CN107920531A - 用于对抗鱼类寄生虫的试剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供了丁醚脲或其兽医学可接受的盐用于治疗鱼类寄生虫的用途。

Description

用于对抗鱼类寄生虫的试剂

技术领域

在最广泛的方面，本发明涉及治疗鱼类寄生虫的领域。

背景技术

寄生虫侵扰在鱼类养殖业中构成相当大的问题。特别是由海虱(例如鲑疮痂鱼虱(Lepeophtheirus salmonis)、细长鱼虱(Caligus elongatus)和智利鱼虱(Caligusrogercresseyi))的侵扰视为鲑科鱼类养殖中，尤其是在大西洋鲑鱼(盐湖鲑鱼(Salmosalar))和虹鳟鱼(虹鳟(Oncorhynchus mykiss))中最重要的疾病问题之一。

鱼类寄生虫可以寄主鱼为食，并且可能对寄主有害或致命。例如，海虱侵扰可引起鳍损伤、皮肤糜烂、流血和开放性伤口，导致被其他病原体感染。当被感染的鱼在驱除刺痒寄生虫例如海虱的尝试中沿着网跳跃或刮擦时，可引起更多损伤。被寄生虫例如海虱侵扰的鱼也可具有降低的食欲，这可能对鱼的生长速度具有直接作用，并且是养鱼者特别关注的。

预防鱼类寄生虫的经常侵扰非常困难。例如，难以控制海水围栏中的海虱，因为海虱无处不在且随流而行。

目前通过用各种杀寄生虫剂定期治疗被感染的鱼来实现养鱼场中的鱼类寄生虫例如海虱的控制，所述杀寄生虫剂包括阿维菌素(如甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和伊维菌素)、有机磷酸盐(如甲基吡啶磷和敌敌畏)、拟除虫菊酯(如溴氰菊酯和氯氰菊酯)、昆虫生长调节剂(IGR)(包括苯甲酰脲如除虫脲和氟苯脲)、除虫菊素和氧化剂(特别是过氧化氢)。

这些杀寄生虫剂通常作为浴处理(尤其是在过氧化氢、拟除虫菊酯和有机磷酸盐的情况下)或作为饲料添加剂(阿维菌素和苯甲酰脲)施用。杀寄生虫剂也可通过腹膜内注射施用于鱼。

由于这些杀寄生虫剂的频繁和亚最佳使用，可发展抗性。对杀寄生虫剂具有减少的敏感性的寄生虫例如海虱对养鱼业造成巨大威胁。抗性寄生虫例如海虱的出现也鼓励使用较高剂量的杀寄生虫剂，这增加了成本，并且可能对环境有害。

此外，当存在对特定治疗的抗性的证据时，应小心避免使用相关化合物。因此，尽可能多的不同组的有效化合物可用于治疗鱼类寄生虫例如海虱的侵扰是有利的。

因此需要能够治疗鱼中的寄生虫侵扰例如海虱侵扰的新试剂，所述新试剂对鱼、养鱼场工人、消费者和环境是安全的。

硫脲丁醚脲是杀昆虫剂和杀螨剂，并且它是线粒体ATP合酶的抑制剂。丁醚脲先前已描述为对鱼有毒。本领域存在即使以非常低的浓度使用时丁醚脲也对鱼有害的强烈偏见，并且先前已报道对于虹鳟鱼低至0.0007mg/l的的LC50(96小时)值。丁醚脲先前并未调查或报道用于治疗鱼类寄生虫例如海虱。

然而，目前令人惊讶地发现，丁醚脲在治疗鱼类寄生虫包括海虱方面是高度有效的，并且对鱼例如鲑鱼和罗非鱼无毒。

发明内容

根据本发明的第一个方面，提供了用于治疗鱼类寄生虫的丁醚脲或其兽医学可接受的盐。

鱼类寄生虫可为海虱。具体地，在这些实施例中，提供了用于治疗鱼中的海虱的丁醚脲或其兽医学可接受的盐。寄生虫可为海虱，海虱可为鱼虱科(Caligidae)。特别地，海虱可为对鱼虱属(Dissonus)、疮痂鱼虱属(Lepeophtheirus)或鱼虱属(Caligus)。海虱可为桡足幼体，成体期前或成体期海虱。

