CN107929998A - 一种介导多氯联苯厌氧还原脱氯的生物炭制剂 - Google Patents

一种介导多氯联苯厌氧还原脱氯的生物炭制剂 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种介导多氯联苯厌氧还原脱氯的生物炭制剂，由以下组分混合制成：无机盐培养基1L，乳酸钠1.5‑2.5ml，维生素溶液1‑2mL，厌氧微生物1‑2mg，油菜杆生物炭4‑6g。本发明提供的生物制剂具有环境友好，无毒性等特点，能有效介导多氯联苯厌氧还原脱氯，为多氯联苯的降解提供了新的途径。

Description

一种介导多氯联苯厌氧还原脱氯的生物炭制剂
技术领域
本发明具体涉及一种能介导多氯联苯厌氧还原脱氯的生物炭制剂，涉及有机物生物降解领域。
背景技术
多氯联苯(Polychlorinated biphenyls,PCBs)是一类由联苯上的氢不同程度的被氯原子取代后的氯代芳香族化合物的总称，包含209种同系物。由于其良好的化学稳定性，阻燃性和绝缘性，曾被广泛应用于电力设备(如变压器、变容器等)的绝缘介质、复写纸、油墨、涂料、润滑剂、增塑剂等PCBs具有高毒性、环境持久性、生物蓄积性，长距离迁移性的特点，由于PCBs结构非常稳定，在环境中很难被降解，同时水溶性低，脂溶性高，可以从周围媒介物质中富集到生物体内，并通过食物链的放大作用进行生物蓄积。它还具有半挥发性，能够通过水体或土壤通过蒸发进入大气环境或通过吸附在颗粒物上的方式，通过大气环流远距离迁移。有科学家在北极地区的生物体中检测到了PCBs，毒理学实验证明PCBs能够导致生物体内分泌紊乱、生殖及免疫机能失调、发育紊乱甚至引起癌症等严重后果，因此PCBs污染对人体健康和生态环境造成巨大威胁。在我国浙江温州、台州地区曾有人随意拆卸废弃电容器而导致大量PCBs流失，使当地大气、农田、河流及鱼类等受到了严重污染。另外，我国大部分近海海域水体中PCBs都超过美国EPA制定的30ng·L-1的标准，污染比较严重，而且大部分海洋生物体内都能检测到PCBs。在黄海和东海近岸水域的一些沉积物中的PCBs含量也偏高。这些事实都说明我国的PCBs污染已经达到相当程度，对生态环境、动物和人类健康构成了潜在的威胁。因此亟待开发实用性的修复技术来解决PCBs带来的环境污染。
目前PCBs污染降解的方法大体上有物理处理(封存、高温处理，溶剂萃取等)、化学处理(氧化还原法)及生物降解等方法，物理或化学处理方法或多或少存在一些问题，比如处理不彻底、处理成本太高或产生二次污染，这些问题限制了物理化学方法的推广使用，生物修复方法显示出其巨大的优势和潜力，生物修复是通过添加污染物降解菌或相关酶来达到治理污染的效果，例如多氯联苯污染区域投入降解菌群生物制剂，促进其分解转化，使其毒性降低或消失。生物降解处理目前作为一种最清洁、最经济的处理方式而被认为是最有前景，也是最有潜力的方法。该技术不会产生二次污染，经济成本低，易于实施。
多氯联苯分子的结构稳定性和难降解性是由其氯化程度决定的，一般来说氯化程度越高，分子结构越稳定，也就越难被降解。对PCBs来说，当其含六个氯以上时，微生物只能通过厌氧还原过程脱去氯离子，或将其转化成低氯代的PCBs后再通过好氧途径降解。因此，微生物厌氧还原脱氯是PCBs降解关键步骤。而且实际污染点高氯代PCBs的毒性更大，更难被降解。
