CN108254456B - 一种测定透明质酸钠凝胶中填充的交联葡聚糖含量的方法 - Google Patents
一种测定透明质酸钠凝胶中填充的交联葡聚糖含量的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108254456B CN108254456B CN201711384231.7A CN201711384231A CN108254456B CN 108254456 B CN108254456 B CN 108254456B CN 201711384231 A CN201711384231 A CN 201711384231A CN 108254456 B CN108254456 B CN 108254456B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cross
- temperature
- peak
- cracking
- pyrolysis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 title claims abstract description 27
- 229920002385 Sodium hyaluronate Polymers 0.000 title claims abstract description 26
- 229940010747 sodium hyaluronate Drugs 0.000 title claims abstract description 26
- YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N sodium;(2s,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2-[(2s,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2- Chemical compound [Na+].CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N 0.000 title claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 238000005336 cracking Methods 0.000 claims abstract description 66
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 58
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims abstract description 27
- 238000000197 pyrolysis Methods 0.000 claims abstract description 23
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000005143 pyrolysis gas chromatography mass spectroscopy Methods 0.000 claims abstract description 6
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims description 15
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims description 15
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 claims description 12
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 4
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 claims description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 11
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 10
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 6
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 5
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 5
- OACYKCIZDVVNJL-UHFFFAOYSA-N 3-Methyl-1,2-cyclopentanedione Chemical compound CC1CCC(=O)C1=O OACYKCIZDVVNJL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XPCTZQVDEJYUGT-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-2-methyl-4-pyrone Chemical compound CC=1OC=CC(=O)C=1O XPCTZQVDEJYUGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- RNQWXOKSUCPOFS-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxan-2-ol Chemical compound OC1COCCO1 RNQWXOKSUCPOFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 2-glycolaldehyde Chemical compound 0.000 description 2
