CN108472376A

CN108472376A - 用于治疗癌症的合理组合疗法

Info

Publication number: CN108472376A
Application number: CN201680069308.9A
Authority: CN
Inventors: G·焦西斯; T·泰尔唐; L·什雷斯塔; J·科伦; E·M·戈梅斯-达伽马; A·罗迪纳
Original assignee: Si Long-Kate Woods Is Commemorated Cancer Center
Current assignee: Si Long-Kate Woods Is Commemorated Cancer Center; Memorial Sloan Kettering Cancer Center
Priority date: 2015-10-05
Filing date: 2016-10-05
Publication date: 2018-08-31
Also published as: JP7132848B2; EP3359196A1; IL258494A; BR112018006572A2; MA47474A; CA3000851A1; JP2018537519A; EA201890623A1; TW201722422A; KR20180058824A; AU2016336351A1; US20180280397A1; EP3359196B1; MX2018004112A; WO2017062520A1

Abstract

本披露提供与增加对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂或诱导伴侣蛋白组的生物化学重布线的药剂组合的伴侣蛋白抑制剂诸如HSP90抑制剂的方法。这些蛋白毒性剂在给予这些伴侣蛋白之前给予以便实现协同活性。

Description

用于治疗癌症的合理组合疗法

相关申请的交叉引用

本申请要求2015年10月5日提交的美国临时申请号62/237,470的优先权，其全部内容通过引用特此结合。

1.背景技术

蛋白质稳态通过伴侣蛋白组(chaperome)的协调作用维持，该伴侣蛋白组是分子伴侣蛋白和共伴侣蛋白以及有助于其功能的折叠酶的网络。在哺乳动物细胞中，超过200个基因编码伴侣蛋白组的成员，这些伴侣蛋白组的成员一起占细胞的总多肽质量的约10％。这些成员的大部分是热休克蛋白(HSP)，其中HSP90和HSP70组成伴侣蛋白组质量的50％-60％。异常细胞过程诸如实现癌症中的复制永生性的那些异常细胞过程可以利用伴侣蛋白组来对抗由蛋白组功能失常产生的负担。然而，不正常应激伴侣蛋白组种类仍未被良好表征，从而阻碍疾病生物学的重要发展。

为了维持稳态，细胞采用包含上千种被编程来执行良好定义的功能的蛋白质的复杂分子部件。通过蛋白质错误表达或突变产生的这些通路的调控异常可能导致赋予恶性表型的生物优势。虽然在细胞水平下，这种调控异常可以是有益的(即，有利于增加存活)，但是在分子水平下，这需要细胞投入能量来维持这些的蛋白质的稳定性和功能。据信，为了将这些蛋白质维持在伪稳定状态中，癌细胞指派分子伴侣蛋白，包括HSP90。

为了支持该假设的是，认识到HSP90在维持转化的表型方面发挥重要作用。HSP90及其相关联的共伴侣蛋白有助于统称为“客户蛋白”的细胞蛋白的正确构象折叠，这些细胞蛋白中的许多是控制细胞生长、分化、DNA损伤应答、以及细胞存活的信号转导通路的效应物。肿瘤细胞对于调控异常的蛋白质成瘾(即，通过突变、异常表达、非正常细胞转运等)可能因此变得严重依赖于HSP90。

HSP90疗法在各种形式的癌症中的基本原理现在被包括在对于标准疗法耐受的疾病方面的临床前和临床研究良好地支持。例如，研究已证实某些HER2+肿瘤对于HSP90抑制剂的明显的敏感性。在这些肿瘤中，17-AAG(还叫做坦螺旋霉素)和17-DMAG(阿螺旋霉素)在曲妥单抗疗法之后甚至并且尤其在患有进行性疾病的患者中引发应答。当在多种三阴性乳腺癌小鼠模型中进行临床前测试时，诸如PU-H71等的其他HSP90抑制剂递送目前在此难以治疗的乳腺癌亚型中报告的最强力靶向单一药剂抗肿瘤效应。

在WO 2013/009655中，示出了不由单独的HSP90表达决定的特定“致癌HSP90”种类的丰度预示对于HSP90抑制疗法的敏感性，并且因此是HSP90疗法的生物标记物。“致癌HSP90”被定义为代表伴侣蛋白复合物的细胞应激特异性形式的HSP90部分，该HSP90部分在肿瘤细胞环境中扩展并以组成型维持在其中并且可以执行维持恶性表型所必要的功能。这类作用不仅是调控过表达的(即，HER2)、突变的(即，mB-Raf)或嵌合的蛋白质(即，Bcr-Abl)的折叠，还促进涉及异常活化的信号传导复合物(即，STAT5、BCL6)的分子的支架和复合物形成。虽然肿瘤变得对于HSP90-致癌蛋白的网络的存活成瘾，但是这些蛋白质对于功能和稳定性也变得依赖于“致癌HSP90”。该共生相互依赖性表明肿瘤对于HSP90致癌蛋白成瘾等同于对于“致癌HSP90”成瘾。

此外，在WO 2013/009655中，示出了HSP90在恶性细胞中形成生物化学上不同的复合物。癌细胞HSP90的主要部分保留与正常细胞相似的“维护”伴侣蛋白功能，而在癌细胞中富集或扩展的功能上不同的HSP90池(即，“致癌HSP90”)与维持肿瘤细胞存活、异常增殖特征和侵入性和转移性行为所需要的致癌蛋白特异性地相互作用。

初始地据信，在癌细胞相对于正常细胞中，含有HSP90的伴侣蛋白组复合物的构成的不一致性是上调元件分子的表现形式。然而，现在提出了后生修饰决定应激修饰的伴侣蛋白组的组成，参见Taldone,T.,Ochiana,S.O.,Patel,P.D.&Chiosis,G.Selectivetargeting of the stress chaperome as a therapeutic strategy.Trends PharmacolSci 35,592-603(2014)[作为治疗性策略的应激伴侣蛋白组的选择性靶向,药理学科学趋势35,592-603(2014)]和Mollapour,M.&Neckers,L.Post-translational modificationsof Hsp90and their contributions to chaperone regulation.Biochimica etbiophysica acta 1823,648-655(2012)[Hsp90的翻译后修饰及其对于伴侣蛋白调控的贡献,生物化学与生物物理学报1823,648-655(2012)]。具体地，经由共伴侣蛋白和衔接子蛋白预募集产生的化学变化诸如翻译后修饰或生物化学改变相反可以是应激伴侣蛋白组种类的区分特征。在其组成和稳定性可能高度依赖于存在于天然肿瘤中的内源性条件的情况下，这些应激伴侣蛋白组种类抵抗通过当前实验室方法进行的调查，这在很大程度上是由于破坏或设计细胞环境来促进分析的方法的限制。

虽然在理解癌细胞中的HSP90功能的生物学方面有最近的进展，但是HSP90的根本性质、结构和功能及其在伴侣蛋白组内的作用仍未被良好理解。对于伴侣蛋白组的更基本的理解将对于发展用于治疗癌症的新靶向疗法是有益的。

2.发明内容

本发明提供与增加对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂或诱导伴侣蛋白组的生物化学重布线的药剂组合的伴侣蛋白抑制剂诸如HSP90抑制剂的方法。

在本披露中，示出了在应激条件诸如恶性转化下，该伴侣蛋白组在生物化学上进行“重布线”以形成稳定的、促进存活的、高分子量复合物。虽然正常生理条件诱导该伴侣蛋白组组件的瞬时存在，但是呈现了突出名为epichaperome的稳定的、多伴侣蛋白组聚集体在某些癌细胞中的积聚的数据。具体地，示出了癌细胞具有预形成的伴侣蛋白组复合物与其所有附件(共伴侣蛋白和辅助因子)的储器，预期在异常细胞中具有提升的活性。进一步示出了在生物化学上进行重布线以便形成这些多伴侣蛋白聚集体(epichaperome)的癌细胞对于存活依赖于该epichaperome。

另外，示出了可以通过诱导适当的蛋白毒性应激来诱导癌细胞形成前述稳定的、多伴侣蛋白组聚集体(epichaperome)。在某些情况下，该蛋白毒性应激能够将在正常生理条件下存在的瞬时伴侣蛋白组组件转化为在此定义的epichaperome复合物。在其他条件下，该蛋白毒性应激能够增加已形成的epichaperome的稳定性。在任一条件下，该蛋白毒性应激有效地使癌细胞对于存活更依赖于该epichaperome中的HSP90和其他伴侣蛋白和共伴侣蛋白。在此示出了这些应激癌细胞显著地更适于使用形成该epichaperome的蛋白质中的至少一种的抑制剂诸如HSP90抑制剂进行处理。因此，示出了通过在给予形成该epichaperome的蛋白质中的至少一种(例如，HSP90)的抑制剂之前的足够时间处使用蛋白毒性应激子预处理肿瘤，使得该肿瘤与未使用该蛋白毒性应激子处理的肿瘤相比对于抑制疗法显著地更敏感。另外，示出了在给予形成该epichaperome的蛋白质中的一种的抑制剂之前的足够时间处使用蛋白毒性应激子预处理肿瘤比同时给予该蛋白毒性应激子和形成该epichaperome的蛋白质中的一种(例如，HSP90)的抑制剂显著地更有效力。

存在将或多柔比星与17-AAG组合以便诱导癌细胞系的细胞凋亡的报告。参见Münster等人，Clin.Cancer Res.Vol.7,2228-2236,Aug.2001[临床癌症研究,第7卷,2228-2236,2001年8月]；Solit等人，Cancer Res.Vol.63,2139-2144,May 2003[癌症研究,第63卷,2139-2144,2003年5月]；以及美国专利7,211,562(统称“Rosen和同事”)。然而，与本披露不同，Rosen和同事发现该组合的功效依赖于细胞中的成视网膜细胞瘤蛋白(Rb)表达的状态。具体地，Rosen和同事示出了使用17-AAG进行的诱导的细胞凋亡的增强在突变的Rb或Rb阴性细胞中不依赖于给药时间表。在异种移植物实验中观察到相似的结果。然而，本发明的方法不依赖于Rb状态并且提供优异的结果，无论Rb状态如何。Rosen和同事还关注于细胞周期在使癌细胞对于细胞凋亡敏感方面的作用。然而，本披露涉及作为导致癌症的敏感化的准素因子的epichaperome的诱导。

还相比于本发明，Rosen和同事发现对于一些组合例如多柔比星和17-AAG，给予的顺序无关紧要。然而，下面的实例示出了当蛋白毒性应激子(例如，多柔比星)在Hsp90抑制剂之前给予时，给药时间表(即，处理的顺序)与相反顺序相比提供优异的结果。

Rosen和同事还声明当17-AAG同时给药时相对于“之后立即”给药时，针对Rb阳性(例如，野生型Rb)癌细胞的组合提供相似的结果。参见参见Münster等人，第2234页。相比之下，本发明涵盖以下认识：与其他给药时间表相比，Hsp90抑制剂在蛋白毒性应激子之后给予提供意料之外的优异功效。

因此，本披露提供以下证据：通过给予特定蛋白毒性应激子来增加对于癌细胞的蛋白毒性应激增加这些细胞对于HSP90抑制疗法的敏感性。这些蛋白毒性应激子能够将这些癌细胞推动到以下状态中：这些癌细胞对于HSP90和其他伴侣蛋白和共伴侣蛋白具有增加的依赖性。因此，本披露提供使用依赖于蛋白毒性应激子和HSP90抑制剂的适当时序的该蛋白毒性应激子和该HSP90抑制剂的合理组合疗法来治疗癌症的方法。

在一个方面中，本披露提供用于通过在使用蛋白毒性应激子进行预处理之后向癌症患者给予HSP90的抑制剂来治疗癌症的方法。该蛋白毒性应激子在给予该HSP90抑制剂之前的足够时间处给予，以便使该epichaperome复合物的形成最大化，从而使得肿瘤最大地易受HSP90抑制疗法的影响。在另一方面，在该epichaperome复合物形成之后显著长的时间处给予该HSP90抑制剂可能减轻该HSP90抑制剂的效应，因为肿瘤对于存活变得较小依赖于该epichaperome。

在某些实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少一小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少两小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少三小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少四小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少五小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少六小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少七小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少八小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少九小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少十小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少十二小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少十八小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少二十四小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂不多于二十四小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少三十六小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂不多于三十六小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少四十八小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂不多于四十八小时之后给予。在某些实施例中，该蛋白毒性应激子在任一上述实施例之间的范围中的时间处给予，例如在给予该HSP90抑制剂之前约一小时与三小时之间给予，在给予该HSP90抑制剂之前约两小时与四小时之间给予，在给予该HSP90抑制剂之前约三小时与五小时之间给予，在给予该HSP90抑制剂之前约两小时与六小时之间给予，在给予该HSP90抑制剂之前约三小时与六小时之间给予，在给予该HSP90抑制剂之前约四小时与六小时之间给予，在给予该HSP90抑制剂之前约四小时与八小时之间给予，在给予该HSP90抑制剂之前约四小时与十小时之间给予，在给予该HSP90抑制剂之前约五小时与七小时之间给予等等。

在特定实施例中，该蛋白毒性剂肠胃外(例如，静脉内)给予。在这类实施例中，该HSP90抑制剂在该肠胃外给予完成之后一定时间处给予。例如，该HSP90抑制剂可以在该蛋白毒性剂的该肠胃外给予完成一小时、两小时、三小时、四小时、五小时、六小时、七小时、八小时、九小时、十小时、十一小时、或十二小时之后给予。在某些实施例中，该HSP90抑制剂可以在该蛋白毒性剂的该肠胃外给予完成十八小时、二十四小时、三十六小时、或四十八小时之后给予。在某些实施例中，该HSP90在任一上述实施例之间的范围中的时间处给予，例如在该蛋白毒性剂的该肠胃外给予完成约一小时至三小时之后给予，在该蛋白毒性剂的该肠胃外给予完成约两小时至四小时之后给予，在该蛋白毒性剂的该肠胃外给予完成约三小时至五小时之后给予，在该蛋白毒性剂的该肠胃外给予完成约两小时至六小时之后给予，在该蛋白毒性剂的该肠胃外给予完成约三小时至六小时之后给予，在该蛋白毒性剂的该肠胃外给予完成约四小时至六小时之后给予，在该蛋白毒性剂的该肠胃外给予完成约四小时至八小时之后给予，在该蛋白毒性剂的该肠胃外给予完成约四小时至十小时之后给予，在该蛋白毒性剂的该肠胃外给予完成约五小时至七小时之后给予等等。

在另一个实施例中，HSP90或另一种伴侣蛋白可以通过使细胞受应激的诱导伴侣蛋白组的生物化学重布线的替代性方式而被诱导来形成稳定的epichaperome复合物。例如，该epichaperome复合物的稳定性可以通过使用HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂预处理癌细胞来增加。在一个这种实施例中，翻译后修饰通过限制伴侣蛋白组蛋白的磷酸化的量来实现。例如，磷酸酯基团可以通过添加磷酸酶来去除。可替代地，激酶抑制剂可以在给予该HSP90抑制剂之前一定时间处添加以便减少这些伴侣蛋白的磷酸化。在一个这种实施例中，癌细胞在给予HSP90抑制剂之前使用药物PD407824进行预处理，该药物PD407824是检查点激酶Chk1和Wee1的抑制剂。

在此披露的方法可以用于治疗多种不同癌症，包括但不限于乳腺癌、肺癌包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌、宫颈癌、结肠癌、绒毛膜癌、膀胱癌、宫颈癌、基底细胞癌、绒毛膜癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌、食管癌、胃癌、头颈癌、急性淋巴细胞性白血病(ACL)、骨髓性白血病包括急性髓细胞白血病(AML)和慢性髓细胞慢性髓细胞白血病(CML)、多发性骨髓瘤、T细胞白血病淋巴瘤、肝癌、淋巴瘤包括何杰金氏病(Hodgkin's disease)、淋巴细胞性淋巴瘤、成神经细胞瘤、滤泡性淋巴瘤和弥散性大B细胞淋巴瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肉瘤、皮肤癌诸如黑色素瘤、睾丸癌、甲状腺癌、肾癌、骨髓增生性病症、胃肠癌包括胃肠道基质肿瘤、食管癌、胃癌、胆囊癌、肛门癌、脑肿瘤包括神经胶质瘤、淋巴瘤包括滤泡性淋巴瘤和弥散性大B细胞淋巴瘤。

在一些实施例中，在此披露的方法可以用于治疗成视网膜细胞瘤(Rb)缺陷或Rb阴性癌症。在一些实施例中，在此披露的方法可以用于治疗乳腺癌、肺癌包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌、宫颈癌、结肠癌、绒毛膜癌、膀胱癌、宫颈癌、基底细胞癌、绒毛膜癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌、食管癌、胃癌、头颈癌、急性淋巴细胞性白血病(ACL)、骨髓性白血病包括急性髓细胞白血病(AML)和慢性髓细胞慢性髓细胞白血病(CML)、多发性骨髓瘤、T细胞白血病淋巴瘤、肝癌、淋巴瘤包括何杰金氏病、淋巴细胞性淋巴瘤、成神经细胞瘤、滤泡性淋巴瘤和弥散性大B细胞淋巴瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肉瘤、皮肤癌诸如黑色素瘤、睾丸癌、甲状腺癌、肾癌、骨髓增生性病症、胃肠癌包括胃肠道基质肿瘤、食管癌、胃癌、胆囊癌、肛门癌、脑肿瘤包括神经胶质瘤、淋巴瘤包括滤泡性淋巴瘤或弥散性大B细胞淋巴瘤，其中该癌症是成视网膜细胞瘤(Rb)缺陷或Rb阴性癌症。在一些实施例中，在此披露的方法可以用于治疗小细胞肺癌、三阴性乳腺癌、HPV阳性头颈癌、成视网膜细胞瘤、膀胱癌、前列腺癌、骨肉瘤、或宫颈癌，其中该癌症是成视网膜细胞瘤(Rb)缺陷或Rb阴性癌症。

在一些实施例中，在此披露的方法可以用于治疗成视网膜细胞瘤(Rb)表达、Rb阳性和/或Rb野生型癌症。在一些实施例中，在此披露的方法用于治疗除了成视网膜细胞瘤、骨肉瘤或小细胞肺癌以外的癌症。在一些实施例中，在此披露的方法用于治疗除了是Rb阳性的乳腺癌以外的癌症。在一些实施例中，在此披露的方法用于治疗除了过表达HER2的乳腺癌以外的癌症。在一些实施例中，在此披露的方法用于治疗除了是Rb阳性和过表达HER2的乳腺癌以外的癌症。应当理解，HER2过表达的确定可以利用与适当参考的比较，该适当参考在一些实施例中是具有中、低、或不可检测的HRE2表达的乳腺癌，或者在其他实施例中是具有中、低、或不可检测的HER2表达的另一种癌症。

