CN108004230A - 一种固定化漆酶及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种固定化漆酶及其制备方法，该固定化漆酶是以高岭土为载体，漆酶通过物理吸附作用固定于高岭土上。其制备方法为将高岭土与漆酶溶液混合进行振荡吸附，离心，得到固定化漆酶。经优化得到的最佳固定化条件：固定化时间为15min、pH为5.0、漆酶初始浓度为0.8mg/mL。本发明的固定化漆酶具有热稳定性好、酶吸附量大、酶活力强、环境友好、对孔雀石绿/Cd2+去除效果好等优点，其制备方法具有操作简便、易于控制、制备成本低、适合大规模制备等优点。

Description

一种固定化漆酶及其制备方法
技术领域
本发明涉及漆酶的固定化领域，具体涉及一种固定化漆酶及其制备方法。
背景技术
漆酶（Laccase，EC 1.10.3.2）是一种苯二酚-氧化还原酶，属于蓝多铜氧化酶（Blue multi-copper oxidases，BMCOs）家族。漆酶分布比较广泛，在真菌、昆虫、细菌、藻类及其高等植物中均有发现，是一种催化底物范围广，催化效率高的绿色环保生物催化剂。目前，漆酶在环境污染物降解、木质素纤维改性、生物传感器制造业、纺织业等应用价值显著。但由于漆酶稳定性差、易失活、在使用过程中容易因为环境的变化而变形失活，且不易从反映体系中分离，产物的分离纯化比较复杂，随着反应时间的延长，反应速率也会逐渐下降，因此，漆酶的工业化应用在一定程度上受到了限制。固定化酶技术是克服了自由酶的上述不足，实现漆酶的连续使用和改善其稳定性的有效手段。固定化酶是指利用物理或化学的手段将酶固定在载体上或束缚在特定区域内，仍能保持原有催化特性，并可回收及循环使用的一类技术。
漆酶的固定化方法包括包埋法和化学法等，其中包埋法容易发生化学聚合反应，导致酶活力损失，并且该方法要求底物和产物是可以通过高分子凝胶的网格扩散的小分子，限制了大分子的酶和底物的应用等。而化学法固定化方法的缺点是载体需要活化剂提前处理；固定化操作比较复杂；反应条件比较强烈；化学修饰时易造成酶失活；蛋白质通过氨基酸侧链功能基团参加共价连接往往会引起酶分子的结构变化从而导致活力降低，需要严格控制条件才能获得活力较高的固定化酶。固定化酶中常用的固定化载体包括活性炭、海藻酸钠、介孔材料以及微滤膜等，但现有的固定化材料存在固定化效率低、加工工艺复杂、成本高等缺点。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：针对现有技术的不足，提供一种廉价的粘土矿物高岭土固定的且具有优异酶学性能的固定化漆酶，以及相应提供该固定化漆酶的制备方法。
为解决上述问题，本发明采用以下技术方案：一种固定化漆酶及其制备方法，其特征在于，所述固定化漆酶是由高岭土固定化漆酶制备得到；所述漆酶来自云芝，≥0.5units/mg；所述固定化漆酶的最适pH为4.5，最适温度为40℃；所述固定化漆酶制备方法包括以下步骤。
（1）先将高岭土置于100℃-120℃的条件下干燥4h-8h。
（2）将上述干燥好的高岭土与漆酶溶液进行混合，所述漆酶溶液中的初始漆酶浓度为0.05mg/mL~2.0mg/mL，所述漆酶溶液的pH值为3.0~7.0；然后将高岭土加入至所述漆酶溶液中，在25℃~35℃的温度下、150rpm~300rpm转速下对所述漆酶和高领土混合溶液振荡15min~300min。
（3）将（2）中所得的固定化酶经过对应pH的缓冲溶液洗涤、5000rpm~10000rpm转速离心分离、-100℃下冷冻和真空干燥20h~24h后即可。
上述的制备方法中，优选地，所述高岭土置于120℃的条件下干燥6h。
上述的制备方法中，优选地，所述高岭土与漆酶的混合液中高岭土与漆酶的质量配比为1：（1~6）。
上述的制备方法中，优选地，所述步骤（2）中，所述漆酶溶液是由漆酶与柠檬酸缓冲液或磷酸缓冲液配制而成，所述柠檬酸缓冲液的pH值为3.0~6.0，所述磷酸缓冲液的pH值为7.0。
上述的制备方法中，优选地，所述步骤（3）中，所述固定化漆酶的洗涤、分离、冷冻和干燥中，固定化漆酶经对应pH的缓冲溶液洗涤、6000rpm转速离心分离，-100℃下冷冻和干燥24h。
本发明的固定化漆酶的制备方法中，漆酶的固定化时间，漆酶溶液的pH值，以及漆酶溶液中的漆酶初始浓度对固定化漆酶的制备有着重要的影响，我们以不同固定化条件下的固定化漆酶的相对酶活作为确定标准，通过以下实验得到本发明的固定化漆酶的制备方法中的工艺参数。
1.固定化时间范围的确定。
