CN108414608A - 一种对复杂反应体系中化学成分实时在线监测分析的方法及其专用装置 - Google Patents

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CN108414608A CN201810062504.4A CN201810062504A CN108414608A CN 108414608 A CN108414608 A CN 108414608A CN 201810062504 A CN201810062504 A CN 201810062504A CN 108414608 A CN108414608 A CN 108414608A
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Abstract

本发明公开了一种对复杂反应体系中化学成分实时在线监测分析的方法及其试验装置。该试验装置包括反应发生装置、精密蠕动泵、电喷雾萃取离子源和质谱仪；所述精密蠕动泵的进液管插入反应发生装置的内部，所述进液管的端口处连接有微孔滤膜，并从该端口处向所述进液管内插入一金属管；所述精密蠕动泵的出液管的出口端连接Y型三通，与所述精密蠕动泵同型号的另一精密蠕动泵的出液管的出口端连接于Y型三通，Y型三通的出口连接电喷雾萃取离子源中样品管道，连接方式为采用金属管桥接。利用本发明提供的在线分析装置以及提供的能够应用于复杂反应体系的化学成分在线监测分析的方法实现了对复杂反应体系的实时在线分析，具有极为重要的价值和意义。

Description

一种对复杂反应体系中化学成分实时在线监测分析的方法及 其专用装置
技术领域
本发明涉及一种对复杂反应体系中化学成分实时在线监测分析的方法及其专用装置。
背景技术
复杂反应体系是指反应物、产物成分较为复杂的一类化学反应体系，比如中药的煎煮体系、多组分有机反应体系和细胞培养代谢体系等，可能同时存在多种物态、多种反应原料、多种反应产物的反应体系。该类反应因成分复杂，基质干扰严重，传统的光谱、色谱分析方法多需要经过复杂冗长的样品预处理，浪费大量的人力物力，而且无法实现对反应体系中物质变化的持续在线监测，反应中间产物难以发现，造成了对该类反应的认识特别是机理的研究较为困难。
对于存在化学反应及物质变化的体系进行成分的分析，探究物质的变化过程和规律是具有重要意义的。为研究化学反应的成分变化过程，传统的分析方法多为间隔取点式，即间隔一定的时间段，分别取样分析，近似得到一个动态的变化规律。这种方式获得的只是一种近似拟合的结果，并不能准确反应真实情况，对于一些短暂存在的中间产物，很可能并不能观察到，这对反应机理的准确认识相当不利。所以建立一种能够应用于复杂反应体系的化学成分在线监测分析的方法具有极为重要的价值和意义。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种对复杂反应体系中化学成分实时在线监测分析的实验装置。
本发明所提供的对复杂反应体系中化学成分实时在线监测分析的实验装置，包括反应发生装置、精密蠕动泵、电喷雾萃取离子源(EESI离子源)和质谱仪；
所述精密蠕动泵的进液管插入所述反应发生装置的内部，从而使反应发生装置中的样品溶液持续精密泵出，所述进液管的进液口处连接有微孔滤膜，并从该端口处向所述进液管内插入一金属管；所述精密蠕动泵的出液管的出口端连接Y型三通，与所述精密蠕动泵同型号的另一精密蠕动泵(稀释泵)的出液管的出口端同样连接于所述Y型三通，用于对样品溶液进行稀释或混合多种溶液，所述Y型三通的出口连接电喷雾萃取离子源中样品管道，连接方式为采用金属管桥接；
所述电喷雾萃取离子源和所述质谱仪串联。
