CN108348607A - 降低全身调节性t细胞水平或活性以治疗中枢神经系统的疾病和损伤 - Google Patents

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Abstract

本说明书公开了一种用于治疗CNS的疾病、病症、病况或损伤的药物组合物，所述药物组合物包含引起个体的全身免疫抑制的水平降低的活性剂。所述药物组合物是通过包括至少一个治疗过程的给药方案施用的，每一个治疗过程按顺序包括治疗期，之后是非治疗间隔期。

Description

降低全身调节性T细胞水平或活性以治疗中枢神经系统的疾 病和损伤
技术领域
本发明大体上涉及通过瞬时降低循环中全身免疫抑制的水平来治疗中枢神经系统(CNS)的疾病、病症、病况或损伤的方法和组合物。
背景技术
大多数的中枢神经系统(CNS)病理都有共同的神经炎症组分，其是疾病进展的一部分并且促进疾病升级。这些病理之一是阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease，AD)，它是一种年龄相关的神经变性疾病，特征在于记忆和认知功能的进行性丧失，其中淀粉样蛋白-β(Aβ)肽聚集体的积聚被认为在CNS内的炎症级联反应中起关键的作用，最终导致神经元损伤和组织破坏(Akiyama等，2000；Hardy和Selkoe，2002；Vom Berg等，2012)。尽管在神经变性疾病中存在慢性神经炎症反应，但是在过去十年中研究神经变性疾病的基于免疫抑制的治疗的临床研究和临床前研究已经提出了关于为何抗炎药物不足的问题(Breitner等，2009；Group等，2007；Wyss-Coray和Rogers，2012)。我们提供了克服AD和类似的CNS疾病和损伤的现有治疗的缺点的新解决方法；这种方法是基于我们对全身免疫系统和中枢免疫系统的不同组分在CNS维护和修复中的作用的独特理解。
发明内容
在一个方面，本发明提供了一种用于治疗不包括自身免疫性神经炎症性疾病复发-缓解型多发性硬化症(RRMS)的CNS的疾病、病症、病况或损伤的药物组合物，所述药物组合物包含引起个体的全身免疫抑制的水平降低的活性剂，其中所述药物组合物用于通过包括至少两个治疗过程的给药方案来施用，每一个治疗过程按顺序包括治疗期，之后是非治疗间隔期。
在另一个方面，本发明提供了一种用于治疗不包括自身免疫性神经炎症性疾病复发-缓解型多发性硬化症(RRMS)的中枢神经系统(CNS)的疾病、病症、病况或损伤的方法，所述方法包括向有需要的个体施用根据本发明的药物组合物，所述药物组合物包含引起全身免疫抑制的水平降低的活性剂，其中所述药物组合物是通过包括至少两个治疗过程的给药方案施用的，每一个治疗过程按顺序包括治疗期，之后是非治疗阶段的间隔期。
附图说明
图1A-B描绘了AD的5XFAD转基因小鼠模型(AD-Tg)随着疾病进展的脉络丛(CP)活性。(A)从1个月、2个月、4个月以及8个月大的AD-Tg小鼠分离的CP中通过RT-qPCR测量的基因icam1、vcam1、cxcl10以及ccl2的mRNA表达水平，被示为与年龄匹配的WT对照相比的倍数变化(每组n＝6-8；对于每一个时间点，进行司图顿氏t检验(Student's t test))。(B)8个月大的AD-Tg小鼠和年龄匹配的WT对照的CP的代表性显微镜图像，所述CP针对上皮紧密连接分子密蛋白-1、Hoechst核染色、以及整联蛋白配体ICAM-1进行免疫染色(比例尺：50μm)。在所有图中，误差棒表示平均值±s.e.m.(均值标准误差)；*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001。
图2A-C示出了(A)在年轻和年老的非CNS患病患者和AD患者的人类死后CP中ICAM-1免疫反应性的定量(每组n＝5；单因素方差分析，之后是纽曼-柯尔斯事后分析(Newman-Keuls post hoc analysis))；(B)8个月大的AD-Tg小鼠和年龄匹配的WT对照的CP中表达IFN-γ的免疫细胞(细胞内染色和对CD45进行预先门控)的流式细胞术分析。阴影图表示同种型对照(每组n＝4-6；司图顿氏t检验)；以及(C)与年龄匹配的WT对照相比，从4个月和8个月大的AD-Tg小鼠分离的CP组织中通过RT-qPCR测量的ifn-γ的mRNA表达水平(每组n＝5-8；对于每一个时间点，进行司图顿氏t检验)。在所有图中，误差棒表示平均值±s.e.m.；*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001。
图3A-B描绘了(A)8个月大的AD-Tg小鼠和WT对照小鼠的CD4+Foxp3+脾细胞出现率(对TCRβ进行预先门控)的代表性流式细胞术图；以及(B)来自1个月、2个月、4个月以及8个月的AD-Tg小鼠和WT对照小鼠的脾细胞的定量分析(每组n＝6-8；对于每一个时间点，进行司图顿氏t检验)。在所有图中，误差棒表示平均值±s.e.m.；*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001。
图4示出了在最后一次注射DTx之后1天时，来自AD-Tg/Foxp3-DTR+/-小鼠的脾细胞的门控策略和代表性流式细胞术图。将DTx腹膜内(i.p.)注射连续4天，从而实现Foxp3+细胞的约99％消耗。
图5A-G示出了在AD-Tg小鼠中瞬时消耗Treg的影响。(A)将AD-Tg/Foxp3-DTR+(表达DTR转基因)和不表达DTR的AD-Tg同窝(AD-Tg/Foxp3-DTR-)对照组用DTx处理连续4天。在最后一次DTx注射之后1天时，在6个月大的经过DTx处理的AD-Tg小鼠中通过RT-qPCR测量的基因icam1、cxcl10以及ccl2的CP mRNA表达水平(每组n＝6-8；司图顿氏t检验)。(B-D)在最后一次DTx注射之后3周，6个月大的经过DTx处理的AD-Tg小鼠和对照的脑实质(不包括脉络丛，它被单独切除)的流式细胞术分析。定量流式细胞术分析显示CD11b高/CD45高mo-MΦ和CD4+T细胞的数量增加(B)，以及经过DTx处理的AD-Tg/Foxp3-DTR+小鼠和AD-Tg/Foxp3-DTR-对照的脑实质中CD4+Foxp3+Treg出现率的代表性流式细胞术图(C)和定量分析(D)(每组n＝3-7；司图顿氏t检验)。(E)在最后一次DTx注射之后3周，在6个月大的经过DTx处理的AD-TgAD-Tg/Foxp3-DTR+和AD-Tg/Foxp3-DTR-对照的脑实质中foxp3和il10的mRNA表达水平(每组n＝6-8；司图顿氏t检验)。(F)在最后一次DTx注射之后3周的GFAP免疫染色的定量分析，显示在来自6个月大的经过DTx处理的AD-Tg/Foxp3-DTR+小鼠和AD-Tg/Foxp3-DTR-对照小鼠的海马体切片中星形胶质增生减少(比例尺：50μm；每组n＝3-5；司图顿氏t检验)。(G)在最后一次DTx注射之后3周，脑实质中il-12p40和tnf-a的mRNA表达水平(每组n＝6-8；司图顿氏t检验)。在所有图中，误差棒表示平均值±s.e.m.；*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001。
图6A-E示出了瞬时消耗Treg对Aβ斑块学习/记忆表现的影响。在最后一次DTx注射之后3周，5个月大的经过DTx处理的AD-Tg/Foxp3-DTR+小鼠和AD-Tg/Foxp3-DTR-对照小鼠的针对Aβ斑块和Hoechst核染色进行免疫染色的脑的(A)代表性显微镜图像和(B)定量分析(比例尺：250μm)。对海马体齿状回(DG)和大脑皮层第5层中的平均Aβ斑块面积和数量进行定量(在6μm脑切片中；每组n＝5-6；司图顿氏t检验)。图6C-E示出了在最后一次DTx注射之后3周，6个月大的经过DTx处理的AD-Tg/Foxp3-DTR+小鼠和对照小鼠的莫里斯水迷宫(Morris water maze，MWM)测试表现。在瞬时Treg消耗后，相对于AD-Tg对照，AD-Tg小鼠在MWM的(C)获得(acquisition)阶段、(D)探索(probe)阶段以及(E)反向(reversal)阶段中显示出更好的空间学习/记忆表现(每组n＝7-9；对于单独成对比较，进行双因素重复测量方差分析，之后是邦费罗尼事后分析(Bonferroni post-hoc analysis)；对于整体获得、探索、以及反向，*，P<0.05)。在所有图中，误差棒表示平均值±s.e.m.；*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001。
图7示出了与年龄匹配的WT对照相比，从6个月和12个月大的APP/PS1AD-Tg小鼠(阿尔茨海默氏病的小鼠模型(参见材料和方法))分离的CP中通过RT-qPCR测量的ifn-γ的mRNA表达水平(每组n＝5-8；司图顿氏t检验)。误差棒表示平均值±s.e.m.；*，P<0.05。
图8A-I示出了在AD-Tg小鼠中每周一次施用醋酸格拉替雷(Glatiramer acetate，GA)的治疗作用。(A)每周一次GA治疗方案的示意图。向小鼠(5个月大)皮下(s.c.)注射GA(100μg)，在第一周内注射两次(在第1天和第4天)，之后每周注射一次，持续总共4周时间。在最后一次注射之后1周(MWM)、1个月(RAWM)以及2个月(RAWM，使用不同的实验空间设置)检查小鼠的认知表现、以及海马体炎症。图8B-D示出了未处理的AD-Tg小鼠和经过每周一次GA处理的AD-Tg小鼠在6个月大时的海马中基因的mRNA表达水平，显示在每周一次GA处理的小鼠中，(B)促炎性细胞因子，如TNF-α、IL-1β以及IL-12p40的表达降低；(C)抗炎性细胞因子IL-10和TGF-β升高；以及(D)神经营养因子IGF-1和BDNF升高(每组n＝6-8；司图顿氏t检验)。在图8E-G中，将AD-Tg小鼠(5个月大)用GA每周处理一次或用媒介物(PBS)处理，并且在6个月大时，在MWM任务中将其与年龄匹配的WT同窝小鼠相比较。相对于对照，经过处理的小鼠在MWM的获得阶段(E)、探索阶段(F)以及反向阶段(G)中显示出更好的空间学习/记忆表现(每组n＝6-9；对于单独成对比较，进行双因素重复测量方差分析，之后是邦费罗尼事后分析；WT小鼠：黑色圆圈；AD-Tg对照：白色圆圈；经过处理的AD-Tg：灰色圆圈)。图8H-I示出了在最后一次GA注射之后1个月(H)或2个月(I)，相同小鼠在RAWM任务中的认知表现(每组n＝6-9；对于单独成对比较，进行双因素重复测量方差分析，之后是邦费罗尼事后分析)。数据代表了至少三次独立实验。在所有图中，误差棒表示平均值±s.e.m.；*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001。
图9A-H示出了在AD-Tg小鼠中每周施用一次GA的另外的治疗作用。A-B示出了经过GA每周一次的处理或经过媒介物(PBS)处理并且在施用方案的第1周结束时(在总共两次GA注射后)被检查的5XFAD AD-Tg小鼠。与年龄匹配的WT对照相比，在经过处理的6个月大的AD-Tg小鼠中，CD4+Foxp3+脾细胞出现率(A)和CP表达IFN-γ的免疫细胞(B；细胞内染色和对CD45进行预先门控)的流式细胞术分析(每组n＝4-6；单因素方差分析，之后是纽曼-柯尔斯事后分析)。(C)在经过GA每周一次处理或经过媒介物处理并且在每周一次GA方案的第1周或第4周结束时被检查的4个月大的AD-Tg小鼠的CP中通过RT-qPCR测量的基因icam1、cxcl10以及ccl2的mRNA表达水平(每组n＝6-8；单因素方差分析，之后是纽曼-柯尔斯事后分析)。图9D-E示出了在每周一次GA之后，来自6个月大的AD-Tg/CX3CR1GFP/+BM嵌合体的脑切片的代表性图像。在经过每周一次GA处理的AD-Tg小鼠中，CX3CR1GFP细胞定位在第三脑室(3V；i)的CP、相邻脑室间隙(ii)、以及侧脑室(LV；iii)的CP处(D；比例尺：25μm)。共聚焦z轴堆栈(stack)的代表性正交投影，显示GFP+细胞与骨髓标志物CD68在经过每周一次GA处理的7个月大的AD-Tg/CX3CR1GFP/+小鼠的CP中的共定位，但是在对照PBS处理的AD-Tg/CX3CR1GFP/+小鼠中不是这样(E；比例尺：25μm)。(F)CX3CR1GFP细胞与骨髓标志物IBA-1在经过GA处理的AD-Tg/CX3CR1GFP/+小鼠的脑中的Aβ斑块附近共定位，并且共表达骨髓标志物IBA-1(比例尺：25μm)。图9G-H示出了在每周一次GA方案的第2周时，从4个月大的WT小鼠、未处理的AD-Tg小鼠、以及AD-Tg小鼠的海马中分离的细胞的代表性流式细胞术图。对CD11b高/CD45高mo-MΦ进行门控(G)和定量(H；每组n＝4-5；单因素方差分析，之后是纽曼-柯尔斯事后分析)。在所有图中，误差棒表示平均值±s.e.m.；*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001。
图10A-H描绘了在AD-Tg小鼠中施用p300抑制剂(C646)的治疗作用。在图10A-B中，将年老的小鼠(18个月)用p300i或媒介物(DMSO)处理1周的时间，并且在停止处理后1天检查。代表性流式细胞术图显示，在p300i处理后，脾脏中表达IFN-γ的CD4+ T细胞的出现率升高(A)，并且CP中表达IFN-γ的免疫细胞数升高(B)。图10C-E示出了在接受p300i或媒介物(DMSO)达1周的时间并且随后在另外3周之后被检查的10个月大的AD-Tg小鼠的脑中Aβ斑块负荷的代表性显微镜图像(C)和定量分析。将脑针对Aβ斑块以及通过Hoechst核染色来进行免疫染色(每组n＝5；比例尺：250μm)。对海马体DG(D)和大脑皮层第5层(E)中的平均Aβ斑块面积和斑块数量进行定量(在6μm脑切片中；每组n＝5-6；司图顿氏t检验)。(F)在7个月大时不同组的AD-Tg小鼠的按1个处理期(session)或2个处理期进行的p300i处理(或作为媒介物的DMSO)施用方案的示意图。图10G-H示出了相对于未处理的AD-Tg组，大脑皮层(第5层)的平均Aβ斑块覆盖百分比的变化(G)以及平均大脑可溶性Aβ1-40和Aβ1-42蛋白质水平的变化(H)(未处理组的Aβ1-40和Aβ1-42平均水平分别是每毫克总部分(total portion)90.5±11.2pg和63.8±6.8pg；每组n＝5-6；单因素方差分析，之后是纽曼-柯尔斯事后分析)。在所有图中，误差棒表示平均值±s.e.m.；*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001。
图11A-D示出了PD-1阻断提高了AD-Tg小鼠的脾脏中产生IFN-γ的CD4+ T细胞的百分比以及脉络丛中IFN-γ的表达。在第1天和第4天向10个月大的AD-Tg小鼠腹膜内注射250μg的抗PD-1或对照IgG，并且在第7-10天检查对全身免疫应答和CP活性的影响。(A-B)在经过抗PD-1或IgG处理的AD-Tg小鼠以及未处理的AD-Tg对照和WT对照中，CD4+IFN-γ+脾细胞出现率(细胞内染色和对CD45和TCR-β进行预先门控)的代表性流式细胞术图(A)和定量分析(B)(每组n＝4-6；单因素方差分析，之后是纽曼-柯尔斯事后分析；**，在所示的处理组之间，P<0.01；误差棒表示平均值±s.e.m.)。(C)与经过IgG处理和未处理的AD-Tg对照相比时，经过抗PD-1处理的AD-Tg小鼠的CP中通过RT-qPCR测量的ifn-g的mRNA表达水平。(D)在相同小鼠的CP的RNA-Seq中常见的GO注释术语(每组n＝3-5；单因素方差分析，之后是纽曼-柯尔斯事后分析；*，P<0.05)(灰度标对应于P值的以10为底的负对数)。
图12A-B示出了PD-1阻断减轻了AD-Tg小鼠的认知衰退。在第1天和第4天向10个月大的AD-Tg小鼠腹膜内注射250μg的抗PD-1或对照IgG，并且在1个月或2个月后检查对病理的影响，其中(A)示出了在用抗PD-1或IgG对照进行1个处理期后AD-Tg小鼠在RAWM中的表现，并且(B)示出了单个抗PD-1处理期或具有1个月间隔的2个处理期对表现的影响。单箭头指示处理的时间点，而双箭头指示认知测试的时间点。与年龄匹配的WT小鼠和未处理的AD-Tg小鼠相比，通过在RAWM学习和记忆任务中每天的平均错误次数评估经过抗PD-1和IgG处理的小鼠的认知表现(每组n＝6-8；对于单独成对比较，进行双因素重复测量方差分析，之后是邦费罗尼事后分析)。
图13A-D描绘了显示PD-1阻断减轻了AD-Tg小鼠的脑中的AD病理的代表性显微镜图像(A)，以及Aβ斑块负荷和星形胶质增生的定量分析(B、C、D)，所述小鼠在10个月大时经过抗PD-1(按1个处理期或2个处理期，如图12A-B中所示)或IgG对照处理，并且随后在12个月大时被检查。将脑针对Aβ斑块(红色)、GFAP(标记星形胶质增生，绿色)、以及通过Hoechst核染色进行免疫染色(每组n＝4-5；比例尺：50μm)。在海马体齿状回(DG)和大脑皮层第5层中对平均Aβ斑块面积和斑块数量进行定量，并且测量海马中的GFAP免疫反应性(在6μm脑切片中；每组n＝5-6；司图顿氏t检验)。在所有图中，误差棒表示平均值±s.e.m.；*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001。
图14示出了抗PD-1抗体的不同给药和施用频率对AD-Tg小鼠的认知衰退的影响，并且图示了给药方案和使用放射臂水迷宫(RAWM)任务在7个月大时抗PD-1抗体处理对空间学习和记忆表现的影响。黑色箭头指示了处理的时间点，并且图示指示了认知测试的时间点。
图15A-H示出了抗PD-1抗体的重复施用对AD-Tg小鼠的认知衰退的影响。从3个月大开始，将5XFAD小鼠用PD-1特异性抗体或IgG对照处理；每月一次继续处理直到5个月大为止(总共三次注射)。实验设计示于(A)中。黑色箭头指示处理的时间点，并且图示指示了认知测试的时间点。(B)经过抗PD-1处理的5XFAD小鼠(n＝7)、经过对照抗体(IgG)处理的5XFAD小鼠(n＝9)、以及野生型(WT)小鼠(n＝8)在5个月大时的RAWM表现。(C)经过抗PD-1处理的5XFAD小鼠(n＝7)、经过IgG处理的5XFAD小鼠(n＝9)、以及野生型(WT)(n＝8)对照在6个月大时的RAWM表现。(对于两个5XFAD处理组之间的多重比较，进行双因素重复测量方差分析和杜奈特氏事后检验(Dunnett's post-hoc test))。(D)抗PD-1处理组和IgG处理组在5个月和6个月时的表现的比较；指示每一只小鼠的错误次数的值取自在测试的第2天进行的最后一次测量。经过抗PD-1处理的5XFAD小鼠(n＝9)、经过IgG处理的5XFAD小鼠(n＝10)、以及野生型(WT)(n＝6)对照的下托中Neu-N+神经元的(E)代表性免疫荧光图像和(F)定量分析。(G)与经过抗PD-1处理的5XFAD小鼠(n＝5)相比，经过IgG处理的5XFAD小鼠(n＝8)中表现出胱天蛋白酶-3活性增加的海马体神经元的代表性免疫荧光图像。(H)海马体CA3区域中激活的胱天蛋白酶-3Neu-N+免疫反应性细胞的定量(单因素方差分析和费舍尔精确检验(Fisher's exact test))。比例尺：100μm(e、g)。数据被表示为平均值±s.e.m.；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
图16示出了单次施用抗TIM-3抗体对AD-Tg小鼠的认知衰退的影响，并且图示了给药方案以及使用放射臂水迷宫(RAWM)任务在7个月大时抗TIM-3抗体处理对空间学习和记忆表现的影响。黑色箭头指示处理的时间点，并且图示指示了认知测试的时间点。
图17A-J示出了PD-L1阻断减轻了AD-Tg小鼠的认知衰退。将5XFAD小鼠(7个月大)用PD-1特异性抗体、PD-L1特异性抗体或同种型匹配的对照抗体(IgG)处理。实验设计示于(A)中。黑色箭头指示了处理的时间点，并且图示指示了使用RAWM进行认知评分的时间点。(B)经过每只小鼠0.1mg(n＝8)、每只小鼠0.5mg(n＝9)、或每只小鼠1.5mg(n＝9)的抗PD-L1特异性抗体的单次剂量注射、或每只小鼠1.5mg的IgG对照(n＝10)处理的5XFAD小鼠(雄性动物和雌性动物按相等比例用于包括IgG对照组在内的所有组中)的RAWM表现。使用年龄匹配的野生型(WT)同窝小鼠作为另外的对照组(n＝10)。(C)经过0.5mg的抗PD-1特异性抗体(n＝14)、或0.5mg的抗PD-L1特异性抗体(n＝7)处理的5XFAD小鼠的RAWM表现的比较；还测试了IgG对照抗体(n＝15)和WT对照(n＝19)(对于每一个抗PD-1处理组和IgG处理组之间的多重比较，进行双因素重复测量方差分析和杜奈特氏事后检验)。所示的结果来自汇集的两次实验。经过抗PD-1处理的5XFAD小鼠(n＝9)、经过抗PD-L1处理的5XFAD小鼠(n＝10)、以及经过IgG处理(n＝9)的5XFAD小鼠的针对Aβ(红色)、GFAP(绿色)以及DAPI核染色进行免疫染色的脑的(D)代表性免疫荧光图像(比例尺：100μm)和Aβ的定量分析(E、F)。(G)在处理后1个月评估的经过抗PD-1处理的5XFAD小鼠(n＝8)、经过抗PD-L1处理的5XFAD小鼠(n＝10)、经过IgG处理(n＝15)的5XFAD小鼠、以及WT(n＝6)的GFAP。对齿状回(DG)和大脑皮层(第V层)中的平均斑块面积和斑块数量进行定量(在6μm脑切片中)，并且测量海马中的GFAP免疫反应性(单因素方差分析和费舍尔精确检验)。在处理后1个月评估的、经过抗PD-1处理的5XFAD小鼠(n＝6)、经过抗PD-L1处理的5XFAD小鼠(n＝8)、以及经过IgG处理的5XFAD小鼠(n＝8)的脑中的突触泡蛋白的(H)代表性免疫荧光图像和(I)定量分析。测量海马体DG区域和CA3区域中的突触泡蛋白免疫反应性(单因素方差分析和费舍尔精确检验)。(J)在用IgG对照(n＝5)、抗PD-1(n＝5)、或抗PD-L1(n＝5)处理后1个月从5XFAD小鼠分离的海马体组织中通过RT-qPCR测量的il-12p40相对于il-10表达的mRNA表达水平(单因素方差分析和费舍尔精确检验)。(B-C、E-G、I-J)数据被表示为平均值±s.e.m.；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
图18A-B示出了在CP处PD-L1表达随着年龄增加而增加，其中(A)示出了年轻小鼠(左侧条柱)和年老小鼠(右侧条柱)的CP中通过RT-qPCR测量的PDL1的表达；以及(B)示出了在年轻小鼠(左侧显微照片)和年老小鼠(右侧显微照片)的CP处PD-L1的上皮表达的免疫组织化学染色。LV：侧脑室。
图19A-B示出了在通过腹膜内注射抗PD1mAb(n＝10只大鼠；20只眼睛)、IgG(n＝10只大鼠；20只眼睛)处理的RCS大鼠或未处理的动物(n＝4只大鼠；8只眼睛)的单只眼睛中经由基于H&E染色的组织学分析所测量的在整个视网膜中外核层(ONL)的厚度图，其中(A)示出了所有动物并且(B)仅示出了响应者。数据被示为平均值±标准误差值；*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。
图20A-B示出了在通过玻璃体内注射抗PD1mAb(n＝6)或IgG(n＝5)处理的RCS大鼠的单只眼睛中经由基于H&E染色的组织学分析所测量的在整个视网膜中外核层(ONL)的厚度图，其中示出了(A)经过抗PD1mAb处理的动物；以及(B)经过IgG处理的动物的两只眼睛(接受注射的眼睛和对侧未注射的眼睛)。数据被示为平均值±标准误差值；显著性差异通过对每一个单独的取样点进行司图顿T检验来确定并且由星号标记(*P<0.05)。
图21A-E示出了在DM-hTau小鼠中PD-1/PD-L1轴阻断增强了单核细胞向脑的募集。在处理后14天使用流式细胞术检查经过0.5mg抗PD-L1(n＝10)或IgG匹配的对照抗体(IgG)(n＝17)处理的10个月大的DM-hTAU小鼠和年龄匹配的WT同窝小鼠(n＝13)。(A)针对脾细胞的流式细胞术门控策略；以及(B)FoxP3+调节性T细胞、和(C)CD44+CD62L-/低效应记忆T(TEF)细胞、以及(C)与CD44+CD62L高中央记忆T(TCM)细胞相比CD44+CD62L-/低效应记忆T(TEF)细胞的定量分析。(D)针对脑CD45低CD11b+和CD45高CD11b+骨髓细胞的流式细胞术门控策略。(E)将来自相同小鼠的脑切除并且分析CD45高CD11b+浸润性骨髓细胞的存在。脑CD45高CD11b+细胞的定量分析，显示在PD-L1阻断(n＝10)后14天，相对于经过IgG处理的DM-hTAU小鼠(n＝16)和WT同窝小鼠(n＝13)，浸润性骨髓细胞的出现率增加。结果是从两次独立实验汇集的。数据被示为平均值±s.e.m.；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
图22A-G示出了在DM-hTau小鼠中PD-1/PD-L1轴阻断增强了单核细胞向脑的募集。将表达具有两个突变(K257T/P301S；双重突变体，DM-hTAU)的人类tau基因的雄性小鼠(平均群组年龄是8个月大)用抗PD-1特异性抗体、抗PD-L1特异性抗体、或同种型匹配的对照抗体(IgG)处理(每只小鼠一次腹膜内注射0.5mg)；实验设计示于(A)中。黑色箭头指示处理的时间点，并且图示指示了认知测试的时间点。(B)使用T型迷宫任务，PD-1/PD-L1阻断对空间记忆的影响。相对于IgG对照(n＝16)，经过抗PD-1(n＝10)或抗PD-L1(n＝10)处理的DM-hTAU小鼠表现出对新臂的偏好(B-C)。使用年龄匹配的野生型(WT)同窝小鼠(n＝19)作为另外的对照组。结果是从两次独立实验汇集的。(C)三个测试组的在不同臂中所花费的时间的代表性热图。(D)经过抗PD-1(n＝6)、抗PD-L1(n＝4)、或IgG同种型对照(n＝6)处理的DM-hTAU小鼠以及年龄匹配的WT同窝小鼠(n＝5)的Y型迷宫认知任务表现。在DM-TAU+IgG(n＝6)、DM-hTAU+抗PD-1(n＝6)、DM-hTAU+抗PD-L1(n＝4)、以及未处理的WT同窝对照(n＝5)的海马中，在处理后1个月评估的GFAP免疫反应性的(E)代表性免疫荧光图像和(F)定量分析。与经过IgG处理的对照相比，DM-hTAU+IgG(n＝11)、DM-TAU+抗PD-1(n＝11)、DM-tau+抗PD-L1(n＝4)、以及未处理的WT同窝对照(n＝5)的脑中的GFAP免疫反应性(单因素方差分析和费舍尔精确检验)。比例尺：100μm。(G)在用IgG对照(n＝5)、抗PD-1(n＝6)、或抗PD-L1(n＝4)处理后1个月，从DM-hTAU小鼠分离的海马中通过RT-qPCR测量的tnf-a；il-6以及il-12p40相对于il-10表达的mRNA表达水平(单因素方差分析和费舍尔精确检验)。(b、d、f-g)数据被表示为平均值±s.e.m.；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
图23A-G示出了在DM-tau小鼠中阻断PD-1/PD-L1途径减少了过度磷酸化。在用抗PD-1、抗PD-L1、或同种型匹配的对照抗体或同种型匹配的对照抗体(IgG)处理后1个月，在8个月大的DM-hTAU小鼠的脑中神经原纤维缠结(NFT)的免疫染色(A-F)。AT-100和AT-180的(A、D)代表性免疫荧光图像和(B、C、E、F)定量分析。在DM-hTAU+IgG(n＝11)、DM-hTAU+抗PD-1(n＝10)、DM-tau+抗PD-L1(n＝4)的海马体CA1区域和CA3区域中测量AT-100和AT-180的免疫反应性(单因素方差分析和费舍尔精确检验)。比例尺：100μm。(B-C、E-F)数据被表示为平均值±s.e.m.。(G)将表达具有两个突变(K257T/P301S；双重突变体，DM-hTAU)的人类tau基因的雄性小鼠和雌性小鼠(在所有测试组中平均分布)(平均群组年龄是9个月大)用每只小鼠0.1mg(n＝7)、每只小鼠0.5mg(n＝10)、或每只小鼠1.5mg(n＝9)的抗PD-L1特异性抗体的单次剂量注射处理、或用每只小鼠1.5mg的IgG对照(n＝10)处理。使用T型迷宫任务确定PD-L1阻断对空间记忆的影响。使用年龄匹配的野生型(WT)同窝小鼠作为另外的对照组(n＝10)。(单因素方差分析和费舍尔精确检验)；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
图24A-B示出了在5XFAD小鼠中PD-1阻断增强了海马体神经发生，其中(A)示出了经过抗PD-1处理的动物、IgG免疫对照以及年龄匹配的野生型对照的针对神经元标志物NeuN(绿色)、DCX(红色)、以及hoechst核染色(蓝色)进行免疫染色的旁矢状面脑切片；以及(B)示出了对经过抗PD-1处理的动物、IgG免疫对照以及年龄匹配的野生型对照的染色进行定量的图表。
图25A-B示出了在5XFAD小鼠中PD-1阻断增强了海马突触可塑性，其中(A)示出了经过抗PD-1处理的动物、IgG免疫对照以及年龄匹配的野生型对照的针对VgluT1(红色)进行免疫染色的旁矢状面脑切片；以及(B)示出了对经过抗PD-1处理的动物、IgG免疫对照以及年龄匹配的野生型对照的染色进行定量的图表。
图26A-B示出了PD-1阻断减少了5XFAD小鼠的下托中的神经元丧失，其中(A)示出了经过抗PD-1处理的动物、IgG免疫对照以及年龄匹配的野生型对照的针对神经元标志物NeuN(绿色)进行免疫染色的旁矢状面脑切片；以及(B)示出了对经过抗PD-1处理的动物、IgG免疫对照以及年龄匹配的野生型对照的染色进行定量的图表。
具体实施方式
免疫检查点机制包括细胞固有的由抑制性受体对激活的T细胞应答性和效应功能的下调，其维持全身性免疫稳态和自身免疫耐受(Joller等，2012；Pardoll，2012)。近年来，对这些免疫检查点，如程序性死亡分子-1(PD-1)途径的阻断(Francisco等，2010)已经显示出显著的抗肿瘤功效，从而突出了发动免疫系统的力量来对抗各种恶性肿瘤的潜能。最近，证实了(WO 2015/136541；Baruch等，2016)向阿尔茨海默氏病的动物模型施用抗PD-1抗体引起Aβ的清除、认知衰退的逆转，并且与神经炎症反应的消退有关。因此，全身免疫抑制干扰了对抗AD病理的能力，而通过释放对全身免疫系统的限制(restrain)，AD病理可以被减轻。
不希望受任何理论的限制，免疫检查点阻断激活了从外周开始并且在脑内许多活性达到顶点的一系列免疫事件。最初，免疫应答增加了次级淋巴器官(淋巴结、脾脏等)处IFN-γ以及外周中的循环单核细胞的可用性。该免疫应答引起脑的脉络丛(CP)(脑室处的上皮层)的免疫激活，这形成血液-脑脊髓液屏障(B-CSF-B)，并且用作白细胞进入CNS的选择性通道。抑制性免疫检查点的阻断对白细胞的CP通道活性的影响是由IFN-γ诱导的CP上皮对白细胞运输分子(黏附分子和趋化因子)的表达所介导的，这使得白细胞运输成为可能。这种增加的表达引起单核细胞衍生的巨噬细胞和免疫调节细胞募集到脑内的患病部位。重要的是，这种募集会对脑功能产生综合作用，包括斑块负荷降低、免疫平衡恢复、局部炎症消退、神经胶质增生减少、突触丧失减少、神经发生增加、神经元保护增加以及神经元存活率提高，从而共同引起神经保护和/或认知衰退的减少。
免疫检查点是免疫系统中上调信号(共刺激分子)或下调信号的分子。四种刺激性检查点分子是肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族的成员，即CD27、CD40、OX40、GITR以及CD137。另外两种刺激性检查点分子属于B7-CD28超家族，即CD28本身和ICOS。许多抑制剂检查点分子是已知的，包括但不限于A2aR、B7-H3、B7-H4、BTLA、CTLA-4、IDO、KIR、LAG-3、PD-1、TIM-3以及VISTA。
本发明提供了一种用于治疗中枢神经系统(CNS)的疾病、病症、病况或损伤的方法。在一个实施方案中，所公开的用于治疗中枢神经系统(CNS)的疾病、病症、病况或损伤的方法不包括自身免疫性神经炎症性疾病复发-缓解型多发性硬化症(RRMS)。所公开的方法包括向有需要的个体施用引起全身免疫抑制的水平降低的活性剂，其中所述活性剂是通过包括至少两个治疗过程的给药方案施用的，每一个治疗过程按顺序包括治疗期，之后是非治疗间隔期。
在另一个方面，本发明涉及一种引起个体的全身免疫抑制水平降低的活性剂、或一种包含所述活性剂的药物组合物，其用于治疗不包括自身免疫性神经炎症性疾病复发-缓解型多发性硬化症(RRMS)的CNS的疾病、病症、病况或损伤，其中所述药物组合物用于通过包括至少两个治疗过程的给药方案来施用，每一个治疗过程按顺序包括治疗期，之后是非治疗间隔期。
在某些实施方案中，所述给药方案被调整以使得全身免疫抑制的水平瞬时降低。
如本文所用的术语“治疗(treating)”指的是获得所期望的生理作用的手段。就部分或完全治愈疾病和/或归因于所述疾病的症状而言，所述作用可以是治疗性的。所述术语指的是抑制疾病，即阻止或减缓它的发展；或改善疾病，即引起疾病的消退。
如本文所用的术语调节性T细胞或效应T细胞的“全身性存在(systemicpresence)”指的是调节性T细胞或效应T细胞在循环免疫系统(即血液、脾脏以及淋巴结)中的存在(如通过它们的水平或活性所测量的)。在免疫学领域中公知的事实是脾脏中的细胞群体特征(profile)反映在血液中的细胞群体特征中(Zhao等，2007)。
本发明的治疗适用于显示出全身免疫抑制升高的患者以及没有显示出这样的升高的患者这两者。有时，需要根据本发明的治疗的个体具有一定水平的外周免疫抑制，这是通过循环中Treg的出现率或数量升高、和/或它们的功能活性增强和/或产生IFNγ的白细胞减少和/或白细胞响应于刺激的增殖减少来反映的。Treg的出现率或数量的升高可以以总数计或作为占总CD4细胞的百分比计。举例来说，根据本发明已经发现，与野生型小鼠相比，阿尔茨海默氏病的动物模型的CD4细胞中具有更高的Foxp3出现率。然而，即使在所述个体中全身Treg细胞的水平没有升高，它们的功能活性没有增强，产生IFNγ的白细胞的水平没有降低或白细胞响应于刺激的增殖没有减少，降低全身免疫抑制的水平或活性的本发明的方法仍有效治疗不包括自身免疫性神经炎症性疾病RRMS的CNS的疾病、病症、病况或损伤。重要的是，所述全身免疫抑制还可以涉及除了Treg之外的另外的免疫细胞类型，如髓源性抑制细胞(MDSC)(Gabrilovich和Nagaraj，2009)。
全身免疫抑制的水平可以通过本领域的普通技术人员公知的各种方法来检测。举例来说，Treg的水平可以通过对外周血液单核细胞或T淋巴细胞进行流式细胞术分析并且测量特异性结合细胞的抗体的量来测量，所述外周血液单核细胞或T淋巴细胞针对Treg的细胞表面标志物或核细胞内标志物(Chen和Oppenheim，2011)、淋巴细胞的CD45、TCR-β、或CD4标志物进行免疫染色。Treg的功能活性可以通过各种测定来测量；举例来说，通常使用胸苷掺入测定，其中对抗CD3mAb刺激的CD4+CD25-T细胞(常规T细胞)的增殖的抑制是通过[3H]胸苷掺入或通过使用CFSE(5-(和6)-羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯，其能够进入细胞；细胞分裂是作为CFSE的荧光强度的连续减半被测量的)来测量的。产生IFNγ的白细胞的数量或它们的活性或它们的增殖能力可以容易地由本领域技术人员使用本领域已知的方法来评估；举例来说，可以通过如下手段测量产生IFNγ的白细胞的水平：在短暂的离体刺激和高尔基体阻断(golgi-stop)并且通过IFNγ细胞内染色(使用例如BD BiosciencesCytofix/cytopermTM固定/透化试剂盒)进行免疫染色之后对外周血液单核细胞进行流式细胞术分析、收集这些细胞的条件培养基并且使用ELISA对分泌的细胞因子的水平进行定量、或比较条件培养基中不同细胞因子的比率，例如IL2/IL10、IL2/IL4、INFγ/TGFβ等。人类外周血液中MDSC的水平可以容易地由本领域技术人员，例如通过使用对DR-/LIN-/CD11b+、DR-/LIN-/CD15+、DR-/LIN-/CD33+以及DR(-/低)/CD14+细胞的出现率进行的流式细胞术分析来评估，如(Kotsakis等，2012)所述的那样。
在人类中，当循环中Treg的总数比健康对照群体中的高10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、或100％或更多；总CD4+细胞中Treg细胞的百分比与健康对照群体中的相比升高了10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、或100％或更多；或Treg的功能活性与健康对照群体中的相比升高了10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、或100％或更多时，则可以认为外周/全身免疫抑制是升高的。或者，当产生IFNγ的白细胞的水平或它们的活性相对于健康对照群体的降低了10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％；或白细胞响应于刺激的增殖相对于健康对照群体的减少了10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％时，则可以认为外周/全身免疫抑制是升高的。
在向个体施用药剂后，当该个体的循环中Treg的总数与在施用所述药剂之前的水平相比减少了10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％；总CD4+细胞中Treg细胞的百分比相对于健康对照群体的下降了10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％；或Treg的功能活性与在施用所述药剂之前的水平相比降低了10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％时，则可以认为所述药剂是引起全身免疫抑制的水平降低的药剂。或者，在向个体施用药剂后，当产生IFNγ的白细胞的总数或它们的活性增加了10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、或100％或更多；或白细胞响应于刺激的增殖相对于健康对照群体的增加了10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％或更多时，则可以认为所述药剂是引起全身免疫抑制的水平降低的药剂。
在某些实施方案中，所述活性剂通过释放由一个或多个免疫检查点对免疫系统施加的限制(restraint)(例如通过阻断所述一个或多个免疫检查点)来引起全身免疫抑制的水平的降低。
在某些实施方案中，全身免疫抑制的水平的降低与产生IFNγ的白细胞的全身性存在或活性的增加有关。
在某些实施方案中，所述活性剂引起全身免疫抑制的水平降低，从而引起效应T细胞的全身性存在或活性的增加。
在某些实施方案中，全身免疫抑制的水平的降低与IFNγ细胞因子的全身性存在或活性的增加有关。
在某些实施方案中，全身免疫抑制的水平的降低与调节性T细胞的全身性存在或活性的降低有关。
在某些实施方案中，全身免疫抑制的水平的降低与IL-10细胞因子的全身性存在或活性的降低有关。
在某些实施方案中，全身免疫抑制的水平的降低与髓源性抑制细胞(MDSC)的全身性存在或活性的降低有关。
在某些实施方案中，所述活性剂引起全身免疫抑制的水平降低，从而引起效应T细胞的全身性存在或活性的增加。
可以被操纵以释放全身免疫抑制的检查点在本文被称作一对免疫检查点受体和它的天然配体或这两个配偶体中的任何一个。举例来说，具有两种已知配体的PD-1在本文被称为“PD-L1”和“PD-L2”，而配体尚未被鉴定的B7H3被简称为“B7H3”。可以根据本发明被操纵以释放全身免疫抑制的检查点包括但不限于PD-1-PD-L1、PD-1-PD-L2、CD28-CD80、CD28-CD86、CTLA-4-CD80、CTLA-4-CD86、ICOS-B7RP1、B7H3、B7H4、B7H7、B7-CD28样分子、BTLA-HVEM、KIR-MHC I类或II类、LAG3-MHC I类或II类、CD137-CD137L、OX40-OX40L、CD27-CD70、CD40L-CD40、TIM3-GAL9、T细胞激活的V型结构域Ig抑制因子(VISTA)、干扰素基因刺激因子(STING)、T细胞免疫球蛋白和免疫受体基于酪氨酸的抑制性基序结构域(TIGIT)、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关蛋白(GITR)、A2aR腺苷以及吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)-L-色氨酸。
能够阻断免疫检查点的药剂是本领域已知的(Colombo和Piconese，2007)并且这些药剂可以根据本发明来使用。下文所引用的出版物和Pardoll，2012中的每一篇以引用的方式并入本文，就如同在本文完全公开那样。
在某些实施方案中，可以根据本发明使用的活性剂可以是抗体。如本文所公开的抗体可以是多克隆抗体、单克隆抗体、二聚体、多聚体、多特异性抗体、人类抗体、人源化抗体、重组抗体、嵌合抗体、双功能抗体、细胞相关抗体(cell-associated antibody)，如Ig受体、线性抗体(linear antibody)、双抗体、微型抗体或纳米抗体，只要所述片段表现出所期望的生物活性即可；以及其单链衍生物。抗体可以是包含VH结构域和VL结构域以及轻链恒定结构域(CL)和重链恒定结构域CH1、CH2以及CH3的全长免疫球蛋白分子、或全长免疫球蛋白分子的免疫活性片段，例如单域抗体(sdAb)、单链可变片段(scFv)、Fab片段、F(ab')2片段、Fc片段、Fd片段、Fv片段。抗体可以源自于任何脊椎动物物种(例如人类、羊、马、驴、鼠类、大鼠、兔、或鸡)，并且可以是任何类型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、以及IgA)、类别(例如IgA、IgD、IgE、IgG、以及IgM)或亚类(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1以及IgA2)。在功能上，本文所公开的抗体可以是拮抗剂抗体，这意指抑制生物活性的抗体，或本文所公开的抗体可以是激动剂抗体，这意指刺激生物活性的抗体。类似地，本文所公开的抗体可以是中和抗体，这意指可以阻断或中和生物活性的抗体。关于天然存在的抗体、非天然存在的抗体、以及其抗原性化合物结合片段的结构的一般公开内容，参见例如Pluckthun，ThePharmacology of Monoclonal Antibodies(《单克隆抗体的药理学》)，第113卷，Rosenburg和Moore编著，纽约的施普林格出版社(Springer-Verlag，New York)，第269-315页(1994)；Borrabeck，Antibody Engineering(《抗体工程化》)，第2版(牛津大学出版社(OxfordUniversity Press)，1995)，这些文献中的每一篇在此以引用的方式整体并入本文。
本文所公开的抗体可以是但不限于抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗CD80、抗CD86、抗B7RP1、抗B7-H3、抗B7-H4、抗B7-H7、抗BTLA、抗HVEM、抗CD-27、抗CD40、抗CD40L、抗CD70、抗CD80、抗CD86、抗CD137、抗CD137L、抗OX40、抗OX40L、抗TIM-3、抗半乳凝素9、抗KIR、抗LAG-3、抗ICOS、抗VISTA、抗STING、抗TIGIT、抗GITR或其任何组合。本文所公开的抗体可以如下剂量向人类施用：例如约0.1mg/kg-20mg/kg、0.1mg/kg-15mg/kg、0.1mg/kg-10mg/kg、0.1mg/kg-5mg/kg、0.2mg/kg-20mg/kg、0.2mg/kg-15mg/kg、0.2mg/kg-10mg/kg、0.2mg/kg-6mg/kg、0.2mg/kg-5mg/kg、0.3mg/kg-20mg/kg、0.3mg/kg-15mg/kg、0.3mg/kg-10mg/kg、0.3mg/kg-5mg/kg、1mg/kg-20mg/kg、1mg/kg-15mg/kg、1mg/kg-10mg/kg、1mg/kg-5mg/kg、1.5mg/kg-20mg/kg、1.5mg/kg-15mg/kg、1.5mg/kg-10mg/kg、1.5mg/kg-6mg/kg或1.5mg/kg-5mg/kg。
程序性细胞死亡蛋白1也被称为PD-1和CD279(分化簇279)，是属于免疫球蛋白超家族的细胞表面受体并且在T细胞和祖B细胞(pro-B cell)上表达。PD-1结合两种配体，即PD-L1和PD-L2。作为免疫检查点，PD-1通过阻止T细胞的激活而在下调免疫系统中起重要的作用，这进而减少自身免疫性并且促进自身耐受性。PD-1的抑制作用是经由促进淋巴结中抗原特异性T细胞的细胞凋亡(程序性细胞死亡)同时减少调节性T细胞(抑制性T细胞)的细胞凋亡的双重机制来实现的。因而，抑制PD-1功能的化合物，如PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂和/或PD-L2抑制剂用来激活免疫系统。一类PD-1抑制剂包括拮抗剂或中和性抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体以及抗PD-L2抗体。许多拮抗剂或中和性抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体以及抗PD-L2抗体是本领域已知的。举例来说，根据本发明使用的抗PD-1抗体可以选自Ohaegbulam等(Ohaegbulam等，2015)中所公开的那些，该文献的全部内容在此以引用的方式并入本文。人类或人源化抗PD-1抗体的实例包括但不限于CD279(人类抗PD1单克隆抗体，Bio X Cell公司)、MEDI0680(AMP-514；人源化IgG4抗PD-1单克隆抗体；阿斯利康公司(AstraZeneca))、纳武单抗(Nivolumab)(BMS-936558；人类IgG4抗PD1单克隆抗体；百时美施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb))、派姆单抗(Pembrolizumab)(兰罗丽珠单抗(Lambrolizumab)、MK-3475；人源化IgG4抗PD1单克隆抗体；默克公司(Merck))、匹地丽珠单抗(Pidilizumab)(CT-011；人源化IgG1抗PD1单克隆抗体；Medivation公司)以及TSR-042(人源化IgG4抗PD-1单克隆抗体；Tesaro公司)。人类或人源化抗PD-L1抗体的实例包括但不限于阿维单抗(Avelumab)(MSB0010718C；人类IgG1抗PD-L1单克隆抗体；默克-雪兰诺公司(Merck-Serono))、阿特珠单抗(Atezolizumab)(MPDL3280A、RG7446；人类IgG抗PD-L1单克隆抗体；罗氏公司(Hoffmann-La Roche))、BMS-936559(MDX-1105；人类IgG4抗PD-L1单克隆抗体；百时美施贵宝公司)、度伐鲁单抗(Durvalumab)(MEDI4736；人源化IgG1抗PD-L1单克隆抗体；阿斯利康公司)、KN035(抗PD-L1单克隆抗体；3D Medicines公司)以及LY3300054(抗PD-L1单克隆抗体；礼来公司(Eli Lilly))。人类或人源化抗PD-L2抗体的实例包括但不限于AMP-224(PD-L2的IgG2a Fc融合蛋白；阿斯利康公司)。在某些实施方案中，抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体和/或抗PD-L2抗体可以如下剂量向人类施用：例如约0.1mg/kg-20mg/kg、0.1mg/kg-15mg/kg、0.1mg/kg-10mg/kg、0.1mg/kg-5mg/kg、0.2mg/kg-20mg/kg、0.2mg/kg-15mg/kg、0.2mg/kg-10mg/kg、0.2mg/kg-6mg/kg、0.2mg/kg-5mg/kg、0.3mg/kg-20mg/kg、0.3mg/kg-15mg/kg、0.3mg/kg-10mg/kg、0.3mg/kg-5mg/kg、1mg/kg-20mg/kg、1mg/kg-15mg/kg、1mg/kg-10mg/kg、1mg/kg-5mg/kg、1.5mg/kg-20mg/kg、1.5mg/kg-15mg/kg、1.5mg/kg-10mg/kg、1.5mg/kg-6mg/kg或1.5mg/kg-5mg/kg。
在某些实施方案中，匹地丽珠单抗可以0.2mg/kg-6mg/kg或1.5mg/kg-6mg/kg的剂量向人类施用；派姆单抗可以1mg/kg-10mg/kg的剂量向人类施用；纳武单抗可以0.3mg/kg-20mg/kg、0.3mg/kg-10mg/kg、1mg/kg-10mg/kg或1mg/kg或3mg/kg的剂量向人类施用；BMS-936559可以0.3mg/kg-10mg/kg的剂量向人类施用；阿特珠单抗可以1mg/kg-20mg/kg的剂量向人类施用；度伐鲁单抗可以0.1mg/kg-15mg/kg的剂量向人类施用；并且阿维单抗可以1mg/kg-20mg/kg的剂量向人类施用。
T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域-3(TIM-3)是Th1特异性细胞表面蛋白，其用作免疫检查点，所述免疫检查点通过下调巨噬细胞激活并且在慢性免疫病况中发生的CD8+ T细胞耗竭中起重要的作用来抑制淋巴细胞活性。TIM-3通过在与它的配体半乳凝素-9(Gal9)相互作用时引起细胞死亡来充当Th1/Tc1功能的负调节因子。因而，抑制TIM-3功能的化合物，如TIM-3抑制剂和/或Gal9抑制剂用来激活免疫系统。一类TIM-3抑制剂包括针对TIM-3和/或Gal-9的拮抗剂或中和抗体。许多拮抗剂或中和性抗TIM-3抗体和抗Gal9抗体是本领域已知的。人类或人源化抗TIM-3抗体的实例包括但不限于AF2365(人类IgG抗TIM-3单克隆抗体；R&D系统公司(R&D Systems))、CD366(人类IgG1抗TIM-3单克隆抗体；BioLegend公司)、F38-2E2(人类IgG1抗TIM-3单克隆抗体；R&D系统公司)、L3D(人类IgG1抗TIM-3单克隆抗体；CN 102492038 B)、MAB2365(人类IgG2a抗TIM-3单克隆抗体；R&D系统公司)、MAB23651(人类IgG1抗TIM-3单克隆抗体；R&D系统公司)以及TSR-022(人源化IgG4抗TIM-3单克隆抗体；Tesaro公司)。在某些实施方案中，抗TIM-3抗体和/或抗Gal9抗体可以如下剂量向人类施用：例如约0.1mg/kg-20mg/kg、0.1mg/kg-15mg/kg、0.1mg/kg-10mg/kg、0.1mg/kg-5mg/kg、0.2mg/kg-20mg/kg、0.2mg/kg-15mg/kg、0.2mg/kg-10mg/kg、0.2mg/kg-6mg/kg、0.2mg/kg-5mg/kg、0.3mg/kg-20mg/kg、0.3mg/kg-15mg/kg、0.3mg/kg-10mg/kg、0.3mg/kg-5mg/kg、1mg/kg-20mg/kg、1mg/kg-15mg/kg、1mg/kg-10mg/kg、1mg/kg-5mg/kg、1.5mg/kg-20mg/kg、1.5mg/kg-15mg/kg、1.5mg/kg-10mg/kg、1.5mg/kg-6mg/kg或1.5mg/kg-5mg/kg。
细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)也被称为分化簇152(CD152)，是充当下调免疫应答的免疫检查点的蛋白质受体。CTLA-4在Treg中组成性表达，但是仅在激活后的常规T细胞中上调。CTLA-4在与抗原提呈细胞的表面上的CD80或CD86结合时用作“关闭”开关。因而，抑制CTLA-4功能的化合物，如CTLA-4抑制剂、CD80抑制剂和/或CD86抑制剂用来激活免疫系统。一类CTLA-4抑制剂包括针对CTLA-4、CD80和/或CD86的拮抗剂或中和抗体。许多拮抗剂或中和性抗CTLA-4抗体、抗CD80抗体以及抗CD86抗体是本领域已知的。人类或人源化抗CTLA-4抗体的实例包括但不限于伊匹单抗(Ipilimumab)(人类IgG1抗CTLA-4单克隆抗体；百时美施贵宝公司)和替西木单抗(Tremelimumab)(人类IgG2抗CTLA-4单克隆抗体；辉瑞公司(Pfizer))。在某些实施方案中，抗CTLA-4抗体、抗CB80抗体和/或抗CD86抗体可以如下剂量向人类施用：例如约0.1mg/kg-20mg/kg、0.1mg/kg-15mg/kg、0.1mg/kg-10mg/kg、0.1mg/kg-5mg/kg、0.2mg/kg-20mg/kg、0.2mg/kg-15mg/kg、0.2mg/kg-10mg/kg、0.2mg/kg-6mg/kg、0.2mg/kg-5mg/kg、0.3mg/kg-20mg/kg、0.3mg/kg-15mg/kg、0.3mg/kg-10mg/kg、0.3mg/kg-5mg/kg、1mg/kg-20mg/kg、1mg/kg-15mg/kg、1mg/kg-10mg/kg、1mg/kg-5mg/kg、1.5mg/kg-20mg/kg、1.5mg/kg-15mg/kg、1.5mg/kg-10mg/kg、1.5mg/kg-6mg/kg或1.5mg/kg-5mg/kg。
杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)是在自然杀伤(NK)细胞和少数T细胞的质膜上表达的I型跨膜糖蛋白的家族。它们通过与在所有有核细胞类型上表达的主要组织相容性(MHC)I类分子相互作用来调节这些细胞的杀伤功能。因此，KIR是淋巴细胞活性的抑制因子。因而，抑制KIR功能的化合物，如KIR抑制剂用来激活免疫系统。一类KIR抑制剂包括针对KIR的拮抗剂或中和抗体。许多拮抗剂或中和性抗KIR抗体是本领域已知的。人类或人源化抗KIR抗体的实例包括但不限于利瑞鲁单抗(Lirilumab)(BMS-986015；人类抗KIR单克隆抗体；百时美施贵宝公司)。在某些实施方案中，抗KIR抗体可以如下剂量向人类施用：例如约0.1mg/kg-20mg/kg、0.1mg/kg-15mg/kg、0.1mg/kg-10mg/kg、0.1mg/kg-5mg/kg、0.2mg/kg-20mg/kg、0.2mg/kg-15mg/kg、0.2mg/kg-10mg/kg、0.2mg/kg-6mg/kg、0.2mg/kg-5mg/kg、0.3mg/kg-20mg/kg、0.3mg/kg-15mg/kg、0.3mg/kg-10mg/kg、0.3mg/kg-5mg/kg、1mg/kg-20mg/kg、1mg/kg-15mg/kg、1mg/kg-10mg/kg、1mg/kg-5mg/kg、1.5mg/kg-20mg/kg、1.5mg/kg-15mg/kg、1.5mg/kg-10mg/kg、1.5mg/kg-6mg/kg或1.5mg/kg-5mg/kg。
淋巴细胞激活基因3(LAG-3)也被称为分化簇223(CD223)，是对T细胞功能具有不同的生物效应的细胞表面分子。LAG-3是通过作用于Treg以及对CD8+ T细胞的直接作用来抑制免疫应答从而抑制淋巴细胞活性的免疫检查点。因而，抑制LAG-3功能的化合物，如LAG-3抑制剂用来激活免疫系统。一类LAG-3抑制剂包括针对LAG-3的拮抗剂或中和抗体。许多拮抗剂或中和性抗LAG-3抗体是本领域已知的。人类或人源化抗LAG-3抗体的实例包括但不限于BMS-986016(人类抗LAG-3单克隆抗体；百时美施贵宝公司)。在某些实施方案中，抗LAG-3抗体可以如下剂量向人类施用：例如约0.1mg/kg-20mg/kg、0.1mg/kg-15mg/kg、0.1mg/kg-10mg/kg、0.1mg/kg-5mg/kg、0.2mg/kg-20mg/kg、0.2mg/kg-15mg/kg、0.2mg/kg-10mg/kg、0.2mg/kg-6mg/kg、0.2mg/kg-5mg/kg、0.3mg/kg-20mg/kg、0.3mg/kg-15mg/kg、0.3mg/kg-10mg/kg、0.3mg/kg-5mg/kg、1mg/kg-20mg/kg、1mg/kg-15mg/kg、1mg/kg-10mg/kg、1mg/kg-5mg/kg、1.5mg/kg-20mg/kg、1.5mg/kg-15mg/kg、1.5mg/kg-10mg/kg、1.5mg/kg-6mg/kg或1.5mg/kg-5mg/kg。
OX40也被称为分化簇134(CD134)，是受体的TNFR超家族的成员。OX40促进效应T细胞和记忆T细胞的扩增，然而，值得注意的是它抑制调节性T细胞的分化和活性的能力以及它对细胞因子产生的调节。OX40在T细胞受体接合后瞬时表达，它仅在炎症病变内最近抗原激活的T细胞上上调。它的配体是OX40L，也被称为分化簇252(CD252)。因而，激活或刺激OX40功能的化合物，如OX40激活剂和/或OX40L激活剂用来激活免疫系统。一类OX40激活剂包括针对OX40和OX40L的激动剂抗体。针对OX40和/或OX40L的许多激动剂抗体是本领域已知的。人类或人源化抗OX40抗体的实例包括但不限于GSK3174998(人源化IgG1抗OX40单克隆抗体；葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline))、MEDI0562(人源化抗OX40单克隆抗体；MedImmune公司)以及MEDI6383(人类OX40融合蛋白；MedImmune公司)。其它抗OX40抗体包括但不限于MEDI6469(9B12；鼠类抗OX40单克隆抗体；MedImmune公司)。在某些实施方案中，抗OX40抗体和/或抗OX40L抗体可以如下剂量向人类施用：例如约0.1mg/kg-20mg/kg、0.1mg/kg-15mg/kg、0.1mg/kg-10mg/kg、0.1mg/kg-5mg/kg、0.2mg/kg-20mg/kg、0.2mg/kg-15mg/kg、0.2mg/kg-10mg/kg、0.2mg/kg-6mg/kg、0.2mg/kg-5mg/kg、0.3mg/kg-20mg/kg、0.3mg/kg-15mg/kg、0.3mg/kg-10mg/kg、0.3mg/kg-5mg/kg、1mg/kg-20mg/kg、1mg/kg-15mg/kg、1mg/kg-10mg/kg、1mg/kg-5mg/kg、1.5mg/kg-20mg/kg、1.5mg/kg-15mg/kg、1.5mg/kg-10mg/kg、1.5mg/kg-6mg/kg或1.5mg/kg-5mg/kg。
抗GITR抗体靶向糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关蛋白(GITR)，所述GITR在调节性T细胞(Treg)的表面上有规律地表达并且在激活后的效应T细胞的表面上表达。抗GITR抗体阻断多种类型的T细胞上存在的GITR与它的配体的相互作用，从而诱导肿瘤-抗原特异性效应T细胞的激活以及消除由不适当地激活的调节性T细胞所诱导的抑制。因而，激活或刺激GITR功能的化合物，如GITR激活剂用来激活免疫系统。一类GITR激活剂包括针对GITR的激动剂抗体。针对GITR的许多激动剂抗体是本领域已知的。人类或人源化抗TIGR抗体的实例包括但不限于GWN323(人源化抗GITR单克隆抗体；诺华公司(Novartis))和TRX518(人源化抗GITR单克隆抗体；GITR公司)。在某些实施方案中，抗GITR抗体可以如下剂量向人类施用：例如约0.1mg/kg-20mg/kg、0.1mg/kg-15mg/kg、0.1mg/kg-10mg/kg、0.1mg/kg-5mg/kg、0.2mg/kg-20mg/kg、0.2mg/kg-15mg/kg、0.2mg/kg-10mg/kg、0.2mg/kg-6mg/kg、0.2mg/kg-5mg/kg、0.3mg/kg-20mg/kg、0.3mg/kg-15mg/kg、0.3mg/kg-10mg/kg、0.3mg/kg-5mg/kg、1mg/kg-20mg/kg、1mg/kg-15mg/kg、1mg/kg-10mg/kg、1mg/kg-5mg/kg、1.5mg/kg-20mg/kg、1.5mg/kg-15mg/kg、1.5mg/kg-10mg/kg、1.5mg/kg-6mg/kg或1.5mg/kg-5mg/kg。
CD27是肿瘤坏死因子受体超家族的成员。CD27活性受到它的配体CD70在淋巴细胞和树突状细胞上的瞬时可用性的控制。CD27的激活在调节B细胞激活和免疫球蛋白合成中起关键的作用，支持初始细胞的抗原特异性扩增，是为T细胞免疫的产生和长期维持所需的并且是B细胞的记忆标志物。CD27转导引起NF-κB和MAPK8/JNK激活的信号。因而，激活或刺激CD27功能的化合物，如CD27激活剂和/或CD70激活剂用来激活免疫系统。一类CD27激活剂包括针对CD27和/或CD70的激动剂抗体。针对CD27和/或CD70的许多激动剂抗体是本领域已知的。人类或人源化抗CD27抗体的实例包括但不限于伐利鲁单抗(Varlilumab)(CDX-1127；人类抗CD27单克隆抗体；塞德斯医疗公司(CelldexTherapeutics))。在某些实施方案中，抗CD27抗体和/或抗CD70抗体可以如下剂量向人类施用：例如约0.1mg/kg-20mg/kg、0.1mg/kg-15mg/kg、0.1mg/kg-10mg/kg、0.1mg/kg-5mg/kg、0.2mg/kg-20mg/kg、0.2mg/kg-15mg/kg、0.2mg/kg-10mg/kg、0.2mg/kg-6mg/kg、0.2mg/kg-5mg/kg、0.3mg/kg-20mg/kg、0.3mg/kg-15mg/kg、0.3mg/kg-10mg/kg、0.3mg/kg-5mg/kg、1mg/kg-20mg/kg、1mg/kg-15mg/kg、1mg/kg-10mg/kg、1mg/kg-5mg/kg、1.5mg/kg-20mg/kg、1.5mg/kg-15mg/kg、1.5mg/kg-10mg/kg、1.5mg/kg-6mg/kg或1.5mg/kg-5mg/kg。
可诱导T细胞共刺激因子(ICOS)也被称为分化簇278(CD278)，是在激活的T细胞上表达的CD28超家族共刺激细胞表面受体。它是T细胞功能的激活因子。因而，激活或刺激ICOS功能的化合物，如ICOS激活剂或B7RP1激活剂用来激活免疫系统。一类ICOS激活剂包括针对ICOS和/或B7RP1的激动剂抗体。许多激动剂抗ICOS抗体和抗B7RP1抗体是本领域已知的。在某些实施方案中，抗ICOS抗体和/或抗B7RP1抗体可以如下剂量向人类施用：例如约0.1mg/kg-20mg/kg、0.1mg/kg-15mg/kg、0.1mg/kg-10mg/kg、0.1mg/kg-5mg/kg、0.2mg/kg-20mg/kg、0.2mg/kg-15mg/kg、0.2mg/kg-10mg/kg、0.2mg/kg-6mg/kg、0.2mg/kg-5mg/kg、0.3mg/kg-20mg/kg、0.3mg/kg-15mg/kg、0.3mg/kg-10mg/kg、0.3mg/kg-5mg/kg、1mg/kg-20mg/kg、1mg/kg-15mg/kg、1mg/kg-10mg/kg、1mg/kg-5mg/kg、1.5mg/kg-20mg/kg、1.5mg/kg-15mg/kg、1.5mg/kg-10mg/kg、1.5mg/kg-6mg/kg或1.5mg/kg-5mg/kg。
在某些实施方案中，可以使用抗体的组合，诸如但不限于：CT-011与针对蛋白质CD20的嵌合单克隆抗体利妥昔单抗(Rituximab)(商品名Rituxan、MabThera以及Zytux)的组合(例如各自为3mg/kg)；纳武单抗(例如1mg/kg)与伊匹单抗(例如3mg/kg)的组合；或纳武单抗(例如1mg/kg-10mg/kg)与HLA-A*0201限制性多肽疫苗的组合(Weber等，2013)。
在某些实施方案中，可以根据本发明使用的活性剂可以是抗体模拟物(mimetic)。抗体模拟物可以像抗体那样特异性结合抗原，但是在结构上与抗体无关。它们通常是具有约3kDa至20kDa的摩尔质量的人工肽或蛋白质。在该实施方案的方面，本文公开的抗体模拟物可以是亲和体(affibody)分子；affilin；affimer；affitin；α体(alphabody)；anticalin；avimer；DARPin；fynomer；Kunitz结构域肽；或单抗体(monobody)。抗体模拟物的非限制性实例示于表1中。
在某些实施方案中，可以根据本发明使用的活性剂可以是适体。适体是结合特异性靶分子的寡核苷酸或肽分子。在该实施方案的方面，本文所公开的适体可以是DNA适体、RNA适体、XNA适体或肽适体。
在某些实施方案中，本文所公开的抗体可以与佐剂组合。佐剂是使免疫应答增加或多样化的任何物质或物质的混合物。佐剂可以用来减少免疫接种的次数或保护性免疫接种所需的抗原的量。非限制性佐剂包括例如脂质体、油相，包括但不限于弗氏(Freund)类型的佐剂，如弗氏完全佐剂(FCA)；弗氏不完全佐剂(FIA)；皂角苷配基糖苷，如例如皂苷；卡波普(carbopol)；N-乙酰基胞壁酰基-L-丙氨酰基-D-异谷氨酰胺(通常被称为胞壁酰二肽或“MDP”)；以及脂多糖(LPS)。这样的佐剂一般以含有水相的乳液，或更通常以含有水不溶性无机盐的乳液的形式使用。这些无机盐包括氢氧化铝、硫酸锌、胶体氢氧化铁、磷酸钙或氯化钙。在该实施方案的方面，本文所公开的抗体可以与例如抗CTLA-4抗体与抗OX40抗体和TLR9配体如CpG(Marabelle等，2013)的组合相组合。
在某些实施方案中，可以根据本发明使用的活性剂可以是小分子。在该实施方案的方面，本文所公开的小分子可以是：(a)p300抑制剂(Liu等，2013)，如吉西他滨(gemcitabine)(低剂量)或C646或其类似物，即式I的化合物：
其中R1选自H、-CO2R6、-CONR6R7、-SO3H、或-SO2NR6R7；R2选自H、-CO2R6、或卤素，优选地是Cl；R3选自卤素(优选地是F)、-NO2、-CN、-CO2R6(优选地是CO2CH3或CO2CH2CH3)、或-CH2OH；R4和R5各自独立地是H或-C1-C6烷基，优选地是甲基；R6是H或-C1-C6烷基，优选地是H、甲基或乙基；并且R7是H或-C1-C6烷基，优选地是H或甲基；(b)舒尼替尼(Sunitinib)；(c)多金属氧酸盐-1(POM-1)(Ghiringhelli等，2012)；(d)α,β-亚甲基腺苷5'-二磷酸酯(APCP)；(e)三氧化二砷(As2O3)；(f)GX15-070(奥巴克拉(Obatoclax))；(g)视黄酸拮抗剂，如Ro 41-5253(合成类视黄醇和选择性小分子拮抗剂)或LE-135；(h)SIRPα(CD47)拮抗剂，如CV1-hIgG4(SIRPα变体)，作为单独药剂或与抗CD47抗体组合；(i)CCR4拮抗剂，如AF399/420/18025，作为单独药剂或与抗CCR4抗体组合；(j)腺苷受体拮抗剂；(k)腺苷A1受体拮抗剂；腺苷A2a受体；(m)腺苷A2b受体拮抗剂；(n)A3受体拮抗剂；(o)吲哚胺-2,3-双加氧酶的拮抗剂；或(p)HIF-1调节剂。
在某些实施方案中，所述药剂是p300抑制剂，它的化学式列于表2中，即C646(4-(4-((5-(4,5-二甲基-2-硝基苯基)呋喃-2-基)亚甲基)-3-甲基-5-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑-1-基)苯甲酸)、C146(4-羟基-3-(((2-(3-碘苯基)苯并[d]唑-5-基)亚氨基)甲基)苯甲酸)或C375(2-氯-4-(5-((2,4-二氧代-3-(2-氧代-2-(对甲苯基氨基)乙基)噻唑烷-5-亚基)甲基)呋喃-2-基)苯甲酸)。具体来说，p300抑制剂是C646。
在某些实施方案中，腺苷受体拮抗剂可以是CGS15943(9-氯-2-(2-呋喃基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺)；腺苷A1受体拮抗剂可以是PSB 36(1-丁基-8-(六氢-2,5-亚甲基并环戊二烯-3a(1H)-基)-3,7-二氢-3-(3-羟丙基)-1H-嘌呤-2,6-二酮)；腺苷A2a受体拮抗剂可以是SCH58261(5-氨基-7-(2-苯乙基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并(4,3-e)-1,2,4-三唑并(1,5-c)嘧啶)、SYN115(4-羟基-N-[4-甲氧基-7-(4-吗啉基)-2-苯并噻唑基]-4-甲基-1-哌啶甲酰胺)、FSPTP(也被称为SCH58261(5-氨基-7-[2-(4-氟磺酰基)苯基乙基]-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-ε]-1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶))、SCH442416(2-(2-呋喃基)-7-[3-(4-甲氧基苯基)丙基]-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺)、或ZM241385(也被称为tozadenant(4-羟基-N-(4-甲氧基-7-吗啉代苯并[d]噻唑-2-基)-4-甲基哌啶-1-甲酰胺)；腺苷A2b受体拮抗剂可以是PSB 603(8-{4-[4-(4-氯苯基)哌嗪-1-磺酰基]苯基}-1-丙基-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-2,6-二酮(Nakatsukasa等，2011))；并且A3受体拮抗剂可以是MRS3777(2-苯氧基-6-(环己基氨基)嘌呤半草酸盐)。
在某些实施方案中，吲哚胺-2,3-双加氧酶通路的小分子抑制剂可以是Indoximod(NSC-721782/NLG-9189(1-甲基-D-色氨酸)，NewLink Genetics公司)、INCB024360((4E)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基)-亚硝基亚甲基]-1,2,5-二唑-3-胺，因塞特公司(Incyte))或NLG-919(1-环己基-2-(5H-咪唑并[5,1-a]异吲哚-5-基)乙醇，NewLink Genetics公司)。
HIF-1调节剂可以是Zheng等(Zheng等，2015)中所述的M30，即(5-[N-甲基-N-炔丙基氨甲基]-8-羟基喹啉)。
在某些实施方案中，可以根据本发明使用的活性剂可以是本文所公开的抗体和本文所公开的小分子的任何组合。在该实施方案的方面，活性剂可以是本文所公开的抗体和本文所公开的小分子的任何组合。
在某些实施方案中，可以根据本发明使用的活性剂可以是选自由以下各项组成的组的蛋白质：(a)印度楝(Neem)叶糖蛋白(NLGP；(Roy等，2013))；和/或(b)sCTLA-4(CTLA-4的可溶性同工型)(Ward等，2013)。
在某些实施方案中，可以根据本发明使用的活性剂可以是沉默分子。在该实施方案的方面，沉默分子选自由以下各项组成的组：miR-126反义分子(Qin等，2013)和抗半乳凝素-1(Gal-1；(Dalotto-Moreno等，2013))。
在某些实施方案中，可以根据本发明使用的活性剂可以是OK-432(酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)的冻干制剂)(Hirayama等，2013)。
在某些实施方案中，可以根据本发明使用的活性剂可以是IL-12和抗CTLA-4的组合。
在某些实施方案中，所述药剂可以衍生自靶向革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌从而促进对Treg的免疫调节的广谱抗生素，例如靶向革兰氏阳性细菌并且已经被证实降低Treg水平/活性的万古霉素(Brestoff和Artis，2013；Smith等，2013)。
在某些实施方案中，可以根据本发明使用的活性剂可以是本文所公开的抗体、本文所公开的抗体模拟物、本文所公开的适体、本文所公开的小分子、本文所公开的印度楝叶糖蛋白、本文所公开的sCTLA-4、本文所公开的沉默分子、本文所公开的OK-432、和/或本文所公开的IL-12和抗CTLA-4的组合的任何组合。
如上所述，活性剂是通过包括至少两个治疗过程的给药方案来施用的，每一个治疗过程按顺序包括治疗期，之后是非治疗间隔期。
术语“治疗期(treatment session)”在本文与术语“治疗阶段(treatmentperiod)”或“治疗的阶段(period of treatment)”可互换使用并且指的是向所治疗的个体施用本文所公开的一种或多种活性剂的时期。如下文更详细论述的，治疗期可以是单次给药事件，或可以是在一段时间内发生的多次给药方案。治疗期使得治疗有效量的本文所公开的活性剂在整个治疗期期间始终被维持。
术语“非治疗期(non-treatment session)”在本文与术语“非治疗阶段”、“无治疗的阶段”、“间隔期(interval session)”或“非治疗间隔期(interval session of non-treatment)”可互换使用并且指的是不向所治疗的个体施用本文所公开的活性剂的时间段。在非治疗期期间停止活性剂施用使得在所治疗的个体中本文所公开的活性剂降低到亚治疗水平。如本文所公开的“非治疗期”与介于在治疗期期间的一段时间内发生的构成多次给药方案的给药事件之间的时间段不是相同的事件。如果在治疗期期间本文所公开的一种或多种活性剂的施用是重复施用，那么非治疗期长于在治疗期期间这些重复施用之间的间隔时间段。
给药方案可以通过多种方式来确定。举例来说，可以通过单独地监测产生IFN-γ的白细胞的水平或活性或白细胞响应于刺激的增殖速率，并且根据经验和个人情况调整如根据监测的结果所确定的治疗期、施用频率以及间隔期，来将免疫抑制的水平调整到对于正接受治疗的每一个患者来说所期望的水平(个性化医疗)。
因此，治疗期可以包括向个体施用活性剂或药物组合物，并且所述治疗期被维持至少直到产生IFN-γ的白细胞的全身性存在或水平或白细胞响应于刺激的增殖速率上升到高于参考值为止，所述施用在间隔期期间暂停，并且只要所述水平高于参考值，所述间隔期就一直被维持，其中所述参考值选自(a)在所述施用之前从所述个体获得的最近的血液样品中所测量的、产生IFN-γ的白细胞的全身性存在或活性的水平、或白细胞响应于刺激的增殖速率；或(b)作为患有CNS的疾病、病症、病况或损伤的个体群体的特征的、产生IFN-γ的白细胞的全身性存在或活性的水平、或白细胞响应于刺激的增殖速率。
治疗期和非治疗期或间隔期的时间长度可以由医师在针对某个患者群体的临床试验中确定，然后始终应用于该患者群体，而不需要在个人基础上监测免疫抑制的水平。
在某些实施方案中，治疗期包括向个体施用活性剂并且所述治疗期被维持至少直到所述活性剂的全身性存在达到治疗水平为止，所述施用在间隔期期间暂停，并且只要所述水平高于所述治疗水平的约95％、90％、80％、70％、60％或50％，所述间隔期就一直被维持。如本文所用的术语“治疗水平”指的是用于在已知的治疗，如癌症治疗中阻断免疫检查点的药物的通常接受的全身水平(参见上文)。
在某些实施方案中，治疗期包括向个体施用活性剂并且治疗期被维持至少直到所述活性剂的全身性存在或活性达到治疗水平为止，然后此时停止施用，并且只要所述活性剂的全身性存在或活性被维持在高于阈值治疗水平，就一直维持非治疗阶段。在该实施方案的方面，阈值治疗水平是如下的水平：所述水平是所述治疗水平的例如至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％。如本文所用的术语“治疗水平”指的是用于在已知的治疗，如癌症治疗中阻断免疫检查点的药物的通常接受的全身水平(参见上文)。在该实施方案的方面，所述活性剂是抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗PD-L2抗体、抗CTLA-4抗体、抗B7RP1抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体、抗B7-H7抗体、抗BTLA抗体、抗HVEM抗体、抗CD-27抗体、抗CD40抗体、抗CD40L抗体、抗CD70抗体、抗CD80抗体、抗CD86抗体、抗CD137抗体、抗CD137L抗体、抗OX40抗体、抗OX40L抗体、抗TIM-3抗体、抗半乳凝素9抗体、抗KIR抗体、抗LAG-3抗体、抗ICOS抗体、抗VISTA抗体、抗STING、抗TIGIT、抗GITR或其任何组合。
在某些实施方案中，治疗期包括向个体施用活性剂并且所述治疗期被维持至少直到所述活性剂的全身性存在或活性达到治疗水平为止，然后此时停止施用，并且只要对认知的有益作用被维持在高于开始治疗之前的水平，就一直维持非治疗阶段。在该实施方案的方面，所维持的对认知的有益作用是显示出高于开始治疗之前的认知水平例如至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％的改善的作用。在该实施方案的方面，所述活性剂是抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗PD-L2抗体、抗CTLA-4抗体、抗B7RP1抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体、抗B7-H7抗体、抗BTLA抗体、抗HVEM抗体、抗CD-27抗体、抗CD40抗体、抗CD40L抗体、抗CD70抗体、抗CD80抗体、抗CD86抗体、抗CD137抗体、抗CD137L抗体、抗OX40抗体、抗OX40L抗体、抗TIM-3抗体、抗半乳凝素9抗体、抗KIR抗体、抗LAG-3抗体、抗ICOS抗体、抗VISTA抗体、抗STING、抗TIGIT、抗GITR或其任何组合。
在某些实施方案中，治疗期包括向个体施用活性剂并且所述治疗期被维持至少直到所述活性剂的全身性存在或活性达到治疗水平为止，然后此时停止施用，并且只要对视力的有益作用被维持在高于开始治疗之前的水平，就一直维持非治疗阶段。在该实施方案的方面，所维持的对视力的有益作用是显示出高于开始治疗之前的视力水平例如至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％的改善的作用。在该实施方案的方面，所述活性剂是抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗PD-L2抗体、抗CTLA-4抗体、抗B7RP1抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体、抗B7-H7抗体、抗BTLA抗体、抗HVEM抗体、抗CD-27抗体、抗CD40抗体、抗CD40L抗体、抗CD70抗体、抗CD80抗体、抗CD86抗体、抗CD137抗体、抗CD137L抗体、抗OX40抗体、抗OX40L抗体、抗TIM-3抗体、抗半乳凝素9抗体、抗KIR抗体、抗LAG-3抗体、抗ICOS抗体、抗VISTA抗体、抗STING、抗TIGIT、抗GITR或其任何组合。
在某些实施方案中，治疗期可以是单次施用或它可以包括在规定的时间段期间给予的多次施用。在该实施方案的方面，治疗期可以是在以下时间期间给予的多次施用：例如1天至4周、2天至4周、3天至4周、4天至4周、5天至4周、6天至4周、1周至4周、10天至4周、2周至4周、17天至4周或3周至4周。举例来说，治疗期可以包括在1周内给予的两次施用，如例如在第一次施用后1天、2天、3天、4天、5天或6天给予第二次施用。作为另一个实例，治疗期可以包括全部均在1周内给予的三次施用，如例如在前一次施用后1天、2天或3天给予。作为另一个实例，治疗期可以包括全部均在2周内给予的三次施用，如例如在前一次施用后1天、2天、3天、4天或5天给予。作为另一个实例，治疗期可以包括全部均在2周内给予的四次施用，如例如在前一次施用后1天、2天、3天或4天给予。作为另一个实例，治疗期可以包括全部均在3周内给予的四次施用，如例如在前一次施用后1天、2天、3天、4天、5天或6天给予。作为另一个实例，治疗期可以包括全部均在3周内给予的五次施用，如例如在前一次施用后1天、2天、3天、4天或5天给予。
在某些实施方案中，非治疗间隔期可以是1周至6个月，例如2周至4周、3周至4周、2周至6周、3周至6周、4周至6周、5周至6周、2周至2个月、3周至2个月、4周至2个月、5周至2个月、6周至2个月、7周至2个月、2个月至3个月、2个月至4个月、3个月至4个月、3个月至5个月、3个月至5个月、4个月至5个月、1周至6个月、2周至6个月、3周至6个月、4周至6个月、6周至6个月、2个月至6个月、3个月至6个月、4个月至6个月或5个月至6个月。在某些实施方案中，非治疗间隔期可以具有1个月至2个月的时间长度、1个月至3个月的时间长度或2个月至3个月的时间长度。
在治疗期中，活性剂或药物组合物的施用可以是单次施用或重复施用，例如，所述活性剂或药物组合物可以仅施用一次，然后紧接着是间隔期，或它可以每天一次、或每2天一次、每3天一次、每4天一次、每5天一次或每6天一次、或每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次施用。这些频率适用于任何活性剂，可以基于本领域的常用实践，并且可以最终由医师在临床试验中确定。或者，治疗期中重复施用的频率可以根据活性剂的性质来调整，其中例如，小分子可以每天一次施用而抗体可以每3天一次施用。应当了解的是，当在治疗期期间以相对低的频率施用药剂，例如在1个月的治疗期期间每周一次、或在6个月的治疗期期间每月一次施用药剂时，在该治疗期之后是非治疗间隔期，其时间长度长于在治疗期期间重复施用之间的时间段(即在该实例中，分别长于1周或1个月)。在该实例中治疗期期间施用之间的1周或1个月的暂停不被认为是间隔期。
可相对于施用频率来调整治疗期和非治疗期或间隔期的时间长度，以便例如每3天一次施用活性剂的频率可能产生6天或9天的治疗期以及相应开始的间隔期。
如果治疗期由单次施用组成，那么给药方案由非治疗间隔期的时间长度决定，以使得在单次施用之后是7天、8天、9天、10天、14天、18天、21天、24天或28天或更长时间的非治疗间隔期，之后是下一个单次施用治疗期。具体来说，给药方案由之间具有2周、3周或4周非治疗的非治疗间隔期的单次施用组成。此外，给药方案可以由之间具有2周至4周、2周至3周或3周至4周非治疗的非治疗间隔期的单次施用组成。
如果治疗期由多次施用组成，那么给药方案由非治疗间隔期的时间长度决定，以使得在1周内给予的多次施用后是7天、10天、14天、18天、21天、24天或28天或更长时间的非治疗间隔期，之后是下一个多次施用治疗期。具体来说，给药方案可以由之间具有2周或3周或4周非治疗的非治疗间隔期的在1周内给予的多次施用组成。此外，给药方案可以由之间具有2周至4周、2周至3周或3周至4周的非治疗间隔期的、在1周内给予的多次施用组成。
作为另一个实例，给药方案可以包括在2周内给予的多次施用，之后是2周、3周或1个月、2个月、3个月或4个月或更长时间的非治疗间隔期，之后是下一个多次施用治疗期。具体来说，给药方案可以由之间具有1个月、2个月、3个月或4个月的非治疗间隔期的、在2周内给予的多次施用组成。此外，给药方案可以由之间具有1个月至2个月、1个月至3个月、1个月至4个月、2个月至3个月、2个月至4个月或3个月至4个月的非治疗间隔期的、在2周内给予的多次施用组成。
作为另一个实例，给药方案可以包括在3周内给予的多次施用，之后是1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、或6个月或更长时间的非治疗期，之后是下一个多次施用治疗期。具体来说，给药方案可以由之间具有1个月、2个月、3个月、4个月、5个月或6个月的非治疗间隔期的、在3周内给予的多次施用组成。此外，给药方案可以由之间具有以下非治疗间隔期的、在3周内给予的多次施用组成：1个月至2个月、1个月至3个月、1个月至4个月、1个月至5个月、1个月至6个月、2个月至3个月、2个月至4个月、2个月至5个月、2个月至6个月、3个月至4个月、3个月至5个月、3个月至6个月、4个月至5个月、4个月至6个月或5个月至6个月。
当然，设想了灵活的给药方案，所述给药方案从某个方案开始并且被另一个方案代替。举例来说，各自包括相隔3天的2次单次施用的治疗期和所述治疗期之间例如1周的间隔期，在被认为适当时可以被这样的给药方案代替，所述给药方案包括由例如2周、3周或4周间隔期隔开的单次施用的治疗期。作为另一个实例，各自包括相隔7天的2次单次施用的治疗期和所述治疗期之间例如2周的间隔期，在被认为适当时可以被这样的给药方案代替，所述给药方案包括由例如2周、3周、4周、5周或6周间隔期隔开的单次施用的治疗期。作为另一个实例，各自包括相隔3天的3次单次施用的治疗期和所述治疗期之间例如2周的间隔期，在被认为适当时可以被这样的给药方案代替，所述给药方案包括由例如2周、3周、4周、5周或6周间隔期隔开的单次施用的治疗期。
在任何情况下，给药方案(即治疗期和间隔期的时间长度)被调整，以使得个体的免疫抑制的水平的降低(例如通过调节性T细胞的全身性存在或活性的水平的降低或产生IFN-γ的白细胞的全身性存在或活性的水平的增加所测量)是瞬时的。
根据本发明的方法、活性剂或药物组合物可以用于治疗作为神经变性疾病、病症或病况的CNS的疾病、病症或病况。在该实施方案的方面，所述神经变性疾病、病症或病况是阿尔茨海默氏病、肌萎缩性侧索硬化、帕金森氏病(Parkinson's disease)、亨廷顿氏病(Huntington's disease)、原发性进行性多发性硬化症；继发性进行性多发性硬化症、皮质基底节变性(corticobasal degeneration)、雷特综合征(Rett syndrome)、tau蛋白病、视网膜变性病症；前部缺血性视神经病变；青光眼；葡萄膜炎；抑郁症；创伤相关应激障碍或创伤后应激障碍、额颞叶痴呆、路易体痴呆、轻度认知障碍、后皮层萎缩(posterior corticalatrophy)、原发性进行性失语症或进行性核上性麻痹。在某些实施方案中，CNS的病况是年龄相关性痴呆。在该实施方案的某些方面，CNS的病况是阿尔茨海默氏病、肌萎缩性侧索硬化、帕金森氏病、亨廷顿氏病。
tau蛋白病是特征在于tau蛋白在人类脑中神经原纤维缠结或胶质原纤维缠结中病理性聚集的在临床上、形态学上以及生物化学上异质的一类神经变性疾病。tau蛋白是与微管结合并且促进它们聚合的微管相关蛋白(MAP)。它在维持轴突运输和神经元完整性中起重要作用，但是在树突中具有生理作用，并且它在胶质细胞中以低水平表达。在tau蛋白病中，由tau的过度磷酸化形成缠结，从而引起它以不溶形式聚集。tau蛋白病的非限制性实例包括阿尔茨海默氏病、嗜银颗粒病(argyrophilic grain disease)、慢性创伤性脑病、皮质基底节变性、拳击员痴呆、额颞叶痴呆、额颞叶变性、哈勒沃登-施帕茨病(Hallervorden-Spatz disease)、亨廷顿氏病、神经节神经胶质瘤、神经节细胞瘤、球状神经胶质tau蛋白病、铅毒性脑病、脂褐质沉积症、Lytico-Bodig病(关岛帕金森氏病-痴呆综合征(Parkinson-dementia complex of Guam))、脑膜血管瘤病、与17号染色体相关的帕金森病、皮克病(Pick's disease)、原发性年龄相关tau蛋白病(PART)(原先被称为仅神经原纤维缠结型痴呆(neurofibrillary tangle-only dementia，NFT-痴呆))、脑炎后帕金森病、进行性核上性麻痹、亚急性硬化性全脑炎以及结节性硬化。
视网膜变性病症是由于感光细胞死亡而引起视网膜退化的病症。视网膜变性有几个病因，包括动脉或静脉阻塞、糖尿病性视网膜病变、早产儿晶状体后纤维增生/视网膜病变、或疾病(通常是遗传性的)。症状包括但不限于视力受损、夜盲症、视网膜脱离、光敏感、眩光敏感、管状视力、深度知觉丧失、对比度丧失、夜盲症、中心视力丧失、周边视力丧失以及视力完全丧失。视网膜变性病症包括但不限于年龄相关黄斑变性(湿性和干性)、色素性视网膜炎、无脉络膜、视网膜视锥细胞-视杆细胞营养不良(Cone-Rod RetinalDystrophy)、回旋状萎缩、青少年视网膜劈裂症、卵黄状黄斑营养不良(贝斯特氏病(Best'sDisease))、无β脂蛋白血症(巴-科二氏病(Bassen-Kornzweig Disease))、巴-比二氏综合征(Bardet-Biedl Syndrome)、蓝色视锥细胞全色盲病(Blue Cone MonochromatismDisease)、显性玻璃膜疣、高曼-法夫尔玻璃体视网膜营养不良(Goldman-FavreVitreoretinal Dystrophy)(增强型S视锥细胞综合征)、卡恩斯-塞尔综合征(Kearns-Sayre Syndrome)、劳-穆二氏综合征(Laurence-Moon Syndrome)、利伯氏先天性黑蒙症(Leber's Congenital Amaurosis)、利伯氏雷夫叙姆病(Leber's Refsum disease)、小口氏病(Oguchi Disease)、乳头周围(中心周围)脉络膜营养不良、色素型营养不良、索斯比黄斑营养不良(Sorsby Macular Dystrophy)、斯特格氏病(Stargardt's Disease)、斯蒂克勒综合征(Stickler's Syndrome)、厄舍综合征(Usher Syndrome)以及瓦格纳氏玻璃体视网膜营养不良(Wagner's Vitreoretinal Dystrophy)。
在某些实施方案中，阻断选自以下各项的免疫检查点之一：ICOS-B7RP1、T细胞激活的V型结构域Ig抑制因子(VISTA)、B7-CD28样分子、CD40L-CD40、CD28-CD80、CD28-CD86、B7H3、B7H4、B7H7、BTLA-HVEM、CD137-CD137L、OX40L、CD27-CD70、STING、TIGIT以及A2aR腺苷和吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)-L-色氨酸的上述活性剂中的每一种，如针对免疫检查点的两个配偶体之一的抗体，用于治疗选自以下各项的神经变性疾病、病症或病况中的任一种：阿尔茨海默氏病、肌萎缩性侧索硬化、帕金森氏病、亨廷顿氏病、原发性进行性多发性硬化症；继发性进行性多发性硬化症、皮质基底节变性、雷特综合征；选自由以下各项组成的组的视网膜变性病症：年龄相关的黄斑变性和色素性视网膜炎；前部缺血性视神经病变；青光眼；葡萄膜炎；抑郁症；创伤相关应激障碍或创伤后应激障碍、额颞叶痴呆、路易体痴呆、轻度认知障碍、后皮层萎缩、原发性进行性失语症或进行性核上性麻痹。包括使用这些活性剂中的任一种的对这些疾病中的任一种的治疗可以根据上述方案来进行。
根据本发明的方法、活性剂以及药物组合物可以进一步用于治疗选自以下各项的CNS损伤：脊髓损伤、闭合性头部损伤、钝伤、穿透性创伤、出血性中风、缺血性中风、脑缺血、视神经损伤、心肌梗塞、有机磷中毒以及由肿瘤切除术所引起的损伤。
在某些实施方案中，阻断选自以下各项的免疫检查点之一：ICOS-B7RP1、T细胞激活的V型结构域Ig抑制因子(VISTA)、B7-CD28样分子、CD40L-CD40、CD28-CD80、CD28-CD86、B7H3、B7H4、B7H7、BTLA-HVEM、CD137-CD137L、OX40L、CD27-CD70、STING、TIGIT、以及A2aR腺苷和吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)-L-色氨酸的上述活性剂中的每一种，如针对免疫检查点的两个配偶体之一的抗体，用于治疗选自以下各项的CNS损伤：脊髓损伤、闭合性头部损伤、钝伤、穿透性创伤、出血性中风、缺血性中风、脑缺血、视神经损伤、心肌梗塞、有机磷中毒以及由肿瘤切除术所引起的损伤。包括使用这些活性剂中的任一种的对这些损伤中的任一种的治疗可以根据上述方案来进行。
如上所述，本申请的发明人已经发现本发明改善了模拟阿尔茨海默氏病的小鼠的认知功能。因此，所述方法、活性剂以及药物组合物可以用于改善CNS运动和/或认知功能，例如用于缓解可能在没有诊断疾病的个体中以及在患有神经变性疾病的人中发生的年龄相关的认知功能丧失。此外，所述方法、活性剂以及药物组合物可以用于缓解由急性应激或创伤性事件所引起的认知功能丧失。本文在上文所提到的认知功能可以包括学习、记忆或这两者。
应当强调的是，在模拟阿尔茨海默氏病的小鼠(5XFAD AD-Tg小鼠)中，本申请的发明人在疾病表现的各个阶段观察到并且表征了认知功能的改善；疾病病理的早期和晚期进展阶段这两者均可以通过所述治疗来减轻。5XFAD AD-Tg小鼠在2.5个月大时开始显示大脑斑块病理并且在5个月大时显示出认知缺陷(Oakley等，2006)。值得注意的是，虽然在以下实施例2中，本申请的发明人描述了在6个月大的5XFAD小鼠中的治疗作用，但是在实施例5中，他们表征了在11个月大和12个月大的5XFAD小鼠中的治疗作用，这是该模型中淀粉样蛋白β斑块沉积和认知缺陷的极度进展阶段。因此预期，所提出的发明将与疾病进展的不同阶段的患者具有相关性，如1期：轻度/早期(持续2年-4年)；2期：中度/中期(持续2年-10年)；以及3期：重度/晚期(持续1年-3+年)。
如本文所用的术语“CNS功能”尤其指的是接收和处理感觉信息、思考、学习、记忆、感知、产生和理解语言、控制运动功能以及听觉和视觉响应、保持平衡和均衡、运动协调、传导感觉信息以及控制诸如呼吸、心率、和消化的自主功能。
术语“认知”、“认知功能”以及“认知表现”在本文可互换使用，其与涉及但不限于以下的任何智力过程或状态相关：学习、记忆、意象生成、思考、意识、推理、空间能力、言语和语言技能、语言习得以及判断注意力的能力。认知是在脑的多个区域中形成的，所述区域如海马、皮层以及其它脑结构。然而，推测长期记忆至少部分地存储在皮层中，并且已知感觉信息通过特定的皮层结构(存在于岛叶皮层中的味觉皮层)来获取、巩固和检索。
在人类中，认知功能可以通过任何已知的方法来测量，所述方法例如但不限于通过临床总体印象变化量表(CIBIC-补充量表)；简易智力状态检查表(Mini Mental StateExam，MMSE)；神经精神症状问卷(Neuropsychiatric Inventory，NPI)；临床痴呆评定量表(Clinical Dementia Rating Scale，CDR)；剑桥自动化成套神经心理测试(CambridgeNeuropsychological Test Automated Battery，CANTAB)；或Sandoz老年临床评估量表(Sandoz Clinical Assessment-Geriatric，SCAG)。认知功能还可以使用成像技术来间接地测量，所述成像技术如正电子发射断层摄影术(PET)、功能性磁共振成像(fMRI)、单光子发射计算机断层摄影术(SPECT)、或允许测量脑功能的任何其它成像技术。
影响患者的认知的过程中的一个或多个的改善将意味着所述患者的认知功能的改善，因此在某些实施方案中，改善认知包括改善学习、可塑性、和/或长期记忆。术语“改善”和“增强”可互换使用。
术语“学习(learning)”涉及获取或获得新的知识、行为、技能、价值观或偏好、或修改和加强现有的知识、行为、技能、价值观或偏好。
术语“可塑性(plasticity)”涉及与脑随着学习而改变以及改变已经获取的记忆的能力相关的突触可塑性、脑可塑性或神经可塑性。反映可塑性的一个可测量的参数是记忆消退。
术语“记忆”涉及其中编码、存储、以及检索信息的过程。记忆具有三个可区分的类别：感觉记忆、短期记忆、以及长期记忆。
术语“长期记忆”是长时间或无限时间地保存信息的能力。长期记忆包括两个主要部分：外显记忆(陈述性记忆)和内隐记忆(非陈述性记忆)。长期记忆是通过记忆巩固来实现的，所述记忆巩固是在初始获取记忆痕之后使它稳定的一类过程。巩固被分为两个具体的过程，即突触巩固，其在学习后的最初几小时内发生；以及系统巩固，其中海马依赖性记忆在数周至数年的时间内变得不依赖于海马。
上文描述本发明的药物组合物的不同特征的实施方案也与本发明的方法相关，这是因为所述方法使用相同的药物组合物。
在又另一个方面，本发明提供了用于降低被诊断为患有阿尔茨海默氏病的患者的Aβ斑块负荷的方法，所述方法包括向所述患者施用如本文在上文所限定的活性剂或药物组合物，其通过释放由一个或多个免疫检查点对免疫系统施加的限制来引起全身免疫抑制的水平的降低。
在再另一个方面，本发明提供了一种用于减少被诊断为患有阿尔茨海默氏病的患者的海马体神经胶质增生的方法，所述方法包括向所述患者施用如本文在上文所限定的活性剂或药物组合物，其通过释放由一个或多个免疫检查点对免疫系统施加的限制来引起全身免疫抑制的水平的降低。
根据本发明使用的药物组合物可以使用一种或多种生理学上可接受的载体或赋形剂以常规的方式配制。一种或多种载体必须在与组合物的其它成分相容以及对其接受者无害的意义上是“可接受的”。
载体、施用方式、剂型等的以下例子作为已知的可能的载体、施用方式、剂型等被列出，从中可以选择载体、施用方式、剂型等以用于本发明。然而，本领域的普通技术人员将了解的是，所选择的任何给定的制剂和施用方式首先应当被测试以确定它实现所期望的结果。
施用方法包括但不限于肠胃外，例如静脉内、腹膜内、肌内、皮下、粘膜(例如口腔、鼻内、颊面、经阴道、经直肠、眼内)、鞘内、局部以及真皮内途径。施用可以是全身的或局部的。
术语“载体”指的是与活性剂一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂、或媒介物。药物组合物中的载体可以包括粘结剂，如微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮(聚维酮(polyvidone)或聚乙烯吡咯酮(povidone))、黄蓍胶、明胶、淀粉、乳糖或乳糖一水合物；崩解剂，如藻酸、玉米淀粉等；润滑剂或表面活性剂，如硬脂酸镁、或十二烷基硫酸钠；以及助流剂，如胶态二氧化硅。
对于口服施用，药物制剂可以呈液体形式，例如溶液、糖浆或悬浮液，或可以作为用于在使用之前用水或其它合适的媒介物重构的药物产品存在。这样的液体制剂可以通过常规手段用药学上可接受的添加剂制备，所述添加剂如悬浮剂(例如山梨糖醇浆、纤维素衍生物或氢化可食用脂肪)；乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯胶)；非水性媒介物(例如杏仁油、油酯、或分馏植物油)；以及防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)。药物组合物可以采用例如片剂或胶囊的形式，所述形式是通过常规手段用药学上可接受的赋形剂制备的，所述赋形剂如粘合剂(例如预胶凝化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石粉或二氧化硅)；崩解剂(例如马铃薯淀粉或羟基乙酸淀粉钠)；或润湿剂(例如十二烷基硫酸钠)。所述片剂可以通过本领域公知的方法包衣。
用于口服施用的制剂可以适当地被配制以给予活性化合物的受控释放。
对于颊面施用，组合物可以采用通过常规方式配制的片剂或糖锭的形式。
所述组合物可以被配制用于通过注射，例如通过弹丸注射或连续输注来进行肠胃外施用。用于注射的制剂可以单位剂型提供，例如在安瓿或多剂量容器中与添加的防腐剂一起被提供。所述组合物可以采用诸如于油性媒介物或水性媒介物中的悬浮液、溶液或乳液的形式，并且可以含有配制剂，如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性成分可以呈粉末形式以用于在使用之前用合适的媒介物，例如无菌无热原的水重构。
所述组合物还可以被配制成直肠组合物，如栓剂或保留灌肠剂，所述组合物例如含有常规的栓剂基质，如可可脂或其它甘油酯。
对于通过吸入施用，根据本发明使用的组合物借助于合适的推进剂，以来自加压包装或雾化器的气雾剂喷雾呈递形式被方便地递送，所述合适的推进剂例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体。在加压气雾剂的情况下，可以通过提供阀门来确定剂量单位，以递送经过计量的量。用于吸入器或吹入器中的由例如明胶制成的胶囊和药筒可以被配制为含有化合物和合适的粉末基质(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。
待用于人类使用的活性成分的剂量的确定是基于本领域常用的实践，并且最终将由医师在临床试验中确定。用于向人类施用的预期近似等效剂量可以基于本文下面所公开的体内实验证据，使用已知的公式来计算(例如Reagan-Show等(2007)Dose translationfrom animal to human studies revisited(重新审视从动物研究到人类研究的剂量转换)，The FASEB Journal22:659-661)。根据该范例，成人等效剂量(mg/kg体重)等于给予小鼠的剂量(mg/kg体重)乘以0.081。
本说明书的方面也可以被描述如下：
1.一种治疗有需要的个体的中枢神经系统的疾病、病症、病况或损伤的方法，所述方法包括向所述个体施用组合物，所述组合物包含通过释放由一个或多个免疫检查点对免疫系统施加的限制来引起全身免疫抑制的水平降低的活性剂，其中所述组合物是通过包括至少一个治疗过程的给药方案施用的，每一个治疗过程按顺序包括治疗期(其中向所述个体施用所述组合物)，之后是非治疗期(其中不向所述个体施用所述组合物)，其中所述非治疗阶段长于所述治疗期；其中，如果在所述治疗期期间所述组合物的施用是重复施用，那么所述非治疗阶段长于所述治疗期期间重复施用之间的时间段；其中所述组合物的施用瞬时降低全身免疫抑制的水平并且增加促进免疫细胞选择性募集到中枢神经系统中的脉络丛通道活性，从而治疗所述个体。
2.一种活性剂、或包含所述活性剂的药物组合物，其用于治疗中枢神经系统的疾病、病症、病况或损伤，其中所述活性剂通过释放由一个或多个免疫检查点对免疫系统所施加的限制来引起全身免疫抑制的水平降低，其中所述活性剂或药物组合物是通过包括至少一个治疗过程的给药方案施用的，每一个治疗过程按顺序包括治疗期(其中向所述个体施用所述组合物)，之后是非治疗期(其中不向所述个体施用所述组合物)，其中所述非治疗阶段长于所述治疗期；其中，如果在所述治疗期期间所述组合物的施用是重复施用，那么所述非治疗阶段长于所述治疗期期间重复施用之间的时间段；其中所述组合物的施用瞬时降低全身免疫抑制的水平并且增加促进免疫细胞选择性募集到中枢神经系统中的脉络丛通道活性，从而治疗所述个体。
3.通过释放由一个或多个免疫检查点对免疫系统施加的限制来引起全身免疫抑制的水平降低的活性剂在治疗中枢神经系统的疾病、病症、病况或损伤的用途。
4.通过释放由一个或多个免疫检查点对免疫系统施加的限制来引起全身免疫抑制的水平降低的活性剂在制造用于治疗中枢神经系统的疾病、病症、病况或损伤的药物中的用途。
5.根据实施方案1的方法、根据实施方案2的活性剂或药物组合物、或根据实施方案3或4的用途，其中所述活性剂是抗体、抗体模拟物、适体、小分子、印度楝叶糖蛋白、sCTLA-4、沉默分子、OK-432、IL-12和抗CTLA-4的组合、或其任何组合。
6.根据实施方案5的方法、根据实施方案5的活性剂或药物组合物、或根据实施方案5的用途，其中所述抗体是多克隆抗体或单克隆抗体。
7.根据实施方案5或6的方法、根据实施方案5或5的活性剂或药物组合物、或根据实施方案5或6的用途，其中所述抗体是二聚体、多聚体、多特异性抗体、重组抗体、嵌合抗体、双功能抗体、细胞相关抗体(如Ig受体)、线性抗体、双抗体、微型抗体或纳米抗体。
8.根据实施方案5至7中的任一个的方法、根据实施方案5至7的活性剂或药物组合物、或根据实施方案5至7中的任一个的用途，其中所述抗体是人类抗体或人源化抗体。
9.根据实施方案5至8中的任一个的方法、根据实施方案5至8的活性剂或药物组合物、或根据实施方案5至8中的任一个的用途，其中所述抗体是拮抗性抗体或激动性抗体。
10.根据实施方案5至9中的任一个的方法、根据实施方案5至9的活性剂或药物组合物、或根据实施方案5至9中的任一个的用途，其中所述抗体是中和抗体。
11.根据实施方案5至10中的任一个的方法、根据实施方案5至10的活性剂或药物组合物、或根据实施方案5至10中的任一个的用途，其中所述抗体是全长免疫球蛋白分子或免疫活性片段。
12.根据实施方案11的方法、根据实施方案11的活性剂或药物组合物、或根据实施方案11的用途，其中所述免疫活性片段是单域抗体(sdAb)、单链可变片段(scFv)、Fab片段、F(ab')2片段、Fc片段、Fd片段、Fv片段。
13.根据实施方案5至12中的任一个的方法、根据实施方案3或4的活性剂或药物组合物、或根据实施方案4至11中的任一个的用途，其中所述抗体是抗PD-1、抗PD-L1、抗PD-L2、抗CTLA-4、抗CD80、抗CD86、抗B7RP1、抗B7-H3、抗B7-H4、抗B7-H7、抗BTLA、抗HVEM、抗CD-27、抗CD40、抗CD40L、抗CD70、抗CD80、抗CD86、抗CD137、抗CD137L、抗OX40、抗OX40L、抗TIM-3、抗半乳凝素9、抗KIR、抗LAG-3、抗ICOS、抗VISTA、抗STING、抗TIGIT、抗GITR或其任何组合。
14.根据实施方案5的方法、根据实施方案5的活性剂或药物组合物、或根据实施方案5的用途，其中所述抗体模拟物是亲和体分子、affilin、affimer、affitin、α体、anticalin、avimer、DARPin、fynomer、Kunitz结构域肽、或单抗体。
15.根据实施方案5的方法、根据实施方案5的活性剂或药物组合物、或根据实施方案4的用途，其中所述适体是DNA适体、RNA适体、XNA适体或肽适体。
16.根据实施方案5的方法、根据实施方案5的活性剂或药物组合物、或根据实施方案5的用途，其中所述小分子是p300抑制剂、舒尼替尼、多金属氧酸盐-1、α,β-亚甲基腺苷5'-二磷酸酯、三氧化二砷、GX15-070、视黄酸拮抗剂、CCR4拮抗剂、腺苷受体拮抗剂、腺苷A1受体拮抗剂；腺苷A2a受体、腺苷A2b受体拮抗剂、A3受体拮抗剂、吲哚胺-2,3-双加氧酶拮抗剂或HIF-1调节剂。
17.根据实施方案1至16中的任一个的方法、根据实施方案2至16中的任一个的活性剂或药物组合物、或根据实施方案3至16中的任一个的用途，其中在所述治疗期期间所述组合物的施用是单次施用。
18.根据实施方案1至16中的任一个的方法、根据实施方案2至16中的任一个的活性剂或药物组合物、或根据实施方案3至16中的任一个的用途，其中在所述治疗期期间所述组合物的施用是重复施用。
19.根据实施方案18的方法、根据实施方案18的活性剂或药物组合物、或根据实施方案18的用途，其中所述重复施用每天一次、每两天一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次或每六天一次进行。
20.根据实施方案18的方法、根据实施方案18的活性剂或药物组合物、或根据实施方案18的用途，其中所述重复施用每周一次或每两周一次、每三周一次或每四周一次进行。
21.根据实施方案1至20中的任一个的方法、根据实施方案2至20中的任一个的活性剂或药物组合物、或根据实施方案3至20中的任一个的用途，其中所述治疗期是1天至4周。
22.根据实施方案21的方法、根据实施方案21的活性剂或药物组合物、或根据实施方案21的用途，其中所述治疗期是3天至4周。
23.根据实施方案22的方法、根据实施方案22的活性剂或药物组合物、或根据实施方案22的用途，其中所述治疗期是1周至4周。
24.根据实施方案1至23中的任一个的方法、根据实施方案2至23中的任一个的活性剂或药物组合物、或根据实施方案3至23中的任一个的用途，其中所述非治疗阶段是1周至6个月。
25.根据实施方案24的方法、根据实施方案24的活性剂或药物组合物、或根据实施方案24的用途，其中所述非治疗阶段是2周至6个月。
26.根据实施方案25的方法、根据实施方案25的活性剂或药物组合物、或根据实施方案25的用途，其中所述非治疗阶段是3周至6个月。
27.根据实施方案26的方法、根据实施方案26的活性剂或药物组合物、或根据实施方案26的用途，其中所述非治疗阶段是1个月至3个月。
28.根据实施方案27的方法、根据实施方案27的活性剂或药物组合物、或根据实施方案27的用途，其中所述非治疗阶段是1个月至2个月。
29.根据实施方案1至28中的任一个的方法、根据实施方案2至28中的任一个的活性剂或药物组合物、或根据实施方案3至28中的任一个的用途，其中所述全身免疫抑制的水平的瞬时降低与产生IFNγ的白细胞的全身性存在或活性的增加和/或IFNγ细胞因子的全身性存在或活性的增加有关。
30.根据实施方案1至29中的任一个的方法、根据实施方案2至29中的任一个的活性剂或药物组合物、或根据实施方案3至29中的任一个的用途，其中所述全身免疫抑制的水平的瞬时降低与效应T细胞的全身性存在或活性的增加有关。
31.根据实施方案1至30中的任一个的方法、根据实施方案2至30中的任一个的活性剂或药物组合物、或根据实施方案3至30中的任一个的用途，其中所述全身免疫抑制的水平的瞬时降低与调节性T细胞的全身性存在或活性的降低和/或IL-10细胞因子的全身性存在的减少有关。
32.根据实施方案1至31中的任一个的方法、根据实施方案2至31中的任一个的活性剂或药物组合物、或根据实施方案3至31中的任一个的用途，其中所述全身免疫抑制的水平的瞬时降低与髓源性抑制细胞(MDSC)的全身性存在的减少有关。
33.根据实施方案1至32中的任一个的方法、根据实施方案2至32中的任一个的活性剂或药物组合物、或根据实施方案3至32中的任一个的用途，其中所述全身免疫抑制的水平的瞬时降低是通过释放由一个或多个免疫检查点对免疫系统施加的限制而发生的。
34.根据实施方案33的方法、根据实施方案33的活性剂或药物组合物、或根据实施方案33的用途，其中所述组合物的施用阻断所述一个或多个免疫检查点，从而引起所述全身免疫抑制的水平的瞬时降低。
35.根据实施方案34的方法、根据实施方案34的活性剂或药物组合物、或根据实施方案34的用途，其中所述一个或多个免疫检查点包括PD-1-PD-L1、PD-1-PD-L2、CD28-CD80、CD28-CD86、CTLA-4-CD80、CTLA-4-CD86、ICOS-B7RP1、B7H3、B7H4、B7H7、B7-CD28样分子、BTLA-HVEM、KIR-MHC I类或II类、LAG3-MHC I类或II类、CD137-CD137L、OX40-OX40L、CD27-CD70、CD40L-CD40、TIM3-GAL9、T细胞激活的V型结构域Ig抑制因子(VISTA)、干扰素基因刺激因子(STING)、T细胞免疫球蛋白和免疫受体基于酪氨酸的抑制性基序结构域(TIGIT)、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关蛋白(GITR)、A2aR腺苷或吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)-L-色氨酸。
36.根据实施方案1至35中的任一个的方法、根据实施方案2至35中的任一个的活性剂或药物组合物、或根据实施方案3至35中的任一个的用途，其中在所述治疗期期间所述组合物的施用被维持至少直到产生IFNγ的白细胞和/或IFNγ细胞因子的全身性存在或活性上升到高于参考值为止，此时停止所述施用，并且只要产生IFNγ的白细胞和/或IFNγ细胞因子的全身性存在或活性高于所述参考值，就一直维持所述非治疗阶段，其中所述参考值包括a)在所述施用之前从所述个体获得的最近血液样品中所测量的产生IFNγ的白细胞和/或IFNγ细胞因子的全身性存在或活性的水平；或b)作为患有中枢神经系统的疾病、病症、病况或损伤的个体的群体的特征的产生IFNγ的白细胞和/或IFNγ细胞因子的全身性存在或活性的水平。
37.根据实施方案1至36中的任一个的方法、根据实施方案2至36中的任一个的活性剂或药物组合物、或根据实施方案3至36中的任一个的用途，其中可溶性淀粉样蛋白β肽的大脑水平在所述个体中降低，大脑淀粉样蛋白β(Aβ)斑块负荷在所述个体中降低或被清除，海马体神经胶质增生在所述个体中减少，促炎性细胞因子的大脑水平在所述个体中降低，脑炎症在所述个体中减少和/或认知功能在所述个体中得到改善。
38.根据实施方案37的方法、根据实施方案37的活性剂或药物组合物、或根据实施方案37的用途，其中所述改善的认知功能是学习、记忆、意象生成、可塑性、思考、意识、推理、空间能力、言语和语言技能、语言习得、判断注意力的能力或其任何组合。
39.根据实施方案1至38中的任一个的方法、根据实施方案2至38中的任一个的活性剂或药物组合物、或根据实施方案3至38中的任一个的用途，其中所述免疫细胞包括单核细胞、巨噬细胞、或T细胞。
40.根据实施方案39的方法、根据实施方案39的活性剂或药物组合物、或根据实施方案39的用途，其中所述T细胞包括调节性T细胞。
41.根据实施方案1至40中的任一个的方法、根据实施方案2至40中的任一个的活性剂或药物组合物、或根据实施方案3至40中的任一个的用途，其中所述中枢神经系统的疾病、病症、病况或损伤是阿尔茨海默氏病、肌萎缩性侧索硬化、帕金森氏病、亨廷顿氏病、原发性进行性多发性硬化症、继发性进行性多发性硬化症、皮质基底节变性、雷特综合征、前部缺血性视神经病变、青光眼、葡萄膜炎、抑郁症、创伤相关应激障碍或创伤后应激障碍、额颞叶痴呆、路易体痴呆、轻度认知障碍、后皮层萎缩、原发性进行性失语症或进行性核上性麻痹。
42.根据实施方案1至40中的任一个的方法、根据实施方案2至40中的任一个的活性剂或药物组合物、或根据实施方案1至40中的任一个的用途，其中所述中枢神经系统的疾病、病症、病况或损伤是tau蛋白病。
43.根据实施方案42的方法、根据实施方案42的活性剂或药物组合物、或根据实施方案42的用途，其中所述tau蛋白病是阿尔茨海默氏病、嗜银颗粒病、慢性创伤性脑病、皮质基底节变性、拳击员痴呆、额颞叶痴呆、额颞叶变性、哈勒沃登-施帕茨病、亨廷顿氏病、神经节神经胶质瘤、神经节细胞瘤、球状神经胶质tau蛋白病、铅毒性脑病、脂褐质沉积症、Lytico-Bodig病(关岛帕金森氏病-痴呆综合征)、脑膜血管瘤病、与17号染色体相关的帕金森病、皮克病、原发性年龄相关tau蛋白病(PART)(原先被称为仅神经原纤维缠结型痴呆(NFT-痴呆))、脑炎后帕金森病、进行性核上性麻痹、亚急性硬化性全脑炎或结节性硬化。
44.根据实施方案1至40中的任一个的方法、根据实施方案2至40中的任一个的活性剂或药物组合物、或根据实施方案3至40中的任一个的用途，其中所述中枢神经系统的疾病、病症、病况或损伤是视网膜变性病症。
45.根据实施方案44的方法、根据实施方案44的活性剂或药物组合物、或根据实施方案44的用途，其中所述视网膜变性病症是湿性年龄相关黄斑变性、干性年龄相关黄斑变性、色素性视网膜炎、无脉络膜、视网膜视锥细胞-视杆细胞营养不良、回旋状萎缩、青少年视网膜劈裂症、卵黄状黄斑营养不良(贝斯特氏病)、无β脂蛋白血症(巴-科二氏病)、巴-比二氏综合征、蓝色视锥细胞全色盲病、显性玻璃膜疣、高曼-法夫尔玻璃体视网膜营养不良(增强型S视锥细胞综合征)、卡恩斯-塞尔综合征、劳-穆二氏综合征、利伯氏先天性黑蒙症、利伯氏雷夫叙姆病、小口氏病、乳头周围(中心周围)脉络膜营养不良、色素型营养不良、索斯比黄斑营养不良、斯特格氏病、斯蒂克勒综合征、厄舍综合征或瓦格纳氏玻璃体视网膜营养不良。
实施例
提供以下非限制性实施例仅用于说明目的，以有助于更完全理解现在所考虑的代表性实施方案。这些实施例不应当被解释为限制在本说明书中所描述的实施方案中的任一个(包括关于本文所公开的活性剂、药物组合物、或方法和用途的那些)。
材料和方法
动物：5XFAD转基因小鼠(Tg6799)和AD双转基因B6.Cg-Tg(APPswe、PSEN1dE9)85Dbo/J小鼠(Borchelt等，1997)购自杰克逊实验室(The Jackson Laboratory)，所述5XFAD转基因小鼠在神经元特异性小鼠Thy-1启动子的转录控制下共同过表达人类APP的家族性AD突变形式(瑞典突变，K670N/M671L；佛罗里达突变，I716V；以及伦敦突变，V717I)和PS1(M146L/L286V)转基因(Oakley等，2006)。通过尾部DNA的PCR分析进行基因分型，如先前所述(Oakley等，2006)。使用杂合突变体cx3cr1GFP/+小鼠(Jung等，2000)(B6.129P-cx3cr1tm1Litt/J，其中CX3CR1趋化因子受体等位基因之一被编码GFP的基因置换)作为BM嵌合体的供体。使Foxp3.LuciDTR小鼠(Suffner等，2010)与5XFAD小鼠交配以能够实现Foxp3+Treg的条件性消耗。由魏茨曼科学研究所(Weizmann Institute of Science)的动物繁育中心(Animal Breeding Center)来繁育和维持动物。本文所详述的所有实验均符合魏茨曼科学研究所的机构动物护理和使用委员会(Institutional Animal Care and UseCommittee，IACUC)所制定的规定。
RNA纯化、cDNA合成、以及定量实时PCR分析：用TRI试剂(分子研究中心(MolecularResearch Center))提取海马体齿状回(DG)的总RNA并且使用RNeasy试剂盒(快而精公司(Qiagen))从裂解物中进行纯化。使用RNA MicroPrep试剂盒(Zymo Research公司)提取脉络丛的总RNA。使用高容量cDNA逆转录试剂盒(应用生物系统公司(Applied Biosystems))将mRNA(1μg)转化成cDNA。使用基于荧光的定量实时PCR(RT-qPCR)测定特定mRNA的表达。使用Fast-SYBR PCR Master Mix(应用生物系统公司)进行RT-qPCR反应。使用标准曲线法对于每一个样品按三个重复进行定量反应。选择肽基脯氨酰异构酶A(ppia)作为参考(看家)基因。扩增循环是95℃持续5秒，60℃持续20秒，以及72℃持续15秒。在测定结束时，构建解链曲线以评价反应的特异性。对于ifn-γ和ppia基因分析，根据制造商的方案(PreAmpMaster Mix试剂盒；应用生物系统公司)，使用非随机PCR引物将cDNA以14个PCR循环预扩增，从而提高后续实时PCR分析的灵敏度。使用TaqMan RT-qPCR，根据制造商的说明书(应用生物系统公司)，测定mRNA表达。所有RT-qPCR反应都是使用StepOne软件2.2.2版(应用生物系统公司)进行和分析的。使用以下TaqMan Assays-on-DemandTM探针：Mm02342430_g1(ppia)和Mm01168134_m1(ifn-γ)。
对于所研究的所有其它基因，使用以下引物：
ppia正向5'-AGCATACAGGTCCTGGCATCTTGT-3'(SEQ ID NO：33)和反向5'-CAAAGACCACATGCTTGCCATCCA-3'(SEQ ID NO：34)；
icam1正向5'-AGATCACATTCACGGTGCTGGCTA-3'(SEQ ID NO：35)和反向5'-AGCTTTGGGATGGTAGCTGGAAGA-3'(SEQ ID NO：36)；
vcam1正向5'-TGTGAAGGGATTAACGAGGCTGGA-3'(SEQ ID NO：37)和反向5'-CCATGTTTCGGGCACATTTCCACA-3'(SEQ ID NO：38)；
cxcl10正向5'-AACTGCATCCATATCGATGAC-3'(SEQ ID NO：39)和反向5'-GTGGCAATGATCTCAACAC-3'(SEQ ID NO：40)；
ccl2正向5'-CATCCACGTGTTGGCTCA-3'(SEQ ID NO：41)和反向5'-GATCATCTTGCTGGTGAATGAGT-3'(SEQ ID NO：42)；
tnf-γ正向5'-GCCTCTTCTCATTCCTGCTT-3'(SEQ ID NO：43)和反向CTCCTCCACTTGGTGGTTTG-3'(SEQ ID NO：44)；
il-1β正向5'-CCAAAAGATGAAGGGCTGCTT-3'(SEQ ID NO：45)和反向5'-TGCTGCTGCGAGATTTGAAG-3'(SEQ ID NO：46)；
il-12p40正向5'-GAAGTTCAACATCAAGAGCA-3'(SEQ ID NO：47)和反向5'-CATAGTCCCTTTGGTCCAG-3'(SEQ ID NO：48)；
il-10正向5'-TGAATTCCCTGGGTGAGAAGCTGA-3'(SEQ ID NO：49)和反向5'-TGGCCTTGTAGACACCTTGGTCTT-3'(SEQ ID NO：50)；
tgfβ2正向5'-AATTGCTGCCTTCGCCCTCTTTAC-3'(SEQ ID NO：51)和反向5'-TGTACAGGCTGAGGACTTTGGTGT-3'(SEQ ID NO：52)；
igf-1正向5'-CCGGACCAGAGACCCTTTG(SEQ ID NO：53)和反向5'-CCTGTGGGCTTGTTGAAGTAAAA-3'(SEQ ID NO：54)；
bdnf正向5'-GATGCTCAGCAGTCAAGTGCCTTT-3'(SEQ ID NO：55)和反向5'-GACATGTTTGCGGCATCCAGGTAA-3'(SEQ ID NO：56)。
免疫组织化学：对石蜡包埋的切片的小鼠脑(6μm厚)和人脑(10μm厚)进行组织处理和免疫组织化学。对于人类ICAM-1染色，使用一级小鼠抗ICAM(1:20，艾博抗公司(Abcam)；ab2213)抗体。将载玻片与3％H2O2一起孵育10分钟，并且使用二级生物素缀合的抗小鼠抗体，继而用Vectastain ABC试剂盒(载体实验室公司(Vector Laboratories))进行生物素/亲和素扩增。随后，施加3,3'-二氨基联苯胺(DAB底物)(Zytomed试剂盒)；将载片脱水并且用基于二甲苯的封固溶液封固。对于组织染色，在组织切除和固定之前，经心脏向小鼠灌注PBS。在解剖显微镜(Stemi DV4；蔡司公司(Zeiss))下，从脑的侧脑室、第三脑室、以及第四脑室分离CP组织。对于全标本CP染色，将组织在4℃用2.5％多聚甲醛(PFA)固定1小时，并且随后转移到含有0.05％叠氮化钠的PBS中。在染色之前，将解剖组织用PBS洗涤并且在室温封闭(20％马血清、0.3％Triton X-100、以及PBS)1小时。在室温用一抗(在含有2％马血清和0.3％Triton X-100的PBS中)或二抗进行全标本染色，持续1小时。在每一个步骤后在PBS中洗涤三次。将组织施加到载玻片上，用Immu-mount(9990402，来自赛默科技公司(Thermo Scientific))封固，并且用盖片密封。对于切片的脑的染色，应用两种不同的组织制备方案(石蜡包埋的切片或用切片机切成的自由浮动的切片)，如先前所述(Baruch等，2013；Kunis等，2013)。使用以下一抗：小鼠抗Aβ(1:300，科文斯公司(Covance)，编号：SIG-39320)；兔抗GFP(1:100，MBL公司，编号：598)；大鼠抗CD68(1:300，eBioscience公司，编号：14-0681)；大鼠抗ICAM-1(1:200，艾博抗公司，编号：AB2213)；山羊抗GFP(1:100，艾博抗公司，编号：ab6658)；兔抗IBA-1(1:300，和光公司(Wako)，编号：019-19741)；山羊抗IL-10(1:20，R&D系统公司，编号：AF519)；大鼠抗Foxp3(1:20，eBioscience公司，编号：13-5773-80)；兔抗CD3(1:500，丹科公司(Dako)，编号：IS503)；小鼠抗ZO-1、小鼠抗E-钙黏着蛋白(E-adherin)、以及兔抗密蛋白-1(全部1:100，英杰公司(Invitrogen)，编号：33-9100、编号：33-4000、编号：51-9000)；兔抗GFAP(1:200，丹科公司，编号：Z0334)。二抗包括：Cy2/Cy3/Cy5缀合的驴抗小鼠/山羊/兔/大鼠抗体(1:200；全部都来自杰克逊免疫研究公司(JacksonImmunoresearch))。使载玻片暴露于Hoechst核染色(1:4000；英杰探针公司)，持续1分钟。在免疫染色程序中常规地使用两个阴性对照，即用同种型对照抗体染色，继而用二抗染色；或仅用二抗染色。对于Foxp3细胞内染色，使用Retreivagen试剂盒(编号：550524、编号：550527；BD PharmingenTM)进行石蜡包埋的载玻片的抗原修复。使用荧光显微镜(E800；尼康公司(Nikon))或激光扫描共聚焦显微镜(卡尔蔡司公司(Carl Zeiss，Inc.))进行显微分析。荧光显微镜配备数字照相机(DXM 1200F；尼康公司)以及配备20×NA 0.50或40×NA0.75物镜(Plan Fluor；尼康公司)。共聚焦显微镜配备LSM 510激光扫描能力(三种激光器：Ar 488、HeNe 543、以及HeNe 633)。使用采集软件(NIS-Elements、F3[尼康公司]或LSM[卡尔蔡司公司])对固定后的组织进行记录。对于染色强度的定量，使用ImageJ软件(NIH)测量总细胞和背景染色，并且计算特异性染色的强度，如先前所述(Burgess等，2010)。使用Photoshop CS6 13.0(Adobe公司)对图像进行剪裁，合并，并且优化，并且使用IllustratorCS5 15.1(Adobe公司)排列。
人类CP的石蜡包埋的切片：年轻和年老的死后非CNS疾病个体以及AD患者的人类脑切片是在经过正当同意和伦理委员会批准(TW220)的情况下从牛津大学脑库(OxfordBrain Bank)(原先被称为Thomas Willis Oxford Brain Collection(TWOBC)获得的。涉及这些切片的实验是由魏茨曼科学研究所的生物伦理委员会批准的。
流式细胞术、样品制备和分析：经心脏向小鼠灌注PBS，并且如先前所述处理组织(Baruch等，2013)。在PBS中在解剖显微镜(Stemi DV4；蔡司公司)下将脑解剖并取出不同的脑区域，并且使用gentleMACSTM解离器(美天旎生物技术公司(Miltenyi Biotec))解离组织。将脉络丛组织从脑的侧脑室、第三脑室以及第四脑室中分离，在37℃在含有400U/ml IV型胶原酶(沃辛顿生物化学公司(Worthington Biochemical Corporation))的PBS(含有Ca2+/Mg2+)中孵育45分钟，然后通过吹吸人工均化。将脾脏用注射器的柱塞捣碎并且用ACK(氯化铵钾)裂解缓冲液处理以去除红细胞。在所有情况下，根据制造商的方案将样品染色。将所有样品经由70μm尼龙网过滤，并且用抗Fc CD16/32(1:100；碧迪生物科技公司(BDBiosciences))封闭。对于IFN-γ的细胞内染色，将细胞与对甲氧基安非他明(10ng/ml；西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich))和离子霉素(250ng/ml；西格玛-奥德里奇公司)一起孵育6小时，并且在最后4小时添加布雷菲德菌素-A(Brefeldin-A)(10μg/ml；西格玛-奥德里奇公司)。用BD Cytofix/CytopermTM Plus固定/透化试剂盒(目录号：555028)进行细胞因子的细胞内标记。对于Treg染色，使用eBioscience FoxP3染色缓冲液套装(set)(目录号：00-5523-00)。以下荧光染料标记的单克隆抗体购自BD Pharmingen公司、BioLegend公司、R&D系统公司、或eBiosciences公司，并且根据制造商的方案使用：PE或Alexa Fluor 450缀合的抗CD4；PE缀合的抗CD25；PerCP-Cy5.5缀合的抗CD45；FITC缀合的抗TCRβ；APC缀合的抗IFN-γ；APC缀合的抗FoxP3；亮紫(Brilliant-violet)缀合的抗CD45。在LSRII细胞计数器(碧迪生物科技公司)上使用FlowJo软件分析细胞。在每一个实验中，使用相关的阴性对照组、阳性对照、以及每一种组织的单染色样品来鉴定所关注的群体并且排除其它群体。
BM嵌合体的制备：如先前所述制备BM嵌合体(Shechter等，2009；Shechter等，2013)。简单地说，在防护头部的同时对性别匹配的接受体小鼠进行致死性全身辐照(950拉德)(Shechter等，2009)。然后向小鼠静脉内注射来自CX3CR1GFP/+供体的5×106个BM细胞。在BM移植之后使小鼠静置8周-10周以使得造血谱系能够重建，之后将它们用于实验中。通过对血液样品进行FACS分析，根据循环单核细胞(CD11b+)中表达GFP的细胞的百分比来确定嵌合状态(chimerism)百分比。在该防护头部的模型中，实现平均60％的嵌合状态，并且证实CNS浸润性GFP+骨髓细胞为CD45高/CD11b高，代表单核细胞衍生的巨噬细胞而非小胶质细胞(Shechter等，2013)。
莫里斯水迷宫：每天对小鼠进行三次试验，持续连续4天，以学会找到池(具有1.1m的直径)中位于水表面下方1.5cm处的隐藏平台。使水温保持在21℃至22℃。用奶粉使水变成不透明的。在测试室内，只有远端视觉形状和物体线索可供小鼠利用，以帮助定位浸没的平台。记录逃避潜伏期，即找到和爬到平台上所需的时间，持续长达60秒。允许每一只小鼠在平台上停留15秒，然后将其从迷宫中移到它的养笼中。如果小鼠在60秒内没有找到平台，那么人工将它放置在平台上并且在15秒之后使其返回到它的养笼中。每一只小鼠的试验间间隔时间是10分钟。在第5天时，去除平台，并且在无法逃避的情况下对小鼠进行持续60秒的单次试验。在第6天和第7天时，将平台放置在与原始训练象限相对的象限中，并且每天分三个阶段对小鼠进行重新训练。使用EthoVision V7.1自动化跟踪系统(诺达思信息技术公司(Noldus Information Technology))记录数据。使用方差分析(ANOVA)和邦费罗尼事后检验进行统计分析。在关灯阶段期间在上午10点与下午5点之间进行所有的MWM测试。
放射臂水迷宫：使用放射臂水迷宫(RAWM)来测试空间学习和记忆，如先前详细描述的那样(Alamed等，2006)。简单地说，将六个不锈钢插入件放置在水池中，从而形成从开放中央区辐射出来的六个游泳臂。在1.1m直径的池中，将逃避平台定位在一个臂(目标臂)的末端处，所述臂位于水表面下方1.5cm处。使水温保持在21℃至22℃。用奶粉使水变成不透明的。在测试室内，只有远端视觉形状和物体线索可供小鼠利用，以帮助定位浸没的平台。目标臂位置对于给定的小鼠保持不变。在第1天时，在15次试验(以3个小时为间隔)中训练小鼠，其中试验在可见平台和隐藏平台之间交替进行，并且最后4次试验仅用隐藏平台进行。在第2天，用隐藏平台在15次试验中训练小鼠。进入到不正确的臂中或不能在15秒内选择臂被记录为错误。通过对小鼠在每一次试验时的臂进入错误次数或逃避潜伏期进行计数来测量空间学习和记忆。训练数据是作为三次连续试验的训练块的平均错误次数或逃避潜伏期来分析的。
GA施用：向每一只小鼠皮下(s.c.)注射溶解在200μl的PBS中的总剂量100μg的GA(批号：P53640；以色列佩塔提科瓦的梯瓦制药工业公司(Teva PharmaceuticalIndustries，Petah Tiqva，Israel))。根据每周一次GA方案(Butovsky等，2006)或每天一次GA施用(图8和图16)对小鼠进行注射。在最后一次GA注射后1周或在处理后1个月，如对于每一个实验所指示的，对小鼠实施安乐死。
Treg的条件性消融：在连续4天内每天一次向Foxp3.LuciDTR小鼠腹膜内(i.p.)注射白喉毒素(DTx；每克体重8ng；西格玛公司)(Suffner等，2010)。通过对血液和脾脏中的免疫细胞进行流式细胞术分析来确认DTx的效力，从而实现表达GFP的FoxP3+CD4+Treg细胞的几乎完全(>99％)消耗(图4)。
P300抑制：类似于先前所述，在小鼠中进行p300的抑制(Liu等，2013)。将p300i(C646；托克斯生物科技公司(Tocris Bioscience))溶解在DMSO中并且每天一次腹膜内注射(8.9mg kg-1d-1，腹膜内)，持续1周。类似地向媒介物处理的小鼠注射DMSO。
ATRA处理：类似于先前所述向小鼠施用全反式视黄酸(ATRA)(Walsh等，2014)。将ATRA(西格玛公司)溶解在DMSO中并且在1周内每隔一天一次腹膜内注射(8mg kg-1d-1)。类似地向媒介物处理的小鼠注射DMSO。
可溶性Aβ(sAβ)蛋白质分离和定量：如先前所述进行组织匀化和sAβ蛋白质提取(Schmidt等，2005)。简单地说，将大脑脑实质解剖，快速冷冻并且保存在-80℃直到匀化为止。从样品中依次提取蛋白质以获得含有不同溶解度的蛋白质的单独级分。在杜恩斯匀浆器(Dounce homogenizer)中，使用研磨用玻璃研杵使样品在含有250mM蔗糖、20mM Tris碱、1mM乙二胺四乙酸(EDTA)、以及1mM乙二醇四乙酸(pH 7.4)的10体积的冰冷组织匀化缓冲液中匀化。在六次冲程(stroke)后，将匀浆与100mM NaCl溶液中的0.4％二乙胺(DEA)1:1混合，之后再进行六次冲程，然后以135,000g在4℃离心45分钟。收集上清液(含有细胞外蛋白和细胞溶质蛋白的DEA可溶性级分)并且用10％的0.5M Tris-HCl(pH 6.8)中和。使用可商购获得的试剂盒(Biolegend公司；分别是编号：SIG-38954和编号：SIG-38956)，根据制造商的说明书，通过酶联免疫吸附测定(ELISA)从可溶性级分中单独地测量Aβ1-40和Aβ1-42。
Aβ斑块定量：从每一个脑中收集6μm的冠状切片，并且对每只小鼠贯穿所关注的区域(齿状回或大脑皮层)的四个不同预定深度的八个切片进行免疫染色。使用Image-ProPlus软件(美国马里兰州贝塞斯达的Media Cybernetics公司(Media Cybernetics，Bethesda，MD，USA))进行阳性染色像素的基于直方图的分割。将分割算法人工地应用于齿状回区域或第V皮层中的每一个图像并且确定由总Aβ免疫染色所占的面积百分比。斑块数量是从相同的6μm冠状脑切片定量的，并且作为每个脑区域的斑块的平均数量被表示。在定量之前，将切片编码以掩盖实验组的身份，并且由对组的身份不知情的观测人员来定量斑块负荷。
统计学分析：用于分析每一组实验的特定测试在附图图例中进行了说明。使用双尾司图顿氏t检验分析数据，以在两组之间进行比较，使用单因素方差分析比较几个组，继而在拒绝零假设之后(P<0.05)进行纽曼-柯尔斯事后程序以进行组的两两比较。使用双因素重复测量方差分析来分析来自行为测试的数据，并且使用邦费罗尼事后程序进行后续两两比较。基于文献和过去经验来选择具有足够的统计学效力的样本量，并且根据年龄、性别、以及基因型将小鼠分配到实验组中。研究人员在实验和结果评估期间对组的身份不知情。根据IACUC指南预先建立所有纳入标准和排除标准。结果被表示为平均值±s.e.m.。在图表中，y轴误差棒表示s.e.m.。使用GraphPad Prism软件(加利福尼亚州圣地亚哥的GraphPad软件公司(GraphPad Software，San Diego，CA))进行统计学计算。
实施例1：在小鼠AD模型中随着疾病进展的脉络丛(CP)通道活性。
我们首先检测了5XFAD转基因小鼠AD模型(AD-Tg)中随着疾病进展的CP活性；这些小鼠共表达与家族性AD相关的五种突变，并且在早至2个月大时发生大脑Aβ病理和神经胶质增生(Oakley等，2006)。我们发现，与年龄匹配的野生型(WT)对照相比，随着疾病病理的进展阶段，AD-Tg小鼠的CP表达显著更低水平的白细胞归巢和运输决定因簇，包括icam1、vcam1、cxcl10、以及ccl2(图1A)，它们被证实为由CP响应于急性CNS损伤而上调，并且是为白细胞的跨上皮迁移所需的(Kunis等，2013；Shechter等，2013)。针对整联蛋白配体ICAM-1的免疫组织化学染色确认了AD-Tg小鼠的CP上皮对它的表达降低(图1b)。此外，对人类死后脑中的ICAM-1进行染色，显示它在CP上皮中的年龄相关的减少，这与我们先前的观察结果是一致的(Baruch等，2014)，并且对该效应的定量评估揭示了与没有CNS疾病的年老个体相比，AD患者有进一步的下降(图2A)。由于CP对白细胞运输决定因簇的诱导依赖于上皮干扰素(IFN)-γ信号转导(Kunis等，2013)，因此我们随后检测所观察到的效应是否可以反映在CP处IFN-γ可用性的丧失。使用流式细胞术细胞内染色检测5XFAD AD-Tg小鼠的CP，揭示了在该隔室中产生IFN-γ的细胞的数量显著更低(图2B)，并且定量实时PCR(RT-qPCR)分析确认了与年龄匹配的WT对照相比，AD-Tg小鼠的CP处ifn-γ的mRNA表达水平更低(图2C)。
实施例2：Treg介导的全身免疫抑制、CP通道活性、以及AD病理之间的功能关系。
调节性T细胞(Treg)在抑制全身效应免疫应答中起关键的作用(Sakaguchi等，2008)。我们设想，Treg介导的全身免疫抑制影响CP处IFN-γ的可用性，因此我们专注于Treg在AD病理中的参与。与先前关于AD患者的Treg水平和抑制活性升高的报道(Rosenkranz等，2007；Saresella等，2010；Torres等，2013)相一致，相对于5XFAD AD-Tg小鼠的年龄匹配的WT同窝小鼠，评价5XFAD AD-Tg小鼠的脾细胞中Foxp3+Treg的出现率，揭示了随着疾病进展它们的水平升高(图3A、B)。为了研究Treg介导的全身免疫抑制、CP通道活性、以及AD病理之间的功能关系，我们使5XFADAD-Tg小鼠与Foxp3-白喉毒素受体(DTR+)小鼠杂交，从而使得能够通过施用白喉毒素(DTx)而瞬时条件性地在体内消耗AD-Tg/DTR+小鼠的Foxp3+Treg(图4A)。相对于经过DTx处理的AD-Tg/DTR-同窝小鼠，Treg的瞬时消耗引起AD-Tg/DTR+小鼠的CP对白细胞运输分子的mRNA表达升高(图5A)。对瞬时Treg消耗对脑实质的长期影响的分析(3周后)，揭示脑中免疫细胞积聚，包括CD45高/CD11b高骨髓细胞(这代表浸润性mo-MΦ(Shechter等，2013))和CD4+T细胞的数量升高(图5B)。此外，Treg的短暂和瞬时消耗引起脑内积聚的CD4+T细胞当中Foxp3+Treg的显著富集，如通过流式细胞术所评估的(图5C、D)。海马的RT-qPCR分析显示foxp3和il10的mRNA的表达增加(图5E)。
我们随后研究在短期消耗Treg之后，免疫调节细胞在脑病理部位中的积聚是否产生对脑功能的长期影响。我们观察到海马神经胶质增生减少(图5F)，并且促炎性细胞因子，如il-12p40和tnf-α，的mRNA表达水平降低(图5G)。此外，在5XFAD AD-Tg小鼠中表现出稳健的Aβ斑块病理的两个脑区域(Oakley等，2006)(即海马体齿状回和大脑皮层(第5层))中大脑Aβ斑块负荷降低(图6A、B)。使用莫里斯水迷宫(MWM)测试来评价对认知功能的影响，揭示了相对于经过DTx处理的AD-Tg/DTR-年龄匹配的小鼠，在Treg消耗后，AD-Tg/DTR+小鼠的空间学习和记忆有显著的改善，这达到了类似于WT小鼠的表现(图6C-E)。综上所述，这些数据表明，在AD-Tg小鼠中瞬时破坏Treg介导的全身免疫抑制会引起炎症消退细胞(包括mo-MΦ和Treg)在脑中积聚，接下来是神经炎症反应的消退、Aβ的清除、以及认知衰退的逆转。
实施例3：每周一次施用共聚物-1降低Treg介导的全身免疫抑制，提高CP通道活性，并且减轻AD病理。
为了进一步证实全身免疫抑制、CP功能以及AD病理之间的反向关系的因果性质，我们随后利用免疫调节化合物醋酸格拉替雷(GA；也被称为共聚物-1或)，发现它在每周一次施用方案中在APP/PS1小鼠AD模型中具有治疗作用(Butovsky等，2006)；该作用在功能上与mo-MΦ向大脑疾病病理部位中的募集相关(Butovsky等，2007)。在此，我们首先研究APP/PS1AD-Tg小鼠的CP是否类似于我们在5XFAD AD-Tg小鼠中的观察结果也在IFN-γ表达水平方面有缺陷。我们发现相对于年龄匹配的WT对照，在APP/PS1AD-Tg小鼠中，CP处的IFN-γ水平降低(图7A)。这些结果促使我们测试每周一次GA在APP/PS1小鼠中的治疗作用(Butovsky等，2006)是否可以在5XFAD AD-Tg小鼠中再现，并且倘若如此，它是否将影响全身Treg以及CP对mo-MΦ运输的激活。我们因此在4周的时间内用GA的每周一次施用方案处理5XFAD AD-Tg小鼠(下文的“每周一次GA”；示意性描绘于图8A中)。我们发现经过每周一次GA处理的5XFAD AD-Tg小鼠显示出神经炎症的减少(图8B-D)和认知表现的改善，这在处理之后持续长达2个月(图8E-I)。通过流式细胞术研究每周一次GA对全身免疫和CP的影响，我们发现脾细胞Foxp3+Treg水平降低(图9A)，并且经过处理的5XFAD AD-Tg小鼠的CP处产生IFN-γ的细胞增加，这达到了与在WT对照中所观察到的水平相似的水平(图9B)。经过每周一次GA处理的小鼠的CP处表达IFN-γ的细胞的升高的水平伴随着白细胞运输分子的上皮表达上调(图9C)。
为了检测浸润性mo-MΦ向CNS的进入，我们使用5XFAD AD-Tg/CX3CR1GFP/+骨髓(BM)嵌合小鼠(使用头部保护来制备)，从而使循环(绿色荧光蛋白(GFP)+标记)骨髓细胞可视化(Shechter等，2009；Shechter等，2013)。我们发现，与经过媒介物处理的AD-Tg/CX3CR1GFP/+对照相比，在每周一次GA处理后，GFP+mo-MΦ向CP以及向相邻脑室间隙的归巢增加(图9D-E)。脑实质的免疫组织化学揭示，GFP+mo-MΦ积聚在大脑斑块形成部位处的存在(图9F)，并且通过对AD-Tg非嵌合小鼠的海马进行流式细胞术分析来定量浸润性骨髓细胞，显示表达CD11b高CD45高的细胞的数量增加(图9G、H)。总之，这些结果证实了mo-MΦ向AD病理部位的募集、全身Treg水平的降低以及CP的IFN-γ依赖性激活之间的功能联系。
实施例4：使用小分子组蛋白乙酰转移酶抑制剂干扰Treg活性。
表明Treg介导的全身免疫抑制干扰对抗AD病理的能力的上述研究结果使人联想到在癌症免疫治疗中归因于Treg的功能，其中这些细胞阻碍了免疫系统发动有效抗肿瘤应答的能力(Bos和Rudensky，2012；Nishikawa和Sakaguchi，2010)。因此，我们认为直接干扰Foxp3+Treg细胞活性的治疗在AD中可能是有利的。我们测试了p300i(C646(Bowers等，2010))，即p300的非肽抑制剂，所述p300是调节Treg功能的组蛋白乙酰转移酶(Liu等，2013)；该抑制剂被证实影响Treg抑制活性，同时保持保护性效应T细胞应答不受干扰(Liu等，2013)。我们发现与经过媒介物(DMSO)处理的对照相比，经过p300i处理的小鼠显示出脾脏(图10A)以及CP(图10B)中全身的表达IFN-γ的细胞的水平升高。我们随后在1周内用p300i或媒介物处理AD-Tg小鼠，并且在3周后检测动物的大脑Aβ斑块负荷。免疫组织化学分析揭示，经过p300i处理的AD-Tg小鼠的大脑Aβ斑块负荷显著降低(图10C-E)。我们还测试在1个处理过程之后对斑块病理的作用是否将持续超过3周，并且倘若如此，额外的处理过程是否将促进持久的作用。我们因此比较了接受单个p300i处理过程并且在2个月后接受检查的AD-Tg小鼠与在此时间段期间接受两个处理过程(中间有1个月的间隔期)的年龄匹配的组(示意性描绘于图10F中)。我们发现，大脑斑块负荷的降低即使在单个处理过程之后两个月仍是明显的，但是在接受中间有1个月间隔期的两个处理过程的小鼠中是更强的(图10G)。由于AD中受损的突触可塑性和记忆与可溶性Aβ1-40/Aβ1-42(sAβ)水平的大脑水平升高有关(Shankar等，2008)，因此我们还测量了在单次或重复循环的p300i处理后sAβ的水平。再次，我们发现一个过程和两个过程(中间有1个月的间隔期)这两者都有效减少大脑sAβ，但是就对sAβ1-42的作用而言，在重复过程之后，该作用更强(图10H)。这些结果表明，虽然单个短期治疗过程是有效的，但是重复治疗过程对于维持持久的治疗作用将是有利的，这类似于我们在每周一次GA处理之后的观察结果。
实施例5：PD-1免疫检查点阻断在阿尔茨海默氏病中的治疗潜能。
我们首先测试靶向PD-1抑制性途径是否可以影响5XFAD AD转基因(AD-Tg)小鼠的IFN-γ相关的全身免疫，所述小鼠共表达与家族性AD相关的五个突变(Oakley等，2006)。在第1天和第4天，向10个月大(这是大脑病理处于晚期的时间点)的AD-Tg小鼠施用针对PD-1的阻断抗体(抗PD-1)或IgG对照抗体的两次腹膜内(i.p.)注射，然后在第7天进行检查。流式细胞术分析揭示，阻断PD-1途径引起产生IFN-γ的CD4+T脾细胞的出现率升高(图11A、B)。
我们随后研究了该全身免疫应答是否影响CP活性。对CP的全基因组RNA测序(未示；全部分析将公开在本申请发明人的具有实施例5的标题的报道中，并且应请求其可以从本申请的发明人那里获得)显示了与对IFN-γ的应答相关的表达谱(图11D和表3)，并且实时定量PCR(RT-qPCR)验证当与经过IgG处理或未处理的AD-Tg对照相比时，CP处的IFN-γmRNA水平升高(图11C)。这些发现确认了在PD-1阻断后的全身性和CP组织特异性的IFN-γ免疫应答，并且促使我们随后测试对疾病病理的作用。
为了研究PD-1阻断对AD病理的功能影响，我们用抗PD-1或IgG对照抗体处理10个月大的AD-Tg小鼠，并且使用放射臂水迷宫(RAWM)任务评价对空间学习和记忆表现的作用。
在处理(有3天时间间隔的两次腹膜内注射)后一个月，经过抗PD1处理的AD-Tg小鼠相对于经过IgG处理或未处理的年龄匹配的对照表现出认知功能的显著改善，这达到了类似于年龄匹配的WT小鼠的认知水平(图12A)。我们随后测试PD-1阻断对AD-Tg小鼠的认知表现的益处是否将持续超过1个月，以及额外的治疗期是否将是有利的。在10个月大时(“1个处理期”)或在10个月大和11个月大时(“2个处理期”)，我们用抗PD-1处理AD-Tg小鼠，并且在12个月大时，研究关于认知表现的结果(示意性描绘于图12B中)。对照组包括WT小鼠、未处理的AD-Tg小鼠、以及接受两个IgG处理期的AD-Tg小鼠。我们发现，虽然单个抗PD-1施用期在处理后1个月对空间学习和记忆具有有益的作用(图12A)，但是在接受单个处理期并且在2个月后测试的小鼠中没有能够检测到显著的作用(图12B)。相比之下，以1个月的间隔期接受两个抗PD-1处理期的AD-Tg小鼠在2个月时间范围结束时显示出类似于WT小鼠的认知表现(图12B)。
我们研究PD-1阻断是否影响如由大脑Aβ斑块负荷和神经胶质增生所表现的AD病理。通过免疫组织化学检测按一个或两个处理期接受抗PD-1或IgG的AD-Tg小鼠的脑的Aβ和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。我们发现，在海马体齿状回(图13A、B)和大脑皮层(第5层)(图13A、C)中大脑Aβ斑块负荷降低，这两个脑区域在5XFAD小鼠中表现出稳健的Aβ斑块病理(Oakley等，2006)。对于Aβ清除方面的作用在抗PD-1施用的单个处理期后是明显的，并且在两个处理期后是更稳健的。GFAP免疫染色的定量分析显示，相对于经过IgG处理的对照，在经过PD-1阻断的1个处理期处理的AD-Tg小鼠和经过PD-1阻断的2个处理期处理的AD-Tg小鼠二者中，海马体星形胶质增生减少(图13A、D)。为了研究施用的剂量和频率的影响，用抗PD-1特异性抗体(IgG2a抗小鼠PD-1)或IgG对照(大鼠IgG2a)处理雌性5XFAD AD转基因小鼠(平均群组年龄是6个月大)。经过抗PD-1处理的小鼠在实验第1天接受500μg抗体的1次注射，或接受两次250μg的注射，在注射之间有3天时间间隔。使用年龄匹配的野生型(WT)小鼠作为另外的对照组。在7个月大时使用放射臂水迷宫(RAWM)任务评价对经过抗PD-1处理的5XFAD小鼠(一次注射组(n＝7)或两次注射组(n＝11))、经过IgG2a处理的5XFAD小鼠(n＝10)、以及WT(n＝14)对照的空间学习和记忆表现的治疗作用(图14)。黑色箭头指示处理的时间点，并且图示指示了认知测试的时间点。使用双因素方差分析和杜奈特事后检验来分析重复测量结果。误差棒表示平均值±s.e.m.；抗PD-1处理组(1次注射)相比于IgG处理的对照，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。在处理(有3天时间间隔的两次腹膜内注射)后一个月，经过抗PD1处理的AD-Tg小鼠相对于经过IgG处理或未处理的年龄匹配的对照表现出认知功能的显著改善，这达到了类似于年龄匹配的WT小鼠的认知水平(图14)。
最后，在重复处理期中，用抗PD-1特异性抗体(IgG2a抗小鼠PD-1)或IgG对照(大鼠IgG2a)每月一次处理雄性5XFAD AD转基因小鼠。第一次注射是在3个月大时，第二次注射是在4个月大时，并且第三次注射是在5个月大时。剂量示于实验设计的方案中(图15A)。使用年龄匹配的野生型(WT)小鼠作为另外的对照组。在两个不同的时间点，即5个月大(图15B)和6个月大(图15C)时，使用放射臂水迷宫(RAWM)任务评价对空间学习和记忆表现的治疗作用。黑色箭头指示处理的时间点，并且图示指示了认知测试的时间点。经过抗PD-1处理的5XFAD小鼠(n＝7)、经过IgG2a处理的5XFAD小鼠(n＝9)、以及WT(n＝8)对照的RAWM表现。使用双因素方差分析和杜奈特事后检验来分析重复测量结果。误差棒表示平均值±s.e.m.；抗PD-1处理组相比于IgG处理的对照，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。在5个月大时，对照IgG处理的小鼠尚未完全丧失空间学习/记忆技能，因此在第2天的最后一次试验时表现出一定的学习能力(图15B)，而在6个月大时，观察到疾病进展，其中功能表现进一步降低(图15C、D)。图15D图示了在5个月大与6个月大之间经过IgG处理的小鼠的衰退，而抗PD-1抗体处理组保持学习能力。这些发现表明，PD-1阻断的重复处理期不仅可以在给予疾病晚期阶段的5XFAD小鼠时逆转疾病进展，而且还可以在认知衰退之前在年幼时开始处理时延迟疾病发作(图15B-D)。
在AD中，据报道神经元丧失和突触衰竭与空间学习/记忆技能受损最密切相关。5XFAD转基因小鼠是表现出显著的神经元丧失的几种AD动物模型之一，所述神经元丧失在这些小鼠6个月大时变得明显。我们因此在上述实验后在最后一次行为测试之后评价小鼠的神经元存活率(图15A-D)。我们分析了这些小鼠的脑中神经元的存活率，重点放在先前用于表明该小鼠AD模型的神经元丧失的下托。免疫组织化学分析揭示，与IgG处理组相比，经过抗PD-1抗体处理的5XFAD小鼠的下托中Neu-N+细胞的数量更高(图15E、F)。
已经将AD中的神经元丧失的潜在分子机制与神经元胱天蛋白酶-3激活相关联。我们因此评估了在用抗PD-1处理后神经元的挽救是否与Neu-N+细胞中激活的胱天蛋白酶-3的水平降低有关。我们发现与IgG处理组相比，经过抗PD-1抗体处理的小鼠显示出Neu-N+神经元中激活的胱天蛋白酶-3免疫反应性的降低(图15G、H)，这进一步证实了抗PD-1抗体治疗对神经元存活率的作用。
实施例6：TIM-3免疫检查点阻断在阿尔茨海默氏病中的治疗潜能。
为了研究TIM-3阻断对AD病理的功能影响，我们用抗TIM-3特异性抗体(抗小鼠TIM-3)或IgG对照(大鼠IgG2a抗体)处理6个月大的雌性5XFAD AD-Tg小鼠。剂量示于实验设计的方案中(图16)。处理由抗体的两次腹膜内注射组成，每一次250μg，在注射之间有3天的时间间隔。使用年龄匹配的野生型(WT)小鼠作为另外的对照组。在7个月大时，使用放射臂水迷宫(RAWM)任务评价对经过抗TIM-3处理的5XFAD小鼠(n＝9)、经过IgG处理的5XFAD小鼠(n＝6)以及WT(n＝7)对照的空间学习和记忆表现的治疗作用(图16)。黑色箭头指示处理的时间点，并且图示指示了认知测试的时间点。使用双因素方差分析和杜奈特事后检验来分析重复测量结果。误差棒表示平均值±s.e.m.；抗TIM-3处理组相比于IgG处理的对照，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。在处理后一个月，相对于经过IgG处理的5XFAD小鼠或年龄匹配的WT对照，经过抗TIM-3处理的AD-Tg小鼠表现出认知表现的显著改善(图16)。
实施例7：PD-L1免疫检查点阻断在阿尔茨海默氏病中的治疗潜能以及与抗PD-1治疗的比较。
PD-1是由许多免疫细胞表达的抑制性受体，在这些免疫细胞当中有效应CD4T细胞，而它的配体PD-L1由树突状细胞、上皮细胞以及调节性T细胞表达。因此，我们探究阻断PD-L1是否可以具有与阻断PD-1类似的作用(图17A)。为此，首先用腹膜内注射的抗PD-L1抗体(每只小鼠0.1mg、0.5mg、或1.5mg)的单次剂量处理6个月大的5XFAD小鼠。在1个月后使用RAWM评估7个月大的小鼠。与用IgG同种型对照的处理相比，虽然0.1mg的抗PD-L1对认知表现没有任何作用，但是0.5mg和1.5mg这两个剂量对RAWM任务表现具有类似的有益作用(图17B)。随后，我们比较0.5mg的抗PD-1抗体的单次注射与0.5mg的抗PD-L1抗体的单次注射对认知表现的作用，并且随后比较对大脑病理的作用(图17C-J)。使用RAWM任务，我们发现抗PD-L1抗体处理在改善5XFAD小鼠的功能性认知结果方面与抗PD-1抗体同样有效(图17C)。在行为测试后，这些小鼠的脑的免疫组织化学分析揭示，与IgG处理组相比，在抗PD-1处理组或抗PD-L1处理组中海马(HC)和皮层中的斑块负荷(通过斑块数量和所述斑块覆盖的面积所测量)以及神经胶质增生(通过神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫反应性所测量)有类似的减少(图17D)。在经过抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体处理的小鼠的脑中，我们还观察到对突触泡蛋白(突触前活动的标志物)更高的特异性的免疫反应性水平，这表明了突触的更好的保留(图17H、I)。我们通过实时(RT)-qPCR分析了经过处理的5XFAD小鼠的海马中il-12p40和il-10的水平。结果显示，相对于经过IgG处理的5XFAD动物，在经过抗PD-1或抗PD-L1处理的小鼠的海马中对抗炎活性的偏向，如由il-12p40/il-10比率降低所表现的(图17J)。应当指出的是，抗PD-1和抗PD-L1的同种型匹配的对照抗体分别是IgG2a和IgG2b。然而，在我们所有的行为研究中，它们给出类似的结果，因此，这两个对照组在这里所呈现的最终分析中被组合。
PD-L1由激活的免疫细胞，如T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞以及小胶质细胞表达，以及由非免疫细胞，如内皮细胞和上皮细胞所表达。因此，我们设想，CP上皮对PD-L1的表达可能促进了白细胞向CNS的运输的下调，这是通过在与CP内表达PD-L1的上皮细胞通信时阻抑表达PD-1的产生IFN-γ的T细胞的活性来实现的。免疫组织化学分析显示，与年轻小鼠相比，在年老的小鼠中，CP上皮表达显著更高水平的PD-L1(图18)。
实施例8：免疫检查点阻断在阿尔茨海默氏病中的治疗潜能。
为了测试阻断免疫检查点是否可以减轻AD病理，在6个月大至10个月大时用以下抗检查点抗体之一处理AD-Tg小鼠：抗ICOS抗体、抗B7RP1抗体、抗VISTA抗体、抗CD40抗体、抗CD40L抗体、抗CD80抗体、抗CD86抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体、B7-H7、抗BTLA抗体、抗HVEM抗体、抗CD137抗体、抗CD137L抗体、抗OX40L抗体、抗CD-27抗体、抗CD70抗体、抗STING抗体、抗TIGIT抗体或抗GITR抗体。将一些小鼠用抗PD-1抗体处理作为阳性对照，用IgG对照处理作为阴性对照或用抗PD1抗体和上述其它抗检查点抗体之一的组合处理。在处理后1个月，测量对空间学习和记忆表现(使用放射臂水迷宫(RAWM)任务)、Aβ斑块负荷(通过Aβ的免疫组织化学)以及海马体星形胶质增生(通过神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的免疫组织化学)的治疗作用。
预期经过所述抗体处理的小鼠与经过IgG处理和未处理的AD-Tg小鼠相比显示出显著的认知改善以及大脑斑块负荷的显著降低。
实施例9：PD-1免疫检查点阻断联合CTLA-4免疫检查点阻断在阿尔茨海默氏病中的治疗潜能。
在10个月大时，在实验的第1天和第4天，向5XFAD阿尔茨海默氏病(AD)转基因(Tg)小鼠腹膜内注射250μg的抗PD1抗体(RMP1-14；编号：BE0146；Bioxcell Lifesciences私人有限公司)和250μg的抗CTLA-4抗体(InVivoMAb抗mCD152；编号：BE0131；BioxcellLifesciences私人有限公司)或对照IgG抗体(IgG2a，编号：BE0089或多克隆叙利亚仓鼠IgG，编号：BE0087；Bioxcell Lifesciences私人有限公司)，并且在3周后如上文所述通过放射臂水迷宫(RAWM)空间学习和记忆任务检测它们的认知表现。
一些小鼠接受额外的处理期，间隔期是3周。将对照组用IgG处理或不处理，并且在3周后测试所有组的小鼠的认知表现。
预期经过抗体的组合处理的小鼠与经过IgG处理和未处理的AD-Tg小鼠相比显示出显著的认知改善以及大脑斑块负荷的显著降低。
实施例10：免疫检查点阻断方法在PTSD病理中的治疗潜能。
严重应激条件或慢性应激可导致创伤后应激障碍(PTSD)和抑郁症。我们采用生理性PTSD样动物模型，在该模型中小鼠表现出高度警惕行为、注意力受损、风险评估增加、以及睡眠不佳(Lebow等，2012)。在该PTSD诱发的实验模型中，使小鼠习惯颠倒的昼/夜循环，达10天，使小鼠遭受两次电击事件(创伤和触发)，这被称为“PTSD诱发”，并且在创伤之后不同的时间点进行评价。在创伤事件后，向小鼠注射所述阻断免疫检查点的化合物。根据以下方案之一处理小鼠：
用以下抗检查点抗体之一处理小鼠：抗ICOS抗体、抗B7RP1抗体、抗VISTA抗体、抗CD40抗体、抗CD40L抗体、抗CD80抗体、抗CD86抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体、B7-H7、抗BTLA抗体、抗HVEM抗体、抗CD137抗体、抗CD137L抗体、抗OX40L抗体、抗CD-27抗体、抗CD70抗体、抗STING抗体、抗GITR抗体或抗TIGIT抗体，单独地或与抗CTLA-4抗体组合。将一些小鼠用抗PD-1抗体处理作为阳性对照，用IgG对照处理作为阴性对照或用抗PD1抗体和上述其它抗检查点抗体之一的组合处理。
一些小鼠以适当的间隔期接受额外的处理期。
预期接受处理的小鼠在该实验模型中不表现与PTSD相关的焦虑行为，如在(Lebow等,2012)中所述的通过在暗/亮迷宫中探索和风险评估所花费的时间或其它行为任务所评估。
实施例11：免疫检查点阻断方法在帕金森氏病病理中的治疗潜能。
在这些实验中使用帕金森氏病(PD)转基因(Tg)小鼠或MPTP诱发的小鼠PD模型。在疾病的进展阶段根据以下方案之一处理小鼠：
用以下抗检查点抗体之一处理PD-Tg小鼠：抗ICOS抗体、抗B7RP1抗体、抗VISTA抗体、抗CD40抗体、抗CD40L抗体、抗CD80抗体、抗CD86抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体、B7-H7、抗BTLA抗体、抗HVEM抗体、抗CD137抗体、抗CD137L抗体、抗OX40L抗体、抗CD-27抗体、抗CD70抗体、抗STING抗体、抗GITR抗体或抗TIGIT抗体，单独地或与抗CTLA-4抗体组合。将一些小鼠用抗PD-1抗体处理作为阳性对照，用IgG对照处理作为阴性对照或用抗PD1抗体和上述其它抗检查点抗体之一的组合处理。
使用例如评估小鼠停留在旋转杆上的能力的旋转杆表现测试来评价运动神经功能。
预期经过一个处理期处理的PD-Tg小鼠与经过IgG处理或经过媒介物处理的对照组或未处理组相比显示出显著改善的运动表现。预期接受两个治疗过程并且在适当的间隔期之后接受检测的PD-Tg小鼠显示出持久的治疗作用。为了维持该治疗作用，使小鼠接受灵活的(active)处理期，其中在每一个处理期之间具有适当的非处理间隔期。
实施例12：PD-1免疫检查点阻断联合CTLA-4免疫检查点阻断在亨廷顿氏病病理中的治疗潜能。
用于这些实验中的模型可以是亨廷顿氏病(HD)R6/2转基因小鼠(Tg)测试系统。R6/2转基因小鼠在疾病的进展阶段过表达突变的人类亨廷顿基因，所述基因包括小鼠的多个CAG重复序列的插入。这些小鼠早在5周-6周大时开始显示出进行性行为-运动缺陷，导致在10周-13周时的过早死亡。症状包括低体重、紧握(clasping)、震颤以及惊厥。
在小鼠45天大时，根据以下方案之一处理小鼠：
用以下抗检查点抗体之一处理小鼠：抗ICOS抗体、抗B7RP1抗体、抗VISTA抗体、抗CD40抗体、抗CD40L抗体、抗CD80抗体、抗CD86抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体、B7-H7、抗BTLA抗体、抗HVEM抗体、抗CD137抗体、抗CD137L抗体、抗OX40L抗体、抗CD-27抗体、抗CD70抗体、抗STING抗体、抗GITR抗体或抗TIGIT抗体，单独地或与抗CTLA-4抗体组合。将一些小鼠用抗PD-1抗体处理作为阳性对照，用IgG对照处理作为阴性对照或用抗PD1抗体和上述其它抗检查点抗体之一的组合处理。
使用例如评估小鼠停留在旋转杆上的能力的旋转杆表现测试来评价运动神经功能。
预期经过一个处理期处理的HD-Tg小鼠与经过IgG处理或经过媒介物处理的对照组或未处理组相比显示出显著改善的运动表现。预期接受两个治疗过程并且在适当的间隔期之后接受检测的HD-Tg小鼠显示出持久的治疗作用。为了维持该治疗作用，使小鼠接受灵活的处理期，其中在每一个处理期之间具有适当的非处理间隔期。
实施例13：免疫检查点阻断方法在肌萎缩性侧索硬化病理中的治疗潜能。
用于该实验中的模型可以是过表达含有Gly93→Ala(G93A)基因的缺陷型人类突变型SOD1等位基因的转基因小鼠(B6SJL-TgN(SOD1-G93A)1Gur(在本文称为“ALS小鼠”)。该模型会发生运动神经元病，因此构成用于测试ALS的公认的动物模型。
在小鼠75天大时，根据以下方案之一处理小鼠：
用以下抗检查点抗体之一处理小鼠：抗ICOS抗体、抗B7RP1抗体、抗VISTA抗体、抗CD40抗体、抗CD40L抗体、抗CD80抗体、抗CD86抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体、B7-H7、抗BTLA抗体、抗HVEM抗体、抗CD137抗体、抗CD137L抗体、抗OX40L抗体、抗CD-27抗体、抗CD70抗体、抗STING抗体、抗GITR抗体或抗TIGIT抗体，单独地或与抗CTLA-4抗体组合。将一些小鼠用抗PD-1抗体处理作为阳性对照，用IgG对照处理作为阴性对照或用抗PD1抗体和上述其它抗检查点抗体之一的组合处理。
使用例如评估小鼠停留在旋转杆上的能力的旋转杆表现测试来评价运动神经功能，或允许小鼠抓住并且保持在下端具有小环的垂直线(具有2mm直径)上。垂直线允许小鼠使用前肢和后肢抓住线。该线以24rpm维持垂直取向的圆周运动(圆周半径是10cm)。使用计时器记录小鼠能够悬挂在该线上的时间。
预期，经过一个处理期处理的ALS小鼠与经过IgG处理或经过媒介物处理的对照组或未处理组相比显示出显著改善的运动表现。预期接受两个治疗过程并且在适当的间隔期之后接受检测的ALS小鼠显示出持久的治疗作用。为了维持该治疗作用，使小鼠接受灵活的处理期，其中在每一个处理期之间具有适当的非处理间隔期。
实施例14：确定最小和最大剂量范围的剂量效应实验和确定治疗方案和它的持久治疗作用的实验。
我们已经证实了利用PD-1阻断的单个治疗期引起了斑块负荷的显著降低以及在治疗之后持续至少2个月的认知功能改善，治疗之后的2个月是测试的最后一个时间点。在此，我们描述了使用向5XFAD AD转基因小鼠施用的另外两个剂量的剂量响应研究。读数是在施用后1个月、2个月以及3个月时的淀粉样蛋白斑块负荷。研究组将包括1)未处理的5XFAD小鼠；2)接受500μg对照抗PD-1(RMP1-14；编号：BE0146；Bioxcell Lifesciences私人有限公司)的1次注射的5XFAD小鼠；3)接受250μg对照抗PD-1(RMP1-14；编号：BE0146；Bioxcell Lifesciences私人有限公司)的1次注射的5XFAD小鼠；4)接受100μg对照抗PD-1(RMP1-14；编号：BE0146；Bioxcell Lifesciences私人有限公司)的1次注射的5XFAD小鼠；以及5)接受500μg对照IgG(IgG2a；编号：BE0089；Bioxcell Lifesciences私人有限公司)的1次注射的5XFAD小鼠。所有小鼠在实验开始时接受处理，并且，在开始处理后以1个月、2个月以及3个月的时间间隔将来自每一组的小鼠处死并且检测它们的脑。
预期经过抗PD-1抗体处理的小鼠与未处理的AD-Tg小鼠或对照IgG处理的小鼠相比显示出大脑淀粉样蛋白β斑块负荷的显著降低。
我们发现，在初始处理之后1个月，用抗PD-1进行的额外的处理期维持了对5XFADAD-Tg小鼠的认知表现改善的作用(实施例5)。这些发现表明，对于长期功效，需要重复处理期。在此，我们描述了使用重复注射来维持治疗的持久作用的研究。
以根据先前研究结果所确定的剂量，向5XFAD AD-Tg小鼠注射药物。对小鼠进行注射，并且在研究阶段期间和之后，使用放射臂水迷宫学习和记忆任务监测它们的认知表现。还对脑的淀粉样蛋白斑块负荷进行组织学检查。
通过具有2周、3周或4周的非处理间隔期的单次注射(或相隔3天的双次注射，如实施例5中所述)对不同组的小鼠进行重复注射(表4)。在初始处理后1个月、2个月或3个月，如上文所述监测小鼠。
实施例15：抗PD-1单克隆抗体在RCS大鼠中的全身施用减轻了视网膜变性。
该实验的目的在于确定抗PD1抗体的全身施用是否减轻视网膜变性疾病的动物模型中外核层的变性。
RCS大鼠是干性AMD和色素性视网膜炎以及其它视网膜退行性疾病和病况的公认动物模型，它们在编码MerTK蛋白的基因中携带缺失突变，从而导致到3个月大时的视网膜变性和完全失明。从4周大时开始观察到视网膜外核层(ONL)厚度的显著和快速的降低。因此，在科学文献中认为保持该模型中的ONL厚度与视觉的保持直接相关。
在4周大时，向RCS大鼠腹膜内(IP)注射抗PD1单克隆抗体(每只动物总共760μg；n＝10)或相同浓度的合适的IgG对照(IgG2a)(n＝10)。另一组RCS大鼠不处理(n＝4)。在处理后2周，在6周大时，将动物处死，切除它们的眼睛并且经由使用H&E染色进行组织学分析来确定每一只眼睛中视网膜ONL层的厚度。通过测量在整个视网膜长度上ONL的厚度并且将数据水平制图以产生允许鉴定在视网膜的任何区域中的治疗作用的图来确定治疗功效。
分析所有经过处理的动物的平均ONL厚度(其中每一只单个眼睛用作独立的数据集)，显示在6周大时(处理后2周)，与经过IgG处理和未处理的对照相比，在经过抗PD1处理的动物中，视网膜的紧邻视神经头部的中央区处的ONL明显更厚(图19A)。
为了评价仅在治疗响应性动物中作用的强度(magnitude)，用于将动物限定为‘阳性响应性动物’的阈值被设定为等于比IgG对照组的中央视网膜中的平均厚度值高2倍标准误差值的值。基于该设定的阈值，抗PD1组中20只分析的眼睛中有13只(65％)被表征为阳性响应者。相比之下，在IgG处理组中，20只分析的眼睛中只有1只(5％)被表征为阳性响应者；显著性差异(卡方＝15.82，P＝0.00007)。仅观察该处理组的13只抗PD1阳性响应性眼睛，显示中央视网膜区域处的厚度是对照眼睛的1.5倍-2倍。此外，与对照组相比，中央视网膜的甚至更宽的区域是显著更厚的(图19B)。有趣的是，尽管抗体是全身施用的并且预期以相似的水平到达和作用于两只眼睛，但是在四只经过抗PD-1处理的动物中观察到单只动物的两只眼睛之间对处理的响应性的差异。
实施例16：抗PD-1单克隆抗体向RCS大鼠的玻璃体的直接局部施用减轻视网膜变性。
该实验的目的在于确定将抗PD1抗体直接局部施用到眼睛的玻璃体中是否减轻视网膜变性疾病的动物模型的外核层的变性。
在4周大时向RCS大鼠注射抗PD1单克隆抗体(n＝6)或合适的IgG对照(每只动物50μg)。向每一只动物的单只眼睛的玻璃体中直接进行注射，而对侧眼睛保持未处理。在处理后2周，在6周大时，将动物处死，切除它们的眼睛并且经由使用H&E染色进行组织学分析来确定每一只眼睛中视网膜ONL层的厚度。通过测量在整个视网膜长度上ONL的厚度并且将数据水平制图以产生允许鉴定在视网膜的任何区域中的治疗作用的图来确定治疗功效。
分析在处理后2周时动物的平均ONL厚度，显示在抗PD1处理组中，与未处理的对侧眼睛相比，在经过处理的眼睛中的视网膜的几个切片中ONL明显更厚(图20A)。在经过IgG处理的动物中没有发现这样的作用(图20B)。
实施例17：经由玻璃体内注射PD-1单克隆抗体或PD-L1单克隆抗体的局部PD-1阻断减轻了视网膜变性。
将抗PD-L1单克隆抗体或抗PD-1单克隆抗体、抗PD-L1单克隆抗体和抗PD-1单克隆抗体的组合、或没有抗原特异性可变区的合适的IgG片段，直接注射到4周大的RCS大鼠的玻璃体中。在整个随后8周期间，对动物响应于视觉刺激的视觉功能进行评估。重要的是，每一只动物只有单只眼睛接受处理，而对侧眼睛不处理并且用作另外的对照。此外，在整个实验中，对来自每一个处理组的指定组的RCS大鼠进行分析，目的是为了定量和定性在神经元存活率和局部免疫应答方面对视网膜的治疗作用，以及定量和定性在视网膜上皮细胞对白细胞运输分子和免疫检查点配体的表达方面对视网膜上皮细胞的作用。预期经由玻璃体内注射局部阻断PD-1/PD-L1途径会引起视网膜变性的减轻、免疫调节以及视觉功能的保持。
实施例18：在Tau蛋白病病理的小鼠模型中靶向PD-1/PD-L1途径增强单核细胞衍生的巨噬细胞向脑实质的募集。
由于使用免疫检查点阻断的治疗直接靶向全身免疫细胞，因此我们假设，它的功效将不限于与AD相关的特定神经病理学标志。为了测试靶向PD-1/PD-L1途径的治疗在模拟不同的疾病病原学的其它AD模型中是否是有效的，我们使用表达与额颞叶痴呆相关的人类tau基因的两个突变(K257T/P301S；双重突变体，DM-hTAU)的小鼠AD模型。这些小鼠发生神经原纤维缠结(NTF)病理，这是广泛范围的tau蛋白病，包括阿尔茨海默氏病(AD)和其它神经变性疾病的特征。这些小鼠的病理特征包括认知缺陷、神经炎症、胶质细胞激活、以及脑内tau蛋白的磷酸化。
我们先前证实了在5XFAD小鼠中全身免疫抑制与AD病理之间的反向功能关系。此外，发现在AD的5XFAD小鼠模型和J20小鼠模型中，疾病进展与CP处IFN-γ可用性的丧失有关。在5XFAD小鼠中，该IFN-γ的减少伴随有FoxP3调节性T细胞的升高，并且用抗PD-1抗体处理引起CP处IFN-γ信号转导的恢复、以及单核细胞衍生的巨噬细胞向脑实质的募集(Baruch等，2016)。在此，我们首先测试，在DM-hTAU小鼠中，施用针对PD-L1的抗体是否影响在抗体施用后2周在脾脏中测量的全身效应记忆T细胞或调节性细胞的水平。我们还发现，在这种小鼠模型中，在不存在处理的情况下，相对于年龄匹配的野生型小鼠，存在FoxP3调节性T细胞的全身升高和效应记忆T细胞(CD44+CD-62L低)的全身水平的降低(图21A-C)。相对于经过IgG处理的小鼠，抗PD-L1抗体的施用没有降低抑制性细胞的水平，但是增加了效应T记忆细胞的水平(图21A-C)，如通过流式细胞术分析所评价的。我们进一步分析了相同小鼠的脑，以确定单核细胞衍生的巨噬细胞的水平。我们发现，相对于经过IgG同种型对照处理的小鼠，在经过抗PD-L1抗体处理的DM-hTAU小鼠的脑中，单核细胞衍生的巨噬细胞显著增加(图21D、E)。这些发现支持了我们的假设，即在该小鼠模型中发生外周免疫抑制，并且降低外周中的免疫抑制有助于疾病缓解性白细胞进入患病的脑中。这些结果加强了我们的观点，即免疫检查点阻断可适用于特征在于另外的病原学的AD。
实施例19：PD-1/PD-L1轴的阻断在Tau蛋白病病理的小鼠模型中减轻了认知缺陷和大脑病理。
如我们在5XFAD小鼠中所观察到的那样，我们的发现是，靶向全身免疫检查点途径增强了单核细胞向脑实质的运输，这促使我们测试靶向PD-1或PD-L1对Tau小鼠模型的认知功能的影响。我们使用与用于5XFAD小鼠中的剂量相同的0.5mg的剂量，用抗PD-1或抗PD-L1处理8个月大的DM-hTAU小鼠(图22A)；使用针对不相关抗原的同种型匹配的抗体作为阴性对照(经过IgG处理的对照)。在用于该研究的测试中，年龄匹配的野生型小鼠作为针对正常学习/记忆表现的另外的对照被评估。在该小鼠AD模型中，通常使用T型迷宫测试和Y型迷宫测试，这些测试测量了短期空间记忆。与经过IgG处理的对照组相比，在抗体的单次注射后1个月，接受抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体的两组在T型迷宫测定中表现出对新臂的偏好增加(图22B、C)。此外，与经过IgG处理的对照组相比，这两个处理组在Y型迷宫测试中均表现出改善的认知表现(图22D)。
处理对神经胶质增生的作用揭示了在抗PD-1/PD-L1处理组的海马中GFAP免疫反应性的降低(图22E、F)。我们进一步测试PD-1/PD-L1轴阻断对神经胶质增生的有益作用是否可能与炎性细胞因子环境的变化相关。为此，我们使用定量RT-qPCR监测了各种细胞因子的水平，以确定CNS的炎症环境是否已经由于处理而发生偏移。我们发现，相对于抗炎性细胞因子il-10，抗PD-1和抗PD-L1这两者均降低了海马中促炎性细胞因子il-12p40的表达水平。此外，这两种处理都引起促炎性细胞因子tnfα和il-6的水平降低(图22G)。
Tau病理的动物模型中的神经炎症被证实增强了过度磷酸化和疾病进展。我们因此测试了抗PD-1和抗PD-L1对tau过度磷酸化的作用。对来自DM-hTAU小鼠的脑切片进行的免疫组织化学分析揭示，与IgG同种型对照组相比，在抗PD-1和抗PD-L1阻断之后，在海马体CA1区和CA3区中，AT-100表位(磷酸化Tau Thr212、Ser214)和AT-180表位(磷酸化TauThr231)的免疫反应性降低(图23A-F)。
最后，由于在癌症免疫治疗中，抗PD-L1抗体以高于抗PD-1的剂量被使用，因此我们测试了增加抗PD-L1抗体的剂量是否具有更好的作用。我们因此进行另外的研究，其中我们测试了各种剂量对9个月大的雌性和雄性(在组中平均分布)DM-hTAU小鼠的短期记忆的作用。相对于每只小鼠1.5mg的对照抗体的单次注射，用每只小鼠0.1mg、0.5mg、或1.5mg的抗PD-L1的单次注射处理小鼠。使用WT同窝小鼠作为完整认知能力的对照。经过每只小鼠0.5mg或1.5mg处理的小鼠显示出接近WT小鼠的表现；每只小鼠1.5mg的抗PD-L1剂量略微更有效，但是剂量之间的差异没有显著性(图23G)。
综上所述，这些结果表明，全身免疫激活改变了脑中与tau动物模型的疾病病理相关的关键过程，这类似于在淀粉样蛋白β病变的动物模型中所发现的广泛的作用。
实施例20：PD-1阻断增强5XFAD小鼠的海马体神经发生。
双层皮蛋白(DCX)是由神经元前体细胞和未成熟的神经元表达的微管相关蛋白。在成人神经元组织中，DCX被用作神经发生的标志物，这是因为它几乎仅由发育中的神经元表达。将雌性5XFAD小鼠(平均群组年龄是6个月大)用抗PD-1特异性抗体(IgG2a抗小鼠PD-1；n＝17)或IgG对照(大鼠IgG2a；n＝7)处理，并且在1个月后处死。使用年龄匹配的野生型(WT；n＝9)小鼠作为另外的对照组。制备来自代表性动物的旁矢状面脑切片，并且对齿状回的颗粒层进行标记(图24A)。将脑切片针对神经元标志物NeuN(绿色)、DCX(红色)、以及hoechst核染色(蓝色)进行免疫染色。以双盲方式从6m厚的脑切片定量DCX+细胞(图24B)。使用单因素方差分析和杜奈特事后检验分析重复测量结果。误差棒表示平均值±s.e.m.；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。结果显示，全身性阻断PD-1/PD-L1途径引起了保护性免疫活性，所述保护性免疫活性调节脑环境以支持海马体神经发生，这是一种对病理的作用，该作用之前与对行为缺陷和认知缺陷的有益作用多次相关。
实施例21：PD-1阻断增强了5XFAD小鼠的海马突触可塑性。
由谷氨酸能神经元(glutamatergic neuron)表达的囊泡谷氨酸转运蛋白1(Vesicular glutamate transporter 1，VGLUT1)介导谷氨酸向突触泡中的摄取，并且被证实促进海马突触可塑性和海马依赖性空间学习。将雌性5XFAD小鼠(平均群组年龄是6个月大)用抗PD-1特异性抗体(IgG2a抗小鼠PD-1；n＝17)或IgG对照(大鼠IgG2a；n＝7)处理，并且在1个月后处死。使用年龄匹配的野生型(WT；n＝9)小鼠作为另外的对照组。制备来自代表性动物的旁矢状面脑切片，并且对下托区进行标记(图25A)。将脑切片针对VgluT1进行免疫染色。以双盲方式使用ImageJ软件从6m厚的脑切片定量荧光强度(图25B)。使用单因素方差分析和杜奈特事后检验分析重复测量结果。误差棒表示平均值±s.e.m.；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。结果显示，全身性阻断PD-1/PD-L1途径引起了外周的保护性免疫活性，并且所述保护性免疫活性调节脑环境以支持突触可塑性并且保持认知功能。
实施例22：PD-1阻断减少了5XFAD小鼠的下托中的神经元丧失。
5XFAD转基因小鼠模型是类似于人类患者的AD进展，表现出显著的神经元丧失的几种淀粉样蛋白动物模型之一。5XFAD小鼠的神经元丧失是在下托和皮层5中表征的。将雌性5XFAD小鼠(平均群组年龄是6个月大)用抗PD-1特异性抗体(IgG2a抗小鼠PD-1；n＝17)或IgG对照(大鼠IgG2a；n＝7)处理，并且在1个月后处死。使用年龄匹配的野生型(WT；n＝9)小鼠作为另外的对照组。制备来自代表性动物的旁矢状面脑切片，并且对下托区进行标记(图26A)。将脑切片针对NeuN进行免疫染色，从而标记神经元(绿色)。以双盲方式使用ImageJ软件从6m厚的脑切片定量下托神经元(图26B)。使用单因素方差分析和杜奈特事后检验分析重复测量结果。误差棒表示平均值±s.e.m.；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。结果显示，全身性阻断PD-1/PD-L1途径引起了保护性免疫活性，所述保护性免疫活性调节脑环境，从而容许支持神经元存活和挽救，最终促进更好的认知表现。
最后，应当了解的是，尽管本说明书的方面通过参考具体实施方案被强调，但是本领域技术人员将容易了解的是，这些公开的实施方案仅说明了本文所公开的主题的原理。因此，应当了解的是，除非明确地如此陈述，否则所公开的主题决不限于本文所述的具体化合物、组合物、制品、设备、方法、方案、和/或试剂等。此外，本领域的普通技术人员将认识到的是，可以根据本文的教导作出某些变化、修改、置换、改变、添加、减除以及其子组合而不脱离本说明书的精神。因此意图是，以下所附权利要求和下文引入的权利要求被解释为在它们的真实精神和范围内包括所有这样的变化、修改、置换、改变、添加、减除以及子组合。
本发明的某些实施方案描述于本文中，包括本申请的发明人已知用于实施本发明的最佳方式。当然，在阅读上述说明后，关于这些描述的实施方案的变化方案对于本领域的普通技术人员来说将变得显而易见。本申请的发明人期望本领域技术人员在适当时利用这些变化方案，并且本申请的发明人意图以除本文具体描述的方式之外的方式来实施本发明。因此，本发明包括如由适用法律所允许的所附权利要求书中所叙述的主题的所有修改和等同方案。此外，除非本文另外指明或以另外的方式与上下文明显矛盾，否则上述实施方案的所有可能的变化方案的任何组合均被本发明所涵盖。
本发明的替代性实施方案、要素或步骤的分组不应当被视为限制。每一个组成员可以单独或以与本文所公开的其它组成员的任何组合的形式被提及和要求保护。预计，出于方便性和/或可专利性的原因，组中的一个或多个成员可以被包括在组中或从组中删除。当任何这样的包括或删除发生时，本说明书被认为包含所修改的组，从而实现用于所附权利要求书中的所有马库什组的书面说明。
除非另外指明，否则用于本说明书和权利要求书中的、表示特征、项目、量、参数、特性、术语等的所有数字都应当被理解为在所有情况下都由术语“约”修饰。如本文所用的术语“约”意指由此所限定的特征、项目、量、参数、特性、或术语涵盖了在所述的特征、项目、量、参数、特性、或术语的值之上和之下加上或减去10％的范围。因此，除非有相反的指示，否则在说明书和所附权利要求书中所阐述的数值参数是可以变化的近似值。举例来说，由于质谱仪器在测定给定分析物的质量时可能略有变化，因此在离子的质量或离子的质量/电荷比的背景下术语“约”指的是+/-0.50个原子质量单位。至少，而不是试图限制等同原则对权利要求书的范围的应用，每一个数字指示都至少应当根据所报告的有效数字的数值和通过应用普通四舍五入技术来解释。
在提到一个实施方案或一个实施方案的方面时，术语“可能(may)”或“可以(can)”的使用还带有“可能不”或“不能”的替代含义。因而，如果本说明书公开了一个实施方案或一个实施方案的一个方面可能或可以被包括作为本发明的主题的一部分，则否定性限制或排除性前提条件也被明确表示，这意味着一个实施方案或一个实施方案的一个方面可能不或不能被包括作为本发明的主题的一部分。以类似方式，在提到一个实施方案或一个实施方案的方面时，术语“任选地”的使用意指所述实施方案或所述实施方案的方面可能被包括作为本发明的主题的一部分或可能不被包括作为本发明的主题的一部分。这样的否定性限制或排除性前提条件是否适用将基于在要求保护的主题中是否叙述了所述否定性限制或排除性前提条件。
尽管阐述本发明的广泛范围的数值范围和值是近似值，但是在具体实施例中所述的数值范围和值是尽可能精确地被报告的。然而，任何数值范围或值在本质上都包含由它们对应的测试测量结果中所存在的标准偏差必然产生的一定误差。在本文对值的数值范围的叙述仅仅意图用作单独地表示落入所述范围内的每一个单独数值的简写方法。除非本文另外指明，否则数值范围的每一个单个值被并入本说明书中，就如同它在本文被单独叙述一般。
除非本文另外指明或与上下文明显矛盾，否则在描述本发明的上下文中(特别是在以下权利要求书的上下文中)所用的术语“a/an(一个)”、“所述(the)”以及类似的指代被解释成涵盖单数形式和复数形式这两者。此外，除非另外具体说明，否则用于所标识的要素的序数指示词，如“第一”、“第二”、“第三”等用于区分要素，并且不表示或暗示这些要素的必需或有限数量，并且不表示这些要素的具体位置或顺序。除非本文另外指明或另外与上下文明显矛盾，否则本文所述的所有方法均可以按照任何合适的顺序进行。本文提供的任何和所有实例或示例性语言(例如“如”)的使用仅意图更好地阐明本发明而不对另外要求保护的本发明的范围构成限制。本说明书中的任何语言不应当被理解成将任何未要求保护的要素指示为对实施本发明来说是必要的。
当用于权利要求书中(无论是在提交时还是按照修正案添加)时，开放式过渡术语“包含(comprising)”(和其等同的开放式过渡短语，如包括(including)、含有(containing)以及具有(having))涵盖所有的单独的明确叙述的要素、限制、步骤和/或特征或其与未叙述的主题的组合；所提到的要素、限制和/或特征是必要的，但是其它没有提到的要素、限制和/或特征可能被添加并且仍然形成权利要求书的范围内的构成物。本文公开的具体实施方案在权利要求书中可以使用封闭式过渡短语“由……组成(consistingof)”或“基本上由……组成(consisting essentially of)”代替“包含”或作为对“包含”的修改来进一步限制。当用于权利要求书中(无论是在提交时还是按照修正案添加)时，封闭式过渡短语“由……组成”排除在权利要求书中没有明确叙述的任何要素、限制、步骤、或特征。封闭式过渡短语“基本上由……组成”将权利要求的范围限于明确叙述的要素、限制、步骤和/或特征以及不会实质上影响要求保护的主题的一个或多个基本和新颖特征的任何其它要素、限制、步骤和/或特征。因此，开放式过渡短语“包含”的含义被定义为涵盖所有具体叙述的要素、限制、步骤和/或特征以及任何任选的另外的未指定的要素、限制、步骤和/或特征。封闭式过渡短语“由……组成”的含义被定义为仅包括权利要求中具体叙述的那些要素、限制、步骤和/或特征，而封闭式过渡短语“基本上由……组成”的含义被定义为仅包括权利要求中具体叙述的那些要素、限制、步骤和/或特征以及不会实质上影响要求保护的主题的一个或多个基本和新颖特征的那些要素、限制、步骤和/或特征。因此，开放式过渡短语“包含”(和其等同的开放式过渡短语)作为极限情况在它的含义内包括，由封闭式过渡短语“由……组成”或“基本上由……组成”指定的要求保护的主题。因而，本文用短语“包含”在本文所描述或由此要求保护的实施方案对于短语“基本上由……组成”和“由……组成”来说是明确或在本质上清楚描述的、能够实现并且在本文得到支持。
本说明书中所提到和鉴别的所有专利、专利公开、以及其它出版物单独地和明确地以引用的方式以其整体并入本文，以用于描述和公开例如这些出版物中所述的可能结合本发明使用的组合物和方法的目的。提供这些出版物仅仅是因为其在本申请的申请日之前公开。关于这一点的任何信息并不应当被理解为承认本申请的发明人无权因在先的发明或任何其它原因而先于所述公开。所有关于日期的陈述或关于这些文件内容的表示都是基于本发明的申请人可获得的信息，而不构成对这些文件的日期或内容的正确性的任何承认。
最后，本文所用的术语仅用于描述具体实施方案的目的，而不意图限制本发明的范围，本发明的范围仅由权利要求书限定。因此，本发明不限于如具体所示和所描述的那样。
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Claims (47)

1.一种用于治疗tau蛋白病的药物组合物，所述药物组合物包含抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗TIM-3抗体、或其任何组合，
其中所述药物组合物是通过包括至少两个治疗过程的给药方案施用的，每一个治疗过程按顺序包括治疗期，之后是非治疗阶段，在所述治疗期中所述药物组合物被施用给个体，在所述非治疗阶段中所述药物组合物不施用给所述个体，
其中所述非治疗阶段长于所述治疗期；
其中，如果在所述治疗期期间所述药物组合物的施用是重复施用，那么所述非治疗阶段长于所述治疗期期间重复施用之间的时间段；并且
其中所述药物组合物的施用瞬时降低全身免疫抑制的水平并且增加促进免疫细胞选择性募集到中枢神经系统中的脉络丛通道活性，从而治疗所述个体。
2.一种用于治疗视网膜变性病症的药物组合物，所述药物组合物包含抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗TIM-3抗体、或其任何组合，
其中所述药物组合物是通过包括至少两个治疗过程的给药方案施用的，每一个治疗过程按顺序包括治疗期，之后是非治疗阶段，在所述治疗期中所述药物组合物被施用给所述个体，在所述非治疗阶段中所述药物组合物不施用给所述个体，
其中所述非治疗阶段长于所述治疗期；
其中，如果在所述治疗期期间所述药物组合物的施用是重复施用，那么所述非治疗阶段长于所述治疗期期间重复施用之间的时间段；并且
其中所述药物组合物的施用瞬时降低全身免疫抑制的水平并且增加促进免疫细胞选择性募集到中枢神经系统中的脉络丛通道活性，从而治疗所述个体。
3.根据权利要求1或2所述的用于所述用途的药物组合物，其中在所述治疗期期间所述药物组合物的施用是单次施用。
4.根据权利要求1或2所述的用于所述用途的药物组合物，其中在所述治疗期期间所述药物组合物的施用是重复施用。
5.根据权利要求4所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述重复施用每天一次、每两天一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次或每六天一次进行。
6.根据权利要求4所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述重复施用每周一次或每两周一次、每三周一次或每四周一次进行。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述治疗期是1天至4周。
8.根据权利要求7所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述治疗期是3天至4周。
9.根据权利要求8所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述治疗期是1周至4周。
10.根据权利要求1至6中任一项所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述非治疗阶段是1周至6个月。
11.根据权利要求10所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述非治疗阶段是2周至6个月。
12.根据权利要求11所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述非治疗阶段是3周至6个月。
13.根据权利要求12所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述非治疗阶段是1个月至3个月。
14.根据权利要求13所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述非治疗阶段是1个月至2个月。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述抗PD-1抗体是中和性抗PD-1抗体，所述抗PD-L1抗体是中和性抗PD-L1抗体和/或所述抗TIM-3抗体是中和性抗TIM-3抗体。
16.根据权利要求1至14中任一项所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述抗PD-1抗体是人类中和性抗PD-1抗体或人源化的中和性抗PD-1抗体。
17.根据权利要求1至15中任一项所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述抗PD-L1抗体是人类中和性抗PD-L1抗体或人源化的中和性抗PD-L1抗体。
18.根据权利要求1至16中任一项所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述抗TIM-3抗体是人类中和性抗TIM-3抗体或人源化的中和性抗TIM-3抗体。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述全身免疫抑制的水平的瞬时降低与产生IFNγ的白细胞的全身性存在或活性的增加和/或IFNγ细胞因子的全身性存在或活性的增加有关。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述全身免疫抑制的水平的瞬时降低与效应T细胞的全身性存在或活性的增加有关。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述全身免疫抑制的水平的瞬时降低与调节性T细胞的全身性存在或活性的降低和/或IL-10细胞因子的全身性存在的减少有关。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述全身免疫抑制的水平的瞬时降低与髓源性抑制细胞(MDSC)的全身性存在的减少有关。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述全身免疫抑制的水平的瞬时降低通过释放由一个或多个免疫检查点对所述免疫系统施加的限制而发生。
24.根据权利要求23所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述药物组合物的施用阻断所述一个或多个免疫检查点，从而引起所述全身免疫抑制的水平的瞬时降低。
25.根据权利要求24所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述一个或多个免疫检查点包括PD1-PD-L1、PD1-PD-L2、TIM-3-Gal9或其任何组合。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的用于所述用途的药物组合物，其中在所述治疗期期间所述药物组合物的施用被维持至少直到产生IFNγ的白细胞和/或IFNγ细胞因子的全身性存在或活性上升到高于参考值为止，此时停止所述施用，并且只要所述产生IFNγ的白细胞和/或IFNγ细胞因子的全身性存在或活性高于所述参考值，就一直维持所述非治疗阶段，
其中所述参考值包括：
a)在所述施用之前从所述个体获得的最近血液样品中所测量的产生IFNγ的白细胞和/或IFNγ细胞因子的全身性存在或活性的水平；或
b)作为患有所述tau蛋白病的个体的群体的特征的、产生IFNγ的白细胞和/或IFNγ细胞因子的全身性存在或活性的水平。
27.根据权利要求1至26中任一项所述的用于所述用途的药物组合物，其中可溶性淀粉样蛋白β肽的大脑水平在所述个体中降低，大脑淀粉样蛋白β(Aβ)斑块负荷在所述个体中降低或清除，海马体神经胶质增生在所述个体中减少，促炎性细胞因子的大脑水平在所述个体中降低，脑炎症在所述个体中减少和/或认知功能在所述个体中得到改善。
28.根据权利要求27所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述改善的认知功能是学习、记忆、意向生成、可塑性、思考、意识、推理、空间能力、言语和语言技能、语言习得、判断注意力的能力或其任何组合。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述免疫细胞包括单核细胞、巨噬细胞、或T细胞。
30.根据权利要求29所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述T细胞包括调节性T细胞。
31.根据权利要求1至30中任一项所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述tau蛋白病是阿尔茨海默氏病、嗜银颗粒病、慢性创伤性脑病、皮质基底节变性、拳击员痴呆、额颞叶痴呆、额颞叶变性、哈勒沃登-施帕茨病、亨廷顿氏病、神经节神经胶质瘤、神经节细胞瘤、球状神经胶质tau蛋白病、铅毒性脑病、脂褐质沉积症、Lytico-Bodig病(关岛帕金森氏病-痴呆综合征)、脑膜血管瘤病、与17号染色体相关的帕金森病、皮克病、原发性年龄相关tau蛋白病(PART)(原先被称为仅神经原纤维缠结型痴呆(NFT-痴呆))、脑炎后帕金森病、进行性核上性麻痹、亚急性硬化性全脑炎或结节性硬化。
32.根据权利要求2至30中任一项所述的用于所述用途的药物组合物，其中所述视网膜变性病症是湿性年龄相关黄斑变性、干性年龄相关黄斑变性、色素性视网膜炎、无脉络膜、视网膜视锥细胞-视杆细胞营养不良、回旋状萎缩、青少年视网膜劈裂症、卵黄状黄斑营养不良(贝斯特氏病)、无β脂蛋白血症(巴-科二氏病)、巴-比二氏综合征、蓝色视锥细胞全色盲病、显性玻璃膜疣、高曼-法夫尔玻璃体视网膜营养不良(增强型S视锥细胞综合征)、卡恩斯-塞尔综合征、劳-穆二氏综合征、利伯氏先天性黑蒙症、利伯氏雷夫叙姆病、小口氏病、乳头周围(中心周围)脉络膜营养不良、色素型营养不良、索斯比黄斑营养不良、斯特格氏病、斯蒂克勒综合征、厄舍综合征或瓦格纳氏玻璃体视网膜营养不良。
33.抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗TIM-3抗体、或其任何组合在治疗tau蛋白病中的用途。
34.抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗TIM-3抗体、或其任何组合在制造用于治疗tau蛋白病的药物中的用途。
35.根据权利要求33或34所述的用途，其中所述抗PD-1抗体是中和性抗PD-1抗体，所述抗PD-L1抗体是中和性抗PD-L1抗体和/或所述抗TIM-3抗体是中和性抗TIM-3抗体。
36.根据权利要求33至35中任一项所述的用途，其中所述抗PD-1抗体是人类中和性抗PD-1抗体或人源化的中和性抗PD-1抗体。
37.根据权利要求33至36中任一项所述的用途，其中所述抗PD-L1抗体是人类中和性抗PD-L1抗体或人源化的中和性抗PD-L1抗体。
38.根据权利要求33至37中任一项所述的用途，其中所述抗TIM-3抗体是人类中和性抗TIM-3抗体或人源化的中和性抗TIM-3抗体。
39.根据权利要求33至38中任一项所述的用途，其中所述tau蛋白病是阿尔茨海默氏病、嗜银颗粒病、慢性创伤性脑病、皮质基底节变性、拳击员痴呆、额颞叶痴呆、额颞叶变性、哈勒沃登-施帕茨病、亨廷顿氏病、神经节神经胶质瘤、神经节细胞瘤、球状神经胶质tau蛋白病、铅毒性脑病、脂褐质沉积症、Lytico-Bodig病(关岛帕金森氏病-痴呆综合征)、脑膜血管瘤病、与17号染色体相关的帕金森病、皮克病、原发性年龄相关tau蛋白病(PART)(原先被称为仅神经原纤维缠结型痴呆(NFT-痴呆))、脑炎后帕金森病、进行性核上性麻痹、亚急性硬化性全脑炎或结节性硬化。
40.抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗TIM-3抗体、或其任何组合在治疗视网膜变性病症中的用途。
41.抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗TIM-3抗体、或其任何组合在制造用于治疗视网膜变性病症的药物中的用途。
42.根据权利要求40或41所述的用途，其中所述抗PD-1抗体是中和性抗PD-1抗体，所述抗PD-L1抗体是中和性抗PD-L1抗体和/或所述抗TIM-3抗体是中和性抗TIM-3抗体。
43.根据权利要求40至42中任一项所述的用途，其中所述抗PD-1抗体是人类中和性抗PD-1抗体或人源化的中和性抗PD-1抗体。
44.根据权利要求40至43中任一项所述的用途，其中所述抗PD-L1抗体是人类中和性抗PD-L1抗体或人源化的中和性抗PD-L1抗体。
45.根据权利要求40至44中任一项所述的用途，其中所述抗TIM-3抗体是人类中和性抗TIM-3抗体或人源化的中和性抗TIM-3抗体。
46.根据权利要求40至45中任一项所述的用途，其中所述视网膜变性病症是湿性年龄相关黄斑变性、干性年龄相关黄斑变性、色素性视网膜炎、无脉络膜、视网膜视锥细胞-视杆细胞营养不良、回旋状萎缩、青少年视网膜劈裂症、卵黄状黄斑营养不良(贝斯特氏病)、无β脂蛋白血症(巴-科二氏病)、巴-比二氏综合征、蓝色视锥细胞全色盲病、显性玻璃膜疣、高曼-法夫尔玻璃体视网膜营养不良(增强型S视锥细胞综合征)、卡恩斯-塞尔综合征、劳-穆二氏综合征、利伯氏先天性黑蒙症、利伯氏雷夫叙姆病、小口氏病、乳头周围(中心周围)脉络膜营养不良、色素型营养不良、索斯比黄斑营养不良、斯特格氏病、斯蒂克勒综合征、厄舍综合征或瓦格纳氏玻璃体视网膜营养不良。
47.一种治疗有需要的个体的tau蛋白病的方法，所述方法包括向所述个体施用组合物，所述组合物包含抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗TIM-3抗体、或其任何组合，
其中所述组合物是通过包括至少两个治疗过程的给药方案施用的，每一个治疗过程按顺序包括治疗期，之后是非治疗阶段，在所述治疗期中所述组合物被施用给所述个体，在所述非治疗阶段中所述组合物不施用给所述个体，
其中所述非治疗阶段长于所述治疗期；
其中，如果在所述治疗期期间所述组合物的施用是重复施用，那么所述非治疗阶段长于所述治疗期期间重复施用之间的时间段；
其中所述组合物的施用瞬时降低全身免疫抑制的水平并且增加促进免疫细胞选择性募集到中枢神经系统中的脉络丛通道活性，从而治疗所述个体。
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