CN108548871A - 朝鲜越桔枝条角质层蜡质组分及其检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于植物化学成分分析应用技术领域,具体涉及朝鲜越桔枝条角质层蜡质组分及其检测方法。朝鲜越桔枝条角质层蜡质组分为:烃类:醇类:酰胺类:醛类:酚类:萜类:醚类:酯类:胺类:苯类:其他=31%:23%:6%:2%:2%:9%:1%:2%:2%:6%:16%;其检测方法为将处理过的朝鲜越桔枝条茎段利用GC–MS进行蜡质成分检测,检测后得到蜡质组分的全部组分的离子峰,并对其离子峰进行面积积分,同时依据质谱库对朝鲜越桔蜡质成分进行全解谱检索判定;采用Excel办公软件对数据进行整理与分析,并用SigmaPlot作图;利用DPS软件中的Duncan’s新复极差法进行多重比较分析。本发明检测方法应用在越桔属植物的蜡质组分检测方法中,为朝鲜越桔蜡质的进一步研究提供理论基础。
Description
技术领域
本发明属于植物化学成分分析应用技术领域,具体涉及朝鲜越桔枝条角质层蜡质组分及其检测方法。
背景技术
朝鲜越桔(VacciniumKoreanumNakai,1911)亦称作红果越桔(VacciniumhirtumThunb,1784),为杜鹃花科(Ericaceae)越桔属(Vaccinium)落叶灌木,是我国东北林区重要的野生经济植物资源。朝鲜越桔主要分布于朝鲜、日本、俄罗斯以及我国辽宁省的凤城、宽甸和吉林通化县等森林区域,我国最早于1963年在辽宁省宽甸县白石砬子(中国数字植物标本馆,采集人:朱有昌、魏均)发现,并于1991年在《中国植物志》中首次记录,2007年被列辽宁省珍稀濒危保护植物,保护级别为3级(《中国植物库》(辽宁卷),2007)。朝鲜越桔生于山顶岩石缝隙,具有耐寒、耐旱和抗抽条等特征,适应山顶部的极端环境条件,是我国东北林区具有极高利用价值和开发前景的经济植物资源,也是开发适宜我国北方地区耐寒越桔(蓝莓)新品种的优异基因资源。
众所周知,以蓝莓为代表的越桔属植物在冬季寒冷、空气干燥的北方地区极易遭受生理干旱而产生抽条现象,致使部分枝条失水干枯而影响产量,因此绝大多数蓝莓品种在冬季均需要进行防寒处理。而朝鲜越桔生长在上述区域中更为寒冷、干燥、多风而且积雪难以覆盖的山顶部,却没有抽条现象发生,翌年可以正常开花和结果。我们在前期通过野外实地考察以及试验研究发现,朝鲜越桔的枝条具有明显的角质层蜡质特征,特别是当年的新生枝条更为明显。一般认为,构成角质层的蜡质是植物自我防御的最后一道屏障,在植物适应干旱环境以及各种非生物和生物逆境过程中发挥重要作用,其中防止植物非气孔性失水是角质层蜡质的重要功能,它可以降低蒸腾作用,从而达到维持植物体水分平衡的目的。除此之外,角质层蜡质还具有降低紫外线辐射对于植物造成损伤的作用;通过降低植物表皮的水分含量而减少灰尘、花粉和大气污染物沉积的作用以及抵抗病虫害的作用等。所以,开展朝鲜越桔角质层蜡质组分研究对我国未来蓝莓产业发展具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用朝鲜越桔枝条茎段测定蜡质组分的方法,分离出全部蜡质成分并进行各组分含量测定。
为实现上述发明目的,本发明采用以下技术方案:
朝鲜越桔枝条角质层蜡质组分,所述组分为:
烃类:醇类:酰胺类:醛类:酚类:萜类:醚类:酯类:胺类:苯类:其他=31%:23%:6%:2%:2%:9%:1%:2%:2%:6%:16%;
其中,烷烃类中碳原子所占比例如下:C10:C11:C12:C14:C27:C31=15%:37%:5%:8%:19%:16%;烯烃类中碳原子所占比例如下:C9:C19:C38=55%:21%:24%;醛类中只含C8类物质;醇类中碳原子所占比例如下:C9:C11:C30=4%:28%:68%;萜类只含C30类物质;苯类只含C15类物质;酚类和醚类只C16类物质;酯类中碳原子所占比例如下:C18:C20=64%:36%;酰胺类中碳原子所占比例如下:C16:C18:C22=17%:67%:16%;胺类中只含C11类物质。
一种朝鲜越桔枝条角质层蜡质组分检测方法,包括以下步骤:
(1) 取朝鲜越桔当年生成熟枝条茎段,直径1.1cm的圆形表皮;
(2) 将步骤(1)的样品放入30mL氯仿提取液中,30s后马上取出;
(3) 将步骤(2)得到的样品加入到同样体积的60℃氯仿中,30s后取出,除去提取液,再进行干燥,即得到固态朝鲜越桔枝条蜡质,加入2.5 ml氯仿溶解,降温后直接测定;
(4) 步骤(3)得到的样品利用GC–MS(Gas Chromatography-Mass Spectrometer, 气相色谱-质谱联用仪)进行蜡质成分检测,得到朝鲜越桔枝条角质层蜡质各组分的含量;
