CN108135876B - 木兰树皮提取物和L-精氨酸Nα-月桂酰基乙酯对菌斑生物膜的协同抗菌作用 - Google Patents

Abstract

本公开总体上涉及用于抑制由唾液菌引起的菌斑生物膜形成的口腔组合物和方法，并且更特别地涉及包含木兰树皮提取物(MBE)与L‑精氨酸N^α‑月桂酰基乙酯(LAE)的组合的口腔组合物。所述口腔组合物适用于改善口腔健康，包括抑制由唾液菌引起的菌斑生物膜形成以及减少菌斑对牙齿的粘附。

Description

木兰树皮提取物和L-精氨酸Nα-月桂酰基乙酯对菌斑生物膜的 协同抗菌作用

相关申请的交叉引用

本申请要求2015年9月11日提交的美国临时申请第62/217,213 号的权益，其以全文引用的方式并入本文。

技术领域

本公开一般地涉及用于抑制由唾液菌引起的菌斑生物膜形成的口腔组合物和方法，并且更特别地涉及包含木兰树皮提取物(MBE)与L- 精氨酸N^α-月桂酰基乙酯(LAE)的组合的口腔组合物。所述口腔组合物适用于改善口腔健康，包括抑制菌斑生物膜的形成以及减少菌斑形成和对牙齿的粘附。

背景技术

口腔包含超过700种细菌种(Aas等人,“Defining the normal bacterial floraof the oral cavity,”J.Clin.Microbiol.,2005,第43(11)卷, 第5721-32页)，在良好的口腔健康时，所述细菌种以共生形式生活在一起(Zarco等人,“The oral microbiome inhealth and disease and the potential impact on personalized dental medicine,”Oral.Dis.,2012,第 18(2)卷,第109-20页)。由于各种外在或内在刺激，口腔微生物群落的生态学转变可产生大量的某种致病菌株并且引起口腔疾病，诸如龋病、牙龈炎和/或口臭。维持口腔健康的关键在于保持口腔微生物群落的共生性质并且防止口腔生物膜内的致病菌种过度生长。这主要通过定期口腔卫生来实现，诸如刷牙，其以机械方式去除口腔生物膜。牙线、牙签、漱口水和口香糖也被推广作为定期口腔卫生的辅助手段(参见 Imfeld,T.,“Chewing gum-facts and fiction:A review of gum-chewing and oral health,”Crit.Rev.Oral Biol.Med.,1999,第10(3)卷,第405-19页； Crocombe等人“Is selfinterdental cleaning associated with dental plaque levels,dental calculus,gingivitis and periodontal disease？”J.Periodontal Res.,2012,第47(1)卷,第188-97页)。

牙菌斑是一种高度复杂的生物膜，其由刷牙后短时间内在牙齿上形成的300多种微生物、其代谢物和唾液膜组成。预防牙菌斑形成的挑战之一在于菌斑生物膜的性质。具体地，菌斑生物膜具有保护唾液菌免受异生素影响的复杂结构(Marsh,P.D.(2004).“Dentalplaque as a microbial biofilm”Caries Research,38(3):204-211)。生物膜结构的复杂性限制了抗微生物剂向生物膜基质中的扩散，从而保护生物膜内的细菌避免暴露于抗微生物剂。此外，已经提出，菌斑生物膜中的细菌通过代谢威胁生物膜中的其它微生物的物质来形成共生关系以互相保护 (Busscher H.J.,Evans L.V.编辑，1998.“Oral Biofilms andPlaque Control,”CRC Press.ISBN 978-90-5702-391-0)。因此，预防菌斑形成比去除已建立的菌斑容易。要去除或穿透现有的生物膜，可能需要使用表面活性剂、研磨剂、酶或有助于穿透和去除菌斑的其它试剂。

预防菌斑的两种主要作用机制是：1)抗微生物剂和2)葡糖基转移酶(GTP)抑制。已经显示具有明确的减少菌斑能力的抗微生物剂包括氯己定(chlorhexidine)、氯化鲸蜡基吡啶(CPC)、三氯生(triclosan)和地莫匹诺(delmopinol)。这些都是医学和非天然抗微生物剂。还发现精油如麝香草酚、桉树脑、水杨酸甲酯和薄荷醇以及醇类媒剂中的其它精油能减少菌斑。尽管麝香草酚在减少菌斑方面最有效，但其味道令人不愉快。通常，这些油受益于醇的存在来促进其溶解和穿透菌斑生物膜。此外，尽管适用于口腔处理如漱口水，但是高浓度的醇可以在口腔组合物如口香糖、薄荷糖、可食用膜、糖食等中留下苦涩的余味。虽然在科学出版物和专利中报道了数种GTF抑制剂，但其在口腔组合物和糖食中使用的潜力尚未进行测试。

因此需要可以用于促进从口腔中去除细菌并且抑制由唾液菌引起的菌斑生物膜形成的其它口腔组合物。

发明内容

本公开一般地涉及用于口腔清洁和抑制由唾液菌引起的菌斑生物膜形成的口腔组合物和方法，并且更特别地涉及包含木兰树皮提取物 (MBE)与L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯(LAE)的组合的口腔组合物。所述口腔组合物可用于改善口腔健康，包括抑制菌斑生物膜的形成以及减少菌斑形成和对牙齿的粘附。

因此，一方面，本公开涉及一种用于抑制消费者口腔中由唾液菌引起的菌斑生物膜形成的口腔组合物，所述组合物包含MBE和LAE，其中所述口腔组合物包含提供协同抑制口腔中菌斑生物膜形成的量的 MBE和LAE。在各种实施方式中，所述口腔组合物可以包含重量比为约16:1至约4:1的MBE和LAE。

另一方面，本公开涉及一种用于抑制消费者口腔中由唾液菌引起的菌斑生物膜形成的包衣口腔组合物，所述包衣口腔组合物包含MBE 和LAE，其量提供了对口腔中菌斑生物膜形成的协同抑制。

另一方面，本公开涉及一种制备包衣口腔组合物的方法，所述方法包含：预处理MBE和LAE以形成预掺合混合物；将所述预掺合混合物添加到包衣糖浆中；以及将所述包衣糖浆涂覆于口腔组合物以得到包衣口腔组合物，其中所述包衣口腔组合物包含提供协同抑制消费者口腔中由唾液菌引起的菌斑生物膜形成的量的MBE和LAE。在各种实施方式中，所述预处理可以包含筛分MBE和LAE，超声处理MBE 和LAE，和/或将MBE和LAE与一种或多种感官组分掺合。

另一方面，本公开涉及一种制备口香糖组合物的方法，所述方法包含：预处理MBE和LAE以形成预掺合混合物；以及从所述预掺合混合物形成口香糖组合物，其中所述口香糖组合物包含提供协同抑制消费者口腔中由唾液菌引起的菌斑生物膜形成的量的MBE和LAE。在各种实施方式中，所述预处理可以包含筛分MBE和LAE，超声处理 MBE和LAE，和/或将MBE和LAE与粉末状口香糖基剂掺合。

另一方面，本公开涉及一种用于抑制哺乳动物受试者的口腔中形成菌斑生物膜的方法，所述方法包含：使本公开的口腔组合物与受试者的口腔接触。

附图说明

在考虑到本公开的以下详细描述时，本公开将得到更充分地了解，并且除上文所阐述以外的特征、方面和优点将变得显而易见。这样的详细描述参考附图，其中：

图1A和1B是描绘如实施例2中所论述的定性光诱导荧光(QLF) 结果的图。图1A描述了前牙唇侧表面的红色荧光面积(犬齿到犬齿，最小(Mn)，最大(Mx))。图1B描绘了红色荧光面积相对于整个齿面的百分比。

图2是描述口香糖对菌斑细菌酸产生的作用的图。在咀嚼如下口香糖之前(“处理前”)和之后(“处理后”)收集菌斑细菌：含有MBE/LAE 的口香糖(“MBE口香糖”)、不含MBE或LAE的对照口香糖(“对照口香糖”)或不含MBE或LAE的口香糖基剂。图2显示菌斑收集时(0小时)或培育2或4小时后获得的菌斑生物质的分散液的平均pH值。

图3是描绘在咀嚼如下口香糖之后(“后”)2小时和4小时菌斑细菌的酸产生的变化(表示为pH差“ΔpH”)的图：含有MBE/LAE的口香糖(“MBE口香糖”)、不含MBE或LAE的对照口香糖(“对照口香糖”)或不含MBE或LAE的口香糖基剂。还描绘了咀嚼前(“前”)收集的菌斑细菌的酸产生随时间的变化。

图4是描绘在咀嚼如下口香糖之后(“后”)2小时和4小时，口香糖对6个测试受试者中菌斑细菌的再生长的作用(表示为再生长比率 OD_{最终/初始})的图：含有MBE/LAE的口香糖(“MBE口香糖”)、不含MBE 或LAE的对照口香糖(“对照口香糖”)或不含MBE或LAE的口香糖基剂。还描绘了咀嚼前(“前”)收集的菌斑细菌随时间的再生长。

图5是描绘在咀嚼如下口香糖之后(“后”)2小时和4小时，菌斑细菌的平均再生长比率的图：含有MBE/LAE的口香糖(“MBE口香糖”)、不含MBE或LAE的对照口香糖(“对照口香糖”)或不含MBE 或LAE的口香糖基剂。还描绘了咀嚼前(“前”)收集的菌斑细菌随时间的再生长。

具体实施方式

除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解相同的含义。尽管类似或等效于本文所述的任何方法和材料可以用于实践或测试本公开，但优选的材料和方法描述如下。

本公开一般地涉及用于口腔清洁和抑制由唾液菌引起的菌斑生物膜形成的口腔组合物和方法。更具体地，本公开涉及包含木兰树皮提取物(MBE)与L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯(LAE)的组合的口腔组合物。所述口腔组合物适用于改善口腔健康，包括抑制口腔中并且特别是牙齿上菌斑生物膜的形成，并且适用于减少菌斑对牙齿的粘附。

具体地，菌斑(也称为“牙菌斑”或“菌斑生物膜”)是生长在口腔内的表面上的生物膜或大量细菌。菌斑可能引起各种口腔疾病，诸如龋病和牙周病。变形链球菌(Streptococcus mutans)(一种革兰氏阳性、兼性厌氧菌)是菌斑的主要组分之一，并且引起龋齿。

令人惊讶的是，现在已经发现MBE与LAE组合能协同有效地抑制由唾液菌引起的菌斑生物膜形成。如本文所用，“协同”或“协同作用”是指当化学物质或生物结构相互作用并且产生的总作用大于其中任何一个的个别作用的总和时发生的作用。因此，将有效量的MBE和LAE的组合并入口腔组合物中可以提供抑制由唾液菌引起的菌斑生物膜形成的口腔组合物。本公开的口腔组合物还可以有效用于去除现有菌斑。

如本文所用，术语“有效”是指产生或能够产生期望的作用。此外，“有效量”或“有效浓度”是指产生或能够产生期望作用的水平、量、份量或百分比。除非另外指明，否则本文使用的所有百分比和比率都按全部组合物的重量计，并且所有测量都在25℃下进行。

因此，另一方面，本公开涉及一种抑制哺乳动物受试者口腔中由唾液菌引起的菌斑生物膜形成的方法。该方法包含使本公开的组合物与所述受试者的口腔接触。所述哺乳动物受试者可以是人类或非人类动物。

在另一个实施方式中，本公开涉及一种制备包衣口腔组合物的方法。该方法包含预处理MBE和LAE以形成预掺合混合物，将预掺合混合物添加到包衣糖浆中，并且将包衣糖浆涂覆于口腔组合物以得到包衣口腔组合物。可以通过如下方法预处理MBE和LAE：在添加到包衣糖浆之前筛分MBE和LAE；在添加到包衣糖浆之前超声处理MBE 和LAE；在添加到包衣糖浆之前将MBE和LAE与一种或多种感官组分掺合；或其组合。

在其它实施方式中，本公开涉及一种制备口香糖组合物的方法。该方法包含预处理MBE和LAE以形成预掺合混合物，以及从所述预掺合混合物形成口香糖组合物。可以通过如下方法预处理MBE和LAE：筛分MBE和LAE；超声处理MBE和LAE；将MBE和LAE与粉末状口香糖基剂掺合；或其组合。

在不希望受任何特定理论限制的情况下，相信与仅包含MBE的口腔组合物或包含未预处理的MBE和LAE的组合物相比，预处理MBE 和LAE使得MBE的负载效率和从口腔组合物中释放的速率得到改善。具体地，在某些实施方式中，通过筛分活性物并且超声处理以溶解活性物进行预处理使得常规口香糖中的负载效率大于90％。因此预处理将口香糖中的负载效率从约50％改善到约90％。

木兰树皮提取物

本公开的组合物包含木兰的提取物(在本文中也称为“木兰提取物”，“木兰树皮提取物”或“MBE”)。如本文所提及，木兰的这种“提取物”是提取自木兰科(Magnoliaceae)植物如厚朴(Magnolia officinalis)(“木兰”)的干皮或树皮的提取物，或这种提取物或其活性组分或化合物的合成或半合成等效物。通常，木兰皮(厚朴的树皮)的提取物含有疏水性化合物，包括木兰醇、和厚朴酚、四氢木兰醇和四氢和厚朴酚。任何木兰科植物都适用于本发明，并且可以在替代性实施方式中使用，优选所述提取物包含有效浓度的选自木兰醇、和厚朴酚、四氢木兰醇、四氢和厚朴酚及其组合的化合物，并且优选包含有效浓度的木兰醇和/或和厚朴酚。优选地，木兰提取物(或其中的活性物)的有效浓度是当与LAE组合使用时使得菌斑生物膜的形成或现有菌斑生物膜的存在减少的浓度。优选地，木兰提取物的有效浓度使得当将木兰提取物与LAE组合使用时，实现对由唾液菌引起的菌斑生物膜形成的协同抑制。

如本文所用，固体或液体材料的“提取”是指使材料与适合的溶剂接触以从所述材料中去除期望提取的物质。如果材料是固体，则优选在其与溶剂接触之前将其干燥并且压碎或研磨。这种提取可以通过本领域技术人员已知的常规方式进行，例如通过使用提取设备，例如索氏设备(Soxhlet apparatus)，该设备将固体材料保持在固持器中并使溶剂流过材料；或通过将溶剂和材料掺合在一起，接着分离液相和固相或两种不混溶的液相，诸如通过过滤或通过沉降和倾析。

在一个实施方式中，木兰提取物由干木兰植物树皮制成，并且可以通过使用适当的溶剂提取树皮来制备。溶剂包括相容的液体，诸如烃和取代的烃。

在优选实施方式中，口腔组合物中使用的天然提取物活性成分是可再现的、稳定的并且具有微生物学安全性。在本发明的一个实施方式中，通过使用二氧化碳(CO₂)进行超临界流体提取(SFE)来分离所述木兰提取物。超临界流体使用容易获得、价格低廉并且对环境安全的溶剂(诸如CO₂)。二氧化碳无毒、无爆炸性、容易获得并且容易从提取的产品中去除。在某些实施方式中，SFE提取产生颜色浅得多的木兰提取物(浅米色产品)，从而特别适用于美学上令人满意的口腔组合物制剂。

在各种实施方式中，木兰提取物中的活性成分优选包含木兰醇、和厚朴酚或两者。木兰醇与和厚朴酚是非离子型羟基联苯化合物，其结构据信如下：

此外，四氢木兰醇和四氢和厚朴酚是木兰醇与和厚朴酚的氢化类似物，其通常以相对小的浓度存在于木兰提取物中，因此可以包括在组合物中。

因此，如下文将更详细描述，在本发明的各种实施方式中，木兰提取物包含一种或多种疏水性化合物：木兰醇、和厚朴酚、四氢木兰醇、四氢和厚朴酚及其混合物，这些化合物与LAE组合用于抑制口腔中由唾液菌引起的菌斑生物膜形成。

在各种实施方式中，本发明的木兰提取物包含约2重量％至约99 重量％的量的木兰醇、和厚朴酚或两者。在其它实施方式中，木兰提取物包含大于50重量％的量的木兰醇、和厚朴酚或两者。在本发明的一个实施方式中，木兰醇以大于50重量％、优选大于70重量％或最优选大于90重量％的量存在。在另一个实施方式中，和厚朴酚以小于50 重量％的量、更优选小于30重量％或最优选小于10重量％的量存在。

MBE可以以0.001至约10重量％的量存在于口腔组合物中。在一些实施方式中，MBE以约0.001至约5.0重量％或约0.001至约2.0重量％的量存在于口腔组合物中。在另一个实施方式中，MBE以约1.0 至约2.0重量％的量存在于口腔组合物中。在其它实施方式中，MBE以小于1重量％的量存在，例如MBE可以以约0.01至约1重量％的量存在于口腔组合物中。在一个优选实施方式中，MBE以约0.01至0.5 重量％的量存在。最优选地，MBE以足以在组合物中提供MBE与LAE 的协同重量比的量存在于口腔组合物中。具体地，MBE优选以足以抑制由唾液菌引起的菌斑生物膜形成的量与LAE组合存在于口腔组合物中。

在各种实施方式中，所述口腔组合物将包含约1至约20mg MBE。另一方面，所述口腔组合物将包含约1至约10mg MBE。

L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯

除MBE之外，本公开的口腔组合物还包含L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯(LAE)。LAE也称为月桂酸精氨酸乙酯、月桂酰胺精氨酸乙酯、 N-月桂酰基-L-精氨酸乙酯、乙基-N^α-月桂酰基-L-精氨酸酯·HCl和INS 第243号。其为一种阳离子氨基酸衍生物，可以用作食品防腐剂。LAE 对革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌、霉菌、酵母菌和其它食物腐败微生物具有抑菌活性(参见Rodriguez,E.,等人,“Cellular effects of monohydrochloride of L-arginine,N^α-lauroyl-ethyl ester(LAE)on exposure to Salmonella typhimurium andStaphylococcus aureus”,J. Applied Microbio.,2004,第96(5)卷,903-912)。LAE是月桂酸、L-精氨酸和乙醇的衍生物，并且LAE的代谢产生L-精氨酸、乙醇和月桂酸，其为正常饮食的三种常见组分(参见Ruckman,S.,等人,“Toxicological and metabolicinvestigations of the safety of N^α-lauroyl ethyl ester monohydrochloride(LAE)”,Food and Chemical Toxicology,2004,第42 卷,245-259)。

LAE的中性非盐形式如下所示：

LAE可以形成中性和阳离子盐两者。除非另外指示，否则如本文所用，“LAE”旨在覆盖盐和中性形式两者。

在一些实施方式中，LAE为食品级并且适用作食品添加剂。其已被美国FDA指定为通常被认为安全(GRAS)或FEMA GRAS(Intl. Flavor Manuf.Assoc.)。在一个非限制性实施例中，LAE是阳离子单盐酸盐。LAE可购得，并且由Vedeqsa,Barcelona,Spain以商品名

-P/100出售。

LAE以0.001至约10重量％的量存在于口腔组合物中。在一些实施方式中，LAE以约0.001至约5.0重量％或约0.001至约2.0重量％的量存在于口腔组合物中。在另一个实施方式中，LAE以约1.0至约 2.0重量％的量存在于口腔组合物中。在其它实施方式中，LAE以小于1重量％的量存在，例如LAE可以以约0.01至约1重量％的量存在于口腔组合物中。在一个优选实施方式中，LAE以约0.01至0.5重量％的量存在。最优选地，LAE以足以在组合物中提供MBE与LAE的协同重量比的量存在于口腔组合物中。具体地，LAE优选以足以对由唾液菌引起的菌斑生物膜形成产生协同抑制的量与MBE组合存在于口腔组合物中。

在各种实施方式中，所述口腔组合物包含约1至约20mg LAE。另一方面，所述口腔组合物包含约1至约10mg LAE。

口腔组合物

包含MBE和LAE的本公开的口腔组合物为食品可接受的或食品接触可接受的材料或载体的形式，其中MBE和LAE可以被并入或分散而没有副作用。口腔组合物可以是水溶性固体或可咀嚼固体，诸如口香糖(例如片状口香糖、丸粒状口香糖、棒状口香糖、压缩口香糖、共挤出层状口香糖、泡泡糖等)、糖食(例如薄荷糖、硬糖、咀嚼糖、巧克力、凝胶、糖食糊等)或口服可溶性片剂、珠粒或锭剂。在一些实施方式中，所述组合物为包衣、壳、膜、糖浆或悬浮液形式的糖食组合物。这些递送系统是本领域技术人员众所周知的，并且制备通常需要将MBE和LAE与风味剂、非致龋甜味剂和其它感官组分一起搅拌到温热的基剂中。在一些实施方式中，所述口腔组合物可以适用于非人类哺乳动物，并且可以是例如动物点心饼干。

如本文所讨论，本公开的口腔组合物优选包含协同重量比的MBE 与LAE。在某些实施方式中，MBE与LAE的重量比优选使得口腔组合物提供对口腔组合物的消费者的口腔中由唾液菌引起的菌斑生物膜形成的协同抑制。在这些实施方式中，MBE和LAE通常以约16:1至约4:1(包括约16:1至约8:1或约8:1至约4:1)的重量比存在于口腔组合物中。

在某些实施方式中，对口腔中由唾液菌引起的菌斑生物膜的协同抑制可以在咀嚼口腔组合物至少10分钟(包括至少20分钟)后发生。

评估LAE和MBE对唾液菌的功效的一种方法是通过测定最小抑制浓度(MIC)。美国专利第7,470,442号中描述了一种测定MIC的适合方法，该专利以引用的方式并入本文中。简言之，使用氯己定作为阳性对照，并且使用无菌水作为阴性对照。使用甲醇和Tween 80作为 MBE的溶剂。Tween 80是聚山梨醇酯80的常用名称。本研究使用96 孔微量滴定板。每个孔含有5×10⁵CFU/ml的细菌、连续稀释的药剂和细菌生长培养基。将所有细菌培养物在37℃下培育并且静置。48小时后，在660nm下通过分光光度法估计细菌生长。将每种测试细菌的 MIC定义为将浊度限制在660nm下小于0.05吸光率的测试化合物的最小浓度。

用于评估LAE和MBE对唾液菌的功效的另一种方法是通过测定最小杀菌浓度(MBC)。美国专利第7,470,442号中描述了一种用于测定 MBC的适合方法。简言之，如上对于MIC测试所述，使用96孔微量滴定板连续稀释液来测定MBC。将没有显示可见生长的孔中的培养物进行连续稀释，并且将10微升培养物一式三份涂布在血琼脂平板上。在37℃下培育所述平板48小时后对活菌落评分。对于每种测试细菌，在初始接种物中测定每毫升的CFU数。将MBC定义为杀灭至少99.9％存在于初始接种物中的细胞的测试化合物的最低浓度。

口香糖

在一个实施方式中，本公开的口腔组合物为口香糖。口香糖可以包括本文阐述的任一种量或重量比的MBE和LAE。在某些实施方式中，口香糖包含MBE和LAE，其量使得口香糖提供对唾液菌引起的菌斑生物膜形成的协同抑制。在这些实施方式中，MBE和LAE优选以约16:1 至约4:1的重量比存在于口香糖中。

本公开的口香糖产品可以使用通常用于口香糖组合物中的各种不同组合物制备。适合的物理形式包括棒、片、块、实心球、空心球、丸粒、层等。尽管每种产品形式的准确成分将因产品而异，但本领域技术人员将会知道特定技术。通常，口香糖组合物通常含有水不溶性可咀嚼口香糖基剂部分、包括水溶性增量剂(即糖、多元醇)和其它水溶性组分的水溶性增量部分以及可能的通常不溶于水的其它活性成分。在咀嚼期间，水溶性部分在一段时间内与一部分风味剂一起消散。口香糖基剂部分在整个咀嚼过程中保留在口腔中。

所述口香糖可以包含约5重量％至约95重量％口香糖基剂。通常，不溶性口香糖基剂可以占口香糖的约10重量％至约50重量％或口香糖的约20重量％至约40重量％。本公开考虑使用任何商业上可接受的口香糖基剂。

通常，所述不溶性口香糖基剂可以包含弹性体、弹性体溶剂、增塑剂、蜡、乳化剂和无机填充剂。塑料聚合物，诸如聚乙酸乙烯酯，其性质有点像增塑剂，也包括在内。可以使用的其它塑料聚合物包括聚月桂酸乙烯酯、聚乙烯醇和聚乙烯基吡咯烷酮。口香糖基剂可以占总口香糖组合物的低至5重量％或高达95重量％，或更通常20至40 重量％。

弹性体提供了口香糖特有的橡胶质地。弹性体通常构成口香糖基剂的约5至约25重量％。合成弹性体可以包括但不限于聚异丁烯、丁基橡胶(异丁烯-异戊二烯共聚物)、苯乙烯共聚物(具有例如约1:3至约 3:1的苯乙烯-丁二烯比率)、聚异戊二烯、聚乙烯、乙酸乙烯酯-月桂酸乙烯酯共聚物和其组合。

天然弹性体可以包括例如天然橡胶如烟或液体胶乳和银菊胶以及天然胶如糖胶树胶(chicle)、节路顿胶(jelutong)、莱开欧胶(lechi caspi)、派瑞罗胶(perillo)、索马胶(sorva)、二齿铁线子胶(massaranduba balata)、巧克力铁线子胶(massarandubachocolate)、尼斯派罗胶(nispero)、罗辛蒂亚胶(rosindinha)、马来乳胶(gutta hangkang)和其混合物。优选的弹性体将取决于例如使用该口香糖基剂的口香糖是粘性的还是常规的、合成的还是天然的、泡泡糖还是普通口香糖。弹性体提供了口香糖特有的橡胶质地。

有时称为弹性体增塑剂的弹性体溶剂包括但不限于天然松香酯，诸如甘油酯、或部分氢化的松香、聚合松香的甘油酯、部分二聚松香的甘油酯、松香的甘油酯、部分氢化的松香的季戊四醇酯、松香的甲基和部分氢化的甲酯、松香的季戊四醇酯；合成物，诸如萜烯树脂、聚柠檬烯和其它多萜烯；和/或前述的任何适合的组合。弹性体溶剂通常以口香糖基剂的5至30重量％的水平使用。

口香糖基剂增塑剂有时称为软化剂。通常，其包括脂肪和油以及蜡。脂肪和油通常是植物油，其通常被部分或完全氢化来提高其熔点。适用于这种用途的植物油包括棉籽油、大豆油、棕榈油(包括棕榈仁油)、椰子油、牛油果油、蓖麻油、花生油、玉米油、油菜籽油、芥花油(canola)、向日葵油、可可油等。还可以使用动物脂肪，诸如乳脂、牛脂和猪脂。常用蜡包括石蜡、微晶蜡和天然蜡，诸如蜂蜡和巴西棕榈蜡。增塑剂通常以口香糖基剂的5至40重量％的水平使用。

口香糖基剂通常含有任选的添加剂如抗氧化剂和着色剂，所述添加剂发挥其正常功能。不太常见的是，可以将风味剂和甜味剂添加到口香糖基剂中。如果使用这些添加剂，则其通常以口香糖基剂的约1 重量％或更少的水平使用。

口香糖和/或口香糖基剂还可以包括填充剂组分。所述填充剂组分通常为无机粉末，诸如碳酸钙、石灰石粉、碳酸镁、滑石、硅酸盐型如硅酸铝和硅酸镁、磷酸二钙、磷酸三钙、纤维素聚合物如木材、其组合等。填充剂可构成口香糖的5重量％至约50重量％。

常用的乳化剂包括甘油单酯和甘油二酯，诸如单硬脂酸甘油酯、卵磷脂、三乙酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、乙酰化单甘油酯、脂肪酸和其组合。乳化剂通常以口香糖的1至10重量％的水平使用。

口香糖的水溶性部分可以包含软化剂、甜味剂、风味剂和其组合以及其它任选成分。例如，口香糖的大部分水溶性部分通常包含充当增量剂的水溶性粉末状碳水化合物。在含糖口香糖中，其最常见是蔗糖，但也可以使用单独或任何组合形式的其它糖，诸如果糖、赤藓糖、右旋糖(葡萄糖)、左旋糖、塔格糖、半乳糖、海藻糖、玉米糖浆固体等。

通常，无糖口香糖将使用糖醇(也称为醛醇(alditol)、多元醇或多羟基醇)作为增量剂，因为糖醇具有低致龋性、降低的含热量和降低的血糖值的益处。这些糖醇包括单独或任何组合形式的山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、氢化异麦芽酮糖、麦芽糖醇、赤藓糖醇、氢化淀粉水解产物固体等。有时使用较长链糖如聚右旋糖和果寡糖，因为其具有降低的热量特性和其它健康益处。所述填充剂通常占口香糖组合物的约5 重量％至约95重量％。

软化剂，在本领域中还称为增塑剂或塑化剂，通常构成口香糖的约0.5重量％至约15重量％。其包括甘油、丙二醇和甜味剂水溶液(糖浆)。糖浆的实例包括通常由水解淀粉制备的玉米糖浆和葡萄糖糖浆。对于无糖产品，可以将淀粉水解产物氢化，得到称为氢化淀粉水解产物糖浆或麦芽糖醇糖浆的成分。

在无糖口香糖的情况下，通常需要添加高效甜味剂来补偿用糖醇替代含糖口香糖中的蔗糖导致的甜味降低。可以将高效甜味剂定义为比蔗糖甜至少二十倍的食品可接受化合物。常用的高效甜味剂包括但不限于阿斯巴甜、三氯蔗糖、乙酰磺胺酸钾、糖精、索马甜、阿力甜、纽甜和环已氨基磺酸盐(cyclamate)，以及天然或植物来源的甜味剂，诸如紫苏、甜菊糖、莫纳甜(monatin)、应乐果甜蛋白(molellin)和查耳酮。

高效甜味剂的使用水平可以根据甜味剂的效力、当地市场偏好、味道和监管环境而广泛变化。典型的水平可以在约0.01重量％至约5 重量％的范围内，但是一些应用可以采用在该范围之外的用量。这些甜味剂可以组合在一起，或以不同的水平与非高效甜味剂组合在一起，来赋予整个组合物期望的甜味。

可以使用风味剂来赋予口香糖产品特有的香味和味觉。这些风味剂在来源上可以是天然或人造(合成)的，或两者的组合。尽管可用于口香糖的风味剂的范围和组合几乎是无限的，但所述风味剂通常包括水果风味剂，诸如柠檬、橙子、酸橙、葡萄柚、橘子、草莓、苹果、樱桃、覆盆子、黑莓、蓝莓、香蕉、菠萝、哈蜜瓜、甜瓜、西瓜、葡萄、醋栗、芒果、猕猴桃等以及组合。薄荷风味剂包括绿薄荷、胡椒薄荷、鹿蹄草、罗勒、玉米薄荷、薄荷醇等以及其混合物。香料风味剂包括肉桂、香草、丁香、巧克力、肉豆蔻、咖啡、甘草、桉树、生姜、小豆蔻等。还使用草本和可口风味剂，诸如爆米花、辣椒、玉米片等。风味剂通常以最终口香糖产品的0.1至10重量％的水平使用。

本公开的口香糖(以及任何口腔组合物)可以使用各种感觉剂或感官组分。通常，感觉剂可以是引起例如口腔或皮肤冷、热、暖、流涎、麻刺或麻木的任何化合物。

所述感官组分任选地选自：风味剂、清凉剂、发热剂、口感剂、麻刺剂、甜味剂、酸味剂、催涎剂、苦味剂、牙齿增白剂、抗龋剂、口气清新剂、闻声剂(audible agent)以及其组合。其在本领域中是众所周知的并且基于口香糖或口腔组合物的期望特征来选择。

清凉剂涵盖任何数量的生理学清凉剂，但不包括传统的风味衍生物，诸如薄荷醇或薄荷酮。优选的清凉剂提供清凉作用而不会赋予其自己的可感觉风味。清凉剂在与人体并且特别是与口腔、鼻和喉咙的粘膜接触时能让人感觉冷或清凉。清凉剂可以是天然或合成的化学物质，其用于赋予带有最小香味的清凉感。通常使用的清凉剂包括乙基对薄荷烷甲酰胺和其它N-取代的对薄荷烷甲酰胺、N,2,3-三甲基-2-异丙基-丁酰胺和其它非环甲酰胺、戊二酸薄荷酯、3-1-薄荷烷氧基丙-1,2- 二醇、异蒲勒醇、丁二酸薄荷酯、薄荷醇丙二醇碳酸酯、乙二醇碳酸酯、乳酸薄荷酯、戊二酸薄荷酯、对薄荷烷-1,8-二醇、薄荷醇甘油醚、N-叔丁基-对薄荷烷-3-甲酰胺、对薄荷烷-3-羧酸甘油酯、甲基-2-异丙基 -双环[2.2.1]庚烷-2-甲酰胺、薄荷醇甲基醚等以及其组合。

本公开的口香糖中可以使用除清凉剂之外的三叉神经刺激剂。其包括升温剂，诸如辣椒素、辣椒油树脂、红辣椒油树脂、黑胡椒油树脂、胡椒碱、姜油树脂、姜醇、生姜醇(shoagol)、肉桂油树脂、桂皮油树脂、肉桂醛、丁子香酚、香草醛的环状缩醛、薄荷醇甘油醚和不饱和酰胺；以及麻刺剂，诸如莲雾(Jambu)提取物、香草基烷基醚(诸如香草基正丁醚)、千日菊素(spilanthol)、紫锥菊(Echinacea)提取物和北方花椒(Northern Prickly Ash)提取物。

口香糖通常发挥口腔护理益处。除了通过咀嚼动作提供的牙齿的机械清洁之外，通过咀嚼、来自产品的风味和味道刺激的唾液在减少口臭、中和酸等方面发挥了其它有益特性。

本公开的口香糖可以提供这些益处以及本文公开的益处，并且还可以用作递送专业口腔护理剂的媒剂。例如，口气清新剂包括锌盐、铜盐、多酚、蘑菇提取物和其混合物。还可以使用口味掩盖风味剂，诸如肉桂、薄荷、鹿蹄草、水果风味剂以及其混合物。还可以使用其它牙齿活性物，例如牙齿增白剂、氟化物、去污剂、钙盐、磷酸盐以及其混合物。

本公开的口香糖可以用于向咀嚼者递送生物活性剂。生物活性剂包括维生素、矿物质、抗氧化剂、营养补充剂、膳食补充剂、功能性食品成分(例如益生菌、益生元、番茄红素、植物固醇、甾烷醇/固醇酯、ω-3脂肪酸、腺苷、叶黄素、玉米黄质、葡萄籽提取物、银杏等)、OTC 和处方药、疫苗以及营养补充剂。

可能需要采取某些步骤来提高或降低药剂或其它成分(例如甜味剂、风味剂)的释放速率或确保释放至少最小量。为此，可以使用诸如包封、隔离活性物的措施以及提高或降低活性物与成分的相互作用的措施。这些技术是本领域技术人员众所周知的。

通常作为非限制性实例，口香糖通过同时或依序地将各种口香糖成分添加到本领域中已知的市售混合器来制备。在将成分充分混合后，将胶块从混合器中排出并且使其成形为期望的形状，诸如滚压成薄片并且切割成棒状、挤压成大块或铸成丸粒，接着包被或包覆。

LAE和MBE可以被同时或依序并入口香糖的中心部分和/或口香糖包衣中。例如，在某些实施方式中，使用本领域中已知的任何适合技术将LAE和MBE组合，接着并入口香糖的中心层中或填充在中心。在某些实施方式中，使用本领域中已知的任何适合技术如本文所述的技术将LAE和MBE组合，接着并入口香糖的包衣中。

在另一个实施方式中，将LAW并入口香糖的中心部分中，并且将MBE并入口香糖包衣中。例如，在某些实施方式中，使用本领域中已知的任何适合技术将LAE并入口香糖的中心层中或填充在中心，而将MBE并入包衣糖浆或包被风味剂(诸如下文所述的包衣糖浆或包被风味剂)中。

在另一个实施方式中，将MBE并入口香糖的中心部分中，并且将 LAE并入口香糖包衣中。例如，在某些实施方式中，使用本领域中已知的任何适合技术将MBE并入口香糖的中心层中或填充在中心，而将 LAE并入包衣糖浆或包被风味剂(诸如下文所述的包衣糖浆或包被风味剂)中。

本发明的口香糖还可以被包被。丸粒状或球状口香糖如常规口香糖那样制备，但使其成型为枕状丸粒或球。接着可以通过常规的包覆技术将丸粒/球包被或包覆，得到独特的包被的丸粒状口香糖。

常规的包覆程序通常用如下糖和其它多元醇包被，包括但不限于蔗糖、右旋糖、麦芽糖、帕拉金糖(palatinose)、木糖醇、乳糖醇、麦芽糖醇、氢化异麦芽酮糖和其它糖醇或其组合。可以将这些材料与如下包覆改性剂掺合，包括但不限于阿拉伯胶、麦芽糖糊精、玉米糖浆、明胶、纤维素型材料如羧甲基纤维素或羟基甲基纤维素、淀粉和改性淀粉、不溶性碳酸盐如碳酸钙或碳酸镁以及滑石。还可以添加防粘剂作为包覆改性剂，所述防粘剂使得各种碳水化合物和糖醇可以用于开发新的包覆或包衣口香糖产品。还可以将风味剂、甜味剂和其它感官组分与具有MBE和/或LAE的包衣添加在一起来产生独特的产品特征。

可以容易地将MBE和LAE添加到为包覆制备的包衣糖浆/溶液中。在另一个实施方式中，MBE和LAE可以单独以粉末形式使用或与其它组分掺合并且用于常规的包覆程序中。在一些实施方式中，MBE 和LAE各自独立地占包衣的0.001重量％至5重量％。在一些实施方式中，MBE和LAE各自彼此独立地以约0.001至约5.0重量％或约0.001 至约2.0重量％的量存在于包衣中。在另一个实施方式中，MBE和LAE 以约1.0至约2.0重量％的量存在于包衣中。在其它优选实施方式中， MBE和LAE以小于1重量％的量存在于包衣中，例如其可以以约0.01 至约1重量％的量存在于包衣中。

在本公开的一些方面中，MBE和LAE以一定量存在于口腔组合物的包衣中，使得口腔组合物提供对口腔组合物消费者口腔中由唾液菌引起的菌斑生物膜形成的协同抑制。在这些实施方式中，MBE和LAE 优选以约16:1至约4:1(包括约16:1至约8:1和约8:1至约4:1)的重量比存在于口腔组合物的包衣中。

糖果/糖食

如前所述，本公开的口腔组合物可以可替选地为糖食产品的形式，包括例如薄荷糖、硬糖、咀嚼糖、包被的咀嚼糖、片状糖果、巧克力、牛轧糖、糖食糊等。这些糖果或糖食产品可以包含本领域已知和/或上文在口香糖的讨论中阐述的各种糖和甜味剂、风味剂和/或着色剂以及其它组分中的任一种。此外，可以使用本领域已知的加工条件和技术来制备这些糖果或糖食产品。糖果或糖食产品可以包括本文阐述的任一种量的MBE和LAE。在一个特定实施方式中，糖果或糖食产品可以包含多达约1.0重量％的MBE和约2.0重量％的LAE。

优选地，所述糖果或糖食产品包含MBE和LAE，其量使得糖果或糖食产品对口腔组合物消费者口腔中由唾液菌引起的菌斑生物膜形成提供协同抑制。在这些实施方式中，MBE和LAE优选以约16:1至约4:1(包括约16:1至约8:1或约8:1至约4:1)的重量比存在于糖果或糖食产品中。

作为非限制性实例，硬糖可以主要包含玉米糖浆和糖，并且由于其仅含有1.0重量％至4重量％水分的事实而得名。在外观上，这些类型的糖果是固体，但其实际上是远低于其熔点的过冷液体。存在不同类型的硬糖。玻璃型通常是透明的或用染料制成不透明的；以及颗粒型，其由于夹带空气和/或水分而总是不透明。

出于说明的目的，应该注意到，通常可以如下进行使用糖基制备沉积玻璃型的连续制备工艺。将糖玉米糖浆混合物涂抹在由高压蒸汽加热的圆筒上。快速的热交换使糖浆中的水蒸发。将煮好的糖浆排出，添加着色剂和风味剂。可以将其直接输送到料斗，接着直接排出到模具中。将糖果输送到分批滚筒，分批滚筒使批料成形并定尺寸。糖果进入成型器，该成型器使单独的块成形为圆盘、球、桶等。本公开可以制成任何形状，圆形、正方形、三角形等，还可以制成动物形状或任何其它新颖的可用造型。接着将糖果冷却，包裹并且封装。

对于颗粒型糖果，水和糖是与其它成分混合的基本组分，并在高温(290℉至310℉)下蒸煮，使水变成蒸汽。将产物转移到冷却轮，在冷却轮中收集约150磅批料，放入牵引机中将产物充气，并且添加风味剂。将糖果转移到分批滚筒，在分批滚筒中使其成形并定尺寸。接着糖果进入成型器，该成型器使单独的块成形。使糖果在35％的相对湿度下冷却，并且进入转鼓，在转鼓中将其用细糖包被。接着将糖果输送到造粒室在90℉和60％湿度下保持四小时。夹带的空气和水分使产物变成颗粒。MBE和LAE可以在制造工艺中的任何适合的时间添加，并且通常在添加风味剂期间添加。

锭剂、珠粒和片剂

在一些实施方式中，所述口腔组合物可以是锭剂、珠粒或片剂。锭剂、珠粒或片剂可以包括本文阐述的任一种量的MBE和LAE。在一个实施方式中，锭剂、珠粒或片剂可以包含多至约1.0重量％的MBE 和约2.0重量％的LAE。

在一个特定实施方式中，锭剂、珠粒或片剂将包含MBE和LAE，其量使得锭剂、珠粒或片剂对消费者口腔中由唾液菌引起的菌斑生物膜形成提供协同抑制。在这些实施方式中，MBE和LAE优选以约16:1 至约4:1的重量比存在。

用于形成锭剂、珠粒或片剂的口腔可接受的媒剂或载体通常是非致龋的、固体水溶性的多元醇，诸如但不限于甘露糖醇、木糖醇、山梨糖醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇、氢化淀粉水解物(HSH)、氢化葡萄糖、氢化二糖或氢化多糖，其量为全部组合物的约85至约95重量％。可以将约0.1至5重量％的少量乳化剂如甘油和压片润滑剂并入片剂、珠粒或锭剂制剂中来方便片剂、珠粒和锭剂的制备。适合的润滑剂包括植物油，诸如但不限于椰子油、硬脂酸镁、硬脂酸铝、滑石、淀粉和聚乙二醇。适合的非致龋性口香糖包括κ角叉菜胶、羧甲基纤维素、羟基乙基纤维素等。

锭剂、珠粒或片剂可以任选地用包被材料如蜡、虫胶、羧甲基纤维素、聚乙烯/顺丁烯二酸酐共聚物或κ-角叉菜胶进行包被来进一步延长片剂或锭剂在口腔中溶解所耗用的时间。无包衣的片剂或锭剂缓慢溶解，提供约3至5分钟的活性成分的持续释放速率。相应地，这个实施方式的固体剂量片剂、珠粒和锭剂组合物提供了在口腔中与本发明的MBE和LAE的相对较长的接触时间。

在一些实施方式中，所述口腔组合物为锭剂。锭剂可以包含有包含LAE的液体、粉末、糖浆、悬浮液、方旦糖(fondant)、太妃糖或巧克力形式的核心，以及包含MBE的如本文所述的包衣。在另一个实施方式中，锭剂可以包含有包含MBE的核心和包含LAE的如本文所述的包衣。

在另一个实施方式中，将MBE和LAE两者都并入锭剂的包衣中。用于包括在包衣中的MBE和LAE的适合量包括上文对于口香糖包衣所阐述的量。在又另一个实施方式中，将MBE和LAE两者都并入锭剂的核心中。用于制备这些实施方式的方法在本领域中是众所周知的。

动物产品

在一些实施方式中，所述口腔组合物可以适用于非人类哺乳动物，并且可以是例如动物点心(例如饼干)。

用于动物的食品和补充剂在本领域中是众所周知的，并且优选用任何适合的面团制成。食品补充面团通常包含以下各项中的至少一种：面粉、粗粉(meal)、脂肪、水和任选的颗粒状蛋白质颗粒(用于形成质地)和风味剂。例如，当期望的产品是饼干时，可以使用常规的面团，其任选含有肉和/或肉副产品或含淀粉材料的离散颗粒。用于生产硬和软(包括用于控制水的保湿剂)动物饼干的适合面团的实例公开在美国专利号5,405,836；5,000,943；4,454,163；4,454,164中，所述专利各自的内容以引用的方式并入本文中。优选将这些组合物烘烤。MBE和LAE 可以与风味剂一起添加，包括在具有软中心的内部储层中，或通过浸渍或喷洒包被在烘烤的食品补充剂的表面上。优选地，所述动物产品包含MBE和LAE，其量使得动物产品对由唾液菌引起的菌斑生物膜形成提供协同抑制。在一个实施方式中，MBE和LAE以约16:1至约4:1 (包括约16:1至约8:1或约8:1至约4:1)的重量比存在。还可以使用本领域技术人员已知用于向动物递送活性成分的任何其它适合方式。

制备方法

包含MBE和LAE的口腔组合物除了上述优点之外，还令人惊讶地发现，与仅包含MBE的口腔组合物相比，LAE与MBE组合包括在口腔组合物中改善了口腔组合物中MBE的负载效率和MBE的释放速率。当在将MBE和LAE并入口腔组合物之前对MBE和LAE进行预处理时，这种作用进一步增强。具体地，相信当MBE和LAE在并入口腔组合物之前进行预处理时，口香糖中MBE的负载效率和释放速率可以增加至少20％，并且通常增加至少33％。具体地，在某些实施方式中，通过筛分和/或超声处理进行预处理在常规口香糖中产生至少 80％并且优选至少90％的负载效率。

在某些实施方式中，在咀嚼口腔组合物至少10分钟或至少20分钟后，口腔组合物中所存在的MBE的至少60％并且优选至少80％释放到消费者口腔中。在某些实施方式中，在咀嚼口腔组合物至少10分钟或至少20分钟后，口腔组合物中所存在的LAE的至少60％并且优选至少90％释放到消费者口腔中。

因此，在一个特定的优选实施方式中，本公开涉及一种制备包衣口腔组合物的方法。该方法包含预处理MBE和LAE以形成预掺合混合物，将预掺合混合物添加到包衣糖浆中，并且将包衣糖浆涂覆于口腔组合物以得到包衣口腔组合物。可以通过如下方法预处理MBE和 LAE：在添加到包衣糖浆之前筛分MBE和LAE；在添加到包衣糖浆之前超声处理MBE和LAE；在添加到包衣糖浆之前将MBE和LAE与一种或多种感官组分掺合；将MBE和LAE预溶解在风味剂、甘油和/或中链甘油三酯(MCT)油中；或其组合。

在其它实施方式中，本公开涉及一种制备口香糖组合物的方法。该方法包含预处理MBE和LAE以形成预掺合混合物，以及从所述预掺合混合物形成口香糖组合物。可以通过如下方法预处理MBE和LAE：筛分MBE和LAE；超声处理MBE和LAE；将MBE和LAE与粉末状口香糖基剂掺合；将MBE和LAE预溶解在风味剂、甘油和/或中链甘油三酯(MCT)油中；或其组合。

在某些实施方式中，包括在所述预掺合混合物中的MBE和LAE 的量足以对口腔组合物的消费者的口腔中由唾液菌引起的菌斑生物膜形成提供协同抑制。在特定的实施方式中，将MBE和LAE以约16:1 至约4:1(包括约16:1至约8:1或约8:1至约4:1)的重量比添加到预掺合混合物中。

在一些实施方式中，在添加到口腔组合物前，通过将MBE和LAE 与一种或多种感官组分掺合来预处理MBE和LAE。在特定的实施方式中，将预掺合混合物添加到包衣糖浆中并且涂覆于口腔组合物。适合的感官组分包括但不限于风味剂、清凉剂、发热剂、口感剂、麻刺剂、甜味剂、酸味剂、催涎剂、苦味剂、牙齿增白剂、抗龋剂、口气清新剂、闻声剂以及其组合。在其它实施方式中，在添加到口香糖组合物(例如压缩的口香糖组合物)前，通过将MBE和LAE与粉末状口香糖基剂掺合来预处理MBE和LAE。在其它实施方式中，在添加到口香糖组合物前，通过将MBE和LAE预溶解在风味剂、甘油和/或中链甘油三酯 (MCT)油中来预处理MBE和LAE。

在一些实施方式中，将MBE和LAE组合并筛分、超声处理或进行这两个操作，接着与一种或多种感官组分或粉末状口香糖基剂掺合。在另一个实施方式中，将MBE和LAE与感官组分或粉末状口香糖基剂掺合，并且将所得混合物筛分、超声处理或进行这两个操作。优选地，将MBE与LAE的混合物筛分，接着超声处理，然后与感官组分或粉末状口香糖基剂掺合。

本文公开的任何口腔组合物可以使用本文所述的方法制备。在特定的实施方式中，根据本公开的方法制备的口腔组合物选自口香糖、糖食、薄荷糖、片剂、珠粒和锭剂。优选地，所述口腔组合物为口香糖或薄荷糖。更优选地，所述口腔组合物为口香糖，诸如包衣口香糖、夹心口香糖或包被的夹心口香糖。优选地，所述口香糖为包衣口香糖。

使用方法

如本文所述，已经令人惊讶地发现MBE与LAE组合能协同有效地抑制由唾液菌引起的菌斑生物膜形成。因此这种组合极大地改善和促进了对消费者口腔中由唾液菌引起的菌斑生物膜的抑制。因此，将有效量的MBE和LAE的组合并入口腔组合物中可以提供抑制由唾液菌引起的菌斑生物膜形成的口腔组合物。本公开的口腔组合物还可以有效用于去除现有菌斑。

因此，另一方面，本公开涉及抑制消费者口腔中并且特别是牙齿上的菌斑生物膜的形成。该方法包含使本公开组合物与口腔接触。优选地，所述消费者为哺乳动物。所述哺乳动物可以是人类或非人类动物。最优选地，所述哺乳动物为人类。组合物可以与口腔接触至少10 分钟或至少约20分钟。

本发明通过以下实施例说明，但不限于以下实施例。

实施例

实施例1：体外生物膜分析

体外评估了不同浓度的MBE和LAE对生物膜形成的作用。

体外生物膜测试

通过Guggenheim(Guggenheim B.,Gierstein E.,Schupbach P, Shapiro S.,2001.“Validation of an in vitro biofilm model of supragingival plaque”JournalDental Research 80:363-370)的改良方法制备和测试生物膜，该文献以引用的方式并入本文中。简言之，通过将唾液菌与唾液处理的羟基磷灰石(HA)盘一起在无菌24孔细胞培养板中培育来使生物膜生长。使用补充有唾液(25％总体积)的培养基并在生长阶段期间频繁地转移盘来促进牙菌斑样生物膜的生长。最多72小时就产生这种生物膜。在实验的第二天和第三天将生物膜暴露于测试组合物(表1中所阐述)每天三次，每次五分钟。通过比浊法并且通过600nm下的分光光度吸光率定量生物膜。

如下测定每个生物膜的CFU数。剧烈震荡后，将0.1ml来自每个生物膜细胞的液体移液到10ml反渗透(RO)H₂O中(100倍稀释)。震荡 100倍稀释液，并将0.1ml移液到10ml ROH₂O中(10,000倍稀释)。震荡10,000倍稀释液，并将0.1ml移液到10ml RO H₂O中(10,000,000倍稀释)。通过WASP II自动涂布器使500μL各稀释液以螺旋形式沉积在CDC琼脂上。将平板在37℃下在厌氧条件下培育48小时。在生长阶段后，计数各平板上生长的细菌菌落数。所有口腔细菌的初始浓度据估计为约1～2×10⁶CFU/ml。

测定MBE的IC₄₀，并且用作阳性对照浓度。

结果

表1中列出了体外生物膜分析的结果。

表1：体外生物膜分析结果

^*LAE是来自Vedeqsa,Barcelona,Spain的LAE-CF(纯度99％)

