CN108219031B - 一种依诺肝素钠的精制方法 - Google Patents

一种依诺肝素钠的精制方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供新的响应面法辅助设计优化的依诺肝素钠精制方法，具体涉两次双氧水氧化脱色、甲醇分级醇沉、响应面法辅助设计获得实验方案、多批次实验获得最优条件，并最终在此基础上制备得各项指标符合要求的依诺肝素钠精制品。该生产工艺简单、易于进行产品收集、效率高，同时所得产品合格率稳定可靠，可直接应用于工业化大生产。

Description

一种依诺肝素钠的精制方法
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种依诺肝素钠的精制方法。
背景技术
依诺肝素钠(Enoxaparin Sodium)是一种低分子肝素钠盐，主要用于预防静脉血栓栓塞性疾病，特别是预防与骨科或普外手术有关的血栓形成；治疗已形成的深静脉栓塞，伴或不伴有肺栓塞；与阿司匹林同用，治疗不稳定性心绞痛及非Q波心梗；用于血液透析体外循环中，防止血栓形成等；是目前抗凝血、抗血栓形成的主要治疗药物之一。其结构如下所示：
Figure BDA0001187369820000011
Figure BDA0001187369820000012
可见其结构中有一个4-烯吡喃糖醛酸结构。依诺肝素钠通过对猪肠黏膜肝素的苄基酯衍生物进行碱解聚而获得，其基本步骤为：以猪黏膜肝素为起始原料，经肝素季铵盐制备、肝素苄酯制备、对肝素苄酯进行碱解聚，以酸中和、醇沉淀，精制、脱色、干燥得到依诺肝素钠成品。其中，在酸中和、醇沉淀后得到的依诺肝素钠中间体，其澄清度往往很差，如果不加以精致纯化，就无法达到2015版《中国药典》的要求，由于依诺肝素钠属于注射剂用原料药，其水溶液澄清度必须小于0.5号浊度标准液，中国药典对此的标准比欧洲药典要严格许多。但经过上述制备步骤，会引入很多对澄清度造成影响的杂质，所以提供一种能够提高澄清度，进而提高依诺肝素钠质量的制备纯化方法尤为重要。
目前依诺肝素钠的精制方法几近成熟，但最终产品的干燥环节成为制约依诺肝素钠澄清度的关键因素，目前主流工业生产采用的是冷冻干燥的方法，但该方法受样品分子量分布、冷冻样品浓度、冷冻干燥机内空气对流情况、承载物料托盘材质等诸多难以控制的因素影响，产品质量难以稳定保证，澄清度往往不合格，极大地制约了其在工业化生产中的效率，因此，喷雾干燥法因其效率高、受影响因素少的特点成为冷冻干燥法的完美替代，目前也有一些喷雾干燥法应用于依诺肝素钠制备的专利报道，如CN104592421A等，但均未对喷雾干燥方法进行系统优化，所得产品质量及其它各项指标也均存在不同程度的问题。
专利CN104592421A提供了一种依诺肝素钠喷雾干燥路线：将依诺肝素钠粗品加入纯化水中，10～30℃下，搅拌溶解形成20％～40％浓度的药液，药液经0.1μm滤膜过滤，喷雾干燥，其中喷雾干燥药液入口温度为140～180℃，出口温度为70～90℃，药液喷雾速率为500～1000mL/h。在该专利中有两组实施例样品最终符合药典中澄明度项下规定。但该方法未进行更多批次验证优化，所得样品的抗Xa及抗IIa因子效价(IU/mg)未经检测，产品质量并不能严格保证，在实际应用中产品质量合格率不足40％，且所得样品性状不一致，偶尔存在产品粘度过大，难以收集等问题。
因此，上述依诺肝素钠干燥方法存在产品质量不稳定、澄清度差、指标参数不合格、技术耐用性差等问题，不利于进行工业化大生产。
发明内容
鉴于现有技术的不足，本发明提供一种依诺肝素钠的精制方法，即利用响应面法辅助优化的依诺肝素钠喷雾干燥条件，该方法对影响依诺肝素钠喷雾干燥产品质量的四个主要因素：喷雾干燥样品浓度、喷雾干燥入口温度、喷雾干燥出口温度及喷雾速率进行统计学分析优化，获得了一条合理的喷雾干燥条件。
本发明以依诺肝素钠粗品为原料，具体通过如下技术方案实现：
一种依诺肝素钠的喷雾干燥方法，包括如下步骤：(1)将依诺肝素钠粗品溶于水后，经双氧水氧化脱色、甲醇分级醇沉，制备依诺肝素钠成品；(2)喷雾干燥获得依诺肝素钠精制品。
所述制备方法具体包括如下步骤：
步骤1：依诺肝素钠成品的制备
将依诺肝素钠粗品加入到纯化水中，搅拌溶解形成25～35％浓度(质量百分数)的药液，用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH至9.5～10.5后，加入1.0～2.0％药液体积的浓度为30％的过氧化氢，持续搅拌20小时后，用1mol/L的盐酸水溶液调节pH至7.0～7.5，之后向药液中逐步加入3.0～5.0倍量(质量比)的氯化钠，搅拌至完全溶解后向药液中加入20～60倍量的甲醇(质量体积比)，沉淀，过滤得依诺肝素钠中间品；按此步骤重复操作一次得依诺肝素钠成品。
步骤2：依诺肝素钠成品的干燥条件
将依诺肝素钠成品加入到纯化水中，搅拌溶解形成45％～60％浓度(质量百分数)的药液，药液经0.1μm滤膜过滤，喷雾干燥，喷雾干燥条件按照响应面法优化所得方案进行，控制喷雾干燥药液入口温度150～170℃，出口温度75～85℃，药液喷雾速率为600～900mL/h，喷雾干燥后得到依诺肝素钠精制品，并对样品的全部指标进行检测分析，优选最佳条件。
进一步地，我们优选步骤(1)中所述用氢氧化钠水溶液调节药液的pH值为10.0～10.2。
进一步地，我们优选步骤(1)中所述盐酸水溶液调节药液的pH值为7.0～7.2。
进一步地，我们优选步骤(1)中所述氯化钠的用量为4倍。
进一步地，我们优选步骤(1)中所述醇沉所用甲醇量为35倍。
进一步地，我们优选步骤(2)中喷雾干燥条件为：依诺肝素钠水溶液浓度为45％(质量百分数)，喷雾干燥入口温度170℃，出口温度80℃，喷雾干燥速率为600ml/h。
与现有技术相比，本发明的技术方案具有如下有益效果：
通过脱色、分级醇沉及响应面法辅助优化的喷雾干燥等技术的整体配合，得到的产品重均分子量为3800～5000Da；低于2000Da的百分比为12.0～20.0％；2000～8000Da的百分比为68.0～82.0％，大于8000Da的百分比应不高于18.0％。澄明度不深于0.5号比浊液；抗Xa因子效价为90IU/mg～125IU/mg；抗IIa因子效价为20.0IU/mg～35.0IU/mg；抗Xa因子效价与抗IIa因子效价的比值为3.3～5.3；干燥失重不大于5.0％；其他项下如溶剂残留、重金属含量等均符合中国药典项下要求，且产品合格率达90％以上，较现有喷雾干燥工艺40％左右的产品合格率有较大提高。该生产工艺简单、易于进行产品收集、效率高，同时所得产品合格率稳定可靠，可直接应用于工业化大生产。
附图说明
图1实施例四中澄清度与样品的浓度、入口温度及出口温度关系图。
图2实施例四中抗Xa因子效价与入口温度、出口温度关系图。
图3实施例四中干燥失重与样品浓度、出口温度及喷雾速率关系图。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对发明本身不做任何形式的限定。在以下实施例中选用的试剂均为市售的普通分析纯试剂。
实施例一
依诺肝素钠成品的制备：
在3000mL三口反应瓶中，将依诺肝素钠粗品20g，加入到纯化水中，搅拌溶解形成25％浓度(质量百分数)的药液，用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH至9.5后，加入1.0％药液体积的浓度为30％的过氧化氢，持续搅拌20小时后，用1mol/L的盐酸水溶液调节pH至7.0，之后向药液中逐步加入3倍量(质量比)的氯化钠，搅拌至完全溶解后向药液中加入20倍量的甲醇(质量体积比)，沉淀，过滤得依诺肝素钠中间品；按此步骤重复操作一次得依诺肝素钠成品，质量收率95.6％。
实施例二
依诺肝素钠成品的制备：
在3000mL三口反应瓶中，将依诺肝素钠粗品20g，加入到纯化水中，搅拌溶解形成35％浓度(质量百分数)的药液，用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH至10.5后，加入2.0％药液体积的浓度为30％的过氧化氢，持续搅拌20小时后，用1mol/L的盐酸水溶液调节pH至7.5，之后向药液中逐步加入5倍量(质量比)的氯化钠，搅拌至完全溶解后向药液中加入60倍量的甲醇(质量体积比)，沉淀，过滤得依诺肝素钠中间品；按此步骤重复操作一次得依诺肝素钠成品，质量收率94.3％。
实施例三
依诺肝素钠成品的制备：
在3000mL三口反应瓶中，将依诺肝素钠粗品20g，加入到纯化水中，搅拌溶解形成30％浓度(质量百分数)的药液，用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH至10.0～10.2后，加入1.5％药液体积的浓度为30％的过氧化氢，持续搅拌20小时后，用1mol/L的盐酸水溶液调节pH至7.2，之后向药液中逐步加入4倍量(质量比)的氯化钠，搅拌至完全溶解后向药液中加入35倍量的甲醇(质量体积比)，沉淀，过滤得依诺肝素钠中间品；按此步骤重复操作一次得依诺肝素钠成品，质量收率96.5％。
实施例四
喷雾干燥：
在喷雾干燥条件中，根据现有文献报道，对产品质量产生关键影响的四个因素分别为：样品溶液浓度(Factor 1)、喷雾干燥入口温度(Factor 2)、喷雾干燥出口温度(Factor 3)及喷雾速率(Factor 4)；各指标考察范围分别为样品溶液浓度45～60％；喷雾干燥入口温度150～170℃；喷雾干燥出口温度75～85℃；喷雾速率600～900ml/h。根据该因素分析设定其试验方案如下表所示：
表1响应面试验因素水平
Figure BDA0001187369820000051
根据以上试验设计，进行响应面分析试验方案设计，共进行30批次实验。依诺肝素钠精制品的指标中受干燥条件影响的4个因变量分别为：澄清度(Response 1，合格者编号为1，不合格者编号为0)、抗Xa因子效价(Response 2，IU/mg)、抗IIa因子效价(Response 3，IU/mg)及干燥失重(Response 4，％)。由于实验在3日内完成，3日内因其他不可控因素的变化可能会对实验造成影响，因此需设置3个BLOCK，在三个BLOCK中设置对应的几个中点实验重复，以检验中点实验的重复性是否良好，观察这些不可控因素对实验造成的影响，从而最大限度的降低实验中不可控因素对实验的干扰。所得试验结果如下(表2)所示。
通过对数据进行统计学分析发现：(1)在澄清度指标下，样品的浓度、入口温度及出口温度直接与其相关，结果见附图1。
(2)在抗Xa因子效价指标下，入口温度与出口温度直接与其相关，结果见附图2。
(3)在抗IIa因子效价指标项下，该指标数据未能与以上四个因素呈现出显著性相关，即此项指标的变化可忽略不计。
(4)在干燥失重项下，该指标数据与样品浓度、出口温度及喷雾速率呈负相关，结果见附图3。
通过分析确认相关因素后对实验结果进一步分析，综合考虑以上四个因变量后对实验条件进行优化计算，最终获得条件为：依诺肝素钠水溶液浓度为45％(质量百分数)，喷雾干燥入口温度170℃，出口温度80℃，喷雾干燥速率为600ml/h的条件为最佳。此条件经计算预测其澄明度应合格；抗Xa因子效价为95.02IU/mg(95％置信区间内抗Xa因子效价值范围为93.40～96.64IU/mg)；抗IIa因子效价为25.00IU/mg(95％置信区间内抗IIa因子效价值范围为24.80～25.20IU/mg)；抗Xa因子效价与抗IIa因子效价比值为3.8(比值范围为3.7～3.9)；干燥失重值应为3.32％(95％置信区间内干燥失重值范围为2.69～3.95％)。
Figure BDA0001187369820000071
实施例五
依诺肝素钠精制品的制备：
