CN108107147B - 亚临床盆腔炎性疾病标志物及其用途 - Google Patents

亚临床盆腔炎性疾病标志物及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物技术领域，涉及系列代谢物用于亚临床盆腔炎性疾病的诊断。本发明通过基于液相色谱质谱联用的代谢组学方法系统地筛选血液中的代谢物，找到与亚临床盆腔炎性疾病发生存在明显相关性的代谢物作为疾病的生物标志物。所述代谢物包括：溶血磷脂酸16:0/0:0、1‑磷酸神经酰胺d18:1/16:0、硬脂酰胺、亚油酸、硬脂酸、磷酯酰乙醇胺P‑18:0/0:0、磷酯酰乙醇胺P‑18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P‑20:0/0:0、吲哚硫酸、3‑吲哚丙酸、p‑甲酚。本发明找到的这些生物标志物可以用于亚临床盆腔炎性疾病的无创诊断和指示治疗，与临床需要通过手术进行诊断的方法比较，具有明显的优势。

Description

亚临床盆腔炎性疾病标志物及其用途
技术领域
本发明涉及体外诊断技术领域，具体涉及多种新的亚临床盆腔炎生物标志物及其在检测亚临床盆腔炎中的应用。
背景技术
盆腔炎性疾病(Pelvic Inflammatory Disease，PID)是一种常见的妇科疾病，为淋病奈瑟球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等致病微生物感染上生殖道后引发的炎症，包括子宫内膜炎、输卵管炎等[1-4]。《2013中国卫生统计年鉴》数据显示我国妇女患妇科病比率为27.8％，其中与PID相关的有60％-80％。PID引起广泛关注的原因在于，如果PID没有得到及时和有效治疗，将会引起较为严重的后遗症，包括异位妊娠、慢性盆腔疼痛、输卵管堵塞所致的不孕症等[5,6]，严重影响妇女生活质量；如果引起输卵管卵巢脓肿破裂、弥漫性腹膜炎、败血症等[7]，则可能威胁病人生命。由此可见，对PID的尽早诊断和治疗对女性健康尤为重要。
临床医生一般根据病史、症状、体征及实验室检查对PID进行初步诊断[8]。对PID症状明显的患者，根据美国CDC诊断指南，临床上诊断不存在困难。但是，对于症状不明显的PID患者(亚临床PID患者[9])，目前临床上没有确定的症状、生理表现或者实验室检测结果能够对其进行诊断[10]。不幸的是，多个研究表明，患有PID导致不孕的患者中，约30％-70％没有被确诊为PID的病史和进行相应治疗[11]，也就是说，亚临床PID在未引起临床医生和患者足够重视的情况下，确实可能会引起严重的后遗症。腹腔镜检查或子宫内膜活检是亚临床PID诊断的金标准[12]。但是，因为金标准为有创手术，费用相对昂贵，不可能用于所有怀疑可能患有PID患者的诊断，特别是如果症状较轻，临床医生和患者可能不愿意使用金标准进行诊断。因此，亚临床PID的无创或微创诊断已经引起广泛关注[9]，学者们致力于寻找新指标或者症状以帮助对亚临床PID的诊断[11,13]，但是目前尚无公认有效的无创诊断方法报道。
临床多通过无创或微创的方法获得生物样本，检测样本中的生物标志物，以到达疾病诊断的目的。但是，目前尚无灵敏又特异的生物标志物用于亚临床PID的诊断[10]。因此，找到亚临床PID灵敏又特异的生物标志物，对PID的诊断、治疗和后遗症的预防具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中亚临床盆腔炎性疾病检测的缺点，提供一种用于检测亚临床盆腔炎性疾病的检测方法，具有灵敏度高、特异性好、无创或微创等优点。
本发明一方面提供了一种检测亚临床盆腔炎性疾病的方法，包括：(a)测定取自受试对象的样品中的一种或多种代谢物的水平，所述代谢物选自溶血磷脂酸16:0/0:0、1-磷酸神经酰胺d18:1/16:0、硬脂酰胺、亚油酸、硬脂酸、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0、吲哚硫酸、3-吲哚丙酸、p-甲酚中的一种或多种；(b)将样品中的所述代谢物的水平与健康受试者比较。其中，样品中的一种或多种代谢物水平相对健康受试者的变化，指示受试对象患有亚临床盆腔炎性疾病或处于亚临床盆腔炎性疾病的风险之中。
