CN108498867B - 一种制作三维小口径血管模型的方法 - Google Patents

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Abstract

一种制作三维小口径血管模型的方法，包括以下步骤：a、支撑支架制备：利用硅胶材料3D打印具有内外同心圆形结构的支撑支架；b、中膜形成：在所述支撑支架的中间层灌注含有人主动脉平滑肌细胞的脱细胞外基质，形成中膜；c、内膜形成：在所述支撑支架的内层灌注人脐静脉内皮细胞悬浮液，形成内膜；d、外膜形成：将所述支撑支架整体置入充满人新生儿真皮成纤维细胞悬浮液的动态培养系统中，形成外膜。本发明方法获得的血管模型生物相容性好，有较强的力学性能，可用于与血管相关的病理模型研究及药物筛选。

Description

一种制作三维小口径血管模型的方法
技术领域
本发明涉及生物工程技术，特别是一种制作三维小口径血管模型的方法。
背景技术
目前，心血管疾病是导致人类死亡的主要原因之一，由于人类自体血管来源有限，血管相关疾病的体外模型构建是对其进行研究的有效方法。随着生物3D打印技术的发展，通过计算机技术、工程学与材料学的结合，构建组织工程血管用于体外血管相关模型的构建成为可能。血管组织工程技术为小口径血管模型提供了新来源,其思路是利用血管细胞和支架复合培养来构建具有生物活性的、生物功能性的小口径血管类似物。
目前，许多构建组织工程小口径血管的策略都是尽可能模仿天然血管的结构、功能和生理环境。天然血管(除毛细管外)都具有内膜、中膜、外膜3层完整结构。为了模仿其形态结构和机械特性,组织工程血管要防止血栓形成、维持结构完整性需要成纤维细胞层、平滑肌层与内皮细胞单层。
近年来研究者尝试应用生物3D打印技术或结合其他技术制备多层血管支架,主要根据天然血管各层的特点和功能要求,分别采用不同的材料,相同材料不同配比、相同材料不同打印参数制备而成。而体外构建具有类似动脉血管壁三层膜结构的小口径(≦6mm)血管仍然面临很大挑战，因为不仅需要准确模仿3层膜结构的空间特征，还要保证该组织工程血管具有足够的机械强度。其中，现有专利文献如CN201510355045.5、CN201510953566.0、CN201611189284.9等，公开了多种细胞-支架三层结构小口径血管支架的制备方法，但由于使用多种技术相结合，工艺流程较多，制作步骤复杂，实际操作难度高，不能一次制造。
从理论上讲要成功地模仿具有三层结构的血管，三维小口径血管模型应该具有：生物相容、稳定性好；防漏、抗血栓；适当的力学特性；适当的血管活性，包括对化学刺激物的收缩或舒张反应；短时间内可大量生产不同型号、廉价产品等特点。
发明内容
本发明的主要目的在于针对现有技术的不足，提供一种制作三维小口径血管模型的方法。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种制作三维小口径血管模型的方法，包括以下步骤：
a、支撑支架制备：利用硅胶材料3D打印具有内外同心圆形结构的支撑支架；
b、中膜形成：在所述支撑支架的中间层灌注含有人主动脉平滑肌细胞的脱细胞外基质，形成中膜；
c、内膜形成：在所述支撑支架的内层灌注人脐静脉内皮细胞悬浮液，形成内膜；
d、外膜形成：将所述支撑支架整体置入充满人新生儿真皮成纤维细胞悬浮液的动态培养系统中，形成外膜。
进一步地：
优选地，还包括以下步骤：
e、长期培养：将所述血管模型置于培养箱中进行长期培养。
步骤a还包括在成型的打印结构上面打出贯穿内外层结构的微孔，并将打完孔的打印结构在多聚赖氨酸溶液中浸泡以形成多聚赖氨酸包被；优选地，将打完孔的打印结构在37℃条件下，在多聚赖氨酸溶液中浸泡2h后取出；优选地，采用激光打孔器在成型的打印结构上面打出所述微孔。
步骤b包括：
(b1)将人主动脉平滑肌细胞用磷酸盐缓冲液清洗后，用胰蛋白酶消化细胞；
(b2)处理后的细胞重悬于细胞培养液，离心把细胞分离出来；
(b3)将分离出来的人主动脉平滑肌细胞与脱细胞外基质(dECM)溶液混合均匀；
(b4)将含有人主动脉平滑肌细胞的脱细胞外基质注入所述支撑支架的中间层，所述脱细胞外基质形成为凝胶，形成中膜；
步骤c包括：
(c1)将人脐静脉内皮细胞用磷酸盐缓冲液清洗后，用胰蛋白酶消化细胞；
(c2)处理后的细胞重悬于细胞培养液；
(c3)将人脐静脉内皮细胞悬浮液灌注入所述支撑支架的内层，将所述支撑支架两端封闭；
(c4)将上述结构在培养箱中进行培养，待人脐静脉内皮细胞贴壁后，形成内膜；
步骤d包括：
(d1)将人新生儿真皮成纤维细胞用磷酸盐缓冲液清洗后，用胰蛋白酶消化细胞；
(d2)处理后的人新生儿真皮成纤维细胞重悬于细胞培养液；
(d3)将上述结构置入充满人新生儿真皮成纤维细胞悬浮液的旋转培养装置中，在旋转过程中进行动态培养，待人新生儿真皮成纤维细胞贴附于所述支撑支架的外部时，形成外膜，优选地，人新生儿真皮成纤维细胞还通过所述微孔进入中层。
步骤a中，将硅橡胶和其催化剂以10:0.6的重量比混合，打印的壁厚为300μm；优选地，选择针头尖端内径为150μm的3ml注射器进行3D打印，挤出微丝直径约为75μm，打印温度为45℃；优选地，选择激光打孔的孔的尺寸为直径500μm，孔间隔为1000μm。
步骤(b3)中，人主动脉平滑肌细胞混入脱细胞外基质溶液，使得细胞浓度约为5×106个/mL。
步骤(b3)中，包括以下制备过程得到所述脱细胞外基质：取猪透明软骨，切碎后放入低渗Tris-HCL溶液，其中10mM Tris-HCL，pH8.0，在-80℃和37℃下反复冻融，6次循环；在37℃下，在0.25％胰酶的磷酸缓冲液PBS中剧烈震荡24h，胰酶溶液每4h更新一次；处理液用1.5M NaCl溶于50mM Tris-HCL，pH7.6的高渗溶液清洗，之后在37℃下，用50U/ml DNAse与1U/ml RNAse溶于10mM Tris-HCL，pH7.5的核酸酶溶液轻度震荡处理4h；用10mM Tris-HCL，pH8.0的低渗Tris-HCL溶液清洗20h，再在1％Triton X-100溶液中处理24h以充分去除溶液中的各种酶；最后，脱细胞的软骨组织清洗72h,去除残留的溶剂；
优选地，步骤(b3)中，包括以下制备过程得到所述脱细胞外基质溶液：取冻干后的dECM粉末100mg和胃蛋白酶10mg，溶于0.5M醋酸溶液，室温搅拌48h。
步骤(c2)中，人脐静脉内皮细胞悬浮液的细胞浓度为5×106个/mL。
步骤(d3)中，人新生儿真皮成纤维细胞悬浮液的细胞浓度为5×106个/mL；优选地，旋转培养的条件包括：温度37℃，CO2体积浓度：5％，转速10rph，旋转48h。。
本发明具有如下有益效果：
本发明提供一种制作三维小口径血管模型的方法，使用本发明构建三维小口径血管模型，克服了应用生物3D打印直接成型或者其他技术构建的具有内膜、中膜、外膜三层完整结构的组织工程血管存在的机械强度不足问题，使得到的小口径血管模型在具备良好的生物相容性的同时，具备类似于天然血管的机械强度和韧性。本发明方法获得的血管模型生物相容性好，有较强的力学性能，可用于与血管相关的病理模型研究及药物筛选。
本发明主要有以下的优势：
与现有技术相比，本发明方法获得的三维小口径血管模型生物相容性好，有接近主动脉血管机械强度的力学性能，能够很好地模拟天然血管的结构和功能。
本发明构建的小口径血管模型采用种子细胞分层种植的方式，优选具有良好生物相容性的去细胞外基质携带细胞，优选旋转培养条件以促进人新生儿真皮成纤维细胞的黏附，形成内膜、中膜、外膜三层完整结构，构建出与天然血管结构相似的血管模型。
本发明构建的小口径血管模型有利于进行体外血管相关病理模型的构建及药物筛选，如用于血栓机化模型的构建：对构建的小口径血管模型通过破坏其完整的内皮层，引入外部刺激，促使外膜的成纤维细胞迁移至血管内部，造成纤维化重塑，模拟体内血栓机化、再通情形，用于血栓的纤维化病理研究及抗栓溶栓相关药物筛选。
附图说明
图1是本发明实施例的制作三维小口径血管模型的方法流程图。
图2是本发明实施例小口径血管模型的3D打印支撑支架结构示意图。
图3是本发明实施例小口径血管模型的中膜形成过程示意图。
图4是本发明实施例小口径血管模型的内膜形成过程示意图。
图5是本发明实施例小口径血管模型的外膜形成过程示意图。
图6是本发明实施例三维小口径血管模型整体结构示意图。
图7是本发明中使用不同硅橡胶与催化剂配比(重量比)及不同壁厚得到的支撑支架的力学性能(支撑支架Ⅰ～Ⅳ，重量比依次为10:1，10:0.6，10:0.5，10:0.3，壁厚均为500μm；Ⅴ～Ⅶ，壁厚依次为500μm，400μm，300μm，重量比均为10:0.6)。
附图标记如下：1-内膜(HUVEC)、2-中膜(HA-VSMC)、3-外膜(HDF-n)。
具体实施方式
以下对本发明的实施方式作详细说明。应该强调的是，下述说明仅仅是示例性的，而不是为了限制本发明的范围及其应用。
参阅图1至图7，在一种实施例中，一种制作三维小口径血管模型的方法，包括以下步骤：
