CN108463117A - 用葡萄蛋白治疗疾病的方法 - Google Patents

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Abstract

一种供人食用的食物组合物，其包含多种葡萄成分，其中该多种葡萄成分包含来自葡萄的磨碎的果肉、种子、茎和皮，并且其中该多种葡萄成分还包含一种或多种KH葡萄蛋白。一种治疗患者的某种疾病的方法，包括用该食物组合物对有此需要的患者进行给药，其中该食物组合物具有高于0％的KH葡萄蛋白的浓度。

Description

用葡萄蛋白治疗疾病的方法
技术领域
本主题涉及从葡萄束生产葡萄酒的方法，还涉及从葡萄植物获得适于人食用的葡萄酒的方法，其中将完整的葡萄束磨碎并用于酿造葡萄酒。本主题提供了一种从葡萄束中获得葡萄酒的过程，其中皮、种子、果肉和茎都被磨碎以制成葡萄酒。
本主题涉及一种基于来自果渣的果汁和粉末生产饮料的方法，并且进一步涉及一种从果渣厂获得适合人食用的新鲜果汁和粉末的方法，其中将果渣整体磨碎并用于制作果汁和粉末。本主题提供了从果渣获得果汁和粉末的方法，其中将果渣中的葡萄的皮、种子、果肉和茎都磨碎并离心以制成果汁和粉末。
本主题涉及一种基于来自葡萄束的果汁和粉末生产饮料的方法，并且还涉及一种从葡萄植物获得适合人食用的新鲜果汁和粉末的方法，其中将葡萄束整体磨碎并用于制作果汁和粉末。本主题提供了一种从葡萄束获得果汁和粉末的方法，其中将皮、种子、果肉和茎都磨碎并离心以制成果汁和粉末。
本主题涉及通过用多种葡萄成分对有需要的患者给药来治疗患者的各种疾病的方法。这些方法涉及用各种葡萄成分，例如KH葡萄蛋白给药，以在患者体内实现期望的效果。
背景技术
葡萄比人类多5000个基因。葡萄是受欢迎的食物原料，并具有对人类健康有益的成分。葡萄酒是受欢迎的饮品，其成分对人类健康有益。
目前有很多葡萄酒生产商，但这些公司在生产过程中造成了很多浪费。事实上，葡萄酒加工的废物部分，例如与葡萄皮、茎或种子有关的废物也是有用的。本主题描述了从整个葡萄束获得葡萄酒的过程。
同样，在葡萄酒和果汁的生产和加工过程中，果渣通常被浪费掉。事实上，诸如皮、茎或种子的果渣部分也是有用的。本主题描述了从整个果渣获得果汁和粉末的过程。
此外，还有许多葡萄汁和提取工厂，但这些公司在生产过程中造成了很多浪费。事实上，葡萄的被浪费部分，如皮、茎或种子也是有用的。本主题描述了一种从整个葡萄束获得果汁和粉末而仅有少量废物的过程以及使用这些产品的各种方法。
发明内容
在一个实施方案中，本主题涉及包含多种葡萄成分的供人食用的食物组合物，其中该多种葡萄成分包含来自葡萄的磨碎的果肉、种子、茎和皮，并且其中该多种葡萄成分还包含含有一种或多种KH葡萄蛋白的葡萄酒。
就此而言，本主题还涉及治疗患者的某些疾病的方法，其包括将用于人食用的食物组合物对有此需要的患者进行给药，该组合物包含多种葡萄成分，其中该多种葡萄成分包含来自葡萄的磨碎的肉、种子、茎和皮，其中该多种葡萄成分还包含含有一种或多种KH葡萄蛋白的葡萄酒，使得该组合物具有高于0％的KH葡萄蛋白的浓度。在这方面的一个实施方案中，在对患者给药后，来自KH葡萄蛋白的KH葡萄酒健康细胞向受损的或有病的细胞发送信号，由此触发蛋白质的合成，以转化受损的或有病的细胞以变得健康，其中KH葡萄酒健康细胞向其他未受损的细胞发送信号以合成蛋白质，以保护其他未受损的细胞免受损伤、感染以及免于发生DNA和其他细胞改变，并且其中KH葡萄酒健康细胞向患者身体发送信号以产生健康的新细胞，从而防止新细胞受到细胞内和细胞外损伤信号的影响。
在另一个实施方案中，本主题涉及一种用于人食用的食物组合物，其包含多种果渣成分，其中该多种果渣成分包含来自葡萄果渣的磨碎的果肉、种子、茎和皮，并且其中该多种果渣成分还包含一种或多种KH果渣蛋白。
就此而言，本主题还涉及治疗患者的某些疾病的方法，其包括将用于人食用的食物组合物对有此需要的患者进行给药，该组合物包含多种果渣成分，其中该多种果渣成分包含来自葡萄果渣的磨碎的肉、种子、茎和皮，其中该多种果渣成分还包含一种或多种KH果渣蛋白，使得该组合物具有高于0％的KH果渣蛋白的浓度。在这方面的一个实施方案中，在对患者给药后，来自KH果渣蛋白的KH果渣健康细胞向受损的或有病的细胞发送信号，由此触发蛋白质的合成，以转化受损的或有病的细胞以变得健康，其中KH果渣健康细胞向其他未受损的细胞发送信号以合成蛋白质，以保护其他未受损的细胞免受损伤、感染以及免于发生DNA和其他细胞改变，并且其中KH果渣健康细胞向患者身体发送信号以产生健康的新细胞，从而防止新细胞受到细胞内和细胞外损伤信号的影响。
在另一个实施方案中，本主题涉及包含多种葡萄成分的供人食用的食物组合物，其中该多种葡萄成分包含来自葡萄的磨碎的果肉、种子、茎和皮，并且其中该多种葡萄成分还包含一种或多种KH葡萄蛋白。
就此而言，本主题还涉及治疗患者的某些疾病的方法，其包括将用于人食用的食物组合物对有此需要的患者进行给药，该组合物包含多种葡萄成分，其中该多种葡萄成分包含来自葡萄的磨碎的果肉、种子、茎和皮，其中该多种葡萄成分还包含一种或多种KH葡萄蛋白，使得该组合物具有高于0％的KH葡萄蛋白的浓度。在这方面的一个实施方案中，在对患者给药后，来自KH葡萄蛋白的KH葡萄健康细胞向受损的或有病的细胞发送信号，由此触发蛋白质的合成，以转化受损的或有病的细胞以变得健康，其中KH葡萄健康细胞向其他未受损的细胞发送信号以合成蛋白质，以保护其他未受损害的细胞免受损伤、感染以及免于发生DNA和其他细胞改变，并且其中KH葡萄健康细胞向患者身体发送信号以产生健康的新细胞，从而防止新细胞受到细胞内和细胞外损伤信号的影响。
附图说明
图1是流程图。
图2是葡萄酒测试项目的图表。
图3显示样品KH101的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量。
图4显示样品KH102的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量。
图5显示样品KH103的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量。
图6显示样品KH104的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量。
图7显示样品KH105的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量。
图8显示样品KH106的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量。
图9显示样品KH107的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量。
图10显示样品KH108的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量。
图11显示样品KH109白葡萄酒的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量。
图12显示样品KH110红葡萄酒的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量。
图13显示样品KH111未成熟大豆毛豆的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量。
图14显示样品KH132红辣椒的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量。
图15显示KH绿和KH蓝的HDL和LDL。
图16显示KH绿和KH蓝的胆固醇。
图17显示KH绿和KH蓝的甘油三酯。
图18显示KIEU HOANGTM蓝标上的细胞计数为13,175,000/mL。
图19显示KIEU HOANGTM绿标上的细胞计数为257,500,000/mL。
图20显示KIEU HOANGTM红标上的细胞计数为898,560,000/mL。
图21显示KIEU HOANGTM Tennobudo上的细胞计数为5,000,000,000个/mL。
图22显示KIEU HOANGTM红标在肺癌和乳腺癌中的抑制作用。
图23显示KIEU HOANGTM绿标在肺癌和乳腺癌中的抑制作用。
图24显示KIEU HOANGTM蓝标在肺和乳腺癌中的抑制作用。
图25显示KIEU HOANGTM Tennobudo标在肺癌中的抑制作用。
图26显示KIEU HOANGTM Tennobudo标在乳腺癌中的抑制作用。
图27显示KIEU HOANGTM绿标中的葡萄糖摄取，其由于本文所述的机制而有助于产生胰岛素以用于糖尿病患者的葡萄糖摄取。
图28显示小鼠中的白血病癌症信号，第1组(载体)。
图29显示小鼠中的白血病癌症信号，第2组(阳性对照)。
图30显示小鼠中的白血病癌症信号，第7组(预防性)。
图31显示小鼠中的白血病癌症信号，第8组(治疗性)。
图32显示了发明人的商业伙伴在饮用KIEU HOANGTM红标和Tennobudo葡萄酒后测试其血糖水平。
图33显示了发明人的脚中的人体移动细胞。视频中用于证明细胞正在移动的静态图片从视频的00:54秒提取。
图34显示了发明人的脚中的人体移动细胞。视频中用于证明细胞正在移动的静态图片从视频的00:59秒提取。
图35显示了发明人的脚中的人体移动细胞。视频中用于证明细胞正在移动的静态图片从视频的01:06秒提取。
图36显示了KIEU HOANGTM葡萄酒中植物的移动细胞。视频中用于证明细胞正在移动的静态图片从视频的00:46秒提取。
图37显示了KIEU HOANGTM葡萄酒中植物的移动细胞。视频中用于证明细胞正在移动的静态图片从视频的00:48秒提取。
图38显示了KIEU HOANGTM葡萄酒中植物的移动细胞。视频中用于证明细胞正在移动的静态图片从视频的00:50秒提取。
图39显示了来自发明人(A)、来自KH103(B)和来自猪TB(C)的细胞。
图40显示了葡萄加工流程图。