- 239000001837 2-hydroxy-3-methylcyclopent-2-en-1-one Substances 0.000 description 2
- SSSNQLHKSUJJTE-UHFFFAOYSA-N 5-Hydroxymaltol Chemical compound CC=1OC=C(O)C(=O)C=1O SSSNQLHKSUJJTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- HYMLWHLQFGRFIY-UHFFFAOYSA-N Maltol Natural products CC1OC=CC(=O)C1=O HYMLWHLQFGRFIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- LOGSONSNCYTHPS-UHFFFAOYSA-N cyclopentane-1,3-dione Chemical compound O=C1CCC(=O)C1 LOGSONSNCYTHPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RXKJFZQQPQGTFL-UHFFFAOYSA-N dihydroxyacetone Chemical compound OCC(=O)CO RXKJFZQQPQGTFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- XLSMFKSTNGKWQX-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetone Chemical compound CC(=O)CO XLSMFKSTNGKWQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWNIBLMWSKIRAT-VFUOTHLCSA-N levoglucosan Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]2CO[C@@H]1O2 TWNIBLMWSKIRAT-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 229940043353 maltol Drugs 0.000 description 2
- CWKLZLBVOJRSOM-UHFFFAOYSA-N methyl pyruvate Chemical compound COC(=O)C(C)=O CWKLZLBVOJRSOM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000005501 phase interface Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/72—Mass spectrometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8624—Detection of slopes or peaks; baseline correction
- G01N30/8631—Peaks
- G01N30/8634—Peak quality criteria
Landscapes
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Quality & Reliability (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及一种测定透明质酸钠凝胶中填充的交联葡聚糖含量的方法，包括如下步骤：1)采用裂解气相色谱‑质谱联用法对若干组质量不同的交联葡聚糖纯品进行高温裂解分析，并根据裂解色谱图得到特征裂解峰的峰面积与质量的线性关系；所述特征裂解峰为丙三醇的特征裂解峰；2)继续对待测样品进行高温裂解分析，根据所述特征裂解峰的出峰时间得到待测样品的特征裂解峰的峰面积，之后得到待测样品中填充的交联葡聚糖的质量或含量。该方法操作简便快捷，结果准确可靠。
Description
技术领域
本发明涉及分析检测领域，具体涉及一种测定透明质酸钠凝胶中填充的交联葡聚糖含量的方法。
背景技术
交联葡聚糖是将纯化后的线性葡聚糖(吡喃型葡聚糖)与环氧氯丙烷反应，再导入丙三醇侧链，而在葡聚糖链间以醚键形成交联的三维空间网状结构的高分子化合物，通常为白色珠状微粒。
目前，交联葡聚糖的品质指标主要有：粒径分布、微生物、内毒素、工作pH值、操作温度、分子量分离范围等。交联葡聚糖广泛应用于凝胶过滤，分离分子量大小不同的蛋白质、酶、核酸和多糖类高分子化合物。交联葡聚糖具有复杂的空间网状结构，可作为药物的负载物，进入血液后能够有效的达到目标地点，防止因过早降解导致负载药物的释放而使效果降低。
此外，用交联葡聚糖填充修饰透明质酸钠，可以降低人体内特定酶分解透明质酸钠的速度，保持效力，具有较高的临床价值，可用于治疗关节炎，加速伤口愈合，也可添加到化妆品达到保湿和抗皮肤老化的功能。
黏膜填充修饰用透明质酸钠凝胶医用新材料中填充有交联葡聚糖，可用于替代进口产品，但至今还没有医用新材料中填充交联葡聚糖的相关定量检测技术。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的空缺，提供一种测定透明质酸钠凝胶中填充的交联葡聚糖含量的方法，该方法操作简便快捷，结果准确可靠。
本发明所提供的技术方案为：
一种测定透明质酸钠凝胶中填充的交联葡聚糖含量的方法，包括如下步骤：
1)采用裂解气相色谱-质谱联用法对若干组质量不同的交联葡聚糖纯品进行高温裂解分析，并根据裂解色谱图得到特征裂解峰的峰面积与质量的线性关系；所述特征裂解峰为丙三醇的特征裂解峰；
2)继续对待测样品进行高温裂解分析，根据所述特征裂解峰的出峰时间得到待测样品的特征裂解峰的峰面积，之后得到待测样品中填充的交联葡聚糖的质量或含量。
