CN108066364A - 合成的骆驼器官提取物、其制备方法及其应用 - Google Patents
合成的骆驼器官提取物、其制备方法及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种用于制备合成的骆驼器官提取物的方法、通过根据本发明所述的方法制成的提取物及其单独和作为药品、化妆品、食品和其他组合物的组分的应用。
Description
技术领域
本发明涉及生物制药领域、具体涉及一种用于制备合成的骆驼器官提取物的方法、通过根据本发明所述的方法制成的提取物及其单独和作为药品、化妆品、食品和其他组合物的组分的应用。
背景技术
动物器官提取物作为药品及化妆品的基础原材料具有十分重要的意义。特别是,动物胎盘提取物因其中所含的活性成分而广泛地被应用于药品及化妆品中(参阅1986年刊第112期第211-218页),在多数情况下,如果必要,其可通过小分子添加剂作为增补。
易养的骆驼日益成为重要的蓄养牲畜,这取决于a)由于气候变化,导致我们地球的沙漠地区扩大;b)由于我们地球人口的无节制增长,如果我们继续像以前那样(例如,精养猪和牛),那么食物终将成为问题。骆驼科包括:双峰驼(300-950kg,亚洲)、单峰驼(300-500kg,非洲)、羊驼、美洲驼、原驼、骆马。驼峰是脂肪储藏部位。
自1947年以来,发明人便将骆驼包括在了其关于猪、牛、马等动物器官提取物的研究中,也制备出了例如天然的骆驼胎盘提取物(I)以及骆驼胸腺提取物(II)并且精确分析了它们的组成,从而为开发相应的无蛋白的合成提取物I(合成I型)及II(合成II型)创造了先决条件。I型和II型的前身是由发明人研发的日本合成注射制剂CELLRYL(基础:小牛血SR71),该药剂的特点为具有细胞代谢激活特性:提高线粒体中ATP的生成,通过WARBURG法来测定的增长系数为1.8左右。
本发明的目的为提供一种用于制备合成的骆驼器官提取物的方法以及由此制成的合成的骆驼器官提取物,优选其显著改善已知的天然和合成动物器官提取物的生化活性特性。通过本发明来解决该任务。通过本发明方法制成的合成骆驼器官提取物的特点尤其在于其改善的细胞代谢活化的特性、并且可被用于日常生活中的许多方面,包括作为药品组合物的组分(例如用于刺激创面愈合),作为化妆品的添加剂(例如在润肤膏中),或者作为营养补充剂。
发明内容
为解决上述任务:
(1)提出一种用于制备合成的骆驼器官提取物的方法,该合成的骆驼器官提取物包括:
以下成分:
a.一种或多种L-氨基酸及其衍生物;
b.出自骆驼器官提取物的肽组分;
c.一种或多种核酸成分及其衍生物;
d.一种或多种维生素及矿物盐;
e.以及其他添加剂,
与以体积计30-40%的水在6.0至7.4的pH值下的混合物。
(2)根据1项所述的方法,其中,所述L-氨基酸及其衍生物选自包括以下化合物的组:甘氨酸、谷氨酸、α-丙氨酸、天冬氨酸、羟脯氨酸、脯氨酸、丝氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、鸟氨酸、天冬酰胺、缬氨酸、酪氨酸、DL-苏氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、苏氨酸、色氨酸、蛋氨酸、β-丙氨酸、异亮氨酸、半胱氨酸、肌酸酐以及马尿酸。
(3)根据1或2项所述的方法,其中,所述方法保持了骆驼器官的肽组分,
b1)以机械方式将无血且已清洗的骆驼器官组织粉碎成浆并与适当的溶剂或溶剂混合物进行混合;
b2)将该混合物冷藏数日,随后进行离心分离;
b3)在离心物中,通过改变渗透条件并同时加热至55-65℃,从现存的蛋白质中分离出肽;
b4)将pH降至3.2至3.5,以便通过充分长时间地排出空气或氧气而去除残留的蛋白质;
b5)最后进行无菌过滤。
(4)根据1至3项中任一项所述的方法,其中,所述适当的溶剂混合物是乙醚和乙醇,并且在步骤b3)之后,在7.2至7.5的pH下将空气混合物通入所述离心物以去除乙醚。
(5)根据1至4项任一项所述的方法,其中所述肽组分获自骆驼胎盘提取物、骆驼胸腺提取物或者骆驼肝脏提取物。
(6)根据1至5项中任一项所述的方法,其中所述核酸成分及其衍生物选自包括以下的组:腺嘌呤、腺苷、胞苷、鸟嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、鸟苷、尿苷、次黄嘌呤、黄嘌呤、环AMP、单磷酸腺苷、肌苷、尿酸以及乳清酸。
(7)根据1至6项中任一项所述的方法,其中,所述维生素及矿物盐选自包括以下的组:吡哆醇-HCI、生物素、氯化硫胺、泛酸钙、生育酚琥珀酸酯、肌醇、烟酰胺、硫酸镁、天冬氨酸镁、磷酸二氢钠一水合物、乙酸锌、葡糖酸钴以及葡糖酸锰。
(8)根据1至7项中任一项所述的方法,其中,所述其他的添加剂选自包括以下的组:葡萄糖、山梨醇、甘露醇、柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、苯甲醇、甘油、乙醇、N-甲基葡糖胺、葡糖胺、乳酸钠以及琥珀酸钠。
(9)根据1至8项中任一项所述的方法,其中,为制备所述合成的骆驼器官提取物,将以下成分:
a.0.1-50g/l、2-10g/l或4g/l的L-氨基酸或L-氨基酸衍生物;
b.每升合成的骆驼器官提取物由获自骆驼器官组织的0.1-10kg、1-5kg或2kg的肽组分组成;
c.0.01-50g/l、0.1-5g/l或1.0g/l的核酸成分及其衍生物;
d.0.1-1.0g/l、0.6-0.9g/l或0.7g/l的维生素及0.1-20g/l、1-5g/l或1.5g/l矿物盐;以及
e.0-200g/l、5-100g/l、80g/l、60g/l或20g/l的其他添加剂,
与以体积计30-40%的水在6.0至7.4的pH下混合。
(重量/体积及体积/体积数据是指合成的骆驼器官提取物的最终体积)。
(10)根据1至9项中任一项所述的方法,其中,为制备所述合成的骆驼器官提取物,将以下成分:
a.L-氨基酸或L-氨基酸衍生物,甘氨酸及谷氨酸各0.3-0.4g/l、α-丙氨酸、天冬氨酸、羟脯氨酸、脯氨酸、丝氨酸、赖氨酸及精氨酸各0.2-0.4g/l、组氨酸、鸟氨酸、天冬酰胺、缬氨酸、酪氨酸、DL-苏氨酸、苯丙氨酸及亮氨酸各0.03-0.06g/l、苏氨酸、色氨酸、蛋氨酸及β-丙氨酸各0.01-0.03g/l、异亮氨酸、半胱氨酸、肌酸酐及马尿酸各小于0.02g/l、尿素0.5-0.9g/l;
b.作为肽组分,每升合成的骆驼器官提取物由获自驼器官组织的2kg肽级分组成;
c.核酸成分及其衍生物,腺嘌呤、腺苷、胞苷、鸟嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、鸟苷、尿苷、次黄嘌呤、黄嘌呤、环AMP及单磷酸腺苷各0.01-0.03g/l、肌苷0.08g/l、尿酸及乳清酸各0.02-0.03g/l;
d.维生素,吡哆醇-HCI各0.5-0.7g/l、生物素0.1g/l、氯化硫胺、泛酸钙及生育酚琥珀酸酯各小于0.002g/l、肌醇及烟酰胺各小于0.03g/l,
以及作为矿物盐,硫酸镁、天冬氨酸镁及磷酸二氢钠一水合物各小于0.07g/l、乙酸锌0.1g/l、葡糖酸钴及葡糖酸锰各0.005g/l;
e.其他添加剂,葡萄糖、山梨醇及甘露醇各0.1-0.5g/l、柠檬酸1-5g/l、苹果酸1-2g/l、琥珀酸5-15g/l、乙醇10-50ml/l、苯甲醇1-4ml/l、甘油0.4-1.0g/l、N-甲基葡糖胺小于0.5g/l、葡糖胺1-2.5g/l、乳酸钠1-4g/l以及琥珀酸钠2-15g/l,
与以体积计30-40%的水在6.0至7.4的pH值下混合(该数值是指最终的体积)。
(11)根据1至10项中任一项所述的方法,其中还加入酵母细胞制剂。
(12)根据1至11项中任一项所述的方法,其中加入具有增加骆驼器官提取物的细胞代谢活性的其他成分。
(13)根据1至12项中任一项所述的方法,其中向所述合成的骆驼器官提取物中加入其他的提升代谢活性的成分。
(14)根据1至13项中任一项所述的方法,其中,向所述合成的骆驼器官提取物中加入其他天然或合成的哺乳动物器官提取物。
(15)根据1至14项中任一项所述的方法,其中,向所述合成的骆驼器官提取物中加入其他天然或合成的植物提取物。
(16)通过根据1至15项中任一项所述的方法来获得的合成的骆驼器官提取物及提取物混合物。
(17)一种药品组合物,其包括通过根据1至15项中任一项所述的方法获得的合成的骆驼器官提取物及提取物混合物,以局部、皮下、静脉或肌肉的施用方式以用于体外或体内创面愈合的目的、用于治疗动脉硬化或辐射损伤。
(18)根据1至15项中任一项所述的合成的骆驼器官提取物及提取物混合物用于制备以局部、皮下、静脉或肌肉的施用方式用于体外或体内创面愈合的目的、并用于治疗动脉硬化或辐射损伤的药物组合物的应用。
(19)根据1至15项中任一项所述的方法来获得的合成的骆驼器官提取物及提取物混合物作为化妆品添加剂的应用。
(20)根据1至15项中任一项所述的方法来获得的合成的骆驼器官提取物及提取物混合物作为食品增强剂的应用。
(21)根据1至15项中任一项所述的方法,其中,将所述合成的骆驼器官提取物与一种或多种骆驼结缔组织成分相混合。
(22)根据21项所述的方法,其中,所述骆驼结缔组织成分选自包括以下的组:各型胶原、弹力蛋白、纤连蛋白、肌酸以及透明质酸。
具体实施方式
