CN108136018A - 缀合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于光动力疗法(PDT)的改善的组合物，其用于选择性破坏恶性细胞、患病细胞或感染细胞或传染物，而不损伤正常细胞。在一个实施方式中，组合物包含与配体连接的光敏化剂，其中所述配体选择性结合至靶向受体并且包含具有小于10个或小于8个氨基酸的分离的肽分子。

Description

缀合物
技术领域
本发明涉及用于光动力疗法(PDT)的改善的组合物，其用于选择性破坏恶性细胞、患病细胞或感染细胞或传染物、以及在对正常细胞的附带损伤最小或者没有损伤的情况下改变细胞的色素。
背景技术
对于需要去除患病细胞和患病组织的一系列病况，PDT是侵袭性最小的疗法。不同于电离辐射，PDT可在相同部位被重复施用。PDT在癌症治疗中的用途是引人注目的，原因是常规形式(比如化学疗法、放射疗法或外科手术)的应用不妨碍PDT的使用，反之亦然。正在寻找其中必须破坏特定细胞群的PDT的其它应用，比如血管(在老年性黄斑变性或癌症中)、免疫疾病、心血管疾病和微生物感染的治疗。
PDT是两步方法或二元方法，其开始于通过静脉内注射或对于皮肤病而言局部应用而施用光敏剂或药物。药物的物理化学性质使得其优选被癌细胞或其它靶细胞摄入。一旦获得肿瘤(或其它靶标)组织与正常组织之间的有利的药物摄取比，则第二步是用特定波长的特定剂量的光激活药剂或药物。光敏剂在其基态或单重态吸收特定波长的光的光子。这导致短暂的激发单重态。这可通过系间窜跃而转变成较长寿命的三重态。正是光敏剂的这种形式实现了各种细胞毒性作用。
反应的主要类型是自由基引起的光氧化(I型反应)、单线态氧引起的光氧化(II型反应)和不涉及氧的光反应(III型反应)。三重态形式的光敏剂导致细胞环境中出现的分子氧经II型反应转变成主要是单线态氧(O2)的活性氧种类(ROS)。如果激活的光敏剂与细胞组分相互作用，则发生I型反应，其中电子或质子被提取，形成自由基比如羟基自由基。
这些分子种类造成细胞组分，比如DNA、蛋白质和脂类的损伤。也已经提出了III型机制，其中三重态光敏剂与游离自由基相互作用，造成细胞损伤。细胞损伤的部位取决于光敏剂的类型、潜伏(incubation)的持续时间、细胞的类型和递送模式。疏水性光敏剂倾向于损伤细胞膜，而阳离子光敏剂集中在膜囊泡(比如线粒体)中，并且在那里造成损伤。
ROS的光激活是高度细胞毒性的。事实上，免疫系统中的一些自然过程利用ROS作为一种破坏有害细胞的途径。这些种类具有短的寿命(<0.04ms)并且在距离它们的起源点的短半径(<0.04mm)内发挥作用。细胞的破坏导致组织的坏死样区域，其最终蜕掉或被再吸收。剩余组织自然愈合，通常不结疤。没有组织发热，并且结缔组织比如胶原蛋白和弹性蛋白不受影响。与热激光技术、外科手术或体外放射治疗相比，这对于底层结构产生的风险较小。更详细的研究已经证明，PDT诱导细胞凋亡(非炎症细胞死亡)，并且看到的所产生的坏死(炎症细胞裂解)是由于没有被免疫系统清理的垂死细胞的团块造成的。
PDT有若干优势。它提供了可通过光激活靶向的无创、低毒性疗法。靶细胞不会对细胞毒素种类(ROS)产生抗性。在治疗之后，很少出现组织瘢痕。但是，目前可用的光敏化药物不仅仅对于靶细胞是很有选择性的，这在许多情况下引起对周围组织的附带损伤，这种选择性的缺乏导致对正常组织的不可接受的损伤，包括炎症、疼痛、延迟愈合和具有差的化妆和功能结果的瘢痕，例如食管癌或膀胱癌中的PhotofrinTM。因为全身性应用的光敏剂药物通常“背负(piggy-back)”在血液蛋白质上，具有降低的肾清除率，因此它们在系统中持续的时间比期望的时间更长，使得患者在最佳情况下光敏2周。
目前，将光敏剂药物与靶元素连接的方法是将衍生的光敏剂直接缀合至单克隆抗体。完整抗体具有在150KDa范围内的高分子量，产生非常大的光免疫缀合物，其具有不利的药物动力学，比如差的肿瘤组织与健康组织比(2:1)，这降低了肿瘤组织中的治疗剂浓度并且使得疗法的效力较小。当前的文献提示，与单克隆抗体上的残基连接的光敏剂药物对于彼此可具有不利影响，其中由于差的光谱特性而发生猝灭效应。除此之外，已经证明，在抗体聚集或丧失功能之前，光敏剂在抗体上差的、不可靠的负载通常具有4:1的比例。
另外，抗体难以合成，并且因为它们大的结构，它们太大而不能通过患者的皮肤屏障进入。因此，具有抗体的光敏剂药物对于局部应用不是非常有用。
另外有人通过试图将光敏剂药物与指定的‘载体’，比如支链碳水化合物或聚乙二醇链和聚赖氨酸链连接来尽力避免这些问题。这些方法都需要另外的缀合步骤，因为配体-载体不能完全经重组制备。使用这类聚合物也可能会有一些问题，比如体内蛋白水解的不稳定性。已知，当光敏剂以这种方式连接时，它们自猝灭，破坏了它们的光物理特性，并且在它们可变成有活性的光敏剂之前，它们依赖于在溶菌酶中的降解而‘去猝灭(de-quench)’。因此，可以以相比通过游离(未连接的)光敏剂获得的光毒性和单线态氧产率更低的光毒性和更低的单线态氧产率，实现高达10:1的较高的连接比。研究显示，脱镁叶绿酸在围绕树状聚合物的周围大量共价连接时，其光敏化活性显著降低。这是能量转移过程(主要是从染料至染料的福斯特能量转移(Forster energy transfer))的结果。福斯特转移是距离依赖性的，其随着距离而快速下降。染料分子的相互作用导致吸收光谱的改变、荧光寿命和单线态氧量子产率降低。也已经报道了结合抗体片段与蛋白质载体分子的融合蛋白质。所有上述方法均在非黑色素瘤癌症组织中得到证明，而对于黑色素瘤癌症治疗，仅进行了非常有限的尝试。我们发现的一种可能性是将光敏剂与α-黑素细胞-刺激激素(α-MSH)的八肽衍生物，Napamide结合，该八肽衍生物包含针对放射性金属的螯合剂(DOTA)，因此在实验动物的黑色素瘤细胞和黑色素肿瘤中运输和积累放射性。DOTA-MSH缀合物特异性结合在恶性黑色素瘤细胞中(并且也在黑素细胞中)过表达的MC1R。实验动物的肿瘤组织与健康组织中放射性金属(例如111铟、67/68镓或90钇)浓度的比例是非常有利的，从而判断该靶向概念的原理对于新方法(novel)的是理想的，以通过光动力疗法(不使用放射性配体)来控制黑素原生成和靶黑色素瘤皮肤(melanomanotic skin)病变。