目前已经有很多研究报道某些脱卤素菌群需要依赖于土壤或沉积物的存在，以保持它们的降解活性。这种现象在五氯酚、二恶英和四溴双酚A等卤代有机污染物的微生物降解中表现尤为典型(Zhang,C.；Suzuki,D.；Li,Z.；Ye,L.；Katayama,A.,Polyphasiccharacterization of two microbial consortia with wide dechlorination spectrafor chlorophenols.Journal Of Bioscience And Bioengineering 2012,114,(5),512-517.Zhang,C.；Katayama,A.,Humin as an Electron Mediator for MicrobialReductive Dehalogenation.Environmental Science&Technology 2012,46,(12),6575-6583.)。在厌氧条件下，大部分卤代有机污染物的还原脱氯反应都是在土壤或者沉积物中发生作用的。有报道表明土壤和沉积物中的胡敏素是促进微生物还原脱卤素反应(多氯联苯脱氯及四溴双酚A脱溴)发生的必要因素(Zhang,C.；Li,Z.；Suzuki,D.；Ye,L.；Yoshida,N.；Katayama,A.,A humin-dependent Dehalobacter species is involved inreductive debromination of tetrabromobisphenol A.Chemosphere 2013)。在这个反应过程中胡敏素起到了电子媒介体的作用。我们最近也报道了胡敏素能介导六氯联苯PCB153(2,2,4,4,5,5-六氯联苯)的降解(Zhang,D.,Zhang,N.,Yu,X.,Zhang,Z.,Yang,S.andZhang,C.(2017)Effect of humins from different sediments on microbialdegradation of 2,2′,4,4′,5,5′-hexachlorobiphenyl(PCB 153),and theirpolyphasic characterization.RSC Advances 7(12),6849-6855.)，也就是说，有机污染物，如PCB的厌氧生物降解活性之所以只能在土壤或沉积物中进行反应，这是由于功能微生物需要依赖于土壤和沉积物中的胡敏素来进行电子传递，从而达到脱氯的效果。
胡敏素是土壤或沉积物腐殖质中既不溶于酸也不溶于碱的固体有机物。目前，学者们普遍研究的电子媒介体包括腐殖酸及其模式化合物都是水溶性的物质，在污染物的实地生物修复中很容易流失。而胡敏素作为固体电子媒介体，在任何pH环境中都不溶解，且其化学结构极其稳定，能长期保持活性。同时，胡敏素还是天然存在、环境友好、无毒性的物质，在实地污染修复中的具有很强的应用优势。
但是，胡敏素的提取方法很繁琐且耗时长，每次提取及纯化需要一至两个月时间。并且，胡敏素的电子媒介效果往往会受土壤或沉积物来源的限制。
发明内容
本发明提供一种介导多氯联苯厌氧还原脱氯的生物制剂，产品环境友好，无毒性，能有效介导多氯联苯厌氧还原脱氯，为多氯联苯的降解提供了新的途径。
本发明采用的技术方案是：一种介导多氯联苯厌氧还原脱氯的生物制剂，由以下组分混合制成：无机盐培养基1L，乳酸钠1.5-2.5ml，维生素溶液1-2mL，厌氧微生物1-2mg，油菜杆生物炭4-6g。
进一步地，所述无机盐培养基配方为：NH4Cl 1.0g/L，CaCl2·2H2O 0.05g/L，MgCl2·6H2O0.1g/L，K2HPO4 0.4g/L，Se/W溶液1mL/L，SL-10微量元素溶液1mL/L，pH7.2的MOPS缓冲液10mmol/L，维生素溶液0.02ml/L,水余量。
其中，每升Se/W溶液的组成为：NaOH 0.5g，NaSeO3·5H2O 3mg，Na2WO4·2H2O 4mg，水余量。
每升SL-10微量元素溶液的组成为：HCl 10.0mL，FeCl2·4H2O 1.5g，CoCl2·6H2O196.0mg，MnCl2·4H2O 100.0mg，ZnCl2 70.0mg，H3BO3 6.0mg，CuCl2·2H2O 2.0mg，NiCl2·6H2O 24.0mg，Na2MoO4·2H2O 36.0mg，水余量。
