CN108566920A - 一种快速培育黑白芦花新品系的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及遗传育种技术领域，尤其涉及一种快速培育黑白芦花新品系的方法。本发明方法包括以下步骤：(1)引进黑白芦花鸡父母代种鸡，利用种公鸡作为新培育品系的父本；(2)引进黑白芦花鸡商品代母鸡；(3)将步骤1中的公鸡与步骤2的母鸡杂交，生产F1代鸡苗；(4)分子标记辅助选择，选留F1代纯合子公母鸡组成新品系育种基础群；(5)将步骤4中选留的合格的纯合子公母鸡进行扩繁，选育提高，连续进行三个世代，新品系建成。本发明培育用公鸡可选择范围广，性能和芦花表型稳定遗传；无须测交，选育准确；比较传统方法至少提前一个世代建成芦花羽纯系。
Description
技术领域
本发明涉及遗传育种技术领域，具体为一种快速培育黑白芦花新品系的方法。
背景技术
黑白芦花鸡在山东市场以及西北部分市场尤其受欢迎，较之相同生长速度的其它羽色的品种，其鸡苗售价要高出0.5元左右，商品代肉鸡要贵0.5元/斤。
由于消费者消费层次的不同，对芦花鸡的长速也提出了不同的要求。因此诸多育种企业纷纷培育芦花鸡。有的育种企业用地方品种中突变出的横斑芦花和高产蛋鸡作为育种素材培育芦花新品系，有的则采用市场上的商品代芦花公母鸡为育种素材。上述的两种方案培育纯系黑白芦花羽色品系时，由于素材原因会导致严重的羽色分离，因此至少要经过两个世代才能得到黑白芦花遗传稳定的基础群体，大大阻碍了新品系的培育进程。
另外，上述素材培育过程中的黑白芦花提纯一般的做法是通过测交将杂合子个体剔除，测交的方法仅仅用于剔除少量公鸡中的杂合子个体尚可，但是用于剔除数量众多的母鸡杂合子个体时则需要分别对每只母鸡个体的蛋进行标记入孵，且至少要保证每只母鸡可以产出7个苗，上述过程繁琐，容易出错而且做不到100％准确，往往用培育的纯系公鸡和其它羽色母鸡杂交时，商品代往往会有不同程度的非芦花个体。
发明内容
本发明的目的在于提供一种快速培育黑白芦花新品系的方法，通过合理的选择市场上的素材，并且结合分子标记辅助选择技术快速的建立黑白芦花新品系，以解决现有技术中培育过程周期长，且难以将黑白芦花性状提纯的缺点。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种快速培育黑白芦花新品系的方法，包括以下步骤：
(1)引进黑白芦花鸡父母代种鸡，利用种公鸡作为新培育品系的父本；
(2)引进黑白芦花鸡商品代母鸡；
(3)将步骤1中的公鸡与步骤2的母鸡杂交，生产F1代鸡苗；
(4)分子标记辅助选择，选留F1代纯合子公母鸡组成新品系育种基础群；
A.PCR：以被检个体DNA为模板，进行PCR扩增
P1：atcccaaggtacacagtgac
P2：gggcacccaggggacacc
引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；
B.测序，目的位点基因分型
将步骤A扩增得到的PCR产物送生物公司测序；
C.选留如下位点为纯合子的个体
表目的位点的基因型
| 物理位置 | 668 | 730 | 854 | 883 | 1093 | 1100 |
| 基因型 | CC | AA | TT | AA | TT | AA |
注：物理位置表示SNP位点在扩增产物上的位置。
(5)将步骤4中选留的合格的纯合子公母鸡进行扩繁，选育提高，连续进行三个世代，新品系建成。
本发明所述的快速培育黑白芦花新品系的方法，其中，所述步骤(2)中母鸡的体重以及胫的长短根据培育需要确定。
本发明所述的快速培育黑白芦花新品系的方法，其中，步骤(4)中PCR反应扩增程序为：94℃变性3min，32次循环94℃30s、58℃30s、72℃1min，72℃延伸10min，得到PCR扩增产物；
扩增片段：
关于扩增片段的说明：扩增片段中的668、730、854、883、1093和1100还有可能分别是CT、AG、TC、AG、TC和AC；如下所示。上述位点任何一个位点出现杂合现象，该个体都要被剔除。
其中，668、730、854、883、1093和1100分别为C、A、T、A、T、A的扩增片段如SEQ IDNO.3所示。
扩增体系：20μL体系，具体为：PCR MIX：10μL，双蒸水8.6μL，1μL的DNA模板，P1引物0.2μL，P2引物0.2μL。
本发明所述的快速培育黑白芦花新品系的方法，其中，步骤(4)中测序所得结果采用DNAstar中SeqMan功能模块进行拼接组装，人工对目的位点的进行分型。
本发明的快速培育黑白芦花新品系的方法在黑白芦花选育中的应用。
本发明技术方案的具体分析：
1.关键点：
(1)素材的选用：公鸡选用芦花鸡父母代的父本，该父本理论上应该为黑白芦花的纯合子，无需测交。
(2)本发明的关键点是通过分子标记辅助选择的办法，对于F1的杂合子进行检测，直接对和黑白芦花形成相关的位点进行检测。相比现有技术，该方案更加的快速，准确；大大加快了品系的培育进程。