图41显示KHJ SDS-Page的图像，特别是KHJ-1、KHJ-2、KHJ-3、KHJ-4和KHJ-5在不同稀释度下的分子量带，其类似于人血浆的免疫球蛋白和高密度脂蛋白(APOA-1)。
图42显示了KUNAMINTM的细胞计数的图像。
图43显示了描述KUNAMINTM如何帮助产生胰岛素以用于糖尿病患者的葡萄糖摄取的图。
图44显示了描述KUNAMINTM中的元素KH602在2014年7月14日如何帮助产生胰岛素以用于糖尿病患者的葡萄糖摄取的图。
图45显示了描述2014年8月28日的KH602的葡萄糖摄取与胰岛素相比的图。
图46显示了描述载体、阳性对照和其他14个测试项目(包括KHJ609、KHJ610和KHJ(KUNAMINTM的代号))的中值相对生物发光的图。所有测试项目减慢了白血病癌细胞的生长，并且均低于载体中值相对生物发光。
图47显示了KHJ治疗性组的生物发光图像。
图48显示了KHJ预防性组的生物发光图像。
图49显示了描述用KHJ和KH103处理的小鼠的外周血中MDSC细胞百分比降低的图。
图50显示了描述用KHJ和KH103处理的小鼠的脾脏中CD4+和CD8+ T淋巴细胞百分比增加的图。
图51显示了描述用KHJ和KH103处理的小鼠的脾脏中MDSC细胞百分比降低的图。
图52显示了描述用KHJ和KH103处理的小鼠的淋巴结中淋巴细胞百分比增加的图。
图53显示了描述用KHJ和KH103处理的小鼠的淋巴结中CD4+和CD8+ T淋巴细胞百分比增加的图。
图54A-B显示了描述预防和治疗组的体重(BW)变化百分比的图。体重变化是基于给药第一天的动物体重计算的。数据点表示体重的组平均百分比变化。误差线表示平均值的标准误差(SEM)。
图55A-B显示了描述对于带有MDA-MB-436确认肿瘤的雌性BALB/c裸鼠用KHJ、KH103或KHGD给药后的肿瘤体积迹线的图。数据点表示组平均值，误差线表示平均值的标准误差(SEM)。
图56A-E显示针对胰岛素、KHG、KHB、KHJ和KH103的3T3-L1脂肪细胞中的葡萄糖摄取的剂量响应曲线拟合。
图57A-E显示针对胰岛素、KH111、KH601、KH602和KHkunamin的3T3-L1脂肪细胞中的葡萄糖摄取的剂量响应曲线拟合。
图58A-E显示针对胰岛素、KHG、KHB、KHJ和KH103的3T3-L1脂肪细胞中的葡萄糖摄取的剂量响应曲线拟合。
图59A-F显示针对胰岛素、KH410、KH601、KH602、KHkunakin和KH409的3T3-L1脂肪细胞中的葡萄糖摄取的剂量响应曲线拟合。
图60A-D显示针对胰岛素、KH111、KH409和KH410的3T3-L1脂肪细胞中的葡萄糖摄取的剂量反应曲线拟合。
图61A-B显示了描述血糖水平和AUC(0-8周)的图。
图62A-B显示了描述胰岛素水平和AUC(0-8周)的图。
图63A-B显示了描述血浆TG水平和AUC(0-8周)的图。
图64A-B显示了描述血浆TCHO水平和AUC(0-8周)的图。
图65A-B显示了描述血浆HDL水平和AUC(0-8周)的图。
图66A-B显示了描述血浆LDL水平和AUC(0-8周)的图。
图67A-B显示了描述小鼠的体重和食物摄入量的图。
图68显示了小鼠的血液/血浆中的生物标记的基线。
具体实施方式
除非另有定义，本文所使用的所有技术和科学术语都具有与目前描述的主题所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
此外，如本文所用，短语“KH葡萄酒蛋白”和“KH葡萄蛋白”被认为是可互换的并且指相同的蛋白质。
在提供数值范围(例如，浓度范围、百分比范围或比率范围)的情况下，应当理解，除非上下文另外明确指出，在所述范围的上限和下限之间的以下限单位的十分之一为基准的每个中间值，以及在所述范围内的任何其他已说明的值或中间值均被涵盖在所述主题内。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括在较小范围内，并且这样的实施方案也涵盖在所述主题内，受到所述范围中的任何明确排除的端值的限制。在所述范围包括一个或两个端值的情况下，排除了所包括端值中任一者或两者的范围也包括在所述主题中。
在整个申请中，各种实施方案的描述使用措辞“包含”；然而，本领域技术人员将会理解，在某些特定情况下，可以替代地使用措辞“基本上由……组成”或“由……组成”来描述实施方案。
为了更好地理解本教导且绝不限制本教导的范围，除非另有说明，表示数量、百分比或比例的所有数字以及在说明书和权利要求书中使用的其他数值应被理解为在所有情况下均由术语“约”来修饰。因此，除非有相反指示，在下面的说明书和所附权利要求书中提出的数字参数都是近似值，其可以根据所希望获得的性质而变化。最低限度，每个数字参数至少应该根据所报告的有效数字的数目并通过使用普通的四舍五入技术来解释。
I.从整个葡萄束制造葡萄酒的过程
本主题的一个实施方案涉及用于人食用的食物组合物，其包含多种葡萄成分，其中该多种葡萄成分包含来自葡萄的磨碎的果肉、种子、茎和皮，并且其中该多种葡萄成分还包含一种或多种KH葡萄蛋白。
在这方面，本主题描述了一种从葡萄植物生产葡萄酒的方法(图1)。葡萄束在收获后立即处理。在约20～30℃下将整个葡萄束在研磨机中粉碎以切断粗茎。收集所有的原料，并在约20～30℃下在超细磨机中研磨。收集原汁，检查原汁的pH值，应该为约3.4～8.0。原汁在约23～24℃下发酵。发酵过程中检查pH和糖。将葡萄酒在室温下压制并过滤。收集沉淀物并转移葡萄酒。
葡萄酒在约15～20℃下老化，并在老化期间检查pH值。葡萄酒在约15～20℃下过滤。收集沉淀物并转移葡萄酒。将葡萄酒装瓶并检查pH值。收集所有沉淀物用于提取用途。
在一个实施方案中，葡萄酒被喷雾干燥以产生粉末。在一个实施方案中，使用巴氏杀菌和低pH值的组合以进行细菌和病毒灭活。在一个实施方案中，制造食物组合物期间的温度为-10～250℃。在一个实施方案中，该过程中的pH为2.5～10。
在一个实施方案中，食物组合物是KIEU HOANGTM葡萄酒，其含有每毫升几十万个活细胞至最高每毫升50至60亿个细胞。在一个实施方案中，食物组合物是葡萄酒CALIW，其含有每毫升500,000～1,000,000个细胞。在一个实施方案中，食物组合物是Blue Label葡萄酒，其含有每毫升10,000,000～5,000,000个细胞。在一个实施方案中，食物组合物是GreenLabel葡萄酒，其含有每毫升100,000,000～300,000,000个细胞。在一个实施方案中，食物组合物是Red Label葡萄酒，其含有每毫升300,000,000～1,000,000,000个细胞。在一个实施方案中，食物组合物是Yellow Label葡萄酒，其含有每毫升1,100,000,000～2,000,000,000个细胞。在一个实施方案中，食物组合物是Pellow Label或Kieu Hoang ProprietaryRed Blend葡萄酒，其含有每毫升2,100,000,000～3,000,000,000个细胞。在一个实施方案中，食物组合物是Kogo和Tenno BUDO葡萄酒，其含有每毫升3,100,000,000～5,000,000,000个细胞。
在一个实施方案中，组合物包含来自所述KH葡萄蛋白的APOA1(高密度脂蛋白)，其具有与人APOA1(高密度脂蛋白)相似的分子量。
II.制造果渣果汁和粉末的过程
本主题的一个实施方案涉及用于人食用的食物组合物，其包含多种果渣成分，其中该多种果渣成分包含来自葡萄果渣的磨碎的果肉、种子、茎和皮，并且其中该多种果渣成分还包含一种或多种KH果渣蛋白。
在一个实施方案中，本主题描述了用于从果渣厂生产果汁和粉末的方法。果渣在收获后立即处理。新鲜果渣在约0～100℃的清洁浴中洗涤。在约0～100℃下将整个果渣在研磨机中粉碎以切断粗茎。收集原料并在约0～100℃下在超细磨机中研磨。收集原汁。检查原汁的pH值并且应该为约2.5～10。将原汁在约-30～30℃下用常规离心机在低至高转速下离心。收集沉淀物和上清液。
向沉淀物中加入2～4倍体积的水并混合约10～100分钟，然后在约-30～60℃下用常规离心机以低至高转速再次离心。收集沉淀物和上清液。
加入1～2倍体积的水，然后混合约10～100分钟，并在约-30～60℃下用常规离心机以低至高转速再次离心。收集沉淀物和上清液。所有上清液在约0～100℃下混合10～100分钟。检查上清液的pH值并且应该为约2.5～10。将上清果汁在约-30～60℃下用盘式离心机以中等至高转速离心，并收集果汁。检查果汁的pH值并且应该为约2.5～10。
在一个实施方案中，为了制造果汁产品，将所收集的果汁在40～60MPa下均化。使用管式消毒器将果汁在130～140℃下灭菌5～20秒。清澈的果汁在25～35℃下装瓶。检查果汁的pH值。
在一个实施方案中，为了制备粉末产品，将所收集的果汁在65～85℃下在单效降膜蒸发器中浓缩，直到白利糖度值为30～50。将浓缩的果汁转移到离心式喷雾干燥器以产生粉末。
将所有沉淀物混合并胶囊化。
在一个实施方案中，食物组合物是粉末、果汁、食物补充剂或混合饮料。在一个实施方案中，食品组合物用于抗衰老化妆品。在一个实施方案中，制造期间的温度是-10～250℃。在一个实施方案中，pH为2.5～10。在一个实施方案中，使用巴氏灭菌和干燥高温加热的组合来进行细菌和病毒灭活。
在一个实施方案中，食物组合物包含来自所述KH果渣蛋白的APOA1(高密度脂蛋白)，其分子量与人APOA1(高密度脂蛋白)相似。在一个实施方案中，食物组合物包含来自所述KH果渣蛋白的白蛋白，其分子量与人白蛋白相似。在一个实施方案中，食物组合物包含来自所述KH果渣蛋白的α1抗胰蛋白酶，其分子量与人α1抗胰蛋白酶相似。
在一个实施方案中，KH果渣蛋白是KH602。在一个实施方案中，KH601和KH602具有人免疫球蛋白的分子较低带。
III.以葡萄汁为基础的饮料生产饮料的方法
本主题的一个实施方案涉及用于人食用的食物组合物，其包含多种葡萄成分，其中该多种葡萄成分包含来自葡萄的磨碎的果肉、种子、茎和皮，并且其中该多种果渣成分进一步包含一种或多种KH葡萄蛋白。