所述电喷雾萃取离子源包括电喷雾通道(萃取剂通道)和样品通道，所述电喷雾通道和样品通道两部分以一定角度交叉组成，在所述样品通道内和所述电喷雾通道内，分别对液体样品和萃取剂输入非氧化气体(如氮气)形成气液混合物，当气液混合物从所述电喷雾通道末端喷出时形成喷雾，使液体样品和萃取剂的成分充分混合进行萃取反应，然后使萃取产物连同萃取混合液一并进入所述质谱仪的进样口。
本发明中所述反应发生装置包括反应容器，根据反应需要还可包括加热装置(如功率可控的电热套)、冷凝管以及磁力搅拌装置。
所述微孔滤膜的规格具体可为0.22μm微孔滤膜。
所述硅胶软管的内径可根据实际对流量的需求进行选择，如0.5-2.4mm。
具体的，所述硅胶软管的内径可为0.5mm，与之匹配的金属管的内径为0.2mm。
所述金属管长度与硅胶软管伸入所述反应发生装置中的部分相适应，可适当调整长度。
本发明中所述蠕动泵的进液管和储液管均为硅胶软管。
本发明中向蠕动泵进液管中插入金属管有两个作用：第一可以减少硅胶软管中的样品溶液滞留，让分析更为及时；第二可以使硅胶软管入口沉入样品溶液，从内部吸取样品。
所述质谱仪具体可为LTQ-XL型线性离子阱质谱仪。
本发明的再一个目的是提供一种利用上述实验装置对复杂反应体系中化学成分实时在线监测分析的方法，包括下述步骤：
1)对反应装置中持续泵出的样品溶液实时在线进行电喷雾萃取电离质谱分析，实时采集各个物质的质谱图和谱峰数据；
EESI源参数的设置：电喷雾通道(或样品通道)与质谱进样口之间的角度α为120-170°(具体可为150°)，电喷雾通道和样品通道之间的角度β为20-120°(具体可为60°)；电喷雾通道出口(或样品通道出口)和质谱进样口之间的距离a为2-10mm(具体可为5mm)，电喷雾通道和样品通道之间的距离b为1-5mm(具体可为2mm)；萃取溶剂为甲醇-二氯甲烷-乙酸按照体积比50:50:1得到的混合溶剂系统，喷雾电压为2-5KV(具体可为3.5KV)，电喷雾流速5-15μL/min(具体可为10μL/min),样品流速5-15μL/min(具体可为10μL/min)；离子传输管温度100-250℃(具体可为180℃)；样品雾化气为氮气，压力0.8-1.5MPa(具体可为1.2MPa)；
串联质谱的参数设置：正离子模式，扫描范围m/z为300-1200Da，质谱扫描模式为选择反应扫描(SRM)；
其他参数由系统自动优化得到；
2)定性分析：根据步骤1)所得谱图中的质荷比，确定对应物质的准分子离子峰，结合质谱标准谱库检索及标准品匹对CID碎片数据对比，从而对待测样品中的物质进行定性分析；
3)定量分析：将定性分析确定的物质的标准品用溶剂稀释成成一系列浓度的标准溶液，按照步骤1)所述的方法进行质谱分析，采集所述标准品对应的谱图和谱峰数据，以各标准品特定碎片离子峰高与内标化合物特定碎片峰高之比为纵坐标，以各标准品浓度与内标浓度比值为横坐标；将步骤2)所得谱图中样品准分子离子峰高与内标化合物特定碎片峰高之比带入所述标准曲线，得到待测样品中与所述标准品相同的物质的浓度；
以药材生附片的水煮提取为例，采用上述方法对生附片水煮过程中溶液化学成分的变化进行定性、定量检测。
1)标准曲线的制备：
准确称取12种生物碱标准品各0.00010g，水为溶剂，配置成1.0mg/mL标准品母液；取各标准品溶液适量，合并稀释，使每1mL混标溶液中分别含乌头碱40μg、新乌头碱40μg、次乌头碱100μg、苯甲酰次乌头碱100μg、苯甲酰乌头原碱40μg、苯甲酰次乌头原碱40μg、乌头原碱40μg、次乌头原碱100μg、新乌头原碱40μg、松果灵30μg、滇乌头碱20μg、印乌头碱40μg，得混标母液，依次以5倍体积梯度稀释，得到一系列混合标准品溶液；采用内标法定量，内标物为盐酸小檗碱，内标浓度1.0μg/mL；采用上述的分析条件对系列混标溶液进行分析，以各个生物碱标准品准特定碎片离子峰高与内标化合物特定碎片峰高之比为纵坐标，以各个生物碱浓度与内标浓度的比值为横坐标，进行线性回归，分别制备12种生物碱的标准曲线回归方程；