本发明另一方面提供了一种为亚临床盆腔炎性疾病提供治疗的方法，包括：(a)测定取自受试对象的样品中的一种或多种代谢物的水平，所述代谢物选自溶血磷脂酸16:0/0:0、1-磷酸神经酰胺d18:1/16:0、硬脂酰胺、亚油酸、硬脂酸、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0、吲哚硫酸、3-吲哚丙酸、p-甲酚中的一种或多种；(b)将样品中的所述代谢物的水平与健康受试者比较。其中，样品中的一种或多种代谢物水平相对健康受试者的变化，指示受试对象应当接受针对亚临床盆腔炎性疾病的治疗。
本发明另一方面提供了代谢物在制备亚临床盆腔炎性疾病检测试剂中的用途，所述代谢物选自溶血磷脂酸16:0/0:0、1-磷酸神经酰胺d18:1/16:0、硬脂酰胺、亚油酸、硬脂酸、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0、吲哚硫酸、3-吲哚丙酸、p-甲酚中的一种或多种。
本发明另一方面提供了一种或多种检测试剂在制备亚临床盆腔炎性疾病指示剂或诊断剂中的用途，所述检测试剂是检测代谢物的试剂，所述代谢物选自溶血磷脂酸16:0/0:0、1-磷酸神经酰胺d18:1/16:0、硬脂酰胺、亚油酸、硬脂酸、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0、吲哚硫酸、3-吲哚丙酸、p-甲酚中的一种或多种。
本发明另一方面提供了检测试剂在制备亚临床盆腔炎性疾病试剂盒中的用途，所述检测试剂是检测代谢物的试剂，所述代谢物选自溶血磷脂酸16:0/0:0、1-磷酸神经酰胺d18:1/16:0、硬脂酰胺、亚油酸、硬脂酸、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0、吲哚硫酸、3-吲哚丙酸、p-甲酚中的一种或多种。
本发明另一方面提供了一种或多种检测试剂，所述检测试剂用于检测溶血磷脂酸16:0/0:0、1-磷酸神经酰胺d18:1/16:0、硬脂酰胺、亚油酸、硬脂酸、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0、吲哚硫酸、3-吲哚丙酸、p-甲酚中的一种或多种。
本发明另一方面提供一种试剂盒，所述试剂盒包含一种或多种检测试剂，所述检测试剂是检测代谢物的试剂，所述代谢物选自溶血磷脂酸16:0/0:0、1-磷酸神经酰胺d18:1/16:0、硬脂酰胺、亚油酸、硬脂酸、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0、吲哚硫酸、3-吲哚丙酸、p-甲酚中的一种或多种。
亚临床盆腔炎性疾病
本发明所称的亚临床盆腔炎性疾病，亚临床盆腔炎，或亚临床PID，均指代同一种疾病。
检测方法
本发明的实施不受检测方法的限制，只要是能够检测本发明所述代谢物的方法，均可实施本发明，例如是，核磁共振法、光谱法、色谱法、免疫法、化学法等。优选的，本发明采用液相色谱法进行检测。更优选的，本发明采用液相色谱与质谱联用方法进行检测。
检测样品
本发明的样品可以选用血液样品，包括但不限于全血、血清、血浆。样品来源主要由检测的方法决定，本领域技术人员可以自行依据选择的检测方法选择合适的样品。优选的，选择血清或血浆。
代谢物或代谢物的组合
本发明涉及的技术方案，可单独选择一种代谢物来实施；亦可多种代谢物组合使用来实施。多种代谢物组合使用会进一步地提高本申请的灵敏度、特异性，从而获取更大的曲线下面积(AUC)。
在一个实施例中，本发明涉及，包括选择溶血磷脂酸16:0/0:0、1-磷酸神经酰胺d18:1/16:0、硬脂酰胺、亚油酸、硬脂酸、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0、吲哚硫酸、3-吲哚丙酸、p-甲酚中的1种。例如，在一个实施例中选择溶血磷脂酸16:0/0:0；例如，在另一个实施例中选择1-磷酸神经酰胺d18:1/16:0；例如，在另一个实施例中选择硬脂酰胺；例如，在另一个实施例中选择亚油酸；例如，在另一个实施例中选择硬脂酸。并可选的，还包括选择溶血磷脂酸16:0/0:0、1-磷酸神经酰胺d18:1/16:0、硬脂酰胺、亚油酸、硬脂酸、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0、吲哚硫酸、3-吲哚丙酸、p-甲酚中的另外至少1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种或10种。例如是，在一个实施例中，选择溶血磷脂酸16:0/0:0，并选择1-磷酸神经酰胺d18:1/16:0、硬脂酰胺、亚油酸、硬脂酸、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0、吲哚硫酸、3-吲哚丙酸、p-甲酚中的一种或多种。
在另一个实施例中，本发明涉及，包括选择溶血磷脂酸16:0/0:0、1-磷酸神经酰胺d18:1/16:0、硬脂酰胺、亚油酸、硬脂酸、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0、吲哚硫酸、3-吲哚丙酸、p-甲酚中的至少2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种，或11种。在一个实施例中，本发明涉及，包括选择选择溶血磷脂酸16:0/0:0、1-磷酸神经酰胺d18:1/16:0、硬脂酰胺、亚油酸、硬脂酸中的一种或多种；在另一个实施例中，本发明涉及，包括选择磷脂酰乙醇胺P-18:0/0:0，溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0和神经酰胺d18:0/16:0。
优选的，在一个实施例中，本发明涉及，包括选择1-磷酸神经酰胺d18:1/16:0；并可选的，还包括选择硬脂酰胺、亚油酸、硬脂酸、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0、吲哚硫酸、3-吲哚丙酸、p-甲酚中的一种或多种。
更优选的，在一个实施例中，本发明涉及，包括选择硬脂酰胺；并可选的，还包括选择亚油酸、硬脂酸、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0、吲哚硫酸、3-吲哚丙酸、p-甲酚中的一种或多种。
更优选的，在一个实施例中，本发明涉及，包括选择亚油酸；并可选的，还包括选择硬脂酸、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0、吲哚硫酸、3-吲哚丙酸、p-甲酚中的一种或多种。
更优选的，在一个实施例中，本发明涉及，包括选择硬脂酸；并可选的，还包括选择磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0、吲哚硫酸、3-吲哚丙酸、p-甲酚中的一种或多种。
更优选的，在一个实施例中，本发明涉及，包括选择磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0；并可选的，还包括选择磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0、吲哚硫酸、3-吲哚丙酸、p-甲酚中的一种或多种。
更优选的，在一个实施例中，本发明涉及，包括选择酯酰乙醇胺P-18:0/0:0；并可选的，还包括选择磷溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0、吲哚硫酸、3-吲哚丙酸、p-甲酚中的一种或多种。
更优选的，在一个实施例中，本发明涉及，包括选择磷溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0；并可选的，还包括选择吲哚硫酸、3-吲哚丙酸、p-甲酚中的一种或多种。
更优选的，在一个实施例中，本发明涉及，包括选择磷吲哚硫酸；并可选的，还包括选择3-吲哚丙酸、p-甲酚中的一种或多种。
更优选的，在一个实施例中，本发明涉及，包括选择3-吲哚丙酸；并可选的，还包括选择p-甲酚中的一种或多种。
更优选的，在一个实施例中，本发明涉及，包括选择p-甲酚。
代谢物与疾病或治疗的关联
本发明涉及的多种代谢物与健康受试者存在差异，这种差异指示亚临床盆腔炎性疾病或处于亚临床盆腔炎性疾病的风险或指示受试对象应当接受针对亚临床盆腔炎性疾病的治疗。
在一个实施方式中，亚油酸、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、1-磷酸神经酰胺d18:1/16:0、p-甲酚、3-吲哚丙酸、吲哚硫酸中的一种或多种，与健康受试者比较下调。优选的，所述下调指示受试对象患有亚临床盆腔炎性疾病或处于亚临床盆腔炎性疾病的风险之中，或指示受试对象应当接受针对亚临床盆腔炎性疾病的治疗。
在另一个实施方式中，硬脂酸、溶血磷脂酸16:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0、神经酰胺d18:0/16:0、硬脂酰胺中的一种或多种，与健康受试者比较上调。优选的，所述上调指示受试对象患有亚临床盆腔炎性疾病或处于亚临床盆腔炎性疾病的风险之中，或指示受试对象应当接受针对亚临床盆腔炎性疾病的治疗。
在另一个实施方式中，亚油酸、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、1-磷酸神经酰胺d18:1/16:0、p-甲酚、3-吲哚丙酸、吲哚硫酸中的一种或多种，与健康受试者比较下调；和/或硬脂酸、溶血磷脂酸16:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0、神经酰胺d18:0/16:0、硬脂酰胺中的一种或多种，与健康受试者比较上调。优选的，所述下调和/或上调指示受试对象患有亚临床盆腔炎性疾病或处于亚临床盆腔炎性疾病的风险之中，或指示受试对象应当接受针对亚临床盆腔炎性疾病的治疗。
检测试剂或试剂盒
本发明涉及的检测试剂可以是单质、组合物或混合物；形态可以是固态、液态，优选是液态，更优选是溶液。检测试剂可包含单一检测一种代谢物的试剂，也可以包含检测多种代谢物的试剂，或者包含检测多种代谢物的试剂的组合。优选的，检测试剂可包含一种或多种标准品和/或对照样品。
本发明涉及的试剂盒可包含上述检测试剂(例如包含标准品和/或对照样品)，以及一种或多种辅助检测的试剂，以用于本发明的技术方案。举例来说，在一个实施方案中，该试剂盒包括一种或多种参考样品和试剂盒使用说明。本发明涉及的试剂盒(Kits)应理解为试剂套组，包括但不限于采用盒装的试剂组合。
本发明首次发现亚临床盆腔炎性疾病患者的血浆中包括溶血磷脂酸16:0/0:0、1-磷酸神经酰胺d18:1/16:0、硬脂酰胺、亚油酸、硬脂酸、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0、吲哚硫酸、3-吲哚丙酸、p-甲酚的多种代谢物与健康受试者存在差异，这些代谢物中的任意一个或者多个可以作为新的亚临床盆腔炎性疾病的生物标志物，应用于亚临床盆腔炎性疾病的检测或提供治疗。相较于现有技术中的检测方法本发明具有无创或微创的优点，并且具有具有灵敏度高、特异性好的特点(参见表3)。
本领域技术人员应该理解，在不脱离本文所公开的本发明范围的前提下，他们可以自由地组合本文所述的本发明的所有特征，不受文中举例的限制。
附图说明
图1亚临床盆腔炎患者和健康受试者代谢组的主成分分析(PCA)的二维(A)和三维(B)图。
图2含有代谢物FC值和P值的火山图。
图3 11种差异代谢物在各血浆样本中浓度的热图
图4磷脂酰乙醇胺P-18:0/0:0，溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0和神经酰胺d18:0/16:0通过逻辑回归，作为一个组合生物标志物的ROC曲线。
具体实施方式
患者信息
本研究通过了湖南省妇幼保健院伦理委员会的审核，达到了赫尔辛基宣言的要求。所有的受试者在开始试验前均签订了知情同意书。亚临床盆腔炎和健康受试者均为女性，20-30岁，体质指数为18.5-23.5，分别于2016年-2017年来自于湖南省妇幼保健院妇科和体检中心。所有受试者均来自于湖南、江西、广东、广西。
入组的亚临床盆腔炎患者，其C反应蛋白和血沉速率均在正常范围，没有明显的盆腔炎症状，但是表现出不孕。通过腹腔镜/宫腔镜确诊了他们的盆腔炎的病变。患有急性盆腔炎、子宫内膜异位症、子宫肌瘤、卵巢囊肿或者其他疾病的患者被排除入组。在最近一个月内接受过药物治疗的患者被排除入组。入组的健康受试者为体检未检查出疾病，在最近一个月内没有接受过药物治疗，同时没有性史。
本代谢组学研究共征集了30例亚临床盆腔炎患者和28例健康受试者，他们的地理分布、年龄、种族、体质指数和临床指标如表1所示，均没有统计学差异。
表1入组受试者的地理分布及其他特征
Figure BDA0001387069590000071
a在正常范围内
