CN107929241A - 一种甘草查尔酮a脂质体及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了甘草查尔酮A脂质体及其制备方法和应用，本发明将适量的胆固醇、卵磷脂和甘草查尔酮A置于混合后，加入氯仿‑甲醇混合液，采用旋转薄膜蒸发法制备均匀的脂质干膜，本发明的技术效果在于发现制备稳定高效的甘草查尔酮A脂质体的制备方法并且验证甘草查尔酮A可通过下调P‑gp表达从而使耐药K562人白血病细胞对阿霉素的药敏性部分恢复，从而达到逆转耐药的作用，对人体正常细胞安全、低毒。

Description

一种甘草查尔酮A脂质体及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于中草药领域，具体涉及一种甘草查尔酮A脂质体及其制备方法和应用.

背景技术

白血病是一种好发在儿童造血系统的恶性肿瘤，是由于造血干细胞增殖分化异常而导致的恶性增殖性疾病,是主要威胁儿童健康的恶性肿瘤之一；儿童白血病具有两个特点:一是恶性程度高,病情发展迅速、大多是急性；二是对化学药物治疗很敏感,癌细胞容易杀灭。因此，化疗是目前治疗白血病最有力和最常用的手段，但在治疗过程中产生的多药耐药(Multi drug resistance,MDR)现象是化疗造成失败的最主要因素，因此，白血病MDR是化疗的一大障碍，也是困扰白血病临床治疗的关键性难题；多药耐药是指肿瘤对一种抗肿瘤药物出现耐药的同时,对其他许多结构各异、作用机制不同的抗肿瘤药物亦产生交叉耐药现象,通常发生在分子量大的亲脂类化合物,如烷化剂类、抗肿瘤抗生素类、植物碱类药物、激素类等抗肿瘤药物。

据美国癌症协会统计,每年白血病患者因肿瘤不同程度的耐药性或受耐药影响而死亡；因此，如何通过克服白血病MDR从而提高抗癌药物疗效已经成为白血病治疗亟待解决的关键科技问题。

肿瘤耐药是一个非常复杂的过程,其机制随着药物及其生物种类或细胞的组织来源不同而异,往往有以下多种机制参与：①药物吸收减少，细胞内药物泵出增多，引起细胞内药物浓度降低，如由mdr1基因编码的P-gp引起的耐药性。

迄今至少已发现13种与MDR相关的ATP结合盒转运体,P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)是其中最重要的一员，研究表明mdr1及其表达产物P-gp在MDR中起主导作用。P-gp参与的MDR近年来最受人们关注。P-gp由mdr-1基因编码，在耐药细胞中高表达的产物，由1280个氨基酸组成，分子量约为170kDa，是一种具有ATP依赖性的药物外排泵，依赖ATP将许多结构差异很大的抗癌药物由肿瘤细胞内泵到细胞外，从而降低细胞内的药物浓度引起MDR的产生；②细胞凋亡的抑制,如抗凋亡基因bcl-2的表达增加及凋亡基因Fas、Bax的降低等；③细胞解毒系统和修复系统功能加强，使药物迅速灭火，药物引起的肿瘤细胞DNA损伤得以及时修复，如与GST相关的耐药性；④靶分子的改变；药物靶点在质和量上的改变，主要指拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)表达降低，并发生点突变，活性降低，减弱以此酶为靶点的药物的细胞毒性；⑤发生在细胞质和细胞器水平的药物亚细胞分布的改变，使药物无法接近其作用靶点，引起药物有效浓度降低，如由多药耐药相关蛋白(MRP)引起的耐药性。

黄酮类化合物是一类多酚化合物，广泛存在于多种蔬菜、水果和药用植物中，通常被分为9种，包括黄酮醇、黄酮、黄烷-3-醇、花青素、异黄酮素、原花青素、橙酮类和查尔酮类。近年来，黄酮类化合物在维持人体正常生理功能及防治疾病方面的作用受到了广泛的重视。流行病学调查显示，经常摄入富含黄酮类化合物的蔬菜和水果可以降低白血病、大肠癌和乳腺癌等癌症的发病率。由于黄酮类化合物的抗肿瘤活性往往具有高效低毒等特点，许多发达国家不断在进行黄酮类化合物逆转肿瘤耐药的的筛选工作。