在一个实施例中，有待在该HSP90之前给予的蛋白毒性应激子是化学治疗剂。具体的化学治疗试剂包括但不限于微管稳定剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、蒽环素类、和烷基化剂。该化学治疗剂在能够增加细胞中形成的epichaperome的水平的剂量下提供。在一个实施例中，该化学治疗剂可以在典型地向癌症患者给予的剂量下给药。在一些实施例中，该化学治疗剂(例如，紫杉烷诸如)在针对该化学治疗剂的处方信息(例如，药物标签)中反映的相同剂量下给药。在另一个实施例中，该化学治疗剂可以在小于典型地向癌症患者给予的量的剂量下给药。例如，向癌症患者给予的该化学治疗剂的剂量可以是在针对该化学治疗剂的处方信息中反映的量的80％、量的70％、量的60％、量的50％、量的40％、量的30％、或量的20％。在某些实施例中，该化学治疗剂可以在任一上述实施例之间的量给予，例如在针对该化学治疗剂的处方信息中反映的量的20％与80％之间给予、在针对该化学治疗剂的处方信息中反映的量的40％与80％之间给予、在针对该化学治疗剂的处方信息中反映的量的50％与70％之间给予、在针对该化学治疗剂的处方信息中反映的量的50％与60％之间给予等等。

在一个这种实施例中，有待在该HSP90抑制剂之前给予的该化学治疗剂是微管稳定剂。具体的微管稳定剂包括但不限于多西他赛、紫杉醇、卡巴它赛、伊沙匹隆、长春新碱、laulimalide、discodermolid、和埃坡霉素。在一个实施例中，该蛋白毒性应激子是蛋白质结合的紫杉醇组合物诸如在其他实施例中，该蛋白毒性应激子是基于cremaphor的紫杉醇组合物(例如，)。

在另一个这种实施例中，有待在该HSP90抑制剂之前给予的该化学治疗剂是蛋白酶体抑制剂。具体的蛋白酶体抑制剂包括但不限于硼替佐米、卡菲佐米和CEP-18770(德兰佐米(delanzomib))。

在另一个这种实施例中，有待在该HSP90抑制剂之前给予的该化学治疗剂是选自以下的化学治疗剂：培美曲塞、奥沙利铂、5-FU、多柔比星、来那度胺、apiosilib、PD407824、和MK1775。

在一个实施例中，受试者在给予根据本披露的给药方案之前正在经历或先前已经历一种或多种化学治疗剂的给予。如果患者当前正处于特定化学治疗剂的给药方案下，则该给药方案可能需要根据本披露进行修改。因此，本披露提供治疗癌症的方法，所述方法包括向癌症患者给予HSP90的抑制剂，该患者在给予该HSP90抑制剂之前的足够时间已接受蛋白毒性应激子以便增加该epichaperome的形成。

在本披露的一个实施例中，有待在给予该蛋白毒性应激子之后给予的该HSP90抑制剂是直接并优先结合到在该患者的癌细胞中存在的致癌形式的HSP90(即，致癌HSP90)的HSP90抑制剂。在本披露的一个实施例中，有待在给予该蛋白毒性应激子之后给予的该HSP90抑制剂是8-(6-碘-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基硫烷基)-9-(3-异丙基氨基-丙基)-9H-嘌呤-6-基胺(PU-H71)或其药学上可接受的盐(例如，HCl盐)。PU-H71可以在范围是从约5mg/m²至约350mg/m²的剂量下根据选自以下的给药时间表向人类患者静脉内给予：每周一次、每周两次、每周三次、每周四次、或每周五次。根据本披露，该蛋白毒性应激子通常在每次给予PU-H71之前预先确定的时间处给予。在特定实施例中，PU-H71在从约20mg/m²至约60mg/m²的剂量下根据选自以下的给药时间表向人类患者静脉内给予：每周一次、每周两次、每周三次、每周四次、或每周五次。在其他实施例中，PU-H71在从约60mg/m²至约150mg/m²的剂量下根据选自以下的给药时间表向人类患者静脉内给予：每周一次、每周两次、每周三次、每周四次、或每周五次。在其他实施例中，PU-H71在从约200mg/m²至约350mg/m²的剂量下根据选自以下的给药时间表向人类患者静脉内给予：每周一次、每周两次、每周三次、每周四次、或每周五次。在其他实施例中，PU-H71在从约250mg/m²至约300mg/m²的剂量下根据选自以下的给药时间表向人类患者静脉内给予：每周一次、每周两次、每周三次、每周四次、或每周五次。在其他实施例中，PU-H71在从约250mg/m²至约300mg/m²的剂量下根据每周两次的给药时间表向人类患者静脉内给予。在其他实施例中，PU-H71在从约300mg/m²至约350mg/m²的剂量下根据每周一次的给药时间表向人类患者静脉内给予。

PU-H71可以在范围是从约5mg/m²至约350mg/m²的剂量下根据选自以下的给药时间表向人类患者静脉内给予：每周一次、每两周一次、每三周一次、或每四周一次。根据本披露，该蛋白毒性应激子通常在每次给予PU-H71之前预先确定的时间处给予。在特定实施例中，PU-H71在从约20mg/m²至约60mg/m²的剂量下根据选自以下的给药时间表向人类患者静脉内给予：每周一次、每两周一次、每三周一次、或每四周一次。在其他实施例中，PU-H71在从约60mg/m²至约150mg/m²的剂量下根据选自以下的给药时间表向人类患者静脉内给予：每周一次、每两周一次、每三周一次、或每四周一次。在其他实施例中，PU-H71在从约200mg/m²至约350mg/m²的剂量下根据选自以下的给药时间表向人类患者静脉内给予：每周一次、每两周一次、每三周一次、或每四周一次。在其他实施例中，PU-H71在从约250mg/m²至约300mg/m²的剂量下根据选自以下的给药时间表向人类患者静脉内给予：每周一次、每两周一次、每三周一次、或每四周一次。在其他实施例中，PU-H71在从约250mg/m²至约300mg/m²的剂量下根据每三周一次的给药时间表向人类患者静脉内给予。在其他实施例中，PU-H71在从约300mg/m²至约350mg/m²的剂量下根据每三周一次的给药时间表向人类患者静脉内给予。

在其他实施例中，有待在给予该蛋白毒性应激子之后给予的该HSP90抑制剂选自SNX-5422、SNX-2112、KW-2478、AT13387、和STA-9090。

在一个方面中，本披露提供通过在7天与31天之间的治疗周期内给予蛋白毒性应激子(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)和HSP90抑制剂的组合来治疗癌症的方法，其中该蛋白毒性应激子(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)和该HSP90抑制剂在所述周期内给予至少一次，并且其中每次给予所述蛋白毒性应激子(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)之后给予所述HSP90抑制剂。根据本披露，该HSP90抑制剂的给予在通过该蛋白毒性应激子(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)诱导的epichaperome形成增加之后进行。在一些实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)至少一小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)至少两小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)至少三小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)至少四小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)至少五小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)至少六小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)至少七小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)至少八小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)至少九小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)至少十小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)至少十二小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)至少十八小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)至少二十四小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)至少三十六小时之后给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)至少四十八小时之后给予。在某些实施例中，该蛋白毒性应激子或HSP90的翻译后修饰的调节剂)在任一上述实施例之间的范围中的时间处给予，例如在给予该HSP90抑制剂之前约一小时与三小时之间给予，在给予该HSP90抑制剂之前约两小时与四小时之间给予，在给予该HSP90抑制剂之前约三小时与五小时之间给予，在给予该HSP90抑制剂之前约两小时与六小时之间给予，在给予该HSP90抑制剂之前约三小时与六小时之间给予，在给予该HSP90抑制剂之前约四小时与六小时之间给予，在给予该HSP90抑制剂之前约四小时与八小时之间给予，在给予该HSP90抑制剂之前约四小时与十小时之间给予，在给予该HSP90抑制剂之前约五小时与七小时之间给予等等。

在一些实施例中，该治疗周期可以是21天周期，其中该蛋白毒性应激子(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)和该HSP90抑制剂仅在该周期的第1天给予。在一些实施例中，该治疗周期可以是21天周期，其中该蛋白毒性应激子(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)和该HSP90抑制剂在该周期过程中给予两次、三次、四次、五次、六次、七次或八次。在一些实施例中，该治疗周期可以是14天周期，其中该蛋白毒性应激子(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)和该HSP90抑制剂在该周期内给予一次、两次、三次、四次、五次、或六次。在一些实施例中，该治疗周期可以是28天周期，其中该蛋白毒性应激子(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)和该HSP90抑制剂在该周期过程中给予两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、或十次。在一些这类实施例中，该蛋白毒性应激子(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)和该HSP90抑制剂可以在该28天治疗周期的第1、8和15天给予。在其他实施例中，该治疗周期可以是7天周期，其中该蛋白毒性应激子(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)和该HSP90抑制剂在该周期的第1天给予。

在某些实施例中，该HSP90抑制剂(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)仅在该蛋白毒性应激子(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)给予的天数给予。在其他实施例中，该HSP90抑制剂在该蛋白毒性应激子(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)给予的天数给予并且在该蛋白毒性应激子(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)不给予的天数给予。例如，在两周周期中，该HSP90抑制剂和该蛋白毒性应激子(或HSP90的翻译后修饰的调节剂)可以在该周期的第1天和第8天给予并且该HSP90抑制剂可以在该周期的第4天和第11天独自给予。

在另一个方面中，本披露提供确定该epichaperome是否存在于肿瘤中的方法。申请人发现这些癌细胞中的该epichaperome的形成的量越大，这些癌细胞对于存活和增殖越依赖于该epichamerome。本披露提供实现肿瘤中该epichaperome的检测的生物化学测定。以这种方式，该epichaperome提供可以用作生物标记物的生物化学标记。由于无论遗传或组织属性如何，该生物标记物均在若干肿瘤类型中发生，所以该生物标记物提供一种针对响应于已在临床评估中或在后期临床前评估中的若干种HSP90和HSP70抑制剂药物的肿瘤的识别进行患者分层的方式。本披露还证实了具有该epichaperome的发生的肿瘤比不具有该epichaperome复合物的肿瘤远远更适于靶向伴侣蛋白和共伴侣蛋白成员(例如，HSP90或HSP70)的药理剂的治疗。此外，如通过在此披露的生物化学技术所测量的该epichaperome复合物的丰度指示这些癌细胞响应于靶向伴侣蛋白组成员的药理剂的易受影响性。

在一个实施例中，该epichaperome复合物的存在或其缺乏使用将等电聚焦与免疫印迹能力组合的基于毛细管的平台来确定。该方法使用固定pH梯度来基于其等电点(pI)将天然多聚体蛋白复合物分离，并且然后允许使用特异性抗体探测固定复合物。此外，该方法仅使用极少量的样品来做到这一点，从而实现对于初级样本的调查。在另一个实施例中，该epichaperome复合物的存在或其缺乏使用非变性PAGE来确定。

3.附图说明

图1a至1d示出了某些癌细胞但并非所有癌细胞富含HSP90是关键组分的稳定的、多伴侣蛋白组复合物。1a，1b)细胞匀浆产物在非变性毛细管等电聚焦分离条件下进行分析并且使用针对HSP90α和HSP90β的抗体进行探测。PT；原发性肿瘤，NPT；与肿瘤相邻的正常组织。示出了来自两个技术重复的平均值±s.d.。1c)培养细胞中和原发性肿瘤中的HSP90的生物化学图谱。TNBC，三阴性乳腺癌。1d)非变性和变性凝胶条件下若干伴侣蛋白组成员的生物化学图谱。IB，免疫印迹。所有数据代表两次或三次独立的实验。

图2a至2c示出了互连的、稳定的多聚体伴侣蛋白组复合物存在于1型癌细胞中。2a)1型、2型和未转化细胞中的关键伴侣蛋白组成员之间的功能和生物化学关系的探索的示意图。2b)使用针对HSP70、HSC70和HOP的抗体消耗的1型癌细胞匀浆产物中的和AHA-1通过特异性siRNA敲低的细胞的多聚体伴侣蛋白复合物的变化。2c)通过其对应的化学诱饵从指示的细胞匀浆产物分离的HSP90和HSP70的货物或相互作用蛋白。匀浆产物和分离物中的蛋白质的水平通过蛋白质印迹进行探测。所有数据独立地重复两次或三次，示出代表性数据。

图3a至3g证实了该epichaperome促进癌细胞存活。3a)指示的细胞MDAMB468(1型，高epichaperome，对于HSP90抑制剂敏感)、ASPC1(2型，低至没有epichaperome，对于HSP90抑制剂耐受)和HMEC(未转化)的裂解物与增加量的PU-H71-小珠(PU-H71附接到固体支持物)或与对照小珠(附接有惰性化学物的小珠)一起孵育。3b)至3d)如通过PU-FITC捕获测量的epichaperome丰度和如通过膜联蛋白V染色测量的使用PU-H71处理48h后的细胞成活力的相关分析。每个数据点代表一个细胞系；数据是来自两个技术重复的平均值。3e)AHA-1水平通过siRNA或干扰对照降低的细胞的PU-H71敏感性。细胞使用增加浓度的PU-H71处理24h。示出了来自两个技术重复和代表性蛋白质印迹的平均值±s.d.。3f)对应于图3d的遗传病灶。3g)如通过膜联蛋白V染色测量的使用指示的HSP90药剂处理48h的1型和2型癌细胞的细胞凋亡敏感性。

图4示出了实例6的离体研究的处理示意图。

图5a至5e证实了示出epichaperome阳性肿瘤对于HSP90抑制敏感的离体研究。5a)示出了使用HSP90抑制剂PU-H71离体处理的原发性乳腺癌样本的敏感性和epichaperome表达。5b)使用PU-H71离体处理的原发性乳腺癌样本的代表性实例。5c)使用PU-H71离体处理的急性髓细胞白血病的代表性实例。5d)使用HSP90抑制剂PU-H71离体处理的急性髓细胞白血病样本的敏感性。5e)进一步示出了示出了使用HSP90抑制剂PU-H71离体处理的原发性乳腺癌样本的敏感性和epichaperome表达。

图6a至6c证实了并非所有肿瘤依赖于epichaperome，但是多于一半的肿瘤依赖于epichaperome。a-c)95个癌细胞系的组中通过PU-FITC确定的Epichaperome丰度(a)和40个原发性AML(b)和通过50个实体肿瘤中的PU-PET(c).对于PU-PET，代表性实体肿瘤的横截面CT和PU-PET图像各自在同一横轴平面处示出。肿瘤的位置通过箭头指示。

图7示出了通过引入蛋白毒性应激子来增加癌细胞的应激增加癌细胞的药理学易受影响性。左图示出了当引入蛋白毒性应激子之后细胞被推动到HSP90成瘾的状态中时，形成了稳定的epichaperome复合物。如左下所示，处于应激状态(即，较大epichaperome形成)中的细胞更易受HSP90疗法的影响。右图示出了增加epichaperome形成的若干种方式，包括添加化学治疗剂或使用HSP90和/或其相互作用伴侣蛋白组的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂。

图8a至8f示出了在添加HSP90抑制剂(用PU-H71例示)之前使用紫杉烷处理乳腺和胰腺癌细胞导致当与单独的化合物或以相反顺序添加时相比应激伴侣蛋白组水平增加和细胞毒性增加。8a，8b)使用媒介物、阳性对照、紫杉醇或硼替佐米处理的细胞中在非变性和变性凝胶条件下HSP90和若干伴侣蛋白组成员的生物化学图谱。8c)使用如指示的媒介物、PU-H71和多西他赛的顺序组合处理的MiaPaCa2胰腺癌细胞的成活力。72h处的细胞成活力使用磺酰若丹明B测定测量。需注意，在紫杉烷之前的PU是拮抗性的。8d)在非变性条件下HSP90的生物化学图谱。使用紫杉醇预处理细胞1h，然后洗去药物以便模拟体内条件。需注意，epichaperome水平(标记为顶部>二聚体)遵循钟形，注意到在5-7h处具有峰值，然后在第24h降低至内源性水平。8e，8f)，使用指示的化学治疗剂处理的指示的癌细胞(示出了乳腺、胰腺和肺)中在非变性和变性凝胶条件下HSP90的生物化学图谱。引起epichaperome增加的实验条件通过星号指示。

图9a和9b.证实了通过磷酸化的翻译后修饰改变效应进行的epichaperome的调节。9a)使用媒介物或磷酸酶(LPP)处理的癌细胞裂解物中在非变性和变性凝胶条件下HSP90的生物化学图谱。在右侧，附接到固体支持物的PU-H71的结合图谱。需注意，使用LPP处理的裂解物中应激HSP90复合物增加，从而表明磷酸化在抑制或限制epichaperome的形成方面的潜在作用。9b)使用指示的激酶抑制剂和化学治疗剂处理的指示的乳腺癌细胞中在非变性凝胶状态下HSP90的生物化学图谱。需注意，某些激酶但并非所有激酶的抑制引起epichaperome的细胞水平的增加。YK198是变构HSP70抑制剂。

图10示出了特定蛋白毒性应激子能够诱导epichaperome形成。

图11a至11e证实了监测当在指示的处理范例下向携带异种移植的MiaPaCa2胰腺癌肿瘤的小鼠给予时PU-H71和的功效和安全性的体内研究。11a，11b)顺序表示之后在6h处进行PU-H71。Ab，PU，PU-H71。肿瘤体积指示为A.平均值+/-SD和B.针对个体小鼠。药剂通过ip注射一周一次(1xwk)给予。11c，11d)小鼠重量每周两次进行监测，11e)同时给予或以之后分别在1h、3h或6h处进行PU-H71的顺序给予的和PU-H71对于肿瘤消退的效应。指示的处理范例的如在第28天测量的异种移植肿瘤的测量的体积(11f)和小鼠重量(11g)。

图12示出了当在指示的处理范例下向携带异种移植的MiaPaCa2胰腺癌肿瘤的小鼠给予时PU-H71和的处理方案进行五周之后拍摄的代表性小鼠的图片。给予6h之后进行PU-H71的顺序处理引起治愈，而PU-H71和的同时处理引起停滞或消退。

图13a至13e证实了监测当在指示的处理范例下向携带异种移植的NCI-H1975EGFR突变体非小细胞肺癌肿瘤的小鼠给予时PU-H71和Abraxane的功效和安全性的体内研究。13a)PU-H71在e之前6h或24h给予(PU->Ab 6h后；PU->Ab 24h后)或反之亦然(Ab->PU 6h后；Ab->PU24h后)。每种药剂还单独给予或组合、同时给予。药剂通过ip注射一周一次(1xwk)给予。13b)处理同时和Ab->PU 6h臂并且如所指示进行监测。需注意，虽然在同时臂上，所有小鼠均在第100天左右复发，但是在顺序Ab->PU 6h臂上注意到治愈。13c)Ab->PU6h对于在上复发的肿瘤的效应。记录到没有重量损失(未示出)。指示的处理范例的在第14天(13d)和第28天(13e)异种移植肿瘤的测量的体积