鱼可为鲑鱼科(Salmonidae)。特别地，鱼可为鲑属(Salmo)或大麻哈鱼属(Oncorhynchus)。可替代地，鱼可为慈鲷科(Cichlidae)，例如罗非鱼属(Oreochromis)。

寄生有效量的丁醚脲或丁醚脲盐可存在于兽医学可接受的制剂中。

该制剂可包含亲水性聚合物。亲水性聚合物可包含聚(乙二醇)或聚(丙二醇)或其衍生物。

该制剂可包含非水极性溶剂。非水极性溶剂可包含DMSO、NMP、四甘醇、丙酮或DMF之一或组合。

该制剂可包含增溶剂。增溶剂可包含Cremophor EL、Tween、Brij C10、KolliphorHS15或Cremophor RH40之一或组合。

该制剂可适合于将丁醚脲或丁醚脲盐在含有所述鱼的水中分散至0.05-5ppm，优选0.5-2ppm的最终浓度。

丁醚脲或丁醚脲盐可为含药鱼饲料的形式。含药鱼饲料可为鱼饲料颗粒或丸粒的形式，所述鱼饲料颗粒或丸粒具有包含丁醚脲或丁醚脲盐的涂层。

丁醚脲或丁醚脲盐可配制用于腹膜内注射。用于腹膜内注射的制剂可包含以10-100mg/ml的量的丁醚脲。

丁醚脲或丁醚脲盐可与另外的活性剂组合配制。另外的活性剂可为能够治疗鱼中的寄生虫例如海虱的试剂。

根据本发明的第二个方面，提供了治疗鱼类寄生虫的方法。该方法包括将丁醚脲或其兽医学可接受的盐施用于鱼。鱼类寄生虫可为海虱。

根据本发明的第三个方面，提供了包含丁醚脲或其兽医学可接受的盐和鱼饲料的组合物。

根据本发明的第四个方面，提供了丁醚脲或其兽医学可接受的盐在治疗鱼类寄生虫中的用途。鱼类寄生虫可为海虱。用途可基本上如本文所述。

具体实施方式

丁醚脲或其兽医学可接受的盐用于治疗鱼中的鱼类寄生虫例如海虱的用途先前并未得到描述。

“治疗鱼类寄生虫”、“治疗鱼中的寄生虫”、“治疗鱼的寄生虫侵扰”、“鱼的寄生虫侵扰的治疗”、“鱼的治疗”、“针对寄生虫治疗鱼”、“控制寄生虫”和类似的术语预期指预防性或应答性治疗，例如控制、消除、保护不受和/或预防鱼群中的鱼类寄生虫(例如海虱)感染、侵扰或状况。鱼类寄生虫侵扰的治疗涵盖减少感染鱼群中每条鱼的寄生虫(例如海虱)的平均数目。寄生虫侵扰的控制涵盖预防感染鱼群中每条鱼的寄生虫的平均数目中的增加。取决于鱼的状况，这些术语还涵盖预防寄生虫(例如海虱)侵扰的发生，或与寄生虫侵扰相关的症状的发作，包括减少与侵扰相关的病症或状况或症状的严重性。因此，“治疗”可指将丁醚脲施用于在施用时未受寄生虫(例如海虱)折磨的鱼。治疗还涵盖预防鱼类寄生虫侵扰或与之相关症状的复发以及提及“控制”(例如，杀死、排斥、驱逐、使丧失能力、阻止、消除、减轻、最小化和根除)。

在一些实施例中，鱼类寄生虫是海虱，并且上述定义将被相应地解释。

提及治疗鱼“中”的寄生虫侵扰被理解为包括治疗外部寄生虫例如海虱，其以鱼“为食”并且不一定存在于鱼内部。像这样，提及治疗鱼中的寄生虫(例如海虱)可被解释为意指治疗鱼群内和鱼群旁存在的寄生虫。

除非另有说明，否则术语“兽医学可接受的”指示物质或组合物必须与被处理的鱼在化学和/或毒理学上相容，和/或如果适用的话，与用于治疗鱼的组合物或制剂中包含的其他成分相容。所公开的组合物可以各种方式施用，并且术语“兽医学可接受的”还指示施用方法对被治疗的鱼无害。应当注意的是，适当时，并且如本领域技术人员应理解的，所公开的丁醚脲组合物和制剂可单独施用，或者与一种或多种兽医学可接受的载体、稳定剂、防腐剂、着色剂、香料、赋形剂或其他试剂组合施用。

丁醚脲

对丁醚脲的提及指以纯形式的丁醚脲，或者任选连同其他物质一起在兽医学可接受的制剂中适当地配制的丁醚脲。另外，对丁醚脲的提及指以游离形式或兽医学可接受的盐形式的丁醚脲。

尽管本领域存在丁醚脲对鱼高度毒性的强烈偏见，但本发明人已惊讶地发现丁醚脲可以寄生有效的量施用于鱼，而对鱼没有任何毒性作用。

目前还已有利地发现，丁醚脲可用于有效杀死鱼类寄生虫包括海虱。此外，丁醚脲在虱子生命周期的多个阶段有利地有效针对海虱。

已发现丁醚脲在单独使用时有效治疗寄生虫例如海虱，而不需要使用另外的杀寄生虫剂或其他试剂。

丁醚脲是基于硫脲的杀昆虫剂/杀螨剂。它还由以下化学名称已知：N-叔丁基-N'-[2,6-二(丙-2-基)-4-苯氧基苯基]硫代碳二酰胺；1-叔丁基-3-(2,6-二异丙基-4-苯氧基苯基)硫脲；和N-[2,6-双(1-甲基乙基)-4-苯氧基苯基]-N'-(1,1-二甲基乙基)硫脲。频繁使用丁醚脲的拼写中的多种变化，并且特别地，丁醚脲通常被称为diafentiuron。为了避免疑问，单词“丁醚脲”的这些不同拼写指相同化合物，其结构显示于下文：

丁醚脲是前体农药(pro-pesticide)，并且活性代谢产物被认为是相应的碳化二亚胺。根据IRAC作用模式分类方案(IRAC Mode of Action Classification Scheme)，丁醚脲已被分为12A类。

丁醚脲以前经常被描述为对鱼有毒，本领域存在丁醚脲不应该施用于鱼或实际上不允许进入水道的强烈偏见。在丁醚脲的材料安全数据表中经常报道关于虹鳟鱼低至0.0007mg/l的致死浓度值(LC50(96小时))。可能由于本领域中的该强烈偏见，丁醚脲以前未调查用于治疗鱼中的寄生虫例如海虱。

尽管本领域中这种广泛持有的偏见，但目前已惊讶地发现，从毒理学和环境两者的角度来看，丁醚脲是安全的。具体地，已惊讶地发现，丁醚脲可用于有效地治疗鱼类寄生虫例如海虱，而对鱼没有任何毒性作用。

丁醚脲一般可在鱼发育的任何阶段应用，以便治疗鱼类寄生虫例如海虱。例如，在鲑鱼的情况下，当鱼在海上时可有利地进行处理。

丁醚脲先前已描述用作处理作物中的农药。然而，已经常发现，特定杀寄生虫化合物针对一种形式的寄生虫(例如作物害虫)的有效性不是该化合物针对另一类寄生虫(例如鱼类寄生虫)有效的指标。例如，可用的众多杀寄生虫化合物中仅非常有限的数目已显示针对海虱的良好功效。这些包括拟除虫菊酯和苯甲酰脲。在已将已知的抗寄生虫化合物对新的寄生虫物种进行测试时，存在促成经历的困难的几种因素。这些包括各个寄生虫物种之间的大的遗传和代谢多样性，以及寄生虫占据非常不同的栖息地，并且已进化出不同的宿主传播和感染策略的事实。鉴于此，已发现丁醚脲在治疗鱼类寄生虫例如海虱方面证实有利的高效力是令人惊讶的。