发明内容

本发明提供甘草查尔酮A脂质体及其制备方法和应用。

本发明的具体技术方案如下：

一种甘草查尔酮A脂质体,所述甘草查尔酮A脂质体的粒径为224.8±4.5nm,其包封率＞55％。

本发明还提供一种制备上述甘草查尔酮A脂质体的方法,步骤如下：称取胆固醇、卵磷脂和甘草查尔酮A置于容器中，加入氯仿-甲醇混合液，所述氯仿-甲醇混合液中氯仿与甲醇体积比＝2:1，采用旋转薄膜蒸发法制备均匀的脂质干膜，以氮气吹干残余溶剂，再加入PH＝7的磷酸缓冲盐溶液，使脂质膜充分溶胀水化，在超声功率400W的条件下超声5min即得；所述胆固醇与卵磷脂质量比为胆固醇：卵磷脂＝1:5；所述甘草查尔酮A与卵磷脂摩尔比为甘草查尔酮A：卵磷脂＝1:10。

作为优选项：所述甘草查尔酮A的纯度为98％。

作为优选项：所述旋转薄膜蒸发法为在50-60℃条件下旋转制膜20-50min；所述脂质干膜厚度为0.1-0.2mm。

作为优选项：所述超声中按照超声5秒，停5秒的频率进行。

本发明还公开上述的甘草查尔酮A脂质体在制备逆转耐药肿瘤药物的应用。

本发明还公开上述的甘草查尔酮A脂质体和药学上可接受的载体的药物组合物在制造用于逆转耐药肿瘤药物的应用。

上耐药肿瘤为白血病肿瘤。

甘草查尔酮A(Licochalcone A,LicA)是从天然甘草中提取的一种黄酮类化合物，具有松弛血管、抗过敏、抗自由基和抗肿瘤等多种作用，但对白血病耐药的影响尚未见报道，本发明探讨甘草查尔酮A脂质体对K562人白血病细胞耐药的逆转作用及其机制，为临床上合理治疗白血病提供理论依据。

本发明中的甘草查尔酮A脂质体可显著性逆转K562人白血病细胞耐药，进一步检测发现，甘草查尔酮A脂质体可以显著性抑制P-gp的表达。

本发明可以直接将甘草查尔酮A脂质体作为治疗药物用于肿瘤治疗，治疗方式为局部给药或静脉注射。

本发明通过以下实验制备甘草查尔酮脂质体以及证明甘草查尔酮A脂质体逆转肿瘤耐药的作用：

①采用超声波薄膜分散法制备甘草查尔酮A脂质体；②不同浓度的甘草查尔酮脂质体分别处理耐药K562人白血病细胞，细胞药敏性升高，细胞内化疗药物浓度升高，生长受抑制；③耐药K562人白血病细胞的耐药相关蛋白表达水平下降。

本发明具有以下优点：

1)本发明采用超声波薄膜分散法制备甘草查尔酮A脂质体，工艺成熟可靠，原料来源广泛且质量优良；制备的甘草查尔酮A脂质体具有缓释、增效、减毒和靶向等优点，生物利用度高。

2)现有逆转剂为老药新用,逆转耐药往往不是其主要功能,临床毒副作用大；生物制剂在体内不稳定,难以作用到靶点，而本发明中甘草查尔酮脂质体性质稳定，具有较好的生物相容性，因此，甘草查尔酮A脂质体对逆转肿瘤耐药作用高效低毒；

3)甘草查尔酮A脂质体可对耐药细胞有细胞毒增效作用，而对敏感细胞往往影响不大，即表现出对P-gp高表达的耐药细胞的选择性；

4)甘草查尔酮A脂质体在发挥逆转肿瘤耐药的同时,还可以通过扶正培本、清热解毒、化痰活血等作用直接发挥抗肿瘤作用,从而提高机体的免疫功能，抑制肿瘤细胞增殖与血管生成，诱导肿瘤细胞分化与凋亡等多种功效可有效抑制肿瘤的生长和转移；

5)甘草查尔酮A脂质体性质稳定到达肿瘤部位后，降解周期较长，药效持久；

6)将甘草查尔酮A脂质体作为药物，可避免连接配基带来的免疫原性问题，同时大幅度降低制药成本；

7)肿瘤细胞对甘草查尔酮A脂质体不易产生耐药性，实现肿瘤治疗具有持久、高效的优良特性；

8)本发明采用常规给药剂型，技术成熟，生产工艺简单易行；

9)本发明采用常规给药方式，给药方便，无痛苦。

附图说明

图1甘草查尔酮A脂质体抑制K562和K562/R细胞增殖曲线图；

图2甘草查尔酮A脂质体对K562/R细胞P-gp蛋白表达的影响，其中A为Westernblot测定P糖蛋白表达，B为凝胶成像分析软件测定蛋白密度；

图3甘草查尔酮A脂质体对K562/R细胞mdr1 mRNA表达的影响。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明。