^**MBE来自Honsea Sunshine Biotech,Ltd.,Guangzhou,China(95％木兰醇和5％和厚朴酚)

仅LAE的抑制百分比并不比阳性对照好，但与阳性对照相比，LAE 与MBE的组合具有改善的抑制。

实施例2：体内生物膜分析

评估了包含各种浓度的MBE和LAE的口香糖对菌斑形成和唾液菌的作用。测试的口香糖制剂如下：

制剂A：对照口香糖(Winterfresh)；

制剂B：包含MBE的包衣口香糖(每份递送5.3mg MBE；口香糖包衣中1.2重量％)；

制剂C：包含MBE+LAE的包衣口香糖(每份递送7.7mg MBE+ 9.0mg LAE；口香糖包衣中1.2重量％MBE)；

制剂D：MBE吸吮-咀嚼口香糖(每份递送9.6mg MBE；口香糖包衣中1.2重量％)。吸吮-咀嚼口香糖通过使受试者吸吮口香糖2分钟接着咀嚼来食用。

菌斑筛选

十二(12)个受试者每天分5次剂量食用5份口香糖20分钟，持续 4天(周一至周四)。每个分支结束后(第5天，(星期五下午))，受试者再食用一份口香糖。公开了菌斑并且拍摄了每个受试者前牙唇侧表面(犬齿到犬齿，Mn，Mx)的数字照片和定量光诱导荧光(QLF)影像(使用含染料的染色剂观察)。为受试者提供进一步预防(专业牙齿清洁)，接着进行9天冲洗，在此期间，受试者使用提供的牙刷和牙膏恢复其正常口腔卫生程序。要求受试者在下周一到场来进行下一个实验阶段。重复这个过程直到每个受试者已经使用全部口腔组合物制剂。

微生物分析

将唾液样品(来自第1天和第5天两天)收集在冰容器中并立即转移到微生物学实验室进行分析。每个样品中的细菌数通过用磷酸盐缓冲盐水连续稀释，涂在选择性和非选择性固体培养基上并且在37℃下在厌氧条件下培育来测定。使用血琼脂和轻型唾液链球菌(Mitis salivarius) 琼脂来测定唾液菌和链球菌(Streptococcus)属的总数。在厌氧培育7天后再检查血琼脂平板来测定黑色厌氧生物的数目。

通过方差分析以及成对事后比较分析数据。将微生物学数据对数转换来用于分析。对于这些筛选者，将α水平设定为15％(即p<0.15)。

结果

测试了三种口香糖配方(制剂B、C和D)和对照(制剂A)对人类体内菌斑再生长的作用。结果如图1A和图1B以及表2和表3所示。

表2：组间统计学差异(QLF)

	红色荧光	ΔR
			A相对于B	0.672	0.428
A相对于C	0.051	0.159
			A相对于D	0.660	0.790
B相对于C	0.015	0.010
			B相对于D	0.844	0.147
C相对于D	0.033	0.154

如在图1A、图1B和表2中可见，如通过QLF(红色荧光)所检测，仅MBE+LAE分支(制剂C)显示菌斑面积显著减少约30％(p＝0.05)。即使制剂C的MBE传递量低于制剂D，但其功效高于仅MBE(制剂B 和D)和对照(制剂A)。从表3可以看出，微生物学结果显示在第5天 FAAcfu发生统计学显著变化(减少0.5log，p＝0.04)。n,p＝0.04).

这些结果展示，与在LAE不存在下包含MBE的口腔组合物相比，包含MBE与LAE的组合的口腔组合物使得体内菌斑形成减少。

实施例3：MBE和LAE在预防菌斑生物膜形成中的协同作用

在这个实施例中，评估了MBE和LAE对预防由唾液菌引起的菌斑生物膜形成的作用。

从4个供体收集80ml唾液并且以3800rpm离心来去除食物残渣。取出15ml上清液并且与等体积的1×PBS混合。接着将混合物过滤灭菌来收集唾液蛋白质，使用所述唾液蛋白质预涂布Calgary器件的盖中的桩后保持3小时。同时，将剩余唾液以10,000rpm离心来收集用于生物膜接种物的细菌。离心后，将沉淀物再悬浮至OD₆₀₀为0.05，并与指定浓度的LAE-CF(纯度99％，来自Vedeqsa)、MBE和两种活性物的组合以预定比率预混合。将活性物和接种物添加到预先涂布唾液的桩中并培育过夜达至少16小时以使得生物膜形成。对照仅包括生长(无活性物)和培养基(无细菌)。

结果

结果如下表4所示。LAE和MBE协同作用的功效以两种活性物的最小生物膜抑制浓度(MBIC)和分级生物膜抑制浓度(FBIC)显示。 FBIC根据下式计算：

FBIC＝[Q_A/Q_a+Q_B/Q_b]，其中

Q_A＝与组分B相组合的组分A的MBIC。

Q_a＝仅组分A的MBIC。

Q_B＝与组分A相组合的组分B的MBIC。

Q_b＝仅组分B的MBIC。

如果FBIC<1，则组分A和B具有协同作用；如果1≤FBIC≤2，则组分A和B具有加和作用；如果2<FBIC，则组分A和组分B具有拮抗作用。FBIC值越低(当FBIC<1时)，两种组分之间的协同作用越强。

令人惊讶地，MBE:LAE比率为4:1、8:1和16:1时观察到抑制生物膜形成的协同活性。MBE和LAE的组合比单独的MBE或LAE有效 1.3至1.8倍。具体地并且非常令人惊讶地，在MBE:LAE比率为16:1 时观察到高功效，其中FBIC为0.564，表示比单独的MBE或LAE的效力高近2倍。相对于MBE，少量的LAE将允许更有成本效益且高效地制备不同的口腔组合物。

表4：MBE和LAE对抑制由唾液菌引起的生物膜形成的协同作用

实施例4：口香糖中LAE的负载效率和释放

在这个实施例中，评估了口香糖中LAE的负载效率和释放。

为了评估丸粒状口香糖的LAE的释放，将样品用LAE-CF配制成胡椒薄荷口香糖。样品由志愿者咀嚼20分钟。将口香糖的团块储存并且冷冻直至分析。通过HPLC测试来自6个咀嚼者和未咀嚼的LAE口香糖的口香糖团块，并且进行比较来确定从口香糖的嚼出/释放情况。表5显示LAE从口香糖中心的回收和释放。

表5：胡椒薄荷风味口香糖中心中LAE的负载效率

从表5中可以看出，配制期间添加的约85％～100％LAE存在于口香糖样品中，指示配制期间添加的LAE中仅约0～15％在配制期间损失。在咀嚼20分钟后，在口香糖样品中存在的LAE中，25.4％的LAE 从棒状口香糖中释放；并且17％的LAE从丸粒状口香糖中释放。

实施例5：口香糖中MBE和LAE的负载效率和释放

使用以下口香糖制剂来评估口香糖中MBE或MBE加上LAE的负载效率和释放。

对于组合物3(MBE-吸吮)，通过吸吮丸粒2分钟使包衣层完全溶解，接着咀嚼8分钟来食用口香糖丸粒。组合物1、2和4通过常规咀嚼10分钟来食用。测定咀嚼前(负载)和咀嚼后(释放)的MBE和LAE 的量。结果如表6所示。

表6：负载和递送结果(mg)

从表6中可以看出，当在口香糖包衣中配制时MBE和LAE的释放更高。此外，吸吮-咀嚼方法还改善了MBE的释放。

实施例6：包衣口香糖

在这个实施例中，制备含有MBE或MBE和LAE的包衣组合物。可以使用包衣组合物制备含有MBE和LAE的包衣口腔组合物。

根据表7中所示的配方制备包衣组合物。

表7：包衣组合物

成分	重量％
		多元醇	63.83
水	22.22
		40％塔尔拉胶(gum tahla)	12.39
着色剂	0.42
		高效力甜味剂	0.42
清凉剂	0.72
		总计	100.00

MBE包衣组合物：将3.75g MBE添加到300g表7中的包衣组合物中。所得包衣组合物包含1.25重量％的MBE。可以将MBE包衣组合物以足以提供12毫克/份的MBE浓度的量涂覆于口腔组合物，诸如口香糖。

MBE/LAE包衣组合物：将3.75g MBE和4.65g LAE添加到300g 表7中的包衣组合物中。所得包衣组合物包含1.25重量％的MBE和 1.55重量％的LAE。可以将MBE/LAE包衣组合物以足以提供12毫克/ 份的MBE浓度和15毫克/份的LAE浓度的量涂覆于口腔组合物，诸如口香糖。

