CN108384837A - 一种基于荧光定量系统的lamp定量方法 - Google Patents
一种基于荧光定量系统的lamp定量方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108384837A CN108384837A CN201810265404.1A CN201810265404A CN108384837A CN 108384837 A CN108384837 A CN 108384837A CN 201810265404 A CN201810265404 A CN 201810265404A CN 108384837 A CN108384837 A CN 108384837A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lamp
- tcda
- syto
- quantitative
- dye
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000013459 approach Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 claims abstract description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 16
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 16
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 11
- 238000005457 optimization Methods 0.000 claims description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 11
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 6
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 4
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 claims description 4
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 claims description 4
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 claims description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 3
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 238000007397 LAMP assay Methods 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000605909 Fusobacterium Species 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- CGNLCCVKSWNSDG-UHFFFAOYSA-N SYBR Green I Chemical compound CN(C)CCCN(CCC)C1=CC(C=C2N(C3=CC=CC=C3S2)C)=C2C=CC=CC2=[N+]1C1=CC=CC=C1 CGNLCCVKSWNSDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- XZTWHWHGBBCSMX-UHFFFAOYSA-J dimagnesium;phosphonato phosphate Chemical compound [Mg+2].[Mg+2].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XZTWHWHGBBCSMX-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 101150032575 tcdA gene Proteins 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6851—Quantitative amplification
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种基于荧光定量系统的LAMP定量方法，该方法利用荧光定量PCR仪就能实现LAMP定量，将LAMP技术与荧光定量技术结合，建立了一种基于荧光定量系统的LAMP定量方法，该方法可以达到定量的目的，同时操作简单、灵敏度高、重复性好，使LAMP检测更加精准便捷。为实现LAMP精准定量开拓了一个新方向。
Description
技术领域
本发明属于基因定量领域，更具体地说，尤其涉及一种基于荧光定量系统的LAMP定量方法。
背景技术
环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）是2000年由日本科学家Notomin提出的一种核酸扩增新技术。它利用Bst DNA 聚合酶及4-6条引物，可以在60-65℃环境下，通过链置换反应直接扩增目的片段，且反应时间仅需15-60min。LAMP技术近年已被大量推广用于病原微生物的检测。
目前LAMP技术多用于定性实验，也可通过浊度仪检测副产物焦磷酸镁沉淀，从而间接达到基因定量的目的，该方法所需浊度仪应用范围较窄，且仪器成本高。而实时荧光定量PCR（qPCR）是一项比较成熟的基因定量技术，目前市场存在多种用于该实验的荧光染料，如SYBR Green I，Evagreen，SYTO-82等。
本发明将LAMP技术与荧光定量技术结合，建立了一种基于荧光定量系统的LAMP定量方法。该方法可以达到定量的目的，同时操作简单、灵敏度高、重复性好，使LAMP检测更加精准便捷。为实现LAMP精准定量开拓了一个新方向。
发明内容
本发明的目的在于提供一种基于荧光定量系统的LAMP定量方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种基于荧光定量系统的LAMP定量方法，该方法利用荧光定量PCR仪实现LAMP定量，采用2种常用荧光染料测试LAMP反应，并对染料浓度进行筛选确定，具体包括以下内容：
Evagreen染料浓度的优化，该染料低浓度对PCR及LAMP抑制作用较小，优化浓度为：0.2X, 0.6X, 1.0X, 1.4X, 1.8X, 2.2X；
SYTO-82染料浓度的优化，SYTO-82是一种稳定性高，信噪比低的荧光染料，低浓度对PCR及LAMP抑制作用较小，优化浓度为：45μM, 35μM, 25μM, 15μM, 5μM, 2.5μM；