事实上，丁醚脲以前仅被报道用作杀昆虫剂和杀螨剂。相比之下，许多鱼类寄生虫包括海虱是甲壳类动物，并且因此，丁醚脲不能被假定为有效地控制这些鱼类寄生虫。

此外，丁醚脲已有利地被发现对于处理在寄生虫生命周期的不同阶段，包括桡足幼体、成体期前和成体期的海虱是非常有效的。目前用于处理海虱的许多杀寄生虫剂(例如有机磷酸盐)的缺点在于它们并非在寄生虫生命周期的所有阶段针对海虱有效。这意指在生命周期的某些阶段虱子没有被杀寄生虫剂有效处理，并且因此杀寄生虫剂处理必须重复几次。重复海虱处理出于许多原因是不希望的。例如，存在与增加杀寄生虫剂的需求和重复处理操作相关的另外支出，以及由于对这些化学品的暴露增加，对鱼、农场主、消费者和环境的有害作用的风险增加。还存在海虱发展对杀寄生虫剂的抗性的风险增加。进一步的经济考虑在于在暴露于杀寄生虫剂之前或暴露于杀寄生虫剂过程中，鱼不能直接喂食，以确保周围的水不含可能干扰处理过程的食物残渣和粪便。因此，单一处理可导致1-2％的重量“损失”；如果在处理期过程中没有拒绝食物，那么鱼否则已获得所述重量。这个数字在商业水产养殖规模上是显著的，并且表示了通过丧失喂食时间的农场主的重大成本。重复杀寄生虫剂处理的需要明显加剧了这种成本。因此，丁醚脲可用于在其生命周期的多个阶段处理海虱，因此减少或去除对多个处理周期的需求是非常有利的发现。

鱼

丁醚脲或兽医上可接受的丁醚脲盐可用于治疗各种不同类型的鱼中的鱼类寄生虫，例如海虱，所述鱼包括在淡水、海水和微咸水中存在的所有年龄的食物鱼、怀卵鱼、观赏鱼、池塘鱼、河鱼、水库鱼。例如，鲈鱼、鲷鱼、鲤鱼、鲶鱼(catfish)、鲑鱼、鲢鱼、丽鱼、军曹鱼、鳕鱼、鳗鱼、牙鲆、丝足鱼、茴鱼、石斑鱼、庸鲽、鲻鱼、鲶鱼(pangasius)、鲽鱼、鲳鱼、斜齿鳊、红眼鱼、鲑鱼、鳎鱼、罗非鱼、鳟鱼、金枪鱼、白鲑、黄尾鰤、大菱鲆、蓝鳍金枪鱼、丁鲷、琥珀鱼、金龙鱼、乌鳢、河豚、黄花鱼、岩鱼、尖吻鲈、白姑鱼、鲟鱼、圆鳍鱼、濑鱼。

特别值得注意的是，可被治疗的鱼是鲑形目(Samoniformes)、鲶形目(Siluriformes)、鲈形目(Perciformes)、鲤形目(Cypriniformes)、鲀形目(Tetraodontiformes)、骨舌鱼目(Osteoglossiformes)、鲟形目(Acipenseriformes)和鲉形目(Scorpaeniformes)。。

丁醚脲组合物可能特别适合于治疗鲑鱼。术语“鲑鱼”将被理解为包含鲑科家族的所有代表，尤其是鲑亚科(salmoninae)，并且优选是鲑属或大麻哈鱼属。特别地，丁醚脲可用于治疗下述鱼中的任一种中的鱼类寄生虫，例如海虱：大西洋鲑鱼(盐湖鲑鱼(Salmonsalar))、虹鳟鱼(虹鳟(Oncorhynchus mykiss))、褐鳟或海鳟(鳟(S.trutta))、太平洋鲑鱼：马苏大麻哈鱼或seema(马苏大麻哈鱼(O.masou))、台湾鲑鱼(台湾大麻哈鱼(O.masouformosanum))、大鳞鲑或大鳞大麻哈鱼(大鳞大麻哈鱼(O.tshawytscha))、马苏鲑或大麻哈鱼(普通大麻哈鱼(O.Keta))、银大麻哈鱼或银鲑(银大麻哈鱼(O.kisutch))、粉鲑(细鳞大麻哈鱼(O.gorbuscha))、红大麻哈鱼或红鲑(红大麻哈鱼(O.nerka))、人工繁殖物种如克拉克海鲑鱼(Salmo clarkii)和红点鲑属(Salvelinus)物种如溪红点鲑(美洲红点鲑(S.fontinalis))。

