CN108367163A - 用于治疗干眼及相关眼表疾病的治疗性组合物 - Google Patents
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Abstract
描述了用于在哺乳动物、特别是人中治疗干眼的组合物、药盒和方法。这样的组合物包含可药用或兽医学上可接受的眼用载体和有效治疗剂量的一种或更多种免疫调节剂,例如调控B细胞或调控T细胞、II型免疫相关的免疫细胞的刺激剂和激活剂,所述II型免疫相关免疫细胞包括II类固有淋巴细胞(innate lymphoid cells,ILC2)、II型CD4+T辅助性细胞和替代性激活的巨噬细胞(AAMac,M2)。
Description
技术领域
本发明总体上涉及眼科领域。
背景技术
1.简介
以下描述包含可用于理解本发明的信息。不承认任何这样的信息是现有技术或与现请求保护的本发明相关,或者任何明确或隐含引用的出版物是现有技术。
2.背景
眼表持续暴露于可以引起炎症的环境作用剂(environmental agent),例如变应原、污染物和微生物。角膜和其下的前房具有保护角膜和眼部免受眼部中免疫介导的炎症和免疫介导的损伤并且产生眼部免疫耐受的独特属性,这被认为对于维持正常的视觉和健康的眼部是必须的。
干眼病(dry eye disease,DED)是最普遍的眼部病症之一,仅是在美国就影响上百万人,并且在世界的其他地区还影响数百万人。眼部症状包括干燥、眼部刺激和疼痛,以及视觉模糊,其可以显著影响生命质量和工作相关活动(work-related activity)。DED患者还报道对其环境的改变具有更高的敏感性和更低的耐受性。视觉功能障碍包括在阅读、驾驶、计算机使用、看电视、以及其他日常个人活动和工作相关活动中的困难。
干眼症状常规用人工泪液滴眼剂、抗炎化合物(环孢素)和皮质类固醇、局部用抗生素(红霉素或杆菌肽软膏剂)和经口四环素类(四环素、多西环素或米诺环素)和眼睑卫生进行管理,其常常是无效、耗时、令人沮丧或效率可变但具有安全性问题的治疗。尽管干眼的发生率很高,局部用环孢素A是美国唯一批准用于DED的治疗,并且其具有高眼部刺激性和低响应率。因此,治疗干眼仍然是一项治疗挑战,并且因此显著需要开发新的治疗方式来治疗DED。
3.定义
在详细描述本发明之前,将定义在本发明上下文中使用的若干术语。除这些术语外,其他术语根据需要在说明书中的其他地方进行定义。除非本文中另有明确定义,否则本说明书中使用的技术术语将具有在其领域中公认的含义。
除非上下文中明确地另有说明,否则本文中使用的没有数量词修饰的名词表示一个/种或更多个/种。
本文中使用的术语“约”(或近似的任何其他术语)是指相对于所表述值的约+/-10%变化。应理解的是,这样的变化无论是否特别地提及总是包含在本文中提供的任何给定值中。
术语“组合治疗”是指涉及提供至少两种不同的治疗以实现指定的治疗效果的治疗方案。例如,组合治疗可以涉及施用两种或更多种化学上不同的活性成分,例如两种或更多种免疫调节剂。或者,组合治疗可以涉及将免疫调节剂的施用与另外治疗(例如放射治疗和/或外科手术)的递送一起进行。此外,组合治疗可以涉及将免疫调节剂与一种或更多种其他生物药剂(例如皮质类固醇)、抗炎剂和/或另外的治疗(例如放射和/或外科手术)一起施用。在施用两种或更多种化学上不同的活性成分的情况下,应理解,活性成分可以作为相同组合物的一部分或作为不同组合物施用。当作为单独的组合物施用时,包含不同活性成分的组合物可以在相同或不同的时间、通过相同或不同的途径、使用相同的不同给药方案施用,全部如特定环境所要求且由主治医师决定。类似地,当将单独或与一种或更多种其他活性成分联合的一种或更多种免疫调节剂物质与例如放射和/或外科手术组合时,可以在外科手术或放射治疗之前或之后递送药物。
术语“单一治疗”是指基于递送一种治疗有效化合物的治疗方案,不管是作为单一剂量还是以数个剂量随时间施用。
根据本发明的“可专利”方法、机器或制品意指该主题在进行分析时满足可专利性的所有法定要求。例如,对于新颖性、非显而易见性等,如果后来的调查显示一项或更多项权利要求涵盖一个或更多个可否认新颖、非显而易见性等的实施方案,则受“可专利”实施方案定义限制的权利要求特别地排除不可专利的实施方案。此外,本文所附权利要求书将被解释为提供最宽的合理范围并且保持其有效性。此外,从本申请被提交或授予专利时到一项或更多项所附权利要求的有效性被质疑时,如果针对可专利性的一个或更多个法定要求被修改或者如果用于评估是否满足对可专利性的特定法定要求的标准变化,将以以下方式解释权利要求书:(1)保留其有效性,以及(2)提供在该情况下最宽的合理解释。
“多个/种”意指多于一个/种。
“对象”是任何动物物种(优选哺乳动物物种,任选人)的成员。另一些哺乳动物包括驯养动物和农场动物,以及动物园、运动或宠物动物,例如狗、马、猫、羊、猪、牛等。因此,本文中描述的方法、组合物、试剂和药盒适用于人干眼病和兽干眼病二者。优选的对象是人,并且最优选“患者”,如在本文中使用的,其是指正接受针对疾病或病症的医疗护理的活人。这包括正接受病理学体征检查的未患限定疾病的人。对象可以是表面上健康的个体、患有疾病的个体或正接受干眼病治疗的个体。“参照对象”是用作针对一个或更多个参数评估其他个体或群体之参照的个体或群体。
“治疗有效量”(或“有效量”)是指当施用于有此治疗需要的对象时足以实现治疗的活性成分(例如,根据本发明的免疫调节剂)的量。因此,本领域普通技术人员可以容易地确定构成组合物的治疗有效量的量。在癌症治疗的背景下,“治疗有效量”是在与干眼病相关的一个或更多个参数中产生客观测量的变化的量,所述参数包括与干眼病相关的一种或更多种基因或生物标志物的表达的提高或降低、疾病阶段或进展等。当然,治疗有效量将根据所治疗的特定对象和病症、对象的体重和年龄、疾病状况的严重程度、所选择的具体化合物、遵循的给药方案、施用时机、施用方式等而变化,其全部都可以容易地由本领域普通技术人员确定。应理解,在组合治疗的情况下,构成特定活性成分的治疗有效量的量可以不同于作为单一治疗(即,仅使用一种化学物质作为活性成分的治疗方案)施用时构成该活性成分的治疗有效量的量。
本文所述的组合物用于干眼治疗的方法。本文中使用的术语“治疗”和“治疗性”涵盖干眼病的全部预防和/或治疗谱。“治疗性”药剂可以以防止性或预防性的方式起作用,包括结合设计成靶向可以被鉴定为处于风险之中(例如通过遗传学、家族史等)个体的过程的那些;或者以改善性或治愈性的方式起作用;或者可以用于减慢干眼病的至少一种症状的进展速率或程度;或者可以用于最小化所需时间、任何不适或疼痛的发生或程度、或者与从干眼病恢复相关的身体限制;或者可以用作其他治疗和处理的辅助方案。
术语“治疗”是指干眼病或干眼病症的任何治疗,包括预防疾病或提供针对疾病的保护(即,使临床症状不出现);抑制疾病(即,阻止、延迟或阻抑临床症状的发展);和/或缓解疾病(即,使临床症状消退)。应理解,并不总是可以区分“预防”和“阻抑”干眼病,因为最终的诱发事件可能是未知的或潜在的。“有治疗需要的”那些包括已经患有干眼病的那些以及其中需要预防疾病的那些。因此,术语“防止”将被理解为构成包括“预防”和“阻抑”二者的“治疗”类型。因此,术语“保护”包括“防止”。
发明内容
本发明涉及包含一种或更多种免疫调节剂的眼用制剂,其用于治疗和预防干眼及相关眼表病症。本发明还涉及用于在有此治疗需要的对象中治疗性治疗和预防干眼及相关眼表病症的方法,其包括向该对象的眼部或眼部区域直接施用本发明的眼用制剂。对象优选地是有此治疗需要的哺乳动物,例如已经被诊断患有或易患眼表干眼病的对象。哺乳动物可以是任何哺乳动物,例如人、灵长类、狗、猫、马等。在一个优选实施方案中,哺乳动物是人。
本发明基于以下令人惊讶的出乎意料发现:在DED患者的眼表中,与调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)、调节性B细胞(regulatory B cell,Breg)、第2组先天性淋巴样细胞(group 2 innate lymphoid cell,ILC2)、2型CD4+ T辅助性细胞(type 2 CD4+ Thelper cell,Th2)或替代性激活的巨噬细胞(alternatively,activated macrophage;AAMac或M2)相关的生长因子和细胞因子显著损失。这些细胞因子和生长因子包括IL-10、IL-4、IL-5、IL-13、IL-3、GM-CSF和淋巴毒素。此外,泪膜中与Treg、Breg或2型免疫(ILC2、Th2或AAMac)相关的这些生长因子和细胞因子的显著损失或水平降低还与眼表组织损伤以及DED中黏蛋白产生和杯状细胞密度降低相关,并且伴随着致病性炎性Th1(1型辅助性T细胞)、Th17(17型辅助性T细胞)、IL-8和/或补体激活的水平升高。