2)待测的生附片水煮溶液中所述12种生物碱的定性和定性分析
将药材生附片置于反应发生装置中，加入二次去离子水，并加入内标盐酸小檗碱使其标浓度为10μg/mL，采用搭建的在线分析装置，药材于反应发生装置中浸泡后开始加热，样品蠕动泵速率1μL/min，稀释泵速率9μL/min，10倍稀释后进入EESI离子源，按照上述分析条件进行实时分析，采集各个样品的质谱图和谱峰数据；结合所述12种生物碱质谱标准谱库检索及所述12种生物碱标准品匹对CID碎片数据对比，进行定性分析；
根据定性分析的结果，分别记录所述12种生物碱对应的准分子离子峰；将每种生物碱的特定碎片离子峰高与内标化合物特定碎片峰高比值带入所述标准曲线回归方程中，分别计算得到生附片水煮溶液中12种生物碱的实时在线的浓度。
上述方法中，生附片与二次去离子水的配比为1g:5ml-1g:500ml；所述浸泡的时间为10-50min。
所述加热的功率为75-150W。
利用本发明提供的在线分析装置以及提供的能够应用于复杂反应体系的化学成分在线监测分析的方法实现了对复杂反应体系(如中药煎煮体系)的实时在线分析，具有极为重要的价值和意义。
附图说明
图1为本发明采用的实验装置图。
图2为EESI离子源结构图。
图3为内标盐酸小檗碱热稳定性曲线。
图4为附子水煮和附子与猪油共煮溶液中成分含量变化曲线(A.次乌头碱，B.新乌头碱，C.乌头碱，D.苯甲酰次乌头原碱，E.苯甲酰新乌头原碱，F.苯甲酰乌头原碱，G.次乌头原碱，H.新乌头原碱，I.乌头原碱，J.松果灵，K.印乌头碱，L.滇乌头碱)
图5为各化合物质谱二级谱图(A.松果灵，B.次乌头原碱，C.新乌头原碱，D.乌头原碱，E.苯甲酰次乌头原碱，F.苯甲酰新乌头原碱，G.苯甲酰乌头原碱，H.次乌头碱，I.印乌头碱，J.新乌头碱，K.乌头碱，L.滇乌头碱)。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，但本发明并不局限于此，凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实验材料与试剂：
生附子；盐酸小檗碱(上海安谱实验科技有限公司)；滇乌头碱(C35H49NO11)、印乌头碱(C34H47NO10)、乌头碱(C34H47NO11)、新乌头碱(C33H45NO11)、次乌头碱(C33H45NO10)、苯甲酰新乌头原碱(C31H43NO10)、苯甲酰次乌头碱(C31H43NO9)、苯甲酰乌头原碱(C32H45NO10)、乌头原碱(C25H41NO9)、次乌头原碱(C24H39NO8)、新乌头原碱(C24H39NO9)和宋果灵(C22H31NO3)等12个标准品购自于北京融诚鑫德科技发展有限公司；甲醇、二氯甲烷(ROE Scientific,Inc.,USA)；二次去离子水(实验室自制)。
实验仪器：
LTQ-XL型线性离子阱质谱仪(LTQ-XL,Finnigan,San Joes,CA)；EESI离子源(东华理工大学质谱科学与仪器实验室自主研制)；分析天平(METTLER TOLEDO仪器有限公司)；石英毛细管(ID 0.10mm,OD 0.15mm,Agilent Technologies Co.Ltd.,USA)；微量进样针(5mL,100μL,Hamiltion,USA)；蠕动泵(BT-100-2J,DG-1和DG-2泵头，保定兰格恒流泵有限公司)；注射泵(LSP02-2A,保定兰格恒流泵有限公司)；电热套(上海力辰邦西仪器科技有限公司)；超声波清洗仪(昆山舒美超声仪器有限公司)；移液枪(美国赛默飞世尔科技有限公司)；0.22μm微孔滤膜(天津市津腾实验设备有限公司)。
实施例
1、实验装置
实验装置如图1所示，本发明所提供的对复杂反应体系中化学成分实时在线监测分析的实验装置，包括反应发生装置、精密蠕动泵、电喷雾萃取离子源(EESI离子源)和质谱仪；
所述精密蠕动泵的进液管插入所述反应发生装置的内部，从而使反应发生装置中的样品溶液持续精密泵出，所述进液管插入所述反应发生装置的内部的端口处连接有0.22μm微孔滤膜，并从该端口处向所述进液管内插入一金属管；所述精密蠕动泵的出液管的出口端连接Y型三通，与所述精密蠕动泵同型号的另一精密蠕动泵(稀释泵)的出液管的出口端同样连接于所述Y型三通，用于对样品溶液进行稀释或混合多种溶液，所述Y型三通的出口连接电喷雾萃取离子源中样品管道，连接方式为采用金属管桥接；
所述电喷雾萃取离子源和所述质谱仪串联。
反应发生装置中，本实验所用的为中药材煎煮装置，采用一250mL三口圆底烧瓶。因本实验要求持续加热，长时间保持药液沸腾，故添加一球形冷凝管，防止水分挥发。加热装置为功率可控的电热套，烧瓶底部有一磁力搅拌子，保证溶液体系均一。
装置核心部位为恒速精密蠕动泵，通过硅胶软管，可以持续精密泵出反应体系中的样品溶液，本实施例为中药材煎煮反应体系，为防止药渣等固体颗粒物阻塞管道，采取双重措施，即药材采用双层纱布包裹，软管入口处连接0.22μm微孔滤膜。软管(i.d.0.5mm)自入口处插入一段金属管(i.d.0.2mm)，有两个作用，第一可以减少软管中的样品溶液滞留，让分析更为及时；第二可以使软管入口及滤头沉入样品溶液，从内部吸取样品。样品泵软管出口接一Y型三通，另一侧接一同型号蠕动泵，可用于对样品溶液进行稀释或混合多种溶液。本实施例中药材提取液浓度较大，另一管路接水，调节两个蠕动泵的流速，对药液稀释10倍后进离子源分析，Y型三通出口连接EESI离子源中样品管道，连接方式为采用金属管桥接。
电喷雾萃取离子源(Extractive Electrospray Ionization,EESI)结构如图1最右侧所示，该离子源由东华理工大学质谱科学与仪器实验室自行研制开发的。电喷雾萃取电离是在综合电喷雾电离(ESI)和电喷雾解吸电离(DESI)技术优点并引进液-液萃取理论与技术的基础上发明的新兴电离技术。与ESI相比，EESI耐受复杂基质的能力大大提高，同时具有较高的长期稳定性的灵敏度，能够在无需样品预处理的条件下对液体、气体和气溶胶样品进行直接电离，非常适合于进行实时在线分析。
2实验方法与结果
2.1样品制备
将新鲜生附子侧根与主根分离，去泥，洗净，切片，40℃下烘干，得生附片。准确称取干燥生附片5.00g，于锥形瓶中加入50mL二次去离子水，室温30℃超声提取30min，抽滤，得生附子超声水提液，用于质谱条件优化及定量方法学考察等。
2.2标准溶液的配制
准确称取12个生物碱标准品各0.00010g，水为溶剂，配置成1.0mg/mL标准品母液。取各标准品溶液适量，合并稀释，使每1mL混标溶液中分别含乌头碱40μg、新乌头碱40μg、次乌头碱100μg、苯甲酰次乌头碱100μg、苯甲酰乌头原碱40μg、苯甲酰次乌头原碱40μg、乌头原碱40μg、次乌头原碱100μg、新乌头原碱40μg、松果灵30μg、滇乌头碱20μg、印乌头碱40μg，得混标母液，依次以5倍体积梯度稀释，得到一系列混合标准品溶液。
2.3质谱条件