图14a至14d证实了监测当在指示的处理范例下向携带异种移植的乳腺癌肿瘤的小鼠给予时PU-H71和的功效和安全性的体内研究。14a，14c和14d)示出了HCC-1806肿瘤模型的结果；14b)示出了MDA-MB-231肿瘤模型的结果。

图15示出了Inucyte动力学生长测定的结果(实例11)。

图16和17示出了根据本披露的方法给予的HSP90抑制剂的结构。

图18a至18c进一步证实了在化学蛋白应激子之后给予的Hsp90抑制剂的功效。18a示出了在添加PU-H71之前暴露于系列稀释的多柔比星(DOX)的伯基特淋巴瘤细胞的成活力。18b示出了对DLBCL细胞的DOX之后进行PU-H71(褐色圆圈)、PU-H71之后进行DOX(蓝色圆圈)或同时给予(黑色圆圈)的给药组合的组合指数值。18c示出了在暴露于指示的药物组合的DLBCL细胞中如通过流式细胞术测量的半胱天冬酶-3活化。

图19a至19d进一步证实了当在指示的处理范例下向携带指示的异种移植肿瘤的小鼠(n＝3-5)给予时PU-H71和的功效和安全性。肿瘤体积指示为平均值+/-SD或针对个体小鼠。药剂一周一次(1xwk)给予。PU；PU-H71，在75mpk下，ip；Ab，在30mpk下，ip；Ab->PU顺序表示之后在6h处进行PU-H71。在携带以下指示的肿瘤的小鼠中监测在上文处理范例下的肿瘤生长(19a至19c)和体重(19d，按以下次序呈现：“媒介物”，最左列，接着“PU(1x wk)”、“Ab(1x wk)”、Ab+PU同时(1x wk)”，并且最右列“Ab>PU6h后(1x wk)”)：a，NCI-H1975肺癌；b，HCC1806三阴性乳腺癌；c，MDA-MB-231三阴性乳腺癌。对于长期体重监测，参见图20c和20d。

图20a至20d进一步证实了当在指示的处理范例下向携带指示的异种移植肿瘤的小鼠(n＝5)给予时PU-H71和的功效和安全性。肿瘤体积针对个体小鼠指示(A，B)，并且小鼠体重指示为平均值±SEM(C，D)。药剂一周一次(1xwk)给予。PU；PU-H71，在75mpk下，ip；Ab，在30mpk下，ip；Ab->PU顺序表示之后在6h处进行PU-H71。小鼠接受每周顺序/PU-H71的>20个连续周期，其中没有观察到毒性的临床体征并且没有观察到重量损失。

图21a和21b进一步证实了当在指示的处理范例下向携带异种移植的MiaPaCa2 4-胰腺癌肿瘤的小鼠(n＝4-5)给予时PU-H71(75mg/kg)和(30mg/kg)的功效和安全性。在治疗第28天处的肿瘤体积值(a)和小鼠重量值(b)呈现为平均值+/-SEM。数据从左列至右列按以下顺序呈现：“媒介物，直至第21天，然后切换至AB>PU 6h(14F)”，“Abraxane(1x wk)30mpk iv”，“Abraxane(1x wk)30mpk iv”，“Abraxane(1x wk)30mpk ip>PU-H71(1xwk)75mpk ip在6h处”，“Abraxane(1x wk)30mpk iv>PU-H71(1x wk)75mpk ip同时”，“Abraxane(1x wk)30mpk iv>PU-H71(1x wk)75mpk ip在6h处”，Abraxane(1x wk)30mpk iv>PU-H71(2x wk)75mpk ip在6h处”，“媒介物”。

图22a至22c进一步证实了当在指示的处理范例下向携带异种移植的MiaPaCa2 4-胰腺癌肿瘤的小鼠(n＝4 5)给予时PU-H71和的功效和安全性。在处理过程中肿瘤体积值(a)和小鼠重量值(b，c)呈现为平均值+/-SEM。应用具有Sidak’s多重比较测试的双向ANOVA来比较14F和14G。14F＝Ab>PU(6h)30mg/kg iv 1x wk PU-H71 75mg/kg ip1x wk，Ab之后6h；14G＝Ab>PU(6h)30mg/kg iv 1x wk PU-H71 75mg/kgip 2x wk，Ab之后6h。

图23a和23b进一步证实了当在指示的处理范例下向携带异种移植的HCC1806三阴性乳腺癌肿瘤的小鼠(n＝5)给予时PU-H71(75mg/kg)和(30mg/kg)的功效和安全性。在处理过程中肿瘤体积值(a)和小鼠重量值(b)呈现为平均值+/-SEM。应用具有Sidak’s多重比较测试的双向ANOVA来比较15F和15G。15F＝Ab>PU(6h)30mg/kgiv1x wk PU-H71 75mg/kg ip 1x wk，Ab之后6h；15G＝Ab>PU(6h)30mg/kg iv1x wk PU-H71 75mg/kg ip 2x wk，Ab之后6h

4.具体实施方式

本披露提供用于通过在使用蛋白毒性应激子进行预处理之后向癌症患者给予治疗有效量的HSP90的抑制剂来治疗癌症的方法。

如在本申请中所用的，术语“治疗”是指延迟症状的发作、减轻癌症的严重性或延迟癌症的症状性进展。疾病的治愈不需要落在治疗的范围内。进一步，应当理解，这些治疗目标的特定结果将在个体间变化，并且一些个体可能获得比代表性群体的统计学平均值更多或更少的益处。因此，治疗是指向有需要的个体给予组合物，期待他们将获得治疗益处。

术语“给予”是指将治疗化合物引入到个体中的动作。一般来讲，可以使用任何给予途径。因此，根据有待治疗的病状的性质，通过口服、鞘内、静脉内、肌肉内或肠胃外注射进行的给予是适当的。给予还可以通过吸入对脑进行，因为在鼻子的上侧具有与脑连接的没有BBB毛细管的隔室。穿过血脑屏障的化合物对于该给予模式是优选的，虽然并不严格地需要该特征。

术语“治疗有效量”涵盖给予的化合物的量和在统计学基础上在个体中获得预防疾病、减轻疾病的严重性或延迟疾病的进展的结果的给予的时间表两者。如将理解的，优选的量将在化合物之间变化，以便使毒性/耐受性与治疗功效和给予模式平衡。最大耐受剂量和关于给药次数和频率的治疗方案的确定是化合物的早期临床评估的常规部分。

如实例1至5所描述，已识别并表征epichaperome，它是无论原始或致病基因突变的组织如何、均在超过一半的肿瘤中发生的修饰的伴侣蛋白组。证实了生物化学修饰将epichaperome与正常细胞的维护伴侣蛋白组特征区分开。虽然瞬时伴侣蛋白组复合物存在于正常细胞形式中并且快速分解，但是这些复合物的相对简短的暂时存在反映匹配其在满足未转化细胞的生长需求的速率下折叠并稳定蛋白质的作用的动力学特征。在另一方面，在未转化细胞中的永久性伴侣蛋白组复合物(即，epichaperome)具有相对长的半衰期，从而使得这些复合物更适于使信号传导和转录复合物维持在活性构型中以便适应连续生长和代谢的癌症伴侣蛋白组的作用。如实例1至3所描述，epichaperome富含伴侣蛋白和共伴侣蛋白，包括HSP90、HSP70、HSC70、HOP、AHA-1、CDC37、HSP40和HSP110。此外，如实例3所示，稳定的多聚体epichaperome在HSP90上集结，并且在物理上和功能上将HSP70和HSP90部件的组分聚集在一起。

另外，在实例6和7中示出了HSP90抑制剂显著地增加高epichaperome细胞的细胞凋亡，从而表示这些细胞依赖于该细胞部件。换言之，示出了epichaperome的丰度与这些癌细胞对于HSP90抑制的易感性之间存在显著相关性。如实例6和7所讨论，降低epichaperome的丰度使得细胞较不适于通过HSP90抑制剂杀死。根据这些实验，发现与具有较低水平的epichaperome的细胞相比，当暴露于HSP90的抑制剂时，富含epichaperome的细胞更可能死亡。在涵盖乳腺癌、肺癌、胰腺癌和胃癌、以及白血病和淋巴瘤的超过90个癌细胞系中，在epichaperome的丰度与这些癌细胞对于HSP90抑制的易感性之间发现显著相关性(P<0.0001)。(图3d和3f)

此外，通过降低AHA-1蛋白的水平、并且从而降低epichaperome蛋白的稳定性来降低epichaperome的丰度使得细胞较不适于通过HSP90抑制杀死。(图3e)。

这些发现导致用于确定适于使用HSP90的抑制剂治疗的患者的新生物标记物的发展。epichaperome呈现用作这种生物标记物的生物化学标记。由于无论遗传或组织属性如何，该生物标记物均在若干肿瘤类型中发生，所以该生物标记物提供一种针对响应于HSP90疗法或可替代地依赖于另一种伴侣蛋白或共伴侣蛋白的抑制的疗法的患者进行患者分层的方式。

蛋白质组和遗传研究未揭露与在特定癌细胞中观察到的epichaperome的富集特异性地相关的病灶的存在。虽然p53-、ras-、myc-、HER-、PI3K/AKT-、和JAK-细胞周期相关缺陷存在于对于PU-H71敏感的肿瘤中，但是这些缺陷在PU-H71耐受细胞中也是明显的(图3f)。这表明导致伴侣蛋白组重构和epichaperome依赖性肿瘤对于epichaperome特征的细胞依赖性的蛋白质组变化可以具有多种基因来源或者可以不依赖于遗传背景。该效应不限于PU-H71处理，因为对于HSP90复合物具有各种选择性的化学上不同的针对HSP90的药剂(SNX2112)和(NVP-AUY-922)重演PU-H71的特征。对于这些HSP90抑制剂的结构，参见图16。1型肿瘤也有效地被这些药剂杀死，而2型肿瘤保持不起反应(图3g)。这些观察一起将epichaperome确认为促进这些肿瘤的存活的方式。

这些观察到的效应与文献中的一些报告相反，这些报告诸如使用Hsp90抑制剂17-AAG与化学治疗剂(例如，或多柔比星)的各种组合的癌细胞系的体外研究(参见，Münster等人，Clin.Cancer Res.Vol.7,2228-2236,Aug.2001)[临床癌症研究,第7卷,2228-2236,2001年8月]。如上讨论的，该参考文献报告当化合物在相同的时间处给药或者17-AAG在之后立即给药时，通过和17-AAG的组合使细胞对于细胞凋亡敏感化是最明显的。此外，由Münster等人，观察到的关于和17-AAG的组合的效应是Rb依赖性的。另外，与下文讨论的结果相反，Münster等人，报告细胞对于多柔比星和17-AAG的组合的敏感化不依赖于化合物添加的次序或时序。

接下来使用离体研究验证原发性肿瘤中的epichaperome的功能显著性(参见针对原发性乳腺肿瘤和针对急性髓细胞白血病的实例6)。当使用PU-H71离体处理原发性乳腺肿瘤(n＝4)时(图4所示的处理示意图)，发现表达稳定的多聚体epichaperome形式的那些肿瘤最有效地被PU-H71杀死。例如，实施对于具有乳腺肿瘤的四名患者(患者1066、患者1067、患者1068、患者1069)的研究(图5a，左)。左上示出了如通过等电聚焦测量的四个乳腺肿瘤的生物化学标记。左中示出了通过HSP90抑制进行的这些样品的敏感性。左下示出了四个分析的乳腺癌肿瘤的受体状态。研究中的患者1066具有富含稳定的多聚体epichaperome形式的肿瘤，如通过基于电荷的非变性凝胶(等电聚焦)确定的(参见图5a)。患者1066的癌细胞易于在引入PU-H71之后经历细胞凋亡。如图5a所示，细胞凋亡相对于对照的程度依赖于PU-H71的浓度。相比之下并且与在培养细胞中的发现相似，不表达稳定的多聚体epichaperome形式的肿瘤大部分保持未受影响。例如，患者1067、1068和1069不具有富含稳定的epichaperome复合物的肿瘤，并且这些肿瘤比患者1066的肿瘤对于PU-H71抑制远远更不敏感(图5a)。另外，在乳腺样本的情况下，相邻的良性组织含有很少至不含epichaperome，并且因此对于PU-H71不敏感。

对于另外的患者衍生的乳腺肿瘤样品的研究使上文描述的观察更进一步(图5e)。图5e的左图示出了通过等电聚焦进行的8个患者乳腺肿瘤样品(PT59、PT60、PT61、PT66、PT14、PT30、PT18、和PT62)的生物化学标记的分析。来自PT59、PT66和PT18的样品证实了富含稳定的多聚体epichaperome形式，如通过基于电荷的非变性凝胶(等电聚焦)确定的。值得注意的是，这些患者的癌细胞易于在引入PU-H71之后经历细胞凋亡(图5e，右图)。另外，确认先前的结果，不表达稳定的多聚体epichaperome形式的肿瘤大部分保持未受影响。例如，来自PT60、PT61、PT14、PT30、和PT62的样品不具有富含稳定的epichaperome复合物的肿瘤并且这些肿瘤对于PU-H71处理远远更不敏感(图5e，右图)。

在另一个实例中，通过基于大小的非变性凝胶分析三个原发性三阴性乳腺肿瘤(TNBC#1、TNBC#2和TNBC#3)的生物化学标记，并且测量含有HSP90、HSC70、AHA1和CD36的epichaperome的丰度(图5a，右图)。基于生物化学标记，在三个肿瘤中的仅一个(TNBC#1)中观察到至显著程度的多聚体复合物并且在另一个(TNBC#3)中观察到至中等程度的多聚体复合物。值得注意的是，TNBC#2示出了非常少至没有指示epichaperome形成的多聚体复合物形成。如图5a的右下图所示，对于HSP90抑制最敏感的肿瘤是含有最多稳定的多聚体HSP90-中心复合物的肿瘤。值得注意的是，显示最少epichaperome形成的TNBC#2对于HSP90疗法耐受。

如图3a所示，PU-H71以较高的亲和力和选择性结合到当在epichaperome复合物中时的HSP90。例如，固体支持物固定的PU-H71与细胞匀浆产物一起孵育以便捕获PU-H71最敏感的HSP90复合物。然后通过等电聚焦分析上清液(即，剩余物或对于PU-H71最不敏感)。图3a示出了epichaperome复合物中的HSP90对于PU-H71最敏感(参见图3a，MDAMB468细胞，其中少量的PU小珠消耗高分子量的、稳定的HSP90复合物，但没有消耗HSP90二聚体)，而维护HSP90保持未改变(参见HMEC细胞，通过等电聚焦没有HSP90标记的变化)。图3b解释了PU-H71的该特性如何可以用作测量epichaperome水平的替代性方法。例如，图3b示出了在具有高epichaperome的细胞(1型)中，标记的PU-H71(诸如荧光标记的PU-FITC)比在2型细胞中捕获更多的HSP90(图3c，y轴)，虽然这些细胞中的总HSP90是相似的(图3b，SDS PAGE)。图3c还示出了当测量这些细胞中通过HSP90抑制剂诱导的细胞凋亡(x轴，膜联蛋白V染色)时，具有高epichaperome(如通过图3b等电聚焦和/或图3c PU-FITC染色测量的)的细胞在使用HSP90抑制剂处理时更容易死亡。图3d示出了使用PU-FITC染色的在原发性急性髓细胞白血病的组中的epichaperome的测量。该图还示出了当使用PU-H71处理时这些细胞的成活力(通过膜联蛋白V染色进行的细胞凋亡测量)。最后，该图将epichaperome水平与细胞凋亡相关，示出这些细胞中的epichaperome越高，这些细胞在使用HSP90抑制剂处理时越容易死亡。

基于上述发现，假设癌细胞可以被诱导来形成前述稳定的、多伴侣蛋白组聚集体(epichaperome)。epichaperome诱导的一种方式是通过添加适当的蛋白毒性应激。因此，具有很少至没有epichaperome的癌细胞可以被诱导来含有epichaperome并且因此增加这些癌细胞对于epichaperome抑制剂诸如HSP90抑制剂的敏感性。另外，已在一定程度上依赖于epichaperome的形成的癌细胞可以被诱导来变得严重依赖于epichaperome。还假设，当癌细胞最大地依赖于epichaperome(例如，HSP90和HSP70的抑制)来维持存活、信号传导并支持连续生长和代谢时，形成的epichaperome复合物的稳定性将在给予或引入蛋白毒性应激子之后的某一点处最大化。由此，在细胞对于重布线以便形成epichaperome的伴侣蛋白的最大依赖性的时间之后，epichaperome复合物的稳定性逐渐减弱，并且伴侣蛋白承担其折叠并稳定蛋白质的传统作用。

此外，假设当癌细胞处于实质性应激的状态中时，靶向含有epichaperome复合物的特定蛋白质的抑制剂可以在给予或引入蛋白毒性应激子之后的一定时间点处给予。该抑制剂可以减少或消除癌细胞中的epichaperome的功能，从而破坏细胞的成活力并且使得细胞易于细胞凋亡。基本概念在图7中描绘。如图7的左上所示，仅依赖于伴侣蛋白和共伴侣蛋白来执行正常“维护”或其他功能的癌细胞可以转化为针对存活对于epichaperome成瘾的细胞。成瘾状态取决于epichaperome复合物的形成。此外，如图7的右下所示，处于成瘾状态中的细胞比处于依赖状态中的细胞远远更易受HSP90抑制的影响。因此，在HSP90抑制疗法之前通过给予蛋白毒性应激子来增加癌细胞中的epichaperome的量对于HSP90疗法的功效具有明显的效应。此外，蛋白毒性应激子具有包括癌细胞的成活力的其自身固有的活性。因此，当根据本披露的方法给予时，蛋白毒性应激子和HSP90抑制剂的组合显示协同活性。

为了研究蛋白毒性应激子对于癌细胞的影响，应用在实例1第5部分中讨论的生物化学技术。如实例8所示，各种癌细胞在作为蛋白毒性应激子的化学治疗剂的存在或不存在下进行培养。使用化学治疗剂预处理的细胞和未预处理(媒介物)的细胞经受非变性PAGE来确定伴侣蛋白复合物的性质。如图7至9所示且实例8所描述，若干种化学治疗剂能够诱导与更稳定的epichaperome的形成一致的稳定的多聚体伴侣蛋白组复合物的形成。并非所有的化学治疗剂诱导稳定的多聚体伴侣蛋白组复合物的形成。图10显示了针对其诱导癌细胞形成epichaperome复合物的能力测试的特定化学治疗试剂的表。

替代添加蛋白毒性应激子，epichaperome复合物的稳定性可以通过使用HSP90和其他伴侣蛋白和共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂预处理癌细胞来增加。影响伴侣蛋白和共伴侣蛋白的翻译后修饰的一种方式是通过影响磷酸化。证实了磷酸化抑制epichaperome复合物的形成。如图9A所示，经由引入适当的磷酸酶来减少磷酸酯基团的量增加epichaperome形成的量。如图9B所示，通过使用特定激酶抑制剂预处理细胞来减少磷酸化也导致epichaperome形成的增加，虽然未在所有激酶抑制剂的情况下观察到该效应，从而表明特定表位涉及调控epichaperome形成。

已建立特定蛋白毒性剂能够诱导更稳定的epichaperome复合物的形成，接下来开发测量当使用PU-H71、多西他赛或PU-H71/多西他赛的组合处理时MiaPaCa2胰腺癌细胞的成活力的体外测定。(参见实例9和14)。关于该组合，执行两个测定，各自在PU-H71和多西他赛的变化浓度下执行。在一个测定中，多西他赛在给予PU-H71之前六小时给予。如图8c所示，在给予PU-H71之前六小时使用多西他赛预处理胰腺癌细胞比在给予多西他赛之前使用PU-H71预处理癌细胞是显著地更强力的。事实上，后一种给药方案证明是拮抗性的。

为了进一步建立蛋白毒性剂和Hsp90抑制剂的组合的效力，对于使用多柔比星(DOX)处理的淋巴瘤细胞执行体外测定。DOX是嵌入到DNA中以便诱导DNA损伤和氧化应激的拓扑异构酶抑制剂。DOX和PU-H71的相互作用使用针对协同作用的标准准则来评估，该标准准则是中值效应/组合指数(CI)方法。剂量应答矩阵用作针对相互作用系统性地测试按顺序或同时暴露时间表的DOX:PU-H71的多种比率的方式。向已暴露于DOX的DLBCL和伯基特淋巴瘤细胞添加PU-H71(DOX→PU-H71)在多种药物比率下是协同性的，而同时给予药物(DOX+PU-H71)或在DOX之前暴露于PU-H71(PU-H71→DOX)引起加成至拮抗相互作用(图18a、18b和未示出)。评估每种药物及其组合对于具有低至中等epichaperome水平的淋巴瘤细胞诸如SUDHL4 DLBCL细胞的细胞周期和细胞凋亡的效应(图18c)。在这些细胞中，24h暴露于1μΜPU-H71引起G1/S阻滞。24h暴露于低于IC50的DOX的剂量导致S期部分损失和G2/M积聚，其中小部分细胞示出亚G1DNA含量，这指示细胞凋亡。当PU-H71在24h延迟的情况下添加到DOX暴露的细胞时，观察到具有G2/M DNA含量的细胞的损失和具有片段化的亚G1DNA含量的细胞的出现。总之，当细胞在PU-H71之前预暴露于DOX化学疗法时，PU-H71和DOX的组合在诱导半胱天冬酶-3活化和细胞凋亡方面是最有效的。

如实例10、13和14所描述，实施体内动物研究来确定披露的组合给药方案的功效。动物模型包括HI 975肿瘤模型来评价肺癌，包括MiaPaca2肿瘤模型来评价胰腺癌，并且包括HCC-1806和MDA-MB-231肿瘤模型来评价三阴性乳腺癌。在实例10所描述的模型中，PU-H71用作HSP90抑制剂并且用作化学治疗剂。各种研究中的动物被同时地或顺序地给予对照媒介物、PU-H71、Abraxne或PU-H71和的组合。对于顺序给予，首先给予接着给予PU-H71，或者首先给予PU-H71接着给予动物的肿瘤体积在预先选择的时间点处评估。

如图11至14和图19至23所示，在体内动物模型中，与同时给予PU-H71和或给予PU-H71六小时后给予相比，给予六小时之后给予PU-H71示出显著增强的功效。此外，如图13a所示(H1975肿瘤模型)，相对于在给予PU-H71之前二十四小时向小鼠给予，在给予PU-H71之前六小时向小鼠给予示出显著增强的功效。该结果指示多聚体epichaperome复合物的稳定性在给予应激子(例如，化学治疗剂)之后的特定时间处最大化并且之后逐渐消散。对于使用的预给予，对于细胞的蛋白毒性应激在六小时与二十四小时之间的某一点处开始削弱。

使用MiaPAca2肿瘤模型也示出了epichaperome稳定性的时间依赖性(参见图11e)。在这种情况下，PU-H71在每周基础上与同时给予或在给予之后一小时、三小时或六小时的时间处给予。肿瘤消退百分比在启动三十六天之后测量。在在PU-H71之前给予的所有情况下，三十六天之后的消退百分比大于PUH71和同时给予的情况。当与PU-H71之间的时序间隔在一小时与六小时之间增加时，存在消退百分比的增加(参见图11e)。

共给予HSP90抑制剂和紫杉烷的现有研究已实现适度结果，诸如停滞或消退(参见，例如，Proia等人，Clin Cancer Res[临床癌症研究]；20(2)；413-24)。本发明代表使用披露组合的HSP90抑制剂和紫杉烷的治愈性治疗方案的第一证实。如实例8和13以及图11至14和图19至23所示，当携带H1975肺癌、MiaPaca2胰腺癌、HCC-1806三阴性乳腺癌、或MDA-MB-231三阴性乳腺癌的异种移植物的小鼠首先使用处理接着在六小时之后给予PU-H71时，获得优异的结果。重要的是，在模型中同时给予和PU-H71通常在某一时间段之后引起肿瘤的复发。例如，在HI 975肿瘤模型、HCC-1806肿瘤模型和MiaPaca2肿瘤模型中，在同时给予e和PU-H71之后大约100天观察到复发(参见图11b)。然而，在这些相同模型中，当在PU-H71之前六小时给予时，通常未观察到复发(参见图11b)。例如，在HI 975肿瘤模型中，在使用处理接着在六小时之后给予PU-H71的小鼠中未观察到肿瘤生长。在这种情况下，在药物初始给予之后第165天停止和PU-H71的处理，并且在药物初始给予之后监测小鼠直至第421天，并且未观察到肿瘤生长。该结果示出了使用披露的给药方案可以引起治愈而不是简单地实现停滞。为了证实这一点，图12示出了当在指示的处理范例下向携带异种移植的MiaPaCa2胰腺癌肿瘤的小鼠给予时进行五周的PU-H71和的处理方案的代表性小鼠的图片。给予6h之后进行PU-H71的顺序处理引起治愈，而PU-H71和的同时处理引起停滞或消退。在HI 975肺癌模型(参见图13b)和HCC-1806和MDA-MB-231肿瘤模型(参见图14a和14b)中获得相似的结果。

因此，本披露提供使用蛋白毒性应激子和是epichaperome复合物的一部分的伴侣蛋白或共伴侣蛋白的抑制剂的合理组合疗法来治疗癌症的方法。给予依赖于蛋白毒性应激子和伴侣蛋白和共伴侣蛋白抑制剂的适当时序。形成epichaperome复合物的蛋白质的特定抑制剂包括HSP90抑制剂、HSP70抑制剂、AHA-1抑制剂、CDC37抑制剂、HOP抑制剂、HSP40抑制剂和HSP110抑制剂或其组合。在一个实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白的抑制剂是HSP90抑制剂。在一个实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白的抑制剂是称为葡萄糖调控蛋白94(Grp94)的HSP90共生同系物。在另一个实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白的抑制剂是HSP70抑制剂。在另一个实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白的抑制剂是在WO 2011/022440或WO 2015/175707中披露的HSP70抑制剂，其各自的全部内容通过引用结合在此。在另一个实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白的抑制剂是HSP90抑制剂和HSP70抑制剂的组合。在另一个实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白的抑制剂是AHA-1抑制剂。在另一个实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白的抑制剂是CDC37抑制剂。在另一个实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白的抑制剂是HOP抑制剂。

在一些实施例中，所提供的方法引起治疗的癌症的部分或完全缓解。在一些实施例中，缓解的特征在于癌症的体征和症状减少或是不可检测的。在一些实施例中，所提供的方法使得癌症的所有体征和症状消失。在一些实施例中，所提供的方法的特征在于在治疗之后未观察到癌症的复发。在一些实施例中，所提供的治疗方法的特征为提供超过仅肿瘤停滞或消退的显著改善的结果。在一些实施例中，所提供的方法引起治疗的癌症的治愈。在一些实施例中，所提供的方法引起在治疗之后存在的肿瘤是不可检测的。

在一个方面中，本披露提供用于通过在使用蛋白毒性应激子进行预处理之后向癌症患者给予是epichaperome复合物的一部分的伴侣蛋白或共伴侣蛋白的抑制剂来治疗癌症的方法。蛋白毒性应激子在给予伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前的足够时间处给予，以便增加或最大化epichaperome复合物的形成，从而使得肿瘤更易受伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制疗法的影响。应当理解，不同的蛋白毒性应激子具有可以影响其给予时序的不同药代动力学和药效学特征。例如，诸如生物半衰期、代谢和组织分布等的因素将影响蛋白毒性应激子的作用的发作和持续时间并且因此影响形成稳定化的epichaperome复合物的时间。诸如给予模式(例如，静脉内相对于口服)等的其他因素也将影响稳定的epichaperome复合物的形成。同样，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂的药代动力学和药效学特征可以影响这种抑制剂的时序和给予。

在某些实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少一小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少两小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少三小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少三四小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少三五小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少六小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少七小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少八小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少九小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少十小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少十二小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少十八小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少二十四小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少三十六小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少四十八小时之后给予。在某些实施例中，蛋白毒性应激子在任一上述实施例之间的范围中的时间处给予，例如在给予伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前约一小时与三小时之间给予，在给予伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前约两小时与四小时之间给予，在给予伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前约三小时与五小时之间给予，在给予伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前约两小时与六小时之间给予，在给予HSP90抑制剂之前约三小时与六小时之间给予，在给予伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前约四小时与六小时之间给予，在给予伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前约四小时与八小时之间给予，在给予伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前约四小时与十小时之间给予，在给予伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前约五小时与七小时之间给予等等。

在特定实施例中，该蛋白毒性剂肠胃外(例如，静脉内)给予。在这类实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在肠胃外给予完成之后一定时间处给予。例如，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂可以在蛋白毒性剂的该肠胃外给予完成一小时、两小时、三小时、四小时、五小时、六小时、七小时、八小时、九小时、十小时、十一小时或12小时之后给予。在某些实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白在任一上述实施例之间的范围中的时间处给予，例如在蛋白毒性剂的肠胃外给予完成约一小时至三小时之后给予，在蛋白毒性剂的肠胃外给予完成约两小时至四小时之后给予，在蛋白毒性剂的肠胃外给予完成约三小时至五小时之后给予，在蛋白毒性剂的肠胃外给予完成约两小时至六小时之后给予，在蛋白毒性剂的肠胃外给予完成约三小时至六小时之后给予，在蛋白毒性剂的肠胃外给予完成约四小时至六小时之后给予，在蛋白毒性剂的肠胃外给予完成约四小时至八小时之后给予，在蛋白毒性剂的肠胃外给予完成约四小时至十小时之后给予，在蛋白毒性剂的肠胃外给予完成约五小时至七小时之后给予等等。

在本披露的一个实施例中，有待在给予蛋白毒性应激子之后给予的伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂是HSP90抑制剂。在一个这种实施例中，该HSP90抑制剂是8-(6-碘-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基硫烷基)-9-(3-异丙基氨基-丙基)-9H-嘌呤-6-基胺(PU-H71)或其药学上可接受的盐。

可以在给予蛋白毒性应激子之后给予的PU-H71是8-(6-碘-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基硫烷基)-9-(3-异丙基氨基-丙基)-9H-嘌呤-6-基胺(PU-H71)或其药学上可接受的盐(例如，HCl盐)。PU-H71可以在范围是从约5mg/m²至约350mg/m²的剂量下根据选自以下的给药时间表向人类患者静脉内给予：每周一次、每周两次、每周三次、每周四次或每周五次。根据本披露，蛋白毒性应激子通常在每次给予PU-H71之前预先确定的时间处给予。在特定实施例中，PU-H71在从约20mg/m²至约60mg/m²的剂量下根据选自以下的给药时间表向人类患者静脉内给予：每周一次、每周两次、每周三次、每周四次或每周五次。在其他实施例中，PU-H71在从约60mg/m²至约150mg/m²的剂量下根据选自以下的给药时间表向人类患者静脉内给予：每周一次、每周两次、每周三次、每周四次或每周五次。在其他实施例中，PU-H71在从约200mg/m²至约350mg/m²的剂量下根据选自以下的给药时间表向人类患者静脉内给予：每周一次、每周两次、每周三次、每周四次或每周五次。在其他实施例中，PU-H71在从约250mg/m²至约300mg/m²的剂量下根据选自以下的给药时间表向人类患者静脉内给予：每周一次、每周两次、每周三次、每周四次或每周五次。在其他实施例中，PU-H71在从约250mg/m²至约300mg/m²的剂量下根据每周两次的给药时间表向人类患者静脉内给予。在其他实施例中，PU-H71在从约300mg/m²至约350mg/m²的剂量下根据每周一次的给药时间表向人类患者静脉内给予。

在本披露的另一个实施例中，有待在给予蛋白毒性应激子之后给予的HSP90抑制剂Hsp90抑制剂是具有化学式I的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

每个Y独立地是CH或N；

R是氢、C₁至C₁₀烷基、烯基、或炔基基团，可选地包含一个或多个杂原子、或经由接头连接到N9上的靶向部分；

X₄是氢或卤素；

X₃是CH₂、CF₂、S、SO、SO₂、O、H、或NR²，其中R²是烷基；

X₂是卤素、烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基烷基、吡咯基、可选地取代的芳氧基、烷基氨基、二烷基氨基、氨甲酰基、酰氨基、烷基酰氨基、二烷基酰氨基、酰基氨基、烷基磺酰氨基、三卤代甲氧基、三卤化碳、硫代烷基、COO-烷基、NH₂、OH、CN、SO₂X₅、NO₂、NO、C＝SR₂、NSO₂X₅、C＝OR₂，其中X₅是F、NH₂、烷基或H，并且R₂是烷基、NH₂、NH-烷基或O-烷基；并且

X₁代表两个取代基，该取代基可以是相同的或不同的，布置在烷基基团上的4’和5’位置，其中X₁选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基烷基、吡咯基、可选地取代的芳氧基、烷基氨基、二烷基氨基、氨甲酰基、酰氨基、烷基酰氨基、二烷基酰氨基、酰基氨基、烷基磺酰氨基、三卤代甲氧基、三卤化碳、硫代烷基、SO₂-烷基、COO-烷基、NH₂OH、CN、SO₂X₅、NO₂、NO、C＝SR₂、NSO₂X₅、C＝OR₂,其中X₅是F、NH₂、烷基或H，并且R₂是烷基、NH₂、NH-烷基、或O-烷基、C₁至C₆烷基或烷氧基，或者其中X₁具有化学式-O-(CH₂)n-O-，其中n是从0至2的整数，并且氧中的一个在芳基环的5’-位置处结合并且另一个在4’-位置处结合。

在本披露的另一个实施例中，有待在给予蛋白毒性应激子之后给予的HSP90抑制剂Hsp90抑制剂是具有化学式II的化合物：

其中Y’是-CH₂-或S；X₄是氢或卤素；并且R是氨基烷基部分，在氨基氮上可选地被一个或两个含碳取代基取代，这些含碳取代基独立地选自烷基、烯基和炔基取代基组成的组，其中氨基烷基部分中的碳的总数量是从1至9。

在本披露的另一个实施例中，有待在给予蛋白毒性应激子之后给予的HSP90抑制剂是具有化学式III或IV的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

(a)Z₁、Z₂和Z₃中的每一个独立地是CH或N；

(b)Y是–CH₂、O或S；

(c)Xa、Xb、Xc和Xd独立地选自CH、CH₂、O、N、H、S、羰基、氟亚甲基、和二氟亚甲基，这样选择以便满足化合价，其中到X基团的每个键是单键或双键；

(d)X₂是卤素、烷基、烯基、炔基、芳基、环烷基、环烯基、饱和或不饱和杂环、芳基、芳氧基、烷氧基、卤代烷氧基、烯氧基、羟基烷基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、酰基氨基、氨甲酰基、酰氨基、二烷基酰氨基、烷基酰氨基、烷基亚磺酰胺基、亚磺酰胺基、三卤化碳、-硫代烷基、S0₂-烷基、-COO-烷基、OH或烷基-CN；

(e)X₄是氢或卤素；并且

(f)R是-(CH₂)_m-N-R₁₀R₁₁R₁₂或-(CH₂)_m-N-R₁₀R₁₁，其中m是2或3并且其中R₁₀-R₁₂独立地选自氢、甲基、乙基、乙烯基、乙炔基、丙基、羟基烷基、异丙基、包括氮的3元环或包括N和可选地另一个杂原子的6元环，该6元环具有取代基来满足化合价，条件是当R₁₀-R₁₂中的所有存在时，该化合物进一步含有药学上可接受的抗衡离子。

在本披露的另一个实施例中，有待在给予蛋白毒性应激子之后给予的HSP90抑制剂是格尔德霉素。在本披露的另一个实施例中，有待在给予蛋白毒性应激子之后给予的HSP90抑制剂是17-N-烯丙基氨基-17-脱甲氧基格尔德霉素(17-AAG)。

在其他实施例中，有待在给予蛋白毒性应激子之后给予的HSP90抑制剂选自17-DMAG、合成化合物CNF-2024(BIIB021)和合成化合物PU-DZ13。

在其他实施例中，有待在给予蛋白毒性应激子之后给予的HSP90抑制剂选自SNX-5422、SNX-2112和KW-2478。这些化合物的结构在图16和17中描绘。

在另一个实施例中，有待在给予蛋白毒性应激子之后给予的HSP90抑制剂是STA-9090。STA-9090具有以下化学结构：

在一个实施例中，有待在给予蛋白毒性应激子之后给予的HSP90抑制剂是在图16或17中描绘的化合物。

在一个实施例中，有待在给予蛋白毒性应激子之后给予的HSP90抑制剂是在WO2006/084030、WO 2008/005937、WO 2011/044394、WO 2012/138894、或WO 2012/138896中披露化合物，其各自的全部内容通过引用结合在此。

在本披露的一个实施例中，有待在给予蛋白毒性应激子之后给予的伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂是HSP90抑制剂。有待根据本披露的方法给予的GRP94抑制剂的具体实例在WO 2015023976A2中描述，WO 2015023976 A2的全部内容通过引用结合在此。

在一个实施例中，有待在伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前给予的蛋白毒性应激子是化学治疗剂。具体的化学治疗试剂包括但不限于微管稳定剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、蒽环素类、和烷基化剂。该化学治疗剂在能够增加细胞中形成的epichamerome的水平的剂量下提供。在一个实施例中，该化学治疗剂可以在典型地向癌症患者给予的剂量下给药。在另一个实施例中，该化学治疗剂可以在小于典型地向癌症患者给予的量的剂量下给药。

在一个这种实施例中，有待在伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前给予的该化学治疗剂是微管稳定剂。具体的微管稳定剂包括但不限于多西他赛、紫杉醇、卡巴它赛、伊沙匹隆、长春新碱、laulimalide、discodermolid和埃坡霉素。在一个实施例中，该蛋白毒性应激子是蛋白质结合的紫杉醇组合物诸如