a、支撑支架制备：利用硅胶材料3D打印具有内外同心圆形结构的支撑支架；
b、中膜形成：在所述支撑支架的中间层灌注含有人主动脉平滑肌细胞的脱细胞外基质，形成中膜；
c、内膜形成：在所述支撑支架的内层灌注人脐静脉内皮细胞悬浮液，形成内膜；
d、外膜形成：将所述支撑支架整体置入充满人新生儿真皮成纤维细胞悬浮液的动态培养系统中，形成外膜；
最终形成具有内膜、中膜、外膜三层完整结构的小口径(≦6mm)血管模型；优选地，形成口径≦6mm的血管模型。
在优选实施例中，本方法还包括以下步骤：
e、长期培养：将所述血管模型置于培养箱中进行长期培养。
本发明应用生物3D打印的方式构建小口径(≦6mm)血管模型，构建出具有内膜、中膜、外膜三层完整结构的组织工程血管，可应用于与血管相关的病理模型研究及药物筛选。
在一些实施例中，本方法可以具体包括以下步骤：
步骤a、支撑支架制备
(a1)硅胶材料处理：用于生物3D打印的硅胶材料由硅橡胶(SE1700；DowChemical)和其催化剂混合而成。通过将硅胶材料置于混合器中混匀以提高其可打印性，在打印过程中可获得连续挤出的微丝。
(a2)3D打印：选择按上述处理后的硅胶材料，用3ml的注射器吸取后安装于3D打印机的喷头处，将硅胶材料挤出在一个经灭菌处理后的玻璃板上，打印完成后，经过在80℃条件下烘烤2h，打印结构成型；
(a3)激光打孔：用激光打孔器在成型的打印结构上面打出贯穿内外层结构的微孔；
(a4)多聚赖氨酸包被：将打完孔的打印结构进行灭菌处理，37℃条件下，在多聚赖氨酸溶液中浸泡2h后取出，获得具有足够力学性能及细胞黏附性的支撑支架。
步骤b、中膜形成：
(b1)从培养箱中取出装有人主动脉平滑肌细胞的培养皿，用磷酸盐缓冲液清洗后，用胰蛋白酶消化细胞；
(b2)处理后的细胞重悬于细胞培养液，离心把细胞分离出来；
(b3)将分离出来的人主动脉平滑肌细胞与脱细胞外基质溶液混合均匀；
(b4)将含有人主动脉平滑肌细胞的脱细胞外基质注入支撑支架的中间层，静置0.5h，待脱细胞外基质成为凝胶，中膜形成；
步骤c、内膜形成：
(c1)从培养箱中取出装有人脐静脉内皮细胞的培养皿，用磷酸盐缓冲液清洗后，用胰蛋白酶消化细胞；
(c2)处理后的细胞重悬于细胞培养液；
(c3)将人脐静脉内皮细胞悬浮液灌注入支撑支架的内层，支撑支架两端用同是硅胶材料打印的塞子封闭；
(c4)将该结构在培养箱中进行培养，每半个小时翻转一次，待人脐静脉内皮细胞贴壁后，内膜形成；
步骤d、外膜形成：
(d1)从培养箱中取出装有人新生儿真皮成纤维细胞的培养皿，用磷酸盐缓冲液清洗后，用胰蛋白酶消化细胞；
(d2)处理后的人新生儿真皮成纤维细胞重悬于细胞培养液；
(d3)将上述结构置入充满人新生儿真皮成纤维细胞悬浮液的旋转培养装置中，进行动态培养，待人新生儿真皮成纤维细胞贴附于支撑支架外部甚至通过微孔进入中层时，外膜形成。
步骤e、长期培养：
将按照上述步骤制备的具有内膜、中膜、外膜三层完整结构的三维小直径血管模型在培养箱中进行长期培养。
在优选实施例中，步骤(a1)中，用于生物3D打印的硅胶材料由硅橡胶(SE1700；DowChemical)和其催化剂以10:0.6(重量比)混合而成，打印壁厚为300μm。
在优选实施例中，步骤(a2)中，选择注射器针头尖端内径为150μm，挤出微丝直径约为75μm，打印温度为45℃。
在优选实施例中，步骤(a3)中，选择激光打孔的孔的尺寸为直径500μm，孔间隔为1000μm。
在优选实施例中，步骤(b3)中，人主动脉平滑肌细胞混入脱细胞外基质溶液中，细胞浓度约为5×106个/mL。
在优选实施例中，步骤(b3)中，脱细胞外基质的制备步骤为：取猪透明软骨，切碎后放入低渗Tris-HCL溶液(10mM Tris-HCL，pH8.0)，在-80℃和37℃下反复冻融，6次循环。在37℃下，在0.25％胰酶的磷酸缓冲液(PBS)中剧烈震荡24h，胰酶溶液每4h更新一次。处理液用高渗溶液(1.5M NaCl溶于50mM Tris-HCL，pH7.6)清洗，之后在37℃下，用核酸酶溶液(50U/ml DNAse与1U/ml RNAse溶于10mM Tris-HCL，pH7.5)轻度震荡处理4h。用低渗Tris-HCL溶液(10mM Tris-HCL，pH8.0)清洗20h，再在1％Triton X-100溶液中处理24h以充分去除溶液中的各种酶。最后，脱细胞的软骨组织清洗72h,去除残留的溶剂。
在优选实施例中，步骤(b3)中，脱细胞外基质溶液的制备步骤为：取冻干后的dECM粉末100mg和胃蛋白酶10mg，溶于0.5M醋酸溶液，室温搅拌48h。
在优选实施例中，步骤(c2)中，人脐静脉内皮细胞悬浮液的细胞浓度约为5×106个/mL。
在优选实施例中，步骤(d3)中，人新生儿真皮成纤维细胞悬浮液的细胞浓度约为5×106个/mL。旋转的条件是：温度37℃，CO2体积浓度：5％，转速10rph，旋转48h。
以下结合附图进一步描述具体实施例的特征及优点。
参照图1，本发明的方法应用生物3D技术，有序构建小口径血管的三层膜结构，并对构建的三维小口径血管进行体外长期培养。更具体地说，图2-5展示了该小口径血管模型的具体制备过程。参照图2，以硅胶材料为墨汁，应用生物3D打印技术构建具有内外同心圆形结构的支撑支架。参照图3，通过在支撑支架中间层灌注含有人主动脉平滑肌细胞(HA-VSMC)的脱细胞外基质(dECM)，形成中膜。参照图4，通过在支撑支架内层灌注人脐静脉内皮细胞(HUVEC)悬浮液，静置待细胞贴壁后形成完整的内皮层，即内膜。参照图5，将支撑支架整体置入充满人新生儿真皮成纤维细胞(HDF-n)悬浮液的动态培养系统中，待HDF-n贴附于支撑支架外部甚至通过微孔进入中层时，外膜形成。参照图6，本发明构建的三维小口径血管模型具有内膜、中膜、外膜三层完整结构，与天然血管结构相似。参照图7，本发明构建的三维小口径血管模型采用硅胶作为支撑材料，通过调节硅橡胶与催化剂的配比及打印结构的壁厚，可以获得接近天然主动脉机械强度的支撑支架。Ⅰ～Ⅶ，除硅橡胶与催化剂的配比以及打印结构存在差异外，其他处理条件都相同，具体为，均采用针头尖端内径为150μm的3ml注射器，45℃下打印，80℃条件下烘烤2h，打印结构成型。其中优选硅橡胶和其催化剂以10:0.6(重量比)混合，打印壁厚为300μm的支撑材料，因其弹性模量为0.24478MPa，最接近人天然主动脉的弹性模量(约为0.27MPa)。
具体制作过程：
支撑支架制备
1)硅胶材料处理：将硅橡胶(SE1700；Dow Chemical)和其催化剂以10:0.6(重量比)混合，然后将混合物置于混合器中混匀以提高其可打印性。
2)3D打印：将上述处理后的硅胶材料，用注射器针头尖端内径为150μm，容量为3ml的注射器吸取后安装于3D打印机的喷头处，在45℃的打印温度下，将硅胶材料挤出在一个经灭菌处理后的玻璃板上，打印完成后，经过在80℃条件下，烘烤2h，打印结构成型；
3)激光打孔：用激光打孔器在成型的打印结构上面打出孔径为500μm，孔间隔为1000μm的贯穿内外层结构的微孔；
4)多聚赖氨酸包被：将打完孔的打印结构进行灭菌处理，37℃条件下，在多聚赖氨酸溶液中浸泡2h后取出，获得具有足够力学性能及细胞黏附性的支撑支架。
中膜形成：
1)制备脱细胞外基质(dECM)：取猪透明软骨，切碎后放入低渗Tris-HCL溶液(10mMTris-HCL，pH8.0)，在-80℃和37℃下反复冻融，6次循环。在37℃下，在0.25％胰酶的磷酸缓冲液(PBS)中剧烈震荡24h，胰酶溶液每4h更新一次。处理液用高渗溶液(1.5M NaCl溶于50mM Tris-HCL，pH7.6)清洗，之后在37℃下，用核酸酶溶液(50U/ml DNAse与1U/ml RNAse溶于10mM Tris-HCL，pH7.5)轻度震荡处理4h。用低渗Tris-HCL溶液(10mM Tris-HCL，pH8.0)清洗20h，再在1％Triton X-100溶液中处理24h以充分去除溶液中的各种酶。最后，脱细胞的软骨组织清洗72h,去除残留的溶剂。取冻干后的dECM粉末100mg和胃蛋白酶10mg，溶于0.5M醋酸溶液，室温搅拌48h。
2)从培养箱中取出装有人主动脉平滑肌细胞(HA-VSMC)的培养皿，用磷酸盐缓冲液清洗后，用胰蛋白酶消化细胞；
3)处理后的细胞重悬于4mL细胞培养液，离心把细胞分离出来；
4)将分离出来的人主动脉平滑肌细胞(HA-VSMC)与脱细胞外基质(dECM)溶液混合均匀，使得细胞浓度约为5×10 6个/mL；
5)将含有人主动脉平滑肌细胞(HA-VSMC)的脱细胞外基质(dECM)注入支撑支架的中间层，静置0.5h，待dECM成为凝胶，中膜形成；
内膜形成：
1)从培养箱中取出装有人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的培养皿，用磷酸盐缓冲液清洗后，用胰蛋白酶消化细胞；
2)处理后的细胞重悬于1ml细胞培养液，使得细胞浓度约为5×10 6个/mL；
3)将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)悬浮液灌注入支撑支架的内层，支撑支架两端用同是硅胶材料打印的塞子封闭；
4)将该结构在培养箱中进行培养，每半个小时翻转一次，待人脐静脉内皮细胞(HUVEC)贴壁后，内膜形成；
外膜形成：
1)从培养箱中取出装有人新生儿真皮成纤维细胞(HDF-n)的培养皿，用磷酸盐缓冲液清洗后，用胰蛋白酶消化细胞；
2)处理后的人新生儿真皮成纤维细胞(HDF-n)重悬于4ml细胞培养液；
3)将上述结构置入充满人新生儿真皮成纤维细胞(HDF-n)悬浮液的旋转培养装置中，进行动态培养，悬浮液中的细胞浓度约为5×10 6个/ml，待HDF-n贴附于支撑支架外部甚至通过微孔进入中层时，外膜形成。
长期培养：
将按照上述步骤制备的具有内膜、中膜、外膜三层完整结构的三维小直径血管模型在培养箱中进行长期培养。
本实施例得到的三维小口径血管模型最大外径为6.0mm，最小内径为2.0mm，弹性模量约为0.24478MPa。
按照上述步骤，应用生物3D打印技术构建的三维小口径血管模型可用于与血管相关的病理模型构建及药物筛选，如应用于构建血栓机化模型。在该模型中，人为破坏组织工程血管的内皮层，促使外膜的成纤维细胞迁移到血管内部形成凝块和/或增殖物以沉积胶原基质，模仿体内情景，进而将此模型用于抗栓与溶栓治疗的研究。具体的操作过程如下：以按上述步骤制作的三维小口径血管模型为基础，制作三种类型模型：i)没有完整内皮层的组织工程血管，人为诱导成纤维细胞迁移进血管内部，作为对照；ii)具有完整内皮层的组织工程血管，诱导血栓形成，模拟体内血栓形成过程；iii)具有完整内皮层的组织工程血管，诱导血栓形成后，人为破坏血管内皮层，促使成纤维细胞迁移到血管内部形成凝块和/或增殖物以沉积胶原基质，模拟体内血栓机化模型。
以上内容是结合具体/优选的实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，其还可以对这些已描述的实施方式做出若干替代或变型，而这些替代或变型方式都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (12)

1.一种制作三维小口径血管模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、支撑支架制备：利用硅胶材料3D打印具有内外同心圆形结构的支撑支架；
b、中膜形成：在所述支撑支架的中间层灌注含有人主动脉平滑肌细胞的脱细胞外基质，形成中膜；
c、内膜形成：在所述支撑支架的内层灌注人脐静脉内皮细胞悬浮液，形成内膜；
d、外膜形成：将所述支撑支架整体置入充满人新生儿真皮成纤维细胞悬浮液的动态培养系统中，形成外膜；
其中，硅胶材料的所述支撑支架在形成的所述血管模型中，使得所述血管模型具有足够的机械强度和韧性。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a还包括在成型的打印结构上面打出贯穿内外层结构的微孔，并将打完孔的打印结构在多聚赖氨酸溶液中浸泡以形成多聚赖氨酸包被。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤b包括：
(b1)将人主动脉平滑肌细胞用磷酸盐缓冲液清洗后，用胰蛋白酶消化细胞；
(b2)处理后的细胞重悬于细胞培养液，离心把细胞分离出来；
(b3)将分离出来的人主动脉平滑肌细胞与脱细胞外基质（dECM）溶液混合均匀；
(b4)将含有人主动脉平滑肌细胞的脱细胞外基质注入所述支撑支架的中间层，所述脱细胞外基质形成为凝胶，形成中膜。
4.如权利要求1至2任一项所述的方法，其特征在于：步骤c包括：
(c1)将人脐静脉内皮细胞用磷酸盐缓冲液清洗后，用胰蛋白酶消化细胞；
(c2)处理后的细胞重悬于细胞培养液；
(c3)将人脐静脉内皮细胞悬浮液灌注入所述支撑支架的内层，将所述支撑支架两端封闭；
(c4)将上述结构在培养箱中进行培养，待人脐静脉内皮细胞贴壁后，形成内膜。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤d包括：
(d1)将人新生儿真皮成纤维细胞用磷酸盐缓冲液清洗后，用胰蛋白酶消化细胞；
(d2)处理后的人新生儿真皮成纤维细胞重悬于细胞培养液；
(d3)将上述结构置入充满人新生儿真皮成纤维细胞悬浮液的旋转培养装置中，在旋转过程中进行动态培养，待人新生儿真皮成纤维细胞贴附于所述支撑支架的外部时，形成外膜，人新生儿真皮成纤维细胞还通过所述微孔进入中层。
6.如权利要求1至2任一项所述的方法，其特征在于：步骤a中，将硅橡胶和其催化剂以10:0.6的重量比混合，打印的壁厚为300μm；选择针头尖端内径为150μm的3mL注射器进行3D打印，挤出微丝直径为75μm，打印温度为45℃。
7.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤a中，将硅橡胶和其催化剂以10:0.6的重量比混合，打印的壁厚为300μm；选择针头尖端内径为150μm的3mL注射器进行3D打印，挤出微丝直径为75μm，打印温度为45℃；采用激光打孔器在成型的打印结构上面打出所述微孔，选择激光打孔的孔的尺寸为直径500μm，孔间隔为1000μm。
8.如权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤（b3）中，人主动脉平滑肌细胞混入脱细胞外基质溶液，使得细胞浓度为5×10 6 个/mL。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于：步骤（b3）中，包括以下制备过程得到所述脱细胞外基质：取猪透明软骨，切碎后放入低渗Tris-HCl溶液，其中10mM Tris-HCl，pH8.0，在- 80℃和37℃下反复冻融，6次循环；在37℃下，在0.25%胰酶的磷酸缓冲液PBS中剧烈震荡24h，胰酶溶液每4h更新一次；处理液用1.5M NaCl溶于50mM Tris-HCl，pH7.6的高渗溶液清洗，之后在37℃下，用50U/mLDNAse与 1U/mLRNAse溶于 10mM Tris-HCl，pH7.5的核酸酶溶液轻度震荡处理4h；用10mM Tris-HCl，pH8.0的低渗Tris-HCl溶液清洗20h，再在1%Triton X-100溶液中处理24h以充分去除溶液中的各种酶；最后，脱细胞的软骨组织清洗72h，去除残留的溶剂；
步骤（b3）中，包括以下制备过程得到所述脱细胞外基质溶液：取冻干后的dECM粉末100mg和胃蛋白酶10mg，溶于0.5M醋酸溶液，室温搅拌48h。
10.如权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤（c2）中，人脐静脉内皮细胞悬浮液的细胞浓度为5×10 6个/mL。
11.如权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤（d3）中，人新生儿真皮成纤维细胞悬浮液的细胞浓度为5×10 6个/mL；旋转培养的条件包括：温度37℃，CO2体积浓度：5%，转速10rph，旋转48h。
12.如权利要求1所述的方法，其特征在于：还包括：
e、长期培养：将所述血管模型置于培养箱中进行长期培养。
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109294971A (zh) * 2018-09-29 2019-02-01 西安交通大学 一种用于药物筛选的颈动脉分叉三维细胞培养模型及其构建方法
CN109758617B (zh) * 2019-03-11 2022-06-03 宁波光远致信生物科技有限公司 一种神经修复膜及其制备方法和应用
CN113368307B (zh) * 2021-01-04 2023-02-10 山东百多安医疗器械股份有限公司 一种耳支架构建材料及其制备工艺
CN112608882B (zh) * 2021-01-14 2022-11-18 大连理工大学 一种植有内皮细胞的硅胶血管模型的制作方法
CN113274556B (zh) * 2021-05-21 2022-08-02 国家纳米科学中心 一种水凝胶人工血管及其制备方法和应用
CN115721781B (zh) * 2022-09-09 2023-11-07 哈尔滨工业大学（深圳） 一种兼具细胞密度和机械强度的人工肌腱的制备工艺

Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2484614A1 (en) * 2002-05-02 2003-11-13 Cook Biotech Incorporated Cell-seeded extracellular matrix grafts
CN1718172A (zh) * 2005-07-20 2006-01-11 同济大学 一种组织工程血管及其体外构建方法
WO2006047758A1 (en) * 2004-10-27 2006-05-04 Massachusetts Institute Of Technology Novel technique to fabricate molded structures having a patterned porosity
WO2006135297A1 (en) * 2005-06-16 2006-12-21 Sinova Safetech Innovation Ab Bowel implant
US20110033927A1 (en) * 2009-04-01 2011-02-10 Worcester Polytechnic Institute Methods of generating small-diameter tissue engineered blood vessels
CN104490489A (zh) * 2014-12-02 2015-04-08 淮安皓运生物科技有限公司 基于3d生物打印技术制备组织工程血管的方法
US20150112419A1 (en) * 2013-10-18 2015-04-23 Wake Forest University Health Sciences Laminous Vascular Constructs Combining Cell Sheet Engineering And Electrospinning Technologies
CN105749349A (zh) * 2010-03-16 2016-07-13 奥加诺沃公司 多层血管
CN105873622A (zh) * 2013-12-16 2016-08-17 卫材R&D管理有限公司 血管重建移植材料
CN105983134A (zh) * 2015-03-05 2016-10-05 刘畅 一种人工血管及其制备方法
CN106137458A (zh) * 2015-04-24 2016-11-23 周惠兴 一种血管浇注成型装置及方法
CN106806945A (zh) * 2016-12-21 2017-06-09 青岛三帝生物科技有限公司 小口径生物人工血管的3d打印制备方法和人工血管
US20180015207A1 (en) * 2016-07-14 2018-01-18 The George Washington University a Congressionally Chartered Not-for-Profit Corporation Smart release system for growth factor delivery and combined bone and vascular growth
CN107693846A (zh) * 2017-09-29 2018-02-16 清华大学 一种具有多层血管结构的仿生血管化软组织及其制备方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1303946C (zh) * 2004-06-25 2007-03-14 清华大学 一种神经组织工程管状支架的制备方法及其专用模具
CN206745480U (zh) * 2016-09-14 2017-12-15 四川蓝光英诺生物科技股份有限公司 管腔组织构建体的打印装置

Patent Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2484614A1 (en) * 2002-05-02 2003-11-13 Cook Biotech Incorporated Cell-seeded extracellular matrix grafts
WO2006047758A1 (en) * 2004-10-27 2006-05-04 Massachusetts Institute Of Technology Novel technique to fabricate molded structures having a patterned porosity
WO2006135297A1 (en) * 2005-06-16 2006-12-21 Sinova Safetech Innovation Ab Bowel implant