以下实施例所用的甘草查尔酮A，纯度为98％，批号：14022606。

【实施例1】甘草查尔酮A脂质体制备及表征检测

(一)甘草查尔酮A脂质体制备

1.制备方法：

称取胆固醇、卵磷脂和甘草查尔酮A置于容器中，加入氯仿-甲醇混合液，所述氯仿-甲醇混合液中氯仿与甲醇体积比＝2:1，在50-60℃条件下旋转薄膜蒸发法旋转制膜20-50min，制成均匀的脂质干膜；所述脂质干膜厚度为0.1-0.2mm；以氮气吹干残余溶剂，再加入PH＝7的磷酸缓冲盐溶液，使脂质膜充分溶胀水化，在超声功率400W的条件下超声5min，即得；所述超声中按照超声5秒，停5秒的频率进行；所述胆固醇与卵磷脂质量比为胆固醇：卵磷脂＝1:5；所述甘草查尔酮A与卵磷脂摩尔比为甘草查尔酮A：卵磷脂＝1:10。

上述制备得到的甘草查尔酮A脂质体的粒径为224.8±4.5nm,其包封率＞55％。

2.处方设计与优化

参照文献和单因素试验预试分析，确定正交实验的因素及水平。以药物包封率为评价指标，采用正交实验进行处方筛选和优化。

(二)甘草查尔酮A脂质体表征

1.形态学观察和粒径大小测定

采用普通光学显微镜和透射电镜磷钨酸负染法观察脂质体。采用激光粒径测量仪测定平均粒径。

2.脂质体包封率测定

1)紫外光谱扫描

将药物、含药脂质体和空白脂质体分别用甲醇-蒸馏水(1:1，V/V)混合液溶解稀释后，于200～500nm扫描，药物和含药脂质体在372nm处有最大吸收，空白脂质体在该波长范围无吸收峰。

2)标准曲线制备

精密称取在60℃干燥至恒重的甘草查尔酮A 1mg置10ml容量瓶中，加甲醇少量溶解并稀释至刻度作为对照品储备液(100μg·mL-1)，准确移取标准溶液0.125、0.25、0.5、0.75、1.0ml于10mL容量瓶中，用甲醇-蒸馏水(1:1,V/V)混合液稀释至刻度。以浓度C(μg/ml)为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制标准曲线。

3)回收率考察

配置一系列不同浓度的甘草查尔酮A标准溶液，分别移取5ml上柱，按照“4.4”项的层析条件进行柱层析，收集游离药物组分，稀释，定容，于372nm处测吸收值，计算柱回收率。配置一系列不同浓度的甘草查尔酮A标准溶液，分别与空白脂质体混合，得标准混合液，分别移取5ml上柱，相同条件柱层析，测得游离药物的组分吸收值，计算柱加样回收率。

4)包封率测定

葡聚糖凝胶柱色谱。柱层析条件：Sephadex G-50柱(2.6cm×30cm)，重蒸馏水洗脱，流速为0.5ml·min-1，室温下进行。先测得脂质体总药量(W总)，再用葡聚糖凝胶层析法分离含药脂质体与游离药物并测定游离药物的量(W游)，按照中国药典2000版的脂质体包封率计算公式计算，即：包封率﹦(W总-W游)/W总×100％。W总：总药物的量，W游：未包入脂质体的游离药物的量。具体简述如下：精密量取脂质体5ml，用重蒸馏水稀释至25ml,后将其置50mL容量瓶用甲醇稀释至刻度，摇匀待测。再取甘草查尔酮A脂质体5ml上柱，重蒸馏水洗脱，以372nm监测并收集游离甘草查尔酮A洗脱峰，用重蒸馏水稀释至25ml,再将其置50ml容量瓶用甲醇稀释至刻度并测定游离药物的量，计算包封率。

5)稳定性考察

将3批样品分别置室温的自然条件下和冰箱内℃放置1、2、3和6月考察其稳定性,具体考察指标如下：①外观：脂质体溶液属于高度分散的热力学不稳定体系,贮存过程中粒子有自发聚集和融合等倾向,导致脂质体粒径分布改变,长期放置可发生聚集、絮凝和分层沉淀。实验中根据样品外观和显微镜下粒子观察结果,对其评价。脂质体外观不分层,无沉淀,记为(-)；不分层,有少许絮凝振摇后可复原,记为(±)分层,有不可逆沉淀记为(+)度；②pH值：脂质体在储存过程中,磷脂氧化水解产生游离的脂肪酸等使pH值下降,所以有必要对脂质体的pH值进行监测,以反映脂质体的稳定包封率；③包封率是评价脂质体质量的指标之一,脂质体在储存过程中,受药物性质和膜稳定性等的影响,易渗漏,因此脂质体的包封率可以反映其稳定性。