在6个1000mL三口反应瓶中，分别将6批依诺肝素钠成品20g加入到纯化水中，搅拌溶解形成45％浓度(质量百分数)的药液，药液经0.1μm滤膜过滤，喷雾干燥，喷雾干燥条件按照响应面法优化所得方案进行，控制喷雾干燥药液入口温度170℃，出口温度80℃，药液喷雾速率为600mL/h，喷雾干燥后得到依诺肝素钠精制品，并对样品的全部指标进行检测分析，所得数据情况如下(见表3)。
对比例一
依诺肝素钠成品的制备：
在干燥的2000mL三口反应瓶中加入依诺肝素钠粗品20g，加入纯化水400mL，10～30℃下，搅拌溶解形成5％浓度的药液，以1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH值至8.8，按药液体积加入0.5％倍的过氧化氢，过氧化氢浓度为30％，持续搅拌20小时，向药液中逐步加入40g氯化钠搅拌溶解，加入药液体积2.5倍的甲醇，沉淀，过滤得依诺肝素钠中间体。按此步骤重复操作一次得依诺肝素钠成品，质量收率90.1％。
对比例二
依诺肝素钠成品的制备：
在干燥的2000mL三口反应瓶中加入依诺肝素钠粗品20g，加入纯化水400mL，10～30℃下，搅拌溶解形成5％浓度的药液，以1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH值至7.8，按药液体积加入1.0％倍的过氧化氢，过氧化氢浓度为30％，持续搅拌12小时，向药液中逐步加入40g氯化钠搅拌溶解，加入药液体积2.5倍的甲醇，沉淀，过滤得依诺肝素钠中间体。按此步骤重复操作一次得依诺肝素钠成品，质量收率87.4％。
对比例三
依诺肝素钠精制品的制备：
向干燥的250mL三口反应瓶中加入依诺肝素钠成品15g，加入纯化水50mL，于20～30℃下，搅拌溶解形成30％浓度的药液，药液经0.1μm滤膜过滤，喷雾干燥，其中喷雾干燥药液入口温度为120℃，出口温度为60℃，药液喷雾速率为800mL/h，喷雾干燥后得依诺肝素钠精制品，并对其各项指标进行测定。
对比例四
依诺肝素钠精制品的制备：
称取依诺肝素钠成品20g加入2000mL三口反应瓶中，加入200mL5％的氯化钠溶液中搅拌溶解，得依诺肝素钠药液，将其过滤得滤液。将滤液在2000r/min的离心机中离心30min得上清液和沉淀物。将500mL甲醇加入到上清液中，搅拌1.5h后静置5h，得沉淀物。将沉淀物用纯化水溶解成15％的溶液(质量百分数)，以0.1μm滤膜过滤后，喷雾干燥得依诺肝素钠精制品，并对其各项指标进行测定。
表3实验所得依诺肝素钠精制品检测结果
Figure BDA0001187369820000091
Figure BDA0001187369820000101
由表3可知，本发明的依诺肝素钠的各项检测指标均优于对比例，且所得结果稳定可靠，合格率高。

Claims (2)

1.一种依诺肝素钠的精制方法，其特征在于，步骤(1)是将依诺肝素钠粗品加入到纯化水中，搅拌溶解形成25～35％浓度质量百分数的药液，用1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH至9 .5～10 .5后，加入1 .0～2 .0％药液体积的浓度为30％的过氧化氢，搅拌20小时后，用1mol/L的盐酸水溶液调节pH至7.0～7.5，之后向药液中逐步加入3～5倍量质量比的氯化钠，搅拌至完全溶解后向药液中加入20～60倍量的甲醇质量体积比，沉淀，过滤得依诺肝素钠中间品；按此步骤重复操作一次得依诺肝素钠成品；步骤(2)喷雾干燥条件为：配制依诺肝素钠水溶液浓度为45％质量百分数；经0 .1μm滤膜过滤后喷雾干燥，喷雾干燥入口温度170℃；喷雾干燥出口温度80℃；喷雾速率600ml/h。
2.根据权利要求1所述的精制方法，其特征在于，步骤(1)中1mol/L的氢氧化钠水溶液调节药液的pH值为10.0～10.2；1mol/L的盐酸水溶液调节药液的pH值为7.0～7.2；氯化钠的用量为4倍量质量比；醇沉所用甲醇倍量为35倍量的甲醇质量体积比。
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