CN108476970A - 分子标记辅助快速缩小玉米叶夹角改良京农科728株型的方法 - Google Patents

分子标记辅助快速缩小玉米叶夹角改良京农科728株型的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了分子标记辅助快速缩小玉米叶夹角改良京农科728株型的方法。本发明利用与玉米无叶舌基因lg1紧密连锁的两个SSR分子标记，以玉米京2416作为轮回亲本，以含lg1基因的具有无叶舌性状玉米自交系作为非轮回亲本，通过杂交、三次回交和分子标记辅助前景和背景选择、自交获得遗传背景与轮回亲本基本一致，表现无叶舌性状的玉米自交系，将亲本无叶舌自交系与京MC01组配，即可快速获得遗传背景与原杂交种基本一致、且叶夹角明显缩小的紧凑型玉米杂交种。本发明方法能够节省将近一半的选育时间，且能够快速缩小已有杂交种的叶夹角，极大地促进了叶夹角小的株型紧凑型玉米杂交种的选育工作，具有良好的应用前景。

Description

分子标记辅助快速缩小玉米叶夹角改良京农科728株型的 方法
技术领域
本发明涉及分子遗传学领域，特别是涉及利用玉米无叶舌基因 lg1连锁的SSR分子标记辅助快速缩小玉米叶夹角改良京农科728 株型的方法。
背景技术
近些年来，随着玉米耐密植、高光效育种目标的提出，株型紧凑、叶片上冲等成为玉米育种家关注的重要表型性状。玉米叶夹角是一个重要的株型指标，直接影响光在冠层内的分布及群体的光能利用，从而影响植株生长发育的过程和生理特性，是影响产量的重要农艺性状。直立的叶片可显著提高光合效率和植株密植度，进而增加产量，叶夹角小，株型紧凑；相反叶夹角大，株型平展。研究表明玉米叶夹角是多基因控制的数量性状，具有作用方式相对复杂、且易受环境影响的特点，因此利用常规的回交转育方法来缩小亲本自交系的叶夹角、改良杂交种的株型，存在耗时长、选择准确性差、改良效果不理想等缺点。
无叶舌种质由于叶舌叶耳消失、叶鞘包茎、叶片直立上冲、光合面积大、光能利用率高，是开展耐密植杂交种选育的重要资源。目前已发现的玉米无叶舌性状有显性和隐性两种，其中lg1基因是隐性无叶舌基因，位于第二条染色体短臂的末端。利用回交转育的方法，可以实现无叶舌性状lg1基因的定向改良。由于lg1基因为隐性，如果仅将玉米杂交种的双亲之一转育成无叶舌，与有叶舌的另一个亲本组配，杂交种仍然表现为有叶舌。但是由于存在剂量效应，当杂交种的基因型为Lg1lg1时，其叶夹角较原杂交种有明显降低。在将亲本自交系转育成无叶舌过程中，如果利用传统的育种方法把无叶舌性状lg1基因导入到轮回亲本选育自交系时，由于该性状是隐性单基因控制，需要对回交1代自交，在分离的自交后代中选择无叶舌植株继续回交，然后自交、回交、再自交，直至回交多代遗传背景与轮回亲本基本一致，再自交2代，才能获得性状稳定的无叶舌自交系。可见，利用常规回交转育方法，对于隐性单基因控制的性状来说，需要使用回交、自交交替的方法，才能将目标性状准确的选择出来，选系时间长、效率低。
分子标记辅助育种，不依赖于表型选择，即不受环境、基因互作、基因与环境互作等因素的影响，而是直接对基因型进行选择，因而能大大提高育种效率。简单重复序列(simple sequence repeats， SSR)是一类广泛存在于基因组上的、由几个核苷酸重复单位组成的串联重复序列。由于其在基因组上的大量分布，多态性高，且操作技术简单，费用低廉，在分子辅助育种中已被广泛使用。因此，筛选出与无叶舌基因紧密连锁的分子标记，利用分子标记对玉米无叶舌基因进行选择，同时结合分子标记辅助背景选择加快轮回亲本遗传背景的回复速度，对无叶舌玉米自交系选育有着独特的优势。利用上述方法快速将玉米杂交种双亲之一转育成无叶舌自交系后，与另一个亲本组配，即可快速获得遗传背景与原杂交种基本一致、且叶夹角明显缩小的紧凑型杂交种。
发明内容
本发明的目的在于提供利用玉米无叶舌基因lg1紧密连锁的 SSR分子标记，结合分子标记辅助背景选择将玉米杂交种双亲之一转育成无叶舌自交系，并将选育得到的玉米无叶舌自交系与杂交种另一个亲本组配，获得遗传背景与原杂交种基本一致、且叶夹角明显缩小的紧凑型玉米杂交种的选育方法。
申请人利用玉米基因组数据库MaizeGDB (http://www.maizegdb.org/)，选择与位于玉米第二条染色体短臂末端lg1基因遗传距离较近，上下游区间共计9个SSR分子标记。提取B73无叶舌突变体rla1(玉米EMS突变体库构建及突变体初步鉴定，安徽农业科学，2014，42(11):3162-3165)和自交系材料(京 2416和京92)的基因组DNA，利用上述分子标记，进行PCR反应条件的优化和筛选，最终确定在B73无叶舌突变体rla1分别与京 2416和京92间具有多态性，分辨率良好，且距离lg1基因遗传距离较近的两个SSR分子标记。