可治疗的鱼特别包括大西洋鲑鱼和太平洋鲑鱼以及海鳟。

丁醚脲组合物还可特别适合于治疗其他类型的鱼，包括罗非鱼。

鱼可在其中进行处理的水生环境可为淡水或优选咸水(如海洋)环境。咸水环境包括，例如大海、入口、盐水湖泊、河流或海湾。

寄生虫

在本文上下文中，术语“鱼类寄生虫”预期指生活在鱼上或鱼中，或者在其他方面以宿主鱼为代价获益的任何生物，例如从鱼获得其部分或全部营养需求的任何生物。寄生虫包括在鱼的外表面上生活或为食的体外寄生虫以及生活在鱼体内的体内寄生虫。

丁醚脲制剂可用于针对寄生虫治疗鱼。特别地，这包括下述的寄生虫：管口水蚤目(Siphonostomatoida)(虱子)、指环虫目(Dactylogyridea)(鳞盘虫属(Diplectanum))、铗钩虫目(Mazocraeidea)(例如Sparycotyle和异沟盘虫属(Heterobothrium))、膜口目(Hymenostomatida)(淡水白斑)、分室科(Capsalidae)(本尼登虫属(Benedenia))、胭蚧科(Dactylopodida)(P.perurans)、剑水蚤目(Cyclopoida)、Parabodonida(隐鞭虫属物种(Cryptobia spp.))、盾纤目(Scuticocilitida)(纤毛虫)、Gluegeida(L.salmonae)、双壳目(Bivalvulida)(例如粘液丸虫属(Myxobolus)、角形虫属(Ceratomyxa)和H.ictaluri)、单后盘目(Monopisthocotylea)(三代虫)、有壁目(Strigeatida)(血吸虫)、Botriocephalidea(绦虫)、旋尾目(Spirurida)(线虫)、鲺目(Arguloida)(淡水中的鱼虱)和蛔目(Ascaridida)(异尖属(Anisakis))，以及隐核虫属(Cryptocaryon)(海水中的白斑)、双穴吸虫属(Diplostomum)(淡水中的眼吸虫)和Enteromyxum(E.leei)。特别地，鱼类寄生虫可为任何寄生性海洋甲壳类动物。

目前用于对抗鱼类寄生虫的杀寄生虫剂包括例如有机磷酸盐、拟除虫菊酯、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、过氧化氢或苯甲酰脲。并非所有这些杀寄生虫剂一直都是可用的，从而使抗性控制程序复杂化。与目前使用的杀寄生虫剂相关的缺点包括其中它们必须使用的高浓度、与化学品使用相关的生态问题、鱼类寄生虫例如海虱发展抗性的能力以及抗性的日益普遍。令人惊讶的是，丁醚脲已被发现对于治疗鱼类寄生虫有效。

鱼类寄生虫侵扰可被测量为被感染的鱼的百分比(即具有至少一个寄生虫的鱼的百分比)。借助于请求保护的丁醚脲的使用，鱼类寄生虫侵扰可减少至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％。优选地，减少可为至少约30％或50％。

鱼类寄生虫侵扰也可测量为鱼类寄生虫数目/鱼(即平均负荷)。借助于请求保护的丁醚脲的使用，鱼类寄生虫数目/鱼可减少至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％或99％。优选地，减少可为至少约40％或60％。

海虱

丁醚脲或兽医学可接受的丁醚脲盐可用于治疗鱼中的海虱。海虱是在淡水、海水和微咸水中发现的体外寄生虫。海虱可为鱼虱科，特别包括对鱼虱属、鱼虱属(包括短鱼虱(C.curtus)、细长鱼虱(C.elongatus)、C.clemensi、智利鱼虱(C.rogercresseyii))和疮痂鱼虱属(Lepeophtheirus)(包括鲑疮痂鱼虱)的寄生虫。