在另一个这种实施例中，有待在伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前给予的化学治疗剂是蛋白酶体抑制剂。具体的蛋白酶体抑制剂包括但不限于硼替佐米、卡菲佐米和CEP-18770(德兰佐米)。

在另一个这种实施例中，有待在伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前给予的化学治疗剂是选自以下的化学治疗剂：培美曲塞、奥沙利铂、5-FU、多柔比星、来那度胺、apiosilib、PD 407824和MK1775。

在另一个实施例中，有待在伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前给予的蛋白毒性应激子通过放射疗法提供。该放射可以通过体外的机器递送(外部光束放射疗法)，或者该放射可以来自放置在身体中癌细胞附近的放射性物质(内部放射疗法)。

在另一个实施例中，有待在伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前给予的蛋白毒性应激子通过高热提供。高热可以通过来自体外的机器的瞄准身体表面附近的肿瘤的高能波在外部诱导。可替代地，高热可以通过放置到肿瘤中的针或探针在内部诱导。

在本披露的一个实施例中，PU-H71在给予紫杉醇或多西他赛之后给予。在一个特定实施例中，PU-H71在给予(聚氧乙烯蓖麻油(cremophor)中的紫杉醇)之后的特定时间处给予。在另一个实施例中，紫杉醇在脂质体制剂中给予，该脂质体制剂诸如LEP-ETU(尼尔法公司(NeoPharm))、-1(麦迪金公司(Medigene))或；(绿叶制药集团(Luye Pharma Group))。在一个实施例中，紫杉醇作为纳米分散体给予。基于纳米分散体的紫杉醇注射剂的一个这种实例是PICN(用于纳米分散体的紫杉醇注射剂)(太阳制药公司(Sun Pharma))。

在一个特定实施例中，PU-H71在给予紫杉醇之后的指定时间处给予。紫杉醇可以通过各种方法配制。例如，紫杉醇可以被配制为基于蛋白质的紫杉醇组合物诸如或基于聚氧乙烯蓖麻油的制剂诸如在这类实施例中，紫杉醇通常静脉内给予。紫杉醇的每次静脉内给予在可以是患者和剂量依赖性的预先确定的时间段内。例如，紫杉醇可以在范围是从1小时至96小时的时间段内输注。在特定实施例中，紫杉醇输注1、3或24小时。PU-H71然后可以在紫杉醇的静脉内剂量完成之后的指定时间处给予。例如，PU-H71可以在完成紫杉醇给予至少两小时、至少三小时、至少四小时、至少五小时、至少六小时、至少七小时、至少八小时或至少十二小时之后给予。在一些实施例中，PU-H71可以在完成紫杉醇给予至少十八小时、至少二十四小时、至少三十六小时、或至少四十八小时之后给予。在一个特定实施例中，PU-H71在给予紫杉醇不多于十二小时之后给予。在一个特定实施例中，PU-H71在给予紫杉醇不多于二十四小时之后给予。在一个特定实施例中，PU-H71在给予紫杉醇不多于四十八小时之后给予。在另一个特定实施例中，PU-H71在给予紫杉醇五小时与七小时之间之后给予。

在PU-H71在给予之后给予的实施例中，给予的剂量和时序通常可以遵循在针对的处方信息上指示的时间表，只要PU-H71在静脉内给予之后的指定时间处给予即可。例如，对于转移性乳腺癌，的建议剂量是260mg/m²，每三周静脉内30分钟。对于非小肺癌，的建议剂量是100mg/m²，在每个21天周期的第1、8和`5天静脉内经30分钟。对于胰腺的腺癌，的建议剂量是在28天周期的第1、8和15天静脉内给予125mg/m²。然而，应当理解，可以偏离在处方信息中反映的给予的剂量和时序。例如，当PU-H71在之后给予时显示的协同效应可以保证相对于在针对的处方信息中反映的剂量的的剂量减少。由此，根据本披露的方法在和PU-H71的方案上向癌症患者给予的的剂量可以是在针对的处方信息中反映的量的80％、量的70％、量的60％、量的50％、量的40％、量的30％或量的20％。在某些实施例中，可以在任一上述实施例之间的量给予，例如在针对的处方信息中反映的量的20％与100％之间给予，在针对的处方信息中反映的量的40％与100％之间给予，在针对的处方信息中反映的量的60％与100％之间给予，在针对的处方信息中反映的量的20％与80％之间给予，在针对的处方信息中反映的量的40％与80％之间给予，在针对的处方信息中反映的量的50％与70％之间给予，在针对的处方信息中反映的量的50％与60％之间给予等等。

在PU-H71在给予l之后给予的实施例中，和PU-H71可以使用各种给药时间表给予，包括但不限于每3周单个剂量、每2周单个剂量或每1周单个剂量。3周和2周给药时间表通常依赖于在3小时、24小时或96小时输注内范围是135-250mg/m²的l的剂量。1周给药时间表通常依赖于1小时输注范围是40-100mg/m²的例如，可以在40mg/m²、50mg/m²、60mg/m²、70mg/m²、80mg/m²、90mg/m²或100mg/m²的剂量下每周给予。

蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白(例如，HSP90)的翻译后修饰的调节剂和伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂可以在称为治疗周期的规则间隔下给予。治疗周期被定义为给药时间表开始重复本身的天的数量。蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)和伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂通常在治疗周期的第1天给予并且可以在治疗周期的其他天给予。例如，蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)和伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂可以在7天、10天、14天、21天、28天或30天给药时间表内给予一次、两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次或十次。如果药物被开处方成一周给予一次，则治疗周期被定义为7天时间段，其中蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)和伴侣蛋白或共伴侣蛋白(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)在该周期的第1天给予并且蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)或伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂不在治疗周期的第2-6天给予。如果药物被开处方成每三周给予一次，则治疗周期定义为21天时间段，其中蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)和伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在该周期的第1天给予并且蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)或伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂不在治疗周期的第2-21天给予。如果蛋白毒性应激子和伴侣蛋白或共伴侣蛋白被开处方成在28天给药时间表的第1、8和15天给予，则蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)或伴侣蛋白或共伴侣蛋白不在每个周期的第16天与第28天之间给予。

在一个方面中，本披露提供通过在7天与31天之间的治疗周期内给予蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)和伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂的组合来治疗癌症的方法，其中蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)和伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在所述周期内给予至少一次，并且其中每次给予所述蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)之后给予所述伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂。根据本披露，伴侣蛋白或共伴侣蛋白的给予在通过蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)诱导的epichaperome形成增加之后进行。在一些实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)至少一小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)至少两小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)至少三小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)至少三四小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)至少五小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)至少六小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)至少七小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)至少八小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)至少九小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)至少十小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)至少十二小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)至少二十四小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)至少三十六小时之后给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)至少四十八小时之后给予。在某些实施例中，蛋白毒性应激子或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)在任一上述实施例之间的范围中的时间处给予，例如在给予伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前约一小时与三小时之间给予，在给予伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前约两小时与四小时之间给予，在给予伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前约三小时与五小时之间给予，在给予伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前约两小时与六小时之间给予，在给予伴侣蛋白与共伴侣蛋白之前约三小时与六小时之间给予，在给予伴侣蛋白或共伴侣蛋白之前约四小时与六小时之间给予，在给予伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前约四小时与八小时之间给予，在给予伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前约四小时与十小时之间给予，在给予伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂之前约五小时与七小时之间给予等等。

在一些实施例中，治疗周期可以是21天周期，其中蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)和伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂仅在该周期的第1天给予。在一些实施例中，治疗周期可以是21天周期，其中蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)和伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在该周期过程中给予两次、三次、四次、五次、六次、七次或八次。在一些实施例中，治疗周期可以是14天周期，其中蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)和伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在该周期内给予一次、两次、三次、四次五次、或六次。在一些实施例中，治疗周期可以是28天周期，其中蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)和伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在该周期过程中给予两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次或十次。在一些这类实施例中，蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)和伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂可以在28天治疗周期的第1、8和15天给予。在其他实施例中，治疗周期可以是7天周期，其中蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)和伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在该周期的第1天给予。

在某些实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)仅在蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)给予的天数给予。在其他实施例中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂在蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)给予的天数给予并且在蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)不给予的天数给予。例如，在两周周期中，伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂和蛋白毒性应激子(或伴侣蛋白或共伴侣蛋白的翻译后修饰的调节剂)可以在该周期的第1天和第8天给予并且伴侣蛋白或共伴侣蛋白抑制剂可以在该周期的第4天和第11天独自给予。

蛋白毒性应激子和伴侣蛋白抑制剂或共伴侣蛋白抑制剂的给予的方法包括但不限于皮内、肌肉内、腹膜内、肠胃外、静脉内，皮下、鼻内、硬膜外、口服、舌下、脑内、阴道内、透皮、直肠、通过吸入、或局部，包括对耳部、鼻部、眼睛、或皮肤。

蛋白毒性应激子和伴侣蛋白抑制剂或共伴侣蛋白抑制剂可以各自作为药学上可接受的组合物给予。这些组合物可以可选地包含适合量的药学上可接受的赋形剂以便提供用于向经历疗法的患者适当给予的形式。这种药物赋形剂可以是稀释剂、悬浮剂、增溶剂、结合剂、崩解剂、防腐剂、着色剂、润滑剂等等。药物赋形剂可以是液体，诸如水或油，包括来自石油、动物、植物或合成来源的那些油，诸如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等等。药物赋形剂可以是盐水、阿拉伯胶、明胶、淀粉糊、滑石、角蛋白、胶态二氧化硅、脲等等。此外，可以使用辅助剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂、和着色剂。在一个实施例中，当向动物给予时，药学上可接受的赋形剂是无菌的。

盐水溶液和右旋糖水溶液以及甘油溶液也可以用作液体赋形剂，特别是对于可注射溶液而言。适合的药物赋形剂还包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、稻米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯乙二醇、水、EtOH等等。若需要，组合物还可以包含少量湿润剂或乳化剂或pH缓冲剂。可以用于配制口服剂型的药学上可接受的载体和赋形剂的特定实例在以下文献中进行描述：Handbook ofPharmaceutical Excipients,(Amer.Pharmaceutical Ass’n,Washington,DC,1986)[药物赋形剂手册,美国医药协会,华盛顿特区,1986]，该文献通过引用结合在此。

组合物可以采取以下形式：溶液、悬浮液、乳液、片剂、丸剂、球剂、胶囊、含液体胶囊、粉末、持续释放制剂、栓剂、乳液、气溶胶、喷雾剂、悬浮液、或适于使用的任何其他形式。

当化合物肠胃外注射时，该化合物可以例如呈等渗无菌溶液的形式。可替代地，当本披露的化合物被吸入时，该化合物可以被配制成干气溶胶或可以被配制成水溶液或部分水溶液。

在一个实施例中，蛋白毒性应激子和伴侣蛋白抑制剂或共伴侣蛋白抑制剂可以单个地配制以用于静脉内给予。在某些实施例中，用于静脉内给予的组合物包含无菌等渗水溶液。在需要的情况下，组合物还可以包含增溶剂。通常，将成分分开或混合在一起以单位剂型提供，例如，作为在气密封容器中的干燥冻干粉末或无水浓缩剂，气密封容器诸如是指示活性剂的量的安瓿或小药囊。当通过输注给予组合物时，该化合物可以使用例如含有无菌药物级水或盐水的输液瓶分配。当化合物通过注射给予时，可以提供无菌注射用水或盐水的安瓿，这样使得可以在给予之前将这些成分混合。

5.实例

5.1实例1：识别伴侣蛋白复合物

5.1.1材料和方法

细胞系。细胞系从在WCMC或MSKCC处的实验室获得，并且最初购自美国种质保存中心(ATCC)或DSMZ。细胞按照供应商建议的培养条件培养。细胞使用短串联重复概况分析验证并且针对支原体进行测试。

原发性乳腺癌样本。患者组织采购通过机构审查委员会批准的生物样本协议#09-121在纪念斯隆凯特琳癌症中心(纽约，纽约州)处授权。使用指示浓度的PU-H71对样本进行处理24h。处理之后，将切片固定在4％福尔马林溶液中1h，然后保存在70％乙醇中。对于组织分析，将切片嵌入石蜡中、进行切片、载玻片安装并且使用苏木精和曙红染色。组织载玻片由乳腺癌病理学家在不知情的情况下进行评价，该乳腺癌病理学家判定存在于肿瘤中的细胞凋亡以及对于正常组织的任何效应。

通过基于纳米蛋白质组毛细管的免疫测定平台的蛋白质分析。将培养细胞在含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的20mM HEPES pH 7.5、50mM KCl、5mM MgCl₂、0.01％NP40、20mMNa₂MoO₄缓冲液中裂解。在自动化系统NanoPro^TM1000 Simple Western上执行总蛋白测定，以用于基于电荷的分离。简而言之，使用含有1x预混合物G2pH 3-10分离梯度(Protein )和1x等电点标准梯的主混合物将总细胞裂解物稀释至250ng/μl的最终蛋白浓度。将以这种方式稀释的样品维持其天然电荷状态并且加载到毛细管中并且在21,000μ瓦特的恒定功率下基于其等电点分离40min。通过嵌入Simple Western系统中的UV光执行固定，接着与抗HSP90β(SMC-107A,应激马克生物科学公司(StressMarq Biosciences))或与抗HSP90α(ab2928,德硕公司(Abeam))一起孵育，并且随后与HRP缀合的抗小鼠IgG(1030-05,南方生物技术公司(SouthernBiotech))或与HRP缀合的抗兔IgG(4010-05,南方生物技术公司(SouthernBiotech))一起孵育。通过使用West Dura Extended DurationSubstrate(赛默科技公司(Thermo Scientific))的化学发光和在Simple Western系统中的数字成像和相关联的软件(Compass)定量蛋白信号。

通过如通过该系统提供的软件Compass采集和分析实验数据。在MDA-MB-468(对于Hsp90抑制剂敏感；高epichaperome水平)、Aspcl(对于Hsp90抑制剂耐受；低至没有epichaperome)和HMEC(未转化)细胞中检测不同的HSP90复合物。

已测试若干纳米蛋白质组条件。3-10+5-8两性电解质的混合物与标准条件具有相似的特征，但是引起然后所希望的较宽的峰分离。

已测试作为蛋白质提取缓冲液的由制造商建议的20mM Bicine pH7.6、0.6％CHAPS缓冲液(缓冲液1)和Tris缓冲盐水(缓冲液2)。高于pi 5(对于Hsp90的标准pi)的选择在缓冲液1和2中裂解的MDA-MB-468细胞中显著降低，从而表明这些条件不适于这些蛋白质种类的高效提取。

已测试若干Hsp90特异性抗体，包括来自德硕的ab2927，得到与H90-10相当的特征。恩佐(Enzo)SPA-830和SPA-845抗体不提供可检测的信号。

蛋白质印迹法。从在添加有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的20mM Tris pH7.4、150mMNaCl、1％P-40缓冲液中的培养细胞提取蛋白质。将10至15μg的总蛋白经受SDS-PAGE，转移到硝酸纤维素膜上，并且与指示的抗体一起孵育。HSP90β和HSP110抗体购自应激马克公司；HSP70、HSC70、HIP、HOP、和HSP40购自恩佐公司；HSP90β、HSP90α和AHA-1购自德硕公司；裂解的PARP购自普洛麦格公司(Promega)；CDC37购自细胞信号传导技术公司(Cell SignalingTechnology)；并且β-肌动蛋白购自西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)。使用TBS/0.1％tween 20洗涤印迹并且与适当的HRP缀合的二级抗体一起孵育。根据制造商的说明书使用增强化学发光检测系统(通用医疗公司(GE Healthcare))检测化学发光信号。

非变性凝胶电泳。选择具有少量的洗涤剂的裂解缓冲液(20mM Tris pH 7.4，20mMKCl，5mM MgCl2，0.01％NP40和10％甘油)用于提取天然Hsp90复合物以便在裂解程序过程中保护这些复合物。通过冻-融程序使细胞裂解。将50-100g的蛋白质加载到4％-10％非变性梯度凝胶上并且在4℃解析。将蛋白质转移到在含有0.1％SDS的转移缓冲液中的硝酸纤维素膜上持续1小时并且使用抗Hsp90抗体进行免疫印迹。已测试若干转移条件以便确定允许高分子量HSP90复合物的转移和检测的一种转移条件。将凝胶在25mM Tris、192mM甘氨酸、0.1％SDS中在室温孵育15min(条件#1)，之后在标准条件中转移；在含有0.05％SDS的转移缓冲液中执行转移(条件#2)并且在含有0.1％SDS的转移缓冲液中执行转移(条件#3)。通过使用阳性对照和AHA1敲低的样品测试信号的特异性。

已针对其识别高分子量Hsp90种类的能力测试若干Hsp90特异性抗体。这些抗体是来自应激马克公司的H90-10克隆体(SMC-107A)、来自德硕公司的ab2928、来自BD转导实验室的610418和来自德硕的ab2927。

5.1.2结果

为了克服用于解析具有相似组成和大小的复合物的蛋白质分离的限制，利用将等电聚焦与免疫印迹能力组合的基于毛细管的平台。Fan,A.C.等人，Nanofluidic proteomicassay for serial analysis of oncoprotein activation in clinical specimens NatMed 15,566-571(2009)[用于临床样本中的癌蛋白活化的系列分析的纳米流体蛋白质组测定,自然医学15,566-571(2009)]。该方法使用固定pH梯度来基于其等电点(pI)将天然多聚体蛋白复合物分离，并且然后允许使用特异性抗体探测固定复合物。此外，该方法仅使用极少量的样品来做到这一点，从而实现对于初级样本的调查。

使用该方法首先分析HSP90，HSP90是人类细胞中最丰富的伴侣蛋白基成员。在培养的未转化细胞中(图1a)和在初生正常乳腺组织中(图1b)，HSP90主要作为单一种类在预测的4.9的pI处聚焦。相反地，通过该方法分析的癌细胞系含有跨越4.5至6的pi范围的HSP90种类的复杂混合物。HSP90α和HSP90β亚型两者均是这些复合物的一部分。此外，虽然所有的癌细胞系均含有具有低于4.9的pi值的多种HSP90复合物，但是细胞系的亚群富含具有5和高于5的反常pI的HSP90复合物，在此称为“1型”细胞(图1a)。具有高(1型)和低(2型)pi的HSP90复合物的该差异也在原发性癌症样本中是明显的，如在两个乳腺肿瘤中所见(图1b)。有趣的是，如通过SDS-PAGE测量的HSP90的总水平在所有分析的样品中是基本上相同的，无论它们是1型细胞还是2型细胞(图1a，顶部)。