本发明待测样品透明质酸钠凝胶中包含交联葡聚糖和透明质酸钠。透明质酸钠凝胶的主要特征裂解峰为1-羟基-2-丙酮、2-羟基乙醛、乙酸、丙酮酸甲酯、1,3-环戊二酮、乙酰胺、3-甲基环戊烷-1,2-二酮、麦芽酚、1,3-二羟基丙酮、3,5-二羟基-2-甲基-4-吡喃酮、丙三醇、丙位戊内酯、1,4-二氧六环-2-醇、1,6-脱水-β-D-吡喃葡萄糖。而其中仅在交联葡聚糖中出现的特征裂解峰为丙酮酸甲酯、1,3-环戊二酮、3-甲基环戊烷-1,2-二酮、麦芽酚、1,3-二羟基丙酮、3,5-二羟基-2-甲基-4-吡喃酮、丙三醇、1,4-二氧六环-2-醇、1,6-脱水-β-D-吡喃葡萄糖。
本发明创造性地发现其中丙三醇的特征裂解峰的峰面积与交联葡聚糖的质量成线性关系。利用气相色谱-质谱联用技术分离分析该体系的裂解组分，根据交联葡聚糖的特征裂解组分对其进行定性，并根据仅出现在交联葡聚糖中的裂解特征组分(丙三醇)的峰面积对交联葡聚糖进行定量测定，该方法可以同时实现定性和定量分析。
本发明根据丙三醇特征裂解峰的峰面积与交联葡聚糖质量的线性关系，即以交联葡聚糖特征裂解组分的峰面积为纵坐标，以交联葡聚糖质量为横坐标制作标准曲线，得到交联葡聚糖纯品的标准曲线，根据标准曲线和公式(1)计算凝胶样品中交联葡聚糖的百分含量。
其中，x为样品中交联葡聚糖的百分含量，A为样品中交联葡聚糖的特征裂解组分的峰面积，a为标准曲线的斜率，b为标准曲线的截距，m为样品的进样质量。
作为优选，所述透明质酸钠凝胶包含交联葡聚糖、透明质酸钠、水和无机盐。
作为优选，所述步骤1)中交联葡聚糖纯品选择3～7组进行高温裂解分析。进一步优选为4组。
作为优选，所述裂解条件为：裂解炉温度300～900℃，裂解时间6～45s，裂解气相接口温度200～400℃。
作为优选，所述色谱条件为：色谱柱为极性柱，初始柱温40～210℃，保持1～5min，以2～50℃/min的速率升温到200～300℃，保持5～15min；进样口温度为200～310℃，分流比为20～200:1。
作为优选，所述质谱条件为：质量扫描范围15～450amu；离子源温度200～280℃，四极杆温度125～180℃，质谱接口温度200～300℃。
进一步，所述裂解气相色谱-质谱联用法中，裂解条件优选为：裂解炉温度500-700℃，裂解气相接口温度300-350℃；色谱条件优选为：色谱柱为强极性柱，初始柱温110-130℃，保持2-4min，以8-12℃/min速率升温到240-260℃，保持10-14min；进样口温度为290-310℃，分流比为40-60:1；质谱条件优选为：质量扫描范围35～200amu；离子源温度220-240℃，四极杆温度140-160℃，裂解时间15～30s，质谱接口温度270-290℃。
同现有技术相比，本发明的有益效果体现在：裂解气相色谱-质谱技术无需预处理样品，采用直接进样方式，建立了定量测定透明质酸钠凝胶中填充交联葡聚糖的方法，结果准确可靠，操作简便，高效且环保，填补了凝胶产品类材料中填充交联葡聚糖含量的检测技术空白，具有十分深远的意义。
附图说明
图1为实施例1中的标准曲线图；
图2为实施例1中的凝胶样品裂解色谱图；
图3为实施例1中的交联葡聚糖纯品的裂解色谱图；
图4为实施例1中的透明质酸钠纯品的裂解色谱图；
图5为实施例2中的凝胶样品裂解色谱图；
图6为实施例3中的凝胶样品裂解色谱图；
图7为实施例4中的凝胶样品裂解色谱图；
图8为实施例5中的凝胶样品裂解色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限此：
美国Agilent公司的Agilent 7890B-5977A气相色谱-质谱联用仪；日本FrontierLab公司的PY-3030D双击式微炉裂解器；瑞士Mettler-Toledo公司的Mettler AG-135电子天平。
透明质酸钠凝胶样品和透明质酸钠由杭州协合医疗用品有限公司提供；交联葡聚糖(SephadexTM)由GE Healthcare Bio-Sciences公司提供。
实施例1
色谱柱为：强极性毛细管柱HP-INNOWax(30m×0.32mm×0.5μm，美国)，初始柱温120℃，保持3min，以10℃/min速率升温到250℃，保持12min；进样口温度为300℃，分流比为50:1；质谱条件为：质量扫描范围35～200amu；离子源温度230℃，四极杆温度150℃，质谱接口温度280℃；裂解条件为：裂解炉温度600℃，裂解时间24s，裂解气相接口温度300℃。
准确称取交联葡聚糖纯品0.32mg、0.53mg、0.75mg、1.14mg，在上述仪器条件下分别进行裂解气相色谱-质谱分析，以特征裂解组分丙三醇(保留时间12.74min)的峰面积A为纵坐标，交联葡聚糖的质量G为横坐标，制作标准曲线(见图1)并线性回归得方程A*10-6＝207.40G+1.023,R＝0.99985。
准确称取凝胶样品5.56mg，置于裂解小杯内，在上述相同的仪器条件下进行裂解气相色谱-质谱分析，裂解色谱图见图2，丙三醇(保留时间12.73min)的峰面积为60.09*106，计算得凝胶样品中交联葡聚糖含量为5.12％。
作为对照，图3为交联葡聚糖纯品的裂解色谱图(0.32mg)。并在上述相同的仪器条件下采用裂解气相色谱-质谱分析透明质酸钠纯品，裂解色谱图见图4，经质谱检索分析裂解产物，未检出丙三醇组分。
实施例2
色谱柱为：强极性毛细管柱HP-INNOWax(30m×0.32mm×0.5μm，美国)，初始柱温120℃，保持3min，以10℃/min速率升温到250℃，保持12min；进样口温度为300℃，分流比为60:1；质谱条件为：质量扫描范围35～250amu；离子源温度230℃，四极杆温度150℃，质谱接口温度280℃；裂解条件为：裂解炉温度500℃，裂解时间18s，裂解气相接口温度300℃。
准确称取交联葡聚糖纯品0.15mg、0.30mg、0.65mg、0.97mg，在上述仪器条件下分别进行裂解气相色谱-质谱分析，以特征裂解组分丙三醇的峰面积A为纵坐标，交联葡聚糖的质量G为横坐标，制作标准曲线并线性回归得方程A*10-6＝219.55G-2.171,R＝0.99976。