海虱是养殖鱼类，特别是鲑科鱼的主要寄生虫，并且当以高数目存在时，可引起严重的疾病以及最终的宿主死亡。保持低侵扰率以预防迁徙的野生鲑科鱼侵扰也是重要的。在其中存在高度集中的鱼群的养鱼场，海虱可对鱼群具有破坏性作用。鲑疮痂鱼虱是海虱的最常见物种之一，并且海虱属物种的海虱对于养鱼业也是有问题的。认为海虱通过以粘液和皮肤为食并且吸吮血液而影响鲑鱼。另外，看起来虱子对寄主鱼具有免疫调节作用，并且能够充当其他鱼类疾病传播的媒介。

基于海虱侵扰超过50％的死亡率已由挪威养鱼场报道。在第一阶段，在附着至鱼的寄生虫的外观，以及以后从对皮肤和组织造成的伤害而看到海虱侵扰。在正好处于从淡水变为海水的阶段以及停止喂食的亲鱼中，观察到最严重的损伤。

物种疮痂鱼虱属的海虱对鱼类特别有害，因为即使是少量的寄生虫也可造成广泛的组织损伤。疮痂鱼虱属的生命周期基本上由三个自由游动的幼虫阶段(无节幼体I和II以及桡足幼体期)组成，桡足幼体附着至鱼，并且发育通过两个稚虫期、两个成体前期和实际的成体期。稚虫和成体期是宿主依赖性的。最危险的阶段都是寄生在鱼上的那些阶段，尤其是成体期，因为它们造成最大的损伤。

令人惊讶的是，丁醚脲已被发现有效用于治疗海虱，并且有效针对海虱生命周期中的多个不同阶段。特别地，丁醚脲已被发现在鲑疮痂鱼虱感染阶段过程中治疗海虱方面高度有效。

毒性

尽管本领域存在显著的偏见，但目前已惊讶地发现，丁醚脲可用于治疗鱼类寄生虫，例如海虱，并且在对鱼无毒的浓度下是有效的。

用于治疗鱼类寄生虫例如海虱的包含丁醚脲的制剂在施用于鱼时是无毒的。具体地，丁醚脲制剂在经处理的鱼群中不诱导过度的死亡率。

一般地，施用于鱼的制剂的毒性与多种因素相关，所述因素可包括例如鱼的大小和重量，鱼是在淡水中还是在咸水中，以及鱼的发育阶段。因此，根据待处理的鱼群的性质和栖息地，可使用而不诱导过度死亡率的丁醚脲浓度可不同。例如，较大的鱼可能能够耐受比较小的鱼更大量和浓度的丁醚脲。用于本发明的包含丁醚脲的制剂是无毒的并且优选不产生死亡率。

商业背景下的毒性可通过任何适用的方法来测量，并且合适的方法是本领域技术人员已知的。例如，对鱼无毒的制剂优选在已处理的大尺寸商业鱼群中不产生死亡率。在已处理的大尺寸商业鱼群中，制剂最多可诱导2％的死亡率。更优选地，与经对照处理的组相比，死亡率水平小于1％，例如小于0.5％。

如本领域技术人员将意识到的，制剂的毒性可以多种方式确定。一些方法可涉及包括大数目鱼的试验。因此，为了避免需要测试大数目的鱼，可使用涉及少得多数目的关于制剂毒性的模型测试。模型测试例如下文描述的模型测试之一的使用提供了进一步的优点，即它去除了复杂因素例如所测试的鱼的大小和敏感性，因为小鱼通常比较大的鱼更容易受到给定处理剂量的影响。通过这种方式，模型测试允许获得丁醚脲的不同浓度和制剂的毒性的标准化比较。

在通过注射施用的丁醚脲制剂的毒性的模型测试中，在约17℃的水温下处理少量大西洋鲑鱼，例如30条鱼/组。一组鱼用大剂量体积(0.2ml)的主题丁醚脲制剂进行处理，并且第二组以相同的方式用常规剂量体积(0.05ml)的主题丁醚脲制剂进行处理。另外，两个对照组以与受试者组相同的方式进行处理，但用对照制剂如PBS代替主题丁醚脲制剂。监测鱼并且记录经过七天的累积死亡率。如果满足两个条件，则主题丁醚脲制剂被视为无毒的。第一个条件是，当丁醚脲制剂以0.05ml的量施用时，受试者组相对于相关对照组不存在增加的死亡率。第二个条件是当丁醚脲制剂以0.2ml的量施用时，受试者组相对于相关对照组存在最多10％的死亡率增加。

