CN108338103A - 一种快速测定海洋贝类最适生存盐度的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种快速测定海洋贝类最适生存盐度的方法，该方法利用致病菌感染法代替传统的养殖实验法，能够在短时间内对海洋贝类的最适盐度进行准确的测定，同时在实验过程中不用投饵，节省了饵料，减少了劳动量，利用本发明方法可在短时间内测定海洋贝类的最适生存盐度，测定时间为常规方法的1/4‑1/6。
Description
技术领域
本发明涉及一种测定海洋贝类最适生存盐度的方法。
背景技术
贝类产业是我国水产业的一个重要组成部分，而贝类养殖业在贝类产业中又占据主导地位。盐度变化使得贝类渗透压发生改变，影响离子交换和机体的能量收支，进而对贝类的生长发育产生影响。不同地理群体的贝类最适盐度具有差异性。因此在养殖生产中，必须检测贝类的最适生长盐度，使其在最适盐度中放养，从而达到养殖生产效益的最大化。
目前对贝类适宜生存盐度的获得，主要通过进行不同盐度条件下的养殖实验来获取，测定方法采用测量不同盐度条件下一定时期内贝类存活率或者壳长和体重的生长数据，从而确定最适生存盐度。但这种常规的测量方法有几个缺点：1、耗时长，短时间内贝类生长不明显，至少要通过1-1.5月的监测才能得到有效的数据；2、劳动繁琐，每天要进行投饵和清洗工作。该方法已经沿用了很多年，效率低下。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种快速测定海洋贝类最适生存盐度的方法。
本发明通过如下技术方案解决其技术问题：一种快速测定贝类最适生存盐度的方法，该方法利用致病菌感染贝类，然后观察贝类在不同盐度梯度海水中的存活率，生存率最高的盐度即为所述贝类的最适生存盐度。该方法具体包括如下步骤：步骤1)将待测贝类放入不同盐度梯度海水中，每个盐度梯度下放置的总数量不少于90只，并使其在不同盐度海水中适应3天以上；每个盐度梯度至少设置两个平行对照组；
步骤2)适应期过后，将大约半致死剂量的致病菌注射到不同盐度梯度下的贝类体内；所述半致死剂量的致病菌通过如下方式测定：在正常盐度海水(本地区盐度的海水)中，采用不同浓度致病菌感染(注射)所述贝类，获得72h半致死剂量作为所述半致死剂量；
步骤3)统计致病菌注射后24h-72h贝类的存活率，判断所述贝类的最适生存盐度，生存率最高的盐度即为所述贝类的最适生存盐度。
一般来说如果直接将感染贝类放到不同盐度海水中，盐度差较大时，渗透压变化也较大，对贝类有一定的损伤，使实验结果不准确，先让实验贝类适应3d以上再做实验，使实验结果更为准确。感染贝类致病菌剂量，本发明选择72h半致死剂量，实际可稍高于半致死剂量，但是不能高太多，最好不要超过2个数量级。以九孔鲍不同时长的半致死剂量来看，剂量太高造成过多的应激死亡，无法分辨哪个盐度比较好，剂量太低往往达不到效果，多个盐度条件下，都不容易死亡，不好区分，72h半致死剂量是多次试验后的优选方案。
所述贝类可以是九孔鲍、华贵栉孔扇贝、方斑东风螺等；针对的贝类为九孔鲍或华贵栉孔扇贝时，所述致病菌可采用哈维弧菌、副溶血弧菌或溶藻弧菌等；针对的贝类为方斑东风螺时，所述致病菌可采用哈维弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌或鳗弧菌等。
相比于现有技术，本发明具有如下有益效果：迄今为止，尚未见到任何有关快速测定贝类最适生存盐度的方法，本发明利用致病菌感染法代替传统的养殖实验法，能够在短时间内对贝类的最适盐度进行准确的测定，同时在实验过程中不用投饵，节省了饵料，也降低了劳动量，利用本发明方法可在短时间内测定贝类的最适生存盐度，测定时间为常规方法的1/4-1/6。
附图说明
图1不同盐度条件下哈维弧菌注射后24h九孔鲍存活率图；
图2不同盐度条件下哈维弧菌注射后24h方斑东风螺存活率图；
图3不同盐度条件下哈维弧菌注射后24h华贵栉孔扇贝存活率图；
图4不同盐度条件下九孔鲍壳长日平均增长图；
图5不同盐度下方斑东风螺相对存活率的变化图；
图6华贵栉孔扇贝稚贝在不同盐度下存活率图；
图7为不同盐度条件下哈维弧菌注射后不同时间九孔鲍存活率图。
具体实施方式
实验一
1、在正常盐度海水(所选地区海水盐度为33‰)中，采用不同浓度哈维弧菌感染九孔鲍，获得72h哈维弧菌半致死剂量(包括浓度和使用量)。
2、配制盐度梯度分别为20‰、25‰、30‰、35‰和40‰的海水，具体步骤如下：(1)低盐海水采用充分曝气24h自来水加正常盐度海水配制；(2)高盐海水采用正常海水加海水晶配制。