准确称取凝胶样品2.93mg，置于裂解小杯内，在上述相同的仪器条件下进行裂解气相色谱-质谱分析，裂解谱图见图5，丙三醇(保留时间12.75min)的峰面积为30.25*106，计算得凝胶样品中交联葡聚糖含量为5.04％。
实施例3
色谱柱为：强极性毛细管柱HP-INNOWax(30m×0.32mm×0.5μm，美国)，初始柱温120℃，保持3min，以10℃/min速率升温到250℃，保持12min；进样口温度为310℃，分流比为80:1；质谱条件为：质量扫描范围35～200amu；离子源温度230℃，四极杆温度150℃，质谱接口温度280℃；裂解条件为：裂解炉温度700℃，裂解时间15s，裂解气相接口温度350℃。
准确称取交联葡聚糖纯品0.21mg、0.35mg、0.65mg、1.08mg，在上述仪器条件下分别进行裂解气相色谱-质谱分析，以特征裂解组分丙三醇的峰面积A为纵坐标，交联葡聚糖的质量G为横坐标，制作标准曲线并线性回归得方程A*10-6＝100.21G-2.475,R＝0.99918。
准确称取凝胶样品3.10mg，置于裂解小杯内，在上述相同的仪器条件下进行裂解气相色谱-质谱分析，裂解谱图见图6，丙三醇(保留时间12.71min)的峰面积为12.84*106，计算得凝胶样品中交联葡聚糖含量为4.93％。
实施例4
色谱柱为：强极性毛细管柱HP-INNOWax(30m×0.32mm×0.5μm，美国)，初始柱温150℃，保持3min，以20℃/min速率升温到250℃，保持12min；进样口温度为290℃，分流比为45:1；质谱条件为：质量扫描范围35～350amu；离子源温度230℃，四极杆温度150℃，质谱接口温度280℃；裂解条件为：裂解炉温度550℃，裂解时间30s，裂解气相接口温度300℃。
准确称取交联葡聚糖纯品0.25mg、0.42mg、0.73mg、1.13mg，在上述仪器条件下分别进行裂解气相色谱-质谱分析，以特征裂解组分丙三醇的峰面积A为纵坐标，交联葡聚糖的质量G为横坐标，制作标准曲线并线性回归得方程A*10-6＝398.51G-3.121,R＝0.99939。
准确称取凝胶样品4.88mg，置于裂解小杯内，在上述相同的仪器条件下进行裂解气相色谱-质谱分析，裂解谱图见图7，丙三醇(保留时间7.49min)的峰面积为96.06*106，计算得凝胶样品中交联葡聚糖含量为5.10％。
实施例5
色谱柱为：强极性毛细管柱HP-INNOWax(30m×0.32mm×0.5μm，美国)，初始柱温120℃，保持3min，以20℃/min速率升温到250℃，保持11.5min；进样口温度为305℃，分流比为20:1；质谱条件为：质量扫描范围35～450amu；离子源温度230℃，四极杆温度150℃，质谱接口温度280℃；裂解条件为：裂解炉温度650℃，裂解时间27s，裂解气相接口温度300℃。
准确称取交联葡聚糖纯品0.31mg、0.46mg、0.80mg、1.25mg，在上述仪器条件下分别进行裂解气相色谱-质谱分析，以特征裂解组分丙三醇的峰面积A为纵坐标，交联葡聚糖的质量G为横坐标，制作标准曲线并线性回归得方程A*10-6＝524.22G+5.132,R＝0.99896。
准确称取凝胶样品4.51mg，置于裂解小杯内，在上述相同的仪器条件下进行裂解气相色谱-质谱分析，裂解谱图见图8，丙三醇(保留时间9.10min)的峰面积为130.20*106，计算得凝胶样品中交联葡聚糖含量为5.29％。
Claims (5)
1.一种测定透明质酸钠凝胶中填充的交联葡聚糖含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)采用裂解气相色谱-质谱联用法对若干组质量不同的交联葡聚糖纯品进行高温裂解分析，并根据裂解色谱图得到特征裂解峰的峰面积与质量的线性关系；所述特征裂解峰为丙三醇的特征裂解峰；
2)继续对待测样品进行高温裂解分析，根据所述特征裂解峰的出峰时间得到待测样品的特征裂解峰的峰面积，之后得到待测样品中填充的交联葡聚糖的质量或含量；
所述裂解条件为：裂解炉温度300～900℃，裂解时间6～45s，裂解气相接口温度200～400℃。
2.根据权利要求1所述的测定透明质酸钠凝胶中填充的交联葡聚糖含量的方法，其特征在于，所述透明质酸钠凝胶包含交联葡聚糖、透明质酸钠、水和无机盐。
3.根据权利要求1所述的测定透明质酸钠凝胶中填充的交联葡聚糖含量的方法，其特征在于，所述步骤1)中交联葡聚糖纯品选择3～7组进行高温裂解分析。
4.根据权利要求1所述的测定透明质酸钠凝胶中填充的交联葡聚糖含量的方法，其特征在于，所述色谱条件为：色谱柱为极性柱，初始柱温40～210℃，保持1～5min，以2～50℃/min的速率升温到200～300℃，保持5～15min；进样口温度为200～300℃，分流比为20～200:1。
5.根据权利要求1所述的测定透明质酸钠凝胶中填充的交联葡聚糖含量的方法，其特征在于，所述质谱条件为：质量扫描范围15～450amu；离子源温度200～280℃，四极杆温度125～180℃，质谱接口温度200～300℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711384231.7A CN108254456B (zh) | 2017-12-20 | 2017-12-20 | 一种测定透明质酸钠凝胶中填充的交联葡聚糖含量的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711384231.7A CN108254456B (zh) | 2017-12-20 | 2017-12-20 | 一种测定透明质酸钠凝胶中填充的交联葡聚糖含量的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108254456A CN108254456A (zh) | 2018-07-06 |
| CN108254456B true CN108254456B (zh) | 2020-12-01 |
Family
ID=62723376
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201711384231.7A Active CN108254456B (zh) | 2017-12-20 | 2017-12-20 | 一种测定透明质酸钠凝胶中填充的交联葡聚糖含量的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108254456B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111811999B (zh) * | 2020-06-17 | 2023-06-20 | 杭州协合医疗用品有限公司 | 一种测定交联透明质酸钠凝胶中包裹的交联葡聚糖微球粒径的方法 |
| CN114280193A (zh) * | 2021-12-28 | 2022-04-05 | 青岛琛蓝海洋生物工程有限公司 | 一种凝胶交联度的检测方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101943686A (zh) * | 2010-09-03 | 2011-01-12 | 中国广州分析测试中心 | 一种聚二甲基硅氧烷的检测方法 |
| CN103091415A (zh) * | 2012-12-30 | 2013-05-08 | 浙江工业大学 | 测定含涤纶的二组分混纺织物中混纺成分和含量的方法 |
| CN103323546A (zh) * | 2013-06-04 | 2013-09-25 | 浙江工业大学 | 一种裂解气相色谱-质谱法分析蜂胶化学成分的方法 |
| JP2017003288A (ja) * | 2015-06-05 | 2017-01-05 | 住友ゴム工業株式会社 | シランカップリング剤の定量方法 |
| CN107085046A (zh) * | 2017-04-06 | 2017-08-22 | 浙江理工大学 | 一种混纺产品中聚酰胺6或聚酰胺66的鉴定方法 |
| CN107102073A (zh) * | 2017-04-06 | 2017-08-29 | 浙江理工大学 | 一种测定混纺产品中聚酰胺6组分含量的方法 |
-
2017
- 2017-12-20 CN CN201711384231.7A patent/CN108254456B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101943686A (zh) * | 2010-09-03 | 2011-01-12 | 中国广州分析测试中心 | 一种聚二甲基硅氧烷的检测方法 |
| CN103091415A (zh) * | 2012-12-30 | 2013-05-08 | 浙江工业大学 | 测定含涤纶的二组分混纺织物中混纺成分和含量的方法 |
| CN103323546A (zh) * | 2013-06-04 | 2013-09-25 | 浙江工业大学 | 一种裂解气相色谱-质谱法分析蜂胶化学成分的方法 |
| JP2017003288A (ja) * | 2015-06-05 | 2017-01-05 | 住友ゴム工業株式会社 | シランカップリング剤の定量方法 |
| CN107085046A (zh) * | 2017-04-06 | 2017-08-22 | 浙江理工大学 | 一种混纺产品中聚酰胺6或聚酰胺66的鉴定方法 |
| CN107102073A (zh) * | 2017-04-06 | 2017-08-29 | 浙江理工大学 | 一种测定混纺产品中聚酰胺6组分含量的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN108254456A (zh) | 2018-07-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Han et al. | Sheathless capillary electrophoresis-tandem mass spectrometry for top-down characterization of Pyrococcus furiosus proteins on a proteome scale | |
| Bessonov et al. | Characterization of purified human Bact spliceosomal complexes reveals compositional and morphological changes during spliceosome activation and first step catalysis | |
| Han et al. | In-line separation by capillary electrophoresis prior to analysis by top-down mass spectrometry enables sensitive characterization of protein complexes | |
| CN108254456B (zh) | 一种测定透明质酸钠凝胶中填充的交联葡聚糖含量的方法 | |
| Kulp et al. | Chemical and biological differentiation of three human breast cancer cell types using time-of-flight secondary ion mass spectrometry | |
| Petkowski et al. | Substrate specificity of mammalian N-terminal α-amino methyltransferase NRMT | |
| Yang et al. | Single-cell mass spectrometry reveals changes in lipid and metabolite expression in RAW 264.7 cells upon lipopolysaccharide stimulation | |
| Nakayama et al. | Method for direct mass-spectrometry-based identification of monomethylated RNA nucleoside positional isomers and its application to the analysis of Leishmania rRNA | |
| JP2017067779A (ja) | 検体の誘導体化及び向上したソフトイオン化の方法 | |
| Lee et al. | Determination of cross sections by overtone mobility spectrometry: evidence for loss of unstable structures at higher overtones | |
| Zamfir | Applications of capillary electrophoresis electrospray ionization mass spectrometry in glycosaminoglycan analysis | |
| Creese et al. | Large-scale analysis of peptide sequence variants: the case for high-field asymmetric waveform ion mobility spectrometry | |
| He et al. | An online field-amplification sample stacking method for the determination of β2-agonists in human urine by CE-ESI/MS | |
| Nakamura et al. | Graphical ranking of divisors to get the most out of a resolution-enhanced Kendrick mass defect plot | |
| Bonaduce et al. | Terpenoid oligomers of dammar resin | |
| Kostyukevich et al. | High-resolution mass spectrometry study of the bio-oil samples produced by thermal liquefaction of microalgae in different solvents | |
| Corso et al. | Polar and non-polar organic binder characterization in Pompeian wall paintings: comparison to a simulated painting mimicking an “a secco” technique | |
| EP2417446A1 (en) | A method of characterizing phytochemicals from trigonella foenum graceum | |
| Li et al. | A novel spectral library workflow to enhance protein identifications | |
| Vandenbogaert et al. | Automated phosphopeptide identification using multiple MS/MS fragmentation modes | |
| Raftery | Enrichment by organomercurial agarose and identification of cys-containing peptides from yeast cell lysates | |
| CN105203663A (zh) | 一种紫草素的快速检测方法 | |
| CN107001416A (zh) | 芋螺毒素肽κ‑CPTx‑btl04、其制备方法及应用 | |
| Pathak et al. | Assessing the Dipole Moments and Directional Cross Sections of Proteins and Complexes by Differential Ion Mobility Spectrometry | |
| Weijman | Carbohydrate composition and taxonomy of the genus Dipodascus |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20211202 Address after: 314503 Wutong Street development avenue, 1488, Zhejiang, Jiaxing, Tongxiang, 1 and 1, South and 3 floors South and 4 floor south, Patentee after: Zhejiang University of science and technology Tongxiang Research Institute Co.,Ltd. Address before: 310018 No. 2 street, Baiyang street, Hangzhou economic and Technological Development Zone, Zhejiang 928 Patentee before: ZHEJIANG SCI-TECH University |
|
| TR01 | Transfer of patent right |