CN108508218A - 晚期糖基化终产物cml作为心肌缺血再灌注损伤的早期诊断标志物及其应用 - Google Patents

晚期糖基化终产物cml作为心肌缺血再灌注损伤的早期诊断标志物及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN108508218A
CN108508218A CN201810776403.3A CN201810776403A CN108508218A CN 108508218 A CN108508218 A CN 108508218A CN 201810776403 A CN201810776403 A CN 201810776403A CN 108508218 A CN108508218 A CN 108508218A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cml
reperfusion injury
myocardial ischemia
detection
end products
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810776403.3A
Other languages
English (en)
Inventor
葛均波
杨继娥
孙爱军
张峰
高旸
曲亚男
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhongshan Hospital Fudan University
Original Assignee
Zhongshan Hospital Fudan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhongshan Hospital Fudan University filed Critical Zhongshan Hospital Fudan University
Priority to CN201810776403.3A priority Critical patent/CN108508218A/zh
Publication of CN108508218A publication Critical patent/CN108508218A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4703—Regulators; Modulating activity
    • G01N2333/4704—Inhibitors; Supressors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/32—Cardiovascular disorders

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明涉及晚期糖基化终产物CML作为心肌缺血再灌注损伤的早期诊断标志物及应用，具体公开采用CML作为心肌缺血再灌注损伤的早期诊断标志物，以及应用Pyridorin抑制CML的生成从而减轻心肌缺血再灌注损伤。本发明在动物水平验证心肌缺血再灌注后晚期糖基化终产物CML显著增加，因此可通过检测受试个体外周血或离体心肌组织样品中晚期糖基化终产物CML的水平，诊断和预示心肌缺血再灌注损伤。而应用抑制剂Pyridorin能够有效减轻心肌缺血再灌注损伤，Pyridorin可作为抗心肌的缺血再灌注损伤的活性成分，用于制备治疗心肌的缺血再灌注损伤的药物。本发明为心肌缺血再灌注损伤的诊断和治疗提供新的有效的靶点。