CN1718172A (zh) * 2005-07-20 2006-01-11 同济大学 一种组织工程血管及其体外构建方法
US20110033927A1 (en) * 2009-04-01 2011-02-10 Worcester Polytechnic Institute Methods of generating small-diameter tissue engineered blood vessels
CN105749349A (zh) * 2010-03-16 2016-07-13 奥加诺沃公司 多层血管
US20150112419A1 (en) * 2013-10-18 2015-04-23 Wake Forest University Health Sciences Laminous Vascular Constructs Combining Cell Sheet Engineering And Electrospinning Technologies
CN105873622A (zh) * 2013-12-16 2016-08-17 卫材R&D管理有限公司 血管重建移植材料
CN104490489A (zh) * 2014-12-02 2015-04-08 淮安皓运生物科技有限公司 基于3d生物打印技术制备组织工程血管的方法
CN105983134A (zh) * 2015-03-05 2016-10-05 刘畅 一种人工血管及其制备方法
CN106137458A (zh) * 2015-04-24 2016-11-23 周惠兴 一种血管浇注成型装置及方法
US20180015207A1 (en) * 2016-07-14 2018-01-18 The George Washington University a Congressionally Chartered Not-for-Profit Corporation Smart release system for growth factor delivery and combined bone and vascular growth
CN106806945A (zh) * 2016-12-21 2017-06-09 青岛三帝生物科技有限公司 小口径生物人工血管的3d打印制备方法和人工血管
CN107693846A (zh) * 2017-09-29 2018-02-16 清华大学 一种具有多层血管结构的仿生血管化软组织及其制备方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"3D Printing PDMS Elastomer in a Hydrophilic Support Bath via Freeform Reversible Embedding";Thomas J. Hinton et al;《ACS Biomater. Sci. Eng》;20160504;第2卷;第1781-1786页 *
"3D打印技术制备新型微流道细胞培养系统";赵瑞军 等;《上海塑料》;20150515(第1期);第42-45页 *
"Printing three-dimensional tissue analogues with decellularized extracellular matrix bioink";Falguni Pati et al;《NATURE COMMUNICATIONS》;20140602;第5卷;第2页右栏第1段，第8页左栏第2段，第9页左栏第3段，右栏第2段 *
"Scaling of Engineered Vascular Grafts Using 3D Printed Guides and the Ring Stacking Method";Cameron B. Pinnock et al;《Journal of Visualized Experiments》;20170327;第121卷;e55322 *
"构建组织工程血管的支架材料和种子细胞研究进展";潘兴纳 等;《海南医学》;20170210;第28卷(第3期);第446-450页 *
"细胞外基质在组织工程中的应用";李珍美玉 等;《交通医学》;20141020;第28卷(第5期);第425-429+432页 *

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