2.理论分析：
(1)素材方面：市面上黑白芦花的父母代种公鸡一定是纯合子，因为只有这样才能保证后代全部为黑白芦花。父母代父本在与黑白芦花形成相关的基因位点一定是纯合的，故作无需测交。
(2)检测方面：表型是由基因型决定的，本发明是针对与黑白芦花形成直接相关的基因位点进行检测，可以做到100％准确。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)培育用公鸡可选择范围广，性能和芦花表型稳定遗传。因培育用素材的公鸡为父母代的父本，该父本已经经过多代选育，生长和繁殖性能均已稳定，芦花表型已经100％纯合固定。
(2)无须测交，选育准确。分子检测F1代中与黑白芦花形成相关的基因座位，可以做到100％准确，而无须测交。
(3)比传统方法至少提前一个世代建成芦花羽纯系。传统的做法用“商品代芦花”或者“地方品种中突变出的芦花”作为育种素材的父本，然后导入高产蛋鸡血缘(海兰褐、海兰灰、白来航等)，该方法最快要到F2才会出现黑白芦花的纯合个体，本案在F1代就会出现纯合的芦花个体。因此本方法至少提前一个世代取得纯合的黑白芦花公母鸡。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1 WJ公司中速型黑白芦花鸡新品系的培育
要求：身体团圆-脚胫短、尾端。
(1)引进A公司黑白芦花鸡父母代种鸡，利用种公鸡作为新培育品系的父本，该公鸡身体团圆，适合华南市场，选择70日龄胫长<6.5cm，体重4.2斤左右个体留种。
(2)引进B公司黑白芦花鸡商品代母鸡，选择70日龄胫长<5.5cm的个体留种，体重3.5斤左右个体留种。
(3)将步骤1中的公鸡与步骤2的母鸡杂交，生产F1代鸡苗。
(4)分子标记辅助选择，选留纯合子公母鸡组成新品系育种基础群。
A.PCR：以被检个体DNA为模板，进行PCR扩增
P1：atcccaaggtacacagtgac
P2：gggcacccaggggacacc
引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；
扩增程序：PCR反应扩增程序为：94℃变性3min，32次循环(94℃30s，58℃30s，72℃1min)，72℃延伸10min，得到PCR扩增产物；扩增片段如SEQ ID NO.3所示；
扩增体系：20μL体系，具体为：PCR MIX：10μL，双蒸水8.6μL，1μL的DNA模板，P1引物0.2μL，P2引物0.2μL。
B.测序，目的位点基因分型
将步骤A扩增得到的PCR产物送生物公司测序。测序所得结果采用DNAstar中SeqMan功能模块进行拼接组装，人工对目的位点的进行分型。
C.选留如下位点为纯合子的个体。
表目的位点的基因型
| 物理位置 | 668 | 730 | 854 | 883 | 1093 | 1100 |
| 基因型 | CC | AA | TT | AA | TT | AA |
注：物理位置表示SNP位点在扩增产物上的位置。
(5)将步骤4中选留的合格的纯合子公母鸡进行扩繁，选育提高，连续进行三个世代，新品系建成。
上述新品系可与任何羽色群体交配，后代全部为黑白芦花。
实施例2 SH公司慢速型黑白芦花鸡新品系的培育
要求：身体修长，容易造型，屠宰率高。
(1)引进JH公司黑白芦花鸡父母代种鸡，利用种公鸡作为新培育品系的父本，该公鸡身体修长，适合华北市场，选择110日龄胫长9cm左右，体重4.2斤左右个体留种。
(2)引进T公司黑白芦花鸡商品代母鸡，选择110日龄胫长7.5cm的个体留种，体重3.5斤左右个体留种。
(3)将“步骤1”中的公鸡与“步骤2”杂交，生产F1代鸡苗。
(4)分子标记辅助选择，选留纯合子公母鸡组成新品系育种基础群。
A.PCR：以被检个体DNA为模板，进行PCR扩增
P1：atcccaaggtacacagtgac
P2：gggcacccaggggacacc
引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；
扩增程序：PCR反应扩增程序为：94℃变性3min，32次循环(94℃30s，58℃30s，72℃1min)72℃延伸10min，得到PCR扩增产物；扩增片段如SEQ ID NO.3所示；
扩增体系：20μL体系，具体为：PCR MIX：10μL，双蒸水8.6μL，1μL的DNA模板，P1引物0.2μL，P2引物0.2μL。
B.测序，目的位点基因分型
将步骤A扩增得到的PCR产物送生物公司测序。测序所得结果采用DNAstar中SeqMan功能模块进行拼接组装，人工对目的位点的进行分型。
C.选留如下位点为纯合子的个体。
表目的位点的基因型
| 物理位置 | 668 | 730 | 854 | 883 | 1093 | 1100 |
| 基因型 | CC | AA | TT | AA | TT | AA |
