CN108464949B - 一种抗氧化美白组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种抗氧化美白组合物及其应用。所述抗氧化美白组合物包括以下原料制备而成：橘皮素和没食子酸。优选的，所述抗氧化美白组合物包括以下原料制备而成：2.44μM的橘皮素和0.000195mg/ml、0.000391mg/ml、0.000781mg/ml、0.001563mg/ml或0.003125mg/ml的没食子酸。本发明的抗氧化美白组合物原料少，通过实验证实，针对DPPH自由基和黑色素产生相关蛋白有增强的抑制效果，可用于化妆品或护肤品中，市场推广价值高。

Description

一种抗氧化美白组合物及其应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体是一种抗氧化美白组合物及其应用。
背景技术
没食子酸(Gallic acid，GA)广泛存在于葡萄，茶叶、五倍花、刺云实豆荚等植物中。 GA具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤的作用。此外，也有报道指出GA具有一定的抗氧化和美白作用。
橘皮素(Tangeretin)是一种天然多甲基黄酮类化合物，其橘皮素通常和柚皮苷、橙皮苷、等黄酮类化合物共存于芸香科(Rutaceae)或大戟科(Euphorbiaceae)植物中。橘皮素被广泛应用于有机化学及生命科学等领域中，其中橘皮素的抗氧化作用也有相应的报道。
肤色是由皮肤生理上的表面状态、血流、水分、色素等多种成分经过错综复杂的结合而决定的，在影响肤色的一系列因素中，最主要的就是黑素(melanin)。黑素合成过多，可引起雀斑、黄褐斑、老年斑、黑色素瘤等色素增加性皮肤病。现代研究表明，黑素是吲哚和醌与蛋白质结合的高分子聚合物，其合成是表皮基底层中黑素细胞的一种应激反应，反应过强，可引起雀斑、黄褐斑、老年斑等色素增加性皮肤病。研究表明，酪氨酸酶 (tyrosinase)是皮肤黑素生物合成过程的主要限速酶，它能将机体内制造黑素的主要原料酪氨酸(tyrosine)羟化，产生L一多巴(L-dopa)，然后再将多巴氧化成多巴醌 (dopaquinone)，多巴醌再经过一系列的代谢过程，重新排列并聚合，最后与蛋白质结合生成一系列引起褐化的黑素蛋白。在这一过程中自由基产生的氧化压力也会通过激活一系列细胞通路，包括络氨酸酶(Tyr)，人酪氨酸酶相关蛋白(TRP1和TRP2)，小眼畸形相关转录因子(MITF)等促进黑素细胞产生黑色素。因此，抗氧化和对相关蛋白的表达抑制能提供有效的美白功效。
抗氧化的作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。目前对自由基清除剂的研究方法主要有2类，一类是体外模型，另一类是体内模型，其中DPPH法是体外模型中最常用的方法。DPPH又称1，1-二苯基-2- 三硝基苯肼，是一种很稳定的氮中心的自由基，他的稳定性主要来自共振稳定作用的3个苯环的空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。它的无水乙醇溶液呈紫色，在517nm波长处有最大吸收，吸光度与浓度呈线性关系。向其中加入自由基清除剂时，可以结合或替代DPPH·，使自由基数量减少，吸光度变小，溶液颜色变浅，借此可评价清除自由基的能力。即通过在517nm波长处检测样品清除DPPH·的效果，来计算抗氧化能力。
本专利旨在提供一种抗氧化美白组合物及其应用，通过没食子酸和橘皮素的配伍，对抗氧化清除自由基和抑制黑色素产生相关基因有增强的效果。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抗氧化美白组合物及其应用，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种抗氧化美白组合物，所述抗氧化美白组合物包括以下原料制备而成：橘皮素和没食子酸。
作为本发明进一步的方案：所述抗氧化美白组合物包括以下原料制备而成：2.44μM 的橘皮素和0.000195mg/ml、0.000391mg/ml、0.000781mg/ml、0.001563mg/ml或0.003125mg/ml的没食子酸。
作为本发明进一步的方案：所述抗氧化美白组合物包括以下原料制备而成：2.44μM 的橘皮素和0.003125mg/ml的没食子酸。
一种抗氧化美白组合物在制备化妆品或护肤品中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明的抗氧化美白组合物原料少，通过实验证实，针对DPPH自由基和黑色素产生相关蛋白有增强的抑制效果，可用于化妆品或护肤品中，市场推广价值高。
附图说明
图1为DPPH自由基抑制实验结果。
图2为24h蛋白印记实验。
图3为24h TRP-1蛋白印记实验半定量统计值。
图4为24h Tyr蛋白印记实验半定量统计值。
图5为48h蛋白印记实验。
图6为48h TRP-1蛋白印记实验半定量统计值。
图7为48h Tyr蛋白印记实验半定量统计值。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
实施例1
一种抗氧化美白组合物，包括2.44μM的橘皮素和0.000195mg/ml的没食子酸。
实施例2
一种抗氧化美白组合物，包括2.44μM的橘皮素和0.000391mg/ml的没食子酸。
实施例3
一种抗氧化美白组合物，包括2.44μM的橘皮素和0.000781mg/ml的没食子酸。
实施例4
一种抗氧化美白组合物，包括2.44μM的橘皮素和0.001563mg/ml的没食子酸。
实施例5
一种抗氧化美白组合物，包括2.44μM的橘皮素和0.003125mg/ml的没食子酸。
实验例
一、DPPH自由基抑制实验
在人类和小鼠中，MITF基因对黑色素细胞发育、分化、迁移、存活起重要作用，它参与诱导调节神经嵴细胞分化形成黑色素细胞。黑色素的生物合成主要由酪氨酸酶(TYR) 及其相关蛋白5，6-二羟基吲哚羧酸氧化酶(由TYRP1编码)和多巴色素互变酶(由TYRP2 编码)来完成。它们是黑色素合成过程中的限速酶，决定了黑色素合成的种类和数量。本实验利用western blotting检测各项蛋白的表达水平。
试剂与仪器：DPPH、VitC均采购于索莱宝生物科技；B16F10细胞采购自ATCC，普通96孔酶标板分别来自Corning、Greiner；多光谱酶标仪采购自Molecular Devices；免疫蛋白印记实验相关耗材均采购自Biorad，Tyr、TRP1，GAPDH抗体采购自武汉谷歌生物科技；免疫蛋白印记半定量扫描使用软件为Image J。
实验步骤：
1.1DPPH测试液的配制：取DPPH 1mg溶于约20mL溶剂(乙醇、95乙醇或甲醇)中，超声5min，充分振摇，务使上下各部分均匀。取1mL该DPPH溶液，在517nm处测A值，使A＝1.2-1.3之间最佳。该DPPH溶液最好避光保存，3.5小时内用完。
1.2样品液的配制：样品用合适的溶剂溶解，配制2.44μM的橘皮素，0.000195mg/ml、 0.000391mg/ml、0.000781mg/ml、0.001563mg/ml和0.003125mg/ml的没食子酸；2.44 μM的橘皮素+0.000195mg/ml的没食子酸、2.44μM的橘皮素+0.000391mg/ml的没食子酸、2.44μM的橘皮素+0.000781mg/ml的没食子酸、2.44μM的橘皮素+0.001563mg/ml 的没食子酸、2.44μM的橘皮素+0.003125mg/ml的没食子酸。
1.3测试：将各100ul不同浓度的样品液分别与0.25mMDPPH室外避光共同孵育30min，在517nm测量吸光度即可。
实验结果显示，单独的橘皮素(用A表示，单位μM)2.44μM或单独各浓度(0.000195mg/ml、0.000391mg/ml、0.000781mg/ml、0.001563mg/ml、0.003125mg/ml)的没食子酸(用B表示，单位mg/ml)对清除DPPH自由基没有效果，其主要原因是本实验预先测试了单独活性物的抗氧化活性，并选取了较低浓度进行测试，结果符合预期。将橘皮素和没食子酸配伍以后，发现不同浓度(A2.44μM+B0.000195mg/ml、A2.44μM+B0.000391 mg/ml、A2.44μM+B0.000781mg/ml、A2.44μM+B0.001563mg/ml、A2.44μM+B0.003125 mg/ml)没食子酸与固定浓度橘皮素复配有明显增强的清除自由基效果，其增强效果为7％左右。
二、免疫蛋白印记实验
实验结果见图2-7；其中A代表2.44μM的橘皮素；B1-4分别代表0.000391mg/ml、0.000781mg/ml、0.001563mg/ml、0.003125mg/ml的没食子酸。
免疫蛋白印记实验显示，不同浓度化合物处理24H之后，发现单独的橘皮素(A，2.44 μM)或单独各浓度(0.000391mg/ml、0.000781mg/ml、0.001563mg/ml、0.003125mg/ml)的没食子酸(B)对酪氨酸酶蛋白、酪氨酸相关蛋白的生成只有微弱抑制作用，将橘皮素和没食子酸配伍以后，发现随没食子酸浓度的提高其配伍对于酪氨酸蛋白的抑制远远优于其单独的作用；处理48H之后体现出与24H相同的效果，且其抑制作用优于24H，这可能与B16F10细胞合成相应蛋白得时间有关。
本实验配制成不同浓度的没食子酸和橘皮素复配溶液，特别针对DPPH自由基的清除作用和黑素产生相关蛋白通路做检测，显示复配的溶液有增强的抗氧化和美白效果。
上面对本专利的较佳实施方式作了详细说明，但是本专利并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本专利宗旨的前提下作出各种变化。

Claims (3)

1.一种抗氧化美白组合物，其特征在于，所述抗氧化美白组合物包括以下原料制备而成：2.44μM的橘皮素和0.000195mg/ml、0.000391mg/ml、0.000781mg/ml、0.001563mg/ml或0.003125mg/ml的没食子酸。
2.根据权利要求1所述的抗氧化美白组合物，其特征在于，所述抗氧化美白组合物包括以下原料制备而成：2.44μM的橘皮素和0.003125mg/ml的没食子酸。
3.一种根据权利要求1和2任一所述的抗氧化美白组合物在制备化妆品中的应用。
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