化学和生物化学的两种类型蛋白质修饰可以改变给定蛋白质的等电点。已知HSP90与若干共伴侣蛋白相互作用，这些共伴侣蛋白包括HSP70和HSC70(它们分别是诱导型和组成型细胞质HSP70家族成员)、HSP70-HSP90组织蛋白(HOP)(还已知为胁迫诱导型磷蛋白1[STIP1])、Hsp90ATP酶的活化剂1(AHA-1或AHSA-1)、以及细胞分裂周期37(CDC37)。这些共伴侣蛋白中的每一个具有不同的作用，其中CDC37通过HSP90促进激酶活化，AHA-1加强其ATP酶活性，并且HSP70和HOP与HSP90参与各种蛋白质的陪伴。实际上，在非变性PAGE中通过大小分离HSP90复合物时，观察到富含高pi HSP90种类的细胞也富含含有高分子量HSP90的复合物(图1c)。在相似条件下，在未转化细胞中检测到一种主要种类。推测来看，这是HSP90二聚体，这与先前的研究一致，该研究发现瞬时HSP90低聚物在正常组织中形成，该低聚物在非变性电泳条件下解离为较小的二聚体和单体。

5.2实例2：识别多聚体形式的伴侣蛋白组成员

接下来针对与呈其天然形式的靶标蛋白质相互作用的抗伴侣蛋白组抗体筛选抗伴侣蛋白组抗体的组。推论这些抗体更可能捕获稳定多聚体形式的伴侣蛋白组成员。使用这些天然同源抗体，观察到高分子量HSP90复合物的细胞含量越大，它越富含多聚体形式的其他主要的伴侣蛋白组成员，诸如HSC70、HOP、AHA-1、CDC37、HSP40和HSP110(图1d，底部)。虽然伴侣蛋白组的四元状态变化，但是每个伴侣蛋白组成员的总体水平保持相对恒定(图1d，顶部)。

5.3实施例3：HSP90和HSC70成核多伴侣蛋白组复合物

5.3.1材料和方法

siRNA敲低。将细胞在1x10⁶个/6孔板下铺板并且使用针对人类AHSA1的siRNA(凯杰公司(Qiagen))转染或者使用脂转染胺RNAiMAX试剂(Lipofectamine RNAiMAX reagent)(英骏公司(Invitrogen))转染阴性对照，孵育72h并且经受进一步分析。

蛋白质消耗。将蛋白质裂解物使用HSP70(恩佐公司)、HSC70(恩佐公司)或HOP连续免疫沉淀三次，或者相同种类使用正常抗体进行免疫沉淀作为阴性对照(圣克鲁斯公司(Santa Cruz))。采集所得的上清液并且在非变性或变性凝胶上运行。

5.3.2结果

为了定义1型肿瘤中的稳定的多聚体伴侣蛋白组复合物的组成并且调查它们的组分之间的关系，改变个体伴侣蛋白组成员，即HSP70、HSC70、HOP和AHA-1的细胞表达，或者使用对于HSP90和HSP70特异性的诱饵捕获复杂参与者(参见实例4)。当通过免疫消耗降低HSP70或HSC70的水平时，HSC70的降低具有最稳健的效应并且引起高分子量伴侣蛋白组种类的重构(图2b)。在这些复合物内，免疫印迹法确认HSP40、热休克105kDa/110kDa蛋白1(HS105或HSP110)、和HSC70相互作用蛋白(HIP)(可替代地名为ST13，致肿瘤性的抑制因子)的量的变化，所有这些蛋白质是已知的HSP70相互作用共伴侣蛋白。还观察到HSP90、HOP、以及令人意外的AHA-1和CDC37的水平的变化，这些蛋白质是与HSP90活性相关联的共伴侣蛋白(图2b)。伴侣蛋白组的实质性重构仅适度地影响总伴侣蛋白组水平。在针对HOP免疫消耗的裂解物中发现相似的结果，其中可以测量到在针对HSP40、HSP110和CDC37免疫消耗的裂解物中的变化，并且在针对AHA-1消耗的裂解物中发现相似的结果，其中注意到HSP70共伴侣蛋白部件的显著重建。这些数据一起指出1型细胞中的HSP90和HSP70伴侣蛋白部件的功能性整合(图2a、2b)。

5.4.实例4：使用基于亲和力的蛋白质组捕获Epichaperome的蛋白质

5.4.1材料和方法

化学诱饵蛋白质组。如其他地方所述生成PU-H71小珠(Moulick,K.etal.Affinity-based proteomics reveal cancer-specific networks coordinated byHsp90.Nature chemical biology 7,818-826(2011))[Moulick,K.等人，基于亲和力的蛋白质组揭示通过Hsp90协调的癌症特异性网络,自然化学生物学7,818-826(2011)]和YK小珠(Rodina et al.,ACS Chem Biol.2014Aug 15；9(8):1698-705)[Rodina等人，ACS化学生物学,2014年8月15日；9(8):1698-705]。针对PU-H71小珠下拉在20mM HEPES pH 7.5、50mMKCl、5mM MgCl₂、1％P40、和20mM Na₂MoO₄中制备蛋白质提取物，或者针对YK小珠下拉在20mMTris pH 7.4、150mM NaCl、和1％NP40中制备蛋白质提取物。将样品在4℃与PU-H71小珠一起孵育3-4h或与YK小珠一起孵育过夜，然后洗涤并且经受具有随后的免疫印迹法和蛋白质印迹分析的SDS-PAGE。使用公布的方案执行蛋白质组分析(Moulick,K.et al.Affinity-based proteomics reveal cancer-specific networks coordinated by Hsp90.Naturechemical biology 7,818-826(2011))[Moulick,K.等人，基于亲和力的蛋白质组揭示通过Hsp90协调的癌症特异性网络,自然化学生物学7,818-826(2011)]和Nayar,U.etal.Targeting the Hsp90-associated viral oncoproteome in gammaherpesvirus-associated malignancies.Blood 122,2837-2847(2013)[Nayar,U.等人，靶向γ疱疹病毒相关恶性肿瘤中的Hsp90相关病毒致癌蛋白质组,血液122,2837-2847(2013)]。对照小珠含有惰性分子。

生物信息学分析。使用专用谱计数值(exclusive spectrum count values)用于蛋白质分析，该专用谱计数值是定量蛋白质组测量的替代方案。检查CHIP和PP5并且用作样品之间的内部质量对照。使用R(版本3.1.3)执行统计学分析。使用来自Bioconductor的limma包的调节的线性模型执行差异蛋白质富集分析。在差异蛋白质富集分析中使用针对蛋白质丰度的对数值。使用对比拟合模型的经验贝叶斯统计用于计算p值，以便反映1型细胞与组合的2型细胞和未转化细胞之间的差异蛋白质丰度。使用包“gplot”和“lattice”创建热图以便显示筛选后的蛋白质。

蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络。将在热图中显示的蛋白质上传在STRING数据库中以便生成PPI网络。边缘的厚度代表官能缔合的置信度分数。该分数基于四个准则来计算：共表达、实验和生物化学验证、手绘数据库中的缔合、以及PubMed摘要中的共提及。未示出没有相邻相互作用的蛋白质。节点中的色标指示分别在1型、2型和未转化细胞中的蛋白质的平均富集(测量为专用谱计数)。使用在Cytoscape中的边缘加权的弹性电布局来生成1型肿瘤的网络布局，该布局具有边际节点的轻微调整以用于更好的可视化。2型和未转化细胞的布局保留1型的布局以用于更好的比较。从分析删除具有小于1的平均相对丰度的蛋白质。这些蛋白质参与的生物过程和在1型肿瘤中富含的蛋白质的功能性基于基因本体术语并且基于其来自UniProtKB、STRING和/或I2D数据库的指定相互作用组来分配

5.4.2结果

通过使用捕获HSP90及其相关联的相互作用组(Moulick,K.et al.Affinity-based proteomics reveal cancer-specific networks coordinated by Hsp90.Naturechemical biology 7,818-826(2011))[Moulick,K.等人，基于亲和力的蛋白质组揭示通过Hsp90协调的癌症特异性网络,自然化学生物学7,818-826(2011)]或HSC70/HSP70及其相互作用组(Rodina,A.et al.Affinity purification probes of potential use toinvestigate the endogenous Hsp70interactome in cancer.ACS Chem Biol 9,1698-1705(2014))[Rodina,A.等人，具有调查癌症中的内源性Hsp70相互作用组的潜在用途的亲和力纯化探针,ACS化学生物学9,1698-1705(2014)]的化学诱饵从1型、2型和未转化细胞分离内源性伴侣蛋白组复合物。然后针对主要伴侣蛋白组成员，尤其是诸如HSP40和HSP110等的HSP70和诸如AHA-1和CDC37等的HSP90的已知调控物探测分离物。还针对HOP进行探测，HOP是HSP70和HSP90部件的桥接共伴侣蛋白(图2a、2c)。两个主要发现出自这些实验。第一，在1型肿瘤中发现HSP90-和HSC70/HSP70成核复合物的富集。相比之下，在相同的实验条件下，在2型癌细胞和在未转化细胞中分离较少的这类复合物。第二，在1型细胞中，意料之外地发现HSP70共伴侣蛋白诸如HSP110和HSP40富集在针对HSP90的诱饵上，而HSP90共伴侣蛋白AHA-1和CDC37富集在针对HSP70的诱饵上。这些观察指示HSP90和HSP70部件的物理整合(图2a、2c)。

HSP90部件的作用的当前接受的机制是涉及早期、中期和晚期阶段伴侣蛋白复合物的暂时组装和解体的作为结果产生的机制。在早期阶段，HSP70与HSP40共伴侣蛋白中的一个一起捕获新生的或变性的蛋白质。接下来，形成中间体复合物，在该中间体复合物中，客户蛋白从HSP70复合物转移到HSP90复合物。通过核苷酸和共伴侣蛋白调控的构象变化将该中间体复合物转换为成熟复合物，其中活性客户蛋白被释放。HOP和CDC37是控制客户进入到通路中的中间阶段共伴侣蛋白，而p23和AHA-1参与导致客户蛋白成熟的周期的晚期阶段(Rehn,A.B.&Buchner,J.in The Networking of Chaperones by Co-chaperones 113-131(Springer,2015))[Rehn,A.B.&Buchner,J.,在通过共伴侣蛋白进行的伴侣蛋白的建网113-131,斯普林格,2015中]。

然而，顺序地作用来在稳态过程中折叠蛋白质的暂态HSP90和HSP70伴侣蛋白组复合物的模型未解释1型肿瘤中观察到的若干HSP90-和HSP70-中心复合物的共存在。相反，数据指示独特的重构在1型肿瘤中发生以得到在2型肿瘤和在正常肿瘤中所见的不同的伴侣蛋白组。1型伴侣蛋白组的特征在于并存地并入两个部件的共伴侣蛋白的稳定的HSP90和HSP70-中心复合物的存在；这通过这些复合物在非变性PAGE条件下的稳定性并且也通过这些复合物通过两种诱饵进行的捕获来证明。

为了理解1型肿瘤中伴侣蛋白组的特异性重构背后的生物化学机制和识别这些多聚体复合物的组分，执行无偏差蛋白质组分析。具体地，使用HSP90诱饵探测来自1型(n＝6)和2型(n＝3)癌细胞和来自未转化(n＝3)细胞的匀浆产物。为了确保捕获大部分HSP90复合物，在HSP90-诱饵饱和的条件下执行这些研究。然后将蛋白质分离物经受质谱分析并且发现各种HSP90相互作用，包括客户蛋白和调节剂。当然，选择110种蛋白质用于生物信息学分析，涵盖已知充当伴侣蛋白、共伴侣蛋白、支架、折叠酶、和异构酶蛋白质并且因此更可能参与1型肿瘤中观察到的伴侣蛋白组重构的蛋白质。

5.5.实例5：Epichaperome促进癌细胞存活

5.5.1材料和方法

试剂。如先前报告的合成该研究中使用的包括PU-H71、NVP-AUY-922、SNX-2112和YK的HSP90和HSP70抑制剂药物(Moulick,K.et al.Affinity-based proteomics revealcancer-specific networks coordinated by Hsp90.Nature chemical biology 7,818-826(2011))[Moulick,K.等人，基于亲和力的蛋白质组揭示通过Hsp90协调的癌症特异性网络,自然化学生物学7,818-826(2011)]和Taldone,T.et al.Heat shock protein70inhibitors[Taldone,T.等人，热休克蛋白70抑制剂]。2.2,5’-硫代二嘧啶、5-(苯硫基)嘧啶、2-(吡啶-3-基硫)嘧啶、和3-(苯硫基)吡啶作为对于热休克蛋白上的变构位点的可逆结合剂(Journal of medicinal chemistry 57,1208-1224(2014))[医学化学杂志57,1208-1224(2014)]。STA-9090购自美帝药库生物科学公司(MedKoo Biosciences)并且CUDC-305购自奇米泰克公司(ChemieTek)。

将指示的细胞MDAMB468(1型，高epichaperome，HSP90成瘾，对于HSP90抑制剂敏感)、ASPC1(2型，低至没有epichaperome，HSP90依赖性，对于HSP90抑制剂耐受)和HMEC(未转化)的裂解物与增加量的PU-H71-小珠(PU-H71附接到固体支持物)或与对照小珠(附接有惰性化学物的小珠)一起孵育(图3a)。将上清液应用到非变性凝胶分离，接着使用HSP90和其他epichaperome复合物组分进行免疫印迹(左，针对MDAMB468的实例)或进行纳米蛋白质组等电聚焦和免疫印迹(左，针对所有3种细胞示出)。呈现一式两份的每个实验条件。对数据作图以指示PU-H71对于如在3种细胞类型中表达的HSP90种类的相对结合亲和力。

在指示的癌细胞(示出了乳腺癌、淋巴瘤、胰腺癌)中在非变性和变性凝胶条件下HSP90的生物化学图谱。经由纳米蛋白质组进行的等电聚焦示出了1型(成瘾的，对于HSP90抑制剂敏感)和2型(依赖性的，对于HSP90抑制剂耐受)癌细胞中epichaperome复合物的丰度(图3b)。

Epichaperome丰度通过PU-FITC流式细胞术测定确定。(图3c)。使用1μΜPU-H71-FITC处理细胞。在处理后4h处，使用FACS缓冲液洗涤细胞两次。为了测量活细胞中的PU-H71-FITC结合，在室温使用在FACS缓冲液中的7-AAD对细胞染色10min，并且通过流式细胞术分析(BD生物科学公司(BD Biosciences))。使用膜联蛋白V染色确定细胞成活力。在1μMPUH71处理后48h处，使用在膜联蛋白V缓冲液中的膜联蛋白V-V450(BD生物科学公司)和7-AAD对细胞染色，并且经受流式细胞术以便测量通过膜联蛋白V/7AAD双阴性选通确定的成活力。

5.5.2结果

如图3a所示，附接到固体支持物的PU-H71能够有效减少epichaperome形成的量，如通过等电聚焦测量的。随着PU-H71的浓度增加，存在裂解物中的epichaperome的量的明显剂量依赖性减少。在图3b中，示出了对于HSP90抑制剂敏感的细胞中的epichaperome复合物的丰度显著大于对于HSP90抑制剂不敏感的细胞中的epichaperome复合物的丰度。在图3c中，示出了HSP90抑制剂PU-H71对于应激HSP90种类相对于维护正常细胞HSP90具有更高的亲和力，并且因此适当标记的PU-H71可以用于定量活细胞中的应激HSP90的丰度。

此外，发现与具有较低水平的epichaperome的细胞相比，当暴露于PU-H71时，富含epichaperome的细胞更可能死亡(图3d)。在涵盖乳腺癌、肺癌、胰腺癌和胃癌、以及白血病和淋巴瘤的超过90个癌细胞系中，在epichaperome的丰度与这些癌细胞对于HSP90抑制的易感性之间发现显著相关性(P<0.0001)。此外，通过降低AHA-1蛋白的水平来降低epichaperome的丰度使得细胞较不适于通过PU-H71杀死(图3e)。该效应不限于PU-H71处理，因为对于HSP90复合物具有各种选择性的化学上不同的针对HSP90的药剂重演PU-H71的特征。1型肿瘤也有效地被这些药剂杀死，而2型肿瘤保持不起反应(图3g)。这些观察一起将epichaperome确认为促进这些肿瘤的存活的方式。

5.6.实例6：离体研究

5.6.1材料和方法

原发性乳腺肿瘤方案。关于该研究采用的离体方案在图4中示意性地描绘。样品制备和处理在以下文献中详细说明：Ex vivo treatment response of primary tumorsand/or associated metastases for preclinical and clinical development oftherapeutics.[原发性肿瘤和/或相关联的转移瘤对于治疗剂的临床前和临床发展的离体治疗应答]Corben AD,Uddin MM,Crawford B,Farooq M,Modi S,Gerecitano J,ChiosisG,Alpaugh ML.J Vis Exp.[可视化实验期刊]2014年10月2日；(92):e52157。

白血病样品中的PU-FITC流测定(图5c)。如先前所述执行PU-FITC测定(Taldone,T.et al.Synthesis of purine-scaffold fluorescent probes for heat shockprotein 90with use in flow cytometry and fluorescence microscopy.Bioorganic&medicinal chemistry letters 21,5347-5352(2011))[Taldone,T.等人，用于在流式细胞术和荧光显微镜法中使用的热休克蛋白90的嘌呤-支架荧光探针的合成,生物有机和医学化学书信21,5347-5352(2011)]。简而言之，在37℃将细胞与1μΜPU-FITC一起孵育4h。然后使用FACS缓冲液(PBS/0.5％FBS)洗涤细胞两次并且重悬浮在含有1μg/ml DAPI的FACS缓冲液中。通过流式细胞术评估处理的成活AML细胞(DAPI-ve)中的PU-FITC的平均荧光强度(MFI)。对于原发性AML样本，还使用抗CD45-APC-H7对细胞染色，以便识别胚细胞和淋巴细胞群体(BD生物科学公司)。胚细胞和淋巴细胞群体基于SSC相对于CD45进行选通。FITC衍生物FITC9用作阴性对照。

原发性急性髓细胞白血病。在知情同意书和威尔康奈尔医学院(Weill CornellMedical College)机构审查委员会批准的情况下并且从宾夕法尼亚大学干细胞和异种移植物核心设施(University of Pennsylvania Stem Cell&Xenograft Core Facility)获得冷藏的原发性AML样品。在37℃将样品解冻并培养1h，接着如先前所述进行处理(Hassane,D.C.et al.Chemical genomic screening reveals synergism betweenparthenolide and inhibitors of the PI-3kinase and mTOR pathways.Blood 116,5983-5990(2010))[Hassane,D.C.等人，化学基因组筛选揭示小白菊内酯与PI-3激酶和mTOR通路的抑制剂之间的协同作用,血液116,5983-5990(2010)]。

Epichaperome丰度通过PU-FITC流式细胞术测定确定。

使用1μΜPU-H71-FITC处理细胞。在处理后4h处，使用FACS缓冲液(PBS-0.5％FBS)洗涤细胞两次。为了测量活细胞中的PU-H71-FITC结合，在室温使用在FACS缓冲液中的7-AAD对细胞染色10min，并且通过使用BD-LSR-II或BD-Canto细胞术分析(BD生物科学公司)。使用膜联蛋白-V染色确定细胞成活力。在1μΜPUH71处理后48h处，使用在膜联蛋白-V缓冲液中的膜联蛋白-V BD Horizon-V450(BD生物科学公司)和7-AAD对细胞染色，并且经受流式细胞术以便测量通过膜联蛋白V/7AAD双阴性选通确定的成活力。

5.6.2结果

验证离体原发性肿瘤中的epichaperome的功能显著性(图5a至5d)。当使用PU-H71离体处理原发性乳腺肿瘤(n＝4)(图5a、5b)和急性髓细胞白血病(n＝40)(图5c、5d)时，发现表达稳定的多聚体epichaperome形式的那些肿瘤最有效地被PU-H71杀死。相比之下并且与在培养细胞中的发现相似，2型肿瘤大部分保持未受影响。在乳腺样本和在AML样品中的非恶性淋巴细胞的情况下，相邻的良性组织含有很少至不含epichaperome，并且因此对于PU-H71不敏感(图5a和5b)。

5.7实例7：肿瘤对于Epichaperome的依赖性

5.7.1材料和方法

流式细胞术测定：如先前所述执行PU-FITC测定(Taldone,T.et al.Synthesis ofpurine-scaffold fluorescent probes for heat shock protein 90with use in flowcytometry and fluorescence microscopy.Bioorganic&medicinal chemistry letters21,5347-5352(2011))[Taldone,T.等人，用于在流式细胞术和荧光显微镜法中使用的热休克蛋白90的嘌呤-支架荧光探针的合成,生物有机和医学化学书信21,5347-5352(2011)]。简而言之，在37℃将细胞与1μΜPU-FITC一起孵育4h。然后使用FACS缓冲液(PBS/0.5％FBS)洗涤细胞两次并且重悬浮在含有1μg/ml DAPI的FACS缓冲液中。通过流式细胞术评估处理的成活AML细胞(DAPI-ve)中的PU-FITC的平均荧光强度(MFI)。

用于循环肿瘤细胞(CTC)的流式细胞术分析。如按照NCT01393509临床研究，在PU-H71处理前和处理后在EDTA管(10ml)中采集外周血。通过ficoll梯度分离获得血块黄层。如上文描述的执行PU-FITC结合测定。简而言之，在37℃使用1μΜPU-FITC或对照处理2百万个细胞持续6h。然后洗涤细胞(1xPBS/5％FBS)并且在冰上使用EpCAM-PE(BD生物科学公司)、CD14-APC-Cy7和CD45-APC(e生物科学公司(ebiosciences),CA)染色45min。洗涤细胞并且在4℃使用DAPI(1μg/ml)染色30分钟。使用BD LSRII流式细胞仪(BD生物科学公司)获取至少1百万个事件。

5.7.2结果

评价了富含epichaperome复合物的肿瘤的发病率。在涵盖胰腺癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、淋巴瘤、和白血病的95个癌细胞系上使用PU-FITC执行流式细胞术，并且发现大约60％-70％呈现中等至高水平的epichaperome复合物图6a。当该研究在患者肿瘤样品上重复时，在原发性液体肿瘤(n＝40)和包括淋巴瘤的实体肿瘤的情况下获得相似的结果(图6b和6c)。这建立了超过一半的肿瘤使用epichaperome，无论其亚型、来源和遗传背景如何。这还建立了肿瘤表达不同水平的epichaperome，并且因此对于epichaperome组分的抑制，即对于药剂诸如HSP90抑制剂的单一药剂给予具有不同的敏感性。

5.8实例8：诱导Epichaperome的形成

5.8.1材料和方法

使用实例1所述的程序培养细胞。经6小时添加蛋白毒性应激子(例如，紫杉醇或硼替佐米)并且然后使细胞裂解。应用匀浆产物以用于在非变性条件下在凝胶上分离。

对于洗去研究(图8d)，培养细胞并且然后使用紫杉醇(在图中称为PAC)处理1-2小时以便模拟体内条件。然后洗去紫杉醇以便确定epichaperome在体外维持多久。

5.8.2结果

使用化学治疗剂作为蛋白毒性应激子的研究的结果在图8a、8b、8e、8f和图10中描绘。这些结果在上文第4部分中讨论。关于图8d，在非变性条件下评价HSP90的生物化学图谱。使用紫杉醇预处理细胞1h，然后洗去药物以便模拟体内条件。epichaperome水平(标记为顶部>二聚体)遵循钟形，注意到在5-7h处具有峰值，然后在第24h降低至内源性水平。

研究磷酸酶或磷酸化抑制剂的效应的结果分别在图9a和9b中描绘。这些结果在上文第4部分中讨论。

5.9实例9：多西他赛PU-H71的组合(MiaCa2胰腺癌细胞)

5.9.1材料和方法

使用如指示的媒介物、PU-H71和多西他赛的顺序组合处理的MiaPaCa2胰腺癌细胞的成活力。72h处的细胞成活力使用磺酰若丹明B测定测量。

5.9.2结果

使用MiaPaCa2胰腺细胞的研究的结果在图8c中描绘。这些结果在上文第4部分中讨论。

5.10实例10：体内动物研究

5.10.1材料和方法

从哈兰实验室(Harlan Laboratories)获得4至6周大nu/nu无胸腺雌性小鼠。所有实验在由在MSKCC处的研究所动物照管与使用委员会(Institutional Animal Care andUse Committee)批准的方案下实施，并且遵循针对研究小鼠的适当和人道使用的规定指南。使用22规格针将HI 975(3X10⁶个细胞)或Mia-Paca2(5X 10⁶个细胞)皮下植入在小鼠的右胁腹中并且使其生长。所有小鼠在其进料中接受强力霉素，同时处于疗法下。在处理之前使肿瘤达到50-150mm³的体积。将小鼠随机分组成：媒介物、PU-H71或各种+PU-H71组合。在给予之前，在10mM磷酸盐缓冲液(pH-6.4)中配制PU-H71的溶液。使用预配制的(5mg/ml)。通过腹膜内(i.p.)注射对携带HI 975或MiaPaca2肿瘤的小鼠给予单独的或组合的(30mg/kg)和/或PU-H71(75mg/kg)。使用游标卡尺每周两次测量肿瘤大小并且将肿瘤体积计算为其(长度x宽度²)/2的积。还每周两次测量体重以便确保没有与处理相关联的可见的毒性。

5.10.2结果

根据每周一次时间表使用单独的指示药剂或给予共混的或按接着在6h处进行PU-H71的顺序处理携带异种移植的MiaPaCa2(胰腺癌，吉西他滨耐受)或H1975非小肺癌(突变的EGFR，厄洛替尼耐受)肿瘤的小鼠(单独的或组合的(30mg/kg)和/或PU-H71(75mg/kg)，通过腹膜内(i.p.)注射；n＝5只小鼠组)。监测肿瘤体积并针对处理时间作图。在图11中，上组示出了每个组中5只小鼠的平均值，而下组示出了监测的个体小鼠的数据。给予六小时之后使用PU-H71处理的小鼠的肿瘤体积相对于单一疗法以及和PU-H71的同时给予基本上减小。图12的图片在处理方案进行5周之后拍摄并且示出了来自每个处理臂的代表性小鼠。虽然同时给予引起肿瘤的停滞消退，但是之后进行PU-H71的顺序给予导致治愈，在小鼠中没有明显的可检测的肿瘤。图13示出了H1975肺癌模型的结果。图14示出了HCC-1806和MDA-MB-231三阴性乳腺癌模型的结果。从这些模型获得的结果与在MiaPaCa2胰腺癌模型中获得的结果一致。

5.11实例11：Incucyte动力学生长测定

5.11.1材料和方法

在组织培养物处理的皿中接种MDA-MD-231和BT20三阴性乳腺癌细胞。一旦铺满至容器表面积的大约50％，使用含有2μΜ紫杉醇、5μΜPU-H71、媒介物(DMSO)、或2μΜ紫杉醇和5μΜPU-H71的组合(一起或顺序)的培养基处理细胞。在这些条件中在容纳在标准细胞培养物培养箱中的Essen IncuCyte生长细胞。每2小时采集每种条件的九张图像，进行总计316小时。在前述处理条件下24小时之后，使用含有5μΜPU-H71或对照媒介物的培养基处理紫杉醇处理的细胞，使用含有2μΜ紫杉醇或对照媒介物的培养基处理PU-H71处理的细胞，并且使用含有对照媒介物的培养基处理使用媒介物和PU-H71与紫杉醇的组合处理的细胞。将所有第二次药物添加物添加到含有原始处理物的现有培养基。使用含有对照媒介物的培养基再稀释现有培养基两次；每次稀释在前一次24小时之后发生。培养96小时之后，将培养基从每个孔吸出并且使用没有药理剂的细胞适当的培养基替换。如上文陈述的，监测细胞总计316小时(即，完全去除药理剂之后200小时)。

5.11.2结果

虽然体外实验不能重演体内处理范例，但是该实验示出了与上文体内实例相似，顺序添加紫杉醇-HSP90抑制剂比单独的药剂或一起添加两种药剂的组合更有细胞毒性。BT20三阴性乳腺癌细胞具有中等水平的epichaperome(如上文测量的)并且对于紫杉烷是敏感的。如在图15中所见，单独的每种药剂在这些细胞中具有细胞毒性效应，如通过记录细胞铺满状态的显微镜监测的(IncuCyte系统)。在大约130h处，替换培养基，去除死亡细胞和细胞碎片(漂浮细胞、细胞碎片通过洗涤去除，通过信号的突然下降指示)。在130h与大约230h之间，仪器记录每个处理组中是否存在剩余的活细胞并且这些细胞是否具有生长的能力。如对于单独的PU-H71和紫杉醇所见的，存在些许活细胞并且这些细胞开始再生长(曲线向上移动)。对于接受顺序紫杉醇->PU的组，存在比并存地添加的紫杉醇和PU更少的活细胞。由于仪器的敏感性限度，230h之后[培养基改变之后第二次突然信号降低]采集的数据是不可靠的。

5.12实例12：多柔比星PU-H71的组合(淋巴瘤)

5.12.1材料和方法

将BJAB伯基特淋巴瘤细胞暴露于系列稀释的DOX 24h，之后添加500nM PU-H71。24h后使用标准MTS测定测量成活力。对一式六份数据点进行平均并且针对未处理(单独的DOX)或PU-H71处理(DOX之后进行PU-H71)对照进行归一化。数据呈现为平均值±SD。需注意，当500nM PU-H71在DOX之后顺序地添加时，DOX的IC50从400nM(闭合圆圈)转换为75nM(开口圆圈)(图18a)。

在6x6剂量应答矩阵上系统性地评估成对药物相互作用，使用CompuSyn进行分析，从而得到在多种药物比率下的25种个体组合。将Farage DLBCL细胞暴露于以下组合：DOX之后以24h延迟添加PU-H71(褐色圆圈，DOX→PU-H71)、PU-H71之后以24h延迟添加DOX(蓝色圆圈，PU-H71→DOX)、或同时给予(黑色圆圈，DOX+PU-H71)。在Fa-CI图中评估药物相互作用，其中加成性、协同作用和拮抗作用分别定义为CI＝1、CI<1和CI>1。组合指数(CI)值使用Compusyn软件根据实验存活数据计算并且示为受影响部分(Fa，由组合杀死的细胞的部分)的函数。Fa-CI图通过使用CompuSyn在从5％至95％的Fa值的整个范围(线)上模拟CI值来构建(图18b)。

将SUDHL4DLBCL细胞在如指示的不同时间表中暴露于PU-H71和DOX或组合。使用PE缀合的抗活性半胱天冬酶-3抗体通过流式细胞术测量半胱天冬酶-3活化(图18C)。细胞周期分析并行地执行并且在每个散点图的左上处的插图中示出。指示亚二倍体群体的频率。

5.12.2结果

使用淋巴瘤细胞的研究的结果在图18中描绘。这些结果在上文第4部分中讨论。

5.13实例13： PU-H71的组合(肺，TNBC)

这些实验进一步证实了在长期给予下顺序(->PU-H71在6h处)处理的效应和安全性并且评估处理终止之后的肿瘤复发或缺少。分析单独地、同时地或按之后在6h处进行PU-H71的顺序给予和PU-H71对于肿瘤生长(图19a至19c和图20a、20b)和小鼠重量(图19d和图20c、20d)的效应。对携带异种移植的NCI-H1975肺癌、HCC1806三阴性乳腺癌或MDA-MB-231三阴性乳腺癌肿瘤的小鼠(n＝3-5)一周一次腹膜内给予单独的或组合的PU-H71(75mg/kg)和(30mg/kg)。在研究过程中未观察到不良效应。所有动物存活至安排的终点并且看起来是健康的，维持正常体重，并且从接受的时间至研究结束表现正常。虽然同时和顺序组合疗法两者均显著抑制肿瘤生长，但是在处理过程中和/或处理终止之后使用同时+PU-H71处理的所有肿瘤复发。使用顺序(->PU-H71在6h处)处理的若干小鼠在处理终止之后若干月保持没有肿瘤(图20a、20b)。例如，五只携带HCC1806的小鼠中的3只在处理终止之后100天没有肿瘤，并且五只MDA-MB-231小鼠中的两只在处理终止之后120天没有肿瘤。

5.14实例14： /PU-H71的组合(胰腺)

这些实验进一步证实了当静脉内给予时顺序(->PU-H71在6h处)处理的效应和安全性。还设计来比较在顺序给予中一周一次或两次给药的PU-H71与的效应。使用如下文指示的和PU-H71处理携带异种移植的MiaPaca2胰腺癌肿瘤的小鼠(n＝5)。在处理过程中监测肿瘤体积和小鼠体重并且分别在图21a和图21b中在40天处理时间段的过程内作图(还参见图22b、22c)。通过ip注射一周一次(1xwk)或每周两次(2xwk，周一-周四)单独地或组合地给予PU-H71(75mpk)。如指示的静脉内或腹膜内在30mpk下1xwk单独地或组合地给药当组合时，PU-H71和同时给药或使用Ab->PU 6h顺序策略。九只小鼠在处理的第21天给予媒介物对照，八只小鼠中的五只切换至顺序(Abraxane(iv)->PU-H71在6h处)并且剩余的四只继续媒介物。

在研究过程中未观察到不良效应。所有动物存活至安排的终点并且看起来是健康的，维持正常体重，并且从接受的时间至研究结束表现正常。

当PU-H71与一周一次或两次给药时未观察到功效差异。

接受一个剂量的顺序((iv)->PU-H71在6h处)的大肿瘤(1319±583mm3)在两天内消退至817.9±515mm3(38％消退)，并且在第二剂量之后消退至452.1±236mm3(65％消退)，并且在处理继续时继续降低(图22a)。

实例15： /PU-H71的组合(TNBC)

这些实验进一步证实了当静脉内给予时顺序(->PU-H71在6h处)处理的效应和安全性。还设计来比较在顺序给予中一周一次或两次给药的PU-H71与的效应。使用如下文指示的和PU-H71处理携带异种移植的HCC1806三阴性乳腺癌肿瘤的小鼠(n＝5)。在处理过程中监测肿瘤体积和小鼠体重并且分别在图23a和图23b中在40天处理时间段的过程内作图。通过ip注射一周一次(1xwk)或每周两次(2xwk，周一-周四)单独地或组合地给予PUH71(75mpk)。如指示的静脉内在30mpk下1xwk单独地或组合地给药当组合时，PU-H71和同时给药或使用Ab->PU 6h顺序策略。对五只小鼠给予媒介物对照。

当PU-H71与一周一次或两次给药时未观察到功效差异。实施方式

本发明的某些实施例通过在下文编号的段落中列举的以下实施例展示：

1.一种通过在使用蛋白毒性应激子预处理之后向癌症患者给予HSP90的抑制剂来治疗癌症的方法，其中该蛋白毒性应激子在给予该HSP90抑制剂之前的足够时间处给予以便增加epichaperome的形成。

2.一种治疗癌症的方法，该方法包括向癌症患者给予HSP90的抑制剂，该患者在给予该HSP90抑制剂之前的足够时间已接受蛋白毒性应激子以便增加该epichaperome的形成。

3.一种治疗癌症的方法，该方法包括在给予Hsp90的抑制剂之前的足够时间向已接受该HSP90抑制剂的癌症患者给予蛋白毒性应激子以便增加该epichaperome的形成。

4.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少一小时之后给予。

5.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少两小时之后给予。

6.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少三小时之后给予。

7.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少四小时之后给予。

8.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少六小时之后给予。

9.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少七小时之后给予。

10.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少八小时之后给予。

11.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少十小时之后给予。

12.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少十二小时之后给予。

13.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂约两小时与约四小时之间之后给予。

14.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂约三小时与约五小时之间之后给予。

15.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂约五小时与约七小时之间之后给予。

16.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂约四小时与约八小时之间之后给予。

17.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂约四小时与约十二小时之间之后给予。

18.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂约六小时与约十二小时之间之后给予。

19.如上述实施例中任一项所述的方法，其中该蛋白毒性应激子是化学治疗剂。

20.如实施例19所述的方法，其中该化学治疗剂是微管稳定剂。

21.如实施例20所述的方法，其中该微管稳定剂选自多西他赛、紫杉醇、卡巴它赛、伊沙匹隆、长春新碱、laulimalide、discodermolid和埃坡霉素。

22.如实施例21所述的方法，其中该化学治疗剂是紫杉醇。

23.如实施例21所述的方法，其中该紫杉醇被配制为

24.如实施例22所述的方法，其中该紫杉醇被配制为

25.如实施例20所述的方法，其中该化学治疗剂是蛋白酶体抑制剂。

26.如实施例25所述的方法，其中该蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、卡菲佐米和CEP-18770(德兰佐米)。

27.如实施例20所述的方法，其中有待在该HSP90抑制剂之前给予的该化学治疗剂是选自以下的化学治疗剂：培美曲塞、奥沙利铂、5-FU、多柔比星、来那度胺、apiosilib、PD407824和MK1775。

28.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中该蛋白毒性应激子是放射。

29.如实施例1-18中任一项所述的方法，其中该蛋白毒性应激子是诱导高热的药剂。

30.一种用于通过在使用HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂预处理之后向癌症患者给予HSP90的抑制剂来治疗癌症的方法。

31.如实施例30所述的方法，其中该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂在给予该HSP90抑制剂之前的足够时间处给予以便增加该epichaperome复合物的形成。

32.如实施例31所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂至少一小时之后给予。

33.如实施例31所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂至少两小时之后给予。

34.如实施例31所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂至少三小时之后给予。

35.如实施例31所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂至少四小时之后给予。

36.如实施例31所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂至少六小时之后给予。

37.如实施例31所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂至少七小时之后给予。

38.如实施例31所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂至少八小时之后给予。

39.如实施例31所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂至少十小时之后给予。

40.如实施例31所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂至少十二小时之后给予。

41.如实施例31所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂约两小时与约四小时之间之后给予。

42.如实施例31所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂约三小时与约五小时之间之后给予。

43.如实施例31所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂约五小时与约七小时之间之后给予。

44.如实施例31所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂约四小时与约八小时之间之后给予。

45.如实施例31所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂约四小时与约十二小时之间之后给予。

46.如实施例31-45中任一项所述的方法，其中该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂是磷酸酶。

47.如实施例31-45中任一项所述的方法，其中该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂是激酶抑制剂。

48.如实施例47所述的方法，其中该激酶抑制剂是PD407824。

49.如实施例1-48中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂是8-(6-碘-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基硫烷基)-9-(3-异丙基氨基-丙基)-9H-嘌呤-6-基胺(PU-H71)或其药学上可接受的盐。

50.如实施例49所述的方法，其中该PU-H71的盐是HCl盐。

51.如实施例49或实施例50所述的方法，其中该PU-H71在范围是从约5mg/m²至约350mg/m²的剂量下根据选自以下的给药时间表向人类患者静脉内给予：每周一次、每周两次、每周三次、每周四次或每周五次。

52.如实施例49或实施例50所述的方法，其中该PU-H71在范围是从约200mg/m²至约300mg/m²的剂量下根据选自以下的给药时间表向人类患者静脉内给予：每周一次、每周两次、每周三次、每周四次或每周五次。

53.如实施例49或实施例50所述的方法，其中该PU-H71在250mg/m²的剂量下向人类患者静脉内给予。

54.如实施例49或实施例50所述的方法，其中给予该PU-H71每周一次、每两周一次、每三周一次、或每四周一次。

55.如实施例1-48中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂是SNX-5422、SNX-2112、AT13387、KW-2478或STA-9090。

56.如实施例1-48中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂是在图16或图17中显示的化合物。

57.如实施例1-56中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂选择性地抑制GRP94。

58.如实施例1-57中任一项所述的组合物，进一步包括给予HSP70抑制剂。

59.如实施例58所述的方法，其中该HSP70抑制剂在该蛋白毒性应激子之后给予。

60.如实施例59所述的方法，其中该HSP70抑制剂与该HSP90抑制剂同时给予或在给予该HSP90抑制剂之前给予。

61.如实施例1-60中任一项所述的方法，其中该癌症选自乳腺癌、肺癌包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌、宫颈癌、结肠癌、绒毛膜癌、膀胱癌、宫颈癌、基底细胞癌、绒毛膜癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌、食管癌、胃癌、头颈癌、急性淋巴细胞性白血病(ACL)、骨髓性白血病包括急性髓细胞白血病(AML)和慢性髓细胞慢性髓细胞白血病(CML)、多发性骨髓瘤、T细胞白血病淋巴瘤、肝癌、淋巴瘤包括何杰金氏病、淋巴细胞性淋巴瘤、成神经细胞瘤、滤泡性淋巴瘤和弥散性大B细胞淋巴瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肉瘤、皮肤癌诸如黑色素瘤、睾丸癌、甲状腺癌、肾癌、骨髓增生性病症、胃肠癌包括胃肠道基质肿瘤、食管癌、胃癌、胆囊癌、肛门癌、脑肿瘤包括神经胶质瘤、淋巴瘤包括滤泡性淋巴瘤和弥散性大B细胞淋巴瘤。

62.一种通过在7天与31天之间的周期内给予蛋白毒性应激子和HSP90抑制剂的组合来治疗癌症的方法，其中该蛋白毒性应激子和该HSP90抑制剂在所述周期内给予至少一次，并且其中每次给予所述蛋白毒性应激子之后给予所述HSP90抑制剂。

63.如实施例62所述的方法，其中该治疗周期是7天。

64.如实施例63所述的方法，其中该蛋白毒性应激子和HSP90抑制剂仅在该治疗周期的第1天给予。

65.如实施例62所述的方法，其中该治疗周期是21天。

66.如实施例65所述的方法，其中该蛋白毒性应激子和HSP90抑制剂仅在该治疗周期的第1天给予。

67.如实施例65所述的方法，其中该蛋白毒性应激子和HSP90抑制剂仅在该治疗周期的第1、8和15天给予。

68.如实施例62所述的方法，其中该治疗周期是28天。

69.如实施例68所述的方法，其中该蛋白毒性应激子和HSP90抑制剂仅在该治疗周期的第1、8和15天给予。

70.如实施例68所述的方法，其中该蛋白毒性应激子和HSP90抑制剂仅在该治疗周期的第1、8、15和21天给予。

71.如实施例62-70中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少一小时之后给予。

72.如实施例62-70所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少两小时之后给予。

73.如实施例62-70中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少三小时之后给予。

74.如实施例62-70中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少四小时之后给予。

75.如实施例62-70中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少六小时之后给予。

76.如实施例62-70中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少七小时之后给予。

77.如实施例62-70中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少八小时之后给予。

78.如实施例62-70中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少十小时之后给予。

79.如实施例62-70中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少十二小时之后给予。

80.如实施例62-70中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂约两小时与约四小时之间之后给予。

81.如实施例62-70中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂约三小时与约五小时之间之后给予。

82.如实施例62-70中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂约五小时与约七小时之间之后给予。

83.如实施例62-70中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂约四小时与约八小时之间之后给予。

84.如实施例62-70中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂约四小时与约十二小时之间之后给予。

85.如实施例62-70中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂约六小时与约十二小时之间之后给予。

86.如权利要求62-85中任一项所述的方法，其中该蛋白毒性应激子是化学治疗剂。

87.如实施例86所述的方法，其中该化学治疗剂是微管稳定剂。

88.如实施例87所述的方法，其中该微管稳定剂选自多西他赛、紫杉醇、卡巴它赛、伊沙匹隆、长春新碱、laulimalide、discodermolid和埃坡霉素。

89.如实施例88所述的方法，其中该化学治疗剂是紫杉醇。

90.如实施例89所述的方法，其中该紫杉醇被配制为

91.如实施例89所述的方法，其中该紫杉醇被配制为

92.如实施例86所述的方法，其中该化学治疗剂是蛋白酶体抑制剂。

93.如实施例92所述的方法，其中该蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、卡菲佐米和CEP-18770(德兰佐米)。

94.如实施例86所述的方法，其中有待在该HSP90抑制剂之前给予的该化学治疗剂是选自以下的化学治疗剂：培美曲塞、奥沙利铂、5-FU、多柔比星、来那度胺、apiosilib、PD407824和MK1775。

95.如权利要求62-85中任一项所述的方法，其中该蛋白毒性应激子是放射。

96.如实施例62-85中任一项所述的方法，其中该蛋白毒性应激子是诱导高热的药剂。

97.如实施例62-96中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂是8-(6-碘-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基硫烷基)-9-(3-异丙基氨基-丙基)-9H-嘌呤-6-基胺(PU-H71)或其药学上可接受的盐。

98.如实施例97所述的方法，其中该PU-H71的盐是HCl盐。

99.如实施例97或实施例98所述的方法，其中该PU-H71在范围是从约5mg/m²至约350mg/m²的剂量下根据选自以下的给药时间表向人类患者静脉内给予：每周一次、每周两次、每周三次、每周四次或每周五次。

100.如实施例97或实施例98所述的方法，其中该PU-H71在范围是从约200mg/m²至约300mg/m²的剂量下根据选自以下的给药时间表向人类患者静脉内给予：每周一次、每周两次、每周三次、每周四次或每周五次。

101.如实施例97或实施例98所述的方法，其中该PU-H71在250mg/m²的剂量下一周两次向人类患者静脉内给予。

102.如实施例97或实施例98所述的方法，其中给予该PU-H71每周一次、每两周一次、每三周一次、或每四周一次。

103.如实施例62-101中任一项所述的组合物，进一步包括给予HSP70抑制剂。

104.如实施例103所述的方法，其中该HSP70抑制剂在该蛋白毒性应激子之后给予。

105.如实施例104所述的方法，其中该HSP70抑制剂与该HSP90抑制剂同时给予或在给予该HSP90抑制剂之前给予。

106.如实施例62-105中任一项所述的方法，其中该癌症选自乳腺癌、肺癌包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌、宫颈癌、结肠癌、绒毛膜癌、膀胱癌、宫颈癌、基底细胞癌、绒毛膜癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌、食管癌、胃癌、头颈癌、急性淋巴细胞性白血病(ACL)、骨髓性白血病包括急性髓细胞白血病(AML)和慢性髓细胞慢性髓细胞白血病(CML)、多发性骨髓瘤、T细胞白血病淋巴瘤、肝癌、淋巴瘤包括何杰金氏病、淋巴细胞性淋巴瘤、成神经细胞瘤、滤泡性淋巴瘤和弥散性大B细胞淋巴瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肉瘤、皮肤癌诸如黑色素瘤、睾丸癌、甲状腺癌、肾癌、骨髓增生性病症、胃肠癌包括胃肠道基质肿瘤、食管癌、胃癌、胆囊癌、肛门癌、脑肿瘤包括神经胶质瘤、淋巴瘤包括滤泡性淋巴瘤和弥散性大B细胞淋巴瘤。

107.一种治疗癌症的方法，包括以下步骤：

检测来自癌症患者的样品中的该epichaperome的存在，向该癌症患者给予HSP90的抑制剂。

108.如实施例107所述的方法，其中该epichaperome在使用蛋白毒性应激子预处理该癌症患者之后检测。

109.如实施例107所述的方法，其中该epichaperome通过天然多聚体蛋白复合物的等电聚焦、之后使用一种或多种抗体探测固定复合物来检测。

110.如实施例109所述的方法，其中该一种或多种抗体包括HSP90抗体。

111.如实施例1-105中任一项所述的方法，其中该癌症是Rb阴性的。

112.如实施例1-105中任一项所述的方法，其中该癌症是Rb阳性的。

113.如实施例61或106所述的方法，其中该癌症是三阴性乳腺癌。

114.如实施例61或106所述的方法，其中该癌症是肺癌。

115.如实施例61或106所述的方法，其中该癌症是胰腺癌。

116.如实施例1-60或62-105中任一项所述的方法，其中该癌症不是成视网膜细胞瘤、骨肉瘤或小细胞肺癌。

117.如实施例1-60或62-105中任一项所述的方法，其中该癌症不是Rb阳性和/或表达HER2的乳腺癌。

118.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少十八小时之后给予。

119.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少二十四小时之后给予。

120.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少三十六小时之后给予。

121.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少四十八小时之后给予。

122.如实施例31所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂至少18小时之后给予。

123.如实施例31所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂至少二十四小时之后给予。

124.如实施例31所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂至少四十八小时之后给予。

125.如实施例62-70中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂之后十八小时处给予。

126.如实施例62-70中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少二十四小时之后给予。

127.如实施例62-70中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少三十六小时之后给予。

128.如实施例62-70中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少四十八小时之后给予。

129.如实施例1-128中任一项所述的方法，其中该治疗引起该癌症的部分或完全缓解。

130.如实施例129所述的方法，其中该治疗引起该癌症的完全缓解。

131.如实施例1-128中任一项所述的方法，其中该治疗使得该癌症的所有体征和症状消失。

132.如实施例1-128中任一项所述的方法，其中治疗之后未观察到该癌症的复发。

133.如实施例1-128中任一项所述的方法，其中该治疗的特征为提供超过仅肿瘤停滞或消退的显著改善的结果。

134.如实施例1-128中任一项所述的方法，其中该治疗引起该癌症的治愈。

135.如实施例1-128中任一项所述的方法，其中治疗之后不存在可检测的肿瘤。

136.如实施例1-135中任一项所述的方法，其中该HSP90的抑制剂直接并优先结合到致癌形式的HSP90。

Claims

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予诱导对于肿瘤细胞的蛋白毒性应激的药剂至少一小时之后给予。

5.如上述权利要求中任一项所述的方法，其中该蛋白毒性应激子是化学治疗剂。

6.如权利要求5所述的方法，其中该化学治疗剂是微管稳定剂。

7.如权利要求5所述的方法，其中该化学治疗剂是蛋白酶体抑制剂。

8.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中该蛋白毒性应激子是放射。

9.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中该蛋白毒性应激子是诱导高热的药剂。

10.一种用于通过在使用HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂预处理之后向癌症患者给予HSP90的抑制剂来治疗癌症的方法。

11.如权利要求10所述的方法，其中该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂在给予该HSP90抑制剂之前的足够时间处给予以便增加该epichaperome复合物的形成。

12.如权利要求10所述的方法，其中该HSP90抑制剂在给予该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂至少一小时之后给予。

13.如权利要求11或12中任一项所述的方法，其中该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂是磷酸酶。

14.如权利要求11或12中任一项所述的方法，其中该HSP90的翻译后修饰(PTM)状态的调节剂是激酶抑制剂。

15.如权利要求14所述的方法，其中该激酶抑制剂是PD407824。

16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂是8-(6-碘-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基硫烷基)-9-(3-异丙基氨基-丙基)-9H-嘌呤-6-基胺(PU-H71)或其药学上可接受的盐。

17.如权利要求16所述的方法，其中该PU-H71的盐是HCl盐。

18.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂是SNX-5422、SNX-2112、AT13387、KW-2478或STA-9090。

19.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂是在图16或图17中显示的化合物。

20.如权利要求1-19中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂选择性地抑制GRP94。

21.如权利要求1-20中任一项所述的方法，该方法进一步包括给予HSP70抑制剂。

22.如权利要求21所述的方法，其中该HSP70抑制剂在该蛋白毒性应激子之后给予。

23.如权利要求22所述的方法，其中该HSP70抑制剂与该HSP90抑制剂同时给予或在给予该HSP90抑制剂之前给予。

24.如权利要求1-23中任一项所述的方法，其中该癌症选自乳腺癌、肺癌包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌、宫颈癌、结肠癌、绒毛膜癌、膀胱癌、宫颈癌、基底细胞癌、绒毛膜癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌、食管癌、胃癌、头颈癌、急性淋巴细胞性白血病(ACL)、骨髓性白血病包括急性髓细胞白血病(AML)和慢性髓细胞慢性髓细胞白血病(CML)、多发性骨髓瘤、T细胞白血病淋巴瘤、肝癌、淋巴瘤包括何杰金氏病、淋巴细胞性淋巴瘤、成神经细胞瘤、滤泡性淋巴瘤和弥散性大B细胞淋巴瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肉瘤、皮肤癌诸如黑色素瘤、睾丸癌、甲状腺癌、肾癌、骨髓增生性病症、胃肠癌包括胃肠道基质肿瘤、食管癌、胃癌、胆囊癌、肛门癌、脑肿瘤包括神经胶质瘤、淋巴瘤包括滤泡性淋巴瘤和弥散性大B细胞淋巴瘤。

25.一种通过在7天与31天之间的周期内给予蛋白毒性应激子和HSP90抑制剂的组合来治疗癌症的方法，其中该蛋白毒性应激子和该HSP90抑制剂在所述周期内给予至少一次，并且其中每次给予所述蛋白毒性应激子之后给予所述HSP90抑制剂。

26.如权利要求25所述的方法，其中该治疗周期是7天。

27.如权利要求26所述的方法，其中该蛋白毒性应激子和HSP90抑制剂仅在该治疗周期的第1天给予。

28.如权利要求25所述的方法，其中该治疗周期是21天。

29.如权利要求28所述的方法，其中该蛋白毒性应激子和HSP90抑制剂仅在该治疗周期的第1天给予。

30.如权利要求25-29中任一项所述的方法，其中该蛋白毒性应激子是化学治疗剂。

31.如权利要求30所述的方法，其中该化学治疗剂是微管稳定剂。

32.如权利要求30所述的方法，其中该化学治疗剂是蛋白酶体抑制剂。

33.如权利要求32所述的方法，其中该蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、卡菲佐米和CEP-18770(德兰佐米(delanzomib))。

34.如权利要求30所述的方法，其中有待在该HSP90抑制剂之前给予的该化学治疗剂是选自以下的化学治疗剂：培美曲塞、奥沙利铂、5-FU、多柔比星、来那度胺、apiosilib、PD407824和MK1775。

35.如权利要求25-29中任一项所述的方法，其中该蛋白毒性应激子是放射。

36.如权利要求25-29中任一项所述的方法，其中该蛋白毒性应激子是诱导高热的药剂。

37.如权利要求25-36中任一项所述的方法，其中该HSP90抑制剂是8-(6-碘-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基硫烷基)-9-(3-异丙基氨基-丙基)-9H-嘌呤-6-基胺(PU-H71)或其药学上可接受的盐。

38.如权利要求37所述的方法，其中该PU-H71的盐是HCl盐。

39.如权利要求25-38中任一项所述的方法，该方法进一步包括给予HSP70抑制剂。

40.如权利要求39所述的方法，其中该HSP70抑制剂在该蛋白毒性应激子之后给予。

41.如权利要求40所述的方法，其中该HSP70抑制剂与该HSP90抑制剂同时给予或在给予该HSP90抑制剂之前给予。

42.如权利要求26-41中任一项所述的方法，其中该癌症选自乳腺癌、肺癌包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌、宫颈癌、结肠癌、绒毛膜癌、膀胱癌、宫颈癌、基底细胞癌、绒毛膜癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌、食管癌、胃癌、头颈癌、急性淋巴细胞性白血病(ACL)、骨髓性白血病包括急性髓细胞白血病(AML)和慢性髓细胞慢性髓细胞白血病(CML)、多发性骨髓瘤、T细胞白血病淋巴瘤、肝癌、淋巴瘤包括何杰金氏病、淋巴细胞性淋巴瘤、成神经细胞瘤、滤泡性淋巴瘤和弥散性大B细胞淋巴瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肉瘤、皮肤癌诸如黑色素瘤、睾丸癌、甲状腺癌、肾癌、骨髓增生性病症、胃肠癌包括胃肠道基质肿瘤、食管癌、胃癌、胆囊癌、肛门癌、脑肿瘤包括神经胶质瘤、淋巴瘤包括滤泡性淋巴瘤和弥散性大B细胞淋巴瘤。

43.一种治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：

检测来自癌症患者的样品中的该epichaperome的存在，

向该癌症患者给予HSP90的抑制剂。

44.如权利要求43所述的方法，其中该epichaperome在使用蛋白毒性应激子预处理该癌症患者之后检测。

45.如权利要求43所述的方法，其中该epichaperome通过天然多聚体蛋白复合物的等电聚焦、之后使用一种或多种抗体探测固定复合物来检测。

46.如权利要求45所述的方法，其中该一种或多种抗体包括HSP90抗体。

47.如权利要求43所述的方法，其中该HSP90的抑制剂在使用蛋白毒性应激子预处理之后给予，其中该蛋白毒性应激子在给予该HSP90抑制剂之前的足够时间处给予以便增加该epichaperome的形成。

48.如权利要求43所述的方法，其中该患者在给予该HSP90抑制剂之前的足够时间已接受蛋白毒性应激子以便增加该epichaperome的形成。