(三)结果

1.处方设计与优化

参照文献和单因素试验预试分析结果，确定胆固醇：卵磷脂(质量比)、甘草查尔酮A:脂类(摩尔比)以及磷酸缓冲液pH值作为3个考察因素，并确定各因素的水平范围，如表1，以药物包封率为评价指标，按照正交实验表设计9个处方制备脂质体。包封率的影响因素大小为A>B>C,各因素的最优搭配为A2B1C3，即胆固醇：卵磷脂(质量比)为1:5，甘草查尔酮A：脂类(摩尔比)为1:10，PBS的pH值为7.2。因此，初步筛选出的组方为：

⑴胆固醇25mg；

⑵磷脂100mg；

⑶甘草查尔酮A 10mg；

⑷pH值为7.4的磷酸盐缓冲液20ml，如表2。

2.甘草查尔酮A脂质体表征

1)形态学观察和粒径大小测定 由透射电镜照片可见，甘草查尔酮A脂质体混悬液适当稀释后,用质量分数为1％的磷钨酸负染,于透射电镜下观察形态,结果可见脂质体外观圆整,多为球形及类球形粒子,大小较均一。粒径分布范围窄且符合正态分布规律,粒径为224.8±4.5nm。

2)紫外光谱扫描，标准曲线制备，回收率考察 药物和含药脂质体在372nm处有最大吸收，空白脂质体在该波长范围无吸收峰。以浓度C(μg/ml)为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制标准曲线,得λ_max＝372nm波长处的吸光度A与药物浓度C(μg·mL-1)的回归方程为：A＝0.0456C+0.0066(r＝0.9991)，线形范围为：1.0～5.0μg·mL-1。柱回收率，其平均值为100.35％，RSD为1.24％。柱加样回收率，其平均值为99.66％，RSD为0.86％，如表3。

3)包封率测定 将制备的甘草查尔酮A脂质体样品上Sephadex G-50柱分离，收集游离Licochalcone A洗脱峰，并测定药物的量，由包封率的计算公式得到脂质体平均包封率为55.73％(n＝4)。

4)稳定性考察 脂质体在充氮气条件下分别于4℃和室温放置1、2、3和6个月均未见分层凝聚等现象，仍为均匀混悬液，且pH值和包封率无显著变化，提示其稳定性良好，如表4。

(四)结论

上述实验结果表明，甘草查尔酮A脂质体的制备方法简单易行，且成功率较高，性质稳定。

【实施例2】甘草查尔酮A脂质体逆转耐药K562人白血病细胞作用研究

(一)细胞培养

K562和K562/R细胞于含10％小牛血清、100U/ml的青霉素和100U/ml的链霉素的RPMI/1640培养液中，在37℃、饱和湿度及5％CO₂的细胞培养箱内传代培养。K562/R细胞培养在在常规培养液中加入1mg/L的阿霉素以维持其耐药性，实验前两周转移至不含阿霉素的培养液中培养，采用对数生长期的细胞进行试验，其他培养条件与K562相同。

(二)细胞处理

1.MTT法测定细胞活力将处于对数生长期的K562细胞(1×l0⁵)和K562/R细胞(2×l0⁵)接种于96孔板中，培养24h后，分别以不同浓度的甘草查尔酮A和0.1％DMSO处理，继续培养48h，待培养结束前4h，向各孔中加入MTT(5.0μg/L)20μl，继续培养4h后每孔加入10％的DMSO 150μl，振荡10min，采用全自动酶标仪检测A570值。按以下公式计算细胞生长抑制率(生长抑制率<5％为该药非细胞毒性浓度)。细胞生长抑制率(IR)＝(1-实验组A 570/对照组A 570)×l00％。采用直线回归法计算半数抑制浓度IC₅₀。

2.MTT法测定细胞药敏性 将对数生长期的K562细胞(1×10⁵)和K562/R细胞(2×10⁵)接种于96孔板中，培养24h后，加不同浓度ADM(0.006～1.72μM)和甘草查尔酮A(1.0～5.0μM)孵育48h后测定A570值。同以上方法测定细胞生长抑制率。每组均设4个复孔，实验重复3次。按ADM浓度-抑制率曲线计算细胞生长抑制50％的ADM浓度即IC₅₀，表示细胞对ADM的药敏性及甘草查尔酮A对该细胞株IC₅₀的影响；耐药倍数＝耐药细胞IC₅₀/敏感细胞IC₅₀。耐药细胞逆转倍数＝ADM IC₅₀/(ADM+甘草查尔酮A)IC₅₀。

3.荧光分光光度法测定细胞内阿霉素(ADM)浓度 根据ADM本身发荧光的特点，参考文献方法测定细胞内阿霉素(ADM)浓度。具体简述如下：将对数生长期的K562细胞(1×l0⁵)和K562/R细胞(2×l0⁵)接种于96孔板中，培养24h后，分别加ADM(0.43μM)和甘草查尔酮A(1.0～5.0μM)孵育24h，PBS洗3次(4℃)，重新悬浮于0.3mol/L HCl的50％乙醇消化液中消化过夜(4℃)，离心，取上清测定荧光强度(激发470nm，发射585nm，狭缝8nm)，同时做ADM浓度—荧光强度标准曲线，计算细胞内阿霉素(ADM)浓度。

4.Western blot测定P糖蛋白表达 取对数生长期细胞,加入甘草查尔酮A(1.0，2.5和5.0μM)作用K562细胞和K562/R细胞24h后,加入适量裂解液和蛋白酶抑制剂，冰上裂解20min，12 000r/min,4℃离心15min,取上清，采用BCA蛋白含量检测试剂盒测定蛋白含量,将所有样品的蛋白含量稀释至等浓度。取20μg样品与5×上样缓冲液混匀,煮沸5min,每孔上样20μg进行SDS-PAGE电泳。电泳完毕,取下凝胶,蛋白条带电转膜至硝酸纤维素膜(80V约2h)。硝酸纤维素膜置于封闭液中,室温封闭2h。加入兔抗人P-gp(1：400)及兔抗人β-actin一抗,4℃孵育过夜,TBST洗膜3次,然后再加羊抗兔IgG-HRP二抗,室温摇床孵育2h,再次TBST洗膜3次。ECL化学发光显色。采用凝胶成像分析软件(Bio-Rad公司，美国)测定蛋白密度.

5.qPCR测定mdr1 mRNA表达水平 参照文献，采用qPCR测定mdr1 mRNA表达水平。甘草查尔酮A不同浓度(1、2.5和5.0μM)作用K562细胞(1×l05)和K562/R细胞后，收集细胞按Trizol RNA提取试剂盒提取总RNA，利用紫外光分光光度仪测定260nm和280nm光密度值，估算总RNA浓度和纯度。mdr1引物由上海申工生物公司合成。mdr1基因引物序列：上游引物：

5′-TGCTCAGACAGGATGTGAGTTG-3′，下游引物：

5′-TAGCCCCTTTAACTTGAGCAGC-3′；GAPDH引物序列：上游引物：5′-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3′，下游引物：

5′-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3′。用M-MLV逆转录酶将总RNA(1.2μg)逆转录成cDNA。将2μl cDNA模板加入到含引物的SYBR Green PCR预混液中以进行扩增，终体积为25μl。使用CFX Connect荧光定量PCR仪(美国BIO-RAD公司)进行定量PCR，检测各组靶基因的Ct值。融解曲线分析确认扩增产物的特异性，2％琼脂糖凝胶电泳确认扩增产物的长度。使用2-ΔΔCt法进行mRNA相对定量，以β-actin为内参基因。

(三)结果

1.细胞活力 甘草查尔酮A作用K562和K562/ADM细胞48h的浓度效应曲线，如图1可见，随着浓度的增加，K562和K562/ADM细胞的增殖抑制率也相应增加，呈量效关系。甘草查尔酮A在浓度(1.0-5.0μM)范围内对K562/R和K562细胞增殖抑制率均小于5％，故确定1.0-5.0μM为最佳逆转耐药的剂量。

2.细胞药敏性 ADM浓度依赖性抑制K562/R和K562细胞增殖，IC₅₀分别为0.452μM和0.045μM，表明K562/R较K562细胞的耐药倍数约为10倍；甘草查尔酮A与不同浓度ADM联合作用均可使K562/ADM的IC₅₀呈浓度(1.0-5.0μM)依赖性下降，其逆转倍数为2.05-13.70倍。甘草查尔酮A增强ADM对K562细胞增殖的抑制作用可达1.32-2.81倍，如表5。