Treg和/或Breg的体内刺激、扩增和激活可以使得抑制炎症,恢复外周耐受,和免疫稳态。先天性ILC2的体内刺激和/或激活诱导2型细胞因子(包括IL-4、IL5、IL-9和IL-13)的产生,从而实现Th2极化,AAMac诱导和激活,炎症消退,促进创伤愈合和组织修复,杯状细胞分化增强,以及黏蛋白产生。AAMac的刺激和/或诱导使得凋亡细胞清除,抑制炎症,产生黏蛋白和其他细胞外基质组分,组织修复,以及恢复组织稳态。
本发明的组合物(即,包含一种或更多种免疫调节剂的组合物)被配制用于经眼递送。这些药物眼用制剂可以是液体、软膏、凝胶、气雾剂、合剂(mist)、乳剂、混悬剂、聚合物、膜、糊剂或固体的形式,并且可以直接施用于眼表。例如,该组合物被配制成用于局部施用至眼部或眼部区域。例如,该制剂可以包含一种或更多种泪液替代品。该制剂可替选地包含眼用润滑剂。或者,可以使用包含根据本发明组合物的装置、接触镜或聚合物来将本发明组合物施用于眼部组织。
任选地,这样的组合物还包含选自以下的化合物:生理学上可接受的透明质酸、甘油、环糊精、卡波姆-甲基纤维素、羧甲基纤维素(CMC)、盐或石油。
该制剂的pH优选为约5.5至7。优选地,该制剂是水性制剂。该制剂可以是单剂量单元的形式或多剂量系统的形式。
本发明还提供了用于治疗干眼和相关眼表病症的方法。这样的方法涉及向有此需要的对象的眼部施用眼用制剂,所述眼用制剂包含有效量的一种或更多种免疫调节剂,所述免疫调节剂选自Treg、Breg或2型免疫相关免疫细胞(包括ILC2、Th2或替代性激活的巨噬细胞(AAMac,M2))的刺激剂和激活剂。免疫调节剂包括部分或完全激活和/或刺激Treg、Breg、ILC2、Th2或AAMac(M2)细胞分化、扩增和功能的蛋白质、肽、抗体、抗体片段、适配体、核酸、碳水化合物、反义分子、RNAi分子或任何其他化合物。免疫调节剂优选地局部施用于眼表。优选地,所使用免疫调节剂的量有效地刺激和/或激活Treg、Breg、ILC2、Th2或AAMac(M2)细胞的分化、扩增和功能。
本发明的免疫调节剂可以是部分或完全激活、刺激或激动由以下因子之受体介导的信号传导的分子组分的生物活性的任何分子:可溶性淋巴毒素α(LT-α3)、IL-33、IL-7、GM-CSF、IL-3、IL-10、IL-4、IL-13、IL-5、IL-9或者对Treg、Breg或2型免疫之刺激、激活、分化或免疫功能具有重要意义的另外细胞因子或生长因子。免疫调节剂(例如重组人IL-33)与眼部组织中ST2表达细胞(例如ILC2和Th2)上的受体(ST2受体)结合,并刺激ILC2群体扩增和产生效应细胞因子,例如IL-4、IL-5、IL-13和/或IL-9。这些2型相关效应细胞因子进一步刺激AAMac诱导和激活,炎症消退,促进组织修复和创伤愈合,增强杯状细胞分化,以及黏蛋白产生,使得恢复组织稳态眼表健康。或者,本发明的免疫调节剂可以是部分或完全激活、刺激或激动IL-33、IL-7、GM-CSF、IL-3、LT-α3、IL-10、IL-4、IL-13、IL-5、IL-9或其他与2型免疫和/或Treg或Breg细胞激活相关的细胞因子的生物活性的任何物质。免疫调节剂的眼用制剂(例如重组人IL-7的眼用制剂)作用于需要IL-7以发育和分化的ILC2和IL-22产生ILC,结果是产生IL-4、IL-13和IL-22。
在本发明的某些优选实施方案中,免疫调节剂是LT-α3介导的信号转导的激活剂。优选地,所使用的免疫调节剂的量有效地激活LT-α3介导的信号转导。免疫调节剂可以局部施用于眼表。在这些实施方案中的一些中,LT-α3介导的信号转导的激活剂是重组人LT-α3(recombinant human LT-α3,rhLT-α3)、重组人LT-α3的经修饰形式、截短的rhLT-α3、人LT-α3的类似物、rhLT-α3的聚乙二醇化形式或rhLT-α3的经翻译后修饰形式。在另一些实施方案中,淋巴毒素介导的信号转导的刺激剂是与可溶性淋巴毒素的受体(肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosis factor receptor 1,TNFR1)和肿瘤坏死因子受体2(tumor necrosisfactor receptor 2,TNFR2))结合并使得激活信号转导或者直接诱导LT-α3受体之信号传导和激活的分子,例如如抗体、蛋白质、肽、小分子或适配体。
在本发明的另一些优选实施方案中,免疫调节剂是IL-33介导的信号转导的激活剂。免疫调节剂可以局部施用于眼表。优选地,所使用的免疫调节剂的量有效地激活IL-33介导的信号转导。在一些实施方案中,IL-33介导的信号转导的激活剂是重组人IL-33、重组人IL-33的经修饰形式、截短的重组人IL-33、人IL-33的类似物、重组人IL-33的聚乙二醇化形式或重组人IL-33的经翻译后修饰形式。或者,IL-33介导的信号转导的激活剂是与IL-33受体(由白介素-1受体相关蛋白ST2和IL-1受体辅助蛋白IL1RacP组成的异二聚受体)结合并使得受体激活或者直接诱导IL-33受体之信号转导和激活的分子,例如如蛋白质、肽、小分子或适配体。
在本发明的另一些优选实施方案中,免疫调节剂是IL-7介导的信号转导的激活剂。免疫调节剂可以局部施用于眼表。优选地,所使用的免疫调节剂的量有效地激活IL-7介导的信号转导。在一些实施方案中,IL-7介导的信号转导的激活剂是重组人IL-7(recombinant human IL-7,rhIL-7)、rhIL-7的经修饰形式、截短的rhIL-7、人IL-7的类似物、rhIL-7的聚乙二醇化形式或rhIL-7的经翻译后修饰形式。在另一方面,IL-7介导的信号转导的刺激剂是与IL-7受体(CD127和CD132的异二聚体)结合并使得激活信号转导或者直接诱导IL-7受体之信号转导和激活的分子,例如如抗体、蛋白质、肽、小分子或适配体。
在本发明的另一些实施方案中,两种或更多种免疫调节剂以组合包含在眼用制剂中并局部施用于眼表。适用于眼用制剂和局部施用至眼表的示例性免疫调节剂包括但不限于与重组人IL-33组合的重组人LT-α3、与重组人GM-CSF组合的重组人LT-α3、或与重组人IL-10组合的重组人IL-7。
在本发明的另一些实施方案中,两种或更多种免疫调节剂以组合递送,但作为单独的眼用制剂局部施用于有此治疗需要的对象的眼表。适用于这样的眼用制剂和局部共施用于眼表的示例性免疫调节剂包括但不限于与重组人IL-33组合的重组人LT-α3、与重组人GM-CSF组合的重组人LT-α3、或与重组人IL-10组合的重组人IL-7。当递送这样的组合时,每种免疫调节剂可以基本上同时递送至对象的受影响眼部。在另一些实施方案中,免疫调节剂在不同的时间和/或使用不同的给药方案递送。
干眼是一种多因素疾病。需根据本发明治疗的干眼及相关眼表病症包括水液缺乏性干眼(aqueous deficient dry eye)、蒸发性干眼(evaporative dry eye)、干燥性结膜炎、迈博姆腺功能障碍(Meibomian gland dysfunction,MGD)、睑缘炎和接触镜不适。在一些变化方案中,待治疗的干眼可归因于眼表炎症、自身免疫病(例如舍格伦综合征(Sjogren's syndrome)和系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus,SLE))。在一些变化方案中,待治疗的干眼由衰老、营养不良、配戴接触镜、过度计算机显示器或终端使用、和/或针对其他疾病或病症的用药引起。任选地,其他相关眼表病症包括例如泪膜中LT-α3、GM-CSF、IL-3、IL-10、IL-4、IL-13、IL-5或IL-9的水平降低并且具有以下症状的眼表病症,所述症状包括但不限于干燥、不适、灼热、瘙痒、刺激、炎症、眼部周围皮肤异常、畏光、视力模糊和接触镜不耐受。
根据以下详细描述和权利要求书,本发明的前述和其他方面将变得更加明显。除非另外定义,否则本文使用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。尽管在本发明的实践或测试中可以使用与本文描述的方法和材料类似或等同的方法和材料,但是下面描述合适的方法和材料。
干眼
术语干眼病(也称为泪液功能障碍、干燥性角膜结膜炎(Keratoconjunctivitissicca,KCS)、干燥性角膜炎、干燥综合症、干眼症、干眼综合征(dry eye syndrome,DES)或简称“干眼”)包括各自与不同原因相关的眼表病症的异质组群,所述原因例如衰老、营养不良、配戴接触镜、过度使用计算机或显示器、舍格伦综合征(SS)中的系统性自身免疫导致眼部干燥、以及迈博姆腺功能障碍(MGD)中迈博姆腺梗阻导致组成变化,以及泪膜质量降低和眼表损伤。然而,所有均以眼部症状的发生为特征,伴随着不同临床体征和病理变化,包括泪液产生降低、泪液层不稳定、角膜表面不规则、结膜上皮上杯状细胞损失、角膜神经末梢的增生和致敏,以及角膜上皮细胞病变的发生。典型的干眼症状是眼部干燥、疼痛、灼烧,以及有砂砾感和眼部刺激,其随着时间的推移变得更加严重。