根据本发明的第一方面,提供一种制备合成的骆驼器官提取物的方法。在此,将一种或多种L-氨基酸及其衍生物、获自骆驼器官提取物的肽组分、一种或多种核酸成分及其衍生物、一种或多种维生素及矿物盐以及可选地其他添加物与以体积计30-40%(体积百分比)的水(优选经双重蒸馏(双蒸馏)的)在6.0至7.4的pH下溶解或混合。将各成分在搅拌及无菌条件下混合。
根据本发明,对L-氨基酸及L-氨基酸衍生物的基团不作进一步限定。在本发明的一种实施方案中,适宜的L-氨基酸及L-氨基酸衍生物有天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酸、谷酰胺、α-丙氨酸、β-丙氨酸、精氨酸、甘氨酸、组氨酸、δ-羟赖氨酸、羟脯氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、正亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、α-胺己二酸、α-氨基丁酸(正)、γ-氨基-正-丁酸、β-氨基-异丁酸、δ-氨基乙酰丙酸、氨基甲酰天冬氨酸、瓜氨酸、肌酸、肌酸酐、胱硫醚、磺基丙氨酸、麦角硫因(巯基组氨酸的甜菜碱)、胍基乙酸(乙酸胍)、高丝氨酸、鸟氨酸、牛磺酸、二羧酸(半胱氨基硫代缩甲醛)、胍盐、鸟尿酸、苯乙酰甘氨酸、马尿酸、尿素、N-乙酰-L-丙氨酸、N-乙酰-L-精氨酸、N-乙酰甘氨酸、N-乙酰-L-羟脯氨酸、N-乙酰-L-异天冬酰胺酸、N-乙酰-L-异亮氨酸、N-乙酰-L-亮氨酸、N-乙酰-L-赖氨酸、N-乙酰-L-蛋氨酸、N-乙酸胞壁酸、、N-乙酰-L-鸟氨酸、N-乙酰-L-苯丙氨酸、N-乙酰-L-脯氨酸、O-乙酰-L-丝氨酸、N-乙酰-L-苏氨酸、N-乙酰-L-色氨酸、N-乙酰-L-缬氨酸、L-异亮氨酸、L-异苏氨酸、N-苯甲酰-L-精氨酸、N-苯甲酰-L-组氨酸、N-苯甲酰-L-赖氨酸、N-苯甲酰-L-蛋氨酸、N-苯甲酰-L-鸟氨酸、N-苯甲酰-L-苯丙氨酸、N-苯甲酰-L-色氨酸、N-苯甲酰-L-缬氨酸、S-苯甲酰-L-半胱氨酸、O-苯甲酰-L-丝氨酸、O-苯甲酰-L-酪氨酸、L-肌肽(β-丙氨酰-L-组氨酸)、N,O-二乙酰-L-苏氨酸以及O-磷酸-L-丝氨酸。
在本发明可选择的实施方案中,适宜的L-氨基酸及其L-氨基酸衍生物的组由以下组成:甘氨酸、谷氨酸、α-丙氨酸、天冬氨酸、羟脯氨酸、脯氨酸、丝氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、鸟氨酸、天冬酰胺酸、缬氨酸、酪氨酸、DL-苏氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、苏氨酸、色氨酸、蛋氨酸、β-丙氨酸、异亮氨酸、半胱氨酸、肌酸酐以及马尿酸。
根据本发明,出自骆驼器官的肽组分以如下方式获得。以机械方式将无血且已清洗的骆驼器官组织粉碎成浆并且与一种或多种适当的溶剂混合,冷藏几天(优选在-10℃以下),例如,5、10或15天,随后通过离心分离(例如,采用防爆式转鼓离心机)。适当的溶剂混合物为例如乙醚和乙醇,优选按13.3:1的比例。在改变离心物的渗透条件并同时加热至约60℃的情况下,从离心物中所包含的蛋白质中分离出肽。随后,在7.2至7.5的pH下,输送空气以去除溶剂(乙醚)。随后将pH降至约3.4,以便通过输送空气或氧气而去除残留的蛋白质。利用磺基水杨酸来确定无蛋白。在无菌过滤之后(孔径:0.22μm),获得所需的肽组分(流份)。
根据本发明的骆驼器官或骆驼器官组织可以理解成出自骆驼的任何器官或器官部分(器官组织)。在本发明可选择的实施方案中,骆驼器官或骆驼器官组织是胎盘、胸腺、肝脏、脾脏、心肌、结缔组织或唾腺。在本发明的优选实施方案中,骆驼器官或骆驼器官组织是骆驼胎盘、骆驼胸腺、骆驼肝脏或骆驼唾腺。在本发明的另一优选实施方案中,骆驼器官或骆驼器官组织是骆驼胎盘或骆驼胸腺。
对根据本发明的核酸成分及核酸衍生物的基团不作进一步限定。核酸成分及其衍生物的示例有2-氨基嘌呤、次黄嘌呤、1-甲基次黄嘌呤、腺嘌呤、2-甲基腺嘌呤、6-甲基氨基嘌呤、鸟嘌呤、1-甲基鸟嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、2-甲基氨基-6-氧代二氢嘌呤、8-羟基鸟嘌呤、异鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、黄嘌呤、1-甲基黄嘌呤、3-甲基黄嘌呤、7-甲基黄嘌呤、3,9-二甲基黄嘌呤、尿酸、1-甲基尿酸、9-甲基尿酸、1,9-二甲基尿酸、3,7-二甲基尿酸、1,3,7-三甲基尿酸、腺苷、3'-氨基-3'-脱氧-腺苷、9-β-D-呋喃核糖基-6-甲基氨基嘌呤、2'-脱氧肌苷、2'-腺苷酸、3'-腺苷酸、5'-腺苷酸、腺苷-5'-二磷酸、腺苷-5'-三磷酸、脱氧腺