综上所述，目前的光动力治疗策略是有效的，其用于临床环境中，但是它们的靶向性不足，伴随有严重的炎症、坏死、疼痛和延迟愈合。因此，迫切需要对于光动力疗法具有改善的选择性的新型的药物或活性化合物，从而以靶向方式治疗各种癌疾病和/或感染，在本案的情况下，尤其是治疗黑色素性病变，比如与恶性雀斑样黑色素瘤(Lentigo MalignaMelanomas)、黑色素癌前病变(melanotic praecanserosis)、雀斑样痣，并且也用于治疗炎症后色素沉淀过度或用于皮肤美白。
本说明书中关于显然是之前公开的文献的列举或讨论不应该必然地被视为承认所述文献是现有技术的一部分或是公知常识。
本文提到的任何文献通过参考以其整体并入本文。
发明内容
在本发明的一个方面中，提供了包含与配体共价连接的光敏化剂的组合物，其中所述配体选择性结合至靶向受体。更具体地，所述配体选择性结合至存在于表皮层、真皮层或皮下组织层的细胞中的靶向受体。所述配体可以是选择性结合至靶细胞、靶组织或靶微生物的任何分离的肽分子(例如，20个、15个、10个或更少的氨基酸)、蛋白质(多肽)、脂质、碳水化合物、生物碱或其组合。在一个实施方式中，对于局部应用组合物(其将在下面更详细地描述)，优选具有作为较小分子(例如生物碱)和肽的配体并且也具有较小的光敏剂，以改善且允许经皮吸收以及表皮中较少的酶代谢。优选地，光敏化剂(photosensitisingagent)或光敏剂(photosensitiser)在各种波长的光下产生ROS。在一个实施方式中，光敏化剂与配体的比例是1:1。缀合可以是共价缀合。
“表皮层(epidermal layer)”意思是生物体(例如，人)的表皮，其是复层鳞状上皮，由增生的基底和分化的基底上(suprabasal)的角质细胞组成，表皮充当身体抵抗不友好环境的主要屏障，通过防止病原体进入使得皮肤成为感染的天然屏障。“真皮层(dermallayer)”是表皮(其组成皮肤)和皮下组织之间的皮肤层，其由结缔组织组成并且为身体缓冲压力和张力。
术语“肽”或“氨基酸序列”指寡肽、肽、多肽、或其蛋白质序列或片段，并且指天然存在的分子或合成分子。多肽“片段”、“部分”或“区段”是至少约5个氨基酸，优选至少约7个氨基酸，更优选至少约8个氨基酸和最优选小于10个氨基酸的一段氨基酸残基。为了有活性，任何多肽必须具有足够的长度，以展示生物学和/或免疫学活性，但是也要足够小，以克服需要化合物用来治疗的患者的皮肤屏障。但是，不限于肽，配体也可以是特异性结合靶细胞或靶微生物(例如细菌、真菌、病毒、寄生虫)的结构或受体的碳水化合物、脂质或生物碱。
“配体(ligand)”意图包括可以以高特异性靶向患病细胞的受体并且具有用于共价缀合至光敏化剂的官能度的任何分子。配体可以是任何肽、抗体、脂质、生物碱或碳水化合物或其组合。这类配体可以是与疾病相关联的任何标记物。优选地，配体是靶向受体的拮抗物。在本发明的典型案例中，靶向的黑皮质素1受体在黑色素细胞中表达。配体可以是单价的或多价的。
在一个实施方式中，配体是Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-NH2。
优选地，组合物进一步包含用于将光敏化剂和配体缀合的接头分子。接头分子可以是选自包括以下物质的组中的任何一种：聚乙二醇单元、氨基酸衍生物和溴代酸衍生物。在一个实施方式中，接头分子是4-溴甲基苯甲酸。
“光敏化剂”意图包括可用于PDT的任何试剂或化合物。这类试剂在暴露于特定波长的光时，产生杀死附近细胞的氧形式。光敏化剂可以是卟啉、原卟啉IX(protoporfinIX)、维替泊芬(verteporfin)、HPPH、替莫卟吩(temoporfin)、亚甲基蓝。优选地，本发明的光敏化剂被波长在400nm至700nm之间的光激活。仍更优选地，本发明的光敏化剂被在627nm和660nm处的光激活，以选择性杀死黑色素细胞(melanoticcell)，而最小化对角质细胞的杀伤。
在一个实施方式中，光敏化剂是亚甲基蓝。可选地，可以使用维替泊芬、原卟啉IX、HPPH、替莫卟吩、光卟啉、血卟啉、他拉泊芬(Talaporfin)、苯并卟啉衍生物一元酸、5-氨基乙酰丙酸(5-aminileuvolinicacid)、金属酞菁、四磺基酞菁锌、菌绿素、氯衍生物或卟啉衍生物。
优选地，相比处于非连接形式的光敏化剂和配体的功能和光物理特性，处于连接形式的光敏化剂和配体的功能和光物理特性基本上不改变。
在本发明的另一方面中，提供了复合物在诊断和/或治疗和/或预防需要破坏靶细胞的疾病中的用途。
疾病本质上可以是任何良性疾病、恶性疾病、感染性疾病(由任何传染原，例如任何细菌、病毒或微生物或寄生虫造成的)或炎性疾病。优选地，所述疾病本质上涉及光和/或内窥镜可接近的任何组织层(例如，皮肤、粘膜、腔等)。优选地，待治疗的疾病是癌症、感染，但是也可包括化妆应用。对于局部应用，优选皮肤癌。这类癌症可包括增生。可选地，本发明的组合物可用于治疗其它皮肤病况，比如瘢痕疙瘩。
仍可选地，组合物可用于化妆品中，例如，用于美白皮肤。
优选地，疾病的诊断通过使光敏化剂可视化而进行。
复合物必须在曝光之前施用至患者。
在本发明的另一实施方式中，提供了包含复合物和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药学组合物。
优选地，制剂是单位剂量，其包含每日剂量或单位、每日子剂量或其适当分数的活性成分。
本发明的复合物通常可以药学上可接受的剂型口服施用或通过任何肠胃外途径施用，其形式为包含活性成分的药物制剂的形式、任选地为无毒的有机或无机酸或碱、加成盐的形式。根据待治疗的患者的疾病和年龄以及施用的途径，可以不同的剂量和制剂施用组合物。
在人类治疗中，本发明的复合物可单独施用，但是通常与针对预期的施用途径和标准药学实践而选择的合适的药学赋形剂、稀释剂或制剂或载体混合在一起施用。
本发明的复合物可口服施用(经片剂和胶囊)或肠胃外施用，例如，经静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内(intrastemally)、颅内、肌内或皮下施用，或它们可通过输注技术施用。对于这些类型的应用，它们应以可包含其它必要添加剂的无菌溶液的形式使用。如果必要，水溶液应被适当缓冲(优选地缓冲至pH3至pH9)。在无菌条件下适当的肠胃外制剂的制备容易通过本领域技术人员熟知的标准药学技术完成。
适于肠胃外施用的制剂包括水性和非水性无菌注射溶液，其可包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使得制剂与预期接受者的血液等渗的溶质；以及水性和非水性无菌混悬剂，其可包含悬浮剂和增稠剂。制剂可以存在于单位剂量或多剂量容器(例如密封安瓿和小瓶)中，并且可被储存在冷冻干燥的(冻干)条件下，只需要在使用前即刻加入无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液和混悬剂可由先前描述类型的无菌粉末、颗粒剂和片剂制备。
对于口服和肠胃外施用至人患者，必须通过进一步的临床研究来评估复合物的每日剂量水平。因此，例如，本发明的复合物的片剂或胶囊可包含视情况每次施用一个剂量或两个剂量或更多个剂量的活性复合物的剂量。在任何情况下，医生将确定最适于任何个体患者的实际剂量，并且所述实际剂量将随着特定患者的年龄、体重和应答而改变。上述剂量是普通病例的示例。当然，也可以存在其中使用更高或更低剂量范围的个例，并且这些都在本发明的范围内。
可选地，本发明的复合物可以以栓剂或阴道栓剂的形式施用，或它们可以以洗剂、溶液、乳霜、软膏或扑粉的形式被局部施用。本发明的复合物也可经皮施用，例如，通过使用皮肤贴。它们也可通过眼途径施用，尤其用于治疗眼部疾病。为了局部施用至皮肤，本发明的复合物可配制为包含活性复合物的适当的软膏，所述活性复合物悬浮在或溶解在例如下述一种或多种物质的混合物中：矿物油、液体石蜡、白矿脂、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。可选地，本发明的复合物可配制为适当的洗剂或乳霜，所述复合物悬浮在或溶解在例如下述一种或多种物质的混合物中：矿物油、失水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚乙二醇、石蜡油、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蜡、鲸蜡硬脂醇(cetearyl alcohol)、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
一般而言，对于皮肤病变，局部施用本发明的复合物是优选的途径，是最方便的。在接受者口服施用之后遭受吞咽障碍或药物吸收受损的情况下，药物可被肠胃外施用，例如舌下给药或含服(buccally)。
在本发明的另一方面中，提供了制备包含与配体连接的光敏化剂的复合物的方法，所述方法包括：(a)提供光敏化剂；(b)提供配体，该配体选择性结合至表皮层、真皮层或皮下组织层的细胞中存在的靶向受体；和(c)将光敏化剂和配体缀合。
优选地，接头分子用于将光敏化剂和配体缀合。更优选地，接头分子是聚乙二醇单元、氨基酸衍生物、溴代酸衍生物。在一个实施方式中，接头分子可以是4-溴甲基苯甲酸或由4-溴甲基苯甲酸制备。
有利地，通过将第一代光敏剂与用于靶向递送至黑色素细胞的特定的MC1受体肽拮抗物共价缀合，以及相继精确的LED光剂量，以在相比周围细胞在膜中具有更多MC1受体的黑色素细胞上诱导特异性光毒性，我们已经开发了巧妙的组合策略。当施用至患者时，提供光源，其穿透足够深度并且特异性损伤靶向的细胞，而对于周围组织的附带损伤最小。通过在近红外波长(627nm、660nm)处的极特定的、良好限定以及定位的LED光照射，将提高特异性。另外，近红外波长允许进入到皮下组织的深度皮肤穿透。这种使用锁钥范式(lockand key paradigm)的精确的串联疗法(tandem therapy)潜在地导致附带损伤的明显下降，其中优先在黑色素细胞中而不是在角质细胞和成纤维细胞中积累光敏剂。
附图说明
为了可以充分理解并且容易实施本发明，现将参考示意性附图通过非限制性实施例来描述仅仅本发明的优选实施方式。
在附图中：
方案1.阐释了由MC1受体特异性拮抗物肽和近红外光的照射促进的光敏剂的靶向递送。
图1.a)以三个重复显示在添加1μM浓度的MB和NAP-MB后由于黑色素产生造成的视觉颜色变化。黑色素产生测定：b)细胞内，c)细胞外，通过用MB(1μM)和NAP-MB(1μM)温育鼠黑色素瘤B16F10细胞系(45,000细胞/孔)，在475nm测量吸光度。
方案2.由4-溴甲基苯甲酸合成NAP-MB。
图2.a)在605nm(橙色)、627nm(红色)、660nm(棕色)和无光(黑色)照射下，NAP-MB(10uM)在B16F10细胞中的细胞毒性作用。用NAP-MB温育的B16F10在无光(b)和在660nm(c)24小时之后的细胞生长图像。
图3.在(a)无光、(b)660nm24小时之后，用NAP-MB温育的NTETR-1的细胞增殖图像。
图4.通过SRB比色测定测量的NAP-MB(1μM)对B16-F10、MeL和N/TETR-1的光毒性(％)(显著性：*p≤0.05)。数据表示三个独立实验的三次重复的平均值±SEM。
图5.在无光和660nm光条件下24小时之后，小鼠黑色素瘤细胞B16-F10、原代人黑色素细胞MeL和人角质细胞N/TETR-1的Incucyte细胞生长图像。图像是独立进行三次的单个实验的代表性图像。
图6.原代人黑色素细胞a)在单独的660nm光下、b)用NAP-MB(1μM)和660nm光处理24小时的生长增殖曲线。
具体实施方式
实施例
材料和方法：化学溶剂和无水溶剂获得自Sigma Aldrich，其被使用而无需进一步纯化。光谱级溶剂购买自Sigma Aldrich。肽序列购买自Nova-Biochem。使用烘干注射器转移无水溶剂。快速柱(flash column)用于纯化所有的合成中间体。通过使用JupiterC12Proteos RP-HPLC柱的制备型反相HPLC，采用溶液A(0.1％TFA水溶液)和溶液B(0.1％TFA乙腈溶液)的二元梯度，进行肽的纯化。通过使用Jupiter C4Proteos RP-HPLC柱的分析型反相HPLC，采用溶液A(0.1％TFA水溶液)和溶液B(0.1％TFA乙腈溶液)的二元梯度，确定肽的纯度。使用Labonco冻干机在-60℃和0.01mbar真空下冷冻干燥HPLC纯化馏分。在Bruker 400MHz NMR光谱仪上记录所有化合物的1H NMR谱。通过水LC-micro光谱仪(Water LC-micro spectrometer)，使用H2O/乙腈(1:1，v:v)分析质谱。在Varian技术国际UV光谱仪(Varian technology international UV spectrometer)上，使用96孔板，进行吸收光谱测量。
以每孔70,000细胞和/或45,000细胞的密度在Nunc六孔组织培养板上的Dulbecco改良的伊格尔培养基(Eagle Medium)、无酚红DMEM培养基中进行细胞接种。α-MSH购买自Sigma Aldrich和Abcam，其结合在黑色素瘤细胞上表达的MC1R，并且通过c-AMP信号传导途径促进黑色素的产生和释放。(3-异丁基-1-甲基黄嘌呤)IBMX购买自Sigma Aldrich，用作内标，其增加细胞中导致增加的黑色素产量的c-AMP水平。使用Bruker板读取器在475nm的光密度处进行黑色素吸光度试验。
1、NAP-MB的合成(方案2)：
接头1的合成：在室温，向4-溴甲基苯甲酸(100mg，0.465mmol)在4mL干燥DCM中的搅拌溶液中添加乙二酰氯(413uL，4.65mmol)和2滴(Cat.)DMF。搅拌反应混合物过夜，并且在室温使用旋转蒸发器和真空蒸发溶剂。在高真空下干燥黄色固体3小时，并且将其溶于4mL干燥DCM中。将DIPEA(243uL，1.395mmol)添加至上述溶液，随后添加甘氨酸叔丁酯(85.7mg，0.515mmol)。在室温，搅拌反应混合物6小时。蒸发溶剂，通过硅胶柱色谱法，使用甲醇：DCM(1:99，v:v)纯化粗反应混合物，以产生接头衍生物1(91mg)，产率为60％。
1H NMR(400MHz，氘代氯仿(Chloroform-d))δ7.88–7.77(m，2H)，7.54–7.43(m，2H)，4.63(s，2H)，4.16(d，J＝4.9Hz，2H)，1.53(s，9H)。
MS(ESI+)：m/z(％)＝414.29(100)[M-CO2]+，415.28(25)[M+H-CO2]+
MB-接头1的合成：在氩气下，在47℃，向天青B(Azure B)(150mg，0.418mmol)在无水DMF(4mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(110mg，0.836mmol)和接头1(137mg，0.418mmol)。向上述混合物中添加KI(60mg，0.418mmol)。加热1.5小时之后，添加接头1(137mg，0.418mmol)。加热3小时之后，添加另外量的接头1(137mg，0.418mmol)。5小时之后，在43℃，使用高真空蒸发DMF溶剂，并且使粗反应物进行硅胶柱色谱法，使用MeOH:DCM(7:93，v:v)，以产生MB-接头1(50mg)，产率为30％。
1H NMR(400MHz，氘代氯仿)δ7.72(d，J＝8.4Hz，4H)，7.28–6.99(m，6H)，4.77(s，2H)，3.97(d，J＝5.1Hz，2H)，3.70–3.50(m，3H)，3.26(s，9H)，1.34(s，9H)。
MS(ESI+)：m/z(％)＝414.29(100)[M-CO2]+，415.28(25)[M+H-CO2]+
MB-接头1-酸的合成：在室温，向MB-接头1(24mg，0.0529mmol)在0.8ml的DCM中的搅拌溶液中逐滴添加三氟乙酸溶液(0.2mL)。搅拌反应混合物3小时，并且通过分析型HPLC监测叔丁基酯的消耗。使用旋转蒸发器和真空蒸发溶剂。进一步收集粗反应物而不纯化。
NAP-MB的合成：在室温，向MB-接头1-酸(29mg，0.0529mmol)在1mlDMF中的搅拌溶液中添加DIPEA(27.6μL，0.1587mmol)，随后添加新戊酰氯(7μL，0.0582mmol)。1.5小时之后，将肽2(58mg，0.0529mmol)逐滴添加在1ml的DMF中。搅拌反应混合物3小时。在高真空下，在40℃，干燥溶剂。通过制备型HPLC，在640nm、210nm、254nm处使用检测器并且按照0.1％的TFA水溶液作为溶剂A和0.1％的TFA乙腈溶液作为溶剂B的梯度，纯化粗反应物。
冷冻干燥样品(8mg)的纯度是80％，并且在640nm、210nm、254nm处使用检测器和按照以下梯度进一步纯化。
通过分析型HPLC，使用相同的溶剂梯度，确定馏分的纯度。混合类似纯度的馏分并且冻干。NAP-MB的重量＝3mg；纯度＝100％。
2、黑色素测定程序：
将鼠黑色素瘤B16F10细胞接种在Nunc六孔组织培养板上(每孔45,000和70,000细胞每孔)的没有添加酚红的DMEM培养基中。通过阳性对照α-MSH(10nM)或可选地通过使用内标IBMX(50μM)温育细胞18小时来刺激细胞。在室温添加光敏剂(1μM)或肽缀合的光敏剂(1μM)，并且在37℃温育72小时。从沉积在孔板底部的细胞团块中吸出细胞外上清液(A)。采用200uL的上清液，在475nm处同时进行三次测量(图1b)。用0.02％的EDTA溶液分离细胞，并且以2000rpm离心3分钟。将细胞团块溶于1M NaOH(200μL)中，在75℃加热5min，以裂解细胞并且冷却至室温。在475nm处同时进行三次测量(图1c)。使用用作活性药物组分的1μM的NAPamide、MB、NAP-MB测试黑色素产生，从而通过测量黑色素产生表明结合MC1受体。
3、细胞增殖测定：
利用光敏剂的增殖实验：
将鼠黑色素瘤B16F10细胞以每孔3000-4000细胞接种在96孔黑色视觉板(blackview plate)Perkin Elmer板中的无酚红DMEM培养基中，因为酚红可能干扰光的吸收。过夜温育之后，将培养基从孔中吸出并且将不同浓度的光敏剂添加至细胞中。在暗处，在37℃，将细胞温育4小时，4小时之后，将细胞用1×PBS洗涤两次，将300μL的培养基添加至孔中，然后将板放置在Incucyte ZOOM Live细胞成像仪中，捕获每小时之后的图像。在一段时间内测量汇合百分比。对于角质细胞细胞系NTETR-1采用类似的方法，不同之处是起始汇合度为75-85％。这是为了模拟其中角质细胞存在的量比黑素细胞大得多的身体中的生理学情况。
通过光敏剂和光照射的增殖实验：
以每孔4000和/或4500细胞在无酚红DMEM培养基中接种B16F10细胞，过夜。用期望浓度的毒素在暗处温育细胞4小时，用1×PBS洗涤细胞两次，更换培养基。接着，使用LED系统针对具体的实验在605nm、627nm和660nm照射细胞。对于不同的持续时间，功率强度以0.10mW/cm2保持恒定。每小时之后将细胞成像，用于生长增殖曲线。对于NTETR-1细胞采用类似的方法，不同之处是起始汇合度为75-85％。
MB和NAP-MB的细胞毒性研究：
以每孔3000细胞在96孔组织培养板中接种B16F10细胞。用10μM、1μM、500nM、250nM、100nM浓度的MB处理细胞4小时，并且使其在37℃增殖。对于光实验，以每孔4500细胞的密度在96孔板中接种B16F10细胞，用NAP-MB(10μM)处理4小时，并且连续24小时暴露于0.10mW/cm2的红光。以每小时的间隔通过incucyte使细胞成像(图2)。
下面提供了进一步的数据，以通过提供小鼠黑色素瘤细胞B16-F10、原代人黑素细胞MeL和人皮肤角质细胞N/TETR-1的可量化的细胞毒性数据来证明在对正常细胞的附带损伤最小的情况下，对黑色素瘤的特异性靶向和破坏。
利用合成的肽-光敏剂构建体NAP-MB和光照射的增殖实验：分别以4000细胞/孔、6000细胞/孔和3500细胞/孔的细胞密度接种小鼠黑色素瘤细胞B16-F10、人皮肤角质细胞N-TETR-1和原代人黑素细胞MeL，以在96-黑色Perkin-Elmer孔板中的无酚红DMEM培养基(用于B16F10和MeL)和KSFM培养基(用于N/TETR-1细胞)中实现类似的起始汇合度，并且在37℃保持过夜。用1μM浓度的NAP-MB在暗处温育细胞4小时，然后使用Incucyte-LED系统，以660nm波长的光照射细胞。光强度以0.10mW/cm2保持恒定，达24小时。在一段时间内测量汇合百分比。24小时之后获得的图像用于光和NAP-MB对细胞形态的组合作用的比较分析。
磺基罗丹明(SRB)光毒性测定：以上面提到的密度接种小鼠黑色素瘤B16-F10细胞、人角质细胞N/TETR-1和原代人黑素细胞MeL，以在过夜温育之后，实现类似的汇合度，从而进行SRB细胞毒性测定。用1μM的NAP-MB温育细胞4小时，并且留在培养基中，用0.10mW/cm2的660nm的光照射24小时。实验结束之后，将冷的10％三氯乙酸(100μL)添加至孔中。在4℃温育1小时之后，将细胞用水洗涤5次并且风干。此外，将在1％乙酸中的SRB(0.4％，100μL)添加至每个孔中。在室温温育30min之后，将细胞用1％乙酸洗涤3次并且风干。添加10mM的Tris碱(200μL)，同时轻轻搅拌，以使染料溶解。在510nm波长测量光密度。使用下述方程计算光毒性的百分数：
其中，
OD处理＝针对用肽-光敏剂NAP-MB和660nm处的光处理的细胞测量的光密度。
OD空白＝针对培养基DMEM或KSFM测量的光密度。
OD对照＝针对用肽-光敏剂NAP-MB处理的细胞测量的光密度。
结果：
利用NAP-MB的光毒性测定(SRB测定)
可用于治疗性应用的大部分有效的光敏剂已知在实际生理学条件下理想地具有至少24小时的肾清除率。为了增加系统性存在，在光照射下温育NAP-MB，达24小时，以及进行磺基罗丹明B(SRB)细胞毒素比色测定，以使用黑色素瘤细胞(B16-F10)、人角质细胞(N/TETR-1)和原代人黑素细胞(MeL)量化1μM的NAP-MB对于细胞的光毒性的量。
与N/TETR-1细胞相比，由于MC1R的大量存在，小鼠黑色素瘤细胞B16-F10明显受缀合NAP-MB光敏剂的影响(图4a)。这确定了NAP-MB靶向黑色素瘤细胞上的MC1R的特异性，作为NAP-MB对于黑色素瘤细胞的特异性靶向和毒性性质的可量化的证据。也测试了原代人黑素细胞，并且，尽管观察到了一些毒性，但是没有达到B16-F10细胞的水平，原因是黑素细胞上的MC1受体是黑色素瘤细胞上的不到10倍(图4b)。如在图中可见，黑素细胞连续24小时不受单独光刺激的影响(图6a)。当连续24小时用NAP-MB温育并且用660nm光照射后，相比仅仅经NAP-MB处理而不暴露于光的细胞，在用NAP-MB和光处理的细胞中观察到减少的增殖(图6b)。
在24小时光与NAP-MB温育之后，B16-F10黑色素瘤细胞和黑素细胞出现可感知的细胞形态差异。相比不暴露于光的对照，细胞清楚地显示不健康的形态。N/TETR-1角质细胞增殖，并且即使用光敏剂和光处理仍保持正常的细胞形态(图5)。
因此，定量的和定性测定都表明，相对于人角质细胞通过特异性杀伤黑色素瘤细胞和黑素细胞，显著减少了附带损伤，从而实现我们特异性靶向MC1R阳性细胞的目的。
讨论：
PDT的效力取决于3个成分：
1)发射特定波长的光源和剂量。光对组织的穿透普遍依赖于波长。在皮肤中，相比红光谱和红外光谱，UV和蓝光穿透性小得多(见方案1)；
2)利用给定的光质释放导致细胞坏死的活性氧种类(ROS)的光敏剂；和
3)被ROS损伤的靶组织和靶细胞。PDT对于靶组织的效力取决于组织对光敏剂的吸收和光敏剂向细胞中的并入。
提议的PDT具有靶向特定的组织、细胞和感染的生物体的高潜力，并且，精度和效力取决于光源和光敏剂。因此，PDT被用在皮肤病学和许多其它医学专业(比如泌尿学、肠胃病学)中以治疗浅表上皮癌和色素癌(pigmentary cancer)、感染或甚至用于化妆应用(例如皮肤美白、酒渣鼻中的coup rose、痤疮)，并且具有高的未来潜力。PDT已经被批准用于治疗非黑色素瘤皮肤癌，比如浅表性基底细胞癌、鲍温病(Bowen’s disease)，并且也已经证明，与卟啉前体δ-氨基乙酰丙酸一起治疗常见的顽固性HPV感染、利什曼病、痤疮、酒渣鼻等的效力。但是，直到现在PDT中使用的所有光敏剂都非特异性积聚在高增殖组织(例如上皮癌细胞)中，具有相当的附带损伤和巨大的疼痛问题。我们的方法使用附接至光敏剂(比如亚甲基蓝、HPPH、维替泊芬)的MC1受体拮抗物(NAPAmide)特异性靶向在黑色素细胞上以较高量表达的MC-1受体(作为例子)，并且由适当的LED设备作为光源产生的用于靶向疗法的精确的光波长可使光动力疗法更进一步。
我们尝试解决有关光敏剂的所有顾虑，比如在实验培养基中的低溶解度、大尺寸、高分子量、疏水性，以及更重要地，高活性氧种类(ROS)量子产率的要求。
在文献筛选小尺寸和分子量之后，我们鉴定了带正电的亚甲基蓝，一种具有改善的溶解度并且具有中等至良好的ROS量子产率的光敏剂，其用于进一步细胞毒性和细胞增殖的研究。使用方案2中显示的接头，将亚甲基蓝(MB)共价连接至MC1受体特异性肽拮抗物Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-NH2(NAP-NH2)。
细胞外以及细胞内黑色素的大量产生指示这些肽和肽缀合的光敏剂对于鼠黑色素瘤B16F10细胞系和人中度着色FM 55细胞系中存在的MC1受体的靶向和结合性质。然而，单独用光敏剂观察到了可忽略的或较少的黑色素产生(图1b、图1c)。肉眼观察到了由于大量黑色素产生而导致的颜色变化(图1a)。
在暗处温育鼠黑色素瘤细胞系B16F10与10uM的MB和NAP-MB，没有观察到细胞毒性。当以0.10mW/cm2的能量强度连续照射B16F10细胞24小时之后，在605nm，627nm和660nm波长的光下可见增殖缺陷，在660nm处的损伤最大(图2)。在关闭光源之后，仍保持细胞增殖。
现在，我们感兴趣地观察到这些波长的光对于表达更少的MC1受体的角质细胞NTETR-1细胞的作用，以解释最小的附带损伤。即使在660nm曝光24小时之后，对于NTETR-1角质细胞类型仍观察到较少的细胞毒性(图3)，使得我们认为MB对于用于在最小的附带损伤的情况下精确治疗黑色素瘤黑素原生成的靶向光动力疗法是更好的光敏剂。我们需要用其它的皮肤细胞类型来重复我们的实验，以确定附带损伤和毒性的程度，而且，迄今为止，NAP-MB是我们有希望的领先候选物。
在本发明中，特异性靶位点位于皮肤细胞(单类型细胞)，即黑色素细胞中，用于控制黑素原生成，使得对于角质细胞的损伤最小化或没有损伤。在一种类型的细胞中优先实现特异性可能是一项有挑战性的任务。复杂性随着皮肤的上层或皮肤的下层中异常黑色素细胞的存在而增加。这可通过用另外的光敏剂，比如维替泊芬、替莫卟吩、光卟啉、原卟啉IX、HPPH或将来的新型光敏剂替换亚甲基蓝以及用于单独激活每种化合物的必要波长来解决。变换不同波长的各种光敏剂而不改变肽可解决从浅表至较深处(经皮)黑色素瘤的黑色素瘤恶性肿瘤，或可用在用于皮肤美白的化妆品中。通过操控使用的光的强度、照射时间和产生的活性氧种类的量，本发明可治疗不同年龄组和不同皮肤类型的从小到大的黑色素瘤肿瘤。本发明的复合物可用于解决不同的娇嫩身体部位(例如，面部)的黑素原生成的治疗策略(包括改变辐射的不同强度)。
不同于全身性肿瘤，肿瘤的部位存在于不同的皮肤层(从表皮至皮下组织)中。因此，致敏剂可通过经皮递送(有或没有阻塞(occlusion))作为乳霜、软膏、贴片或通过微型针或通过病灶内注射、更少的全身性途径来施用。通过灯或甚至用于内部器官的内窥镜，光源通常来自外部，或可以与电池植入病变部位并且远程控制。
通过将第一代光敏剂共价缀合至用于靶向递送至黑色素细胞的MC1受体特异性肽拮抗物，我们开发了巧妙的组合技术，相继的精确波长的LED光剂量的照射成功实现了以最小化的附带损伤杀死黑色素瘤中的黑色素细胞。
证明了这种位点特异性的化学积累和由LED产生的针对不同穿透水平的精确的局部化光递送的技术有能力在微观环境和纳米环境中执行靶向疗法。
该技术具有治疗良性色素沉着过度以及治疗大的浅表恶性黑色素性病变，比如达到真皮的恶性雀斑样黑色素瘤(LMM)的潜力(这取决于光敏剂的经皮吸收)。近红外波长可到达较下面的真皮层(dermal compartment)中。这提供了手创新药(first-in-class)策略，其使用与配体缀合的光敏剂和LED的光波长。这为我们提供了一个平台来处理各种治疗性状况，比如：
a、光敏剂与结合至(尤其在黑色素细胞中表达的)MC1受体的特异性配体的新型化学连接的靶向集中和积累；黑色素性组织和健康的外周组织之间的优选积累比例小于4:1；
b、各种波长和相同光敏剂的照射的持续时间，以产生不同程度的ROS以及进入组织的深度；
c、可以改变光敏剂；并且可以使用其它光敏剂，比如维替泊芬、原卟啉IX、HPPH、替莫卟吩、光卟啉、血卟啉、他拉泊芬、苯并卟啉衍生物一元酸、5-氨基乙酰丙酸、金属酞菁、四磺基酞菁锌、菌绿素、氯衍生物、卟啉衍生物；
d、通过连接光敏剂与其它靶标(例如血管、特异性肿瘤标记物)的其它特异性配体或抗体，恶性病变的多击中治疗(multi-hit)也是可能的，
以解决不同的皮肤类型(亚洲、非洲等)疾病、不同穿透水平的疾病(浅表的、皮肤的等)、不同年龄的患者以及不同阶段(早期或晚期)的疾病，新连接的光敏剂必须与适当的制剂组合或甚至通过微型针递送。
尽管在前述说明书中已经描述了本发明优选的实施方式，但是本领域技术人员应理解，在不背离本发明的情况下，可以在设计或构建体的细节方面进行许多变型或修改。

Claims (28)

1.一种组合物，其包含与配体连接的光敏化剂，其中所述配体选择性结合至在表皮层、真皮层或皮下组织层的细胞中存在的靶向受体。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中光敏化剂与配体的比例是1:1。
3.根据权利要求1或2中任一项所述的组合物，其中所述配体是所述靶向受体的拮抗物。
4.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述靶向受体在黑素细胞中表达。
5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述靶向受体是黑皮质素1受体。
6.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述配体是单价的或多价的。
7.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述配体是Ac-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-NH2。
8.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其进一步包含用于将所述光敏化剂和配体缀合的接头分子。
9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述接头分子是选自包括以下物质的组中的任何一种：聚乙二醇单元、氨基酸衍生物和溴代酸衍生物。
10.根据权利要求9所述的组合物，其中所述接头分子是4-溴甲基苯甲酸。
11.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述光敏化剂由波长在400nm至700nm之间的光激活。
12.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述光敏化剂是选自包括以下物质的组中的任何一种：亚甲基蓝、维替泊芬、原卟啉IX、HPPH、替莫卟吩、光卟啉、血卟啉、他拉泊芬、苯并卟啉衍生物一元酸、5-氨基乙酰丙酸、金属酞菁、四磺基酞菁锌、菌绿素、氯衍生物或卟啉衍生物。
13.一种制备包含与配体连接的光敏化剂的复合物的方法，所述方法包括：
(a)提供光敏化剂；
(b)提供配体，所述配体选择性结合至在表皮层、真皮层或皮下组织层的细胞中存在的靶向受体；和
(c)将所述光敏化剂和配体缀合。
14.根据权利要求13所述的方法，进一步提供用于将所述光敏化剂和配体缀合的接头分子。
15.根据权利要求13所述的方法，其中所述接头分子是选自包括以下物质的组中的任何一种：聚乙二醇单元、氨基酸衍生物和溴代酸衍生物。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述接头分子是4-溴甲基苯甲酸。
17.一种通过根据权利要求13至16中任一项所述的方法获得的复合物。
18.根据权利要求1至12、或17至18中任一项所述的复合物，其中与处于非连接形式的所述光敏化剂和配体的功能和物理特性相比，处于连接形式的所述光敏化剂和配体的功能和物理特性基本上不变。
19.根据权利要求1至12、或17至18中任一项所述的复合物在诊断和/或治疗和/或预防需要破坏靶细胞的疾病或皮肤病况中的用途。
20.根据权利要求1至12、或17至18中任一项所述的复合物在制备用于诊断和/或治疗和/或预防需要破坏靶细胞的疾病的药物中的用途。
21.根据权利要求1至12、或17至18中任一项所述的复合物，其用于诊断和/或治疗和/或预防需要破坏靶细胞的疾病。
22.根据权利要求19至21中任一项所述的用途或复合物，其中待治疗的所述疾病是癌症。
23.根据权利要求22所述的用途或复合物，其中待治疗的所述疾病是皮肤癌。
24.根据权利要求19至21中任一项所述的用途或复合物，其中所述治疗包括皮肤美白。
25.根据权利要求19至21中任一项所述的用途或复合物，其中疾病的诊断通过使所述光敏化剂可视化而进行。
26.根据权利要求19至21中任一项所述的用途或复合物，其中所述复合物在曝光之前被施用至患者。
27.根据权利要求19至21中任一项所述的复合物的用途，其中所述靶细胞是在表皮层、真皮层或皮下组织层中的细胞。
28.一种药学组合物，其包含根据权利要求1至12、或17至18中任一项所述的复合物和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1088210A (zh) * 1992-07-26 1994-06-22 耶达研究及发展有限公司 叶绿素、细菌叶绿素衍生物，它们的制备以及含有它们的药物组合物
US20050209331A1 (en) * 2004-03-22 2005-09-22 Syneron Medical Ltd. Method of treatment of skin
WO2006020979A2 (en) * 2004-08-13 2006-02-23 Yale University Factor vii conjugates for selectively treating neovascularization disorders
WO2008023378A1 (en) * 2006-08-23 2008-02-28 Yeda Research And Development Co. Ltd Conjugates of rgd peptides and porphyrin or (bacterio)chlorophyll photosynthesizers and their uses
WO2008039994A2 (en) * 2006-09-28 2008-04-03 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Targeted photodynamic therapy agent
US20090053247A1 (en) * 2005-10-07 2009-02-26 Photobiotics Limited Biological materials and uses thereof
CN102143970A (zh) * 2008-05-27 2011-08-03 健赞股份有限公司 α-促黑素细胞激素的肽类似物
US20120323163A1 (en) * 2011-05-18 2012-12-20 National Taiwan University Methods of using dual-effect liposome in therapy

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6147195A (en) * 1993-07-26 2000-11-14 Yeda Research And Development Co., Ltd. Chlorophyll and bacteriochlorophyll derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions comprising them
WO2014071457A1 (en) * 2012-11-08 2014-05-15 Newsouth Innovations Pty Limited Dual action nitric oxide donors and their use as antimicrobial agents

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1088210A (zh) * 1992-07-26 1994-06-22 耶达研究及发展有限公司 叶绿素、细菌叶绿素衍生物，它们的制备以及含有它们的药物组合物
US20050209331A1 (en) * 2004-03-22 2005-09-22 Syneron Medical Ltd. Method of treatment of skin
WO2006020979A2 (en) * 2004-08-13 2006-02-23 Yale University Factor vii conjugates for selectively treating neovascularization disorders
US20090053247A1 (en) * 2005-10-07 2009-02-26 Photobiotics Limited Biological materials and uses thereof
WO2008023378A1 (en) * 2006-08-23 2008-02-28 Yeda Research And Development Co. Ltd Conjugates of rgd peptides and porphyrin or (bacterio)chlorophyll photosynthesizers and their uses
WO2008039994A2 (en) * 2006-09-28 2008-04-03 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Targeted photodynamic therapy agent
CN102143970A (zh) * 2008-05-27 2011-08-03 健赞股份有限公司 α-促黑素细胞激素的肽类似物
US20120323163A1 (en) * 2011-05-18 2012-12-20 National Taiwan University Methods of using dual-effect liposome in therapy

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JEAN-PHILIPPE BAPST，ET AL.: "Glycosylated DOTA-r-Melanocyte-Stimulating Hormone Analogues for Melanoma Targeting: Influence of the Site of Glycosylation on in Vivo Biodistribution", 《BIOCONJUGATE CHEM.》 *
PAULA D. RAPOSINHO，ET AL.: "A 99mTc(CO)3-labeled pyrazolyl–α-melanocyte-stimulating hormone analog conjugate for melanoma targeting", 《NUCLEAR MEDICINE AND BIOLOGY》 *
SONGEUN BEACK,ET AL.: "Photodynamic therapy of melanoma skin cancer using carbon dot – chlorin e6 – hyaluronate conjugate", 《ACTA BIOMATERIALIA》 *
T. A. SLASTNIKOVA，ET AL.: "Study of Efficiency of the Modular Nanotransporter for Targeted Delivery of Photosensitizers to Melanoma Cell Nuclei in vivo", 《DOKLADY BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS》 *
TATIANA A SLASTNIKOVA1，ET AL.: "Modular nanotransporters: a multipurpose in vivo working platform for targeted drug delivery", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF NANOMEDICINE》 *
ZHEN CHENG，ET AL.: "64Cu-Labeled Alpha-Melanocyte-Stimulating Hormone Analog for MicroPET Imaging of Melanocortin 1 Receptor Expression", 《BIOCONJUGATE CHEM.》 *
赵琼: "《微雕时代》", 28 February 2015, 青岛出版社 *

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