电喷雾萃取离子源(EESI)结构图如图2所示，实验中经过条件优化，电喷雾毛细管(或样品喷雾毛细管)与质谱进样口之间的角度α为150°，电喷雾毛细管和样品喷雾毛细管之间的角度β为60°。电喷雾毛细管(或样品喷雾毛细管)出口和质谱进样口之间的距离a为5mm，电喷雾毛细管出口和样品喷雾毛细管出口之间的距离b为2mm。雾化气采用氮气，氮气压力为1.2MPa，喷雾电压为3.5KV，电喷雾流速10μL/min,样品流速10μL/min，离子传输管温度180℃，萃取溶剂为甲醇-二氯甲烷-乙酸系统(50:50:1，v/v/v)，其他参数由系统自动优化得到。
设置LTQ-MS为正离子检测模式，扫描范围m/z为300-1200。
2.4标准曲线的绘制
本实验采用内标法定量，内标物为盐酸小檗碱，内标浓度1.0μg/mL，质谱扫描模式为选择反应扫描(SRM)，相关化合物的母离子及检测离子对信息见表1。采用既定的分析条件，对系列混标溶液进行分析，以样品特定碎片离子峰高与内标化合物特定碎片峰高的比值为纵坐标，以样品浓度与内标浓度的比值为横坐标，绘制标准曲线，结果见表2。
表1 13个化合物SRM扫描相关参数
2.5方法学考察
2.5.1线性关系及检测限、定量限
采用2.3中所述质谱分析条件，对2.2所制备的系列混合标准品溶液进行分析，以样品峰与内标峰的比值为纵坐标，以样品特定碎片离子峰高与内标化合物特定碎片峰高的比值为横坐标，绘制标准曲线，分别以信噪比(S/N)约为3和10时的样品浓度为检测限和定量限，12个生物碱类化合物的相关参数见表2。
表2 12个生物碱类化合物的标曲、线性关系、检测限和定量限
2.5.2重复性和精密度考察
取附子超声提取液做方法重复性考察，提取液稀释100倍，加内标使内标浓度1μg/mL，采用2.3所述质谱分析条件，平行重复6次，计算各化合物测得值的相对标准偏差(RSD)，考察该分析方法重复性。
精密度考察以高A、中、低三个浓度的混合标准品溶液为样品，每个浓度平行制样分析6次，计算各化合物分析结果的RSD，考察分析方法的精密度。相关结果见表3。
表3重复性和精密度考察
2.5.3内标热稳定性考察
因本研究为中药煎煮过程中成分的在线检测，实验中要对体系进行加热并持续沸腾，故需对内标化合物的热稳定性进行考察。制备1μg/mL的盐酸小檗碱水溶液，加入1/5体积猪油，加热，分别取加热0h,0.5h,1h,2h,3h,4h后的样品进行分析，观察内标化合物浓度是否稳定。其结果如图3所示，可见内标小檗碱在油水混合体系中加热含量保持稳定。
2.5.4基质效应考察
考察煎煮过程中溶出的复杂基质对目标成分含量测定的影响，取超声提取所得药液稀释100倍，平行制备三组样品，样品A为药液+水，样品B为药液+混合标准品溶液，样品C为混合标准品溶液+水，混标溶液设置高、中、低三个浓度分别考察，按2.3所示分析方法分析，所得各化合物浓度值代入公式：平行分析6次，计算均值及RSD，结果见表4。
表4基质效应考察
2.6附子水煮及与猪油共煮过程成分变化分析
根据上述已建立和考察的分析方法，对生附片水煮和与猪油共煮过程中溶液化学成分的变化进行定性、定量检测。
水煮实验采用药材生附片5g，加入50mL二次去离子水，内标(盐酸小檗碱)10μg/mL，采用搭建的在线分析装置，药材于烧瓶中浸泡30min后开始加热，加热功率125W，样品蠕动泵速率1μL/min，稀释泵速率9μL/min，10倍稀释后进入EESI离子源，实时分析。
与猪油共煮实验采用药材生附片5g，加入50mL二次去离子水，20mL猪油，加内标(盐酸小檗碱)10μg/mL，采用搭建的在线分析装置，药材于烧瓶中浸泡30min后开始加热，加热功率125W，样品蠕动泵速率1μL/min，稀释泵速率9μL/min，10倍稀释后进入EESI离子源，实时分析。
水煮实验、与猪油共煮实验中各成分含量变化曲线如图4所示，各曲线下面积(AUC)见表5。各化合物定性鉴定是通过与标准品匹对CID碎片数据完成的，相关化合物的质谱二级谱图见图5所示。
表5各化合物含量曲线下面积
注：-为不显著，*为显著，**为极显著。T1/2是依据5次实验均值点的高斯拟合方程计算获得；ΔT表示两者之差。
结合图4及表5，可以发现在对附子进行煎煮过程中，反应体系中是否添加猪油，对各类化合物特别是二酯型和单酯型乌头碱类化合物的含量变化具有显著影响。猪油的添加可以显著加快毒性化合物二酯型乌头碱类化合物的水解消失，同时加快了活性成分单酯型乌头碱类化合物的生成。
质谱的稳定性相对于紫外等其他检测器要弱，通常定量时结果上下波动较大，对数据分析时产生一定困难，因此本发明中引入两个参数：时间-浓度曲线下面积(AUC)和1/2最高浓度时对应的时间(T1/2)，来处理数据，在比较分析中，使结果更为直观，结论更为可靠。AUC基于各化合物时间-浓度曲线，通过软件origin 9.0获得，T1/2基于浓度时间拟合方程后求解获得，拟合用软件matlab R2016a进行高斯拟合，得到拟合方程后用R语言求解，获得二分之一最大值时对应的时间值。
如上表所示，可见除松果灵外，通过AUC检验，其他化合物在是否添加猪油的实验中结果具有显著性差异，相对应的T1/2也具有较大差异。这两个参数可相互补充，对于个别化合物，可能由于实验误差等原因单个参数检验不准确，如苯甲酰乌头原碱，虽AUC检验显著性较低，但T1/2具有较大差异，而新乌头碱的T1/2值差较小，但AUC差异显著，说明猪油的加入对二者还是具有显著影响。只有松果灵，AUC和T1/2值同时差异较小，可证实二者差异不显著，即猪油对其的影响较小。

Claims (9)

1.一种对复杂反应体系中化学成分实时在线监测分析的实验装置，包括反应发生装置、精密蠕动泵、电喷雾萃取离子源和质谱仪；
所述精密蠕动泵的进液管插入所述反应发生装置的内部，从而使反应发生装置中的样品溶液持续精密泵出，所述进液管的进液口处连接有微孔滤膜，并从该端口处向所述进液管内插入一金属管；所述精密蠕动泵的出液管的出口端连接Y型三通，与所述精密蠕动泵同型号的另一精密蠕动泵的出液管的出口端同样连接于所述Y型三通，用于对样品溶液进行稀释或混合多种溶液，所述Y型三通的出口连接电喷雾萃取离子源中样品管道，连接方式为采用金属管桥接；
所述电喷雾萃取离子源和所述质谱仪串联。
2.根据权利要求1所述的实验装置，其特征在于：所述电喷雾萃取离子源包括电喷雾通道和样品通道，所述电喷雾通道和样品通道两部分以一定角度交叉组成，在所述样品通道内和所述电喷雾通道内，分别对液体样品和萃取剂输入非氧化气体形成气液混合物，当气液混合物从所述电喷雾通道末端喷出时形成喷雾，使液体样品和萃取剂的成分充分混合进行萃取反应，然后使萃取产物连同萃取混合液一并进入所述质谱仪的进样口。
3.根据权利要求1或2所述的实验装置，其特征在于：所述质谱仪为LTQ-XL型线性离子阱质谱仪。
4.根据权利要求1-3任一项所述的实验装置，其特征在于：所述反应发生装置包括反应容器，还可包括加热装置、冷凝管以及磁力搅拌装置。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的实验装置，其特征在于：所述微孔滤膜的规格为0.22μm微孔滤膜；
所述蠕动泵的进液管和储液管均为硅胶软管。
6.一种利用权利要求1-5任一项所述的实验装置对复杂反应体系中化学成分实时在线监测分析的方法，包括下述步骤：
1)对反应装置中持续泵出的样品溶液实时在线进行电喷雾萃取电离质谱分析，实时采集各个物质的质谱图和谱峰数据；
EESI源参数的设置：电喷雾通道或样品通道与质谱进样口之间的角度α为120-170°，电喷雾通道和样品通道之间的角度β为20-120°；电喷雾通道出口或样品通道出口与质谱进样口之间的距离a为2-10mm，电喷雾通道和样品通道之间的距离b为1-5mm；萃取溶剂为甲醇-二氯甲烷-乙酸按照体积比50:50:1得到的混合溶剂系统，喷雾电压为2-5KV，电喷雾流速5-15μL/min,样品流速5-15μL/min；离子传输管温度100-250℃；样品雾化气为氮气，压力0.8-1.5MPa；
串联质谱的参数设置：正离子模式，扫描范围m/z为300-1200Da，质谱扫描模式为选择反应扫描；
2)定性分析：根据步骤1)所得谱图中的质荷比，确定对应物质的准分子离子峰，结合质谱标准谱库检索及标准品匹对CID碎片数据对比，从而对待测样品中的物质进行定性分析；
3)定量分析：将定性分析确定的物质的标准品用溶剂稀释成成一系列浓度的标准溶液，按照步骤1)所述的方法进行质谱分析，采集所述标准品对应的谱图和谱峰数据，以各标准品特定碎片离子峰高与内标化合物特定碎片峰高之比为纵坐标，以各标准品浓度与内标浓度比值为横坐标；将步骤2)所得谱图中样品准分子离子峰高与内标化合物特定碎片峰高之比带入所述标准曲线，得到待测样品中与所述标准品相同的物质的浓度。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述复杂反应体系为中药煎煮体系。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述中药煎煮体系为生附片的水煎煮体系，对生附片水煮过程中溶液化学成分的变化进行定性、定量检测的方法如下：
1)标准曲线的制备：
准确称取12种生物碱标准品各0.00010g，水为溶剂，配置成1.0mg/mL标准品母液；取各标准品溶液适量，合并稀释，使每1mL混标溶液中分别含乌头碱40μg、新乌头碱40μg、次乌头碱100μg、苯甲酰次乌头碱100μg、苯甲酰乌头原碱40μg、苯甲酰次乌头原碱40μg、乌头原碱40μg、次乌头原碱100μg、新乌头原碱40μg、松果灵30μg、滇乌头碱20μg、印乌头碱40μg，得混标母液，依次以5倍体积梯度稀释，得到一系列混合标准品溶液；采用内标法定量，内标物为盐酸小檗碱，内标浓度1.0μg/mL；对系列混标溶液进行电喷雾萃取电离质谱分析，采集各个生物碱标准品的质谱图和谱峰数据；以各个生物碱标准品准特定碎片离子峰高与内标化合物特定碎片峰高之比为纵坐标，以各个生物碱浓度与内标浓度的比值为横坐标，进行线性回归，分别制备12种生物碱的标准曲线回归方程；
2)待测的生附片水煮溶液中所述12种生物碱的定性分析和定量分析：
将药材生附片置于反应发生装置中，加入二次去离子水，并加入内标盐酸小檗碱使其标浓度为10μg/mL，采用搭建的在线分析装置，药材于反应发生装置中浸泡后开始加热，样品蠕动泵速率1μL/min，稀释泵速率9μL/min，10倍稀释后进入EESI离子源，按照步骤1)所述的分析条件进行实时分析，采集各个样品的质谱图和谱峰数据；结合所述12种生物碱质谱标准谱库检索及所述12种生物碱标准品匹对CID碎片数据对比，进行定性分析；
根据定性分析的结果，分别记录所述12种生物碱对应的准分子离子峰；将每种生物碱的特定碎片离子峰高与内标化合物特定碎片峰高比值带入所述标准曲线回归方程中，分别计算得到生附片水煮溶液中12种生物碱的实时在线的浓度。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述生附片与二次去离子水的配比为1g:5ml-1g:500ml；所述浸泡的时间为10-50min；所述加热的功率为75-150W。
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