CN108043365A - 一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料及制备与应用 - Google Patents

一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料及制备与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN108043365A
CN108043365A CN201711338792.3A CN201711338792A CN108043365A CN 108043365 A CN108043365 A CN 108043365A CN 201711338792 A CN201711338792 A CN 201711338792A CN 108043365 A CN108043365 A CN 108043365A
Authority
CN
China
Prior art keywords
small peptide
integral material
bionical
preparation
affine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201711338792.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108043365B (zh
Inventor
江正瑾
王启钦
王祥宇
韩海
金含颖
刘潇
罗荣英
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jinan University
University of Jinan
Original Assignee
Jinan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jinan University filed Critical Jinan University
Priority to CN201711338792.3A priority Critical patent/CN108043365B/zh
Publication of CN108043365A publication Critical patent/CN108043365A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108043365B publication Critical patent/CN108043365B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明属于亲和富集整体材料领域，公开了一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料及制备与应用。将单体GMA与交联剂、致孔剂和引发剂混合反应得到基质整体材料；然后将金属螯合剂溶液灌注到基质材料中，加热反应，然后灌注金属无机盐溶液反应，将金属离子螯合固定到基质材料上，再灌注含组氨酸标签的小肽配体溶液反应，得到基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料。本发明的整体材料以小肽作为亲和配基，相比较于常用的蛋白质A/G、抗原或靶标蛋白等生物大分子配基，其表现出价格低廉、化学性质稳定、不含生物杂质、无免疫原性、洗脱条件非常温和不会对抗体蛋白的构象产生破坏、使用寿命长等优点。

Description

一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料及制备与应用
技术领域
本发明属于亲和富集整体材料领域，具体涉及一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料及制备与应用。
背景技术
单抗药物由于具有靶向性强、特异性高、毒副作用低等众多优点而成为目前制药界的热点领域。2014年全球销售前十的药物中抗体类药物占七席，并包揽了前三甲[NatureReviews Drug Discovery,2015,14(2):83-83；Nature Reviews Drug discovery,2014,13(8):577-587.]。据全球顶尖市场调研公司PMR的最新预测，至2020年全球抗体类药物市场规模将超过1400亿美元。值得注意的是，在单抗药物的生产过程中，下游单抗纯化的花费约占总体成本50-80％[Journal of Chromatography A,2016,1466:105-112.]，严重制约了单抗药物的推广和普及。一直以来，基于蛋白质A/G的亲和富集材料凭借其高亲和能力和强特异性在单抗纯化中占主导地位[Journal of Chromatography B,2014,962:89-93.]。但是，蛋白质A/G存在易降解、易脱落、对pH值敏感、甚至因结合作用过强而破坏抗体蛋白空间结构、使用寿命短、用于体内样品分析时难以消除内源性IgG的干扰等缺点。而且常用的商业化蛋白配基固定载体，如琼脂糖等，通常存在一定的非特异性吸附，最终影响到单抗的富集纯化效果，为后续的质量监控和临床应用分析等带来诸多困难。
为了弥补生物大分子配基存在的不足，近年来涌现了一系列新型抗体亲和配基，常见的有小分子配基(螯合金属离子类[Methods,2012,56(2):116-129.]、氨基酸类[Journal of Chromatography A,2011,1218(13):1756-1766.]和硼酸类配基[ChemicalScience,2012,3(5):1467-1471.]等)和合成仿生配基(染料类、三嗪类和Ugi类配基等)[Methods,2012,56(2):116-129.]。小分子配基稳定性好、价格便宜，但其特异选择性和亲和性不如生物大分子配基[Methods,2012,56(2):116-129.]。合成仿生配基通常以蛋白质A/L/G为模板设计合成，稳定性、选择性和亲和性较好，适用于细胞培养上清液中mAb的富集纯化，但对于含有大量高同源性IgG等杂蛋白的体内样本，其特异选择性仍显不足[Bioanalysis,2016,8(8):847-856.]，并且染料等配基存在毒性和生物兼容性差的缺点[Methods,2012,56(2):116-129.]。
鉴于此，开发成本低、稳定性好、特异性高、非特异性吸附低、生物兼容性好的新型仿生小分子亲和富集材料，对单抗药物的生产研发、质量控制与临床应用评价均具有十分重要的理论和应用价值。
发明内容
针对以上现有技术存在的缺点和不足之处，本发明的首要目的在于提供一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料的制备方法。
本发明的另一目的在于提供一种通过上述方法制备得到的基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料。
本发明的再一目的在于提供上述基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料在细胞培养液或血清样品中目标单抗药物富集中的应用。
本发明目的通过以下技术方案实现：
一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将单体甲基丙烯酸缩水甘油酯(Glycidyl methacrylate,GMA)与交联剂、致孔剂和引发剂混合，超声溶解、脱气后灌入容器内，加热聚合反应，冲洗除去未反应的残留物，得到基质整体材料；
(2)合成含组氨酸标签的小肽配体：将小肽与间隔臂试剂反应后再与组氨酸标签反应，得到含组氨酸标签的小肽配体；
(3)将金属螯合剂溶液灌注到步骤(1)所得基质整体材料中，加热反应；然后灌注金属无机盐溶液反应，将金属离子螯合固定到基质整体材料上，再灌注步骤(2)所得含组氨酸标签的小肽配体溶液反应，得到基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料。
优选地，步骤(1)中所述交联剂是指乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)、聚乙二醇二丙烯酸酯(PEGDA)、3-(N-甲基-N,N-二甲基丙烯酰氧乙基氨)丙烷磺酸盐(CL1)、2-(N-甲基-N,N-二甲基丙烯酰氧乙基氨)乙烷羧酸盐(CBDMA)和2-(甲基丙烯酰氧基)乙基-[N-(2-甲基丙烯酰氧基)乙基]磷酰胆碱(MMPC)中的任意一种；所述致孔剂为水、1,4-丁二醇和正丙醇的混合溶液；所述引发剂为偶氮二异丁腈(AIBN)。
优选地，步骤(1)中所述的容器为不锈钢管、玻璃管、毛细管、固相萃取小柱、磁性纳米材料、固相萃取吸头、薄层板、滤纸、滤膜或玻璃单体瓶；更优选经过γ-MAPs(3-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷)预处理的色谱容器。
步骤(2)中所述的小肽为常规天然或人工合成的包含2～12个氨基酸的小肽。优选地，所述的小肽为以下①～⑥中的至少一种：
①Glu-Asp-Gly-Trp(EDGW)；
②Glu-Asp-Pro-Trp(EDPW)；
③Glu-Asp-Trp-Trp(EDWW)；
④Gln-Leu-Gly-Pro-Tyr-Glu-Leu-Trp-Glu-Leu-Ser-His(QLGPYELWELSH)；
⑤Gly-Pro-Tyr-Glu-Leu-Trp-Glu-Leu-Ser-His(GPYELWELSH)；
⑥具有式(I)结构的DAAG小肽：
上述小肽①～⑤的氨基酸序列见序列表。
上述具有式(I)结构的DAAG小肽⑥可参照“Novel peptide ligand with highbinding capacity for antibody purification.Journal of Chromatography A,1225(2012)158–167”获得。
优选地，步骤(2)中所述间隔臂试剂为一端由Boc保护的PEG二胺或多肽链，所述多肽链是指由丝氨酸、甘氨酸、丙氨酸和苏氨酸中至少一种氨基酸所构成的多肽链。
优选地，步骤(2)中所述组氨酸标签是指含有4～8个组氨酸的组氨酸标签。组氨酸标签为本领域常规试剂，可通过商业购买获得。
优选地，步骤(3)中所述金属螯合剂是指N,N-双(羧甲基)-L-赖氨酸(ANTA)、亚氨基二乙酸、咪唑或组氨酸等；所述金属无机盐是指硫酸锌、硫酸镍、硫酸钴或硫酸铜。
优选地，步骤(3)中所述加热反应的温度为50～80℃，反应时间为240～1440min；所述灌注金属无机盐溶液反应的温度为室温，反应时间为240～1440min；所述灌注含组氨酸标签的小肽配体溶液反应的温度为室温，反应时间为240～1440min。
一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料，通过上述方法制备得到。
上述基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料在细胞培养液或血清样品中目标单抗药物富集中的应用。
本发明所得整体材料具有如下优点及有益效果：
(1)本发明采用特定的方法将含组氨酸标签的小肽配体与基质整体材料相结合，所得整体材料以小肽作为亲和配基，相比较于常用的蛋白质A/G、抗原或靶标蛋白等生物大分子配基，其表现出诸多独特的优点：如价格低廉、化学性质稳定、不含生物杂质、无免疫原性、洗脱条件非常温和不会对抗体蛋白的构象产生破坏、使用寿命长等。
(2)本发明以有机聚合物整体材料为色谱基质，其具有制备过程简单可控、孔隙度高、比表面积大、耐酸碱性好、非特异性吸附低等优点。
(3)本发明的制备方法简单，快速可靠，有利于实现产业化。
附图说明
图1为实施例1中His-标记-DAAG小肽配体的制备路线图。
图2为实施例1中His-标记-DAAG功能化亲和整体色谱柱制备示意图。
图3为实施例1所得His-标记-DAAG功能化亲和整体色谱柱内有机聚合物的扫描电镜图。
图4为实施例1所得His-标记-DAAG功能化亲和整体色谱柱的X射线能谱图。
图5为实施例1所得His-标记-DAAG功能化亲和整体色谱柱结合赫赛汀(trastuzumab)、人免疫球蛋白(human serum immunoglobulin G,hIgG)和其他蛋白的色谱图。
图6为实施例1所得His-标记-DAAG功能化亲和整体色谱柱对hIgG和BSA的动态吸附曲线图。
图7为实施例1所得His-标记-DAAG功能化亲和整体色谱柱和Ni2+基质金属螯合亲和整体柱对荧光标记BSA的非特异性吸附表征结果图。
图8为实施例1所得His-标记-DAAG功能化亲和整体色谱柱对单抗细胞培养液中赫赛汀的富集色谱图(a)和所收集淋洗/洗脱组分的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析图(b)。
图9为实施例1所得His-标记-DAAG功能化亲和整体色谱柱对赫赛汀细胞培养液淋洗部分(a)和富集洗脱部分(b)的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)谱图。
图10为实施例1所得His-标记-DAAG功能化亲和整体色谱柱的稳定性和重复利用率测试结果图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
(1)基质整体柱的制备：将单体GMA(甲基丙烯酸缩水甘油酯)、交联剂EDMA(乙烯二甲基丙烯酸酯)、致孔剂(水、1,4-丁二醇和正丙醇的混合体系)和引发剂AIBN(偶氮二异丁腈)，按照文献[Analytical chemistry,2015,87(8):4552-4559.]比例配制成聚合反应混合溶液，超声溶解、脱气后灌入经过γ-MAPs预处理的石英毛细管内，然后将石英毛细管两端封口，放入65℃水浴中反应12小时；反应完毕后将石英毛细管与高压泵连接，冲洗掉未反应的单体、致孔剂和低聚物，得到poly(GMA-co-EDMA)基质整体色谱柱。
(2)含6个组氨酸标签的小肽配体(His-标记-DAAG)的制备：将DAAG小肽与一端由叔丁基氧羰基保护的聚乙二醇二胺(Boc-NH-PEG-NH2)缩合，脱去Boc后，再与6个组氨酸标签(6His-tag)反应缩合，得到His-标记-DAAG。上述His-标记-DAAG小肽配体的制备路线图如图1所示。
(3)小肽配体的固定：首先将100mM三乙酸基氨(Amino butyl-nitrilotriaceticacid,ANTA)溶液(pH 10)连续泵入到步骤(1)的poly(GMA-co-EDMA)基质整体柱中，70℃下水浴反应12h后，得到poly(GMA-co-EDMA)-NTA整体柱。再用100mM NiSO4·6H2O溶液在室温下冲洗poly(GMA-co-EDMA)-NTA整体柱6h后，得到poly(GMA-co-EDMA)-NTA-Ni2+整体柱(Ni2 +螯合固定的整体柱)。最后其用1mg/mL的His-标记-DAAG(His-tag-DAAG)水溶液冲洗6h后，即可得到His-标记-DAAG功能化亲和富集整体色谱柱。
本实施例整体色谱柱的制备示意图如图2所示，柱内有机聚合物的电子扫描电镜结果如图3所示，整体色谱柱的X射线能谱图如图4所示。
本实施例所得亲和富集整体色谱柱的性能测试：
(1)考察色谱柱对单抗的特异性结合能力：
色谱条件为：
色谱柱：150mm×100μm i.d.；
样品：赫赛汀(Transtuzumab)、人免疫球蛋白(hIgG)、牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)、β-乳球蛋白(β-lactoglobulin)、肌红蛋白(myoglobin)和胰蛋白酶(trypsin)；
流动相A：50mM/L磷酸缓冲溶液，100mM/L氯化钠，pH＝7.0；
流动相B：10mM/L甲酸钠，100mM/L氯化钠，pH＝3.6；
流速：1μL/min；
检测波长：280nm；
进样量：1μL。
所得His-标记-DAAG功能化亲和整体色谱柱结合trastuzumab、hIgG和其他蛋白的色谱图如图5所示。图5结果表明，在流动相A的冲洗过程中，BSA、HSA、β-lactoglobulin、myoglobin和trypsin都被快速冲洗出来，待10分钟时流动相由A转换成B后，Trastuzumab和hIgG才被洗脱下来，说明该柱对赫赛汀和人免疫球蛋白有一定的特异性结合能力。
(2)分别考察色谱柱对hIgG和BSA的动态吸附能力：
色谱条件为：
色谱柱：150mm×100μm i.d.；
样品：hIgG、BSA；
流动相：50mM/L磷酸缓冲溶液，100mM/L氯化钠，pH＝7.0；
总流速：1μL/min；
检测波长：280nm。
所得整体色谱柱对hIgG和BSA的动态吸附曲线图如图6所示。可见随着hIgG浓度的增加，该柱对hIgG的动态吸附量逐渐增大；但是BSA在所研究浓度范围内，该柱对其的动态吸附量都很低。
(3)考察色谱柱对BSA的非特异性吸附情况：
实验条件为：
色谱柱：His-标记-DAAG功能化整体柱和Ni2+金属固定整体柱，100mm×100μmi.d.；
样品：异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白(FITC-BSA)；
流动相：50mM/L磷酸缓冲溶液，100mM/L氯化钠，pH＝7.0；
冲洗时间：30min。
所得His-标记-DAAG功能化整体柱和Ni2+金属固定整体柱对FITC-BSA的非特异性吸附表征结果如图7所示。结果表明，前者对FITC-BSA表现出比后者更低的非特异性吸附。
(4)用于单抗细胞培养液中Trastuzumab的富集：
色谱条件为：
色谱柱：150mm×100μm i.d.；
样品：赫赛汀细胞培养液；
流动相A：50mM/L磷酸缓冲溶液，100mM/L氯化钠，pH＝7.0；
流动相B：10mM/L甲酸钠，100mM/L氯化钠，pH＝3.6；
流速：1μL/min；
检测波长：280nm；
进样量：1μL细胞培养液。
所得His-标记-DAAG功能化整体柱对单抗细胞培养液中赫赛汀的富集色谱图(a)和所收集淋洗/洗脱组分的SDS-PAGE分析图(b)如图8所示。图8a结果显示，在流动相A下，大量杂质被洗脱下来；当流动相切换至B后，赫赛汀才逐渐被洗脱。SDS-PAGE结果显示(图8b)，流动相A的冲洗部分几乎不含有赫赛汀，但是流动相B的洗脱部分含有高纯度的赫赛汀。同时，上述组分的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析结果如图9所示，(a)淋洗部分的谱图；(b)经His-标记-DAAG功能化整体柱富集后所得洗脱部分的谱图。结果显示，流动相A的冲洗部分几乎不含有赫赛汀(图9a)，但是流动相B洗脱部分含有赫赛汀的特征片段(图9b)，进一步表明该柱有潜力用于细胞培养液中Trastuzumab的富集纯化。
(5)测试色谱柱的重复利用率：
色谱条件为：
色谱柱：150mm×100μm i.d.；
样品：hIgG；
流动相：50mM/L磷酸缓冲溶液，100mM/L氯化钠，pH＝7.0；
总流速：1μL/min；
检测波长：280nm。
所得His-标记-DAAG功能化整体柱的稳定性和重复利用率结果如图10所示。可见经过连续10次的重生循环后，该柱对hIgG的动态吸附量变化很小。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 暨南大学
<120>一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料及制备与应用
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 小肽氨基酸序列1
<400> 1
Glu Asp Gly Trp
1
<210> 2
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 小肽氨基酸序列2
<400> 2
Glu Asp Pro Trp
1
<210> 3
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 小肽氨基酸序列3
<400> 3
Glu Asp Trp Trp
1
<210> 4
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 小肽氨基酸序列4
<400> 4
Gln Leu Gly Pro Tyr Glu Leu Trp Glu Leu Ser His
1 5 10
<210> 5
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 小肽氨基酸序列5
<400> 5
Gly Pro Tyr Glu Leu Trp Glu Leu Ser His
1 5 10

Claims (10)

1.一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)将单体甲基丙烯酸缩水甘油酯与交联剂、致孔剂和引发剂混合，超声溶解、脱气后灌入容器内，加热聚合反应，冲洗除去未反应的残留物，得到基质整体材料；
(2)合成含组氨酸标签的小肽配体：将小肽与间隔臂试剂反应后再与组氨酸标签反应，得到含组氨酸标签的小肽配体；
(3)将金属螯合剂溶液灌注到步骤(1)所得基质整体材料中，加热反应；然后灌注金属无机盐溶液反应，将金属离子螯合固定到基质整体材料上，再灌注步骤(2)所得含组氨酸标签的小肽配体溶液反应，得到基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料。
2.根据权利要求1所述的一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述交联剂是指乙二醇二甲基丙烯酸酯、聚乙二醇二丙烯酸酯、3-(N-甲基-N,N-二甲基丙烯酰氧乙基氨)丙烷磺酸盐、2-(N-甲基-N,N-二甲基丙烯酰氧乙基氨)乙烷羧酸盐和2-(甲基丙烯酰氧基)乙基-[N-(2-甲基丙烯酰氧基)乙基]磷酰胆碱中的任意一种；所述致孔剂为水、1,4-丁二醇和正丙醇的混合溶液；所述引发剂为偶氮二异丁腈。
3.根据权利要求1所述的一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的容器为不锈钢管、玻璃管、毛细管、固相萃取小柱、磁性纳米材料、固相萃取吸头、薄层板、滤纸、滤膜或玻璃单体瓶。
4.根据权利要求1所述的一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的容器为经过γ-MAPs预处理的色谱容器。
5.根据权利要求1所述的一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述的小肽为以下①～⑥中的至少一种：
①Glu-Asp-Gly-Trp；
②Glu-Asp-Pro-Trp；
③Glu-Asp-Trp-Trp；
④Gln-Leu-Gly-Pro-Tyr-Glu-Leu-Trp-Glu-Leu-Ser-His；
⑤Gly-Pro-Tyr-Glu-Leu-Trp-Glu-Leu-Ser-His；
⑥具有式(I)结构的DAAG小肽：
6.根据权利要求1所述的一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述间隔臂试剂为一端由Boc保护的PEG二胺或多肽链，所述多肽链是指由丝氨酸、甘氨酸、丙氨酸和苏氨酸中至少一种氨基酸所构成的多肽链。
7.根据权利要求1所述的一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述组氨酸标签是指含有4～8个组氨酸的组氨酸标签。
8.根据权利要求1所述的一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料的制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述金属螯合剂是指N,N-双(羧甲基)-L-赖氨酸、亚氨基二乙酸、咪唑或组氨酸等；所述金属无机盐是指硫酸锌、硫酸镍、硫酸钴或硫酸铜；所述加热反应的温度为50～80℃，反应时间为240～1440min；所述灌注金属无机盐溶液反应的温度为室温，反应时间为240～1440min；所述灌注含组氨酸标签的小肽配体溶液反应的温度为室温，反应时间为240～1440min。
9.一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料，其特征在于：通过权利要求1～8任一项所述的方法制备得到。
10.权利要求9所述的一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料在细胞培养液或血清样品中目标单抗药物富集中的应用。
CN201711338792.3A 2017-12-14 2017-12-14 一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料及制备与应用 Active CN108043365B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711338792.3A CN108043365B (zh) 2017-12-14 2017-12-14 一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料及制备与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711338792.3A CN108043365B (zh) 2017-12-14 2017-12-14 一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料及制备与应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108043365A true CN108043365A (zh) 2018-05-18
CN108043365B CN108043365B (zh) 2020-07-03

Family

ID=62132822

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711338792.3A Active CN108043365B (zh) 2017-12-14 2017-12-14 一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料及制备与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108043365B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111333776A (zh) * 2020-03-20 2020-06-26 暨南大学 一种氮杂环类有机聚合物整体材料及制备与应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1457257A1 (de) * 2003-01-16 2004-09-15 Macherey, Nagel GmbH &amp; Co. Handelsgesellschaft Trennmaterial, Säule mit diesem Trennmaterial sowie deren Verwendung zur Reinigung von Proteinen
CN102893146A (zh) * 2010-05-19 2013-01-23 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 疏水相互作用色谱法
CN103111094A (zh) * 2012-11-23 2013-05-22 南宁市蓝光生物技术有限公司 六聚组氨酸标签蛋白免疫亲和纯化富集柱制备及其应用
WO2014145441A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Sortase-mediated protein purification and ligation
CN106622181A (zh) * 2015-10-30 2017-05-10 中国科学院大连化学物理研究所 一种固定化金属离子亲和色谱材料及其制备和应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1457257A1 (de) * 2003-01-16 2004-09-15 Macherey, Nagel GmbH &amp; Co. Handelsgesellschaft Trennmaterial, Säule mit diesem Trennmaterial sowie deren Verwendung zur Reinigung von Proteinen
CN102893146A (zh) * 2010-05-19 2013-01-23 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 疏水相互作用色谱法
CN103111094A (zh) * 2012-11-23 2013-05-22 南宁市蓝光生物技术有限公司 六聚组氨酸标签蛋白免疫亲和纯化富集柱制备及其应用
WO2014145441A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Sortase-mediated protein purification and ligation
CN106622181A (zh) * 2015-10-30 2017-05-10 中国科学院大连化学物理研究所 一种固定化金属离子亲和色谱材料及其制备和应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
B. VIJAYALAKSHMI AYYAR ET AL.: "Affinity chromatography as a tool for antibody purification", 《METHODS》 *
KAIFENG DU: "Peptide immobilized monolith containing tentacle-typefunctionalized polymer chains for high-capacity bindingof immunoglobulin G", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A》 *
LINE NAOMI LUND ET AL.: "Novel peptide ligand with high binding capacity for antibody purification", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A》 *
STEFANO MENEGATTI ET AL.: "Alkaline-stable peptide ligand affinity adsorbents for the purification of biomolecules", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111333776A (zh) * 2020-03-20 2020-06-26 暨南大学 一种氮杂环类有机聚合物整体材料及制备与应用