取16mg高岭土作为载体，加入4mL装有0.4mg漆酶的柠檬酸缓冲液中（浓度为0.1M，pH值为5.0），于30℃下以200rpm的速度振荡15min~300min，离心分离后用缓冲液清洗数次；用紫外分光光度计测定固定化漆酶氧化2，2-连氮-二（3-已基并噻-6-磺酸）（ABTS）吸光度在420nm处的吸光度，得到的固定化漆酶的相对活性情况如表1所示；由表1可知，固定化漆酶的相对活性随着时间增长不断下降，考虑到随着时间延长，漆酶活性损失增加，因此，上述方案中确定的优先振荡固定化时间为15min~300min，最佳的固定化时间为15min。
表1不同振荡时间下制得的固定化漆酶的相对活性。
。
2.pH值范围的确定。
调节柠檬酸缓冲液pH值为3.0~6.0，磷酸缓冲液pH值为7.0；取16mg高岭土作为载体，加入4mL装有0.4mg漆酶的不同pH值的缓冲液中（浓度0.1M），于30℃下以200rpm的速度振荡15min，离心分离后用对应pH缓冲液清洗数次，用紫外分光光度计测定固定化漆酶氧化2，2-连氮-二（3-已基并噻-6-磺酸）（ABTS）吸光度在420nm处的吸光度，得到的固定化漆酶的相对活性情况如表2所示；由表2可知，固定化漆酶的相对活性受pH值影响较大。因此，上述技术方案中优先的pH值为5.0，此时固定化漆酶相对活性最高。
表2不同pH值条件下制得固定化漆酶的相对活性。
。
3.初始漆酶浓度范围的确定。
取16mg高岭土作为载体，加入4mL装有0.2~8.0mg漆酶的柠檬酸缓冲液中（浓度为0.1M，pH值为5.0），于30℃下以200rpm的速度振荡15min，离心分离后用柠檬酸缓冲液清洗数次；分别测定不同漆酶初始浓度条件下固定化漆酶的相对活性，测得的结果如表3所示，由表3可知，在0.1~0.8mg/mL初始漆酶浓度条件下制备的固定化漆酶的相对活性较高，在0.8mg/mL时，固定化漆酶的相对活性最高。因此，确定适宜的初始漆酶浓度范围为0.1~0.8mg/mL，最佳初始漆酶浓度为0.8mg/mL。
表3不同初始漆酶浓度下制得固定化漆酶的相对活性。
。
与现有技术相比，本发明的优点是。
1.本发明还提供了一种固定化漆酶的制备方法，通过将高岭土和漆酶溶液混合利用物理吸附进行固定化成功制备得到固定化漆酶，具有操作简单、易于控制、制备成本低、对漆酶固定化效果好、适合大规模制备等优点。
2.本发明的制备方法中，以高岭土为原料固定化漆酶，其中高岭土是一种环境友好、廉价的环境矿物材料，其来源广泛，成本低廉，且清洁无污染，对环境无毒害作用。
3.本发明采用物理吸附制备固定化漆酶，使得漆酶活性损失小，可重复使用，固定化后pH值的适用范围扩大，热稳定性有了较大提高。
附图说明
图1为实施例中高岭土和制得的固定化漆酶的SEM图，其中（a）为高岭土，（b）为固定化漆酶。
图2为实施例中高岭土和制得的固定化漆酶的EDS图，其中（a）为高岭土，（b）为固定化漆酶。
图3为实施例中高岭土和制得的固定化漆酶的FIRT图，其中（a）为高岭土，（b）为固定化漆酶。
图4为实施例中的固定化漆酶和对照样（游离漆酶）在不同pH条件下的相对活性变化曲线图。
图5为实施例中的固定化漆酶和对照样（游离漆酶）在不同温度条件下的相对活性变化曲线图。
图6为实施例中的固定化漆酶和对照样（游离漆酶）在60℃下不同时间相对活性变化曲线图。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体优先的实施例对本发明作进一步描述，但并不因此而限制本发明的保护范围。
实施列1。
一种本发明的固定化漆酶，该固定化漆酶包括质量比为1:5的高岭土和漆酶，固定化漆酶以高岭土为载体，漆酶通过物理吸附作用固定于高岭土上。
一种上述固定化漆酶的制备方法，包括以下步骤：（1）称取一定量的高岭土，放置在120℃的干燥箱中烘6h；（2）将16mg的高岭土加入到含漆酶的pH为5.0的柠檬酸缓冲液中，其中，漆酶初始浓度为0.8mg/mL，将混合液置于摇床中于30℃温度下以200rpm速度振荡15min，然后用pH值为5.0的柠檬酸缓冲液洗涤数次，离心分离后，经-100℃冷冻真空干燥，得到固定化漆酶（制得的固定化漆酶在-4℃下保存）。
将高岭土和制得的固定化漆酶进行SEM检测分析，结果如图1所示。图1为高岭土和固定化漆酶的SEM图，其中（a）为高岭土，（b）为固定化漆酶。由图1（a）和图1（b）可知，本发明的固定化漆酶以高岭土为载体，漆酶固定在高岭土上和固定在高岭土中，且漆酶经固定化后所得固定化漆酶的结构无变化，漆酶在固定在高岭土上后，高岭土的团聚现象消失，固定化漆酶有好的分散现象。
将高岭土和制得的固定化漆酶进行EDS检测分析，结果如图2所示。图2为高岭土和固定化漆酶的EDS图，其中（a）为高岭土，（b）为固定化漆酶。由图2可知，将漆酶固定到高岭土后所得固定化漆酶中的元素组成并没有很大的变化，但是Cu元素的含量发生了变化，漆酶的催化中心是金属铜离子，说明漆酶已经成功的固定化在高岭土表面和高岭土中。
将高岭土和制得的固定化漆酶进行FIRT检测分析，结果如图3所示。图3为高岭土和固定化漆酶的FIRT图，其中（a）为高岭土，（b）为固定化漆酶，由图3可知，高岭土和固定化漆酶含有丰富的官能团，将漆酶固定到高岭土后所得固定化漆酶后，增加了1523cm-1、3522cm-1特征峰，其中，1523cm-1是-NH2变角弯曲形成的，3522cm-1是-OH弯曲振动形成的。
1、pH值的适用范围。
将固定化漆酶分别溶解于pH值为3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0的柠檬酸缓冲液（浓度为0.1M）中，然后置于30℃环境中12h，检测其氧化ABTS的活性，得到不同pH下固定化漆酶的相对活性（以最高酶活为100%），同时，以游离漆酶作为对照组，测定不同pH下游离漆酶的相对活性（以最高酶活为100%），结果如图4所示。由图4可知，固定化漆酶的最适pH值相对游离漆酶略有上升，表明固定化漆酶中的固定化载体改变了漆酶所处的微环境；游离漆酶在pH值为3.0~4.0时，活性较高，但pH值为5.5和6.0时，游离漆酶几乎失去活性；固定化漆酶的适宜pH值较游离漆酶广泛，在pH值为3.0~6.0间均能保持较高活性，在较高pH值时仍保持一定活性；因此，与游离漆酶相比，本实施例1制得的固定化漆酶受溶液pH值的影响不显著，具有较好的pH值适用范围。
2、温度的适用范围。
将固定化漆酶置于20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃的柠檬酸缓冲溶液（该柠檬酸缓冲溶液的浓度为0.1M，pH值为5.0）中热处理1h，然后置于室温下1h以测定固定化漆酶的活性，从而衡量酶在热处理失活后，失活是否具有可逆性，并研究固定化对可逆性是否有影响，检测其氧化ABTS的活性，得到不同温度下固定化漆酶的相对活性（以最高酶活为100%），同时，以游离漆酶作为对照组，测定不同温度下游离漆酶的相对活性（以最高酶活为100%），结果如图5所示。由图可知，固定化漆酶较游离漆酶的最适宜温度发生了变化，游离漆酶的最适宜温度为20℃，固定化漆酶的最适宜温度为40℃。
3、热稳定性。
利用游离漆酶和固定化漆酶分别置于pH为5.0的柠檬酸缓冲溶液中，于60℃下保温，然后每隔30min，取出一定量的固定化漆酶和游离漆酶，检测其氧化ABTS的活性，得到的不同时间段固定化漆酶和游离漆酶的相对活性如图6。由图6可知，固定化漆酶的失活速度明显低于游离漆酶的失活速度；保温2h时，固定化漆酶的相对活性仍能维持80%以上，而游离漆酶的相对活性只达到50%；由此可见，本实施例1制得的固定化漆酶热稳定性显著增长，表明固定化漆酶的载体高岭土能提供更适宜环境抵抗热变化，因此，固定化漆酶中的载体高岭土有利于增强热稳定性。
实施列2。
将实施例1制备的固定化漆酶用于处理水体中孔雀石绿/Cd2+，考察了其处理效果，具体步骤如下。
按照添加量为4mg/mL，将实施例1制得的固定化漆酶与孔雀石绿初始浓度为50mg/L，Cd2+浓度为10mg/L的水体混合，同时加入介体物质（该介体物质为丁香醛，简称SA，作用是作为反应介体，起着氧化耦合作用；该介体物质在反应体系中的浓度为0.5mmol/L）和柠檬酸缓冲溶液（其作用提供定值pH的反应环境，具体为通过加入柠檬酸缓冲溶液使反应体系中的pH值为5.0），混合均匀后，在转速为200rpm、温度为30℃下进行处理，振荡反应时间为300min时，孔雀石绿的去除率为98.21%，固定化漆酶对Cd2+的去除效果达到20%以上。
以上实施例仅是本发明的优先实施例方案，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例。凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应该指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理放入前提的改性和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种固定化漆酶及其制备方法，其特征在于，所述固定化漆酶是由高岭土固定化漆酶制备得到；所述漆酶来自云芝，≥0.5units/mg；所述固定化漆酶的最适pH为4.5，最适温度为40℃；所述固定化漆酶制备方法包括以下步骤：
（1）先将高岭土置于100℃-120℃的条件下干燥4h-8h；
（2）将上述干燥好的高岭土与漆酶溶液进行混合，所述漆酶溶液中的初始漆酶浓度为0.05mg/mL~2.0mg/mL，所述漆酶溶液的pH值为3.0~7.0；然后将高岭土加入至所述漆酶溶液中，在25℃~35℃的温度下、150rpm~300rpm转速下对所述漆酶和高岭土混合溶液振荡15min~300min；
（3）将（2）中所得的固定化酶经过对应pH的缓冲溶液洗涤、5000rpm~10000rpm转速离心分离、-100℃下冷冻和真空干燥20h~24h后即可。
2.根据权利要求1所述的固定化漆酶的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中，所述高岭土置于120℃的条件下干燥6h。
3.根据权利要求1所述的固定化漆酶基制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，所述高岭土与漆酶的混合液中高岭土与漆酶的质量配比为1：（1~6）。
4.根据权利要求1所述的固定化漆酶的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，所述漆酶溶液是由漆酶与柠檬酸缓冲液或磷酸缓冲液配制而成，所述柠檬酸缓冲液的pH值为3.0~6.0，所述磷酸缓冲液的pH值为7.0。
5.根据权利要求1所述的固定化漆酶的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，所述漆酶溶液中漆酶的初始浓度为0.8mg/L，所述漆酶溶液的pH为5.0，所述反应温度为30℃，所述振荡的转速为200rpm，所述振荡的时间为15min。
6.根据权利要求1所述的固定化漆酶的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中，所述固定化漆酶的洗涤、分离、冷冻和干燥中，固定化漆酶经对应pH的缓冲溶液洗涤、6000rpm转速离心分离，-100℃下冷冻和干燥24h。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111593588A (zh) * 2020-06-01 2020-08-28 苏州大邦纺织有限公司 一种用于棉织物皂洗的改性漆酶皂洗剂及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007036235A1 (en) * 2005-09-30 2007-04-05 Novozymes A/S Immobilization of enzymes
US20130316433A1 (en) * 2012-05-22 2013-11-28 Qingguo Huang Enzyme composition and methods to transform perfluoroalkyl compounds in soil and/or groundwater
CN103499625A (zh) * 2013-09-13 2014-01-08 同济大学 二维纳米稀土硼酸盐漆酶传感器的制备方法及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007036235A1 (en) * 2005-09-30 2007-04-05 Novozymes A/S Immobilization of enzymes
US20130316433A1 (en) * 2012-05-22 2013-11-28 Qingguo Huang Enzyme composition and methods to transform perfluoroalkyl compounds in soil and/or groundwater
CN103499625A (zh) * 2013-09-13 2014-01-08 同济大学 二维纳米稀土硼酸盐漆酶传感器的制备方法及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
XIAOKE HU等: "Comparative study of immobilized Trametes versicolor laccase on nanoparticles and kaolinite", 《CHEMOSPHERE》 *
李阳等: "漆酶催化氧化水中有机污染物", 《化学进展》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111593588A (zh) * 2020-06-01 2020-08-28 苏州大邦纺织有限公司 一种用于棉织物皂洗的改性漆酶皂洗剂及其制备方法

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