在一个实施方案中，食物组合物是粉末、果汁、食物补充剂或混合饮料。在一个实施方案中，制造期间的温度是-10～250℃。在一个实施方案中，pH为2.5～10。在一个实施方案中，使用巴氏灭菌和干燥高温加热的组合来进行细菌和病毒灭活。
在一个实施方案中，食物组合物包含来自所述KH葡萄蛋白的APOA1(高密度脂蛋白)，其分子量与人APOA1(高密度脂蛋白)相似。在一个实施方案中，食物组合物包含来自所述KH葡萄蛋白的白蛋白，其分子量与人白蛋白相似。在一个实施方案中，食物组合物包含来自所述KH葡萄蛋白的α1抗胰蛋白酶，其分子量与人α1抗胰蛋白酶相似。在一个实施方案中，食物组合物包含来自所述KH葡萄蛋白的免疫球蛋白和APOA-1，其分子量与人免疫球蛋白和APOA-1相似。
在一个实施方案中，KH葡萄蛋白是KH602。在一个实施方案中，KH葡萄蛋白是KHJ。
在一个实施方案中，本主题描述了从葡萄植物生产果汁和粉末的方法(图40)。葡萄束在收获后立即处理。新鲜葡萄束在约0～100℃的清洁浴中洗涤。在约0～100℃下将整个葡萄束在研磨机中粉碎以切断粗茎。收集所有的原料，并在约0～100℃下在超细磨机中研磨。收集原汁，并检查原汁的pH值，其应为约2.5～10。将原汁在约-30～30℃下用常规离心机在低至高转速下离心。收集沉淀物和上清液。
向沉淀物中加入2～4倍体积的水并混合约10～100分钟，然后在约-30～60℃下用常规离心机以低至高转速再次离心。收集沉淀物和上清液。
加入1～2倍体积的水，然后混合约10～100分钟，并在约-30～60℃下用常规离心机以低至高转速再次离心。收集沉淀物和上清液。所有上清液在约0～100℃下混合10～100分钟。检查上清液的pH值并且应该为约2.5～10。将上清果汁在约-30～60℃下用盘式离心机以中等至高转速离心，并收集果汁。检查果汁的pH值并且应该为约2.5～10。
在一个实施方案中，为了制造果汁产品，将所收集的果汁在40～60MPa下均化。使用管式消毒器将果汁在130～140℃下灭菌5～20秒。清澈的果汁在25～35℃下装瓶。检查果汁的pH值。
在一个实施方案中，为了制备粉末产品，将所收集的果汁在65～85℃下在单效降膜蒸发器中浓缩，直到白利糖度值为30～50。将浓缩的果汁转移到离心式喷雾干燥器以产生粉末。
将所有沉淀物混合并胶囊化。
在一个实施方案中，本主题的食物组合物是粉末、果汁或其他饮料、食物补充剂或浓缩物。在一个实施方案中，本主题的食物组合物是饮料并且KHJ蛋白包含KH103蛋白。在一个实施方案中，KH葡萄蛋白包含KHJ蛋白。在一个实施方案中，KHJ蛋白包含分子量与人免疫球蛋白和APOA-1蛋白分子量相似的蛋白。在一个实施方案中，KHJ蛋白还包含活细胞。在一个实施方案中，KH葡萄蛋白包含KH602蛋白。在一个实施方案中，KH葡萄蛋白包含KH103蛋白和KHJ蛋白的组合，并且可以是液体或粉末形式。
IV.治疗/预防方法
本主题的一个实施方案涉及治疗患者的某些疾病的方法，其包括用该食物组合物对有此需要的患者进行给药，其中该食物组合物具有高于0％的KH葡萄酒蛋白的浓度。
本主题的另一个实施方案涉及治疗患者的某些疾病的方法，其包括用该食物组合物对有此需要的患者进行给药，其中该食物组合物具有高于0％的KH果渣蛋白的浓度。
本主题的另一实施方案涉及治疗患者的某些疾病的方法，其包括用该食物组合物对有此需要的患者进行给药，其中该食物组合物具有高于0％的KH葡萄蛋白的浓度。
在一个实施方案中，用食物组合物进行的给药降低了甘油三酯和胆固醇并且增加了患者的高密度脂蛋白(APOA1)。在一个实施方案中，用食物组合物进行的给药增加了患者的葡萄糖摄取。在一个实施方案中，用食物组合物进行的给药清除了斑块并且为患者提供了心脏、大脑和动脉阻塞的保护。在另一个实施方案中，用食物组合物进行的给药治疗和/或预防了患者的糖尿病。在又一个实施方案中，用食物组合物进行的给药治疗和/或预防了患者的高胆固醇血症和/或高脂血症。
在一个实施方案中，用食物组合物进行的给药抑制了患者各种癌细胞的生长。就此而言，本文所述的食物组合物抑制了患者白血病细胞的生长，治疗了患者的白血病和/或预防了患者的白血病。在一个实施方案中，用食物组合物进行的给药通过静脉注射两次植入总共30,000,000个白血病癌细胞后(第一次以10,000,000个细胞进行，对于那些首次植入后没有发展出白血病的小鼠来说，第二次以20,000,000个细胞进行)，预防了小鼠白血病的发展。类似地，本文所述的食物组合物抑制了患者乳腺癌和/或肺癌细胞的生长，治疗了患者的乳腺癌和/或肺癌，和/或预防了患者的乳腺癌和/或肺癌。
在一个实施方案中，用食物组合物进行的给药抑制了由于不同原因的疾病导致的患者发炎。
在一个实施方案中，本主题涉及治疗患者的某种疾病的方法，其包括用该食物组合物对有此需要的患者进行给药，其中该食物组合物具有高于0％的KH葡萄蛋白的浓度。在一个实施方案中，该某种疾病是癌症，并且该给药抑制了癌细胞的生长。在一个实施方案中，该某种疾病是白血病并且该癌细胞包含白血病癌细胞。在一个实施方案中，用该食物组合物进行给药旨在通过预防白血病发展来延长患者的寿命。在一个实施方案中，在用KH葡萄蛋白对患者给药后形成的KH葡萄健康细胞向受损的或有病的细胞发出信号，由此触发通过RNA进行的蛋白质的合成，以转化受损的或有病的细胞以变得健康，其中健康细胞向其他未受损伤的细胞发送信号以合成蛋白质，以保护其他未受损伤的细胞免受损伤、感染以及免于发生DNA和其他细胞改变。此外，在向患者给药后的KH葡萄健康细胞向患者身体发送信号以产生健康的新细胞，从而防止新细胞受到细胞内和细胞外损伤信号的影响。
在一个实施方案中，本主题涉及治疗有需要的患者的高血糖水平的方法，其包括用该食物组合物对有此需要的患者进行给药，其中该食物组合物具有高于0％的KH葡萄蛋白的浓度。KH葡萄蛋白可以包含KHGD蛋白。
在一个实施方案中，本主题涉及治疗有需要的患者的胰岛素敏感性的方法，其包括用该食物组合物对有此需要的患者进行给药，其中该食物组合物具有高于0％的KH葡萄蛋白的浓度。KH葡萄蛋白可以包含KHGD蛋白。
在一个实施方案中，本主题涉及治疗有需要的患者的血浆TG水平的方法，其包括用该食物组合物对有此需要的患者进行给药，其中该食物组合物具有高于0％的KH葡萄蛋白的浓度。KH葡萄蛋白可以从由KH103蛋白、KHJ蛋白、KHGD蛋白及它们的组合构成的群组中选出。
在一个实施方案中，本主题涉及用于人食用的食物组合物，其包含全部来自葡萄的多种成分，例如来自葡萄的果肉、种子、茎和皮。
在一个实施方案中，本主题涉及商标为KUNAMINTM的果汁和混合饮料。
在一个实施方案中，本主题涉及粉末和混合食物补充剂。
在一个实施方案中，本主题涉及具有在体外抑制各种癌细胞生长的能力的KHJ制剂。此外，该制剂能够延长寿命，并在通过静脉注射两次植入总共30,000,000个白血病癌细胞后(第一次以10,000,000个细胞进行，对于那些首次植入后没有发展出白血病的小鼠来说，第二次以20,000,000个细胞进行)，能够预防小鼠白血病的发展。
在一个实施方案中，本主题涉及具有在体外抑制各种癌细胞生长的能力的KH602制剂。此外，该制剂能够延长寿命，并在通过静脉注射两次植入总共30,000,000个白血病癌细胞后(第一次以10,000,000个细胞进行，对于那些首次植入后没有发展出白血病的小鼠来说，第二次以20,000,000个细胞进行)，能够预防小鼠白血病的发展。
在一个实施方案中，本主题涉及具有KH葡萄良好健康细胞的KHJ，其中RNA合成良好蛋白质：将信号发送至受损的、生病的和坏的细胞，其触发合成良好蛋白质，其将这些细胞转化为良好的健康细胞；将信号发送至其他目前未损坏的细胞，以合成良好蛋白质，以保护它们免受损伤、感染并免于发生DNA和其他细胞改变；将信号发送至身体产生健康的新细胞，并禁止它们受到细胞内和细胞外损伤信号的影响。
在一个实施方案中，本主题涉及具有KH葡萄良好健康细胞的KH602，其中RNA合成良好蛋白质：将信号发送至受损的、生病的和坏的细胞，其触发合成良好蛋白质，其将这些细胞转化为良好的健康细胞；将信号发送至其他目前未损坏的细胞，以合成良好蛋白质，以保护它们免受损伤、感染并免于发生DNA和其他细胞改变；将信号发送至身体产生健康的新细胞，并禁止它们受到细胞内和细胞外损伤信号的影响。
在一个实施方案中，本主题涉及KUNAKINTM(KH103)和KUNAMINTM(KHJ)的组合以制备KUNAKIMINTM，其为液体和/或粉末形式并且具有与上述全部相同的作用和功能。
在一个实施方案中，本主题涉及KHJ，其还包含分子量与人蛋白质免疫球蛋白和APOA-1的分子量相似的蛋白质。
在一个实施方案中，本主题涉及KUNAMINTM(KHJ)，其还包含活细胞。
实施例
体外研究1–血脂指标(lipid panel)
在KIEU HOANGTM葡萄酒中发现100个测试项目中HDL的最高水平。图2是葡萄酒测试项目的图表。对没有特定数量细胞的KIEU HOANGTM红葡萄酒和白葡萄酒进行了测试。红葡萄酒KH110含有最高水平的HDL，含量为0.180/μL。测试由世界十大CRO实验室之一进行。
本研究的目的是量化RAAS产品中的胆固醇/胆固醇酯(TC)、HDL胆固醇(HDLC)、LDL/VLDL胆固醇(LDLC/VLDLC)和甘油三酯(TG)的浓度。
胆固醇/胆固醇酯定量试剂盒提供了一种简便的方法，可通过比色法或荧光测定法对游离胆固醇、胆固醇酯或二者进行灵敏定量。血液中的大部分胆固醇呈胆固醇酯的形式，其可通过胆固醇酯酶水解成胆固醇。然后，胆固醇被胆固醇氧化酶氧化产生H2O2，其与敏感的胆固醇探针反应产生颜色(λmax＝570nm)和荧光(Ex/Em＝535/590nm)。该测定法在反应中存在胆固醇酯酶的情况下检测总胆固醇(胆固醇和胆固醇酯)，或者在反应中不存在胆固醇酯酶的情况下检测游离胆固醇。
BioVision的HDL和LDL/VLDL胆固醇定量试剂盒提供了一种在方便地将血清样品中HDL与LDL和VLDL(极低密度脂蛋白)分离后对HDL和LDL/VLDL进行简单定量的方法。在该测定中，胆固醇氧化酶特异性识别游离胆固醇并产生产物，该产物与探针反应以产生颜色(λ＝570nm)和荧光(Ex/Em＝538/587nm)。胆固醇酯酶将胆固醇酯水解为游离胆固醇，因此，胆固醇酯和游离胆固醇可以在反应中存在或不存在胆固醇酯酶的情况下单独检测。