在北京基地(春播)，将受体自交系京2416和京92作为母本，分别与B73无叶舌突变体rla1进行杂交配制F1。在三亚基地(秋播) 种植F1自交，收获2个相应的F2群体。利用rla1×京2416，rla1 ×京92的F2分离群体，分析标记与表型的连锁关系，以验证本发明筛选得到的2个SSR标记可用于无叶舌性状的田间分子标记辅助选择。
本发明提供了玉米无叶舌基因lg1紧密连锁的SSR分子标记，由核苷酸序列如SEQID NO.1-2或SEQ ID NO.3-4所示的引物对 PCR扩增获得。
本发明提供了一种快速缩小玉米叶夹角的杂交种选育方法：选育玉米无叶舌自交系，将其与玉米自交系杂交后即得叶夹角小的玉米杂交种；所述玉米无叶舌自交系，其选育过程包括在回交转育过程中对杂合基因型Lg1lg1进行SSR分子标记辅助前景选择，前景选择所用的SSR分子标记由核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2或SEQ ID NO.3-4所示的引物对PCR扩增获得；将选育得到的玉米无叶舌自交系。
进一步地，为改良玉米材料京农科728，使其叶夹角缩小，可选用的正常有叶舌玉米自交系为玉米材料京MC01。
具体地，本发明提供了玉米无叶舌自交系的选育方法，是在回交转育过程中对杂合基因型Lg1lg1进行SSR分子标记辅助前景选择，前景选择所用的SSR分子标记由核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2 或SEQ ID NO.3-4所示的引物对PCR扩增获得。
本发明所述的玉米无叶舌自交系选育方法，包括以下步骤：
(1)以杂交种亲本之一作为轮回亲本，以含lg1基因的具有无叶舌性状玉米自交系作为非轮回亲本，杂交组配F1代，收获F1代的种子；种植F1代的种子，得到F1代玉米植株；
(2)回交第一次BC1代的获得；利用核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2和SEQ ID NO.3-4所示分子标记对BC1代进行分子标记辅助前景选择；
(3)回交第二次BC2代的获得；利用核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2和SEQ ID NO.3-4所示分子标记同时对BC2代进行分子标记辅助前景选择；
(4)回交第二次BC3代的获得；利用核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2和SEQ ID NO.3-4所示分子标记同时对BC3代进行分子标记辅助前景选择；
(5)通过前景选择入选的BC3F1代单株，进行自交得到BC3F2，种植BC3F1代群体的种子，在BC3F2代植株中选择无叶舌性状的植株继续自交，即获得了遗传背景与轮回亲本基本一致，同时表现无叶舌性状的新自交系。
步骤(2)-(3)回交转育过程中利用分子标记辅助进行前景选择标准为：同时选择核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2和SEQ ID NO.3-4 所示的分子标记进行，核苷酸序列如SEQID NO.1-2的分子标记，扩增产物大小为193/230bp，同时核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示的分子标记鉴别时，扩增产物大小为153/157bp，则待测玉米具有 lg1基因，可作为前景选择的入选单株。
步骤(4)回交转育过程中利用分子标记辅助进行前景选择的标准为：当选择核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2的分子标记鉴别时，若扩增产物大小为193/230bp，且选择核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4 所示的分子标记鉴别，若扩增产物大小为153/157bp，则待测玉米具有lg1基因，可用于步骤(5)的自交。
步骤(2)前景选择之后，还包括对BC1代做分子标记辅助背景选择，方法为：分别以非轮回亲本和轮回亲本的DNA为模板，利用中国专利ZL 201310751112.6(CN104285776B)的40对SSR引物分别进行PCR扩增，筛选在非轮回亲本和轮回亲本之间存在多态性的引物，利用筛选出的引物对前景选择入选的单株进行检测，与轮回亲本得到的对应PCR扩增图谱进行比较，选取与轮回亲本差异等位基因数最少的前10-15个单株作为下一步回交的母本。