本发明建立的LAMP定量体系为：总体积20μL，包括：1x Thermopol buffer (20 mMTris-HCl，(pH8.8)，10 mM KCl，10 mM(NH4)2SO4，2 mM MgSO4，0.1%.Triton X-100)，6 mMMgSO4，1.4 mM dNTPs，0.8 M 甜菜碱，0.2 μM外引物（tcdA-F3,tcdA-B3），1.6μM 内引物（tcdA-FIP,tcdA-BIP），0.8μM环引物（tcdA-LB），320 U/mL Bst DNA 聚合酶 0.2X-2.2XEvagreen 或2.5-45μM SYTO-82 ，模板DNA 1μL，ddH2O补足至20μL。LAMP荧光定量检测程序为：63℃ 15s； 63℃ 30s，63℃ 30s,60个循环；95℃ 2min;25℃ 2min。95℃ 2 min处理使酶失活，可以有效降低污染率，25℃ 2 min使反应体系恢复至室温，避免下机时离心管盖弹开，造成气溶胶污染。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明将LAMP技术与荧光定量技术结合，建立了一种基于荧光定量系统的LAMP定量方法，该方法可以达到定量的目的，同时操作简单、灵敏度高、重复性好，使LAMP检测更加精准便捷，为实现LAMP精准定量开拓了一个新方向。
附图说明：
图1：不同浓度荧光染料Evagreen测试LAMP荧光图
图2：不同浓度荧光染料SYTO-82测试LAMP荧光图
图3：Evagreen测试艰难梭菌荧光图
图4：SYTO-82测试艰难梭菌荧光图
图5：Evagreen 测试艰难梭菌标准曲线
图6：SYTO-82测试艰难梭菌标准曲线。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
一种基于荧光定量系统的LAMP定量方法，该方法利用荧光定量PCR仪实现LAMP定量，对qLAMP所用染料浓度进行筛选，并基于该染料，建立检测艰难梭菌tcdA基因标准曲线具体包括以下内容：
具体实施例1：qLAMP使用Evagreen染料和SYTO-82染料浓度优化
实验材料：艰难梭菌(Clostridium difficile, ATCC 43255)过夜培养，提取DNA备用。所用引物如下：
tcdA-F3：GCCATATTYTTTAGATTCAGACAA
tcdA-B3：CTAAAAAAAGAAYTAGAAGCTAAGG
tcdA-FIP：GCTGGTATATCTGCRGGAATACYTRTTTACCACTGAAGTTGCCTT
tcdA-BIP：TTCAGCACCTATTCCAACAATTGAGGGTGTTTTAGCAATAAATATGTCA
tcdA-LB：AGCTACMGTTGCAGCTATAGA
实验方法：Evagreen染料浓度的优化，优化浓度梯度为：0.2X, 0.6X, 1.0X, 1.4X,1.8X, 2.2X；
SYTO-82染料浓度的优化，LAMP优化浓度梯度为：45μM, 35μM, 25μM, 15μM, 5μM, 2.5μM；
染料优化LAMP定量体系为：总体积20μL，包括：1x Thermopol buffer (20 mM Tris-HCl，(pH8.8)，10 mM KCl，10 mM(NH4)2SO4，2 mM MgSO4，0.1%.Triton X-100)，6 mM MgSO4，1.4 mM dNTPs，0.8 M 甜菜碱，0.2 μM外引物（tcdA-F3,tcdA-B3），1.6 μM 内引物（tcdA-FIP,tcdA-BIP），0.8 μM环引物（tcdA-LB），320 U/mL Bst DNA 聚合酶0.2X-2.2X Evagreen或2.5-45μM SYTO-82，艰难梭菌DNA 1 μL，ddH2O补足至20μL。LAMP荧光定量检测程序为：63℃ 15s； 63℃ 30s，63℃ 30s，60个循环；95℃ 2min；25℃ 2min。
结果：2种荧光染料均显示，浓度越低，对体系抑制作用越小，反应时间也越短；同时荧光强度也越弱。综合考虑染料抑制作用和荧光强度，Evagreen染料最适浓度为1X,SYTO-82的最适浓度为15 μM。
具体实施例2：基于Evagreen染料和SYTO-82染料，建立检测艰难梭菌tcdA基因标准曲线。
实验材料：艰难梭菌(Clostridium difficile, ATCC 43255)过夜培养，提取DNA备用，分别用2种常用的荧光染料： Evagreen和SYTO-82对艰难梭杆菌tcdA基因进行荧光定量实验。所用引物如下：
tcdA-F3：GCCATATTYTTTAGATTCAGACAA
tcdA-B3：CTAAAAAAAGAAYTAGAAGCTAAGG
tcdA-FIP：GCTGGTATATCTGCRGGAATACYTRTTTACCACTGAAGTTGCCTT
tcdA-BIP：TTCAGCACCTATTCCAACAATTGAGGGTGTTTTAGCAATAAATATGTCA
tcdA-LB：AGCTACMGTTGCAGCTATAGA
实验方法：提取艰难梭菌DNA，并稀释DNA样本至10ng/μL，1ng/μL, 100pg/μL, 10pg/μL, 1pg/μL, 100fg/μL, 10fg/μL, 1fg/μL。以这些样本为模板，分别以荧光染料浓度分别为Evagreen 1X, SYTO-82 15μM进行荧光定量扩增。
LAMP定量体系为：总体积20μL，包括：1x Thermopol buffer (20 mM Tris-HCl，(pH8.8)，10 mM KCl，10 mM(NH4)2SO4，2 mM MgSO4，0.1%.Triton X-100)，6 mM MgSO4，1.4mM dNTPs，0.8 M 甜菜碱，0.2 μM外引物（tcdA-F3,tcdA-B3），1.6 μM 内引物（tcdA-FIP,tcdA-BIP），0.8 μM环引物（tcdA-LB），320 U/mL Bst DNA 聚合酶，1X Evagreen 或15 μMSYTO-82，艰难梭菌DNA 1 μL，ddH2O补足至20μL。LAMP荧光定量检测程序为：63℃ 15s；60个循环：63℃ 30s，63℃ 30s；95℃ 2min；25℃ 2min。
结果:2种荧光染料测试结果均显示以该方法对艰难梭菌检测的最低检测限为1pg/ul。且标准曲线R2＞0.950。
Evagreen 测试艰难梭菌的标准曲线线性方程为：y= -0.941ln(x)+ 26.163，R²=0.9694。其中：x为模板DNA浓度，y为CT值，R2为线性相关系数。从结果来看，R2为0.9694，这表明建立的基于Evagreen LAMP定量检测艰难梭菌是可行的。
SYTO-82 测试艰难梭菌的标准曲线线性方程为：y= -1.093ln(x)+ 28.271，R =0.9743。其中：x为模板DNA浓度，y为CT值，R2为线性相关系数。从结果来看，R2为0.9743，这表明建立的基于SYTO-82 LAMP定量检测艰难梭菌是可行的。
综上所述，基于荧光定量系统的LAMP定量是可行的。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (1)
1.一种基于荧光定量系统的LAMP定量方法，该方法利用荧光定量PCR仪实现LAMP定量，采用2种常用荧光染料测试LAMP反应，并对染料浓度进行筛选确定，具体包括以下内容：
Evagreen染料浓度的优化，该染料低浓度对PCR及LAMP抑制作用较小，优化浓度梯度为：0.2X, 0.6X, 1.0X, 1.4X, 1.8X, 2.2X；
SYTO-82染料浓度的优化，SYTO-82是一种稳定性高，信噪比低的荧光染料，低浓度对PCR及LAMP抑制作用较小，优化浓度梯度为：45μM, 35μM, 25μM, 15μM, 5μM, 2.5μM；
本发明建立的LAMP定量体系为：总体积20μL，包括：1x Thermopol buffer (20 mMTris-HCl，(pH8.8)，10 mM KCl，10 mM (NH4)2SO4，2 mM MgSO4，0.1%.Triton X-100)，6 mMMgSO4，1.4 mM dNTPs，0.8 M 甜菜碱，0.2μM外引物（tcdA-F3,tcdA-B3），1.6μM 内引物（tcdA-FIP,tcdA-BIP），0.8μM环引物（tcdA-LB），320 U/mL Bst DNA 聚合酶，0.2X-2.2XEvagreen 或2.5-45μM SYTO-82，模板DNA 1μL，ddH2O补足至20μL；
LAMP荧光定量检测程序为：63℃ 15s； 63℃ 30s，63℃ 30s，60个循环；95℃ 2min；25℃，2min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810265404.1A CN108384837A (zh) | 2018-03-28 | 2018-03-28 | 一种基于荧光定量系统的lamp定量方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810265404.1A CN108384837A (zh) | 2018-03-28 | 2018-03-28 | 一种基于荧光定量系统的lamp定量方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108384837A true CN108384837A (zh) | 2018-08-10 |
Family
ID=63072953
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810265404.1A Pending CN108384837A (zh) | 2018-03-28 | 2018-03-28 | 一种基于荧光定量系统的lamp定量方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108384837A (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006333785A (ja) * | 2005-06-02 | 2006-12-14 | Japan Health Science Foundation | ＬＡＭＰ法を用いたクロストリディウム・ディフィシルｔｏｘｉｎＢ遺伝子検出方法およびこの方法に用いるプライマーセット |
| CN101402998A (zh) * | 2008-10-15 | 2009-04-08 | 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 产毒素b艰难梭菌环介导等温扩增快速检测方法 |
| CN102154456A (zh) * | 2010-12-29 | 2011-08-17 | 中国检验检疫科学研究院 | 牛结核病病原体荧光定量lamp的检测方法 |
| CN103497947A (zh) * | 2013-09-13 | 2014-01-08 | 浙江国际旅行卫生保健中心 | 一种体外新型快速环介导等温扩增方法、体外检测甲型h1n1流感病毒的试剂及方法 |
| CN104328204A (zh) * | 2014-11-20 | 2015-02-04 | 南方医科大学南方医院 | 艰难梭菌ab毒素的lamp检测方法及其专用引物与试剂盒 |
-
2018
- 2018-03-28 CN CN201810265404.1A patent/CN108384837A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006333785A (ja) * | 2005-06-02 | 2006-12-14 | Japan Health Science Foundation | ＬＡＭＰ法を用いたクロストリディウム・ディフィシルｔｏｘｉｎＢ遺伝子検出方法およびこの方法に用いるプライマーセット |
| CN101402998A (zh) * | 2008-10-15 | 2009-04-08 | 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 产毒素b艰难梭菌环介导等温扩增快速检测方法 |
| CN102154456A (zh) * | 2010-12-29 | 2011-08-17 | 中国检验检疫科学研究院 | 牛结核病病原体荧光定量lamp的检测方法 |
| CN103497947A (zh) * | 2013-09-13 | 2014-01-08 | 浙江国际旅行卫生保健中心 | 一种体外新型快速环介导等温扩增方法、体外检测甲型h1n1流感病毒的试剂及方法 |
| CN104328204A (zh) * | 2014-11-20 | 2015-02-04 | 南方医科大学南方医院 | 艰难梭菌ab毒素的lamp检测方法及其专用引物与试剂盒 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| IGOR P. OSCORBIN ET AL.: ""Comparison of fluorescent intercalating dyes for quantitative loop-mediated isothermal amplification (qLAMP)"", 《BIOTECHNIQUES》, vol. 61, no. 1, 31 July 2016 (2016-07-31), pages 21 * |
| 谭贵良: "《现代分子生物学及组学技术在食品安全检测中的应用》", 30 June 2014, 中山大学出版社, pages: 138 - 140 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US9856525B2 (en) | Digital assays with associated targets | |
| US20180023118A1 (en) | Nicking and Extension Amplification Reaction for the Exponential Amplification of Nucleic Acids | |
| Michaeli et al. | Optical detection of epigenetic marks: sensitive quantification and direct imaging of individual hydroxymethylcytosine bases | |
| US20100184159A1 (en) | Compositions, Methods, and Kits for Selective Amplification of Nucleic Acids | |
| EP3339451A1 (en) | Primers for detecting influenza by using lamp, and use thereof | |
| US20060286558A1 (en) | Normalization of samples for amplification reactions | |
| CN106399517B (zh) | 一种多交叉恒温扩增结合金纳米生物传感的核酸检测技术 | |
| Wang et al. | Exponential amplification of DNA with very low background using graphene oxide and single-stranded binding protein to suppress non-specific amplification | |
| US20070037184A1 (en) | Methods and kits for evaluating dna methylation | |
| US20220333183A1 (en) | Assay methods and kits for detecting rare sequence variants | |
| CN112322705A (zh) | 一种用于多重核酸检测的恒温扩增荧光rma方法 | |
| Wang et al. | A ligation/recombinase polymerase amplification assay for rapid detection of SARS-CoV− 2 | |
| Han et al. | Isothermal gene amplification coupled MALDI-TOF MS for SARS-CoV-2 detection | |
| TWI465572B (zh) | Method, composition and system of amplification and detection of target microbial DNA | |
| CN111926114A (zh) | 一种检测副流感病毒多重real-time PCR试剂盒、方法和应用 | |
| CN113736858B (zh) | 一种环状寡核苷酸探针介导的核酸扩增子的实时监测方法 | |
| Wang et al. | Endonuclease restriction-mediated real-time polymerase chain reaction: a novel technique for rapid, sensitive and quantitative detection of nucleic-acid sequence | |
| Huang et al. | Identification of 8 foodborne pathogens by multicolor combinational probe coding technology in a single real-time PCR | |
| US11377683B2 (en) | Looped primer and loop-de-loop method for detecting target nucleic acid | |
| WO2012142003A2 (en) | Chemical ligation | |
| US11555222B2 (en) | PCR controls | |
| CN108384837A (zh) | 一种基于荧光定量系统的lamp定量方法 | |
| CN109097449B (zh) | 一种基于金属钌配合物的实时荧光lamp检测方法及试剂盒 | |
| Berard et al. | DNA nucleic acid sequence-based amplification-based genotyping for polymorphism analysis | |
| Fang et al. | Hydrogel-compartmentalized heterogeneous amplification for viral digital genotyping |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Xiao Chuanxing Inventor after: Wang Qizhi Inventor after: Yang Luxi Inventor after: Ke Xiquan Inventor after: Li Dapeng Inventor after: Li Xiaoyan Inventor before: Yang Luxi Inventor before: Li Xiaoyan |
|
| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20190709 Address after: Room W606A, Taiwanese Science and Technology Enterprise Development Center, No. 88 Xiangxing Road, Torch High-tech Zone, Xiamen City, Fujian Province, 361000 Applicant after: XIAMEN LANTE BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Applicant after: THE FIRST AFFILIATED HOSPITAL OF BENGBU MEDICAL College Address before: Room W606A, Taiwanese Science and Technology Enterprise Development Center, No. 88 Xiangxing Road, Torch High-tech Zone, Xiamen City, Fujian Province, 361000 Applicant before: XIAMEN LANTE BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. |
|
| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180810 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |