CN108029449A - 一种云南橡树种子育苗接种印度块菌的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种云南橡树种子育苗接种印度块菌的方法，属于野生菌种植技术领域。首先对云南橡树种子进行消毒备用，选择伴生有块菌的云南橡树菌根和鲜印度块菌粉碎后配以无菌水得到块菌菌根液和菌种液，按适当的质量比取河沙、珍珠岩、生荒土混匀并加入印度块菌菌种液并调整含水率得到育苗基质备用，按适当的质量比取河沙、珍珠岩、生荒土、橡树块菌菌根土混匀并调整含水率得到接种基质备用；然后在大棚里育苗基质中播种，种子出苗后1‑2月取出浸泡在印度块菌菌种液中4min以上，再移栽植入接种基质中，控制温室大棚内光照度、温度和湿度，进行苗期管理，每月对幼苗施块菌菌种液2‑3次，至幼苗长成菌根树苗。具有方法可靠、接种率高、成本低等优点。

Description

一种云南橡树种子育苗接种印度块菌的方法

技术领域

本发明涉及一种印度块菌接种方法，尤其是一种云南橡树种子育苗接种印度块菌的方法，属于野生菌种植技术领域。

背景技术

印度块菌(Tuber indicum)，又名松露，俗名猪拱菌、无娘果等，被称为“国际第一名菌”。印度块菌富含17种氨基酸、8种维生素、适量的蛋白质、以及雄性酮、甾醇、鞘脂、脂肪酸、氨基酸及微量元素等50余种生理活性成分，并含有人体自身不能合成的8种氨基酸、锌、锰、铁、钙、磷、硒等必需营养素，具有增强免疫力、抗衰老、益胃、清神、止血、疗痔等药用价值，具有抗癌活性，对癌细胞有一定的抑制作用，可以激发脑细胞活力。由于野生印度块菌产量低，需要依靠人工栽培来满足日益增长的市场需求，而有效的接种方法不仅是印度块菌菌根化生产的前提，也是块菌栽培成败的关键。

橡树，又称栎树或柞树，其果实称橡子，木材泛称橡木，是世上最大的开花植物。橡树抗逆性强，耐干燥、高温和水湿，抗霜冻和城市环境污染，抗风性强，喜沙壤土或排水良好的微酸性土壤，耐环境污染，对贫瘠、干旱、偏酸性或碱度土壤适应能力强。橡树生长速度中等，在潮湿、排水良好的土壤上每年长高60厘米。

目前，国内外虽有少量关于印度块菌的栽培接种技术，并一定程度地运用到人工栽培实践中，但多停留在探索阶段，技术还远不成熟。橡树作为印度块菌的宿主植物之一，在印度块菌的人工栽培中占有重要地位，但现有云南橡树接种技术尚不成熟，接种效果不理想，接种成功率较低，导致印度块菌栽培的成本增加、产量偏低，难以推广应用，需要研究有效的云南橡树印度块菌人工接种方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有印度块菌人工栽培中接种成功率低、成本高等不足，提出一种云南橡树种子育苗接种印度块菌的方法，通过宿主植物幼苗培育和营造菌种生长环境，提高印度块菌接种成功率，降低人工种植块菌的生产成本。

为解决上述技术问题，本发明提供一种云南橡树种子育苗接种印度块菌的方法，其具体步骤如下：

（1）种子预处理：取云南橡树种子，置于0-3℃下冰箱内保藏4-5个月，取出后在无菌条件下进行三次消毒处理，先用浓度35-40％的H2O2液体浸泡0.5-1小时，取出擦洗后用无菌水冲洗干净，然后放入浓度30-35%的乙醇中进行第二次消毒10-20min，取出用无菌水冲洗干净后再放入浓度1.5-5%的次氯酸钠水溶液中进行第三次消毒，取出后用无菌水冲洗2-3次，置于培养皿中备用；

（2）制备块菌菌种液：选择成熟的鲜印度块菌，先用自来水清洗干净，然后用无菌水冲洗2-3遍后置于粉碎机中粉碎至粒度50-80目的细末状，再按1：5-10的体积比加入无菌水，得到块菌菌种液备用；

（3）制备育苗基质：按1：1：3-4的重量比，取干燥的河沙、珍珠岩、生荒土，粉碎至粒度2-4mm以下后混合均匀，再调整其含水率为45-55%，得到育苗基质备用；

（4）制备接种基质：按1：1：2-3的重量比，取干燥的河沙、珍珠岩、生荒土粉碎至粒度小于等于4mm，按生荒土重量的1-1.5倍的量直接取橡树林中表层松散的橡树菌根土，将所取的河沙、珍珠岩、生荒土、橡树菌根土混合均匀，再调整其含水率为40-45%，得到接种基质备用；