步骤(3)前景选择之后，还包括对BC2代做分子标记辅助背景选择，方法为：利用BC2代单株对应的母本BC1代与轮回亲本扩增带型不同的SSR引物对，对分子标记辅助前景选择入选的单株进行PCR扩增；与轮回亲本得到的对应PCR扩增图谱进行比较，选取与轮回亲本无差异等位基因的单株作为进一步回交的母本。
本发明中，非轮回亲本选自rla1，轮回亲本为京2416。
在本方面的实施例中，筛选在非轮回亲本rla1和轮回亲本京 2416之间存在多态性的引物分别为umc2007y4、bnlg1940k7、 bnlg2291k4、umc1705w1、bnlg161k8、bnlg1702k1、umc1545y2、umc1125y3、bnlg240k1、phi080k15、umc1506k12、umc1147y4、bnlg1671y17、phi96100y1、umc1536k9、bnlg1520k1、umc1489y3、 bnlg490y4、umc1999y3、umc1429y7、bnlg249k2、phi299852y2、 umc2160k3、bnlg2235y5、phi233376y1、umc2084w2、umc1231k4、 phi041y6、umc2163w3。
本发明方法中，利用核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2或SEQ ID NO.3-4所示分子标记进行辅助前景选择时，采用的PCR扩增条件为94℃，3min；94℃，30s，55℃，30s，72℃，30s，共30个循环； 72℃7min。
本发明提供了上述选育方法在改良京农科728株型中的应用，所述改良是缩小玉米叶夹角。
本发明还提供了上述选育方法在玉米种质资源改良中的应用。
本发明的有益效果在于：本发明利用适用于特定改良群体的，与lg1基因紧密连锁的共显性分子标记，在回交转育过程中对杂合基因型Lg1lg1进行鉴定筛选，免去对回交后代进行自交的步骤，与常规育种方法相比，既可以提高选择的准确性，又能够节省将近一半的选系时间。同时，针对传统回交转育方法背景回复周期长的问题，结合利用分子标记辅助背景选择的方法，仅需要回交3代，自交1代，即可获得遗传背景基本回复到轮回亲本的无叶舌改良系。具体应用中，本发明选用玉米京2416作为轮回亲本，以含lg1基因的具有无叶舌性状玉米自交系作为非轮回亲本，通过杂交、三次回交和分子标记辅助前景和背景选择、自交获得遗传背景与轮回亲本基本一致，表现无叶舌性状的玉米自交系，将亲本无叶舌自交系与京MC01组配，即可快速获得遗传背景与原杂交种基本一致、且叶夹角比原品种京农科728明显缩小、其他性状与原品种京农科728 无明显差异的紧凑型玉米杂交种。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
本发明实施例中所用的玉米种质资源来自北京市农林科学院玉米研究中心。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1玉米无叶舌lg1基因SSR分子标记的筛选
1、利用玉米基因组数据库MaizeGDB(http://www.maizegdb.org/)，选择与位于玉米第二条染色体短臂末端lg1基因遗传距离较近，上下游区间共计9个SSR分子标记。
表1无叶舌基因lg1上下游标记的位置与引物序列
Primer名称 序列(5'to3') 染色体位置
umc2245-L GCCCTGTTATTGGAACAGTTTACG 30.9
umc2245-R CGTCGTCTTCGACATGTACTTCAC
isu308337-L TTCTTGCTTGTCTCTAGCAGCTT 35.6
isu308337-R TGTGGCGATGTCCATGATT
isu488638-L AGGCAACTCCTGTGTCTGTGT 45.2
isu488638-R CATGATCGCCCACTCCTT
umc1165-L TATCTTCAGACCCAAACATCGTCC 47.4
umc1165-R GTCGATTGATTTCCCGATGTTAAA
phi098-L GAGATCACCGGCTAGTTAGAGGA 56.72
phi098-R GTATGGTTGGGTACCCGTCTTTCTA
umc1542-L TAAAGCTATGATGGCACTTGCAGA 57.60
umc1542-R CATATTTGCCTTTGCCCTTTTGTA