注：物理位置表示SNP位点在扩增产物上的位置。
(5)将“步骤4”中选留的合格的纯合子公母鸡进行扩繁，选育提高，连续进行三个世代，新品系建成。
上述新品系可与任何羽色群体交配，后代全部为黑白芦花。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
序列表
<110> 江苏兴牧农业科技有限公司
江苏立华牧业股份有限公司
<120> 一种快速培育黑白芦花新品系的方法
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物P1(Artificial Sequence)
<400> 1
atcccaaggt acacagtgac 20
<210> 2
<211> 18
<212> DNA
<213> 引物P2(Artificial Sequence)
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<211> 1538
<212> DNA
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gacaaacaga cgcaccgcgg ggtgtcccct gggtgccc 1538
Claims (5)
1.一种快速培育黑白芦花新品系的方法，包括以下步骤：
(1)引进黑白芦花鸡父母代种鸡，利用种公鸡作为新培育品系的父本；
(2)引进黑白芦花鸡商品代母鸡；
(3)将步骤1中的公鸡与步骤2的母鸡杂交，生产F1代鸡苗；
(4)分子标记辅助选择，选留F1代纯合子公母鸡组成新品系育种基础群；
A.PCR：以被检个体DNA为模板，进行PCR扩增
P1：atcccaaggtacacagtgac
P2：gggcacccaggggacacc
引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；
B.测序，目的位点基因分型
将步骤A扩增得到的PCR产物送生物公司测序；
C.选留如下位点为纯合子的个体
其中，物理位置表示SNP位点在扩增产物上的位置；
(5)将步骤4中选留的合格的纯合子公母鸡进行扩繁，选育提高，连续进行三个世代，新品系建成。
2.根据权利要求1所述的快速培育黑白芦花新品系的方法，其特征在于：所述步骤(2)中母鸡的体重以及胫的长短根据培育需要确定。
3.根据权利要求2所述的快速培育黑白芦花新品系的方法，其特征在于：步骤(4)中PCR反应扩增程序为：94℃变性3min，32次循环94℃30s、58℃30s、72℃1min，72℃延伸10min，得到PCR扩增产物；
扩增体系：20μL体系，具体为：PCR MIX：10μL，双蒸水8.6μL，1μL的DNA模板，P1引物0.2μL，P2引物0.2μL。
4.根据权利要求3所述的快速培育黑白芦花新品系的方法，其特征在于：步骤(4)中测序所得结果采用DNAstar中SeqMan功能模块进行拼接组装，人工对目的位点的进行分型。
5.权利要求1-4任一项所述的快速培育黑白芦花新品系的方法在黑白芦花选育中的应用。
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| CN1911006A (zh) * | 2005-08-08 | 2007-02-14 | 河南农业大学 | 一种横斑浅芦花鸡新品系的培育方法 |
| CN103563851A (zh) * | 2013-11-20 | 2014-02-12 | 河南农业大学 | 一种基于分子辅助选择的青胫显性白羽肉鸡品系的培育方法 |
| CN103898102A (zh) * | 2014-02-14 | 2014-07-02 | 华南农业大学 | 一种鸡黄色羽相关的分子标记及其应用 |
| CN106434867A (zh) * | 2016-07-28 | 2017-02-22 | 江苏省家禽科学研究所 | 监测家禽保种效果的snp标记筛选方法及其在鸡保种上的应用、以及snp标记的鉴定方法 |
| CN106701929A (zh) * | 2016-12-14 | 2017-05-24 | 华南农业大学 | 一组与清远麻鸡标准羽色相关的分子标记及其应用 |
-
2017
- 2017-09-12 CN CN201710815377.6A patent/CN108566920A/zh active Pending
Patent Citations (5)
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| CN112514846A (zh) * | 2019-09-18 | 2021-03-19 | 中国农业大学 | 一种从显性白羽鸡中发掘、筛选和提纯有色羽鸡的方法 |
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