苷酸、2'-脱氧腺苷-5'-三磷酸酯、N-丁二酰腺苷酸、3'-鸟苷酸、鸟苷-5'-二磷酸、鸟苷-5'-三磷酸、肌苷-3'-磷酸、肌苷-5'-磷酸、肌苷-5'-二磷酸、黄苷酸、黄苷-5'-单磷酸、鸟苷二磷酸-甘露糖、鸟苷二磷酸-果糖、鸟苷二磷酸-海藻糖、二磷酸吡啶苷酸、三磷酸吡啶核苷酸、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶、胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶、尿嘧啶丙氨酸、5-氨基尿嘧啶、4,5-二氢尿嘧啶、4-氨基尿嘧啶、尿苷、4,5-二氢尿苷、2'-脱氧尿苷、5-甲基尿苷、假尿苷、乳清苷、胞苷、2'-脱氧胞苷、5-甲基胞苷、胸苷、a-胸苷、胞苷-2'-单磷酸酯、胞苷-3'-单磷酸酯、胞苷-5'-单磷酸酯、胞苷-5'-二磷酸酯、尿苷-2'-单磷酸酯、尿苷-3'-单磷酸酯、乳清酸、尿苷-5'-单磷酸酯、尿苷-5'-二磷酸酯、5-甲基胞苷-3'-单磷酸酯、乳清苷-5'-单磷酸酯、胸苷-5'单磷酸酯、胸苷-5'-三磷酸酯、2'-脱氧胞苷-5'单磷酸酯、2'-脱氧胞苷-5-二磷酸酯、尿苷二磷酸-葡萄糖、尿苷二磷酸半乳糖、尿苷二磷酸-阿拉伯糖、尿苷二磷酸-木糖、尿苷二磷酸-葡糖醛酸、尿苷二磷酸-N-乙酰半乳糖胺、胞苷二磷酸-a-丙三醇、胞苷二磷酸-核糖醇、环AMP、环GMP以及其他。
在本发明的具体实施方案中,核酸成分及核酸衍生物的组由以下化合物组成:腺嘌呤、腺苷、胞苷、鸟嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、鸟苷、尿苷、次黄嘌呤、黄嘌呤、环AMP、单磷酸腺苷、肌苷、尿酸以及乳清酸。
有关本发明的维生素及矿物盐的组包括所有公知的维生素及矿物盐。维生素及矿物盐的非详尽清单包括吡哆醇-HCI、生物素、氯化硫胺、D-泛醇、泛酸钙、生育酚琥珀酸酯、肌醇、烟酰胺、硫酸镁、天冬氨酸镁、磷酸二氢钠一水合物、乙酸锌、葡糖酸钴及葡糖酸锰。
有关本发明的其他添加剂的组包括改善合成的骆驼器官提取物的效果和作用的物质,例如,提高保存限期、各组分的可溶性、缓冲作用或功效。其他添加剂的组还包括:葡萄糖、山梨醇、甘露醇、柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、苯甲醇、甘油、乙醇、N-甲基葡糖胺、葡糖胺、乳酸钠以及琥珀酸钠。
在根据本发明可选择的实施方案中,为制备合成的骆驼器官提取物,将以下成分:
a.0.1-50g/l、2-10g/l或4g/l的L-氨基酸或L-氨基酸衍生物;
b.每升合成的骆驼器官提取物由0.1-10kg、1-5kg或2kg的骆驼器官组织的肽组分组成;
c.0.01-50g/l、0.1-5g/l或1g/l的核酸成分及其衍生物;
d.0.1-1.0g/l、0.6-0.9g/l或0.7g/l的维生素及0.1-20g/l、1-5g/l或1.5g/l矿物盐;以及
e.0-200g/l、5-100g/l、80g/l、60g/l或20g/l的其他添加剂,
与以体积计30-40%的水在6.0至7.4的pH下混合(重量/体积及体积/体积数据是指合成的骆驼器官提取物的最终体积)。
在根据本发明的另一实施方案中,为制备合成的骆驼器官提取物,将以下成分:
a.作为L-氨基酸或L-氨基酸衍生物,甘氨酸及谷氨酸各0.3-0.4g/l、α-丙氨酸、天冬氨酸、羟脯氨酸、脯氨酸、丝氨酸、赖氨酸及精氨酸各0.2-0.4g/l、组氨酸、鸟氨酸、天冬酰胺、缬氨酸、酪氨酸、DL-苏氨酸、苯丙氨酸及亮氨酸各0.03-0.06g/l、苏氨酸、色氨酸、蛋氨酸及β-丙氨酸各0.01-0.03g/l、异亮氨酸、半胱氨酸、肌酸酐及马尿酸各小于0.02g/l、尿素0.5-0.9g/l;
b.作为肽组分,每升合成的骆驼器官提取物由2kg的骆驼器官组织的肽组分组成;
c.作为核酸成分及其衍生物,腺嘌呤、腺苷、胞苷、鸟嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、鸟苷、尿苷、次黄嘌呤、黄嘌呤、环AMP及单磷酸腺苷各0.01-0.03g/l、肌苷0.08g/l、尿酸及乳清酸各0.02-0.03g/l;
d.作为维生素,吡哆醇-HCI 0.5-0.7g/l、生物素0.1g/l、氯化硫胺、泛酸钙及生育酚琥珀酸酯各小于0.002g/l、肌醇及烟酰胺各小于0.03g/l,
以及作为矿物盐,硫酸镁、天冬氨酸镁及磷酸二氢钠一水合物各小于0.07g/l、乙酸锌0.1g/l、葡糖酸钴及葡糖酸锰各0.005g/l;
e.以及作为其他添加剂,葡萄糖、山梨醇及甘露醇各0.1-0.5g/l、柠檬酸1-5g/l、苹果酸1-2g/l、琥珀酸5-15g/l、乙醇10-50ml/l、苯甲醇1-4ml/l、甘油0.4-1.0g/l、N-甲基葡糖胺小于0.5g/l、葡糖胺1.0-2.5g/l、乳酸钠1-4g/l以及琥珀酸钠2-15g/l,
与以体积计30-40%的水在6.0至7.4的pH下混合(数值是指最终体积)。
在本发明可选择的实施方案中,在用于制备合成的骆驼器官提取物的方法中加入特殊酵母细胞制剂,其使得代谢活性进一步提升。这种酵母细胞制剂的示例有H38型(《75Years Chemistry:Re-Reading》第II卷第448-449页,ISBN978-1-882292-34-9)。在根据本发明的方法的另一种可选择地实施方案中,加入5-500ml/l、10-150ml/l或50ml/l(基于合成的骆驼器官提取物的最终体积)的H38型酵母细胞制剂)。在又一种应用方案中,合成的牛胸腺提取物也能够加强骆驼器官提取物的细胞代谢激活特性。
在本发明的另一种可选择地实施方案中,除肽提取物,氨基酸与核酸及其衍生物、维生素、矿物盐以及其他添加剂之外,可以加入具有加强骆驼器官提取物的细胞代谢活性激活作用的其他成分。加强骆驼器官提取物的细胞代谢活性激活作用的成分还有糖类及糖类衍生物,例如葡萄糖、转化糖、D-甘露糖、D-核酮糖、L-赤藓酮糖-1-磷酸酯、D-果糖-6-磷酸酯、D,L-阿拉伯糖及N-甲基己糖胺、具有3至6个碳原子的脂肪族羧酸以及缓冲物质。
在本发明的另一种实施方案中,向合成的骆驼器官提取物中混入其他的提升代谢活性激活的成分。根据本发明的合成的骆驼器官提取物是若干天然材料提取物的有效替代品或补充品,特别是针对天然或合成的哺乳动物器官及植物的提取物,其形式有胎盘、胸腺、血液、血清、脾脏、肝脏、心肌、弹力蛋白、胶原、结缔组织、羊水、脐带、水母、鱼卵提取物及其组合物。根据本发明的合成的骆驼器官提取物能够与这类天然材料提取物组合,例如,天然或合成的哺乳动物器官及植物的提取物。
本发明的另一方面涉及利用根据本发明的方法制成的合成的骆驼器官提取物。能够借助现有技术中常规的分析方法来验证所述合成的骆驼器官提取物的组成及性质。如此测试的分析参数能够包括:pH值;干燥残渣(105℃下5小时);氮含量(根据凯氏定氮法);氨基酸测定:通过薄层色谱法(TLC)及HPLC借助茚三酮定性;肽验证:借助缩二脲试剂;无蛋白性(借助磺基水杨酸);核酸成分:TLC;以及根据DAB10的无菌性检验。
表1:无蛋白的合成骆驼胎盘提取物(合成I型)的品质标准
根据另一方面,本发明涉及前述合成的骆驼器官提取物的应用,以单独的方式或者以与出自骆驼及其他生物的另外胶原或其他器官提取物的混合或组合的形式用于制备医药组合物,尤其是用于加强免疫系统,用于激活细胞代谢或用于治疗肠胃疾病,特别是溃疡,并且以局部、皮下、静脉或肌肉的施用方式而用于体外或体内创面愈合的目的,用于治疗动脉硬化或辐射损伤。另一种根据本发明对合成的骆驼器官提取物的应用在于制备化妆品配剂,例如乳膏配剂。
此外,合成的骆驼器官提取物还能够以单独的方式或者以混合或组合的形式未稀释或经稀释使用,采用含有该提取物的胶囊的形式,以便直接口服,例如作为营养补充剂或食品增强剂。
通过应用合成的骆驼器官提取物为骆驼补充饲料
我们发现:a)相应使用于不愿意吃饱的幼小骆驼(食欲差的骆驼),这样治疗一段时间后显现疗效。但必须很快停止喂食这种提取物,因为那些食欲差的骆驼会变得过食。b)作为营养补充剂,骆驼器官提取物适于康复期的骆驼。c)应用骆驼器官提取物作为注射制剂:通过汉堡人Wolfgang Seidel以及圣马丽亚UFSM大学的前校长Jose Mariano da RochaFilho教授介绍,采用他们好友Scheich的骆驼进行相应的试验:Scheich将根据本发明人的配方所制得的骆驼胸腺提取物作为注射液,他的骆驼在几年当中赢得比赛佳绩。
正如常用的面包酵母的发酵会因添加本作者研发的代谢活化酵母制剂H38而有所提高,通过施用代谢激活的骆驼器官提取物而提升骆驼机体的活力。这一点有益于竞技骆驼或者处于康复期的骆驼。
以单独方式或以与其他器官提取物的混合或组合的形式的本发明所制得的合成的骆驼器官提取物的应用并不限于某种生物。在本发明的一种实施方案中,发明的合成的骆驼器官提取物可以应用于哺乳动物,例如,人、骆驼、马、牛、羊、鸡或猪。在另一种实施方案中,将根据本发明的合成的骆驼器官提取物应用于微生物或植物。
制备乳膏剂(水/油乳剂):
自1965年以来,本发明人已实现成功应用多种无蛋白(且无酵素)的化妆品添加剂,例如,OMNITHYMUS、EVANGYL(POLA)中的k-PFE+CELLRYL。
本发明人已在《75Years Chemistry:Re-Reading》第II卷第320页(ISBN978-1-882292-34-9)中给出在化妆品添加剂中使用无蛋白器官提取物的原理,同样在本书第524页对以常规、合成及细胞外方式获得的提取物进行对比。
根据下列组成,配制护手霜,其中加入合成的提取物I。乳膏剂的最终组成如下:
表2
(双蒸馏:双重蒸馏)
为制备该乳膏配剂,将脂相组分及凡士林加热至约75℃。同时,将PVA凝胶分散到约80℃的热水中并且其逐步溶解。向后者的分散体,加入乙氧基化脂肪胺并带有约25个单位的环氧乙烷(EO)以及可选的乳化剂,此后将经预加热的脂相乳化于其中。在混合温度下搅拌5分钟之后,冷却至60℃,然后加入10%的氢氧化钠溶液并且继续冷却至40℃以下。缓慢搅拌之后,再添加试验溶液的制剂(合成的提取物I)。配料匀质化良好。护手霜稳定量产并且与不含受试物添加剂的配料相比展现出更好的护肤功效。
骆驼结缔组织成分(骆驼胶原)
制备:
将骆驼皮肤去除血液、肌肉和脂肪之后切碎,随后按照提取目的加入中性盐或酸,在冷冻干燥的状态下或者作为溶液(用于保藏的山梨酸添加剂)保存(参阅德国药剂报,1977年刊第117期第1557-1562页)。现有技术中记载的用于获得其他哺乳动物胶原的对比方法。
骆驼胶原:N 18%±0.3
羟脯氨酸含量:14-15%
根据本发明的一种可选择的实施方案,本发明的方法制得的合成的骆驼器官提取物与一种或多种骆驼结缔组织成分相混合。这种结缔组织成分的示例有各型胶原、弹性蛋白、纤连蛋白、肌酸以及透明质酸。
实施例
实施例1
制备合成的骆驼胎盘提取物(合成I型)作为1升配料
按1升最终体积计算的以下成分在搅拌下并在无菌条件下溶入一定体积的经双重蒸馏的水(H2O)中,该体积相当于最终体积的3/10至4/10。pH值保持在6.0至7.4之间。
L-氨基酸及衍生物:
甘氨酸及谷氨酸各0.3-0.4g、α-丙氨酸、天冬氨酸、羟脯氨酸、脯氨酸、丝氨酸、赖氨酸及精氨酸各0.2-0.4g、组氨酸、鸟氨酸、天冬酰胺、缬氨酸、酪氨酸、DL-苏氨酸、苯丙氨酸及亮氨酸各0.03-0.06g、苏氨酸、色氨酸、蛋氨酸及β-丙氨酸各0.01-0.03g、异亮氨酸、半胱氨酸、肌酸酐及马尿酸各小于0.02g、尿素0.5-0.9g。
出自骆驼胎盘腺体的肽组分:
10kg解冻的已清洗无血且在齿式胶体磨中粉碎(直至0.3mm的浆)的腺体在4L乙醚+300ml乙醇中于-10℃以下的冷藏室中存放10天,然后在防爆式转鼓离心机中进行分离。在改变离心分离的渗透条件(+150g的NaCl)并同时加热至60℃的情况下,从离心物内所含的蛋白质中分离出肽;然后通入空气,即在pH7.5下去除乙醚,并且利用琥珀酸将pH变成3.4之后去除残留的蛋白质(充分长时间的流通空气或氧气:采用磺基水杨酸加以检验)。在微孔过滤(孔径0.22微米)之后,获得该例中所需的肽组分(流份),其中从骆驼胎盘腺体中所获的数量足够用于5L的合成提取物I,即在示例中仅用到1/5。
核酸成分及衍生物:
腺嘌呤、腺苷、胞苷、鸟嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、鸟苷、尿苷、次黄嘌呤、黄嘌呤、环AMP及单磷酸腺苷各0.01-0.03g、肌苷0.08g、尿酸、乳清酸0.02-0.03g。
维生素:
吡哆醇-HCI 0.5-0.7g、生物素0.1g、氯化硫胺、泛酸钙及生育酚琥珀酸酯各小于0.002g、肌醇及烟酰胺各小于0.03g。
矿物盐:
硫酸镁、天冬氨酸镁及NaH2PO4-H2O各小于0.07g、醋酸锌0.1g、葡糖酸钴及葡糖酸锰各0.005g。
其他添加剂:
葡萄糖、山梨醇及甘露醇各0.1-0.5g、柠檬酸1-5g、苹果酸1-2g、琥珀酸5-15g、乙醇10-50ml、苯甲醇1-4ml、甘油0.4-1.0g/l、N-甲基葡糖胺小于0.5g、乳酸钠1-4g、琥珀酸钠2-15g、氯化钠1-10g,如果必要的可不添加防腐剂。
在制备溶液的过程中,应注意,某些成分应预先溶解于NaOH或HCl中并且得到中和,例如,将谷氨酸、天冬氨酸、缬氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸溶于2N NaOH中,将黄嘌呤溶于3N NaOH中,将鸟嘌呤溶于3NHCl中。
采用经双重蒸馏的水填加至1L的最终体积之后,再次调节pH并进行无菌过滤。
实施例2
合成提取物I+H38(后为Y20):
制备方法按照实施例1所示工艺进行。在填加至1L之前,加入50ml特定的酵母细胞制剂H38(Y20),并且采用经双重蒸馏的水填加至1L。
测出的呼吸增强系数为2.6。
实施例3
PADBERG法:
在Padberg试验中,评估皮肤对亚甲蓝的吸收,其中吸收量与皮肤的干燥性有关。这是由于观察到吸收涂在皮肤上的亚甲蓝与皮肤的干燥性成正比,从而粗糙度越高,则亚甲蓝吸收得越多。
通常请5至15个年龄在35至65岁的受试者进行Padberg试验。指示受试者在试验开始前三天以及试验期间不在试验要研究的皮肤部位上使用任何化妆品。每一受试者分别在两个前臂内侧标记6个试验区,这些试验区中的一个试验区保持不经处置。首先,对每一试验区进行Padberg试验,以便确定空白值。此后,受试人在14天中将待试物质每日早晚两次涂在试验部位上。最后一次涂抹之后的四小时进行再一次Padberg试验。
例如按照《Journ.Soc.Cosmetic Chemicals 20》1969年刊第719-728页中所述那样进行Padberg试验。
PADBERG试验的结果:表3
在下列表3中概括出针对添加合成的提取物I的乳膏组合物或未添加的乳膏组合物(安慰剂乳膏)的光度计值,其表示为基于初始值的被治疗皮肤的百分比。在表3中,还给出算得的平均值。
结果表明,采用添加合成的提取物I的乳膏制剂可实现皮肤光洁。相应地,还示出了使用合成的胸腺提取物作为添加剂的情况。
表3:根据PADBERG法采用添加及未添加合成的骆驼胎盘提取物(合成提取物I)的乳膏配剂(水/油乳剂)的粗糙度试验(应用周期14天)
对比实施例4
WARBURG法试验
在WARBURG装置中,借助压力计测定产物的代谢活性,而且在采用小鼠或豚鼠的肝匀浆的情况下,通过测量O2摄入来确定呼吸增强。根据填充方案,容器的侧球装有试验溶液或水。将具有与没有产品添加剂的反应过程相比较。将容器与压力计相连接。将压力计挂在恒温器中并且加热至额定温度。然后,通过倾倒将容器两侧容器中的试验溶液或水注入主容器内。这时开始真正的反应时间。间隔10分钟进行单次读数,将结果输入测量方案中。Warburg试验历时90分钟。结果提供关于增强代谢活性的因素。
检测方案
示例:具有系数1.83的黑麦胚芽提取物对照标准:1.0(在37℃下预培养1小时)
表4
表5
实施例5
以类似于对比实施例4的方式,针对合成提取物I、合成提取物II、合成骆驼肝脏提取物以及骆驼NGF(神经生长促进因子)测定呼吸增强系数。
表6
举例而言,在疯牛病(BSE)危机期间,骆驼器官提取物能够替代不理想的牛胎盘提取物:在骆驼生长的国家确保不会出现疯牛病。上述取值对于骆驼NGF而言十分重要:在日本成功的临床试验中,在治疗面部神经麻痹中采用骆驼NGF取得良好成果。采用其他动物的NGF制剂的早期结果已在文献《Re-Reading》第II卷第295页(ISBN 978-1-882292-34-9)中有所报道。根据本文中针对其他哺乳动物所述的方法获得骆驼NGF:VE分析数据)针对骆驼NGF的规定:培育:每公斤骆驼唾腺1.8g,在BU中的生物活性为0.010-0.019μg/g。根据Montalcini所著《Cancer Research 14》第49页(1954年)针对获取及表征小鼠NGF的数据进行骆驼NGF的生物鉴定及评定。随着由骆驼唾腺中获取骆驼NGF的同时,驳倒参考书目中的观点,即在大型动物的唾腺中无法产生NGF因子(与T.Yamamoto博士合作)。
通过例如与H38(后期Y20)组合,特定的酵母细胞制剂(《75YearsChemistry–Re-Reading》第II卷第448-449页及引文[11,14],ISBN978-1-828292)使得这些提取物的活性能够进一步提升。
实施例6
下面是针对合成提取物I活性试验并且与猪胎盘提取物进行比较的结果以及关于所用工作方法的注释:
表7
1《Re-Reading》第IV部分第448-456页(IBSN 978-1-882292-36-3)中的方法说明
2《Cosmetics and Toiletries》1977年刊第92期第25-27页
骆驼胎盘合成物I在对照标准前5至8天开始变态,而猪胎盘提取物I在对照标准前3至4天开始变态(参见表7)。
Claims (10)
1.一种用于制备合成的骆驼器官提取物的方法,其包括:
以下成分:
a.一种或多种L-氨基酸和/或其衍生物;
b.出自骆驼器官提取物的肽组分;
c.一种或多种核酸成分和/或其衍生物;
d.一种或多种维生素及矿物盐;
e.以及可选的其他添加剂,
与以体积计30-40%的水在6.0至7.4的pH下的混合。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,
i)所述L-氨基酸及其衍生物选自包括以下的组:甘氨酸、谷氨酸、α-丙氨酸、天冬氨酸、羟脯氨酸、脯氨酸、丝氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、鸟氨酸、天冬酰胺酸、缬氨酸、酪氨酸、DL-苏氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、苏氨酸、色氨酸、蛋氨酸、β-丙氨酸、异亮氨酸、半胱氨酸、肌酸酐以及马尿酸;