同样，甘油三酯定量试剂盒提供了一种灵敏、简便的测定方法，用于测量各种样品中的甘油三酯浓度。在测定中，甘油三酯转化为游离脂肪酸和甘油。然后，甘油被氧化以产生产物，该产物与探针反应产生比色(λ＝570nm的分光光度法)和荧光(Ex/Em＝535/590nm)方法。该试剂盒可在下表1中列出的各种样品中检测出1pmol～10nmol(或1～10000μM范围)的甘油三酯：
表1
通过荧光法对总胆固醇/胆固醇酯进行定量(TC)
胆固醇/胆固醇酯定量试剂盒(目录号#K603-100；100次测定；-20℃储存)。
试剂盒内容如表2所列：
表2
成分 K622-100 盖码 部件编号
胆固醇测定缓冲液 25ml WM K603-100-1
胆固醇探针(在DMSO中，无水) 200μl 红 K603-100-2A
酶混合物(冻干) 1小瓶 绿 K603-100-4
胆固醇酯酶(冻干) 1小瓶 蓝 K603-100-5
胆固醇标准品(2μg/μl) 100μl 黄 K603-100-6
试剂盒在-20℃下储存并避光。使用前温热至室温。使用时将酶和胆固醇标准品保存在冰上。
在使用前将胆固醇探针温热至室温以解冻DMSO溶液。储存于-20℃，避光。
使用前将胆固醇酯酶溶解在220μl胆固醇测定缓冲液中。分装并储存于-20℃。
使用前将酶混合物溶解在220μl胆固醇测定缓冲液中。分装并储存于-20℃。
标准曲线制备：
通过将10μl胆固醇标准品添加到790μl胆固醇测定缓冲液中，充分混合，从而将胆固醇标准品稀释至25ng/μl。将0、4、8、12、16、20μl加入到一系列孔中。用胆固醇测定缓冲液将体积调节至50μl/孔，以产生0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5μg/孔的胆固醇标准品。
样品制备：
在96孔透明底部黑色板中加入5μl测试样品，用胆固醇测定缓冲液调节至最终体积为50μl/孔。
混合足够的试剂以满足要操作的样品和标准品的数量。对于每个孔，准备总共50μl反应混合物：
45.6μl 胆固醇测定缓冲液
0.4μl 胆固醇探针
2μl 胆固醇酶混合物
2μl 胆固醇酯酶
充分混匀将50μl反应混合液加入到含有标准品或测试样品的每个孔中。
在37℃温育反应60分钟，避光。
在ENSPIRE中测量Ex/Em 535/590nm处的荧光。
计算：
从读数中减去0标准读数。绘制标准曲线。将样品读数应用于标准曲线以确定反应孔中的样品胆固醇量。
样品胆固醇浓度：
C＝A/V(μg/μl)
其中：A是标准曲线中的样品胆固醇量(μg)。
V是添加到样品反应孔中的原始样品体积(μl)。
通过荧光测定法(HDLC和LDLC/VLDLC)对HDL和LDL/VLDL进行胆固醇定量
HDL和LDL&VLDL胆固醇定量试剂盒(目录号#K613-100；100次测定；-20℃储存)。试剂盒内容列于如下表3中：
表3
成分 体积 盖码 部件编号
胆固醇测定缓冲液 25ml WM K613-100-1
2X LDL/VLDL沉淀缓冲液 10ml NM K613-100-2
胆固醇探针(在DMSO中，无水) 200μl 红 K613-100-3A
酶混合物(冻干) 1小瓶 绿 K613-100-5
胆固醇酯酶(冻干) 1小瓶 蓝 K613-100-6
胆固醇标准品(2μg/μl) 100μl 黄 K613-100-7
将胆固醇探针温热至室温，储存于-20℃，避光。
将胆固醇酯酶溶解在220μl胆固醇测定缓冲液中。分装并储存于-20℃。
使用前将酶混合物溶解在220μl胆固醇测定缓冲液中。分装并储存于-20℃。
分离HDL和LDL/VLDL：
将100μl的2X沉淀缓冲液与100μl血清样品在微量离心管中混合。在室温下温育10分钟，以2000x g(5000rpm)离心10分钟。将上清液(HDL)转移到新的标记管中。再次旋转沉淀物(LDL/VLDL)，去除HDL上清液。在200μl的PBS中重悬沉淀物。
注意A：如果上清液浑浊，则样品应重新离心。如果样品保持混浊，用PBS以1:1稀释样品，并重复分离程序。由于用2X沉淀缓冲液稀释，最终结果乘以二(2)。
标准曲线和样品制备：
通过将10μl胆固醇标准品添加至790μl胆固醇测定缓冲液中，从而将胆固醇标准品稀释至25ng/μl，将0、4、8、12、16、20μl添加至96孔透明底部黑色板的一系列孔中。用胆固醇测定缓冲液将体积调节至50μl/孔，以产生0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5μg/孔的胆固醇标准品。使用5μl的HDL或LDL/VLDL级分，用胆固醇测定缓冲液将总体积调整至50μl/孔。
混合足够的试剂以满足要操作的测定的数量。对于每次测定，准备总共50μl反应混合物，其中含有：
45.6μl 胆固醇测定缓冲液
0.4μl 胆固醇探针
2μl 酶混合物
2μl 胆固醇酯酶
向含有胆固醇标准品或测试样品的每个孔中加入50μl反应混合物，充分混合。在37℃下温育反应60分钟，避光。在ENSPIRE中测量Ex/Em 538/587nm处的荧光。
计算：
从读数中减去0标准读数。绘制标准曲线。将样品读数应用于标准曲线以确定反应孔中的样品胆固醇量。
样品胆固醇浓度：
C＝A/V(μg/μl)
其中：A是标准曲线中的样品胆固醇量(μg)。
V是添加到样品反应孔中的原始样品体积(μl)。
通过荧光测定法(TG)进行甘油三酯定量
甘油三酯定量试剂盒(目录号#K622-100；100次测定；-20℃储存)。试剂盒内容列于如下表4中：
表4
成分 K622-100 盖码 部件编号
甘油三酯测定缓冲液 25ml WM K622-100-1
甘油三酯探针(冻干) 1小瓶 红 K622-100-2
二甲基亚砜(DMSO，无水) 0.4ml 棕 K622-100-3
脂肪酶 0.5ml 蓝 K622-100-4
甘油三酯酶混合物(冻干) 1小瓶 绿 K622-100-5
甘油三酯标准品(1mM) 0.2ml 黄 K622-100-6
试剂盒储存于-20℃，避光。使用前将甘油三酯测定缓冲液温热至室温。在打开前简单离心所有小瓶。
使用前将甘油三酯探针溶解在220μl无水DMSO(提供)中。储存于-20℃，避光，防潮。
将甘油三酯酶混合物溶解在220μl甘油三酯测定缓冲液中。分装并储存于-20℃。
将脂肪酶溶解在220μl甘油三酯测定缓冲液中。分装并储存于-20℃。
标准曲线制备：
重新溶于热水浴(80～100℃)1分钟或直到标准品看起来浑浊，涡旋30秒，重复加热并再涡旋一次。用甘油三酯测定缓冲液将甘油三酯标准品稀释至0.01mM。每个孔中各自加入0、10、20、30、40、50μl。用甘油三酯测定缓冲液将体积调节至50μl/孔以产生0.1、0.2、0.3、0.4、0.5nmol/孔的甘油三酯标准物。
样品制备：
在96孔透明底部黑色板中加入5μl测试样品，用甘油三酯测定缓冲液调节至最终体积为50μl/孔。
向每个标准品和样品孔中加入2μl脂肪酶。在室温下混合并温育20分钟以将甘油三酯转化为甘油和脂肪酸。
对于甘油三酯反应混合物：混合足够的试剂以满足要操作的样品和标准品的数量。对于每个孔，准备总共50μl反应混合物：
47.6μl 甘油三酯测定缓冲液
0.4μl 甘油三酯探针
2μl 甘油三酯酶混合物
将50μl反应混合物加入到含有甘油三酯标准品、测试样品和对照的每个孔中。充分混合。在室温下温育30分钟，避光。
在ENSPIRE中测量Ex/Em 535/590nm处的荧光。
计算：
通过从所有样本读数中减去从0甘油三酯标准品得到的值来校正背景。绘制标准曲线。将样品读数应用于标准曲线。
然后可以计算甘油三酯浓度：
C＝Ts/Sv(nmol/μl或μmol/ml或mM)
其中：Ts是来自标准曲线的甘油三酯量(nmol)。
Sv是在样品孔中加入的样品体积(稀释前)(μl)。
结果
表5：样品KH 101的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量(图3)
表6：样品KH102的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量(图4)
表7：样品KH103的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量(图5)
表8：样品KH104的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量(图6)
表9：样品KH 105的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量(图7)
表10：样品KH106的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量(图8)
表11：样品KH107的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量(图9)
表12：样品KH108的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量(图10)
表13：样品KH 109的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量(图11)
表14：样品KH 110的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量(图12)
表15：样品KH 111的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量(图13)
表16：样品KH 132的TC、HDL、LDL/VLDL和TG的定量(图14)
体外研究2–血脂指标
第二个血脂指标是由世界十大CRO实验室之一的无锡制药(Wuxi Pharma)对KIEUHOANGTM蓝标葡萄酒以及绿标葡萄酒进行的。发现HDL的水平也非常高(图15～17)。
体外研究3–酒中的细胞
活细胞也可在所有的KIEU HOANGTM葡萄酒中找到，从少于每毫升一百万个细胞的低水平，到高至每毫升五十亿个细胞(图18～21)。另一个发现表明，细胞浓度越高，葡萄酒的味道会更好。许多研究也显示细胞浓度越高，效果越好。
体外研究4–肺癌和乳腺癌
在四种不同标签的KIEU HOANGTM葡萄酒的体外研究中发现，该葡萄酒可以抑制癌细胞特别是肺癌和乳腺癌的生长(图22～26)。
体外研究5–KIEU HOANGTM葡萄酒绿标葡萄酒和糖尿病
世界十大CRO实验室之一的无锡制药进行了体外研究。该研究表明，细胞计数为257,500,000mL的KIEU HOANGTM绿标可以帮助葡萄糖摄取，这意味着饮用葡萄酒后，糖尿病患者的其系统的糖水平较低(图27)。
细胞数越高，糖水平越低，其机理是由于KIEU HOANGTM葡萄酒中发现的KH良好健康活细胞。含有KH葡萄酒良好健康细胞的葡萄酒配方(其中RNA合成良好蛋白质)将信号发送给受损的、生病的和坏的细胞，触发合成良好蛋白质，以将这些细胞转化为良好的健康细胞。此外，将信号发送到其他目前未受损的细胞，以合成良好蛋白质，以保护它们免受损伤、感染并免于发生DNA和其他细胞改变。将信号发送到患者身体，以产生健康的新细胞，并禁止它们受到细胞内和细胞外损伤信号的影响。
体内研究1：白血病癌症相对KIEU HOANG葡萄酒红标
体内研究也在无锡制药进行。研究发现，与载体对照相比，KIEU HOANG葡萄酒红标有助于减缓癌症的发展(图28～31)。
志愿者研究1–血脂指标
自1985年以来，志愿者的心脏病专家开了药方但志愿者从未服用该处方药。相反，志愿者开始跑步两个小时，自1983年以来每天锻炼。
2013年1月28日，志愿者进行了健康检查。甘油三酯水平为1,114mg/dL，胆固醇水平为346mg/d，HDL水平为44mg/dL，LDL水平超过上限(>400mg/dL)，并且发现高血压。志愿者拒绝服用药物Lipitor和降压药。相反，他转向KIEU HOANGTM葡萄酒，他发现KIEU HOANGTM葡萄酒具有最高水平的高密度脂蛋白。因此，志愿者相信KIEU HOANGTM葡萄酒有助于降低胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白水平。结果得到了证实。
2013年6月，在瑞金医院(Rui Jin Hospital)进行志愿者的胆固醇测试后，他的医生得出结论，甘油三酯、高血压和胆固醇水平仍然很高，但他的医生并不知道他在2013年1月28日的测试中的水平有多高。
在2013年1月28日至2013年6月3日期间，志愿者每晚喝两杯KIEU HOANGTM蓝标、绿标、红标或金标。甘油三酯水平从1,114mg/dL降至379mg/dL。胆固醇从346mg/dL降至235mg/dL。HDL水平从44mg/dL增加到48mg/dL。LDL从超过上限的>400mg/dL降至125mg/dL，如下图所示。
2013年8月6日，志愿者的家庭医生观察了瑞金医院的结果，并开了一些含有化学物质的药物来降低胆固醇和甘油三酯水平。志愿者并不服用药物，而是继续饮用KIEUHOANGTM葡萄酒，此外，开始服用2粒KUNAKINTM(大豆中的359种蛋白质)、2粒KUNAMINTM(具有种子、果肉、茎和皮的葡萄浓缩物)和4粒KHCARETM 男士配方，以及一小时在跑步机上快速行走，同时实践健康饮食。
2013年9月10日，在于2013年8月6日更换养生法后再次进行了测试。结果显示甘油三酯水平从1,114mg/dL降至101mg/dL。胆固醇水平从346mg/dL降至235mg/dL。HDL从44mg/dL增加到50mg/dL。LDL从超过上限的>400mg/dL降至158mg/dL。甘油三酯水平下降了1,102.9％。胆固醇水平下降了140％。HDL增加至110％。LDL下降了253％，如下图所示。
志愿者研究2-糖尿病患者的较低糖水平
2014年11月中旬和12月中旬进行了一位特定志愿者的血糖测量。11月中旬，三名志愿者消费了一瓶KIEU HOANGTM葡萄酒红标。晚餐后，特定的志愿者测量了他的糖水平，显示7.0的读数。十二月中旬，同样的三名志愿者消费了一瓶Tennobuddo(前身为Guilliams)，晚餐后，特定的志愿者测量了他的糖水平，显示6.9的读数。糖的读数水平进行了两次以用于验证。对于特定的志愿者，即使他服用处方化学药物，他的最低糖水平一般为11.5～12mmol/L。
因此，细胞含量为每毫升275,000,000个细胞至最多每毫升5,000,000,000个(50亿个)活细胞的KIEU HOANGTM葡萄酒绿标TM、红标TM、黄标TM、紫标TM和/或TennoBudoTM(前身Guilliams)有助于将糖尿病患者的糖水平在晚餐后从11.5～12mmol/L降至7和6.9mmol/L。
发现细胞数越高，不仅降低糖尿病患者的糖水平，而且葡萄酒的味道也越好。图32显示了一位志愿者在喝了KIEU HOANGTM红标和Tennobudo葡萄酒后测试了他的血糖水平。
志愿者研究3-发明人的移动活细胞相对KIEU HOANG葡萄酒中的活细胞
来自植物、动物和人类的细胞是一样的，永远活着。例如，即使在癌症患者死亡后，坏的癌细胞仍然活着。酿酒葡萄已经被用来通过压碎来酿造葡萄酒，并且在不同的温度下，细菌和病毒可以在3.5～4.0的低pH下被消除。但是，活细胞仍然存在于葡萄酒中。
来自发明人的细胞(A)、来自KH103的细胞(B)和来自猪TB的细胞(C)显示在图39A-C中用于比较。为了证明细胞在人体组织中仍然存货，将发明人脚下的皮肤从身体取出，研磨成粉末，高速离心并且经历高达120℃的高温。在上述步骤之后，细胞仍然存活。细胞由称为双环的两个环组成。外环是DNA，内环是RNA。
图33显示了发明人的脚中的人体移动细胞。视频中用于证明细胞正在移动的静态图片从视频的00:54秒提取。图34显示了发明人的脚中的人体移动细胞。视频中用于证明细胞正在移动的静态图片从视频的00:59秒提取。图35显示了发明人的脚中的人体移动细胞。视频中用于证明细胞正在移动的静态图片从视频的01:06秒提取。
图36显示了KIEU HOANGTM葡萄酒中植物的移动细胞。视频中用于证明细胞正在移动的静态图片从视频的00:46秒提取。图37显示了KIEU HOANGTM葡萄酒中植物的移动细胞。视频中用于证明细胞正在移动的静态图片从视频的00:48秒提取。图38显示了KIEU HOANGTM葡萄酒中植物的移动细胞。视频中用于证明细胞正在移动的静态图片从视频的00:50秒提取。
体外研究6–KH601葡萄籽提取物和KH602白藜芦醇
KH601和KH602的体外研究也由无锡制药进行。该研究显示，KH601和KH602含有高密度脂蛋白(APOA-1)，但胆固醇和甘油三酯含量较低。
体内研究2–KH609葡萄籽提取物和KH610白藜芦醇
在这项KH609和KH610相对于白血病癌症的研究中，发现KH609和KH610有助于减缓白血病癌细胞的生长。
体外研究7–通过SDS Page测试和KUNAMINTM的细胞计数
KHJ、KH601和KH602是KUNAMINTM的代号。进行SDS Page来检查KUNAMINTM的分子量。发现KUNAMINTM的分子量与人血浆中发现的免疫球蛋白和APOA1(高密度脂蛋白)的分子量相似(图41)。
在不同浓度的KUNAMINTM中，KUNAMINTM含有每毫升10,000,000个细胞至每毫升10亿个细胞(图42)。
体外研究8–HDL/VLDL/LDL测试和KUNAMINTM中的甘油三酯
该研究在无锡制药进行，以检测高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)的水平。KH601是KUNAKINTM的一种成分，具有非常高的高密度脂蛋白(HDL)水平，这是很好的胆固醇。KHJ和KH 601具有最低水平的LDL、VLDL和甘油三酯。
KUNAMINTM中的葡萄糖摄取
葡萄糖代谢是维持细胞稳态的能量和生物材料的主要来源。额外的葡萄糖作为糖原存储在肌肉和肝脏中，糖原在需要时水解成葡萄糖并释放到血液中。细胞中葡萄糖摄取的速率是动态的并且受激素和/或生长因子(包括胰岛素)的严格调控。
GLUT4是在脂肪组织和横纹肌(骨骼和心脏)中发现的胰岛素调节的葡萄糖转运蛋白，其负责将胰岛素调节的葡萄糖转运进入细胞。在低胰岛素条件下，GLUT4被隔离在肌肉和脂肪细胞的细胞内囊泡中。胰岛素通过诱导GLUT4从这些囊泡转移至质膜而诱导葡萄糖摄取的快速增加。随着囊泡与质膜融合，GLUT4转运蛋白被插入并可用于运输葡萄糖，由此葡萄糖吸收增加。
本研究使用2-脱氧-D-[3H]-葡萄糖来追踪测试蛋白对于3T3-L1细胞响应于胰岛素的葡萄糖摄取速率的影响。
材料和试剂
试剂：
HEPES，Invitrogen(目录号15630130)
MgSO4，SIGMA(目录号63138)
CaCl2，FLUKA(目录号06991)
KCl，SIGMA(目录号P9333)
NaCl，Fisher(目录号BMA51202)
BSA，Gibco(目录号A6003)
脱氧-D-葡萄糖，2-[1,2-3H(N)]，Perkin Elmer(目录号NET328A250UC)
胰岛素，Sigma(目录号I2643)
2-脱氧-D-葡萄糖，Sigma(目录号D6134)
FBS，Invitrogen(目录号10100147)
DMEM，Invitrogen(目录号11965118)
地塞米松，Sigma(目录号D1756-25MG)
3-异丁基-1-甲基黄嘌呤，IBMX，Sigma(目录号I5879)
仪器和板：
顶部密封-密封膜Perkin Elmer(目录号6005250)
Tri-Carb(Perkin Elmer)
96孔微孔板(Nunc-442587)
96孔微量滴定黑色透明板(Greiner-655090)
细胞：
3T3-L1成纤维细胞(中国科学院细胞库，目录号GNM25)
测试样品：
如表17中所示，由RAAS US提供10种测试蛋白质：
表17
测试样品 体积/性质
KHG 10ml
KHB 10ml
KHJ 10ml
KH 103 10ml
KH 111 10ml
KH 409 粉末
KH 410 粉末
KH 601 粉末
KH 602 粉末
KH Kunakin 粉末
实验程序
将粉末样品溶解在20g：100ml dd H2O中。过滤溶液中的固体颗粒。同时过滤所有剩下的样品。
细胞培养：在37℃和5％CO2下，在培养基I(含有25mM葡萄糖、1％PS、10％FBS的DMEM)中培养3T3-L1成纤维细胞。
细胞分化：在与含有1μg/ml胰岛素、1μM地塞米松和0.5mMIBMX的培养基II(DMEM，10％FBS，1％PS)汇合后2天，3T3-L1成纤维细胞分化成脂肪细胞(第0天)。用含有1μg/ml胰岛素的培养基II代替培养基并培养2天。(第2天)。培养基更换为10％FBS/DMEM(第4天)。每两天用10％FBS/DMEM饲喂细胞。通常在第8天完全分化。
葡萄糖摄取测定：以200μl/孔将2x105/ml的3T3-L1脂肪细胞种植到96孔细胞培养板(含有1μg/ml胰岛素的培养基II)中，在37℃下用5％CO2培养过夜。将3T3-L1脂肪细胞在无血清培养基中温育过夜。用KRPH缓冲液(5mM Na2HPO4，20mM HEPES，pH 7.4，1mM MgSO4，1mM CaCl2，136mM NaCl，4.7mM KCl和1％BSA)洗涤3T3-L1脂肪细胞3次。加入含有100nM人胰岛素/载体的90μl KRPH并在37℃和5％CO2下温育30分钟。加入含有0.25uCi 1-[3H]-2-脱氧葡萄糖/孔和50μmol/l 2-脱氧葡萄糖的10μl KRPH，并在37℃下在95％空气/5％CO2中温育10分钟。通过用含有10mM葡萄糖的冷PBS漂洗细胞三次来停止转运。将脂肪细胞在50μl10％KOH中裂解5分钟。然后使用TriCap对等分试样进行闪烁计数。注：从3T3-L1成纤维细胞到3T3-L1脂肪细胞需要细胞分化。
结果
在葡萄糖摄取测定中使用3T3-L1脂肪细胞以八种浓度(起始浓度为1％，3倍稀释)测试十种测试蛋白(图43-45)。该测定独立进行两次。如果两次重复所获得的EC50值不在3倍差异范围内，则再次重复该测定。使用GraphPad Prism 5来分析数据。
所分析的数据：2014-7-11
对应的剂量响应曲线拟合显示在图27、图43和图56A-E中。
所分析的数据：2014-7-14
对应的剂量响应曲线拟合显示在图44和图57A-E中。
所分析的数据：2014-8-27
对应的剂量响应曲线拟合显示在图58A-E中。
所分析的数据：2014-8-28
对应的剂量响应曲线拟合显示在图45和图59A-F中。
所分析的数据：2014-8-29
对应的剂量响应曲线拟合显示在图60A-D中。
结论
对于胰岛素参考，取得5次EC50。
样品KHG、KGJ和KH602在3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取测定中测试两次。它们都对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取具有活性。我们两次获得的结果是一致的。
EC50 KHG KHJ KH 602
n＝1 0.036％ 0.405％ 0.449％
n＝2 0.014％ 0.828％ 0.199％
样品KH409、KH410和KH601在3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取测定中测试两次。它们对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取有抑制作用。两次获得的结果是一致的。
IC50 KH 409 KH 410 KH 601
n＝1 0.192％ 0.250％ 1.481％
n＝2 0.161％ 0.728％ 0.488％
样品KHB、KH103、KH111和KH Kunakin在3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取测定中测试两次。它们对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取测定均无活性。两次获得的结果是一致的。
体内研究3
使用Molt-4-luc白血病模型来评估不同化合物在Balb/c裸鼠体内的抗癌功效。在细胞植入后第50天，载体组的中值相对生物发光为153.43，阳性对照组为1.40；而KHJ预防组和KHJ治疗组分别产生2.84和1.32的相对生物发光。细胞注射后第111天，在载体对照组中，两只小鼠死亡，三只小鼠显示生物发光信号。在阳性对照组中，一只小鼠死亡，其显示生物发光信号。然而，在KHJ治疗组中，所有小鼠都存活，并且预防组中的一只小鼠和治疗组中的一只小鼠在这种molt-4-luc白血病模型中显示生物发光信号。总之，结果显示KHJ的测试化合物被荷瘤小鼠良好地耐受，并且测试物品KHJ对肿瘤生长具有抑制作用。
目的是评估不同化合物在Balb/c裸鼠白血病模型中的抗肿瘤效果。所有的实验均在AAALAC认证的动物设施中进行，符合机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的方案。
实验准备
从批准的供应商(上海BK实验动物有限公司(Shanghai BK Laboratory AnimalCo.,LTD.)，中国上海)获得体重约20克的雌性Balb/c裸鼠。抵达后，由兽医人员或授权人员对动物进行一般健康评估。在用于研究之前，使动物适应至少三天(在到达实验室时)。动物在适应环境中分组饲养，并在生活中分别饲养。将动物室环境调整至以下目标条件：温度20～25℃，相对湿度40～70％，人工光源12小时，黑暗12小时。每天监测温度和相对湿度。
所有动物均可随意获得认证啮齿动物饲料。研究前动物未禁食。水经过高压灭菌后提供给动物随意饮用。对水进行定期分析并将结果存档于WuXi AppTec。在饲料或水中没有预计会干扰研究的目的、进行或结果的检测到的水平的已知的污染物。
细胞培养
Molt-4-luc(供应商链接：Caliper-125057)肿瘤细胞作为悬浮培养物在补充有10％胎牛血清的RPMI 1640培养基中于37℃在空气中具有5％CO2的气氛中体外维持。肿瘤细胞每周常规传代培养两次。收获处于指数生长期的细胞并计数用于肿瘤接种。
测试物品(KH51、KHJ、KHR、KH103、KH111、KH606、KH610、KHJ2、KHJ3、KHJC和KH103C)由RAAS提供。在盐水中配制环磷酰胺(山西普德药业有限公司(Shanxi PowerdonePharmaceutics Co.,Ltd.)；批号#04120503)。
实验协议
根据体重将小鼠随机分配至16个组(载体对照、阳性对照和14个测试物品组)。根据表13，在肿瘤植入前4周用测试物品对预防组中的小鼠给药。根据表18，在细胞注射后立即用测试物品对载体、阳性对照和治疗组中的小鼠给药。测量并记录全身和转移性生物发光。
表18：实验设计
注：*预防组：6只小鼠，可自由饮用测试样品，测试样品在细胞注射前4周给予。
**治疗组：6只小鼠，可自由饮用测试样品，测试样品在细胞注射后立即给予。
载体、阳性对照组：细胞注射后立即给予治疗。
表19：对有信号的动物的治疗
注：a.细胞注射后的天数
b.按照负责人的要求，在实验期间改变了剂量。
*预防组：6只小鼠，可自由饮用测试样品，测试样品在细胞注射前4周给予。
**治疗组：6只小鼠，可自由饮用测试样品，测试样品在细胞注射后立即给予。
载体、阳性对照组：细胞注射后立即给予治疗。
生物发光测量
将接种的小鼠称重并以150mg/kg在腹膜内注射荧光素。给予荧光素10分钟后，将动物用氧和异氟烷的混合气预先麻醉。当动物处于完全麻醉状态时，将它们移入成像室用IVIS(Lumina II)进行生物发光测量。测量整个动物身体，包括原发性和转移性肿瘤的生物发光，并记录图像。
药物和材料
测试化合物(KH51、KHJ、KHR、KH103、KH111、KH606、KH610、KHJ2、KHJ3、KHJC和KH103C)由RAAS提供。环磷酰胺(山西普德药业有限公司(Shanxi PowerdonePharmaceutics Co.,Ltd.)；批号#04120503)。
数据分析：中值相对生物发光
测量整个动物身体，包括原发性和转移性肿瘤的生物发光(BL)，并使用固定强度度量表记录图像。用IVIS Lumina II软件计算相对生物发光(RBL)值并记录数据。用中值相对生物发光绘制肿瘤生长曲线。
RBL＝RBLt/RBL0，其中
RBLt--时间t时的RBL值
RBL0--开始时的RBL值
数据分析：存活动物和有癌症信号的动物
在细胞注射后，动物每周一次持续接受生物发光测量，直到第111天。测量整个动物身体，包括原发性和转移性肿瘤的生物发光。记录存活动物和有癌症信号的动物。
结果：不同组的中位相对生物发光
在细胞植入后第50天，载体组的中位相对生物发光为153.43，阳性对照组为1.40，而KHJ预防组和KHJ治疗组分别产生2.84和1.32的相对生物发光。结果显示，测试物品KHJ对肿瘤生长具有抑制作用。不同组的中值相对生物发光在图46中示出。
结果：存活动物和有癌症信号的动物
在注射细胞之后，动物每周一次持续接受生物发光测量，直到第111天。测量整个动物身体，包括原发性和转移性肿瘤的生物发光。记录存活动物和有癌症信号的动物。细胞注射后第111天，在载体对照组中，两只小鼠死亡，三只小鼠显示生物发光信号。在阳性对照组中，一只小鼠死亡，其显示生物发光信号。然而，在KHJ治疗组中，所有小鼠都存活，并且在此Molt-4-luc白血病模型中，预防组中的一只小鼠和治疗组中的一只小鼠显示出生物发光信号。
存活动物和有癌症信号的动物显示于表20。
表20：细胞注射后第111天的总结
注：*预防组：6只小鼠，可自由饮用测试样品，测试样品在细胞注射前4周给予。
**治疗组：6只小鼠，可自由饮用测试样品，测试样品在细胞注射后立即给予。
载体、阳性对照组：细胞注射后立即给予治疗。
使用molt-4-luc白血病模型来评估不同化合物在Balb/c裸鼠中的抗癌功效。在细胞植入后第50天，载体组的中位相对生物发光为153.43，阳性对照组为1.40，而KHJ预防组和KHJ治疗组分别产生2.84和1.32的相对生物发光。
细胞注射后第111天，在载体对照组中，两只小鼠死亡，三只小鼠显示生物发光信号。在阳性对照组中，一只小鼠死亡，其显示生物发光信号。然而，在KHJ治疗组中，所有小鼠都存活，并且在此Molt-4-luc白血病模型中，预防组中的一只小鼠和治疗组中的一只小鼠显示出生物发光信号。小鼠死亡的原因可能是肿瘤生长。这里，显示生物发光的小鼠死亡。这意味着肿瘤生长是导致小鼠死亡的主要原因。注：KH609预防组中的一只小鼠(1/6)在细胞注射后第44天死亡。使用GraphPad Prism 5来制备图表。
结果显示，测试物品KHJ对肿瘤生长具有抑制作用。在KH609和KH610相对于白血病癌症的研究中，发现KH609和KH610有助于减缓白血病癌细胞的生长。
在所测试的项目中，包括KHJ609、KHJ610和KHJ，它们是KunaminTM的代号。如图46所示，所有测试项目都显示减慢了白血病癌细胞的生长，并且都低于载体中值相对生物发光。
在KHJ治疗组中(图47)，直到第106天都没有一只小鼠死亡，并且与载体组相比，它们都没有显示出中值相对生物发光。其中三只发展为白血病，一只在第57天死亡。另外，与使用药物的阳性组相比，阳性组中的一只小鼠也在第57天死亡。由于载体中的三只小鼠未生长为白血病的事实，要求CRO向载体中的这三只小鼠以及KHJ中的所有六只小鼠注射2000万以上的白血病细胞直至第150天。载体组以及阳性对照组中的全部小鼠死亡。KHJ组的小鼠继续存活到280天。
在KHJ预防组(图48)中，直到第106天都没有一只小鼠死亡。一只小鼠(5-53)显示出中值相对生物发光，并且由于KHJ帮助将白血病癌细胞转化为KH良好健康细胞(来自人类、植物和动物)。与载体组相比，三只小鼠发展为白血病并且在第57天死亡一只。同样与使用药物的阳性组相比，阳性组中的一只小鼠也在第57天死亡。由于载体中的三只小鼠未生长为白血病的事实，要求CRO向载体中的这三只小鼠以及KHJ中的所有六只小鼠注射2000万以上的白血病细胞(预防性和治疗性)直到第150天。载体组和阳性对照组中的所有小鼠均死亡。KHJ的小鼠继续存活到300天。
总之，KUNAMINTM的果汁浓度为零。浓度越高，产生的细胞就越多，在预防和治疗白血病方面会更有效。
体内研究4
评价KHJ、KH103和KHGD在雌性BALB/c裸鼠的皮下MDA-MB-436人乳腺癌模型中的体内抗肿瘤功效。
用于预防性分组(arms)的组别示于表21。用于治疗性分组的组别示于表22。
表21预防性分组的组别
注意事项：
给药时间表(接种后的天数，日数之前的减号表示接种前的天数)
第1组：自由饮用无菌水。
第2组：
第-13天至第52天：仅自由饮用KHJ。
第53天至第57天：自由饮用KHJ，连同每天4次灌胃KHJA，间隔3小时，每次0.4mL。
第58天至第61天：仅自由饮用KHJ。
第62天至第72天：自由饮用KHJ，连同每天4次灌胃KHJA，间隔3小时，每次0.4mL。
第3组：
第-13天至第50天：仅自由饮用KH103。
第51天至第72天：自由饮用KH103，连同每天4次灌胃KH103(150mg/ml)，间隔3小时，每次0.4mL。
第4组：
第-13天至第-11天：自由饮用KHGD，连同每天3次灌胃KHGD，间隔4小时，每次0.4mL。
第-10天至第32天：自由饮用KHGD 8小时开/16小时关，连同每天3次灌胃KHGD，间隔4小时，每次0.4mL。
第33天至第52天：自由饮用KHGD 16小时开/8小时关，连同每天4次灌胃KHGD，间隔3小时，每次0.4mL。
第53天至第57天：自由饮用KHGD 16小时开/8小时关，连同每天4次灌胃KHGold，间隔3小时，每次0.4mL。
第58天至第61天：仅自由饮用KHGD 16小时开/8小时关。
第62天至第72天：自由饮用KHGD 16小时开/8小时关，连同每天4次灌胃KHGold，间隔3小时，每次0.4mL。
表22治疗性分组的组别
注意事项：
给药时间表(接种后的天数)
第5组：自由饮用无菌水。
第6组：每周两次i.p.。
第7组：
第9天至第52天：仅自由饮用KHJ。
第53天至第57天：自由饮用KHJ，连同每天4次灌胃KHJA，间隔3小时，每次0.4mL。
第58天至第61天：仅自由饮用KHJ。
第62天至第72天：自由饮用KHJ，连同每天4次灌胃KHJA，间隔3小时，每次0.4mL。
第8组：
第9天至第50天：仅自由饮用KH103。
第51天至第72天：自由饮用KH103，连同每天4次灌胃KH103(150mg/ml)，间隔3小时，每次0.4mL。
第9组：
第9天至第32天：自由饮用KHGD 8小时开/16小时关，连同每天3次灌胃KHGD，间隔4小时，每次0.4mL。
第33天至第52天：自由饮用KHGD 16小时开/8小时关，连同每天4次灌胃KHGD，间隔3小时，每次0.4mL。
第53天至第57天：自由饮用KHGD 16小时开/8小时关，连同每天4次灌胃KHGold，间隔3小时，每次0.4mL。
第58天至第61天：仅自由饮用KHGD 16小时开/8小时关。
第62天至第72天：自由饮用KHGD 16小时开/8小时关，连同每天4次灌胃KHGold，间隔3小时，每次0.4mL。
动物和住房条件
所使用的动物是小家鼠(Mus musculus)，BALB/c裸鼠品系，6～8周龄，雌性。体重为18～22克。动物的数量加上备用是90只小鼠。动物供应商是上海BK实验动物有限公司。
将小鼠保持在恒定温度和湿度下的单独通风笼中，每只笼子中有5只动物。温度为20～26℃，湿度为40～70％。笼子由聚碳酸酯制成，尺寸为300mm×200mm×180mm。垫料是玉米芯，每周更换两次。
对于饲料，动物在整个研究期间可以自由获取经辐照灭菌的干燥颗粒食物。动物可以自由获取无菌饮用水。
每个笼子的识别标签包含以下信息：动物数量、性别、品系、收到日期、处理、研究号码、组号和处理开始日期。通过耳部打码对动物进行标记用于识别。
测试和阳性对照物品
测试物品KHJ由RAAS制造，为液体，并且以500ml/小瓶包装并在4℃下储存。
测试物品KH103由RAAS制造，为液体，并且以500ml/小瓶包装并在4℃下储存。
测试物品KHGD由RAAS制造，为液体，并且以500ml/小瓶包装并在4℃下储存。
测试物品KHJA由RAAS制造，为液体，并且以500ml/小瓶包装并在4℃下储存。
测试物品KH103粉末由RAAS制造，为白色粉末，并且以500g/包包装并在室温下储存。
测试物品KHGold由RAAS制造，为液体，并且以500ml/小瓶包装并在4℃下储存。
阳性对照剂紫杉醇由扬子江药业集团(Yangtze River Pharmaceutical Group)制造，批号为13092811，为淡黄色溶液，以5ml:30mg/瓶包装并在室温下储存。
实验方法和程序
细胞培养
将MDA-MB-436肿瘤细胞(ATCC，Manassas，VA，目录号HTB-130)作为单层培养物在补充有10％胎牛血清、10μg/ml胰岛素、16μg/ml谷胱甘肽、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素在37℃，空气中含5％CO2的气氛中进行。通过胰蛋白酶-EDTA处理将肿瘤细胞每周常规传代培养两次。收获处于指数生长期的细胞并计数用于肿瘤接种。
肿瘤接种
每只小鼠用补充有BD Matrigel(1:1)的0.1ml PBS中的MDA-MB-436肿瘤细胞(1×107)在右腹皮下接种用于肿瘤发展。接种前13天开始预防性处理。肿瘤接种后第9天开始治疗性处理，此时平均肿瘤大小达到约81mm3。每组由10只荷瘤小鼠组成。如实验设计表21(预防性)和表22(治疗性)所示，根据预定方案用测试物品对小鼠给药。
测试物品制备
表23：测试物品制剂制备
所有与动物处理、护理和研究有关的程序都是根据由WuXi AppTec的机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准的准则，遵循实验动物护理评估和认证协会(AAALAC)的规定进行。在常规监测时，每天检查动物的肿瘤生长和处理对正常行为如流动性、食物和水消耗(仅查看)、体重增加/减少(体重每周测量两次)、眼睛/毛发褪色和协议规定的任何其他异常结果的影响。基于每个子集内的动物数量记录死亡和观察到的临床征兆。
肿瘤测量
主要终点是查看肿瘤生长是否可以延迟或小鼠是否能被治愈。使用卡尺每周两次测量肿瘤的两个尺寸，并且使用以下公式计算体积，表示为mm3：V＝0.5a×b2，其中a和b分别是肿瘤的长径和短径。然后将肿瘤大小用于计算T-C和T/C值。用T和C来计算T-C，T作为治疗组肿瘤的平均体积达到600mm3所需的时间(以天计)，而C作为对照组肿瘤的平均体积达到相同大小的时间(以天计)。T/C值(以百分比表示)是抗肿瘤有效性的指标；T和C分别是给定日的处理组和对照组的平均体积。
使用以下公式计算每组的ΔTGI：ΔTGI(％)＝[1-(Ti-T0)/(Vi-V0)]×100；Ti是给定日治疗组的平均肿瘤体积，T0是治疗开始当天治疗组的平均肿瘤体积，Vi是与Ti同一天的载体对照组的平均肿瘤体积，V0是治疗开始当天的载体组的平均肿瘤体积。
在研究终止时拍摄肿瘤照片并测量肿瘤重量。使用以下公式计算T/Cweight值(百分比)：T/Cweight％＝Tweight/Cweight×100％，其中Tweight和Cweight分别是治疗组和载体对照组的平均肿瘤重量。
对于每组在每个时间点的肿瘤体积提供了总结统计，包括平均值和平均值的标准误差(SEM)。
对载体-治疗性组的平均肿瘤体积达到2,000mm3(接种后第71天)时获得的数据进行各组之间肿瘤体积和肿瘤重量差异的统计分析。