（5）播种育苗：在温度、湿度、光照度适当的温室大棚中，将经步骤（1）消毒处理的橡树种子，按1-3cm的深度播入步骤（3）得到的育苗基质中，再按常规方法进行育苗管理，浇水、除草，出苗后每个月再浇施步骤（2）制备的块菌菌种液2-3次，保持育苗基质的湿度，至种子出苗后1-2个月，得到橡树幼苗；

（6）菌根苗培育：自育苗基质中取出步骤（5）所得橡树幼苗，将橡树幼苗的根系浸入步骤（2）制备的印度块菌菌种液中4min以上，取出后植入步骤（4）所得接种基质中，控制温室大棚内适当的温度、湿度、光照度，按常规方法进行苗期管理，浇水、除草，并每月对幼苗施步骤（2）制备的块菌菌种液2-3次，保持接种基质的湿度，经4-6个月的培育，即得到云南橡树块菌菌根苗。

所述云南橡树种子是生长在云南地区的橡树所产、大小均匀、饱满成熟的种子。

所述步骤（3）和（4）中，调整育苗基质和接种基质的PH值为6.7-7.5，宜为微酸至中性，以利于云南橡树钟子的出苗、生长和菌种的生长。

所述步骤（4）中制备接种基质的橡树菌根土是直接取自伴生有印度块菌的云南橡树树根处的表层土壤，以保证菌种接种后生长良好。橡树菌根土中含有菌根菌，缺少菌根菌会导致菌种接种后生长不良。

所述步骤（5）中云南橡树种子播种时间宜在每年的3-4月，以提高种子的出苗率和接种的效果。

所述步骤（6）中菌根苗的种植密度为每平方米200-300株。

所述步骤（5）和（6）中，温室大棚内的温度为25-30℃、湿度为75-85%、光照度为25000-30000lux。

本发明中育苗基质和接种基质的成分配比、接种时间、菌根苗的密度、大棚内的温度和湿度等各参数均可根据实际需要具体确定，保证良好的接种效果即可。

本发明采用恰当组分的接种基质和特殊的接种育苗方法，通过多环节的多重菌种布施，为印度块菌菌种在橡树苗根部的宿生营造了良好的环境，大大提高了接种的成功率，降低了人工种植印度块菌的成本，可使印度块菌的接种率达到95%以上。具有方法可靠、接种率高、成本低等优点，适宜广泛推广使用。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式作进一步详尽描述。实施例中未注明的技术或产品，均为现有技术或可以通过购买获得的常规产品。

实施例1：本云南橡树种子育苗接种印度块菌的方法，其具体步骤如下：

（1）种子预处理：取生长在云南地区的橡树所产大小均匀、饱满成熟的种子云，置于0℃下冰箱内保藏4个月，取出后在无菌条件下进行三次消毒处理，先用浓度30％的H2O2液体浸泡1小时，取出擦洗后用无菌水冲洗干净，然后放入浓度30%的乙醇中进行第二次消毒20min，取出用无菌水冲洗干净后再放入浓度1.5%的次氯酸钠水溶液中进行第三次消毒，取出后用无菌水冲洗3次，置于培养皿中备用；

（2）制备块菌菌种液：选择成熟的鲜印度块菌，先用自来水清洗干净，然后用无菌水冲洗2遍后置于粉碎机中粉碎至粒度70目的细末状，再按1：5的体积比加入无菌水，得到块菌菌种液备用；

（3）制备育苗基质：按1：1：3的重量比，取干燥的河沙、珍珠岩、生荒土，粉碎至粒度2mm以下后混合均匀，再调整其含水率为45%、PH值为6.7，得到育苗基质备用；

（4）制备接种基质：按1：1：2的重量比，取干燥的河沙、珍珠岩、生荒土粉碎至粒度2mm以下，按生荒土重量的1倍的量直接取橡树林中伴生有印度块菌的云南橡树树根处表层松散的橡树菌根土，将所取的河沙、珍珠岩、生荒土、橡树菌根土混合均匀，再调整其含水率为40%、PH值为6.7，得到接种基质备用；

（5）播种育苗：每年的4月，在温室大棚中，控制棚内温度25℃、湿度75%、光照度25000lux，将经步骤（1）消毒处理的橡树种子，按1cm的深度播入步骤（3）得到的育苗基质中，再按常规方法进行育苗管理，浇水、除草，出苗后每个月再浇施步骤（2）制备的块菌菌种液2次，保持育苗基质的湿度，至种子出苗后1个月，得到橡树幼苗；

（6）菌根苗培育：自育苗基质中取出步骤（5）所得橡树幼苗，将橡树幼苗的根系浸入步骤（2）制备的印度块菌菌种液中4min，取出后按每平方米200株的密度植入步骤（4）所得接种基质中，控制温室大棚内温度为25℃、湿度为75%、光照度为25000lux，按常规方法进行苗期管理，浇水、除草，并每月对幼苗施步骤（2）制备的块菌菌种液2次，保持接种基质的湿度，经4个月的培育，即得到云南橡树块菌菌根苗。

本实施例通过采用本发明方法，印度块菌的接种率为95%，种植后第8年进入收获期，印度块菌的单产由现有方法的3kg/亩提高到10kg/亩，且块菌促进了云南橡树的生长发育，同时云南橡树又有效地促进了块菌的生长发育提高植物的抗病虫害能力，可保持与稳定生态系统，促进森林植被的恢复与发育。

实施例2：本云南橡树种子育苗接种印度块菌的方法，其具体步骤如下：

（1）种子预处理：取生长在云南地区的橡树所产大小均匀、饱满成熟的种子云，置于3℃下冰箱内保藏5个月，取出后在无菌条件下进行三次消毒处理，先用浓度35％的H2O2液体浸泡0.5小时，取出擦洗后用无菌水冲洗干净，然后放入浓度35%的乙醇中进行第二次消毒10min，取出用无菌水冲洗干净后再放入浓度5%的次氯酸钠水溶液中进行第三次消毒，取出后用无菌水冲洗2次，置于培养皿中备用；

（2）制备块菌菌种液：选择成熟的鲜印度块菌，先用自来水清洗干净，然后用无菌水冲洗3遍后置于粉碎机中粉碎至粒度50目的细末状，再按1：10的体积比加入无菌水，得到块菌菌种液备用；

（3）制备育苗基质：按1：1：4的重量比，取干燥的河沙、珍珠岩、生荒土，粉碎至粒度4mm后混合均匀，再调整其含水率为55%、PH值为7.5，得到育苗基质备用；

（4）制备接种基质：按1：1：3的重量比，取干燥的河沙、珍珠岩、生荒土粉碎至粒度4mm，按生荒土重量的1.5倍的量直接取橡树林中伴生有印度块菌的云南橡树树根处表层松散的橡树菌根土，将所取的河沙、珍珠岩、生荒土、橡树菌根土混合均匀，再调整其含水率为45%、PH值为7.5，得到接种基质备用；

（5）播种育苗：每年的3月，在温室大棚中，控制棚内温度30℃、湿度85%、光照度30000lux，将经步骤（1）消毒处理的橡树种子，按3cm的深度播入步骤（3）得到的育苗基质中，再按常规方法进行育苗管理，浇水、除草，出苗后每个月再浇施步骤（2）制备的块菌菌种液3次，保持育苗基质的湿度，至种子出苗后2个月，得到橡树幼苗；

（6）菌根苗培育：自育苗基质中取出步骤（5）所得橡树幼苗，将橡树幼苗的根系浸入步骤（2）制备的印度块菌菌种液中10min，取出后按每平方米300株的密度植入步骤（4）所得接种基质中，控制温室大棚内温度为30℃、湿度为85%、光照度为30000lux，按常规方法进行苗期管理，浇水、除草，并每月对幼苗施步骤（2）制备的块菌菌种液3次，保持接种基质的湿度，经6个月的培育，即得到云南橡树块菌菌根苗。

本实施例通过采用本发明方法，印度块菌的接种率为97%，种植后第4年进入收获期，印度块菌的单产由现有方法的3kg/亩提高到14kg/亩，且块菌促进了云南橡树的生长发育，同时云南橡树又有效地促进了块菌的生长发育提高植物的抗病虫害能力，可保持与稳定生态系统，促进森林植被的恢复与发育。

实施例3：本云南橡树种子育苗接种印度块菌的方法，其具体步骤如下：

（1）种子预处理：取生长在云南地区的橡树所产大小均匀、饱满成熟的种子云，置于1℃下冰箱内保藏5个月，取出后在无菌条件下进行三次消毒处理，先用浓度32％的H2O2液体浸泡0.6小时，取出擦洗后用无菌水冲洗干净，然后放入浓度32%的乙醇中进行第二次消毒15min，取出用无菌水冲洗干净后再放入浓度3%的次氯酸钠水溶液中进行第三次消毒，取出后用无菌水冲洗3次，置于培养皿中备用；

（2）制备块菌菌种液：选择成熟的鲜印度块菌，先用自来水清洗干净，然后用无菌水冲洗3遍后置于粉碎机中粉碎至粒度80目的细末状，再按1：6的体积比加入无菌水，得到块菌菌种液备用；

（3）制备育苗基质：按1：1：3.5的重量比，取干燥的河沙、珍珠岩、生荒土，粉碎至粒度3mm以下后混合均匀，再调整其含水率为50%、PH值为7.0，得到育苗基质备用；

（4）制备接种基质：按1：1：2.5的重量比，取干燥的河沙、珍珠岩、生荒土粉碎至粒度3mm以下，按生荒土重量的1.3倍的量直接取橡树林中伴生有印度块菌的云南橡树树根处表层松散的橡树菌根土，将所取的河沙、珍珠岩、生荒土、橡树菌根土混合均匀，再调整其含水率为42%、PH值为6.8，得到接种基质备用；

（5）播种育苗：每年的4月，在温室大棚中，控制棚内温度28℃、湿度80%、光照度28000lux，将经步骤（1）消毒处理的橡树种子，按2cm的深度播入步骤（3）得到的育苗基质中，再按常规方法进行育苗管理，浇水、除草，出苗后每个月再浇施步骤（2）制备的块菌菌种液2次，保持育苗基质的湿度，至种子出苗后2个月，得到橡树幼苗；

（6）菌根苗培育：自育苗基质中取出步骤（5）所得橡树幼苗，将橡树幼苗的根系浸入步骤（2）制备的印度块菌菌种液中至少4min，取出后按每平方米280株的密度植入步骤（4）所得接种基质中，控制温室大棚内温度为28℃、湿度为80%、光照度为28000lux，按常规方法进行苗期管理，浇水、除草，并每月对幼苗施步骤（2）制备的块菌菌种液3次，保持接种基质的湿度，经5个月的培育，即得到云南橡树块菌菌根苗。

本实施例通过采用本发明方法，印度块菌的接种率为98%，种植后第5年进入收获期，印度块菌的单产由现有方法的3kg/亩提高到13kg/亩，且块菌促进了云南橡树的生长发育，同时云南橡树又有效地促进了块菌的生长发育提高植物的抗病虫害能力，可保持与稳定生态系统，促进森林植被的恢复与发育。

实施例4：本云南橡树种子育苗接种印度块菌的方法，其具体步骤如下：

（1）种子预处理：取生长在云南地区的橡树所产大小均匀、饱满成熟的种子云，置于2℃下冰箱内保藏4个月，取出后在无菌条件下进行三次消毒处理，先用浓度30％的H2O2液体浸泡0.8小时，取出擦洗后用无菌水冲洗干净，然后放入浓度33%的乙醇中进行第二次消毒16min，取出用无菌水冲洗干净后再放入浓度2%的次氯酸钠水溶液中进行第三次消毒，取出后用无菌水冲洗2次，置于培养皿中备用；

（2）制备块菌菌种液：选择成熟的鲜印度块菌，先用自来水清洗干净，然后用无菌水冲洗3遍后置于粉碎机中粉碎至粒度60目的细末状，再按1：8的体积比加入无菌水，得到块菌菌种液备用；

（3）制备育苗基质：按1：1：4的重量比，取干燥的河沙、珍珠岩、生荒土，粉碎至粒度3.5mm以下后混合均匀，再调整其含水率为48%、PH值为7.2，得到育苗基质备用；

（4）制备接种基质：按1：1：3的重量比，取干燥的河沙、珍珠岩、生荒土粉碎至粒度3.5mm以下，按生荒土重量的1.5倍的量直接取橡树林中伴生有印度块菌的云南橡树树根处表层松散的橡树菌根土，将所取的河沙、珍珠岩、生荒土、橡树菌根土混合均匀，再调整其含水率为40%、PH值为7.2，得到接种基质备用；

（5）播种育苗：每年的3月，在温室大棚中，控制棚内温度26℃、湿度78%、光照度26000lux，将经步骤（1）消毒处理的橡树种子，按2.5cm的深度播入步骤（3）得到的育苗基质中，再按常规方法进行育苗管理，浇水、除草，出苗后每个月再浇施步骤（2）制备的块菌菌种液3次，保持育苗基质的湿度，至种子出苗后1.5个月，得到橡树幼苗；

