CN108546735A - 一种基于牛磺酸的快速制备核酸电泳缓冲液的预制试粉及其使用方法 - Google Patents

一种基于牛磺酸的快速制备核酸电泳缓冲液的预制试粉及其使用方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108546735A
CN108546735A CN201810338108.XA CN201810338108A CN108546735A CN 108546735 A CN108546735 A CN 108546735A CN 201810338108 A CN201810338108 A CN 201810338108A CN 108546735 A CN108546735 A CN 108546735A
Authority
CN
China
Prior art keywords
powder
taurine
prefabricated
nucleic acid
concentration
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN201810338108.XA
Other languages
English (en)
Inventor
徐卫平
刘玉婷
王文霞
许建强
杨骁婧
佟慧妍
穆罕默德·拉塞尔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dalian University of Technology
Original Assignee
Dalian University of Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dalian University of Technology filed Critical Dalian University of Technology
Priority to CN201810338108.XA priority Critical patent/CN108546735A/zh
Publication of CN108546735A publication Critical patent/CN108546735A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明属于生物学分析领域，提供一种基于牛磺酸的快速制备核酸电泳缓冲液的预制试粉及其使用方法，其组成成分及重量如下：基于配制1L一倍(1×)浓度的电泳缓冲液，每份预制试粉中含有9.6‑12g的Tris碱、3.755‑7.51g的牛磺酸、0.186‑0.744g的Na2EDTA·2H2O。在室温下，每一份的试粉与1L去离子水充分混合互溶，即得到1L 1×浓度的电泳缓冲液，电泳缓冲液pH值在8.7‑9.2之间。采用本发明提供的预制试粉能够快速制备固定浓度、固定pH值的核酸电泳缓冲液。本发明制备的缓冲液具有较长的电泳寿命和较好的正负极稳定性；且制备的电泳缓冲液，有利于保护DNA和RNA在电泳过程中不被降解，维持稳定的双螺旋二级结构，增强核酸电泳后荧光检测的准确性和灵敏性。

Description

一种基于牛磺酸的快速制备核酸电泳缓冲液的预制试粉及其 使用方法
技术领域
本发明属于生物学分析领域，提供一种生物化学或分子生物学分析中，用于核酸电泳缓冲液快速制备的预制试粉、制备方法及其使用方法。
背景技术
电泳检测在核酸的生化和分子生物学分析中，具有重要地位，是核酸质量和浓度检测的常规方法之一，是分析DNA和RNA片段大小、质量浓度和纯度的重要依据。传统的核酸电泳主要使用醋酸盐缓冲体系TAE(Tris-Aceticacid-EDTA)或硼酸盐缓冲体系TBE(Tris-Boric acid-EDTA)，需实验室自主配制溶液。不仅配制过程耗时耗力，而且在组分溶解后，需要调节溶液pH值，才可使用，增加了缓冲液配制的时长和出错概率，同时TAE和TBE的电泳寿命短，在4-5小时的核酸电泳后，电泳槽正负极pH值产生显著变化，不利于DNA和RNA的结构稳定，需换用新的缓冲液进行电泳。急需发明一种电泳寿命长，且制备方法简便快速的核酸电泳缓冲液。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供一种基于牛磺酸的快速制备核酸电泳缓冲液的预制试粉、制备方法及其使用方法。该试粉的主要成分包括Tris碱(三羟甲基氨基甲烷)、牛磺酸、Na2EDTA(乙二胺四乙酸二钠)，其优点是通过与一定体积的去离子水混合互溶，能够快速制备固定浓度、固定pH值的核酸电泳缓冲液。
为了达到上述目的，本发明的技术方案如下：
一种基于牛磺酸的快速制备核酸电泳缓冲液的预制试粉，其组成成分及重量如下：基于配制1L一倍(1×)浓度的电泳缓冲液，每份预制试粉中含有9.6-12g的Tris碱、3.755-7.51g的牛磺酸、0.186-0.744g的Na2EDTA·2H2O；由此配制的电泳缓冲液中各组成成分的浓度为：Tris碱80-100mmol/L、牛磺酸30-60mmol/L、Na2EDTA 0.5-2mmol/L，电泳缓冲液的pH值在8.7-9.2之间。试粉中所有物料均完全混合，以散粉或压片形式，储存或封装在塑料容器或袋中。所述的Na2EDTA·2H2O可以被其它含不同结晶水的Na2EDTA所代替，但Na2EDTA的质量浓度保持不变。
所述的基于配制1L一倍(1×)浓度的电泳缓冲液，预制试粉的各组成成分及重量优选为：每份预制试粉中含有10.8g的Tris碱、3.755g的牛磺酸、0.372g的Na2EDTA·2H2O；由此配制的电泳缓冲液中各组成成分的浓度为：Tris碱90mmol/L、牛磺酸30mmol/L、Na2EDTA1mmol/L，电泳缓冲液的pH值在8.8-9.0之间。
一种基于牛磺酸的快速制备核酸电泳缓冲液的预制试粉的使用方法如下：
在室温下，每一份的试粉与1L去离子水充分混合互溶，即得到1L 1×浓度的电泳缓冲液。此过程无需称量试粉，无需调节缓冲液pH值，操作简单快捷。
一种基于牛磺酸的快速制备核酸电泳缓冲液的预制试粉的制备方法如下：
所述的预制试粉可进行放大或缩小规模的制备，以1L 1×浓度电泳缓冲液试粉中各组分质量份数为基准，根据目标缓冲液体积和浓度的乘积，计算得到基准中各组分质量的放大或缩小倍数，称量各组分且均匀混合后，以散粉或压片形式，储存或封装在塑料容器或袋中。举例如下：如配备1L 10×浓度电泳缓冲液试粉，则将基准中各组分质量放大至10倍，如配备5L 0.5×浓度电泳缓冲液试粉，则将基准中各组分质量放大至2.5倍。
所述的预制试粉还可以整体制备，按照各组分的质量比例，称量且均匀混合各组分，储存于塑料容器或袋中。在配制电泳缓冲液时，根据待配缓冲液的浓度和体积的乘积，先计算所需预制试粉质量，再称量预制试粉，最后与待配缓冲液体积的去离子水充分混合，制得电泳缓冲液。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明提供的预制试粉不同于传统的TAE和TBE体系，试粉使用了牛磺酸缓冲体系TTE(Tris-Taurine-EDTA)。经实验证明，TTE电泳缓冲液具有比TAE和TBE更好的正负极稳定性，更小的pH值和电导率波动性，以及更高的核酸电泳稳定性。
(2)本发明的预制试粉使用方法简便快速，省去了常规电泳缓冲液制备的称量多项药品、调节溶液pH值的步骤，仅需取一至几份封装在塑料容器或袋中的预制试粉，与一定体积的去离子水混合，即可制得固定浓度和pH值(8.8-9.0)的TTE电泳缓冲液，使得缓冲液的制备过程可在5-10分钟内完成，减轻电泳缓冲液配制的人力，提高缓冲液制备的效率和准确性。
(3)采用本发明试粉所制备的缓冲液，具有较长的电泳寿命和较好的正负极稳定性，在连续电泳10小时以上的电泳槽中，正负极的pH值变化不超过1％。本发明试粉所制备的电泳缓冲液，有利于保护DNA和RNA 在电泳过程中不受降解，维持稳定的双螺旋二级结构，增强核酸电泳后荧光检测的准确性和灵敏性。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
基于配制1L 1×浓度的核酸电泳缓冲液，制备预制试粉，每份试粉含有10.8g的Tris碱、3.755g的牛磺酸、0.372g的Na2EDTA·2H2O。取一份试粉与1L去离子水充分混合后，得到1×浓度的电泳缓冲液(Tris碱90mmol/L、牛磺酸30mmol/L、Na2EDTA 1mmol/L，pH值8.96)，电泳10小时后，正极pH值8.79，负极pH值8.83，核酸样品稳定，紫外成像良好。
实施例2
基于配制1L 1×浓度的电泳缓冲液，制备预制试粉，每份预制试粉含有10.8g的Tris碱、5.6325g的牛磺酸、0.372g的Na2EDTA·2H2O。取一份试粉与1L去离子水充分混合后，得到1×浓度的电泳缓冲液(Tris碱90mmol/L、牛磺酸45mmol/L、Na2EDTA 1mmol/L，pH值8.82)，电泳10小时后，正极pH值8.66，负极pH值8.72，核酸样品稳定，紫外成像良好。
实施例3
基于配制20L 0.5×浓度的电泳缓冲液，制备预制试粉，每份预制试粉含有108g的Tris碱、37.55g的牛磺酸、3.72g的Na2EDTA·2H2O。取一份试粉与20L去离子水充分混合后，得到0.5×浓度的电泳缓冲液(Tris碱90mmol/L、牛磺酸30mmol/L、Na2EDTA 1mmol/L，pH值8.94)，电泳10小时后，正极pH值8.78，负极pH值8.88，核酸样品稳定，紫外成像良好。
上所述实施例仅表达了本发明的实施方式，但并不能因此而理解为对本发明专利的范围的限制，应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些均属于本发明的保护范围。

Claims (4)

1.一种基于牛磺酸的快速制备核酸电泳缓冲液的预制试粉，其特征在于，所述的预制试粉中各组成成分及重量配比如下：基于配制1L一倍(1×)浓度的电泳缓冲液，每份预制试粉中含有9.6-12g的Tris碱、3.755-7.51g的牛磺酸、0.186-0.744g的Na2EDTA·2H2O；由此配制的电泳缓冲液中各组成成分的浓度为：Tris碱80-100mmol/L、牛磺酸30-60mmol/L、Na2EDTA 0.5-2mmol/L，电泳缓冲液的pH值在8.7-9.2之间；试粉中所有物料均完全混合，以散粉或压片形式储存。
2.根据权利要求1所述的一种基于牛磺酸的快速制备核酸电泳缓冲液的预制试粉，其特征在于，所述的基于配制1L一倍(1×)浓度的电泳缓冲液，预制试粉的各组成成分及重量优选为：每份预制试粉中含有10.8g的Tris碱、3.755g的牛磺酸、0.372g的Na2EDTA·2H2O；由此配制的电泳缓冲液中各组成成分的浓度为：Tris碱90mmol/L、牛磺酸30mmol/L、Na2EDTA1mmol/L，电泳缓冲液的pH值在8.8-9.0之间。
3.根据权利要求1或2所述的一种基于牛磺酸的快速制备核酸电泳缓冲液的预制试粉，其特征在于，所述的Na2EDTA·2H2O可以被其它含不同结晶水的Na2EDTA所代替，要求Na2EDTA的质量浓度保持不变。
4.权利要求1或2或3任一所述的一种基于牛磺酸的快速制备核酸电泳缓冲液的预制试粉的使用方法，其特征在于以下步骤：在室温下，将每一份的试粉与1L去离子水充分混合互溶，即得到1L 1×浓度的电泳缓冲液。
CN201810338108.XA 2018-04-12 2018-04-12 一种基于牛磺酸的快速制备核酸电泳缓冲液的预制试粉及其使用方法 Withdrawn CN108546735A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810338108.XA CN108546735A (zh) 2018-04-12 2018-04-12 一种基于牛磺酸的快速制备核酸电泳缓冲液的预制试粉及其使用方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810338108.XA CN108546735A (zh) 2018-04-12 2018-04-12 一种基于牛磺酸的快速制备核酸电泳缓冲液的预制试粉及其使用方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108546735A true CN108546735A (zh) 2018-09-18

Family

ID=63514997

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810338108.XA Withdrawn CN108546735A (zh) 2018-04-12 2018-04-12 一种基于牛磺酸的快速制备核酸电泳缓冲液的预制试粉及其使用方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108546735A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111621584A (zh) * 2020-04-16 2020-09-04 大连海关技术中心 一种快速筛查饲料中转基因成分的试剂盒及其应用
CN111621585A (zh) * 2020-04-16 2020-09-04 大连民族大学 一种同时检测多种转基因油菜品系的快速检测试剂盒及其应用
CN112811560A (zh) * 2021-01-19 2021-05-18 宁波上下生物科技发展有限公司 牛磺酸作为氢气逸散延缓剂的应用、富氢水及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030205473A1 (en) * 1999-03-31 2003-11-06 Qiang Liu pK-matched running buffers for gel electrophoresis
US20060057575A1 (en) * 2002-02-25 2006-03-16 Lifeind Ehf. Method for two-dimensional conformation-dependent separation of non-circular nucleic acids
CN106124597A (zh) * 2016-06-21 2016-11-16 中国海洋大学 一种sds‑聚丙烯酰胺电泳胶及其制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030205473A1 (en) * 1999-03-31 2003-11-06 Qiang Liu pK-matched running buffers for gel electrophoresis
US20060057575A1 (en) * 2002-02-25 2006-03-16 Lifeind Ehf. Method for two-dimensional conformation-dependent separation of non-circular nucleic acids
CN106124597A (zh) * 2016-06-21 2016-11-16 中国海洋大学 一种sds‑聚丙烯酰胺电泳胶及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ARUPA GANGULY等: "Conformation-sensitive gel electrophoresis for rapid detection of single-base differences in double-stranded PCR products and DNA fragments: Evidence for solvent-induced bends in DNA heteroduplexes", 《PROC.NATL.ACAD.SCI.USA》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111621584A (zh) * 2020-04-16 2020-09-04 大连海关技术中心 一种快速筛查饲料中转基因成分的试剂盒及其应用
CN111621585A (zh) * 2020-04-16 2020-09-04 大连民族大学 一种同时检测多种转基因油菜品系的快速检测试剂盒及其应用
CN111621585B (zh) * 2020-04-16 2021-03-02 大连民族大学 一种同时检测多种转基因油菜品系的快速检测试剂盒及其应用
CN112811560A (zh) * 2021-01-19 2021-05-18 宁波上下生物科技发展有限公司 牛磺酸作为氢气逸散延缓剂的应用、富氢水及其制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108546735A (zh) 一种基于牛磺酸的快速制备核酸电泳缓冲液的预制试粉及其使用方法
Lee et al. Enhanced production of bioethanol and ultrastructural characteristics of reused Saccharomyces cerevisiae immobilized calcium alginate beads
Vosolsobě et al. The evolutionary origins of auxin transport: what we know and what we need to know
JP2017538435A5 (zh)
Bergenholm et al. Construction of mini‐chemostats for high‐throughput strain characterization
CN104193627A (zh) 一种氨溴索与3,4-二羟基苯甲酸药物共晶及其制备方法
US20240067820A1 (en) Poloxamer compositions and methods of making and using same
Jones et al. The viscosity of deuterium oxide and its mixtures with water at 25 C
CN101974556B (zh) 一种同位素标记的重组c反应蛋白的制备方法
Islam et al. Volumetric and viscometric properties of aqueous solutions of N-methylformamide, 1, 2-diaminopropane and 2-methylpropane-2-ol
CN106450401B (zh) 一种利用废弃钒电解液制备硫酸氧钒的方法
CN107632012A (zh) 测定锂离子电池材料中硼、锆元素含量的方法
CN105926964B (zh) 一种利用嗜冷碳酸盐矿化菌修复混凝土表面的方法
CN108548710A (zh) 一种基于硼酸的快速制备核酸电泳缓冲液的预制试粉及其使用方法
CN105039370A (zh) 用于生物合成白藜芦醇的融合基因、表达载体及制备方法
WO2006093343A1 (ja) 電気泳動用バリアー物質及びバリアー構造体ならびに電気泳動装置
CN102772372A (zh) 一种吲哚美辛包合物微球的制备方法
CN109507263A (zh) 微生物对接地金属材料的腐蚀试验系统
CN103734133A (zh) 一种氨基酸复合生物膜剥离剂
Staunton et al. Preparation of recombinant fibronectin fragments for functional and structural studies
CN105524881B (zh) 动物淋巴细胞分离液及其制备方法
CN204865550U (zh) 一种新型电泳槽
CN104032005B (zh) 一种pcr测序中间产物的保存剂及保存方法
CN207908029U (zh) 一种高效称量装置
Baborovský Degree of hydration of the anion so4 derived from the electrolytic water transport

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20180918