umc2536-L CATACGTAATCCTACGCGACAACA 58.99
umc2536-R TTGTGAAACAAAAAGAAAGCACGA
bnlg1338-L GTGCAGAATGCAGGCAATAG 51.3
bnlg1338-R GCAAATGTTTTCACACACACG
magi44170-L TGTGGGATGTGGTCTCTAACG 48.5
magi44170-R ACATCAGAGCACACCACTGC
注：位置表示在MaizeGDB网站上的IBM2 2008Neighbors Frame 2中相对的遗传位置，其中lg1基因为50.9
提取B73无叶舌突变体rla1和自交系材料(京2416和京92) 的基因组DNA，利用上述分子标记，进行PCR反应条件的优化和筛选，最终确定两个在无叶舌rla1和有叶舌京2416、京92间具有多态性，分辨率良好，且距离lg1基因遗传距离较近的SSR分子标记。这两个SSR分子标记为isu488638和umc1542，用于PCR扩增两个标记isu488638和umc1542的引物对序列分别如SEQ ID NO.1-2 和SEQ ID NO.3-4所示。二者在B73无叶舌突变体rla1和自交系材料(京2416和京92)的PCR扩增片段大小分别见图1和图2。
2、两个SSR分子标记与玉米无叶舌lg1基因连锁关系分析
在北京基地(春播)，将自交系京2416和京92作为母本，分别与无叶舌的rla1进行杂交配制F1。在三亚基地(秋播)种植F1自交，收获相应的F2群体。利用rla1×京2416，rla1×京92的F2分离群体，分析与表型的连锁关系。
用自交系rla1、京2416和京92，以及2个F2分离群体，检测分子标记isu488638和umc1542与表型的连锁关系。
rla1×京2416的F2分离群体79株，其中26株田间表型为无叶舌，53株为有叶舌，rla1×京92的F2分离群体81株，其中25株田间表型为无叶舌，56株为有叶舌。提取基因组DNA，利用isu488638 和umc1542进行检测。结果显示，这两个标记与lg1基因紧密连锁，用isu488638进行PCR检测时，在160株分离群体(rla1×京2416 的F2分离群体79株和rla1×京92的F2分离群体81株)中有7株基因型与表型不符；用umc1542进行检测时，在160株分离群体中有3株基因型与表型不符(详见表2)；当用isu488638和umc1542 两个标记同时进行辅助选择时，基因型与表型完全吻合，即 isu488638基因型为230/230、且umc1542基因型为157/157的株数为45株，田间表现均为无叶舌；isu488638基因型为193/230或 193/193、且umc1542基因型为153/157或153/153的株数为105株，田间表现均为有叶舌，说明isu488638和umc1542可用于京2416、京92等系列自交系回交转育无叶舌性状的分子标记辅助选择。
表2 isu488638和umc1542基因型和有无叶舌表型的对比
实施例2玉米无叶舌自交系的选育
1、杂交子代F1的获得
第一年夏，以玉米自交系rla1(非轮回亲本，无叶舌)做供体、京2416(可购自北京市农林科学院玉米研究中心)(轮回亲本，有叶舌，杂交种京农科728的父本)做受体杂交组配F1代，收获F1代的种子。
同年冬海南第一代，种植F1代的种子，得到F1代玉米植株。
2、回交一次BC1代的获得
(1)回交
以F1代植株做母本，继续与轮回亲本京2416回交，收获BC1 代的种子。同年冬海南第二代，种植BC1代群体的种子，得到BC1 代群体。
(2)BC1代分子标记辅助前景选择
对通过田间表型选择初步入选的BC1代单株，首先利用目标性状选择标记进行检测，选择核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2的分子标记鉴别，若扩增产物大小为193/230bp，并且选择核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示的分子标记鉴别时，若扩增产物大小为153/157bp，则待测玉米具有lg1基因，可作为前景选择的入选单株，进行下一步的分子标记辅助背景选择。本实施例同时利用上述2个分子标记进行辅助选择，综合二者的结果进行选择，以获得最准确的筛选结果。
样品的基因组DNA采用CTAB提取，浓度稀释到200ng/μl。合成的分子标记引物用灭菌的ddH2O稀释至终浓度为10pM，将待测样品的DNA进行PCR扩增。PCR反应为20μL体系，DNA模板1μl，上下游混合后的引物1μl，MIX(含2×Buffer)10μl，ddH2O为 8μL。反应程序：预变性，94℃，3min；PCR循环30次(变性，94℃， 30s；退火，55℃，30s；延伸，72℃，30s)；最后延伸，72℃，7min。扩增产物利用3730XL DNA分析仪进行检测。
(3)BC1代分子标记辅助背景选择
以rla1和京2416的DNA为模板，对40对SSR引物(参见中国专利ZL 2013 10751112.6/CN(104285776B)进行PCR扩增和电泳检测，筛选在二者之间存在多态性的引物。通过扩增产物电泳图谱比对，发现umc2007y4、bnlg1940k7、bnlg2291k4、umc1705w1、bnlg161k8、bnlg1702k1、umc1545y2、umc1125y3、bnlg240k1、 phi080k15、umc1506k12、umc1147y4、bnlg1671y17、phi96100y1、 umc1536k9、bnlg1520k1、umc1489y3、bnlg490y4、umc1999y3、 umc1429y7、bnlg249k2、phi299852y2、umc2160k3、bnlg2235y5、 phi233376y1、umc2084w2、umc1231k4、phi041y6、umc2163w3等 29对引物在rla1和京2416上存在差异。
利用29对差异引物对分子标记辅助前景选择入选的单株进行检测，与京2416得到的对应PCR扩增图谱进行比较。
根据扩增结果，选取与京2416差异等位基因数最少的前10-15 个单株作为进一步回交的母本。
3、回交二次BC2代的获得
(1)回交
选取与京2416差异等位基因数最少的前10-15个单株作母本，以京2416作为父本，组配BC2代。
次年夏，种植BC2代群体的种子，按穗行田间种植，每个穗行种植50株。
(2)BC2代分子标记辅助前景选择
对通过田间表型选择初步入选的单株，首先利用目标性状选择标记进行检测，将核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示的分子标记扩增产物为193/230bp、同时核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示的分子标记扩增产物为153/157bp的单株挑选出来，作为前景选择的入选单株，进行下一步的分子标记辅助背景选择。
(3)BC2代分子标记辅助背景选择
利用BC2代单株对应的母本BC1代与京2416扩增带型不同的 SSR引物对，对分子标记辅助前景选择入选的单株进行PCR扩增；与京2416得到的对应PCR扩增图谱进行比较。选取与京2416无差异等位基因的单株作为进一步回交的母本。
4、回交三次BC3代的获得
(1)回交
以BC2代中与京2416无差异等位基因的单株作母本，以京2416 作为父本，组配BC3F1代。
种植BC3F1代群体的种子，按穗行田间种植，每个穗行种植50 株。
(2)BC3代分子标记辅助前景选择
对通过田间表型选择入选的单株，首先利用目标性状选择标记进行检测，将核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示的分子标记扩增产物为193/230bp、同时核苷酸序列如SEQ IDNO.3-4所示的分子标记扩增产物为153/157bp的单株挑选出来进入下一代。
5、BC3F2代的获得
(1)自交：通过前景选择入选的BC3F1代单株，进行自交得到BC3F2。田间种植BC3F1代群体的种子，按穗行田间种植，每个穗行种植50株。
(2)BC3F2代目标性状表型选择
在BC3F2代植株中选择无叶舌性状的植株继续自交，即获得了遗传背景与京2416基本一致，同时表现无叶舌性状的新自交系，命名为京2416Y。
实施例3改良京农科728株型以获得叶夹角缩小的玉米杂交种
京农科728是由北京农林科学院玉米研究中心用京MC01×京 2416选育而成的玉米品种。本实施例以玉米自交系京MC01作母本，以实施例2获得的无叶舌自交系京2416Y做父本组配，获得了比原京农科728(由京MC01与京2416组配获得)叶夹角缩小10度左右、其他性状与原品种京农科728无明显差异的紧凑型玉米杂交种。
虽然，上文已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 北京市农林科学院
<120> 分子标记辅助快速缩小玉米叶夹角改良京农科728株型的方法
<130> KHP171118820.9
<160> 18
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
aggcaactcc tgtgtctgtg t 21
<210> 2
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
catgatcgcc cactcctt 18
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
taaagctatg atggcacttg caga 24
<210> 4
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
catatttgcc tttgcccttt tgta 24
<210> 5
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
gccctgttat tggaacagtt tacg 24
<210> 6
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
cgtcgtcttc gacatgtact tcac 24
<210> 7
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
ttcttgcttg tctctagcag ctt 23
<210> 8
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
tgtggcgatg tccatgatt 19
<210> 9
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
tatcttcaga cccaaacatc gtcc 24
<210> 10
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
gtcgattgat ttcccgatgt taaa 24
<210> 11
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
gagatcaccg gctagttaga gga 23
<210> 12
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
gtatggttgg gtacccgtct ttcta 25
<210> 13
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
catacgtaat cctacgcgac aaca 24
<210> 14
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
ttgtgaaaca aaaagaaagc acga 24
<210> 15
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
acatcagagc acaccactgc 20
<210> 16
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
tgtgggatgt ggtctctaac g 21
<210> 17
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
gcaaatgttt tcacacacac g 21
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
gtgcagaatg caggcaatag 20

Claims (10)

1.一种快速缩小玉米叶夹角的杂交种选育方法，其特征在于，选育玉米无叶舌自交系，将其与正常有叶舌玉米自交系杂交后即得叶夹角小的株型紧凑型玉米杂交种；玉米无叶舌自交系的选育过程包括在回交转育过程中对杂合基因型Lg1lg1进行SSR分子标记辅助前景选择，前景选择所用的SSR分子标记由核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2或SEQ ID NO.3-4所示的引物对PCR扩增获得。
2.如权利要求1所述的选育方法，其特征在于，所述正常有叶舌玉米自交系为玉米材料京MC01。
3.如权利要求1所述的选育方法，其特征在于，玉米无叶舌自交系的选育过程包括以下步骤：
(1)杂交子代F1的获得：以杂交种亲本之一作为轮回亲本，以含lg1基因的具有无叶舌性状玉米自交系作为非轮回亲本，杂交组配F1代，收获F1代的种子；种植F1代的种子，得到F1代玉米植株；
(2)回交第一次BC1代的获得；利用核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2和SEQ ID NO.3-4所示分子标记对BC1代进行分子标记辅助前景选择；
(3)回交第二次BC2代的获得；利用核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2和SEQ ID NO.3-4所示分子标记对BC2代进行分子标记辅助前景选择；
(4)回交第三次BC3代的获得；利用核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2和SEQ ID NO.3-4所示分子标记对BC3代进行分子标记辅助前景选择；
(5)通过前景选择入选的BC3F1代单株，进行自交得到BC3F2，种植BC3F2代群体的种子，在BC3F2代植株中选择无叶舌性状的植株继续自交，即获得了遗传背景与轮回亲本基本一致，同时表现无叶舌性状的新自交系。
4.如权利要求3所述的选育方法，其特征在于，步骤(2)-(3)回交转育过程中利用分子标记辅助进行前景选择标准为：选择核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2的分子标记鉴别时，若扩增产物大小为193/230bp；
并且同时选择核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示的分子标记鉴别时，若扩增产物大小为153/157bp；
同时具备上述两种情况的，则待测玉米具有lg1基因，可作为前景选择的入选单株。
5.如权利要求3所述的选育方法，其特征在于，步骤(4)回交转育过程中利用分子标记辅助进行前景选择的标准为：选择核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2的分子标记鉴别时，若扩增产物大小为193/230bp；
并且同时选择核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示的分子标记鉴别时，若扩增产物大小为153/157bp；
同时具备上述两种情况的，则待测玉米具有lg1基因，可用于步骤(5)的自交。
6.如权利要求3所述的选育方法，其特征在于，步骤(2)前景选择之后，还包括对BC1代做分子标记辅助背景选择，方法为：分别以非轮回亲本和轮回亲本的DNA为模板，利用中国专利CN104285776B公开的40对SSR引物分别进行PCR扩增，筛选在非轮回亲本和轮回亲本之间存在多态性的引物，利用筛选出的引物对前景选择入选的单株进行检测，与轮回亲本得到的对应PCR扩增图谱进行比较，选取与轮回亲本差异等位基因数最少的前10-15个单株作为下一步回交的母本。
7.如权利要求6所述的选育方法，其特征在于，步骤(3)前景选择之后，还包括对BC2代做分子标记辅助背景选择，方法为：利用BC2代单株对应的母本BC1代与轮回亲本扩增带型不同的SSR引物对，对分子标记辅助前景选择入选的单株进行PCR扩增；与轮回亲本得到的对应PCR扩增图谱进行比较，选取与轮回亲本无差异等位基因的单株作为进一步回交的母本。
8.如权利要求1-7任一所述的选育方法，其特征在于，非轮回亲本为B73无叶舌突变体rla1，轮回亲本为京2416，筛选在非轮回亲本和轮回亲本京2416之间存在多态性的引物分别为umc2007y4、bnlg1940k7、bnlg2291k4、umc1705w1、bnlg161k8、bnlg1702k1、umc1545y2、umc1125y3、bnlg240k1、phi080k15、umc1506k12、umc1147y4、bnlg1671y17、phi96100y1、umc1536k9、bnlg1520k1、umc1489y3、bnlg490y4、umc1999y3、umc1429y7、bnlg249k2、phi299852y2、umc2160k3、bnlg2235y5、phi233376y1、umc2084w2、umc1231k4、phi041y6、umc2163w3。
9.如权利要求1-8任一所述的选育方法在改良京农科728株型中的应用，其特征在于，所述改良是缩小玉米叶夹角。
10.权利要求1-8任一所述的选育方法在玉米种质资源改良中的应用。
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