CN108404113A - 用于抗辐射损伤的口服辐抗肽药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种药物组合物，其活性成分包括辐抗肽蛋白CBLB502，所述组合物可用于将辐抗肽蛋白CBLB502口服给予受试者，用于治疗或预防受试者辐射损伤。本发明的口服药物组合物给药方式简便，更容易应用。

Description

用于抗辐射损伤的口服辐抗肽药物组合物

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及用于抗辐射损伤的口服蛋白药物组合物。

背景技术

辐抗肽蛋白(原CBLB502)是沙门氏菌鞭毛蛋白衍生多肽，研究表明辐抗肽经腹腔或皮下注射对小鼠和恒河猴具有显著的辐射防护效果以及肝保护效果(王磊，等。Toll样受体5激动剂CBLB502蛋白的辐射防护作用，国际药学研究杂志，Vol.39，June，2012；申星，等。Toll样受体5激动剂CBLB502对7.0Gy60Coγ射线照射恒河猴的辐射防护作用观察，解放军医学杂志，2015,40(4):285-291；Wang L,et al.Toll-like receptor 5signalingrestrains T-cell/natural killer T-cell activation and protects againstconcanavalin A-induced hepatic injury.Hepatology.2017，65(6):2059-2073)。注射辐抗肽蛋白发挥抗辐射作用的主要机制是通过体内肝细胞以及免疫细胞表面TLR5受体激活细胞内NF-kB信号通路抑制辐射引起的细胞凋亡，同时诱导细胞分泌细胞因子进入血液发挥功能，进而达到保护组织免受或者减轻损伤的效果。

然而，口服蛋白类物质，由于众所周知的原因，蛋白质的分子量比较大，人的消化道是不能直接吸收的，需要先分解成氨基酸以后才能被人体吸收，所以可以认为蛋白质口服会失效。被吸收后的氨基酸可以重新合成对人体有用的各种蛋白质。如果口服的蛋白质没有被消化分解完全，则会通过肠道排泄出体外。酶的降解是导致蛋白类药物口服生物利用度低的主要因素之一。并且，蛋白质和多肽分子对肠道黏膜的低通透性，进入肠道的药物分子必须依次穿过粘膜层、水层、上皮层，经基底膜进入毛细血管，而蛋白质和多肽类药物分子量大，脂溶性差，难以透过肠道黏膜。

为克服上述问题，虽然现有技术中对蛋白质和多肽类药物口服给药进行了一系列的研究，取得了一定的进展，但现有技术中蛋白质口服给药的反应机理均是穿过屏障到达体内发挥作用，且均需要与诸如微粒给药系统、内源性细胞转运系统、应用酶抑制剂和粘附给药系统等进行联合使用，如Damge等最早制备了胰岛素毫微球，糖尿病大鼠口服后，血糖值20d内下降，但口服游离胰岛素则无效。

本发明通过对小鼠动物模型，发现灌胃口服高剂量辐抗肽注射液后，可以提高照射小鼠的存活率和外周血象，以及血液中细胞因子水平；此外，通过给大鼠口服辐抗肽肠溶胶囊制剂，提高受照射大鼠的存活率，外周血象，减轻大鼠的出血损伤症状。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于治疗或预防受试者辐射损伤的药物组合物，其活性成分包括辐抗肽蛋白CBLB502，所述组合物可用于将辐抗肽蛋白CBLB502口服给予受试者。

根据本发明，辐抗肽蛋白指的是CBLB502蛋白，其可以在市场上商购或按照现有技术已知的方法制备，其具体的制备方法可参见申请号为201110257680.1的“一种重组细菌鞭毛蛋白衍生多肽的制备和活性鉴定方法”的专利申请。

不同于常规的口服蛋白药物需要通过肠道黏膜等屏障进入体内发挥作用，本发明人发现了在哺乳动物肠道上皮细胞表达有TLR5受体:固有免疫应答能通过模式识别受体来感受细胞内外环境的病原体，发起信号激活宿主第一道防御线杀死病原体，Toll样受体(TLR)是一类最关键的模式识别受体(PRRs)。在体内TLR5信号通路主要参与由组织损伤或机体应激产生的内源性配体介导的免疫炎症反应，这种TLR介导的识别模式又称为损伤相关分子模式(PAMPs)。在肠道上皮细胞亦表达有TLR5受体，并识别入侵的细胞鞭毛等病原体，在肠道系统性免疫和粘膜免疫中起重要作用，这种模式主要是由各种病原体引发的，又称为病原相关分子模式(DAMPs)。