3、将九孔鲍直接放入不同盐度梯度海水中，每个盐度梯度下放置的贝类总量不少于90只，每个盐度梯度设置3个平行对照组，使九孔鲍在不同盐度海水中适应3天。
4、适应阶段结束后，以注射方式将接近72h半致死剂量的哈维弧菌50μl注射到不同盐度梯度下的贝类体内。
5、统计哈维弧菌注射后24h不同贝类的存活率，判断其的最适生存盐度，实验期间不投喂饵料，换水4-6次。
实验结果如图1所示。
图7为不同盐度条件下哈维弧菌注射后不同时间九孔鲍存活率，可见根据哈维弧菌注射后48h、72h的存活率也能得出同样结论。
上述哈维弧菌还可换成副溶血弧菌、溶藻弧菌等其他鲍类致病菌。
实验二
1、在正常盐度海水(所选地区海水盐度为33‰)中，采用不同浓度哈维弧菌感染方斑东风螺，获得72h哈维弧菌半致死剂量。
2、配制盐度梯度分别为20‰、25‰、30‰、35‰和40‰海水，具体步骤如下：(1)低盐海水采用充分曝气24h自来水加正常盐度海水配制；(2)高盐海水采用正常海水加海水晶配制。
3、将方斑东风螺直接放入不同盐度梯度海水中，每个盐度梯度下放置的贝类总量不少于90只，每个盐度梯度设置3个平行对照组，使其在不同盐度海水中适应3天。
4、适应阶段结束后，以注射方式将接近72h半致死剂量的哈维弧菌50μl注射到不同盐度梯度下的贝类体内。
5、统计哈维弧菌注射后24h不同贝类的存活率，判断其的最适生存盐度，实验期间不投喂饵料，换水4-6次。
实验结果如图2所示。
上述哈维弧菌也可换成副溶血弧菌、创伤弧菌或鳗弧菌等其他致病菌。
实验三
1、在正常盐度海水(所选地区海水盐度为33‰)中，采用不同浓度哈维弧菌感染华贵栉孔扇贝，获得72h哈维弧菌半致死剂量。
2、配制盐度梯度分别为20‰、25‰、30‰、35‰和40‰海水，具体步骤如下：(1)低盐海水采用充分曝气24h自来水加正常盐度海水配制；(2)高盐海水采用正常海水加海水晶配制。
3、将华贵栉孔扇贝直接放入不同盐度梯度海水中，每个盐度梯度下放置的贝类总量不少于90只，每个盐度梯度设置3个平行对照组，使其在不同盐度海水中适应3天。
4、适应阶段结束后，以注射方式将接近72h半致死剂量的哈维弧菌50μl注射到不同盐度梯度下的贝类体内。
5、统计哈维弧菌注射后24h不同贝类的存活率，判断其的最适生存盐度，实验期间不投喂饵料，换水4-6次。
实验结果如图3所示。
上述哈维弧菌也可换成溶藻弧菌或副溶血弧菌等其他贝类致病菌。
上面实验结果如图1-3所示，在不同盐度条件下，对九孔鲍、方斑东风螺和华贵栉孔扇贝进行感染，24h后不同贝类在不同盐度条件下具有不同的存活率，其中在盐度30条件下，九孔鲍、方斑东风螺和华贵栉孔扇贝的存活率最高，表明为其最适生存盐度。
图4-6为相关文献上公开的九孔鲍、方斑东风螺和华贵栉孔扇贝在不同盐度条件下的壳长日平均增长率及不同盐度条件下的存活率数据，可见，本实验结果与文献上的结果具有一致性，证明采用本发明方法可在短时间内快速测定不同贝类的最适生存盐度。图4出处：盐度对九孔鲍摄食、生长及存活的影响，水产学报；图5出处：方斑东风螺对盐度适应性的研究，南方水产；图6出处：华贵栉孔扇贝稚贝盐度适应性的研究，广东海洋大学学报。
Claims (3)
1.一种快速测定海洋贝类最适生存盐度的方法，其特征在于，该方法利用致病菌感染贝类，然后观察贝类在不同盐度梯度海水中的存活率，生存率最高的盐度即为所述贝类的最适生存盐度。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：步骤1)将待测贝类放入不同盐度梯度海水中，每个盐度梯度下放置的总数量不少于90只，并使其在不同盐度海水中适应3天以上；每个盐度梯度至少设置两个平行对照组；
步骤2)适应期过后，将半致死剂量的致病菌注射到不同盐度梯度下的贝类体内；所述半致死剂量的致病菌通过如下方式测定：在正常盐度海水中，采用不同浓度致病菌感染所述贝类，获得72h半致死剂量作为所述半致死剂量；
步骤3)统计致病菌注射后24h-72h贝类的存活率，判断所述贝类的最适生存盐度，生存率最高的盐度即为所述贝类的最适生存盐度。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述贝类为九孔鲍、华贵栉孔扇贝或方斑东风螺；针对的贝类为九孔鲍或华贵栉孔扇贝时，所述致病菌采用哈维弧菌、副溶血弧菌或溶藻弧菌；针对的贝类为方斑东风螺时，所述致病菌采用哈维弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌或鳗弧菌。
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