CN108079367A - 一种含有田七活性成分的海藻酸钙止血海绵及其制备方法和应用 - Google Patents

一种含有田七活性成分的海藻酸钙止血海绵及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明一种含有田七活性成分的海藻酸钙止血海绵及其制备方法和应用，属于生物医学工程材料领域。该制备方法包括以下操作步骤：（1）将海藻酸钠和田七粉末按照一定比例充分搅拌溶解于水中，放于冰箱预冷后再放入冷冻真空干燥机种进行冷冻干燥，得到含有田七活性成分海藻酸钠海绵。（2）将步骤（1）中所得含有田七活性成分的海藻酸钠海绵置于氯化钙/甘油/乙醇/水混合液中浸泡一定时间后，弃去混合液，再至烘箱中干燥，得到干燥的含有田七活性成分的海藻酸钠止血海绵。本制备方法温和、操作方便，得到的止血海绵中田七活性成分不容易脱落，能附在海藻酸钙止血海绵中长时间发挥消炎镇痛的作用，并易于除去，其止血性，高度保水性以及良好的生物相容性团为其在止血材料的应用提供支持。

Description

一种含有田七活性成分的海藻酸钙止血海绵及其制备方法和 应用
技术领域
本发明属于生物医学工程材料领域，特别涉及一种含有田七活性成分的海藻酸钙止血
海绵及其制备方法和应用。
背景技术
海藻酸钙海绵因其良好的生物相容性、止血、促进伤口愈合的功能、易去除性和透氧性等优势，在伤口止血材料中有着巨大的应用价值。
Winter等在1962年提出“湿法疗法”，伤口处于潮湿环境下伤口较干燥条件更容易愈合，首次提出海藻酸盐作为止血材料的可能(Nature 1962, 193: 293-294)。20世纪80年代初，英Courtaulds公司利用海藻酸钙纤维为原料制成一种医用纱布，并应用于伤口止血中，发现当纱布中的海藻酸钙能和人体的钠离子发生离子交换，不溶性海藻酸钙能缓慢转变成水溶性海藻酸钠，成为一种高度保水的水凝胶。中国也于1987年10月1日正式批准海藻酸可用于人体组织中。截至2012年，英国临床上应用的海藻酸辅料已有19种。(ChineseJournal of Current Advances in General Surgery 2014, 17(4): 292-296）。初晓夏等对比了海藻酸钙止血海绵与纱布，钠吸棉以及明胶止血海绵临床常用的3种止血辅料的体外细胞毒性，发现海藻酸钙止血海绵与纱布的细胞毒性都为细胞毒性分级1级，显示出良好的生物相容性(Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2015, 19(43):6998-7003)。然而，仅含海藻酸钙的止血海绵并不具备消炎或止痛的功能。
因此，如何得到能够快速止血并能起消炎作用的止血海绵便成为当前医疗领域亟待解决的重要课题。
发明内容
为解决上述现有技术中存在的不足之处，本发明的目的在于提供含有田七活性成分的海藻酸钙消炎止血海绵；此止血海绵能起到快速凝血功能，并且所含的田七活性成分能附着在海绵中，不易脱落，长时间发挥促进止血，以及消炎镇痛的作用。田七具有止血，散瘀，消肿，定痛功效，是我国著名的消炎止血镇痛良药。迄今为止，含有田七活性成分的海藻酸钙止血海绵及其应用尚未见报道。
本发明的田七活性成分的海藻酸钙消炎止血辅料的制备方法，包括以下操作步骤：
（1）含有田七活性成分的海藻酸钠海绵的制备：
称取海藻酸钠粉末及田七粉末按一定比例溶于水中，搅拌使其完全溶解，倒入模具中，然后放入冰箱预冷冻，再放入冷冻真空干燥机中干燥，得到含有田七活性成分的海藻酸钠海绵。
（2）含有田七活性成分的海藻酸钙止血海绵的制备
将步骤（1）中所得海藻酸钠海绵浸泡在氯化钙/甘油/乙醇/水的混合液中一定时间，弃去混合液，将所得凝胶置于60~80℃烘箱中进行干燥，得干燥的含有田七活性成分的海藻酸钙止血海绵。总厚度约0.5~1 cm。
（1）含田七活性成分的海藻酸钠海绵的制备
将海藻酸钠和田七粉末充分搅拌溶解于水中，倒入模具，预冷后，再进行冷冻干燥，得到含有田七活性成分的海藻酸钠海绵；
（2）含有田七活性成分的海藻酸钙海绵的制备
将步骤(1)中所得到的含有田七活性成分的海藻酸钠海绵置于含氯化钙，甘油，乙醇和水的混合液中浸泡交联，再烘干得到含有田七活性成分的海藻酸钠止血海绵。
步骤（1）中所述田七粉末由研磨机研磨制备；田七粉末和海藻酸钠的质量比为1~5：15，优选为1~10。
步骤（1）中所述溶解于水后，海藻酸钠为质量分数为0.5~4%，优选为2%。
步骤（1）中所述含田七的海藻酸钠海绵的冷冻干燥方式为-80~-40℃，优选为-50℃。
所述的方法，其中，冷冻干燥是在真空条件下干燥12～48小时；冷冻干燥的机真空为5-15 Pa，优选为10Pa。
步骤（1）所述的预冷为-20~-10℃条件下预冷。
步骤（2）所述的含氯化钙，甘油，乙醇和水的混合液配方为氯化钙：甘油：乙醇：水的质量比为1: 2~6：20~40：5~10，优选为1: 3：30：8。
步骤（2）中所述浸泡交联处理时间为12~60小时，优选为48小时。
步骤（2）中所述烘干方式为60~80℃条件下干燥3~6小时。
本发明与现有技术相比，具有如下优点和有益效果：
（1）此止血海绵能起到快速凝血功能，所含的田七活性成分不仅能进一步加速止血，还能起到消炎镇痛的作用。
（2）所含田七粉末不容易脱落，能附在止血海绵中中长时间发挥消炎镇痛的功能，并能随海绵一起除去。
（3）本发明材料成分简单、原料易得、生物相容性好，有望在生物医学工程材料领域得到广泛应用。
附图说明
图1为实施例1中含有田七的海藻酸钙止血海绵(左)与不含田七的海藻酸钙止血海绵（右）。
图2为实施例4含有田七的海藻酸钙止血海绵的浸提液细胞毒性图。
图3为实施例4用不同浓度的含有田七的海藻酸钙止血海绵的浸提液培养24小时的细胞的形态图其中，A为空白对照，B至F依次是体积分数为10%，25%，50%，75%，100%的止血海绵浸提液培养的细胞形态。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
以下实施例所使用的田七粉末由研磨机研磨制备。
以下实施例所使用的海藻酸钠溶液中海藻酸钠的质量分数为0.5~2%。
以下实施例所使用的田七粉末和海藻酸钠的质量比为0.1~1：10。
以下实施例所使用的含田七活性成分的海藻酸钠海绵的干燥方法按照以下操作步骤：将含田七活性成分的海藻酸钠凝胶放于-30~-10℃冰箱中预冷冻4~6小时，再放于置于冷冻真空干燥机中，-80~-50℃条件下干燥12～48小时；
以下实施例所使用的氯化钙/甘油/乙醇/水的混合液中氯化钙：甘油：乙醇：水的质量比为1: 2~6：20~40：5~10。
以下实施例所使用的含田七活性的海藻酸钙止血海绵的干燥方法按照以下操作步骤：将含田七活性成分的海藻酸钙止血海绵凝胶置于干燥箱中，50～80℃条件下干燥3～6小时；
实施例1 含有田七活性成分的海藻酸钙止血海绵的制备
（1）含有田七活性成分的海藻酸钠海绵的制备：
称取2g海藻酸钠及0.2g田七碾磨粉末溶于100mL水中，搅拌使其完全溶解，倒入模具中（海绵），放入-20℃冰箱中预冷冻，然后在冷冻真空干燥机中-50℃冷冻真空干燥，得到含有田七活性成分的海藻酸钠海绵。
（2）含有田七活性成分的海藻酸钙止血海绵的制备
将步骤（1）中所得海藻酸钠海绵中倒入氯化钙/甘油/乙醇/水（比例为1: 3：30：8）的混合液至刚好浸没海绵，浸泡8h，弃去混合液，将所得凝胶置于60~80℃烘箱中进行干燥，得干燥的含有田七活性成分的海藻酸钙止血海绵，总厚度约0.5cm（请参见图1）。
实施例2 含有田七活性成分的海藻酸钙止血海绵的制备
（1）含有田七活性成分的海藻酸钠海绵的制备：
称取1.5g海藻酸钠及0.1g田七碾磨粉末溶于100mL水中，搅拌使其完全溶解，倒入模具中（海绵），放入-20℃冰箱中预冷冻，然后在冷冻真空干燥机中-50℃冷冻真空干燥，得到含有田七活性成分的海藻酸钠海绵。
（2）含有田七活性成分的海藻酸钙止血海绵的制备
将步骤（1）中所得海藻酸钠海绵中倒入氯化钙/甘油/乙醇/水（比例为1:3：20：6），混合液至刚好浸没海绵，浸泡8h，弃去混合液，将所得凝胶置于60~80℃烘箱中进行干燥，得干燥的含有田七活性成分的海藻酸钙止血海绵，总厚度约0.5cm。
实施例3 含有田七活性成分的海藻酸钙止血海绵的制备
（1）含有田七活性成分的海藻酸钠海绵的制备：
称取2.4g海藻酸钠及0.6g田七碾磨粉末溶于100mL水中，搅拌使其完全溶解，倒入模具中（海绵），放入-20℃冰箱中预冷冻，然后在冷冻真空干燥机中-50℃冷冻真空干燥，得到含有田七活性成分的海藻酸钠海绵。
（2）含有田七活性成分的海藻酸钙止血海绵的制备
将步骤（1）中所得海藻酸钠海绵中倒入氯化钙/甘油/乙醇/水（比例为1:4：22：5），混合液至刚好浸没海绵，浸泡8h，弃去混合液，将所得凝胶置于60~80℃烘箱中进行干燥，得干燥的含有田七活性成分的海藻酸钙止血海绵，总厚度约0.5cm。
实施例4 细胞毒性测定
（1）海藻酸钙止血海绵浸提液的收集：
无菌操作下，称量实施例1制备得到的海藻酸钠止血海绵放入15mL 离心管中，加入DMEM高糖培养液作为浸提液，控制止血海绵的质量浓度为100 g/L，置于37℃摇床中浸提48h，用0.22 μm微孔过滤器过滤后，收集浸提液，用DMEM高糖培养基按体积分数75%，50%，25%，10%进行梯度稀释，置于4℃冰箱待用。
（2）CCK-8法测定海绵浸提液对3T3细胞的毒性作用
以10000/孔 细胞悬液接种于96孔培养板上，每组接种6孔，每孔100μL，将培养板置于37℃，饱和湿度，体积分数5% CO2培养箱中静置培养24h。待细胞贴壁生长后弃去原液，分别加入含体积分数10%胎牛血清的DMEM高糖培养基（空白对照组），和不同浓度梯度的含田七活性成分的海藻酸钙止血海绵浸提液，每孔100uL，继续静置培养24h。24h后取出96孔板，采用CCK-8法测定材料的细胞毒性，结果如图2所示，体积分数为100%，75%，50%，25%，10%的止血海绵浸提液均表现出良好的生物相容性，体积分数为100%的浸提液中培养的细胞仍然保持了90%以上存活率，如图3所示，细胞形态较空白对照组无明显变化。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种含有田七活性成分的海藻酸钙止血海绵的制备方法，其特征在于包括以下操作步骤：
（1）含田七活性成分的海藻酸钠海绵的制备
将海藻酸钠和田七粉末充分搅拌溶解于水中，倒入模具，预冷后，再进行冷冻干燥，得到含有田七活性成分的海藻酸钠海绵；
（2）含有田七活性成分的海藻酸钙海绵的制备
将步骤(1)中所得到的含有田七活性成分的海藻酸钠海绵置于含氯化钙，甘油，乙醇和水的混合液中浸泡交联，再烘干得到含有田七活性成分的海藻酸钠止血海绵。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中所述田七粉末和海藻酸钠的质量比为1~5：15，优选为1~10。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中所述溶解于水后，海藻酸钠为质量分数为0.5~4%，优选为2%。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中所述含田七的海藻酸钠海绵的冷冻干燥方式为-80~-40℃，优选为-50℃。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：冷冻干燥是在真空条件下干燥12～48小时。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：冷冻干燥的机真空为5-15 Pa，优选为10Pa。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述的预冷为-20~-10℃条件下预冷后。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）所述的含氯化钙，甘油，乙醇和水的混合液配方为氯化钙：甘油：乙醇：水的质量比为1: 2~6：20~40：5~10，优选为1: 3：30：8。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述浸泡交联处理时间为12~60小时，优选为48小时。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述烘干方式为60~80℃条件下干燥3~6小时。
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