(5)经GC–MS检测后得到蜡质组分的全部组分的离子峰,并对其离子峰进行面积积分,同时依据质谱库对朝鲜越桔蜡质成分进行全解谱检索判定;
(6)采用 Excel办公软件对数据进行整理与分析,并用SigmaPlot作图;利用DPS软件中的Duncan’s 新复极差法进行多重比较分析。
具体地,GC–MS检测所用质谱扫描模式:Full Scan(全解谱) ,扫描范围(m/z):50nm~450 nm。
具体地,GC–MS检测色谱分析条件为:
进样量:2μL;
进样口温度:280℃;
模式:不分流;
载气:He;
流速:1mL/min,恒流模式;
色谱柱:DB-5ms毛细柱 30.0m X 250μm X 0.25μm;
程序升温:40℃保持1min;30℃/min升至130℃,保持0min;5℃/min升至250℃,保持0min;10℃/min升至300℃,保持5min;
离子源:EI,离子源温度:230℃,碰撞能量:70eV;
溶剂延迟:0min;
四级杆温度:150℃。
具体地,步骤(1)中所取样品重量为5g。
上述检测方法应用在越桔属植物的蜡质组分检测方法中。
具体地,上述检测方法应用在云南越桔蜡质组分检测方法中。
与现有技术相比,本发明的有益效果为:本发明首次明确了朝鲜越桔枝条角质层蜡质组分检测的方法,并首次对朝鲜越桔枝条角质层蜡质组分进行了全解谱。为朝鲜越桔蜡质的进一步研究提供理论基础,同时也为其他越桔属植物的蜡质组分研究提供科学依据。
附图说明
图1 朝鲜越桔枝条角质层蜡质组分GC-MS 全解谱检测结果;
图2 朝鲜越桔枝条角质层蜡质组分比例;
图3朝鲜越桔枝条角质层蜡质组分碳原子分布比例;
图4 云南越桔枝条角质层蜡质组分GC-MS全解谱检测结果;
图5 云南越桔枝条角质层蜡质组分比例;
图6 云南越桔枝条角质层蜡质组分碳原子分布比例。
具体实施方式
以下结合具体实施方式对本发明做进一步说明。
实施例1
植物材料:野生朝鲜越桔当年生枝条(Vaccinium koreanum Nakai)(2016年采自辽宁省凤城市帽盔山);云南越桔(Vaccinium bracteatum Thunb)当年生枝条(2016年采自云南省昆明市寻甸县)。
朝鲜越桔枝条角质层蜡质组分检测方法,包括以下步骤:
1.朝鲜越桔枝条蜡质组分的提取:
(1) 取朝鲜越桔当年生成熟枝条茎段,蒸馏水清洗至表面无异物;
(2) 将步骤(1)的材料,取直径1.1cm的圆形表皮,5g;
(3) 将步骤(2)的样品放入30mL 氯仿提取液中,30s后马上取出;
(4) 将步骤(3)得到的样品加入到同样体积的60℃氯仿中,30s后取出,干燥后加入2.5ml氯仿溶解,降温后待上机测试。
朝鲜越桔枝条蜡质组分全解谱鉴定:
(1) 利用GC–MS(Gas Chromatography-Mass Spectrometer, 气相色谱-质谱联用仪)对上述样品进行蜡质成分检测,得到朝鲜越桔枝条角质层蜡质各组分的含量;所用仪器为:安捷伦7890a-5975c,配自动进样器7683B;
(2) 检测所用质谱扫描模式:Full Scan(全解谱) ,扫描范围(m/z):50 nm ~450 nm;
(3) 色谱分析条件为:进样量:2μL;进样口温度:280℃;模式:不分流;载气:He;流速:1mL/min,恒流模式;色谱柱:DB-5ms毛细柱 30.0m X 250μm X 0.25μm;程序升温:40℃保持1min;30℃/min升至130℃,保持0min;5℃/min升至250℃,保持0min;10℃/min升至300℃,保持5min;离子源:EI,离子源温度:230℃,碰撞能量:70eV;溶剂延迟:0min;四级杆温度:150℃;
(4) 经GC–MS检测后得到蜡质组分的全部组分的离子峰,并对其离子峰进行面积积分,同时依据质谱库对朝鲜越桔蜡质成分进行全解谱检索判定;
(5) 采用 Excel 2007办公软件对数据进行整理与分析,用SigmaPlot 10.0 作图。利用DPS 软件中的Duncan’s 新复极差法进行多重比较分析。
朝鲜越桔枝条角质层蜡质组分检测结果:
朝鲜越桔枝条角质层蜡质组分全解谱检测结果如图1所示。朝鲜越桔(Vaccinium koreanum Nakai)化学成分分析显示朝鲜越桔蜡质化合物成分较多,不同成分所占比例分别是烃类:醇类:酰胺类:醛类:酚类:萜类:醚类:酯类:胺类:苯类:其他=31%:23%:6%:2%:2%:9%:1%:2%:2%:6%:16%,如图3。各组分碳原子分布及比例见图5。烷烃类中碳原子所占比例如下:C10:C11:C12:C14:C27:C31=15%:37%:5%:8%:19%:16%;烯烃类中碳原子所占比例如下:C9:C19:C38=55%:21%:24%;醛类中只含C8类物质;醇类中碳原子所占比例如下:C9:C11:C30=4%:28%:68%;萜类只含C30类物质;苯类只含C15类物质;酚类和醚类只C16类物质;酯类中碳原子所占比例如下:C18:C20=64%:36%;酰胺类中碳原子所占比例如下:C16:C18:C22=17%:67%:16%;胺类中只含C11类物质。
实施例2
应用实施例1的检测方法测定云南越桔枝条角质层蜡质组分,多次重复试验的数据接近,云南越桔枝条角质层蜡质组分全解谱检测结果如图2所示。云南越桔(Vaccinium bracteatum Thunb)蜡质组分检测结果分别是烃类:醇类:酰胺类:萜类:苯类=65%:6%:7%:3%:19%,如图4。各组分碳原子分布及比例见图6。烷烃中碳原子所占比例如下:C9:C11:C12:C14:C17:C18:C21:C25:C29:C35:C44=7%:9%:15%:14%:16%:4%:11%:13%:3%:3%:5%;苯类中只含C15类物质;烯烃中碳原子所占比例如下:C16:C20:C22=49%:40%:11%;醇类中只含C25类物质;胺类中只含C18类物质;萜类中只含C30类物质。
通过该方法,成功地对云南越桔枝条角质层蜡质组分进行了检测。为云南越桔蜡质的进一步研究奠定理论基础。
Claims (7)
1.朝鲜越桔枝条角质层蜡质组分,其特征在于,所述组分为:
烃类:醇类:酰胺类:醛类:酚类:萜类:醚类:酯类:胺类:苯类:其他=31%:23%:6%:2%:2%:9%:1%:2%:2%:6%:16%;
其中,烷烃类中碳原子所占比例如下:C10:C11:C12:C14:C27:C31=15%:37%:5%:8%:19%:16%;烯烃类中碳原子所占比例如下:C9:C19:C38=55%:21%:24%;醛类中只含C8类物质;醇类中碳原子所占比例如下:C9:C11:C30=4%:28%:68%;萜类只含C30类物质;苯类只含C15类物质;酚类和醚类只含C16类物质;酯类中碳原子所占比例如下:C18:C20=64%:36%;酰胺类中碳原子所占比例如下:C16:C18:C22=17%:67%:16%;胺类中只含C11类物质。
2.一种朝鲜越桔枝条角质层蜡质组分检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1) 取朝鲜越桔当年生成熟枝条茎段,直径1.1cm的圆形表皮;
(2) 将步骤(1)的样品放入30mL氯仿提取液中,30s后马上取出;
(3) 将步骤(2)得到的样品加入到同样体积的60℃氯仿中,30s后取出,除去提取液,再进行干燥,即得到固态朝鲜越桔枝条蜡质,加入2.5 ml氯仿溶解,降温后直接测定;
(4) 步骤(3)得到的样品利用GC–MS进行蜡质成分检测,得到朝鲜越桔枝条角质层蜡质各组分的含量;
(5) 经GC–MS检测后得到蜡质组分的全部组分的离子峰,并对其离子峰进行面积积分,同时依据质谱库对朝鲜越桔蜡质成分进行全解谱检索判定;
(6)采用 Excel办公软件对数据进行整理与分析,并用SigmaPlot作图;利用DPS软件中的Duncan’s 新复极差法进行多重比较分析。
3.如权利要求1所述的检测方法,其特征在于,GC–MS检测所用质谱扫描模式:FullScan(全解谱) ,扫描范围(m/z):50 nm~450 nm。
4.如权利要求1所述的检测方法,其特征在于,GC–MS检测色谱分析条件为:
进样量:2μL;
进样口温度:280℃;
模式:不分流;
载气:He;
流速:1mL/min,恒流模式;
色谱柱:DB-5ms毛细柱 30.0m X 250μm X 0.25μm;
程序升温:40℃保持1min;30℃/min升至130℃,保持0min;5℃/min升至250℃,保持0min;10℃/min升至300℃,保持5min;
离子源:EI,离子源温度:230℃,碰撞能量:70eV;
溶剂延迟:0min;
四级杆温度:150℃。
5.根据权利要求书1所述的检测方法,其特征在于,步骤(1)中所取样品重量为5g。
6.权利要求1所述的检测方法在越桔属植物的蜡质组分检测方法中的应用。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于,所述越桔属植物为云南越桔。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114814056A (zh) * | 2022-04-24 | 2022-07-29 | 南京农业大学 | 碳酸二甲酯在提取植物表皮蜡质中的应用 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050026161A1 (en) * | 2002-11-01 | 2005-02-03 | Edward Jablonski | Displacement sandwich immuno-PCR |
CN101470106A (zh) * | 2007-12-27 | 2009-07-01 | 深圳市华测检测技术股份有限公司 | 氯化石蜡的检测方法 |
CN104897807A (zh) * | 2015-05-19 | 2015-09-09 | 山东省产品质量检验研究院 | 一种应用气相色谱检测叶面肥料中三十烷醇含量的方法 |
CN105362329A (zh) * | 2015-09-30 | 2016-03-02 | 宋晓梅 | 一种越橘叶提取物及其制备方法和医药用途 |
KR20170017497A (ko) * | 2015-08-07 | 2017-02-15 | 강원대학교산학협력단 | 질량분석 스펙트럼을 이용한 안토시아닌의 정성 및 정량 분석 방법 |
CN107361130A (zh) * | 2017-06-21 | 2017-11-21 | 西北农林科技大学 | 一种抑制苹果果实油腻化发生的方法 |
CN107478758A (zh) * | 2017-07-28 | 2017-12-15 | 大连大学 | 蔓越桔的化学成分标准指纹图谱及其构建方法与应用 |
-
2018
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Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050026161A1 (en) * | 2002-11-01 | 2005-02-03 | Edward Jablonski | Displacement sandwich immuno-PCR |
CN101470106A (zh) * | 2007-12-27 | 2009-07-01 | 深圳市华测检测技术股份有限公司 | 氯化石蜡的检测方法 |
CN104897807A (zh) * | 2015-05-19 | 2015-09-09 | 山东省产品质量检验研究院 | 一种应用气相色谱检测叶面肥料中三十烷醇含量的方法 |
KR20170017497A (ko) * | 2015-08-07 | 2017-02-15 | 강원대학교산학협력단 | 질량분석 스펙트럼을 이용한 안토시아닌의 정성 및 정량 분석 방법 |
CN105362329A (zh) * | 2015-09-30 | 2016-03-02 | 宋晓梅 | 一种越橘叶提取物及其制备方法和医药用途 |
CN107361130A (zh) * | 2017-06-21 | 2017-11-21 | 西北农林科技大学 | 一种抑制苹果果实油腻化发生的方法 |
CN107478758A (zh) * | 2017-07-28 | 2017-12-15 | 大连大学 | 蔓越桔的化学成分标准指纹图谱及其构建方法与应用 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
ANNA SZAKIEL 等: "Triterpenoid content of Vaccinium myrtillus stem cuticular waxes", 《CHEMISTRY AND PHYSICS OF LIPIDS》 * |
WENJING CHU 等: "Composition and morphology of cuticular wax in blueberry (Vaccinium spp.) fruits", 《FOOD CHEMISTRY》 * |
张芸芸 等: "小麦叶片表皮蜡质成分及含量分析", 《麦类作物学报》 * |
罗倩 等: "植物表面蜡质测定中气质检测条件的优化", 《实验室研究与探索》 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114814056A (zh) * | 2022-04-24 | 2022-07-29 | 南京农业大学 | 碳酸二甲酯在提取植物表皮蜡质中的应用 |
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