

正向引物：5’-CCGGGTACCGCCACCATGT GGCTGGGGACTTC-3’(SEQ ID NO.1)

反向引物：5’-CGGCTCGAGAATCAAATGGGTGTTTTGATGGC-3’(SEQ ID NO.2)

在5’端引物和3’端引物分别添加KpnI和XhoI两个限制性酶切位点。以帕金森患者提取和反转录得到的cDNA作为扩增模板，上述cDNA序列经限制性内切酶KpnI和XhoI双酶切后插入到经KpnI和XhoI双酶切的真核细胞表达载体pcDNA3.1中，连接获得的重组载体pcDNA3.1-1用于后续实验。

将实验分为三组：对照组(巨噬细胞)、阴性对照组(转染pcDNA3.1-NC)和实验组(转染pcDNA3.1-1)。

3)转染

采用Invitrogen公司的使用脂质体3000进行载体的转染，具体转染方法按照说明书的指示进行。pcDNA3.1空载体和pcDNA3.1-1的转染浓度均为0.5μg/ml。

3、RNA的提取具体步骤同实施例2

4、逆转录

1)加入dNTP mixture1μl，Oligo dT primer 1μl，总RNA 2μg，加Rnase FreeddH₂O使总体积至10μl，在PCR仪上进行变性、退火反应，65℃，5min，反应完成后置于4℃。

2)构建20μl反应体系，继续加入5×Primer Script Buffer 4μl，RNaseInhibitor 0.5μl，Prime Script RTase 0.5μl，RNase Free ddH₂O 5.0μl，在PCR仪上按下列条件进行反转录反应：42℃15～30min，95℃5min，反应完成之后，置于冰上。

5、QPCR检测ZNF774基因的转录水平

1)引物的设计

根据Genebank中ZNF774基因和管家基因GAPDH基因的编码序列设计QPCR扩增引物，由博迈德公司合成，具体引物序列如下：

ZNF774基因：

正向引物为5’-TGGATGGATATGTAGGAGAG-3’(SEQ ID NO.3)；

反向引物为5’-GGTTCTTAGGTGTCTTATGAG-3’(SEQ ID NO.4)。

GAPDH基因：

正向引物为5’-AACTCTGGTAAAGTGGATATTG-3’(SEQ ID NO.5)；

反向引物为5’-GGTGGAATCATATTGGAACA-3’(SEQ ID NO.6)。

2)PCR反应体系：正向引物和反向引物各1μl，SYBR Green PCR master mix 10μl，cDNA 1μl，ddH₂O 7μl。

3)PCR反应条件：95℃10min，(95℃10s，60℃30s，72℃15s)×40个循环，65℃～95℃，温度升高速度0.5℃/5s。在Bio-Rad iQ5荧光定量PCR仪上进行PCR反应，通过融解曲线分析和电泳确定目的条带，ΔΔCT法进行相对定量。

6、结果

结果如图1所示，与对照组相比，实验组中的ZNF774显著上调，差异具有统计学意义(P<0.05)。

实施例4ZNF774基因的过表达对巨噬细胞杀菌率的影响

1、细胞培养及分化步骤同实施例1

2、细胞分组

将实验分为三组：对照组(巨噬细胞组/空白组)、转染组(pcDNA3.1-1)、阳性对照组(胰岛素组)，对照组与转染细胞组加入完全培养基，阳性对照组加入相同体积的胰岛素，胰岛素的终浓度为200ng/ml。

3、细胞吞噬功能检测步骤同实施例1

4、结果

以对照组的巨噬细胞的杀菌率为0，统计结果显示，实验组的杀菌率为32.16％±0.21，胰岛素组的杀菌率为34.72±1.39，提示ZNF774在吞噬细胞的杀菌过程中起着重要的作用，其可用于糖尿病患者牙种植体创口愈合的促进。

上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。

序列表

<110> 中国人民解放军总医院

<120> 一种用于糖尿病患者种植体骨整合的药物靶标

<160> 6

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 32

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

ccgggtaccg ccaccatgtg gctggggact tc 32

<210> 2

<211> 32

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

cggctcgaga atcaaatggg tgttttgatg gc 32

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

tggatggata tgtaggagag 20

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

ggttcttagg tgtcttatga g 21

<210> 5

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

aactctggta aagtggatat tg 22

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

ggtggaatca tattggaaca 20

Claims

1.ZNF774的促进剂在制备促进糖尿病患者种植体创口愈合的药物组合物中的应用，其特征在于，所述促进剂促进巨噬细胞的杀菌率，所述促进剂为含有能编码功能性ZNF774蛋白的核酸的试剂或含有ZNF774蛋白质的试剂。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述糖尿病是II型糖尿病。

3.一种体外筛选促进糖尿病患者种植体创口愈合的候选药物的方法，其特征在于，步骤包括：

检测所述体系中ZNF774基因或其编码的蛋白的表达或活性；

其中，若所述待筛选物质可增加ZNF774的表达或活性，则表明该待筛选物质是促进糖尿病患者种植体创口愈合的候选药物。

4.权利要求3所述的方法在体外筛选促进糖尿病患者种植体创口愈合的候选药物中的应用。