实施例7：包含MBE和LAE的口香糖对人类龈上菌斑细菌的酸产生和再生长的作用

在这个实施例中，使用菌斑糖酵解和再生长法(PGRM)评估了 MBE和LAE对人类龈上菌斑的再生长和糖酵解的作用以及口香糖作为递送机制的有效性。

所有种族和性别的6名年龄为18-65岁的成人(5名女性，1名男性) 参与了该研究。参加者在测试访问的前一天晚上和测试访问的早晨避免口腔卫生。在咀嚼口香糖样品之前收集其过夜龈上菌斑(左上和左下)(处理前样品，“前”)。接着参与者咀嚼一个口香糖样品10min，并在咀嚼后20min收集其右上和右下菌斑样品(处理后样品，“后”)。如在White等人,J.Clin.Dent.6[特刊]:59-70,1995中所述，使用 PGRM体外测试咀嚼之前和之后所有菌斑样品的生长和产生酸的能力，该文献以引用的方式并入本文中。还可以测试其体外形成生物膜的能力。

处理组

在这个测试中评估的口香糖样品是：a)口香糖基剂对照；b)包含 MBE和LAE两者的实验口香糖(“MBE口香糖”)；和c)不含MBE或 LAE的口香糖(“对照口香糖”)。除了每份包含15mg(0.5重量％)MBE 和2mg(0.067重量％)LAE之外，MBE口香糖(3000mg份量，以两个1500mg丸粒施用)与对照口香糖相同。

PGRM-糖酵解活性测量

将体内处理的菌斑样品(“后”)与未处理的菌斑样品(“前”)进行糖酵解活性比较。将处理前和处理后菌斑样品分散在缓冲液中，并且通过添加0.03％缓冲液(胰蛋白酶大豆肉汤，“TSB”)将样品的光密度 (OD)(在600nm下测量)调节到0.20±0.01，得到标准化的生物质菌斑。将1mL标准化的生物质菌斑移液到2mL Eppendorf小瓶中，并且通过添加50μL的40％蔗糖储备溶液引发细菌代谢。接着将标准化的菌斑在37℃下和120rpm搅拌下培育。在培育2小时和4小时后，通过悬浮缓冲液中的pH变化来测量酸产生。结果示于表8-10以及图2和图3 中。

表8：咀嚼MBE口香糖(MBE和LAE)对人类龈上菌斑细菌的酸产生的作用

表9：咀嚼对照口香糖(无MBE/LAE)对人类龈上菌斑细菌的酸产生的作用

表10：咀嚼无风味剂口香糖基剂对人类龈上菌斑细菌酸产生的作用

抑制菌斑细菌将糖代谢成酸的能力是抗微生物剂有效性的一种量度，其中处理后酸产生减少是抗微生物作用的证据。从表8-10以及图 2和图3中所示的结果可以看出，与未处理的(“前”)对照菌斑样品相比，MBE口香糖(含有MBE和LAE)处理的菌斑样品在两小时后的pH 值高0.3个pH单位，指示暴露于这种口香糖的细菌的酸形成活性降低。因此，结果显示，在咀嚼MBE口香糖10分钟后，降低酸产生的阳性趋势长达2小时。对于口香糖基剂和对照口香糖没有观察到酸产生降低的统计学显著趋势。

PGRM-菌斑再生长活性

通过评定好氧培养基中标准化菌斑样品的细菌再生长来确定 MBE和LAE对菌斑生长的作用。将300μL如上制备的来自糖酵解小瓶的分散菌斑的等分试样转移到含有0.5mL6％(w/w)BBL TSB(pH 7.1±0.2)以及100μL无菌水的单独的2mL Eppendorf小瓶中。通过添加50μL储备的40％蔗糖溶液来加速肉汤中的细菌生长。样品制备后，在光谱仪中在3mL一次性比色皿(curvette)中在600nm下测量菌斑分散液的初始光密度。在37℃下以1200rpm在2mL Eppendorf管中培育样品。将菌斑样品培育4小时，并且在用丸粒混合器均质化后2小时和4小时测量光密度(600nm)。结果示于表11-14以及图4和图5。以最终菌斑分散液浊度(OD₆₀₀)报道再生长结果。

表11：咀嚼MBE口香糖(MBE和LAE)对人类龈上菌斑细菌的再生长(OD₆₀₀)的作用

表12：咀嚼对照口香糖对人类龈上菌斑细菌再生长(OD₆₀₀)的作用

表13：咀嚼无风味剂的口香糖基剂对人类龈上菌斑细菌再生长 (OD₆₀₀)的作用

表14：再生长比率(OD_最终/OD_初始)

^*标准偏差

从这些结果可以看出，在咀嚼MBE口香糖(含有MBE和LAE)10 分钟后，在减少短期菌斑细菌再生长方面存在长达4小时的阳性趋势，而对照口香糖和口香糖基剂不抑制菌斑细菌的再生长。这些结果表明口香糖可以用作用于短期菌斑控制的抗微生物剂的有效口腔递送系统。

此书面描述使用实施例来公开本发明，包括最佳方式，并且还使本领域技术人员能够实践本发明，包括制造和使用任何器件或系统以及执行任何并入的方法。本发明的可取得专利权的范畴由权利要求书限定，并且可以包括本领域技术人员想到的其它实施例。如果这些其它实施例具有不与权利要求书的字面语言不同的结构成分，或者如果其包括与权利要求书的字面语言无实质区别的等效结构成分，则这些其它实施例旨在属于权利要求书的范畴。

Claims (25)

1.一种用于抑制消费者口腔中由唾液菌引起的菌斑生物膜形成的口腔组合物，所述组合物包含木兰树皮提取物(MBE)和L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐，其中所述口腔组合物包含提供协同抑制口腔中菌斑生物膜形成的量的MBE和L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐，其中MBE与L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐的重量比为16:1至4:1。

2.权利要求1所述的口腔组合物，其中所述口腔组合物包含1mg至20mg的MBE。

3.权利要求1所述的口腔组合物，其中所述口腔组合物包含1mg至10mg的MBE。

4.权利要求1所述的口腔组合物，其中所述口腔组合物包含1mg至20mg的L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐。

5.权利要求1所述的口腔组合物，其中所述口腔组合物选自口香糖、糖食、片剂、珠粒和锭剂。

6.权利要求1所述的口腔组合物，其中所述口腔组合物是口香糖，并且口腔中菌斑生物膜形成的协同抑制发生在至少10分钟的咀嚼时间之后。

7.权利要求1所述的口腔组合物，其中所述口腔组合物减少菌斑对牙齿的粘附。

8.一种用于抑制消费者口腔中由唾液菌引起的菌斑生物膜形成的包衣口腔组合物，所述包衣口腔组合物包含提供协同抑制所述口腔中菌斑生物膜形成的量的重量比为16:1至4:1的MBE和L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐。

9.权利要求8所述的包衣口腔组合物，其中MBE占包衣的1重量％至2重量％。

10.权利要求8所述的包衣口腔组合物，其中L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐占包衣的1重量％至2重量％。

11.权利要求8所述的包衣口腔组合物，其中所述包衣口腔组合物选自口香糖、糖食、片剂、珠粒和锭剂。

12.权利要求8所述的包衣口腔组合物，其中所述包衣口腔组合物是口香糖，并且口腔中菌斑生物膜形成的协同抑制发生在至少10分钟的咀嚼时间之后。

13.一种制备包衣口腔组合物的方法，所述方法包含：

预处理MBE和L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐以形成预掺合混合物；

将所述预掺合混合物添加到包衣糖浆中；以及

将所述包衣糖浆施用于口腔组合物以得到所述包衣口腔组合物，

其中所述包衣口腔组合物包含提供协同抑制消费者口腔中由唾液菌引起的菌斑生物膜形成的量的MBE和L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐，其中MBE与L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐的重量比为16:1至4:1。

14.权利要求13所述的方法，其中所述口腔组合物选自口香糖、糖食、片剂、珠粒和锭剂。

15.权利要求13所述的方法，其中通过将MBE和L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐与一种或多种感官组分掺合来预处理MBE和L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐。

16.权利要求13所述的方法，其中通过筛分MBE和L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐来预处理MBE和L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐。

17.权利要求13所述的方法，其中在所述预掺合混合物中MBE与L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐的重量比为16:1至8:1。

18.权利要求13所述的方法，其中MBE占所述包衣的1重量％至2重量％。

19.权利要求13所述的方法，其中L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐占所述包衣的1重量％至2重量％。

20.权利要求13所述的方法，其中所述包衣口腔组合物是包衣口香糖。

21.权利要求13所述的方法，其中通过将MBE和L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐与粉末状口香糖基剂掺合来预处理MBE和L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐。

22.权利要求13所述的方法，其中通过将MBE和L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐预溶解在风味剂、甘油、MCT油或其组合中来预处理MBE和L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐。

23.权利要求13所述的方法，其中在所述预掺合混合物中MBE与L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐的重量比为16:1至4:1。

24.权利要求13所述的方法，其中在所述预掺合混合物中MBE与L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐的重量比为8:1至4:1。

25.权利要求13所述的方法，其中在所述预掺合混合物中MBE与L-精氨酸N^α-月桂酰基乙酯或其盐酸盐的重量比为16:1至8:1。

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