进行单因素ANOVA来比较各组之间的肿瘤体积和肿瘤重量，并且当获得显著的F统计学(治疗方差与误差方差的比率)时，使用Dunnett t检验进行组间比较。所有数据均使用SPSS 19.0进行分析。认为p<0.05是统计学显著的。
死亡率、发病率和体重增加或减少
定期监测动物体重作为毒性的间接测量(图54A-B)。除了预防性KHGD第4组发现由于KHGD的3天全天供应而发现有消瘦和脱水迹象之外，没有组别由于测试物品给药而体重减轻。KHGD预防组的平均体重在预防性处理的前3天从22.0显著下降至18.2g，而来自该组的4只动物表现出严重的大于20％的体重减轻。KHGD-预防组的体重变化在给药调整为8小时开/16小时关后从-17.1％恢复至-2.3％。
可能由于药物毒性(在死亡前发现腹胀)，由阳性对照紫杉醇处理的第6组的小鼠#419和#370在治疗性处理开始后第20天和第63天死亡。其他小鼠似乎并没有明显地生病(表24)。
表24：研究期间动物的死亡率和发病率
注：
a.表现出死亡率或发病率的动物数量
b.治疗性处理开始后的天数
c.预防性处理开始后的天数
服用KHJ、KH103和KHGD的带有MDA-MB-436异种移植物的雌性BALB/c裸鼠的体重变化示于图54A-B。
表25：基于第71天的肿瘤体积测量计算的MDA-MB-436异种移植物模型中的KHJ、KH103和KHGD的肿瘤生长抑制计算
注：
a.接种后第71天的平均值±SEM。
b.通过将治疗组的组平均肿瘤体积除以对照组的组平均肿瘤体积(T/C)计算肿瘤生长抑制。使用以下公式计算ΔTGI：ΔTGI(％)＝[1-(Ti-T0)/(Vi-V0)]×100。
c.基于肿瘤大小计算p值，其与预防性分组中的载体-预防性组和治疗性分组中的载体-治疗性组进行比较。
肿瘤生长曲线示于图55A-B。不同组中的荷瘤小鼠的肿瘤重量示于表26。
表26：不同组中的肿瘤重量
注：
a.接种后第78天的平均值±SEM
b.通过将处理组的肿瘤重量除以对照组的肿瘤重量来计算肿瘤生长抑制(T/Cweight)
c.基于肿瘤重量计算p值，其与预防性分组中的载体-预防性组和治疗性分组中的载体-治疗性组进行比较
评估KHJ、KH103和KHGD在治疗MDA-MB-436人乳腺癌异种移植物模型中的治疗功效。肿瘤接种后不同时间点的不同组的肿瘤大小的结果显示在表25和图55A-B中。
对于预防性分组，在肿瘤接种后第71天，载体处理的对照小鼠的平均肿瘤尺寸达到1,480mm3。用测试物品KHJ和KH103以表21和表22中详述的给药方案进行治疗产生了显著的抗肿瘤活性。它们的平均肿瘤尺寸分别为675和657mm3(T/C值分别为46％和44％，p＝0.112和0.102)，同时与载体组相比，肿瘤尺寸为600mm3的肿瘤生长延迟为15天和12天。KHGD预防性处理产生了很小的抗肿瘤活性，平均肿瘤尺寸为1,260mm3(T/C值＝85％)，并且与载体组相比，肿瘤生长仅延迟了4天，p值＝0.859。
对于治疗性分组，在肿瘤接种后第71天，载体处理的对照小鼠的平均肿瘤尺寸达到2,025mm3。阳性对照剂紫杉醇(1.5mg/kg，BIW×9周)的治疗产生统计学显著的抗肿瘤活性，平均肿瘤尺寸为637(T/C值＝31％；p＝0.006)，与载体组相比，肿瘤尺寸为600mm3的肿瘤生长延迟了23天。同时，KHJ和KH103治疗性处理显示出中等的抗肿瘤效力。它们的平均肿瘤尺寸为1,370和1,205mm3(T/C值分别为68％和60％，p＝0.315和0.150)，同时，肿瘤生长至600mm3延迟了10天和13天。KHGD治疗性处理被荷瘤动物良好地耐受，并且将肿瘤生长至600mm3仅延迟3天，并且在研究终止时不产生肿瘤抑制。
肿瘤重量的结果(表26)基本与肿瘤体积一致。
测试药剂KHJ、KH103和KHGD均被荷瘤动物良好地耐受。除了KHGD预防性处理组中的7只小鼠由于KHGD的3天全天供应而导致体重减轻16.7～26.1％之外(但是所有动物在剂量调整后恢复)，在所有处理组中没有观察到体重减轻。
总之，如表21和表22所示给药的测试药剂KHJ和KH103对MDA-MB-436人乳腺癌异种移植物模型产生中等的抗肿瘤活性。所有3种测试药剂KHJ、KH103和KHGD都被荷瘤动物良好地耐受。
DIO小鼠研究
根据饲料诱导的肥胖(DIO)小鼠中以下实验设计的治疗剂评估RAAS产品在小鼠中的功效。
DIO小鼠的产生：经过一周的适应后，小鼠随意喂食高脂肪粒状饲料(D12492i；Research Diets,Inc)和淡水。通常，C57BL/6J雄性小鼠在高脂肪饲料处理12～14周后变肥胖，轻度至中度高血糖并且发生葡萄糖耐量降低。在研究时小鼠优选为40～50g或更大。
组别设置(n＝10，4只小鼠用于免疫)：
阿托伐他汀 tid po 10mL/kg+随意饮水
载体对照 tid po 10mL/kg+随意饮水
Kunakin(KH103)治疗剂 tid po 10mL/kg+随意
Kunamin(KHJ)治疗剂 tid po 10mL/kg+随意
Kh gold(KHGD)治疗剂 tid po 10mL/kg+夜间随意饮水
允许动物自由获取高脂肪饲料和测试物品(水)60天。每周记录两次体重和食物摄入量。
血浆中的BG、胰岛素、TG、HDL-C、LDL-C和TCHO的水平每两周一次(基线在研究开始前测试(图68))。数据由Graph Pad Prism分析和绘制。
图61A-B显示了描述血糖水平和AUC(0-8周)的图。作为阳性对照的阿托伐他汀20mg/kg显著降低了血糖水平。KHGD显著降低了血糖水平。
图62A-B显示了描述胰岛素水平和AUC(0-8周)的图。作为阳性对照的阿托伐他汀20mg/kg显著增加了胰岛素敏感性。KHGD显著增加了胰岛素敏感性。
图63A-B显示了描述血浆TG水平和AUC(0-8周)的图。作为阳性对照的阿托伐他汀20mg/kg显著降低了血浆TG水平。所有测试物品都有降低血浆TG水平的趋势。
图64A-B显示了描述血浆TCHO水平和AUC(0-8周)的图。作为阳性对照的阿托伐他汀20mg/kg具有降低血浆TCHO水平的趋势。所有测试物品对血浆TCHO水平没有影响。
图65A-B显示了描述血浆HDL水平和AUC(0-8周)的图。作为阳性对照的阿托伐他汀20mg/kg显著降低了血浆HDL水平。KHGD显著增加了血浆HDL水平。
图66A-B显示了描述血浆LDL水平和AUC(0-8周)的图。作为阳性对照的阿托伐他汀20mg/kg具有降低血浆LDL水平的趋势。所有测试物品对血浆LDL水平都没有影响。
图67A-B显示了描述小鼠的体重和食物摄入量的图。作为阳性对照的阿托伐他汀20mg/kg显著降低了DIO小鼠的体重。所有测试物品对DIO小鼠的体重和食物摄入量没有影响。
下一步：在研究结束前为小鼠添加OGTT研究。血糖耐量测试应该比血糖和胰岛素更敏感。
收集末端肝脏样品用于生物标记分析。肝脏的改善也可以反映测试物品的功效。
利用本文所包含的信息，在不脱离所附权利要求的主旨和范围的情况下，对本主题所属领域的技术人员而言，对本主题精确描述的各种偏离将是显而易见的。由于优选实施方案和其他描述仅旨在说明当前提供的主题的特定方面，因此本主题不被认为在范围上局限于所定义的过程、特性或成分。实际上，对于化学、生物化学或相关领域的技术人员而言显而易见的用于实施本主题的所描述模式的各种修改均旨在落入随附权利要求的范围内。

Claims (20)

1.一种供人食用的食物组合物，其包含：
多种葡萄成分，
其中该多种葡萄成分包含来自葡萄的磨碎的果肉、种子、茎和皮，并且
其中该多种葡萄成分还包含一种或多种KH葡萄蛋白。
2.权利要求1的食物组合物，其中该食物组合物是粉末、果汁或其他饮料、食物补充剂或浓缩物。
3.权利要求2的食物组合物，其中该食物组合物是饮料，并且该KH葡萄蛋白包含KH103蛋白。
4.权利要求1的食物组合物，其中该KH葡萄蛋白包含KHJ蛋白。
5.权利要求4的食物组合物，其中该KHJ蛋白包含分子量与人免疫球蛋白和APOA-1蛋白的分子量相似的蛋白。
6.权利要求4的食物组合物，还包含活细胞。
7.权利要求1的食物组合物，其中该KH葡萄蛋白包含KH602蛋白。
8.权利要求1的食物组合物，其中该KH葡萄蛋白包含KH103蛋白与KHJ蛋白的组合。
9.权利要求8的食物组合物，其中该食物组合物为液体或粉末形式。
10.一种治疗患者的某种疾病的方法，包括用权利要求1的食物组合物对有此需要的患者进行给药，其中该食物组合物具有高于0％的KH葡萄蛋白的浓度。
11.权利要求10的方法，其中该某种疾病是癌症并且该给药抑制癌细胞的生长。
12.权利要求11的方法，其中该某种疾病是白血病并且该癌细胞包含白血病癌细胞。
13.权利要求12的方法，其中用该食物组合物进行给药旨在通过预防白血病发展来延长患者的寿命。
14.权利要求10的方法，其中在用KH葡萄蛋白给药后形成的健康细胞向受损的或有病的细胞发送信号，由此触发通过RNA进行的蛋白质的合成，以转化受损的或有病的细胞以变得健康，
其中该健康细胞向其他未受损的细胞发送信号以合成蛋白质以保护其他未受损的细胞免受损伤、感染以及免于发生DNA和其他细胞改变，并且
其中该健康细胞向患者身体发送信号以产生健康的新细胞，从而防止新细胞受到细胞内和细胞外损伤信号的影响。
15.一种治疗有需要的患者的高血糖水平的方法，其包括用权利要求1的食物组合物对有此需要的患者进行给药，其中该食物组合物具有高于0％的KH葡萄蛋白的浓度。
16.权利要求15的方法，其中该KH葡萄蛋白包含KHGD蛋白。
17.一种治疗有需要的患者的胰岛素敏感性的方法，其包括用权利要求1的食物组合物对有此需要的患者进行给药，其中该食物组合物具有高于0％的KH葡萄蛋白的浓度。
18.权利要求17的方法，其中该KH葡萄蛋白包含KHGD蛋白。
19.一种治疗有需要的患者的血浆TG水平的方法，其包括用权利要求1的食物组合物对有此需要的患者进行给药，其中该食物组合物具有高于0％的KH葡萄蛋白的浓度。
20.权利要求19的方法，其中该KH葡萄蛋白是从由KH103蛋白、KHJ蛋白、KHGD蛋白及它们的组合构成的群组中选出的。
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