3.细胞内药物浓度 K562细胞内ADM积累是K562/R细胞2.6倍，表明K562/R细胞具有典型耐药特征。甘草查尔酮A浓度(1，2.5和5.0μM)依赖性可增加K562/R细胞内ADM水平分别为48.46％,149.58％和268.0％，可使K562细胞ADM浓度有所增加，但差别不显著(<1.3倍)，如表6。

4.P-gp蛋白表达 经1.0-5.0μM的甘草查尔酮A处理后,K562/R细胞P-gp蛋白表达明显下降,抑制率分别为33.1％，53.4％和66.6％，且经5.0μM的甘草查尔酮A处理的K562/R细胞中P-gp蛋白表达水平可稍低于K562细胞，如图2。

5.mdr1 mRNA表达 与亲代敏感株K562相比,mdr1 mRNA在K562/R细胞中过表达；甘草查尔酮A(1.0、2.5和5.0μM)作用48h后，K562/R细胞中mdr1 mRNA表达水平呈不同程度的降低，抑制率分别为28.8％，48.0％和63.1％，如图3。

(四)结论

上述实验结果表明，甘草查尔酮A脂质体可通过下调P-gp表达从而使K562/R对ADM的药敏性部分恢复，从而达到逆转耐药的作用。

综合以上实验的结果、结论，可以确信，甘草查尔酮A脂质体是逆转肿瘤耐药的有效药物。

试验因素与水平

表1

正交设计与结果分析

表2

甘草查尔酮A脂质体回收率测定结果(n＝5)

表3

甘草查尔酮A脂质体稳定性考察结果(n＝3)

注：脂质体外观不分层,无沉淀,记为(-)；不分层,有少许絮凝振摇后可复原,记为(±)分层,有不可逆沉淀记为(+)度

表4

甘草查尔酮A脂质体对K562/R细胞药敏性的影响

注：n＝4.与ADM组比，^*P<0.05,^**P<0.01.

表5

甘草查尔酮A脂质体对K562和K562/R细胞内ADM浓度(μM)的影响

注：n＝4.与对照组比，^*P<0.05，^**P<0.01.

表6

表1试验因素与水平；

表2正交实验设计与结果；

表3甘草查尔酮A脂质体回收率测定结果；

表4甘草查尔酮A脂质体稳定性考察结果；

表5甘草查尔酮A脂质体对K562/R细胞药敏性的影响；

表6甘草查尔酮A脂质体对K562和K562/R细胞内阿霉素浓度(μM)的影响。

应当理解的是，本说明书未详细阐述的部分均属于现有技术。

应当理解的是，上述针对较佳实施例的描述较为详细，并不能因此而认为是对本发明专利保护范围的限制，本领域的普通技术人员在本发明的启示下，在不脱离本发明权利要求所保护的范围情况下，还可以做出替换或变形，均落入本发明的保护范围之内，本发明的请求保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (8)

1.一种甘草查尔酮A脂质体,其特征在于:所述甘草查尔酮A脂质体的粒径为224.8±4.5nm,其包封率＞55％。

2.如权利要求1所述的一种制备甘草查尔酮A脂质体的方法,其特征在于:步骤如下：称取胆固醇、卵磷脂和甘草查尔酮A置于容器中，加入氯仿-甲醇混合液，所述氯仿-甲醇混合液中氯仿与甲醇体积比＝2:1，采用旋转薄膜蒸发法制备均匀的脂质干膜，以氮气吹干残余溶剂，再加入PH＝7的磷酸缓冲盐溶液，使脂质膜充分溶胀水化，在超声功率400W的条件下超声5min即得；所述胆固醇与卵磷脂质量比为胆固醇：卵磷脂＝1:5；所述甘草查尔酮A与卵磷脂摩尔比为甘草查尔酮A：卵磷脂＝1:10。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述甘草查尔酮A的纯度为98％。

4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述旋转薄膜蒸发法为在50-60℃条件下旋转制膜20-50min；所述脂质干膜厚度为0.1-0.2mm。

5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述超声中按照超声5秒，停5秒的频率进行。

6.如权利要求1所述的甘草查尔酮A脂质体在制备逆转耐药肿瘤药物的应用。

7.如权利要求1所述的甘草查尔酮A脂质体和药学上可接受的载体的药物组合物在制造用于逆转耐药肿瘤药物的应用。

8.如权利要求4或5所述的应用，其特征在于：所述耐药肿瘤为白血病肿瘤。