ii)所述核酸成分及其衍生物选自包括以下的组:腺嘌呤、腺苷、胞苷、鸟嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、鸟苷、尿苷、次黄嘌呤、黄嘌呤、环AMP、单磷酸腺苷、肌苷、尿酸以及乳清酸;
iii)所述维生素及矿物盐选自包括以下的组:吡哆醇-HCI、生物素、氯化硫胺、泛酸钙、生育酚琥珀酸酯、肌醇、烟酰胺、硫酸镁、天冬氨酸镁、磷酸二氢钠一水合物、乙酸锌、葡糖酸钴以及葡糖酸锰;以及
iv)所述其他添加剂选自包括以下的组:葡萄糖、山梨醇、甘露醇、柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、苯甲醇、甘油、乙醇、N-甲基葡糖胺、乳酸钠以及琥珀酸钠。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其中,为保存所述出自骆驼器官的肽组分,
b1)以机械方式将无血且已清洗的骆驼器官组织粉碎成浆并且与一种或多种适当的溶剂或溶剂混合物进行混合;
b2)将该混合物冷藏数日,随后进行离心分离;
b3)在离心物中,通过改变渗透条件并同时加热至55-65℃,分离出包含在所述离心物中的肽;
b4)将pH降至3.2至3.5,以便去除残留的蛋白质;
b5)最后进行无菌过滤。
4.根据权利要求1至4中任一项所述的方法,其中,还加入酵母细胞制剂。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法,其中,加入具有增强骆驼器官提取物的细胞代谢激活活性和/或者本身具有代谢活性激活作用的其他成分。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法,其中,向所述合成的骆驼器官提取物中加入其他的天然或合成的哺乳动物器官提取物。
7.通过根据权利要求1至6中任一项所述的方法来获得的合成的骆驼器官提取物及提取物混合物。
8.根据权利要求1至6中任一项所述的合成的骆驼器官提取物及提取物混合物用于制备通过局部、皮下、静脉或肌肉的施用方式、用于体外或体内创面愈合的目的、用于治疗动脉硬化或辐射损伤的药物组合物的应用。
9.根据权利要求1至6中至少一项所述的方法来获得的合成的骆驼器官提取物及提取物混合物作为化妆品添加剂或作为食品增强剂的应用。
10.根据权利要求1至6中任一项所述的方法,其中,将所述合成的骆驼器官提取物与一种或多种骆驼结缔组织成分相混合,所述骆驼结缔组织成分选自包括以下的组:各型胶原、弹力蛋白、纤连蛋白、肌酸以及透明质酸。
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WO1993010802A1 (de) * | 1991-12-02 | 1993-06-10 | Randolph Riemschneider | Wässrige synthetische organextrakte |
CN1870972A (zh) * | 2003-09-08 | 2006-11-29 | 列夫-巴尔有限公司 | 包含骆驼奶或其成分的化妆品组合物 |
-
2016
- 2016-11-17 CN CN201611025061.9A patent/CN108066364A/zh active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1993010802A1 (de) * | 1991-12-02 | 1993-06-10 | Randolph Riemschneider | Wässrige synthetische organextrakte |
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Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
RANDOLPH RIEMSCHNEIDER: "Camel in Chemistry II Camel Placenta Extracts", 《 PELLAM JOURNAL OF SCIENCE》 * |
阚建全主编: "《食品化学》", 中国农业大学出版社 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113433243A (zh) * | 2021-06-29 | 2021-09-24 | 广西壮族自治区食品药品检验所 | 分散固相微萃取-氨基酸自动分析仪法同时测定化妆品中20种游离氨基酸的方法 |
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