因此，当辐抗肽蛋白进入肠道后，有可能与肠上皮细胞表面TLR5受体结合，在肠上皮细胞中诱发信号通路反应，而不需要穿过肠道黏膜屏障进入血液，这种反应方式与辐抗肽蛋白注射给药是完全不同的反应机制，也完全不同于常规的口服蛋白类药物。

常规的辐抗肽蛋白注射给药方式主要是通过体内肝细胞及免疫细胞表面TLR5受体激活细胞内NF-kB信号通路发挥作用，更多的参与损伤相关分子模式。而口服时辐抗肽虽然无法通过体内肝/免疫细胞机制起作用，但有可能直接与肠道细胞TLR5受体结合，更多地通过病原相关分子识别模式发挥功能。辐抗肽口服方式的机制主要是通过与肠道上皮细胞TLR5受体结合发挥作用，与现有的蛋白质口服给药技术不同，不是通过改善给药系统穿过肠道黏膜提高药物吸收率和生物利用度来发挥作用，因此可以避免现有口服蛋白药物活性灭失的缺点。

在本发明的一个具体实施方案中，所述组合物的活性成分由辐抗肽蛋白CBLB502组成，不同于常规的口服蛋白给药需要与微粒给药系统、内源性细胞转运系统或应用酶抑制剂等进行联合使用，本发明的口服药物组合物以辐抗肽蛋白CBLB502作为唯一活性成分，将辐抗肽蛋白CBLB502直接进行灌胃给药，可提高受试者辐射后的存活率或外周血象指标。

在一个具体实施方案中，本发明的口服药物组合物还包括包衣，所述包衣可抑制组合物在受试者胃中消化。

在本发明的一个具体实施方案中，包衣抑制所述组合物在个体的胃中消化。在一个实施方案中，本发明的包衣剂型在pH移向碱性范围时释放药物。在一个实施方案中，包衣是单层包衣，其中在其他实施方案中，是多层施用的包衣。在一个实施方案中，肠溶衣是肠溶薄膜包衣。在一些实施方案中，包衣包含可生物降解的多糖、壳聚糖、含水肠溶衣、乙基纤维素水分散体、水凝胶、明胶等或其组合。在一个实施方案中，如本领域技术人员已知，将根据期望的释放部位和/或特征来使用pH敏感性包衣。

在本发明的一个具体实施方案中，所述包衣是肠溶衣。关于肠溶衣的方法是本领域熟知的，每种方法都代表本发明的单独实施方案。

在本发明的另一个实施方案中，所述包衣是明胶包衣，施用明胶包衣的方法在本领域是已知的。每种方法都代表本发明的单独实施方案。

在本发明的另一个实施方案中，所述组合物还包括赋形剂、稀释剂或载体。

在本发明的另一个实施方案中，所述组合物为液体口服组合物。

在本发明的另一个实施方案中，所述组合物用于将辐抗肽蛋白CBLB502口服给予受试者。

在本发明的另一个实施方案中，所述组合物用于治疗受试者辐射损伤；优选地，所述组合物用于提高受试者辐射后的存活率。

本发明还提供了所述口服药物组合物在制备用于治疗辐射损伤的药物中的用途。

在本发明的一个优选实施方案中，其中所述药物组合物的唯一活性成分为辐抗肽蛋白CBLB502。

在本发明的一个优选实施方案中，所述药物组合物还包括包衣；优选地，所述包衣为肠溶衣或明胶包衣。

本发明的优点是本发明提供了一种口服辐抗肽药物组合物，其给药方式简便，更容易应用。灌胃口服高剂量辐抗肽溶液后，可以提高受试者的存活率和外周血象指标，以及血液中细胞因子水平；此外，通过给药口服辐抗肽肠溶胶囊制剂，可提高受照射受试者的存活率，外周血象，减轻出血损伤症状。

附图说明

图1为γ射线照射后小鼠的存活率示意图；其中，a为阳性组，其在射线照射之前腹腔注射辐抗肽4ug/只；b为实验组，其在射线照射前灌胃口服辐抗肽蛋白溶液，给药剂量为蛋白含量5mg/只；c为对照组，其在射线照射前灌胃等体积磷酸盐缓冲液；

图2为小鼠给药后不同时间的外周血象指标变化示意图；

图3为给药后小鼠的外周血抗辐射相关细胞因子的表达变化示意图；

图4为γ射线照射后大鼠的存活率变化示意图；其中，a为实验组2，其在γ射线照射前2小时，口服辐抗肽胶囊两粒；b为实验组1，其在γ射线照射前2小时，口服辐抗肽胶囊一粒；c为对照组，其在γ射线照射前2小时，给药PBS溶液；