样品收集
亚临床盆腔炎患者的血液在进行手术前，过夜禁食后早晨收集。健康受试者的血浆于过夜禁食后早晨收集。收集到血液后，立即3000rpm离心，将血浆置于离心管中-80℃保存。
代谢物的提取
冻存的血浆在4℃下解冻，取100ul，加入300ul甲醇/乙腈(1:1,v/v)混合试剂。加入一定量和内标(包括1-13C硬脂酸和柚皮苷)，涡旋3min，于4℃过夜保存，于13,000rpm离心10分钟，取上清过0.22um微孔滤膜。取5ul进LC-Q-TOF-MS分析。取10个血浆样本混合，制成质控样本，按照上述方法进行处理，健康方法的重复性和稳定性。
LC-Q-TOF-MS分析
LC-Q-TOF-MS系统由安捷伦1290液相色谱和6540Q-TOF-MS组成。色谱柱为安捷伦ZORBAX Eclipse XDB-C18(3.0×150mm i.d.,3.5μm)，流动相为乙腈(A)和0.1％甲酸5mM乙酸铵混合溶液(B)，流速为0.4ml/min，梯度为0-2min5％A，2-6min变为100％A，6-10min100％A。柱温为35℃。
质谱扫描模式为正负离子两种模式，质谱参数为：capillary voltage 3500V；nozzle voltage(Expt)500V；fragmentor 120V；skimmer 65V；gas temperature 250℃；sheath gas temperature 350℃。扫描范围为m/z 50–1250。干燥和碰撞气体均为氮气，在MS/MS扫描时，碰撞能量为20V。标准离子为m/z 301.9981,966.0007,980.0163,1033.9881(负模式)和m/z 322.0486,622.0302,922.0118,1221.9929(正模式)。获得的数据首先通过安捷伦Muss Hunter Profinder B06.00软件处理。
数据处理
数据整理为平均值±SD。T检验通过SPSS 16.0软件计算，p<0.05被认为有统计学差异。内标的保留时间和峰面积用于校正代谢物的保留时间和峰面积。将包含有每个样本中所有被检测到的代谢物的保留时间和校正峰面积的数据列表导入MetaboAnalyst 3.0软件，以进行多变量分析。主成分分析(PCA)用于区分患者和健康人的代谢轮廓。根据组间代谢物的p值和变化大小(FC)值，发现其中的差异代谢物。代谢物的FC值为患者组和健康人组中较大响应值除以较小响应值，若为患者组除以健康人组则为正值，反之为负值。这些代谢物的精确分子量和质谱碎裂信息与Metlin数据库中的信息进行对比，对其进行定性。能够买到的代谢物标准品，通过与标准品的质谱行为进行比对，以进行定性。因为每组的样本量不是足够大，我们进行了一个2000个样本的置换检验，以检测之前的统计学差异不是偶然获得。计算各差异代谢物在95％的置信区间内的受试者工作特征曲线(ROC)的曲线下面积(AUC)。
结果
液质联用仪共检测到466种物质。主成分分析结果的二维图和三维图如图1所示，浅色的点表示亚临床盆腔炎患者，深色的点表示健康受试者，图1表明患者和健康人的代谢轮廓趋向于分布到两个独立的空间。
亚临床盆腔炎患者组与健康受试者组两组之间共发现到11种差异代谢物，它们的P<0.05，且具有较大的FC值，如图2所示。各代谢物的P值和FC值总结在表2中。这些代谢物的热图如图3所示，能够直观的看到它们在患者和受试者体内的差异。
表2导致亚临床盆腔炎患者和健康人代谢轮廓差异的11种差异代谢物
Figure BDA0001387069590000081
Figure BDA0001387069590000091
a患者的浓度低于健康人
b患者的浓度高于健康人
代谢物的置换检验结果显示，它们的统计学差异非偶然所得。ROC曲线用于评价差异代谢物诊断疾病的灵敏度和特异性，由MetaboAnalyst 3.0软件计算获得。各差异代谢物的ROC曲线下面积、灵敏度和特异性总结在表3中。
表3 11种差异代谢物及组合代谢物的ROC曲线
Figure BDA0001387069590000092
Figure BDA0001387069590000101
a代谢物包括磷脂酰乙醇胺P-18:0/0:0，溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0和神经酰胺d18:0/16:0。逻辑回归方程为logit(P)＝–1.676–0.029×磷脂酰乙醇胺P-18:0/0:0+0.025×溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0+0.022×神经酰胺d18:0/16:0,logit(P)是诊断为亚临床盆腔炎的可能性。
如表3所示，单独使用溶血磷脂酸16:0/0:0、1-磷酸神经酰胺d18:1/16:0、硬脂酰胺、亚油酸、硬脂酸、磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0或磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0的ROC曲线下面积可达0.8以上；单独使用吲哚硫酸或3-吲哚丙酸的ROC曲线下面积可达0.7以上；单独使用p-甲酚的ROC曲线下面积亦可达0.6以上。选择具有较大FC值的磷脂酰乙醇胺P-18:0/0:0，溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0和神经酰胺d18:0/1，6:0，通过建立逻辑回归模型将它们组合，灵敏度为80％，特异性为89.3％，ROC曲线下面积可达0.911。示例性的ROC曲线如图4所示，其他代谢物的ROC曲线在此不一一示出。
对本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的等同改变以及形变，而所有的这些等同改变以及形变都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。
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Claims (9)

1.代谢物在制备亚临床盆腔炎性疾病检测试剂中的用途，其特征在于，包括：
(a)制备测定取自受试对象的样品中的代谢物的水平的试剂，所述代谢物为磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0和神经酰胺d18:0/16:0；
(b)将样品中的所述代谢物水平与健康受试者比较；
其中，样品中的代谢物水平相对健康受试者的变化，指示受试对象患有亚临床盆腔炎性疾病或处于亚临床盆腔炎性疾病的风险之中。
2.代谢物在制备为亚临床盆腔炎性疾病提供治疗方法的检测试剂中的用途，其特征在于，包括：
(a)制备测定取自受试对象的样品中的代谢物的水平的试剂，所述代谢物为磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0和神经酰胺d18:0/16:0；
(b)将样品中的所述代谢物水平与健康受试者比较；
其中，样品中的代谢物水平相对健康受试者的变化，指示受试对象应当接受针对亚临床盆腔炎性疾病的治疗。
3.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述样品选自血液样品。
4.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述样品选自血清或血浆。
5.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于：测定取自受试对象的样品中的代谢物的水平的方法为液相色谱法。
6.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于：测定取自受试对象的样品中的代谢物的水平的方法为液相色谱与质谱联用法。
7.代谢物在制备亚临床盆腔炎性疾病检测试剂中的用途，其特征在于：所述代谢物为磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0和神经酰胺d18:0/16:0。
8.检测试剂在制备亚临床盆腔炎性疾病试剂盒中的用途，其特征在于：所述检测试剂包括检测代谢物的试剂，所述代谢物为磷酯酰乙醇胺P-18:0/0:0、溶血磷酯酰乙醇胺P-20:0/0:0和神经酰胺d18:0/16:0。
9.如权利要求7或8所述的用途，其特征在于：所述检测试剂包括所述代谢物的标准品和/或对照样品。
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