每升维生素溶液的组成为：生物素20mg，叶酸20mg，VB6 100mg，VB1 50mg，VB250mg，VB3 50mg，D-泛酸钙50mg，V B12 50mg，对氨基苯甲酸50mg，硫辛酸50mg，VB550mg，亚铁血红素50mg，1,2-萘醌50mg，水余量。
进一步地，所述厌氧微生物由以下质量份数的菌种混合制成：脱硫单胞菌(Desulfuromonassp.)43.5-45.5份，脱硫杆菌(Desulfitobacteriumsp.)21.6-25.8份，微小杆菌(Exiguobacteriumsp.)3.8-5.3份，柠檬酸杆菌(Citrobactersp.)6.2-8.1份，嗜碱菌(Alkaliphilussp.)4.7-5.1份，假单胞菌(Pseudomonassp.)1.8-2.3份，脱卤素杆菌(Dehalobactersp.)3.5-6.5份，Bellilinea sp.3.4-4.1份，Dehalogenimonas sp.2.8-5.9份。
进一步地，所述油菜杆生物炭的制备方法为：将油菜杆切成1-2cm长的枝条，在炭化炉中，无氧条件下，温度450℃，炭化4-6h，取出，机械破碎，研磨，过60目筛，即可获得油菜杆生物炭。
本发明的有益效果是：产品环境友好，无毒性，能有效介导多氯联苯厌氧还原脱氯，为多氯联苯的降解提供了新的途径。
附图说明
图1是实施例1的降解结果图。
图2是实施例2的降解结果图。
图3是实施例3的降解结果图。
图4是对比例1的降解结果图。
图5是对比例2的降解结果图。
具体实施方式
经过长期研究，发明人发现了一种可以与胡敏素的电子媒介作用相媲美或者说效果更胜一筹的固体电子媒介体-油菜杆生物炭。本发明首次报道油菜杆生物炭作为固体电子媒介体在微生物降解氯代有机污染物(多氯联苯)的过程中起着不可或缺的作用。鉴于油菜杆生物炭是天然制成、环境友好、且在自然环境中广泛存在，这个固体胞外电子传递体系的发现，是有机污染物，特别是持久性有机污染物(部分有机污染物在环境中比较容易被降解，如在好氧菌的作用下即可被降解或只需很短的时间即可被降解。而像诸如五氯酚、多氯联苯等有机物很难被降解，会在环境中持久存在，因此这些物质的微生物降解利用需要特定的条件，需借助特定的载体如本专利中的油菜杆生物炭才能被完成)原位生物修复技术研究的重大突破。
本发明用油菜杆生物炭作为固体电子媒介体促进多氯联苯的生物厌氧还原脱氯。油菜，原产中国，十字花科、芸薹属植物，其茎颜色深绿，帮如白菜，花朵为黄色。一般生长在气候相对相对湿润的地方。主要分布在浙江、安徽、河南、四川等地。
基于油菜杆生物炭作为固体电子媒介体促进多氯联苯的生物厌氧还原脱氯的作用，以油菜杆生物炭为基础，本发明特定配制了能介导多氯联苯厌氧还原脱氯的生物制剂，包括无机盐培养基、厌氧微生物、乳酸钠及维生素溶液，尤其是能促进多氯联苯的生物厌氧还原脱氯的特定厌氧微生物选择。多氯联苯的厌氧还原脱氯是个电子消耗过程，微生物通过呼吸作用以有机酸盐(如乳酸钠)为电子供体，多氯联苯为电子受体将氯素从有机污染物中去除的过程，所以本发明配方中的乳酸钠是作为电子供体加入的。
本发明中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
下面通过具体实施例，并结合附图，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。
本发明的厌氧微生物筛选自东海近岸海域海底沉积物样品(122°E，29°N)，经菌落多样性分析，微生物菌群组成为：脱硫单胞菌(Desulfuromonassp.)，脱硫杆菌(Desulfitobacteriumsp.)微小杆菌属(Exiguobacteriumsp.)，柠檬酸杆菌(Citrobactersp.),嗜碱菌(Alkaliphilussp.)，假单胞菌(Pseudomonassp.)，脱卤素杆菌(Dehalobactersp.)，Bellilineasp.，Dehalogenimonassp.。
本发明无机盐培养基的成分，SL-10微量元素溶液的成分，Se/W溶液的成分，维生素溶液的成分均是市售产品。
pH7.2的MOPS缓冲液配制为：41.8g MOPS溶解在1L蒸馏水中，加0.5～1M的NaOH水溶液调节pH至7.2，然后用蒸馏水定容至1L，于4摄氏度保存。
本发明油菜杆生物炭的制备方法为：将油菜杆切成1cm长的枝条，在马弗炉中，无氧条件下，温度450℃，炭化4-6h，取出，机械破碎，研磨，过60目筛，即可获得油菜杆生物炭。
实施例1：
一种能介导多氯联苯厌氧还原脱氯的生物制剂，由以下组分混合制成：无机盐培养基1L，厌氧微生物1mg，乳酸钠1.5ml，维生素溶液1mL，油菜杆生物炭4g。
按质量百分比计，所述厌氧微生物由以下菌种组成：脱硫单胞菌(Desulfuromonassp.)43.5％，脱硫杆菌(Desulfitobacteriumsp.)23.6％，微小杆菌(Exiguobacteriumsp.)3.8％，柠檬酸杆菌(Citrobactersp.)6.2％，嗜碱菌(Alkaliphilussp.)5.1％，假单胞菌(Pseudomonassp.)1.8％，脱卤素杆菌(Dehalobactersp.)6.5％，Bellilinea sp.3.6％，Dehalogenimonas sp.5.9％。
所述无机盐培养基配方为：NH4Cl 1.0g/L，CaCl2·2H2O 0.05g/L，MgCl2·6H2O0.1g/L，K2HPO4 0.4g/L，Se/W溶液1mL/L，SL-10微量元素溶液1mL/L，pH7.2的MOPS缓冲液10mmol/L，维生素溶液0.02ml/L,水余量。
每升Se/W溶液的组成为：NaOH 0.5g，NaSeO3·5H2O 3mg，Na2WO4·2H2O 4mg，水余量。
每升SL-10微量元素溶液的组成为：HCl 10.0mL，FeCl2·4H2O 1.5g，CoCl2·6H2O196.0mg，MnCl2·4H2O 100.0mg，ZnCl2 70.0mg，H3BO3 6.0mg，CuCl2·2H2O 2.0mg，NiCl2·6H2O 24.0mg，Na2MoO4·2H2O 36.0mg，水余量。
每升维生素溶液的组成为：生物素20mg，叶酸20mg，VB6 100mg，VB1 50mg，VB250mg，VB3 50mg，D-泛酸钙50mg，V B12 50mg，对氨基苯甲酸50mg，硫辛酸50mg，VB550mg，亚铁血红素50mg，1,2-萘醌50mg，水余量。
实施例2：
一种能介导多氯联苯厌氧还原脱氯的生物制剂，由以下组分混合制成：无机盐培养基1L，厌氧微生物2mg，乳酸钠2.5ml，维生素溶液2mL，油菜杆生物炭6g。
按质量百分比计，所述厌氧微生物由以下菌种组成：脱硫单胞菌(Desulfuromonassp.)45.2％，脱硫杆菌(Desulfitobacteriumsp.)25.8％微小杆菌(Exiguobacteriumsp.)5.3％，柠檬酸杆菌(Citrobactersp.)6.5％,嗜碱菌(Alkaliphilussp.)4.9％，假单胞菌(Pseudomonassp.)2.3％，脱卤素杆菌(Dehalobactersp.)3.8％，Bellilinea sp.3.4％，Dehalogenimonas sp.2.8％。
其它同实施例1。
实施例3：
一种能介导多氯联苯厌氧还原脱氯的生物制剂，由以下组分混合制成：无机盐培养基1L，厌氧微生物1.5mg，乳酸钠2ml，维生素溶液1.5mL，油菜杆生物炭5g。
按质量百分比计，所述厌氧微生物由以下菌种组成：脱硫单胞菌(Desulfuromonassp.)45.5％，脱硫杆菌(Desulfitobacteriumsp.)21.6％微小杆菌(Exiguobacteriumsp.)5.2％，柠檬酸杆菌(Citrobactersp.)8.1％,嗜碱菌(Alkaliphilussp.)4.7％，假单胞菌(Pseudomonassp.)1.8％，脱卤素杆菌(Dehalobactersp.)3.5％，Bellilinea sp.4.1％，Dehalogenimonas sp.5.5％。
其它同实施例1。
对比例1：不加厌氧微生物，其余同实施例1。
对比例2：不加油菜杆杆生物炭，其余同实施例1。
将多氯联苯以25mg/L置于实施例1-3以及对比例1-2制备得到的降解体系中，在培养箱中于30℃下黑暗环境中静置培养。在培养至少30天以后，用一次性注射器从培养体系中采取1ml样品，并以正己烷和丙酮(比例为1:9)为萃取剂从中萃取PCB及其代谢产物，然后用配备HP-5MS毛细管柱(J&W Scientific,Folsom,CA)的Agilent 7000系列气相色谱-质谱-质谱联用仪(GC-MS-MS)(美国,安捷伦)进行样品分析。
Agilent 7000GC-MS-MS程序方法为：初始温度80℃，保持2min，以8℃/min升至196℃，然后2℃/min的速度升至228℃，然后以8℃/min的速度升至250℃，保持12min，最后以10℃/min的速度升至290℃，保持3min，共计54.25min。
通过使用PCB标准品定量，本次购买使用的Aroclor1260分别含三氯联苯(PCB-3)1.98mol％，四氯联苯(PCB-4)4.23mol％,五氯联苯(PCB-5)32.71mol％,六氯联苯(PCB-6)32.67mol％,七氯联苯(PCB-7)25.46mol％,八氯联苯(PCB-8)2.95mol％。
图1表示实施例1的降解结果，通过上述培养厌体系培养30天，60天，75天后，Aroclor中主要成分高氯代多氯联苯PCB-5,PCB-6,PCB-7基本完全被降解，逐步转化为低毒的PCB-3和PCB-4，其中，从第0天到第60天，PCB-8从2.95mol％到2.62mol％，PCB-7从25.46mol％到13.2mol％，PCB-6从32.67mol％到13.13mol％，PCB-5从32.71mol％到10.28mol％，PCB-4从4.23mol％到46.46mol％，PCB-3从1.98mol％到15.06mol％，第60-75天降解效果基本稳定。
图2表示实施例2的降解结果，通过上述培养厌体系培养30天，60天，75天后，Aroclor中主要成分高氯代多氯联苯PCB-5,PCB-6,PCB-7基本完全被降解，逐步转化为低毒的PCB-3和PCB-4，其中，从第0天到第60天，PCB-8从2.95mol％到2.48mol％，PCB-7从25.46mol％到5.15mol％，PCB-6从32.67mol％到3.89mol％，PCB-5从32.71mol％到5.39mol％，PCB-4从4.23mol％到62.62mol％，PCB-3从1.98mol％到20.97mol％，第60-75天降解效果基本稳定。
图3表示实施例3的降解结果，通过上述培养厌体系培养30天，60天，75天后，Aroclor中主要成分高氯代多氯联苯PCB-5,PCB-6,PCB-7基本完全被降解，逐步转化为低毒的PCB-3和PCB-4，其中，从第0天到第60天，PCB-8从2.95mol％到2.63mol％，PCB-7从25.46mol％到8.35mol％，PCB-6从32.67mol％到9.87mol％，PCB-5从32.71mol％到8.25mol％，PCB-4从4.23mol％到58.08mol％，PCB-3从1.98mol％到18.82mol％，第60-75天降解效果基本稳定。
图4表示对比例1的降解结果，加入油菜杆生物炭，不加厌氧微生物，多氯联苯相比于标准样品基本没降解，说明多氯联苯的厌氧降解必须厌氧微生物的参与。
图5表示对比例2的降解结果，不加油菜杆生物炭，只加厌氧微生物，多氯联苯基本也没发生降解，说明多氯联苯的降解必须需要油菜杆生物炭的参与，油菜杆生物炭能代替土壤或胡敏素作为电子媒介体介导多氯联苯的还原降解实验。
实验表明，本生物制剂能把大部分高氯代多氯联苯(PCB-5，PCB-6，PCB-7，PCB-8)脱氯变成低氯代多氯联苯(PCB-3，PCB-4)，能显著降低其毒性和降解难度，使其更容易进一步通过好氧途径降解。
此外，本发明还采用其它不同的生物炭(垃圾生物炭、花生壳生物炭、山核桃生物炭等)代替油菜杆生物炭进行降解实验，对多氯联苯Aroclor1260几乎没降解效果。推测，油菜杆生物炭的成分可能含有其他生物炭所没有的具电子转移能力的活性基团，该基团能在微生物的作用下将培养系统中氧化还原过程中产生的电子转移至多氯联苯，从而介导多氯联苯的厌氧生物还原脱氯。
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。

Claims (4)

1.一种介导多氯联苯厌氧还原脱氯的生物制剂，其特征在于，由以下组分混合制成：无机盐培养基1L，乳酸钠1.5-2.5ml，维生素溶液1-2mL，厌氧微生物1-2mg，油菜杆生物炭4-6g。
2.根据权利要求1所述的生物制剂，其特征在于，所述无机盐培养基配方为：NH4Cl1.0g/L，CaCl2·2H2O 0.05g/L，MgCl2·6H2O 0.1g/L，K2HPO4 0.4g/L，Se/W溶液1mL/L，SL-10微量元素溶液1mL/L，pH7.2的MOPS缓冲液10mmol/L，维生素溶液0.02ml/L,水余量。
其中，每升Se/W溶液的组成为：NaOH 0.5g，NaSeO3·5H2O 3mg，Na2WO4·2H2O 4mg，水余量。
每升SL-10微量元素溶液的组成为：HCl 10.0mL，FeCl2·4H2O 1.5g，CoCl2·6H2O196.0mg，MnCl2·4H2O 100.0mg，ZnCl2 70.0mg，H3BO3 6.0mg，CuCl2·2H2O 2.0mg，NiCl2·6H2O 24.0mg，Na2MoO4·2H2O 36.0mg，水余量。
每升维生素溶液的组成为：生物素20mg，叶酸20mg，VB6 100mg，VB1 50mg，VB2 50mg，VB350mg，D-泛酸钙50mg，V B12 50mg，对氨基苯甲酸50mg，硫辛酸50mg，VB5 50mg，亚铁血红素50mg，1,2-萘醌50mg，水余量。
3.根据权利要求1所述的生物制剂，其特征在于，所述厌氧微生物由以下质量份数的菌种混合制成：脱硫单胞菌(Desulfuromonassp.)43.5-45.5份，脱硫杆菌(Desulfitobacteriumsp.)21.6-25.8份，微小杆菌(Exiguobacteriumsp.)3.8-5.3份，柠檬酸杆菌(Citrobactersp.)6.2-8.1份，嗜碱菌(Alkaliphilussp.)4.7-5.1份，假单胞菌(Pseudomonassp.)1.8-2.3份，脱卤素杆菌(Dehalobactersp.)3.5-6.5份，Bellilineasp.3.4-4.1份，Dehalogenimonas sp.2.8-5.9份。
4.根据权利要求1所述的生物制剂，其特征在于，所述油菜杆生物炭的制备方法为：将油菜杆切成1-2cm长的枝条，在炭化炉中，无氧条件下，温度450℃，炭化4-6h，取出，机械破碎，研磨，过60目筛，即可获得油菜杆生物炭。
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