Description

晚期糖基化终产物CML作为心肌缺血再灌注损伤的早期诊断 标志物及其应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体地说，涉及晚期糖基化终产物CML作为心肌缺血再灌注损伤早期诊断标志物，以及应用Pyridorin抑制CML的生成从而减轻心肌缺血再灌注损伤。
背景技术
近年来，随着老龄化社会的来临，人民生活质量的提高及CVD危险因素的广泛流行，我国CVD的发病率及死亡率逐年增长。国家心血管中心最新发布的《中国心血管病报告》中指出，我国目前CVD死亡占城乡居民总死亡原因的首位，农村为45.01％，城市为42.61％，高于肿瘤及其他系统疾病(图1)。其中，缺血性心脏病(ischemic heart disease，IHD)尤其是冠心病(coronary heart disease，CHD)是导致CVD死亡的首要病因。而急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)则是导致冠心病死亡的主要原因。近年来，随着药物及器械治疗的发展以及全国各地区多条急性心梗绿色通道的共同努力，急性心梗的罪犯血管得到了早期、及时的开通，使得AMI死亡率大大降低。然而，罪犯血管供血范围内的缺血心肌再灌注后会发生组织细胞代谢功能障碍及结构破坏进一步加重的现象，即心肌缺血/ 再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion injury，MIRI)。MIRI导致缺血心肌的坏死范围扩大，心肌组织纤维化加重，心脏的负性重塑导致心功能下降，最终发展为心衰(heartfailure，HF)。HF的发生导致急性心梗患者的远期生活质量大大降低。因此，如何有效地干预及治疗罪犯血管开通后的MIRI是降低AMI死亡率及提高患者远期生活治疗亟待解决的问题。
研究表明，血清和组织中晚期糖基化终末产物水平与糖尿病慢性并发症的程度明显相关，AGEs可以诱导血管和肾脏基底膜蛋白的结构和功能改变，引起炎症和细胞代谢改变，目前AGEs的实际化学结构尚不清楚，体内已被鉴别出来的糖基化产物主要有：羧甲基赖氨酸(Carboxy-methyl-lysine,CML)和戊糖苷(pentosidine)。Pyridorin是一种强效晚期糖化终产物(AGEs)口服抑制剂，能够有效预制CML的生成，Pyridorin被用于糖尿病肾病的治疗。现有技术中，关于晚期糖基化终产物CML作为心肌缺血再灌注损伤的早期诊断标志物及应用Pyridorin抑制CML的生成从而减轻心肌缺血再灌注损伤，目前还未见报道。
发明内容
本发明的第一个目的是针对现有技术中的不足，提供晚期糖基化终产物CML或其检测试剂的用途。
本发明的第二个目的是针对现有技术中的不足，提供一种检测心肌缺血再灌注损伤的诊断试剂盒。
本发明的第三个目的是针对现有技术中的不足，提供Pyridorin的制药用途。
为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：
晚期糖基化终产物CML或其检测试剂的用途，用于制备检测心肌缺血再灌注损伤的诊断试剂或试剂盒。
作为本发明的一个优选实施方案，所述检测是指受试个体外周血检测。
作为本发明的一个优选实施方案，所述检测是指离体心肌组织样品检测。
作为本发明的一个优选实施方案，晚期糖基化终产物CML检测试剂是CML的特异性抗体。
为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：
一种检测心肌缺血再灌注损伤的诊断试剂盒，所述试剂盒包含检测晚期糖基化终产物 CML表达的试剂。
作为本发明的一个优选实施方案，所述检测晚期糖基化终产物CML表达的试剂是CML 的特异性抗体。
作为本发明的一个优选实施方案，所述检测是指受试个体外周血检测或离体心肌组织样品检测。
为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：
Pyridorin在制备预防和/或治疗心肌缺血再灌注损伤的药物中的应用，所述药物改善缺血再灌注损伤后的心功能和心肌的梗死面积。
本发明还提供晚期糖基化终产物CML的用途，它被用作心肌缺血再灌注损伤的早期诊断标志物。
本发明通过western blot，免疫荧光和Ellisa实验发现，在心肌缺血再灌注后，晚期糖基化终产物CML的生成显著增加(图2，图3，图4)。
通过大量的动物实验，我们发现CML能够加重心肌的缺血再灌注损伤(图5，图6)。
我们通过实验发现应用Pyridorin抑制CML的生成能够有效减轻心肌缺血再灌注损伤 (图5，图6)。
本发明在动物水平验证心肌缺血再灌注后晚期糖基化终产物CML显著增加，因此可通过检测受试个体外周血或离体心肌组织样品中晚期糖基化终产物CML的水平，诊断和预示心肌缺血再灌注损伤。而应用抑制剂Pyridorin能够有效减轻心肌的缺血再灌注损伤，因此抑制剂Pyridorin可作为抗心肌的缺血再灌注损伤的活性成分，用于制备治疗心肌的缺血再灌注损伤的药物。本发明应用Pyridorin抑制晚期糖基化终产物CML的生成，从而减轻心肌缺血再灌注损伤，为心肌缺血再灌注损伤的诊断和治疗提供新的有效的靶点。
附图说明
附图1为《中国心血管报告2016》公布的城乡死亡构成比。
附图2为Western Blot实验结果。显示：C57小鼠心肌缺血再灌注后3小时及24小时CML的水平，在心肌缺血再灌注后，晚期糖基化终产物CML的生成显著增加。
附图3为ELISA实验结果。显示：C57小鼠心肌缺血再灌注后3小时、24小时和48 小时外周血中CML水平，在心肌缺血再灌注后，晚期糖基化终产物CML的生成显著增加。
附图4为免疫荧光实验结果。显示：C57小鼠缺血再灌注后24小时心肌组织中CML显著增加，在心肌缺血再灌注后，晚期糖基化终产物CML的生成显著增加。
附图5为干预小鼠动物实验结果。显示：增加小鼠体内CML水平，导致小鼠心肌缺血再灌注后24小时心功能显著下降；应用Pyridorin抑制CML的产生，小鼠心肌缺血再灌注后24小时心功能明显改善。
附图6为干预小鼠动物实验结果。显示：增加小鼠体内CML水平，导致小鼠心肌缺血再灌注后24小时梗死面积增加；应用Pyridorin抑制CML的产生，小鼠心肌缺血再灌注后 24小时心肌梗死面积显著降低。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