（6）菌根苗培育：自育苗基质中取出步骤（5）所得橡树幼苗，将橡树幼苗的根系浸入步骤（2）制备的印度块菌菌种液中10min，取出后按每平方米250株的密度植入步骤（4）所得接种基质中，控制温室大棚内温度为26℃、湿度为78%、光照度为26000lux，按常规方法进行苗期管理，浇水、除草，并每月对幼苗施步骤（2）制备的块菌菌种液3次，保持接种基质的湿度，经5个月的培育，即得到云南橡树块菌菌根苗。

本实施例通过采用本发明方法，印度块菌的接种率为96%，种植后第6年进入收获期，印度块菌的单产由现有方法的3kg/亩提高到11kg/亩，且块菌促进了云南橡树的生长发育，同时云南橡树又有效地促进了块菌的生长发育提高植物的抗病虫害能力，可保持与稳定生态系统，促进森林植被的恢复与发育。

上面对本发明的技术内容作了说明，但本发明的保护范围并不限于所述内容，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下对本发明的技术内容做出各种变化，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种云南橡树种子育苗接种印度块菌的方法，其特征在于具体步骤如下：

（1）种子预处理：取云南橡树种子，置于0-3℃下冰箱内保藏4-5个月，取出后在无菌条件下进行三次消毒处理，先用浓度35-40％的H2O2液体浸泡0.5-1小时，取出擦洗后用无菌水冲洗干净，然后放入浓度30-35%的乙醇中进行第二次消毒10-20min，取出用无菌水冲洗干净后再放入浓度1.5-5%的次氯酸钠水溶液中进行第三次消毒，取出后用无菌水冲洗2-3次，置于培养皿中备用；

（2）制备块菌菌种液：选择成熟的鲜印度块菌，先用自来水清洗干净，然后用无菌水冲洗2-3遍后置于粉碎机中粉碎至粒度50-80目的细末状，再按1：5-10的体积比加入无菌水，得到块菌菌种液备用；

（3）制备育苗基质：按1：1：3-4的重量比，取干燥的河沙、珍珠岩、生荒土，粉碎至粒度2-4mm以下后混合均匀，再调整其含水率为45-55%，得到育苗基质备用；

（4）制备接种基质：按1：1：2-3的重量比，取干燥的河沙、珍珠岩、生荒土粉碎至粒度小于等于4mm，按生荒土重量的1-1.5倍的量直接取橡树林中表层松散的橡树菌根土，将所取的河沙、珍珠岩、生荒土、橡树菌根土混合均匀，再调整其含水率为40-45%，得到接种基质备用；

（5）播种育苗：在温度、湿度、光照度适当的温室大棚中，将经步骤（1）消毒处理的橡树种子，按1-3cm的深度播入步骤（3）得到的育苗基质中，再按常规方法进行育苗管理，浇水、除草，出苗后每个月再浇施步骤（2）制备的块菌菌种液2-3次，保持育苗基质的湿度，至种子出苗后1-2个月，得到橡树幼苗；

（6）菌根苗培育：自育苗基质中取出步骤（5）所得橡树幼苗，将橡树幼苗的根系浸入步骤（2）制备的印度块菌菌种液中4min以上，取出后植入步骤（4）所得接种基质中，控制温室大棚内适当的温度、湿度、光照度，按常规方法进行苗期管理，浇水、除草，并每月对幼苗施步骤（2）制备的块菌菌种液2-3次，保持接种基质的湿度，经4-6个月的培育，即得到云南橡树块菌菌根苗。

2.根据权利要求1所述的云南橡树种子育苗接种印度块菌的方法，其特征在于：所述云南橡树种子是生长在云南地区的橡树所产、大小均匀、饱满成熟的种子。

3.根据权利要求1所述的云南橡树种子育苗接种印度块菌的方法，其特征在于：所述步骤（3）和（4）中，调整育苗基质和接种基质的PH值为6.7-7.5。

4.根据权利要求1所述的云南橡树种子育苗接种印度块菌的方法，其特征在于：所述步骤（4）中，制备接种基质的橡树菌根土是直接取自伴生有印度块菌的云南橡树树根处的表层土壤。

5.根据权利要求1所述的云南橡树种子育苗接种印度块菌的方法，其特征在于：所述步骤（5）中，云南橡树种子播种时间宜在每年的3-4月。

6.根据权利要求1所述的云南橡树种子育苗接种印度块菌的方法，其特征在于：所述步骤（6）中，菌根苗的种植密度为每平方米200-300株。

7.根据权利要求1所述的云南橡树种子育苗接种印度块菌的方法，其特征在于：所述步骤（5）和（6）中，温室大棚内的温度为25-30℃、湿度为75-85%、光照度为25000-30000lux。