泪膜由三层构成:(1)由迈博姆腺产生的脂质层;(2)由主泪腺和副泪腺产生的水层;和(3)由结膜杯状细胞产生的亲水性黏蛋白层。这三个层中任一个的任何异常组成或产生均导致泪膜不稳定和干眼症状。根据干眼研讨会(Dry Eye Workshop,DEWS)的报道,DED分为两种主要类型:水液缺乏性干眼和蒸发性干眼。
除眼部症状之外,中度至重度干眼还是一种眼表上皮疾病。发病机理是一个多因素过程,包括通过高渗性泪膜和由上皮细胞、驻留免疫细胞和产生IL-17和干扰素(IFN)-γ的浸润性CD4 T细胞产生的细胞因子激活眼表上皮中的应激途径,导致眼表和泪腺炎症,泪液产生降低,上皮稳态、分化和创伤愈合失调,增强凋亡,结膜杯状细胞损失,和降低黏蛋白产生。
衰老是干眼的最常见原因之一。所有佩戴接触镜的人中约有一半抱怨干眼。某些药物(例如抗组胺剂、鼻减充血剂、β阻滞剂、异维甲酸、镇静剂、利尿剂、三环类抗抑郁剂、抗高血压剂和经口避孕剂)可以引起或恶化DED病症。
在通过临床和临床前研究确定和表征DED的眼表中潜在的炎症方面已经取得重大进展,这使得更好地了解炎症在DED发病机理和临床表现中的关键作用。越来越多的临床和临床前证据表明特定细胞因子和细胞亚组是DED发病机理的驱动因子。认为,干燥应激引起眼表上皮的应激和炎症,其进而导致致病性IFN-γ分泌T辅助性(Th)-1细胞和IL-17分泌Th17细胞的激活和随后扩增。作为重要的促炎Th1细胞因子,已知IFN-γ诱导上皮细胞和其他细胞类型中MHC II、ICAM-1以及多种共刺激和黏附分子的细胞表面表达,由此增强免疫激活。IFN-γ还已显示在促进DED中眼表上皮的凋亡和鳞状化生中发挥关键作用。在实验性干眼模型中,IFN-γ通过激活凋亡途径来诱导角膜上皮凋亡。IFN-γ的泪液水平升高也与干眼中眼表上皮的鳞状化生相关。在干眼模型中的结膜上皮中,IFN-γ减小结膜杯状细胞密度并提高角化包膜前体蛋白SPRR-2和其他上皮分化相关蛋白的表达水平。认为,Th17细胞因子IL-17促进角膜上皮屏障破坏。Th-17细胞是与常规的Th-1和Th-2谱系不同的IL-17产生CD4+ T细胞亚组,并且其已与数种自身免疫病和自身炎性疾病(包括DED)相关。
杯状细胞和黏蛋白
杯状细胞(GC)是简单的柱状分泌性上皮细胞,其分泌凝胶形成黏蛋白并广泛分布在整个哺乳动物黏膜表面,例如胃肠道、泌尿生殖道、呼吸道和结膜。由杯状细胞产生的黏蛋白在水合、润滑和清除下面的上皮的病原体方面起关键作用。因此,杯状细胞作为黏蛋白的主要产生者的重要性已经充分确立。功能性杯状细胞的数目和密度以及产生的黏蛋白的类型、量和速率在正常生理条件下受到调节。其改变与病理状态相关,例如哮喘中黏蛋白过度分泌,以及肠疾病(例如炎性肠病)中的杯状细胞密度耗竭或减小。
在眼表上,杯状细胞是结膜上皮中的主要黏蛋白分泌细胞,并且黏蛋白具有在眨眼期间润滑眼表上皮的完整功能,从而稳定泪膜,并且用作外部病原体和颗粒的物理屏障。
眼表中杯状细胞的损失、杯状细胞功能的改变以及因此黏蛋白分泌降低与不稳定的泪膜和脆弱的眼表相关。众所周知,在干眼病中,杯状细胞密度和黏蛋白产生降低。已将泪膜中杯状细胞损失和黏蛋白耗竭报道为中度至重度干眼,并且多种相关眼表病症在缺乏稳定泪膜的情况下可以导致角膜溃疡和穿孔,所述眼表病症包括舍格伦综合征、中性粒细胞性角膜炎、史-约综合征(Stevens-Johnson syndrome)、眼部黏膜类天疱疮和移植物抗宿主病。
IL-13(由ILC2和Th2 T细胞产生的2型免疫相关细胞因子)可以诱导杯状细胞分化和黏液产生。在另一方面,IFN-γ(由ILC1和Th1 T细胞产生的1型免疫相关细胞因子)可以抑制杯状细胞的分化和黏蛋白的产生。
免疫调节
眼表持续暴露于可以引起炎症的环境作用剂,例如过敏原、污染物和微生物。类似于其他黏膜组织(例如肠),眼部免疫耐受的调节对于稳态和保护眼部组织免受病原体侵入以及免疫介导的炎症和免疫介导的损伤是重要的。在免疫系统的不同分支和组分之间存在多种机理和相互作用,包括先天性免疫系统,例如先天性淋巴样细胞(ILC)、组织驻留性单个核吞噬细胞(例如巨噬细胞和树突细胞(Dendritic Cell,DC));和适应性免疫系统,包括T细胞和B细胞。在眼表中,共生微生物群和相关黏膜耐受的存在对于免疫系统和组织的稳态也是重要的。在T细胞中,存在初始T细胞(T cell)、效应T细胞(Teff)和调节性T细胞(Treg),并且类似地存在抗体产生B细胞、效应B细胞(Beff)和调节性B细胞(Breg)。
适应性免疫系统在调节性细胞与效应细胞(例如Treg与Teff)之间的动态相互作用控制耐受与效应性免疫应答之间的平衡。Treg频率和功能的扰动或Treg/Teff水平的不平衡与免疫耐受的破坏和自身免疫的发生相关。
调节性T细胞(Treg)
调节性T细胞(Treg)是在维持免疫激活与免疫耐受之间的平衡中具有重要作用的抑制性T细胞。Treg对于使免疫系统保持检查至关重要,有助于避免免疫介导的病理学和效应T细胞群的无限扩增,包括通过维持自身耐受来预防自身免疫病,以及抑制变态反应、哮喘和病原体诱导的免疫病理学以及许多其他功能。Treg功能的缺陷可以是发生自身免疫或不能控制免疫病理的重要因素;因此,在药理学上或通过基于细胞的治疗来增强Treg功能将是治疗自身免疫的辅助手段。Treg产生IL-10,并且众所周知,IL-10是Treg抑制的重要介质。
最近有报道称,除免疫调节以及抑制自身免疫和炎症之外,Treg还在组织修复中起重要作用。
Th1、Th2和Th17细胞
CD4+ T细胞通常分为调节性T细胞(Treg)和T辅助性(Th)效应细胞。常规的效应T辅助性(Th)细胞根据其效应功能和其产生的细胞因子可以分为Th1、Th2和Th17辅助性细胞。产生干扰素(IFN)-γ的T辅助性(Th)1CD4+细胞亚组和产生IL-17的CD4+效应细胞(Th17)能够引起炎症和自身免疫疾病,并且Th1和Th17辅助性细胞一般被认为是炎性的。产生IFN-γ的Th1细胞有助于消除细胞内病原体,并参与细胞介导的迟发型超敏响应。Th17辅助性细胞介导针对细胞外细菌和真菌的宿主免疫,并且其正常作用是在上皮/黏膜屏障处提供抗微生物免疫。以下是对报道的Th细胞功能的简单总结:
Th1:
通过响应于DC来源的IL-12产生TNF-α和IFN-γ来促进针对细胞内病原体的适应性免疫;和
促进炎性髓细胞的募集。
Th2:
产生IL-4、IL-5、IL-9和IL-13;
促进IL-4介导的Th2细胞型响应、嗜酸性粒细胞的IL-5依赖性募集、IL-13介导的杯状细胞分化和黏液产生;和
促进替代性激活的巨噬细胞(AAMac,M2)的分化,由此促进黏膜上皮的修复。
Th17:
响应于DC来源的IL-23和IL-1β产生IL-17;
促进针对真菌和细胞外细菌的先天性免疫;和
IL-17促进中性粒细胞募集和从肠上皮细胞(intestinal epithelial cell,EC)产生抗微生物肽。
Th2细胞产生2型免疫相关细胞因子,包括IL-4、IL-5、IL-9和IL-13,并且参与变态反应和细胞外病原体的清除。在功能上,Th2细胞因子对体内的许多细胞类型具有作用,因为2型细胞因子的受体广泛表达于众多细胞类型上。其是抗炎性的,促进炎症消退、上皮创伤愈合、细胞外基质组分产生、杯状细胞分化和黏蛋白产生、以及组织修复。IL-4通过STAT6传导信号以上调GATA3表达,这是Th2细胞分化的主要调节因子。IL-4还抑制Th1和Th17细胞响应以及IFN-γ和IL-17产生。IL-4和IL-13是AAMac(M2巨噬细胞)的原型直接诱导物,并且因此促进黏膜上皮的修复。除其他功能之外,IL-13还可以提高上皮细胞黏液产生、杯状细胞增殖和黏液产生,使巨噬细胞极化成AAMac表型,和提高胶原沉积。IL-5是募集嗜酸性粒细胞所需的。
先天性淋巴样细胞(ILC)
先天性淋巴样细胞(ILC)是新出现的免疫细胞家族,并且通过启动、调节和消退炎症在免疫系统中发挥重要作用。ILC优先地在哺乳动物体的屏障表面(例如皮肤、肺和肠)以及在脂肪和一些黏膜相关淋巴样组织中富集。ILC对于提供针对病原体的保护和维持器官稳态具有重要意义。ILC迅速且直接地对细胞因子和微生物信号作出响应,并且是多种细胞因子(促炎性和免疫调节性的)的早期有效先天细胞来源。ILC还通过修复受损组织(包括肺、不同淋巴样组织和胃肠道)而直接有助于炎症消退。这些修复过程对于限制持续性炎症、防止再感染以及使组织恢复到稳态状态至关重要。人体内研究已揭示,ILC响应在数种疾病状态中发生显著改变,并且特别地,最近的研究已确定ILC在细胞因子介导的上皮细胞屏障完整性调节中的关键作用。
根据表面标志物、转录因子和细胞因子的共同表达,ILC家族涵盖三个亚组,称为第1、2或3组ILC。如下总结的,ILC亚组响应于细胞因子微环境的变化产生不同的标志性细胞因子和免疫调节分子。
ILC1:
表达T-bet,Th1特异性T盒转录因子,其控制标志Th1细胞因子IFNgamma(IFN-γ)的表达;
通过响应于DC来源的IL-12产生TNF-α和IFN-γ来促进针对细胞内病原体的先天性免疫;和
促进炎性髓细胞的募集。
ILC2:
高度表达GATA3;
响应于上皮细胞来源和髓细胞来源的IL-25、IL-33和TSLP而产生IL-4、IL-5、IL-9、IL-13和双调蛋白;
促进IL-4介导的Th2细胞型响应、嗜酸性粒细胞的IL-5依赖性募集以及IL-13介导的杯状细胞分化的黏液产生;和
促进替代性激活的巨噬细胞(AAMac,M2)的分化,由此促进黏膜上皮的修复。
ILC3:
表达视黄酸相关孤儿受体阳性(RORγt);
响应于DC来源的IL-23和IL-1β产生IL-17和IL-22;
促进针对真菌和细胞外细菌的先天性免疫;和
IL-17和IL-22促进中性粒细胞募集和从肠上皮细胞(IEC)产生抗微生物肽。
产生细胞因子的ILC与CD4 T辅助性细胞谱系Th1、Th2和Th17分别共有显著的转录控制相似性。与IFN-γ产生Th1细胞类似,上皮内ILC1细胞是IL-12和IL-15响应性IFN-γ产生细胞的独特亚组。ILC1细胞在发炎的黏膜组织中累积。上皮内ILC1细胞对来源于上皮细胞和髓细胞二者的危险信号作出响应,例如在被TLR激动剂刺激时。认为,当致病性攻击限于黏膜表面时,上皮细胞传递显性危险信号,而当上皮屏障被破坏时上皮内ILC1细胞的单核细胞和树突细胞(DC)刺激可能占优势,导致下面组织中的DC激活。
与Th2细胞相似,ILC2细胞产生IL-4、IL-5、IL-9和IL-13,其是与2型免疫相关的细胞因子。IL-4和IL-13是AAMac(M2巨噬细胞)的原型直接诱导物。其促进炎症消退、上皮创伤愈合、细胞外基质和黏液产生以及组织修复。ILC2来源的IL-13可以提高上皮细胞黏液产生,使巨噬细胞极化成AAMac表型,和提高胶原沉积。ILC2细胞还可以间接地通过IL-13引发的激活DC向肺引流淋巴结迁移和后续Th2细胞致敏,或者直接地通过与CD4 T细胞的II类主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex class II,MHCII)依赖性相互作用来促进Th2响应。
与Th17细胞类似,ILC3细胞对骨细胞和DC来源的IL-1β和IL-23作出响应并产生IL-17和/或IL-22。ILC3细胞可以通过调节先天性和适应性免疫应答来限制慢性炎症。ILC细胞通过产生粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)来调节髓细胞的稳态。在肠中,该过程受肠共生细菌的巨噬细胞感应和IL-1β的产生调节,其可以作用于ILC3细胞以促进GM-CSF表达。ILC3来源的LTα1β2或可溶性LTα3的产生可以间接地通过调节基质细胞或DC响应来促进B细胞产生IgA。ILC3来源的GM-CSF的产生可以影响髓细胞稳态以随后促进针对食物抗原Treg响应和耐受。
ILC3细胞在调节肠中的组织修复方面也具有重要作用,因为已报道,相对于对照,IBD患者的肠组织中ILC3细胞的数目减少。由ILC3细胞产生的IL-22作用于肠干细胞或祖细胞区室以限制凋亡并保护肠屏障功能。因此,ILC3细胞参与免疫稳态和发病机理,以及黏膜表面的保护性免疫。
巨噬细胞:经典激活的巨噬细胞(Classical Activation of Macrophage)(CAM,M1)和替代性激活的巨噬细胞(Alternative Activation of Macrophage)(AAMac,M2)。
巨噬细胞来源于造血祖细胞,后者分化成组织巨噬细胞和密切相关的髓样树突细胞。组织驻留巨噬细胞在没有明显的炎症的情况下组成性地存在于器官中,并且在去除凋亡细胞中发挥营养和稳态作用,充当损伤和感染的哨兵。它们有助于组织重塑,先天免疫和适应性免疫中的宿主防御以及许多疾病过程。在损伤和感染部位,巨噬细胞获得增强的细胞毒性、抗微生物和抑制活性,启动修复并消除炎症。巨噬细胞分化和激活有三个阶段:第一阶段是分化,其依赖于生长因子如GM-CSF或M-CSF;第二阶段是巨噬细胞致敏,其可以由IFN-γ或IL-4和IL-13介导;而第三阶段是巨噬细胞激活,其由通过TLR或类似受体递送的局部信号刺激。
基于不同的表型、基因表达谱和生物学功能,巨噬细胞可分为两种主要类型:的Th细胞功能的简单总结:
经典激活的巨噬细胞(CAM或M1):
炎性巨噬细胞
IFN-γ介导的巨噬细胞致敏;
通过IFN-γ调节CAM中的基因表达依赖于STAT-1;
IFN-γ拮抗IL-4对基因表达的影响;
以炎性细胞因子分泌和一氧化氮产生为特征的炎症;以及
产生有效的病原体杀灭机制。
替代性激活的巨噬细胞(AAMac或M2):
抗炎、免疫抑制、创伤愈合、组织修复和营养或调节性巨噬细胞;
IL-4和IL-13介导的巨噬细胞致敏依赖于STAT-6;
IL-4拮抗IFN-γ对基因表达的影响;
优先诱导以IL-4为主的Th2型应答,导致通过B细胞的IgG类型转换;
除病原体防御外,AAMac清除凋亡细胞并具有高吞噬能力;
减轻炎性应答,产生大量的抗炎介质(如IL-10、TGF-β、IL-1Ra和脂氧素);
促进创伤愈合和组织修复,包括产生细胞外基质(ECM)组分以及血管生成和趋化因子。
由AAMac产生的特征性细胞因子是IL-10和IL-1Ra。在肺中,认为AAMac可提供负调节信号来保护宿主免于对环境刺激的过度炎性应答。最近对这种细胞群的研究已经开始关注它们介导创伤愈合、血管生成和ECM沉积的潜力。免疫调节细胞因子TGF-β和IL-10在抑制巨噬细胞激活中起重要作用。
2型细胞因子、创伤愈合、杯状细胞和眼表中的黏蛋白:
2型免疫应答由细胞因子IL-4、IL-5、IL-9和IL-13定义。2型免疫诱导以嗜酸性粒细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、ILC2、IL-4和/或IL-13条件化巨噬细胞(AAMac或M2)和Th2细胞为特征的复杂免疫应答。2型免疫应答促进组织修复并参与伤口修复和炎症的消退阶段。2型免疫调节感染或损伤后的伤口修复和组织再生途径,抑制1型驱动的自身免疫疾病,促进抗蠕虫免疫,中和毒素并维持代谢稳态。
2型应答的免疫细胞包括M2巨噬细胞、Th2细胞和ILC2细胞,并且它们在抑制促炎轴方面具有重要作用。2型免疫应答通过抑制由M1巨噬细胞、ILC1细胞以及Th1和Th17细胞介导的促炎轴促进有效的创伤愈合,如果不能快速控制,促炎轴可能进一步加剧组织损伤。
上皮细胞还可以通过产生警报蛋白、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、IL-25和IL-33来帮助指导2型应答。TSLP通过抑制DC衍生的IL-12产生来调节2型免疫,而IL-25和IL-33主要靶向分泌大量IL-4、IL-5、IL-13和IL-9的ILC2细胞。2型细胞因子继而靶向上皮细胞、杯状细胞和巨噬细胞,它们共同刺激增加的液体和黏液产生,包封和屏障形成以及上皮细胞更新。因此,2型免疫应答有助于伤口修复。
据报道,人中结膜上皮细胞和角膜上皮细胞两者表达功能性IL-4受体α(IL-4Rα),并且利用其配体IL-4和IL-13的刺激可诱导多种基因的表达,例如,抗炎分子以及细胞分化和增殖相关分子。其中之一是透明质酸合成酶3(HAS3),其参与细胞外基质的主要成分透明质酸(hyaluronic acid)的合成。与由HAS基因家族的其他成员编码的蛋白质相比,HAS3更多被认为是透明质酸合成的调节剂。HA以非常高的水平存在于眼中,充当组织润滑剂并提供机械保护。HA在维持角膜(眼前面的透明部分)、视网膜和充满眼睛的大部分的玻璃体凝胶的健康中起着重要作用。其还有助于创伤愈合,并广泛用于眼用滴眼剂用于干眼病。已经显示干眼病中的角膜上皮屏障显著改善。(Ueta,等,Br J Ophthalmol.2010Sep;94(9):1239-43.;Uet,M等,Jpn J Ophthalmol.2011Jul;55(4):405-10)
据报道IL-4和IL-13增加非眼黏膜中杯状细胞数量和黏蛋白表达。IL-13在杯状细胞增生中的重要性得到研究的支持,其表明用IL-13直接刺激原代肺上皮细胞引起杯状细胞群体增加。IL-13对杯状细胞增生的影响已经在胃肠道和呼吸道中进行了广泛研究,并且还表明结膜黏膜中的IL-13调节杯状细胞稳态。此外,已经在体外表明IL-13刺激杯状细胞的增殖和黏蛋白的释放。
效应B细胞和调节性B细胞
通过B细胞的细胞因子产生是B细胞的不依赖于抗体的功能之一,对免疫的多个方面是重要的。B细胞来源的细胞因子(包括淋巴毒素)对于二级淋巴器官的发生、稳态和激活以及异位部位的三级淋巴组织的发育很重要。
基于细胞因子产生谱,B细胞可以功能性地细分为效应B细胞和调节性B细胞。效应B细胞和调节性B细胞两者都可以将抗原呈递给CD4+ T细胞,并且可以提供共刺激和细胞因子;然而,他们在免疫应答中具有相反作用。
效应B细胞可以分泌增强和稳定效应Th1和Th2细胞的细胞因子谱的细胞因子,例如IFNγ、IL-12、IL-4和IL-2。另外,效应B细胞可将额外的幼稚T细胞募集到炎性应答中,总结如下。
在Th1型细胞因子的存在下由T细胞致敏的B效应-1细胞分泌IFNγ和IL-12p70,并且不分泌大量的IL-4、IL-13或IL-2,但分泌IL-10、TNFα和IL-6。
在Th2型细胞因子的存在下由T细胞致敏的B效应-2细胞分泌IL-2、淋巴毒素、IL-4和IL-13,但非常少量的IFNγ和IL-12。B效应子-2细胞也可以分泌IL-10、TNFα和IL-6。
调节性B细胞是具有免疫抑制或调节能力的B细胞,并且最近已经作为维持免疫耐受的重要因素。与Treg的那些类似,它们的调节功能可以通过释放免疫抑制性细胞因子或分子来介导。通过产生免疫调节细胞因子,包括IL-10、IL-35和转化生长因子β(TGF-β),调节性B细胞通过阻止致病性T细胞和其他促炎性淋巴细胞的扩增来抑制免疫病理学,促进Treg发育和扩增并改变抗原呈递DC的活性。
认为表达IL-10和LT-α3的B细胞具有Breg的调节特性和潜在特性,有利于免疫应答和淋巴微环境的稳态。已经提出表达淋巴毒素的B细胞、CXCR5+DC和CXCL13可以调节T细胞区以外的产生IL-4的Th2分化。在前列腺癌中,通过CXCL13募集到前列腺肿瘤中的B细胞通过产生淋巴毒素来促进耐药性癌症的进展。这种关键的免疫抑制性B细胞产生淋巴毒素、IgA、IL-10和PD-L1,其表现取决于TGFβ受体信号传导。
IL-10
白介素10(IL-10)是重要的免疫调节细胞因子和免疫介导的炎症的强力负调节剂,具有广泛的靶细胞类型,主要是造血来源(Jankovic D,Kugler DG,Sher A.IL-10production by CD4+ effector T cells:a mechanism for self-regulation.MucosalImmunol.2010 May;3(3):239-46)。IL-10可以由多种免疫细胞类型产生,包括AAMac、调节性B细胞和调节性T细胞,并且在感染、过敏和自身免疫的情况下降低免疫介导的炎症方面起着特别显著的作用。IL-10可以抑制效应淋巴细胞产生的促炎细胞因子并维持Treg的分化。
通过Treg的IL-10产生对于保持检查和限制环境界面、特别是黏膜组织如肠和肺中的炎症的免疫应答是必不可少的。IL-10与Treg的诱导和扩增有关。表达转录因子Foxp3的调节性T细胞在抑制自身免疫应答中起关键作用。IL-10作用于调节性T细胞以维持转录因子Foxp3的表达及其抑制功能。
IL-10可由IL-4或IL-13致敏的巨噬细胞AAMac产生,并具有抗炎特性。在肠道中,由固有层巨噬细胞产生的IL-10在炎性应答过程中在维持Treg细胞中的Foxp3表达中起关键作用。
在黏膜中正常条件下的稳态下,ILC2、NKT、Treg和Th2细胞产生IL-10、IL-2、IL-4、IL-3和其他2型细胞因子;因此,存在着1型、2型和17型的平衡存在,如由IFNγ/IL-10和IL-17/IL-10的平衡比例证明的。
先前已将IL-10与非致病性Th17细胞相关联,并且抑制IL-10产生提高了这些细胞的致病性。稳态(非致病性)Th17细胞产生IL-10(IL-17+/IL-10+),而致病性Th17细胞不产生(IL-17+/IL-10-)。IL-10的表达在致病性Th17细胞中显著下调。效应T细胞中受损的IL-10信号传导结果在Th17细胞响应中放大,但不是Th1细胞响应,且Treg细胞可以以IL-10依赖性方式抑制这些Th17细胞响应。因此,稳态Th17细胞具有IL-17+/IL-10+谱;相反,致病性Th17细胞具有IL-17+/IL-10-/IFNγ+谱。
在生理条件下,Th17细胞主要存在于小肠和大肠以及相关的淋巴组织中,在那里它们促进抗微生物肽的产生,强化上皮屏障的完整性,以及募集和激活粒细胞和巨噬细胞来抑制致病细菌。抗炎IL-10赋予Treg抑制致病性Th17细胞应答的能力。因此,Treg通过作为在免疫效应细胞中操作的负调节回路的主要放大器来限制Th17细胞炎症,并且IL-10是参与该调节的关键分子之一。
IL-33
白介素33(IL-33)是最近鉴定的IL-1家族成员,其通过由白介素-1受体相关蛋白ST2和IL-1受体辅助蛋白IL1RacP组成的异二聚体受体进行信号传导。IL-33由基质和免疫细胞表达,或者在组织损伤时由上皮细胞释放。IL-33可以直接作用于ILC2细胞并诱导产生IL-4、IL-5、IL-9和IL-13。最近的研究揭示了ST2在调节性T细胞亚群上的表达,以及IL-33在组织稳态和修复中的作用,表明以前在这些细胞网络内未识别的相互作用。因此,由于其在促进Treg扩增和功能中新发现的作用,最近IL-33作为Treg生物学的调节剂而受到关注。
GM-CSF(CSF2)
粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF,CSF2)是刺激造血祖细胞增殖和分化的造血生长因子。在人中,GM-CSF定位于染色体区域5q31处的相关基因簇,包括IL-3和2型细胞因子(例如IL-4、IL-5、IL-9和IL-13)。GM-CSF和IL-3的人基因在染色体5上串联紧密连接,并且人GM-CSF、IL-3和IL-5的高亲和力受体共有共同的β亚基。
单核细胞分化为DC所需的细胞因子(包括GM-CSF和IL-4)可以由多种细胞群体产生,如Th2细胞、CD3CD56明亮自然杀伤细胞、肥大细胞和角质形成细胞。小鼠中GM-CSF产生的缺陷导致Treg数量下降和口服耐受性受损。GM-SCF的消融减少了巨噬细胞和DC的细胞数量,并且损害了IL-10和其他调节因子的产生,导致肠中Treg稳态的破坏,从而导致肠道炎症。据报道,在暴露于凋亡细胞后,GM-CSF缺陷的DC和巨噬细胞产生改变的细胞因子谱,其导致Treg减少和Th1细胞增加。
据报道,通过GM-CSF的单核细胞重编程有助于调节肠道炎症期间的免疫功能,并在肠道炎症中发挥有益作用。GM-CSF活化的单核细胞加速上皮愈合,其伴随着体内固有层单核细胞中IL-10、IL-4和IL-13产生的增加,以及IFN-γ产生的减少。证实以下发现,GM-CSF激活的单核细胞通过在体外T细胞中上调IL-4、IL-10和IL-13来吸引T细胞并使其向Th2分化。(等,J Immunol.2015,第194(5)卷)
GM-CSF受体信号传导在调节巨噬细胞伤口修复活动和促进上皮伤口修复的分子途径中起关键作用。在声带(VF)损伤模型中,用GM-CSF治疗促进上皮创伤愈合,并通过诱导透明质酸产生和促进细胞外基质(ECM)组分和ECM生产相关生长因子(包括透明质酸酸合酶2(HAS-2)、原弹性蛋白、MMP-1、HGF和c-Met)的基因表达来促进再生(Lim等,PLoSOne.2013;vol.8(1):e54256)。
淋巴毒素α(TNF-β)
淋巴毒素-α(LT-α)和淋巴毒素-β(LT-β)分别是被称为TNFSF1和TNFSF3的TNF超家族的成员。LT-α是可溶性蛋白,而LT-β是II型跨膜蛋白。分泌的LT-α组装成同三聚体LT-α3或者与膜结合LT-β的复合体以产生两种类型的异三聚体LT-α1/β2和LT-α2/β1。淋巴毒素由RORγt+ILC、激活的CD4+ T细胞、非极化的IL-2分泌效应T细胞和Th1效应细胞表达。激活的幼稚CD4+ T细胞表达非常高水平的可溶性LT-α3。除了LT-α3和IL-2外,这些细胞还产生高水平的TNF-α以及大量的IFN-γ和IL-13。
在肠道中,由RORγt(+)ILC细胞产生的可溶性LT-α3通过调节T细胞向肠道归巢来控制固有层中T细胞依赖性IgA诱导,因此可溶性LT-α3参与调节CD4+ T细胞(如Treg)归巢和稳态。由RORγt(+)ILC产生的膜结合淋巴毒素β(LTα1β2)通过控制DC功能对于T细胞非依赖性IgA诱导很重要。肠上皮细胞中的淋巴毒素β受体(LTβR)信号传导促进黏膜损伤后的自我修复,并且LTβR信号传导在上皮细胞中在调节肠上皮细胞稳态以限制黏膜损伤的发挥作用。RORγt(+)ILC通过产生LT对于保护对抗肠道病原体,维持上皮屏障以及防止共生菌群的系统性传播很重要。
IL-22
已知在化学、感染或辐射诱导的肠损伤后,ILC3细胞被DC衍生的IL-1β、IL-23、TL1A和RA激活。ILC3细胞的激活诱导IL-22产生,其直接促进黏液产生和上皮细胞修复,部分通过直接作用于肠干细胞或祖细胞。
IL-7
适应性和先天性淋巴细胞的发育和稳态取决于基质细胞因子IL-7(白介素7)。IL-7是由骨髓和胸腺中的基质细胞分泌的造血生长因子。其刺激淋巴祖细胞的增殖。IL-7是对B细胞和T细胞发育很重要的细胞因子。ILC细胞也表达IL-7R并且其产生依赖于IL-7。特别地,IL-7对于GATA3+ILC2和RORγt+ILC3的分化和发育很重要。IL-7刺激多潜能(多能)造血干细胞分化为淋巴祖细胞。其还刺激淋巴谱系(B细胞、T细胞和NK细胞)中所有细胞的增殖。在B细胞成熟以及T细胞和NK细胞存活、发育和稳态的某些阶段,其对于增殖很重要。
IL-7也由角质形成细胞、树突细胞、肝细胞、神经元和上皮细胞产生,但不由正常淋巴细胞产生。IL-7可由肠上皮细胞和上皮杯状细胞局部产生,并可作为肠黏膜淋巴细胞的调节因子。IL-7在淋巴细胞存活中发挥重要作用。在体内IL-7对于维持Treg表面的CD25表达是必要的。CD25表达的IL-7调节影响Treg有效结合IL-2和转导IL-2信号的能力,并剧烈影响体内IL-2诱导的Treg扩增。
眼部免疫耐受
在类似于眼表面的黏膜表面,处于生理状态或稳态的免疫系统不会启动对自身组织、共生微生物抗原或持续存在于环境中的大量抗原的炎性免疫应答,但应该保持准备对侵入病原体发起强力攻击以及响应于环境损害。因此,在局部炎症过程和组织损伤期间,驻地免疫细胞有必要从稳态(通常是组织保护性)状态转变为有效的抗微生物免疫或炎性状态,随后解决急性炎症,清除病原体和凋亡细胞,创伤愈合,组织修复和恢复稳态。
总之,已提出在黏膜中,组织驻留巨噬细胞和DC分泌IL-1β,其促使ILC3细胞释放可溶性LT-α3和GM-CSF。可溶性LT-α3调节T幼稚细胞或Treg细胞向黏膜的归巢。归巢于黏膜的Treg细胞或从T幼稚细胞转化而来的Treg扩增并且由GM-CSF调节稳态,因此导致黏膜中Treg细胞的诱导和IL-10的产生并维持外周免疫耐受和稳态。
免疫调节剂
本领域技术人员根据前述内容将认识到,调节性T细胞(Treg)和B细胞(Breg)、与2型免疫相关的免疫细胞(包括ILC2细胞、Th2细胞和/或AAMac)的局部刺激和/或激活可以发生在包括任何一种或更多种所述细胞类型或相互作用的多种生物学点上。Treg和/或Breg的刺激可导致抑制炎症、恢复外周耐受和免疫稳态。先天ILC2细胞的刺激和/或激活将诱导产生IL-4、IL5、IL-9和IL-13,从而导致Th2极化,AAMac诱导和激活,消退炎症,促进创伤愈合和组织修复,并增强杯状细胞分化和黏蛋白产生。类似地,AAMac的刺激和/或诱导将导致清除凋亡细胞,抑制炎症,产生黏蛋白和其他细胞外基质组分,恢复组织修复和组织稳态。例如,Treg的刺激可以通过局部施用IL-10诱导而发生。或者ILC2细胞的激活可以通过用IL-33或ST2L受体信号传导刺激来发生,导致产生IL-4、IL-5、IL-9和IL-13。ILC2细胞也可以用IL-7或IL-7受体信号转导来刺激。外周耐受和免疫稳态的恢复可通过局部施用单独的或与GM-CSF组合的可溶性LT-α3来实现。或者,眼表面健康可以通过局部施用与2型免疫的刺激剂如ILC2和/或Th2发育和产生IL-4、IL-13、IL-5和IL-9的激活剂组合的可溶性LT-α3来恢复。刺激可用或通过GM-CSF、LT-α3、IL-10、IL-4、IL-13、IL-7和IL-33信号传导或途径激活来发生。
在本发明的上下文中,免疫调节剂是部分或完全激活、刺激或激动信号传导的分子组分的生物活性的任何物质,所述信号传导由IL-33、IL-7、GM-CSF、LT-α3、IL-10、IL-4、IL-13或者其他Treg、Breg或2型免疫刺激因子和生长因子的受体介导。或者,任何免疫调节剂是部分或完全激活、刺激或激动IL-33、IL-7、GM-CSF、LT-α3、IL-10、IL-4、IL-13或者其他2型相关细胞因子(IL-4、IL-13、IL-5和IL-9)或调节性T细胞的生物活性的任何物质。因此,激活是激活剂刺激的相应状态。由IL-33、IL-7、GM-CSF、LT-α3、IL-10、IL-4或IL-13或者IL-33、IL-7、GM-CSF、LT-α3、IL-10、IL-4或IL-13的受体的激动剂介导的信号传导的分子组分。
设想本发明的实践延伸到现在或将来已知的这种受体的任何刺激或激活。
刺激免疫调节、免疫调节功能或2型免疫的合适种类的激活剂分子包括重组蛋白、多肽、肽、模拟肽、核酸分子和小分子。
眼用制剂
可用于本发明实践的一种或更多种免疫调节剂可以与合适的药物载体组合配制。这样的制剂优选包含治疗有效量的一种或更多种免疫调节剂和眼科上可接受的载体(赋形剂)。这样的载体包括但不限于缓冲剂、渗透剂、缓和剂、表面活性剂、润肤剂、张度剂、增稠剂和/或防腐剂组分及其组合。制剂应适合施用方式,并且在本领域的技术范围内。
例如,本发明的药物组合物可以包含至少一种免疫调节剂和这样的载体的组合,所述载体包括但不限于盐水、缓冲盐水、右旋糖、水、甘油及其组合。
在一个方面,药物组合物被配制用于向眼睛局部施用。例如,药物组合物被配制用于结膜下施用,例如通过滴眼剂。药物组合物可还包含泪液替代品。优选地,根据本发明的药物组合物被配制成用于局部施用的溶液剂、混悬剂或其他剂型。基于易于配制,以及患者通过在受影响的眼睛中滴注1至2滴溶液来容易地施用所述组合物的能力,通常优选水溶液。然而,组合物也可以是混悬剂、黏性或半黏性凝胶或其他固体或半固体组合物类型。它们也可以被植入,例如作为控释装置或组合物的一部分。
通常,可以使用与一种或更多种免疫调节剂组合的可接受的眼用载体,以调节眼用制剂的张力、pH、稳定性、黏度和无菌性。
血液和泪液的生理pH为约7.4。但防止角膜损伤的有用范围是6.5至8.5。由于缓冲能力(buffer capacity)由缓冲剂浓度决定,因此缓冲剂对张力的影响也必须考虑在内,这也是眼用产品通常只轻度缓冲的另一个原因。为了调节pH,优选至生理pH,缓冲剂可能特别有用。本发明溶液的pH应保持在6.0至8.0,更优选约6.5至7.8。可以加入合适的缓冲剂,例如硼酸、硼酸钠、柠檬酸钾、柠檬酸、碳酸氢钠、TRIS和多种混合磷酸盐缓冲剂(包括Na2HPO4、NaH2PO4和KH2PO4的组合)及其混合物。硼酸盐缓冲液是优选的。由于其缓冲和抗感染特性,硼酸经常用于调节眼用溶液的等渗性。应考虑待施用溶液的pH、化学性质和体积。通常,缓冲剂的用量范围为约0.05至10重量%。对于大多数药物溶液来说,0.01至0.1的缓冲能力通常是足够的。
多种载体中的任一种可以用于本发明的制剂中,包括水,水和水混溶性溶剂的混合物,包含0.5%至5%无毒水溶性聚合物的植物油或矿物油,天然产物,例如明胶、藻酸盐、果胶、黄蓍胶、刺梧桐胶、黄原胶、角叉菜胶、琼脂和阿拉伯胶、淀粉衍生物,以及其他合成产品,例如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯甲醚、聚环氧乙烷,优选交联的聚丙烯酸酸或这些聚合物的混合物。本发明的制剂可以包含选自以下的化合物:生理上可接受的盐、泊洛沙姆类似物与卡波姆、卡波姆/羟丙基甲基纤维素(RPMC)、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮卡波姆-甲基纤维素、羧甲基纤维素(CMC)、透明质酸、环糊精和石油。
载体的浓度通常为活性成分浓度的1至100,000倍。可包含在制剂中的其他成分包括张力增强剂、防腐剂、增溶剂、无毒赋形剂、缓和剂、螯合剂、pH调节剂、共溶剂和增黏剂或增黏剂。
如果需要,通常通过张力增强剂来调节张力。这样的试剂可以例如是离子型和/或非离子型。离子张力增强剂的实例为碱金属或碱土金属卤化物,例如CaCl2、KBr、KCl、LiCl、Nal、NaBr或NaCl,Na2SO4或硼酸。非离子张力增强剂是例如尿素、甘油、山梨醇、甘露糖醇、丙二醇或右旋糖。通常用张力剂将本发明水溶液调节至接近正常泪液的渗透压,其相当于0.9%±0.1%的氯化钠溶液或2.5%±0.3%的甘油溶液。约225至400mOsm/kg的制剂的渗量浓度是优选的,更优选为280至320mOsm。
局部制剂还可以包含防腐剂。防腐剂通常可以选自季铵化合物,如苯扎氯铵、苯佐氯铵等。适当时,将足够量的防腐剂加入到眼用组合物中以确保防止由细菌和真菌引起的使用期间的二次污染。
或者,本发明的局部制剂不包含防腐剂。
制剂可以包含其他无毒赋形剂,例如乳化剂、润湿剂或填充剂,例如聚乙二醇200、300、400和600或Carbowax 1000、1500、4000、6000和10000。所添加的赋形剂的量和类型符合特定要求并且通常为约0.0001至约90重量%。
其他化合物也可以加入到本发明的制剂中以增加载体的黏度。黏度增强剂的实例包括但不限于多糖如透明质酸及其盐、硫酸软骨素及其盐、右旋糖酐、纤维素家族的各种聚合物、乙烯基聚合物和丙烯酸聚合物。
所述至少一种免疫调节剂可以通过使用水凝胶、药物洗脱接触镜和纳米系统(脂质体系统、树状聚合物、固体生物可降解纳米颗粒、纳米凝胶)和/或冲洗溶液或者以其形式来施用。
眼用制剂、眼软膏、乳膏、药膏、粉末、溶液等也被认为是在本发明的范围内。
此外,多种其他递送系统是已知的并且可用于施用至少一种免疫调节剂。本发明的药物组合物可以通过任何合适的途径施用,包括局部注射、结膜下注射或眼内注射,以及植入持续释放药物装置。
滴眼剂
在滴眼剂模式中使用免疫调节剂来治疗干眼病症会通过缓解系统施用中所见的生物利用度问题来增强其效果。
滴眼剂可以配制有或没有一种或更多种泪液替代品。本文还提供了用于治疗干眼病症的药物组合物,其包含可药用或兽医学上可接受的载体中的有效量的一种或更多种免疫调节剂和泪液替代品。免疫调节剂和泪液替代品可协同作用以提供免疫调节剂在眼表面上更长的停留时间,从而提高作用的持续时间和效力。
多种泪液替代品是本领域已知的,包括但不限于:单体多元醇,例如甘油、丙二醇和乙二醇;聚合物多元醇;纤维素酯;右旋糖酐;水溶性蛋白质;乙烯聚合物;和卡波姆。许多这样的泪液替代品是可商购的,其包括但不限于纤维素酯,如Visine泪液替代品也可以包含石蜡,例如市售的Lacri-软膏。用作泪液替代品的其他市售软膏,如Refresh
在一个方面,泪液替代品包含羟丙基甲基纤维素。一种这样的泪液替代品是润滑滴眼剂。(CibaVision-Novartis)是一种无菌润滑剂滴眼剂,包含3mg/g羟丙基甲基纤维素,并用过硼酸钠保存。
本发明的药物组合物可以包含一种或更多种免疫调节剂和一种或更多种泪液替代品的组合。
本发明的药物组合物可以包含两种免疫调节剂的组合和泪液替代品。或者,本发明的药物组合物可以包含三种免疫调节剂的组合和泪液替代品。
本发明的局部制剂可以包含一种或更多种免疫调节剂以及至少两种泪液替代品的组合。
对于治疗应用,本发明的免疫调节剂以可药用或兽医上可接受的剂型向哺乳动物、优选人施用,所述剂型为例如本文所述的那些,包括向需要治疗干眼病的对象的眼睛局部施用的那些。
对于预防或治疗干眼病,特定免疫调节剂的适当剂量将取决于例如待治疗的特定疾病,疾病的严重程度和过程,药剂施用是用于预防目的还是治疗目,以前的治疗,对象的临床病史和对药物的响应(如果以前向对象施用),药物是作为单一治疗还是作为组合治疗的一部分递送,以及主治医师的判断。免疫调节剂可以一次或在一系列治疗中向对象施用。
药盒
本发明的另一方面涉及包含用于治疗上述干眼病疾病的材料的制品,即药盒。这样的药盒通常包含容器,所述容器包含含有待施用以提供治疗的免疫调节剂的组合物,以及使用随附组合物的说明书。合适的容器包括滴眼器(eyedropper)、管等。容器可以由任何合适的材料形成。在任何情况下,容器容纳本发明的组合物。容器上或与容器相关的说明书表明该组合物用于治疗例如干眼病。此类说明书通常采用包含监管机构可能要求的信息的包装插页的形式。
附图说明
以下提供了对本说明书中描述的每幅附图和每个表格的简述。本申请包含至少一幅彩图。如有需要,在提出请求并支付必要的费用之后,可提供带有彩图的本文件副本。
图1示出了IL-10与IL-3、IL-4、IL-5、淋巴毒素α(LT-α)和GM-CSF(CSF2)之间的散点图。所有的生物标志物浓度均为Log10(pg/mL)标度。在与调节性T细胞或2型免疫相关的细胞因子之间观察到强相关性,所述细胞因子包括淋巴毒素α(TNFβ)、IL-10、GM-CSF(CSF2)、IL-3、IL-4和IL-5。所示的生物标志物数据是对照非干眼对象(11个眼)和干眼对象(102个眼)。
表1:与非干眼正常对照相比,在从干眼对象收集的泪液中发现与Treg、Breg以及ILC2、Th2和AAMac细胞相关之生长因子和细胞因子的水平显著较低(P<=0.001);相比之下,与非干眼正常对照相比,在干眼对象中发现显著更高水平的炎性细胞因子IL-8。在此列出了GM-CSF、IL-3、IL-4、IL-5、IL-10和淋巴毒素3α(TNFβ)的T检验比较结果。也列出了IL-8的T检验结果。采用以下标准招募患有干眼的对象:至少6个月的干眼症状、总评分等于或大于23的眼表疾病指数(Ocular Surface Disease Index,OSDI)、短于5秒的泪膜破裂时间(tear break up time,TBUT)和小于10的5分钟无麻醉希尔默试验(Schirmer test)。非干眼正常对照对象满足无眼部干眼症状(OSDI小于13)和无角膜染色以及TBUT>=7的标准。有35名DED对象和6名对照对象。
分析物 | t统计量 | p值 | 平均值(DED) | 平均值(对照) | 单位 |
GM-CSF(CSF2) | -3.547 | <0.001 | 49.1 | 186.4 | pg/mL |
IL-3 | -5.061 | <0.0001 | 63.8 | 342.6 | pg/mL |
IL-4 | -8.515 | <0.0001 | 18.6 | 226.5 | pg/mL |
IL-5 | -3.776 | <0.001 | 14.0 | 50.3 | pg/mL |
IL-10 | -3.521 | <0.001 | 12.4 | 40.5 | pg/mL |
淋巴毒素α(TNFβ) | -3.638 | <0.001 | 93.6 | 865.1 | pg/mL |
IL-8 | 2.341 | 0.024 | 698 | 269 | pg/mL |
表2:DED组和非DED对照对象组的临床参数
具体实施方式
以下结合附图对本实用新型的技术方案进行详细的描述,以使本领域技术人员能够更加清楚的理解本实用新型的方案,但并不因此限制本实用新型的保护范围。
实施例1
1.研究目的
评估局部施用眼用重组人IL-33(rhIL-33)改善干眼患者的症状和体征。
确定用于在干眼患者中局部施用眼rhIL-33的合适剂量。
2.背景和基本原理
IL-33通过与ILC2细胞上的IL-33受体结合刺激并诱导2型细胞因子(包括IL-4、IL-5、IL-9和IL-13)的产生,从而促进组织修复、创伤愈合,并解决炎症。IL-33也被证明促进Treg的扩增和功能。
3.研究设计
这是DED患者中的2阶段、前瞻性、随机化、双掩蔽、安慰剂对照、平行组、多中心研究。将患者随机等分到以下六个处理组(每组70名患者):1.0mcg/mL、4mcg/mL、12mcg/mL或25mcg/mL的重组人IL-33眼用制剂,每日两次(BID),以及安慰剂对照(BID)。本研究遵循源于或衍生自赫尔辛基宣言(Declaration of Helsinki)的道德原则,并遵守所有International Conference on Harmonisation Good Clinical Practice Guidelines。
4.对象
符合条件的干眼患者至少18岁,诊断为干眼病至少6个月或更长时间。主要的入选标准是:
1)愿意并能够对知情同意书和HIPAA文件进行阅读、签名和签署日期。
2)愿意并能够遵守所有的研究程序。
3)正常眼睑解剖结构。
4)在以前的临床诊断的支持下,至少6个月的DED的病史。
5)持续干眼病,其特征为:
OSDI(眼表疾病指数(Ocular Surface Disease Index))的对象分级总分>=33;
·角膜荧光素染色评分的和>=6(国家眼研究所量表(National Eye Institutescale));和
·泪膜破裂时间<5秒。
主要的排除标准是:
1)根据研究者的意见可能影响研究参数的任何眼部疾病,包括但不限于活性眼部感染、眼部炎症、青光眼和/或糖尿病视网膜病变。
2)任何免疫缺陷病史,HIV、乙型肝炎、丙型肝炎阳性状态,或急性活动性甲型肝炎的证据(抗HAV IgM),或器官或骨髓移植。
3)目前或五年内在眼睛、其他器官或血液中的癌症患者。
4)眼睛过敏或纤维化。
5)目前或在访问1的30天内已经服用下列任何药物:局部用环孢素眼用皮质类固醇、自体血清、局部眼用抗生素、局部用眼用抗组胺药或肥大细胞稳定剂或者局部或鼻用血管收缩剂。
5.终点:
主要终点:第12周,角膜荧光素染色和干眼病状评分(眼部疼痛,或砂质/砂砾感)相比于基线的变化。
次要终点:第12周,其他干眼临床体征,包括TBUT、希尔默试验和结膜染色以及干眼生物标志物检验相比于基线的变化。
6.评估
安全性评估包括静息血压和脉率、临床实验室检查、视力、生物显微镜、结膜充血评估、IOP和眼底检查。
效力评估包括主观测试和客观测试。客观效力评估包括TBUT、角膜染色分级、结膜染色分级和希尔默试验。主观效力评估包括OSDI问卷。
7.统计方法
样本量计算:接受10%的误差范围(类型1,单侧)以达到90%的置信水平来检测安慰剂组和活性组之间的响应差异;每个处理组的样本量为70名对象。
统计分析:处理组比较使用连续终点的协方差分析(ANCOVA)进行。对于主要终点,角膜荧光素染色评分和干眼病状评分相比于基线的平均变化,使用ANCOVA模型比较从基线到12周的变化的组间差异,协变量包括基线值、处理组合分层因子。对于每个处理比较,计算最小平方(LS)平均差异及其对应的90%置信区间(CI)和p值。
实施例2
1.研究目的
评估局部施用眼用重组人LT-α3(rhLT-α3)改善干眼病患者的症状和体征。
确定用于在干眼患者中局部施用眼rhLT-α3的合适剂量。
2.背景和基本原理
认为由RORγt(+)ILC细胞产生的可溶性LT-α3参与黏膜中调节性CD4+ T细胞、特别是Treg和幼稚T细胞的归巢和稳态。RORγt(+)ILC细胞通过产生LT-α3对于保护肠道病原体,维持上皮屏障以及防止共生菌群的系统扩散很重要。
3.研究设计
这是DED患者中的2阶段、前瞻性、随机化、双掩蔽、安慰剂对照、平行组、多中心研究。将患者随机等分到以下六个处理组(每组70名患者):1.0mcg/mL、5mcg/mL、15mcg/mL或45mcg/mL的LT-α3的眼用制剂,每日两次(BID),以及安慰剂对照(BID)。本研究遵循源于或衍生自赫尔辛基宣言的道德原则,并遵守所有International Conference onHarmonisation Good Clinical Practice Guidelines。
4.对象
符合条件的干眼患者至少18岁,诊断为干眼病至少6个月或更长时间。主要的入选标准是:
1)愿意并能够对知情同意书和HIPAA文件进行阅读、签名和签署日期。
2)愿意并能够遵守所有的研究程序。
3)正常眼睑解剖结构。
4)在以前的临床诊断的支持下,至少6个月的DED的病史。
5)持续干眼病,其特征为:
OSDI(眼表疾病指数)的对象分级总分>=33;
·角膜荧光素染色评分的和>=6(国家眼研究所量表);和
·泪膜破裂时间<5秒。
主要的排除标准是:
1)根据研究者的意见可能影响研究参数的任何眼部疾病,包括但不限于活性眼部感染、眼部炎症、青光眼和/或糖尿病视网膜病变。
2)任何免疫缺陷病史,HIV、乙型肝炎、丙型肝炎阳性状态,或急性活动性甲型肝炎的证据(抗HAV IgM),或器官或骨髓移植。
3)目前或五年内在眼睛、其他器官或血液中的癌症患者。
5.终点:
主要终点:第12周,角膜荧光素染色和干眼病状评分(眼部疼痛,或砂质/砂砾感)相比于基线的变化。
次要终点:第12周,其他干眼临床体征,包括TBUT、希尔默试验和结膜染色以及干眼生物标志物检验相比于基线的变化。
6.评估
安全性评估包括静息血压和脉率、临床实验室检查、视力、生物显微镜、结膜充血评估、IOP和眼底检查。
效力评估包括主观测试和客观测试。客观效力评估包括TBUT、角膜染色分级、结膜染色分级和希尔默试验。主观效力评估包括OSDI问卷。
7.统计方法
样本量计算:接受10%的误差范围(类型1,单侧)以达到90%的置信水平来检测安慰剂组和活性组之间的响应差异;每个处理组的样本量为70名对象。
统计分析:处理组比较使用连续终点的协方差分析(ANCOVA)进行。对于主要终点,角膜荧光素染色评分和干眼病状评分相比于基线的平均变化,使用ANCOVA模型比较从基线到12周的变化的组间差异,协变量包括基线值、处理组合分层因子。对于每个处理比较,计算最小平方(LS)平均差异及其对应的90%置信区间(CI)和p值。
根据本公开内容,本文所描述和要求保护的所有组合物和方法都可以制备和执行而无需多度实验。尽管本发明的组合物和方法已经根据优选实施方案进行了描述,但是对于本领域技术人员来说明显的是,可以对组合物和方法进行改变。对于本领域技术人员而言明显的是所有这些类似的替代和修改被认为是在由所附权利要求限定的本发明的精神和范围内。
说明书中提到的所有专利、专利申请和出版物指示本发明所属领域的普通技术人员的水平。所有专利、专利申请和出版物,包括要求优先权或其他权益的专利、专利申请和出版物通过引用的方式并入本文,其程度如同每个单独的出版物被具体地和单独地指出通过引用并入。
本文中说明性描述的本发明适当地可以在缺少本文未具体公开的任何元件的情况下实施。因此,例如,在本文的每种情况下,术语“包括”,“基本上由......组成”和“由......组成”中的任何一个可以用其他两个术语中的任一个替换。已经使用的术语和表达被用作描述的术语而不是限制,并且不意图使用这样的术语和表达来排除所示出和描述的特征或其部分的任何等同物,但是认识到可以在要求保护的本发明的范围内可以进行各种修改。因此,应该理解的是,虽然本发明已经通过优选实施方案和任选特征具体公开,但是本领域技术人员可以采用本文公开的概念的修改和变化,并且这样的修改和变化被认为是在由所附权利要求限定的本发明的范围内。
Claims (28)
1.一种用于在哺乳动物中治疗干眼的局部眼用制剂,其包含:(a)治疗有效量的一种或更多种免疫调节剂,所述免疫调节剂选自调节性T细胞(Treg)、调节性B细胞(Breg)或2型免疫相关免疫细胞的刺激剂和激活剂,所述2型免疫相关免疫细胞包括第2组先天性淋巴样细胞(ILC2)、2型CD4+T辅助性细胞(Th2细胞)和替代性激活的巨噬细胞(AAMac,M2);和(b)可药用或兽医学上可接受的眼用载体。
2.根据权利要求1所述的制剂,其包含治疗有效量的一种或更多种免疫调节剂,所述免疫调节剂选自Treg、Breg、ILC2细胞、Th2细胞或AAMac(M2)细胞的刺激剂和激活剂。
3.根据权利要求1所述的制剂,其中每种所述免疫调节剂独立地选自部分或完全激活和/或刺激Treg、Breg、ILC2细胞、Th2或AAMac(M2)细胞活性、功能或增殖的蛋白质、肽、抗体、抗体片段、适配体、核酸、碳水化合物、小分子和任何其他物质。
4.根据权利要求1所述的制剂,其中每种免疫调节剂是部分或完全激活、刺激或激动由以下因子之受体介导的信号传导的分子组分的生物活性的分子:LT-α3、IL-33、IL-7、GM-CSF、IL-3、IL-10、IL-4、IL-13、IL-5、IL-9、或者刺激和/或激活Treg、Breg、ILC2细胞、Th2或AAMac(M2)细胞的免疫功能的另外细胞因子或生长因子。
5.根据权利要求4所述的制剂,其中免疫调节剂是重组人IL-33、重组人IL-33的经修饰形式、截短的重组人IL-33、人IL-33的类似物、重组人IL-33的聚乙二醇化形式或重组人IL-33的经翻译后修饰形式。
6.根据权利要求4所述的制剂,其中免疫调节剂是重组人LT-α3(rhLT-α3)、重组人LT-α3的经修饰形式、截短的rhLT-α3、人LT-α3的类似物、rhLT-α3的聚乙二醇化形式或rhLT-α3的经翻译后修饰形式。
7.根据权利要求4所述的制剂,其中免疫调节剂是重组人IL-7(rhIL-7)、rhIL-7的经修饰形式、截短的rhIL-7、人IL-7的类似物、rhIL-7的聚乙二醇化形式或rhIL-7的经翻译后修饰形式。
8.根据权利要求1所述的制剂,其中所述制剂是水性、非水性、凝胶、软膏制剂,或者是固体、糊剂、液体、气雾剂、合剂、聚合物、膜、乳剂或混悬剂的形式。
9.根据权利要求1所述的制剂,其还包含选自以下的化合物:生理学上可接受的盐、泊洛沙姆类似物与卡波姆、卡波姆/羟丙基甲基纤维素(RP MC)、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮卡波姆-甲基纤维素、羧甲基纤维素(CMC)、透明质酸、环糊精和石油。
10.根据权利要求1所述的制剂,其还包含眼科上可接受的赋形剂。
11.根据权利要求10所述的制剂,其中所述赋形剂是缓冲剂、渗透剂、缓和剂、表面活性剂、润滑剂、张度剂和/或防腐剂组分。
12.根据权利要求11所述的制剂,其中所述制剂的渗量浓度为约225至约400mOsm/Kg。
13.根据权利要求11所述的制剂,其中所述制剂的渗量浓度为约280至约320mOsm/Kg。
14.根据权利要求11所述的制剂,其中所述防腐剂组分是苯扎氯铵。
15.根据权利要求1所述的制剂,其包含生理学水平的钠、钾、氯化物、钙、镁、磷酸盐和碳酸氢盐,并且还包含聚山梨酯80和硼酸盐缓冲剂。
16.一种眼用药盒,其包含权利要求1所述的制剂和将所述制剂施用于眼部的装置。
17.根据权利要求16所述的药盒,其中施用装置是滴眼器、眼杯、眼用喷雾器或凝胶软膏管。
18.根据权利要求16所述的药盒,其还包含在单个容器中的单剂量或多剂量的所述制剂。
19.一种治疗眼部疾病、损伤或病症的方法,其包括向有此治疗需要的患者施用权利要求1所述的制剂。
20.根据权利要求19所述的方法,其中所述眼部疾病是干眼病。
21.根据权利要求19所述的方法,其中所述眼部疾病是与舍格伦综合征或全身性自身免疫病相关的眼部疾病。
22.根据权利要求19所述的方法,其中所述眼部疾病是由泪液蒸发过快(蒸发性干眼)或泪液产生不足引起的眼部疾病。
23.根据权利要求19所述的方法,其中所述眼部疾病、损伤或病症是可归因于选自以下的一种或更多种原因的眼部疾病、损伤或病症:衰老、接触镜使用、药物使用和LASIK屈光外科手术的并发症。
24.根据权利要求19所述的方法,其中所述眼部疾病、损伤或病症由外科手术、对眼部的物理损伤或眼部炎症引起。
25.根据权利要求19所述的方法,其中所述眼部炎症由以下引起:外科手术性创伤,干眼,由化学、辐射或热灼伤引起的损伤,或异物的渗透。
26.一种治疗眼部的方法,其中所述眼部的正常免疫调节或创伤愈合已被破坏或改变,所述方法包括向所述眼部施用权利要求1所述的制剂。
27.根据权利要求26所述的方法,其中免疫调节或创伤愈合被破坏的所述眼部由所述眼部中Treg、Breg或2型免疫的活性丧失或降低引起。
28.根据权利要求26所述的方法,其中免疫调节或创伤愈合被破坏的所述眼部被诊断具有低于正常水平的淋巴毒素α、IL-10、IL-4、IL-13、IL-5、IL-9、GM-CSF、IL-3和/或其他与所述眼部中Treg、Breg或2型免疫相关的生长因子或细胞因子。
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