图5为γ射线照射后大鼠的体征损伤图；其中，a为对照组，b为实验组1；

图6为在射线照射之前2小时口服给药辐抗肽胶囊后大鼠的外周血象变化示意图。

具体实施方式

为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。

实施例1

本实施例使用的实验动物为C57BL/6小鼠，18～22g，将小鼠随机分为两组，每组20只。实验组小鼠灌胃口服辐抗肽蛋白溶液(蛋白含量5mg/只)，对照组灌胃等体积磷酸盐缓冲液，阳性组小鼠腹腔注射辐抗肽4ug/只。各组小鼠给药后经8.0Gy剂量γ射线照射后，观察30天存活率(图1)

结果如图1所示，可以看出,小鼠口服灌胃后，辐抗肽可以显著提高照射小鼠的存活率。

实施例2

本实施例使用的实验动物为C57BL/6小鼠，18～22g，将小鼠随机分为两组，每组20只。实验组C57BL/6小鼠经灌胃口服辐抗肽，给药剂量为5mg/只，阳性对照组小鼠经腹腔注射辐抗肽溶液给药，给药剂量为4ug/只。分别于给药后1小时、3小时、6小时、12小时、14小时，尾静脉采血检测外周血象，检测白细胞WBC、中性粒细胞NEUT和血小板PLT的水平。

实验结果如图2所示，可以看出，在照射后恢复期内，口服辐抗肽给药组受照射小鼠的外周血中白细胞、中性粒细胞以及血小板数量高于注射对照组，并且恢复期提前。

实施例3

本实施例使用的实验动物为C57BL/6小鼠，18～22g，将C57BL/6小鼠经灌胃口服辐抗肽，给药剂量5mg/只，分别于给药后1小时、3小时、6小时采血检测外周血中抗辐射相关细胞因子G-CSF和IL-6的表达。

实验结果如图3所示，可以看出，C57BL/6小鼠在口服辐抗肽后，外周血中细胞因子G-CSF和IL-6的表达显著升高，并分别在3小时和1小时达到最高水平。

实施例4

辐抗肽蛋白经冷冻干燥处理后装入常规制备的微型肠溶胶囊，装量50ug/粒。选取SD大鼠，体质量为300-350g，将其分为三组，每组10只。

实验组1：在9.0Gyγ射线照射前2小时，口服辐抗肽胶囊一粒(150ug/kg)

实验组2：在9.0Gyγ射线照射前2小时，口服辐抗肽胶囊两粒(300ug/kg)，

对照组：在9.0Gyγ射线照射前2小时，给药PBS溶液；

给药2小时之后，进行9.0Gyγ射线照射。

观察照射后30天存活率和体征损伤。

实验结果如图4和图5所示，由图4可以看出，SD大鼠口服辐抗肽肠溶胶囊后，受照射大鼠的实验组存活率高于PBS对照组大鼠。

由图5可以看出，口服给药组大鼠受照射后眼、口鼻等处粘膜溃疡等损伤明显比对照组大鼠减轻。

实施例5

本实施例实验动物选取SD大鼠，300-350g，将其口服辐抗肽胶囊一粒(150ug/粒)，对照组给药PBS溶液，给药后2小时，对其进行6.0Gyγ射线照射，然后分别于第0d、5d、10d、15d、20d、25d、30d、35d尾静脉采血检测外周血象，检测白细胞WBC、中性粒细胞NEUT和血小板PLT的水平。

实验结果如图6所示，由图6可以看出，口服给药后，受照大鼠外周血中白细胞、中性粒细胞以及血小板指标均高于对照组大鼠的指标。

显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方式予以穷举，凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。

Claims (10)

1.一种用于治疗或预防受试者辐射损伤的药物组合物，其特征在于，其活性成分包括辐抗肽蛋白CBLB502，所述组合物可用于将辐抗肽蛋白CBLB502口服给予受试者。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，辐抗肽蛋白CBLB502为所述组合物的唯一活性成分。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物还包含包衣；

优选地，所述包衣为肠溶衣或明胶包衣。

4.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物还包括赋形剂、稀释剂或载体。

5.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物为液体口服组合物。

6.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物用于将辐抗肽蛋白CBLB502口服给予受试者。

7.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物用于提高受试者辐射后的存活率。

8.权利要求1所述的药物组合物在制备用于治疗辐射损伤的药物中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其中所述药物组合物的唯一活性成分为辐抗肽蛋白CBLB502。

10.根据权利要求9所述的应用，所述药物组合物还包括包衣；优选地，所述包衣为肠溶衣或明胶包衣。