CN111333776B (zh) * 2020-03-20 2021-11-09 暨南大学 一种氮杂环类有机聚合物整体材料及制备与应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN108043365B (zh) 2020-07-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Moser et al. Immunoaffinity chromatography: an introduction to applications and recent developments
Kašička Recent advances in CE and CEC of peptides (2007–2009)
Kilár Recent applications of capillary isoelectric focusing
Štěpánová et al. Applications of capillary electromigration methods for separation and analysis of proteins (2017–mid 2021)–a review
Mechref et al. Glycoprotein enrichment through lectin affinity techniques
Zheng et al. Monoliths with proteins as chiral selectors for enantiomer separation
Kašička Recent developments in capillary and microchip electroseparations of peptides (2019–mid 2021)
CN107110785A (zh) 快速制备标记的葡糖基胺和分析生产所述标记的葡糖基胺的糖基化生物分子的方法
Amundsen et al. Immunoaffinity CE in clinical analysis of body fluids and tissues
Wittmann-Liebold et al. Advanced methods in protein microsequence analysis
Ying et al. Poly (glycidyl methacrylate) nanoparticle-coated capillary with oriented antibody immobilization for immunoaffinity in-tube solid phase microextraction: Preparation and characterization
Wei et al. Construction of a microfluidic platform integrating online protein fractionation, denaturation, digestion, and peptide enrichment
Yang et al. Preparation of an epitope-imprinted polymer with antibody-like selectivity for beta2-microglobulin and application in serum sample analysis with a facile method of on-line solid-phase extraction coupling with high performance liquid chromatography
Kovács et al. Medicinal chemistry meets proteomics: fractionation of the human plasma proteome
Yang et al. Depletion of albumin and immunoglobulin G from human serum using epitope‐imprinted polymers as artificial antibodies
Xu et al. Advances and applications of in-tube solid-phase microextraction for analysis of proteins
Hou et al. Selective recognition of a cyclic peptide hormone in human plasma by hydrazone bond-oriented surface imprinted nanoparticles
Xu et al. Development of histidine-tagged cyclic peptide functionalized monolithic material for the affinity purification of antibodies in biological matrices
CN108043365A (zh) 一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料及制备与应用
CN109307771A (zh) 亲和层析定量检测重组人α干扰素工艺中间体含量的方法
Nakamura et al. Flow immunoassay for detection of human chorionic gonadotrophin using a cation exchange resin packed capillary column
CN1325516C (zh) 卵黄免疫球蛋白的仿生亲和纯化方法
Govorun et al. Proteomics and peptidomics in fundamental and applied medical studies
CN109678932B (zh) 一种IgG抗体亲和的小分子肽及其应用
CN108148124A (zh) 一种人hnrpa0多肽及其抗体制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant