CN108384835A - 一种基于Wafergen Smartchip系统的高效极微量基因表达定量技术 - Google Patents

一种基于Wafergen Smartchip系统的高效极微量基因表达定量技术 Download PDF

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CN108384835A
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orifice plates
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徐子静
傅延
张鸿
张慧
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Anhui Differential Gene Technology Co Ltd
Original Assignee
Anhui Differential Gene Technology Co Ltd
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6851—Quantitative amplification

Abstract

本发明公开了一种基于Wafergen Smartchip系统的高效极微量基因表达定量技术，包括以下步骤：步骤一：调试好MSND分液设备，利用MSND自带软件设置分液程序，步骤二：根据需求配置反应酶试剂，分别加入到384孔板中，步骤三：将cDNA样品试剂分别加入到384孔板内已加有酶试剂的孔位，步骤四：将芯片放置入MSND中，将配置有样品及酶试剂的384孔板放置到MSND上，执行分液程序，将384孔板内样品喷入芯片中。本发明通过采用一张具有5184个纳米孔的芯片，每个纳米孔可以进行100nl级别的PCR反应，一张芯片一次可以做5184个基因表达量检测反应，相较于其他表达量检测技术，能够极大程度降低检测所需试剂，提升检测自动化水平，以Smartchip为基础，减少实验生产当中PCR试剂用量，提升检测通量。

Description

一种基于Wafergen Smartchip系统的高效极微量基因表达定 量技术
技术领域
本发明涉及基因表达定量领域，特别涉及一种基于Wafergen Smartchip 系统的高效极微量基因表达定量技术。
背景技术
基因表达量是基因功能研究中一个很重要的指标，以此可以探究基因突变、环境影响、基因表达调控及细胞生物相关问题。通常利用转录组反转录 cDNA作为检测基因表达量的样品来源，现有技术多是利用QPCR平台或转录组表达量测序技术进行基因表达量定量，QPCR技术存在通量较低，检测基因位点少的问题，转录组测序检测灵敏性上没有QPCR技术好。
因此，发明一种基于Wafergen Smartchip系统的高效极微量基因表达定量技术来解决上述问题很有必要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种基于Wafergen Smartchip系统的高效极微量基因表达定量技术，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种基于Wafergen Smartchip系统的高效极微量基因表达定量技术，包括以下步骤：
步骤一：调试好MSND分液设备，利用MSND自带软件设置分液程序；
步骤二：根据需求配置反应酶试剂，分别加入到384孔板中；
步骤三：将cDNA样品试剂分别加入到384孔板内已加有酶试剂的孔位；
步骤四：将芯片放置入MSND中，将配置有样品及酶试剂的384孔板放置到MSND上，执行分液程序，将384孔板内样品喷入芯片中；
步骤五：将加有assay试剂的384孔板放入MSND中，执行分液程序，将 384孔板内assay引物试剂喷入之前已喷入样品酶试剂的芯片中；
步骤六：将芯片从MSND取出，放入SmartChip Real-Time PCR Cycler仪器，执行QPCR检测程序，读取样品基因表达量结果。
优选的，所述步骤二中每个孔位加入酶试剂16.9ul-17.3ul。
优选的，所述步骤三中每个孔位加入cDNA样品试剂14.1-14.5ul。
本发明的技术效果和优点：通过采用一张具有5184个纳米孔的芯片，每个纳米孔可以进行100nl级别的PCR反应，一张芯片一次可以做5184个基因表达量检测反应，相较于其他表达量检测技术，能够极大程度降低检测所需试剂，提升检测自动化水平，以Smartchip为基础，减少实验生产当中PCR 试剂用量，提升检测通量。
具体实施方式
下面将结合本发明中的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
本发明提供了一种基于Wafergen Smartchip系统的高效极微量基因表达定量技术，包括以下步骤：
步骤一：调试好MSND分液设备，利用MSND自带软件设置分液程序；
步骤二：根据需求配置反应酶试剂，分别加入到384孔板中，每个孔位加入酶试剂16.9ul；
步骤三：将cDNA样品试剂分别加入到384孔板内已加有酶试剂的孔位，每个孔位加入cDNA样品试剂14.1ul；
步骤四：将芯片放置入MSND中，将配置有样品及酶试剂的384孔板放置到MSND上，执行分液程序，将384孔板内样品喷入芯片中；
步骤五：将加有assay试剂的384孔板放入MSND中，执行分液程序，将 384孔板内assay引物试剂喷入之前已喷入样品酶试剂的芯片中；
步骤六：将芯片从MSND取出，放入SmartChip Real-Time PCR Cycler仪器，执行QPCR检测程序，读取样品基因表达量结果。
实施例2：
本发明提供了一种基于Wafergen Smartchip系统的高效极微量基因表达定量技术，包括以下步骤：
步骤一：调试好MSND分液设备，利用MSND自带软件设置分液程序；
步骤二：根据需求配置反应酶试剂，分别加入到384孔板中，每个孔位加入酶试剂17.1ul；
步骤三：将cDNA样品试剂分别加入到384孔板内已加有酶试剂的孔位，每个孔位加入cDNA样品试剂14.3ul；
步骤四：将芯片放置入MSND中，将配置有样品及酶试剂的384孔板放置到MSND上，执行分液程序，将384孔板内样品喷入芯片中；
步骤五：将加有assay试剂的384孔板放入MSND中，执行分液程序，将 384孔板内assay引物试剂喷入之前已喷入样品酶试剂的芯片中；
步骤六：将芯片从MSND取出，放入SmartChip Real-Time PCR Cycler仪器，执行QPCR检测程序，读取样品基因表达量结果。
实施例3：
本发明提供了一种基于Wafergen Smartchip系统的高效极微量基因表达定量技术，包括以下步骤：
步骤一：调试好MSND分液设备，利用MSND自带软件设置分液程序；
步骤二：根据需求配置反应酶试剂，分别加入到384孔板中，每个孔位加入酶试剂17.3ul；
步骤三：将cDNA样品试剂分别加入到384孔板内已加有酶试剂的孔位，每个孔位加入cDNA样品试剂14.5ul；
步骤四：将芯片放置入MSND中，将配置有样品及酶试剂的384孔板放置到MSND上，执行分液程序，将384孔板内样品喷入芯片中；
步骤五：将加有assay试剂的384孔板放入MSND中，执行分液程序，将 384孔板内assay引物试剂喷入之前已喷入样品酶试剂的芯片中；
步骤六：将芯片从MSND取出，放入SmartChip Real-Time PCR Cycler仪器，执行QPCR检测程序，读取样品基因表达量结果。
根据实施例1-2得知：实施例2中每个孔位加入酶试剂17.1ul，每个孔位加入cDNA样品试剂14.3ul得出的检测通量更高，并且不会浪费PCR试剂用量。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种基于Wafergen Smartchip系统的高效极微量基因表达定量技术，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一：调试好MSND分液设备，利用MSND自带软件设置分液程序；
步骤二：根据需求配置反应酶试剂，分别加入到384孔板中；
步骤三：将cDNA样品试剂分别加入到384孔板内已加有酶试剂的孔位；
步骤四：将芯片放置入MSND中，将配置有样品及酶试剂的384孔板放置到MSND上，执行分液程序，将384孔板内样品喷入芯片中；
步骤五：将加有assay试剂的384孔板放入MSND中，执行分液程序，将384孔板内assay引物试剂喷入之前已喷入样品酶试剂的芯片中；
步骤六：将芯片从MSND取出，放入SmartChip Real-Time PCR Cycler仪器，执行QPCR检测程序，读取样品基因表达量结果。
2.根据权利要求1所述的一种基于Wafergen Smartchip系统的高效极微量基因表达定量技术，其特征在于：所述步骤二中每个孔位加入酶试剂16.9ul-17.3ul。
3.根据权利要求1所述的一种基于Wafergen Smartchip系统的高效极微量基因表达定量技术，其特征在于：所述步骤三中每个孔位加入cDNA样品试剂14.1-14.5ul。
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