本发明的技术路线是：
1)对野生型C57小鼠进行缺血再灌注损伤模型建立，分别取小鼠再灌注后3小时，24 小时，48小时的血清及心肌组织。
2)通过ELISA，WB和免疫荧光等技术检测心肌缺血再灌注损伤后小鼠外周血及心肌组织中的晚期糖基化终产物CML的水平。
3)结果发现，小鼠心肌缺血再灌注损伤后CML的水平较假手术组显著升高。
4)为进一步验证CML在心肌缺血再灌注损伤中的作用，我们在建立心肌缺血再灌注损伤模型后，给予小鼠外源性的CML，通过心超和染色的方法检测增加CML对小鼠心功能和梗死面积的影响。
5)结果发现，与单纯手术组相比，增加CML的水平，小鼠的心功能显著降低和梗死面积均显著增加。
6)为进一步验证Pyridorin是否能够减轻心肌缺血再灌注损伤，我们在小鼠的饮用水中加入了Pyridorin(1g/L)喂养一周后，建立心肌缺血再灌注损伤模型，通过心超和染色的方法检测Pyridorin对小鼠心功能和梗死面积的影响。
7)结果发现，Pyridorin能够有效改善小鼠缺血再灌注损伤后的心功能和心肌的梗死面积。
实施例1建立小鼠缺血再灌注损伤模型及检测晚期糖基化终产物CML的水平
实验材料：7-8周野生型C57B/6小鼠，CML抗体(ab27684,abcam,USA),CML检测试剂盒(OxiSelectTM Nε-(carboxymethyl)lysine(CML)Competitive ELISA Kit，CellBiolabs， USA)
方法：1)取7-8周野生型C57B/6小鼠，2％异氟烷麻醉，打开小鼠左侧胸腔，6-0缝合线结扎前降支造成心肌缺血，40分钟后，松开线结，分别取松开线结后2小时，24小时，和 48小时取小鼠心肌组织和外周血检测CML水平。2)外周血CML检测方法见CML检测试剂盒说明书。3)心肌组织CML检测方法：提取心肌组织蛋白质，采用Western Blot检测心肌组织中CML的水平，或将心肌组织制成冰冻切片，采用免疫荧光的方法，用CML抗体检测心肌组织中CML的水平。
结果：小鼠心肌缺血再灌注损伤后CML的水平较显著升高。(图2,3,4)
实施例2 CML对小鼠心功能和梗死面积的影响
实验材料：7-8周野生型C57B/6小鼠，CML试剂，Evans blue染料，TTC染料
方法：1)取7-8周野生型C57B/6小鼠，2％异氟烷麻醉，打开小鼠左侧胸腔，6-0缝合线结扎前降支造成心肌缺血，40分钟后，松开线结，与心肌组织局部注射0.1mg/kg CML，缝合胸腔；2)24小时后，采用VisualSonics VeVo 2100影像系统检测小鼠心功能；3)2％异氟烷麻醉小鼠，打开胸腔，采用1％Evans blue染料灌注小鼠心脏，取下小鼠心脏，将其切成4-5块，再将其放入盛有1％TTC的培养皿中，于37度孵育30分钟，在体式显微镜下观察心肌梗死面积。
结果：与单纯手术组相比，增加CML的水平，小鼠的心功能显著降低和梗死面积均显著增加，心功能降低。(图5，6)
实施例3 Pyridorin对心肌缺血再灌注损伤模型小鼠心功能和梗死面积的影响
实验材料：6-7周野生型C57B/6小鼠，pyridorin药物，Evans blue染料，TTC染料
方法：1)取6-7周野生型C57B/6小鼠，在其饮用水中加入了Pyridorin(1g/L)喂养一周后，采用上述方法建立心肌缺血再灌注模型；2)24小时后，采用VisualSonics；VeVo2100 影像系统检测小鼠心功能；3)采用上述方法观察小鼠梗死面积。
结果：Pyridorin能够有效改善小鼠缺血再灌注损伤后的心功能和心肌的梗死面积。(图 5，6)
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.晚期糖基化终产物CML或其检测试剂的用途，其特征在于，用于制备检测心肌缺血再灌注损伤的诊断试剂或试剂盒。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测是指受试个体外周血检测。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测是指离体心肌组织样品检测。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，晚期糖基化终产物CML检测试剂是CML的特异性抗体。
5.一种检测心肌缺血再灌注损伤的诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含检测晚期糖基化终产物CML表达的试剂。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述检测晚期糖基化终产物CML表达的试剂是CML的特异性抗体。
7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述检测是指受试个体外周血检测或离体心肌组织样品检测。
8.晚期糖基化终产物CML的用途，其特征在于，它被用作心肌缺血再灌注损伤的早期诊断标志物。
9.Pyridorin在制备预防和/或治疗心肌缺血再灌注损伤的药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述药物改善缺血再灌注损伤后的心功能和心肌的梗死面积。
CN201810776403.3A 2018-07-09 2018-07-09 晚期糖基化终产物cml作为心肌缺血再灌注损伤的早期诊断标志物及其应用 Pending CN108508218A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810776403.3A CN108508218A (zh) 2018-07-09 2018-07-09 晚期糖基化终产物cml作为心肌缺血再灌注损伤的早期诊断标志物及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810776403.3A CN108508218A (zh) 2018-07-09 2018-07-09 晚期糖基化终产物cml作为心肌缺血再灌注损伤的早期诊断标志物及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108508218A true CN108508218A (zh) 2018-09-07

Family

ID=63404226

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810776403.3A Pending CN108508218A (zh) 2018-07-09 2018-07-09 晚期糖基化终产物cml作为心肌缺血再灌注损伤的早期诊断标志物及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108508218A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110257508A (zh) * 2019-07-12 2019-09-20 宁夏医科大学 一种在衰老心肌缺血后处理缺血再灌注损伤治疗用miRNA标志物及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000057863A2 (en) * 1999-03-25 2000-10-05 Medicure Inc. Use of pyridoxine compounds for treatment of cardiovascular and related pathologies
WO2001013900A2 (en) * 1999-08-24 2001-03-01 Medicure International Inc. Compositions for the treatment of cardiovascular diseases containing pyridoxal compounds and cardiovascular compounds
US6228858B1 (en) * 1995-09-12 2001-05-08 University Of Kansas Medical Center Advanced glycation end-product intermediaries and post-amadori inhibition

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6228858B1 (en) * 1995-09-12 2001-05-08 University Of Kansas Medical Center Advanced glycation end-product intermediaries and post-amadori inhibition
WO2000057863A2 (en) * 1999-03-25 2000-10-05 Medicure Inc. Use of pyridoxine compounds for treatment of cardiovascular and related pathologies
WO2001013900A2 (en) * 1999-08-24 2001-03-01 Medicure International Inc. Compositions for the treatment of cardiovascular diseases containing pyridoxal compounds and cardiovascular compounds

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
RAJA G. KHALIFAH等: "Amadorins: Novel Post-Amadori Inhibitors of Advanced Glycation Reactions", 《BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS》 *
YI LIU ET AL.: "The alternative crosstalk between RAGE and nitrative thioredoxin inactivation during diabetic myocardial ischemia-reperfusion injury", 《AM J PHYSIOL ENDOCRINOL METAB》 *
刘文操 等: "晚期糖基化终产物及其受体增加在老年大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用", 《中国药物与临床》 *
刘毅: "晚期糖基化终产物对心肌微血管内皮细胞及糖尿病心肌缺血再灌注损伤的影响及机制", 《中国博士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 *
杨秀颖 等: "糖基化终末产物及相关药物研究进展", 《中国药理学通报》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110257508A (zh) * 2019-07-12 2019-09-20 宁夏医科大学 一种在衰老心肌缺血后处理缺血再灌注损伤治疗用miRNA标志物及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Michaud et al. Inhibition of hypoxia‐induced angiogenesis by cigarette smoke exposure: impairment of the HIF‐lalpha/VEGF pathway
Caro et al. Studies on the mechanism of insulin resistance in the liver from humans with noninsulin-dependent diabetes. Insulin action and binding in isolated hepatocytes, insulin receptor structure, and kinase activity.
Regan Alcohol and the cardiovascular system
Kang et al. Post-cyclosporine-mediated hypertension and nephropathy: amelioration by vascular endothelial growth factor
JP2019069942A (ja) ペプチド治療薬およびその使用方法
Ghavami et al. Autophagy regulates trans fatty acid-mediated apoptosis in primary cardiac myofibroblasts
Xu et al. Silibinin decreases hepatic glucose production through the activation of gut–brain–liver axis in diabetic rats
Ning et al. Atorvastatin treatment ameliorates cardiac function and remodeling induced by isoproterenol attack through mitigation of ferroptosis
US10639289B2 (en) Application of neuraminidase and inhibitors thereof in myocardial ischemia and myocardial infarction
Ray et al. Oral NaHCO3 activates a splenic anti-inflammatory pathway: evidence that cholinergic signals are transmitted via mesothelial cells
Hua et al. Metformin increases cardiac rupture after myocardial infarction via the AMPK-MTOR/PGC-1α signaling pathway in rats with acute myocardial infarction
Larivière et al. Increased immunoreactive endothelin-1 levels in blood vessels and glomeruli of rats with reduced renal mass
Yuan et al. Effects of ghrelin on Cx43 regulation and electrical remodeling after myocardial infarction in rats
CN108508218A (zh) 晚期糖基化终产物cml作为心肌缺血再灌注损伤的早期诊断标志物及其应用
Fiordaliso et al. Effects of dipeptidyl peptidase-4 (DPP-4) inhibition on angiogenesis and hypoxic injury in type 2 diabetes
Sampaio et al. Hypertension plus diabetes mimics the cardiomyopathy induced by nitric oxide inhibition in rats
Lu et al. Effect of autophagy on cardiomyocyte membrane Cx43 acute remodeling in rats with ischemia-reperfusion
Li et al. A high-salt diet aggravates retinal ischaemia/reperfusion injury
Lu et al. Gastric nNOS reduction accompanied by natriuretic peptides signaling pathway upregulation in diabetic mice
US10610515B2 (en) Composition including indoprofen and use thereof
Okada et al. Role of endothelin ETB receptor in partial ablation-induced chronic renal failure in rats
CN111329867A (zh) 一种1,25-(oh)2d3在制备治疗心力衰竭药物中的应用
Su et al. Improvement of cardiac dysfunction by L-arginine combined with vitamin C through restoring angiogenesis associated with NADPH/NOS/NO signal pathway in diabetic rats
CN110613847B (zh) 一种抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用
CN110870917B (zh) Ews或其上调剂在制备治疗糖尿病及防治糖尿病个体肿瘤发生的药物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20180907