在通过浴处理施用的丁醚脲制剂的毒性的模型测试中，将少量大西洋鲑鱼如5条鱼在约8-12℃的水温下处理60分钟。如果没有一条鱼由于处理而死亡，则主题丁醚脲制剂被视为无毒的。

丁醚脲的使用

为了成为有效的杀寄生虫剂，寄主对杀寄生虫剂的耐受性必须大于寄生虫对杀寄生虫剂的耐受性。耐受性中的差异可能是由于例如宿主和寄生虫物种的摄取、遗传和/或代谢之间的差异。耐受性中的变化可用于找到合适的治疗窗，即灭活寄生虫而不过度伤害宿主的浓度。目前已有利地发现存在治疗窗，在所述治疗窗中丁醚脲可用于有效地和有效率地治疗鱼类寄生虫，例如海虱，但对鱼无毒。

术语“治疗有效量”指(i)治疗鱼类寄生虫感染或侵扰，(ii)减弱、改善或消除感染或侵扰的一种或多种症状，和/或(iii)预防或延迟鱼类寄生虫感染或侵扰的一种或多种症状的发作的丁醚脲的量。

可基于侵扰率定期用杀寄生虫剂处理鱼。在这种情况下，由于寄生虫例如海虱一般在较高的水温下发育得更快，所以在夏季可更频繁地施用处理。为了优化治疗，农场主可协调使用的处理的时机和类型。丁醚脲适用于处理鱼类寄生虫例如海虱的发现提供了用于安排治疗策略的进一步选项。

在经处理的鱼内，丁醚脲优选以药理学有效浓度分布至所有组织和器官，包括粘液、皮肤、鳃和肠。鱼优选吸收丁醚脲，并且丁醚脲的浓度优选得到维持且在鱼的血液、鱼片和皮肤内以治疗有效浓度下可检测延长的时间段。因此，除直接处理作用之外，丁醚脲制剂还优选在施用后保护鱼免受寄生虫的新攻击延长的时间段。

当使用丁醚脲用于治疗鱼类寄生虫时，鱼将吸收丁醚脲，使得治疗有效浓度的丁醚脲将维持延长的时期，例如至少5个月，优选至少6个月且更优选至少9个月。

丁醚脲具有低溶解度，并且可与水混溶。一般地，用于治疗鱼类寄生虫例如海虱的丁醚脲制剂可以液体组合物的形式，以纯形式和/或作为固体活性物质(例如以特定的粒径)。优选地，丁醚脲制剂可包含配制技术中常规使用的佐剂中的至少一种，例如溶剂、赋形剂、增溶剂等。制剂可以本身已知的方式制备，通常通过将丁醚脲用固体或液体载体混合、粒化和/或压实，适当时加入进一步佐剂如可乳化剂或分散剂、稳定剂、着色剂、抗氧化剂和/或防腐剂。

浴处理

丁醚脲可通过浴处理施用于鱼，例如通过将鱼放入“药浴”内并且将它们在其中保持在一段时间(几分钟至几小时)，例如当从一个网围栏或育种盆转移地另一个。还能够临时或连续地处理鱼的生境，例如其中保持鱼的网箱、整个池塘、水族箱、水槽或盆。为了用作浴处理，可将丁醚脲或包含丁醚脲的制剂溶解或悬浮于含有鱼和寄生虫的水中。

基于总浴体积，丁醚脲可以约0.01ppm至约100ppm，优选约0.05ppm至约50ppm，更优选约0.1ppm至约20ppm，并且甚至更优选约0.25ppm至约10ppm，或约0.5ppm至约5ppm，例如约1ppm、2ppm或3ppm的浓度使用。这些值表示含有鱼的水中处理试剂的浓度(即控制寄生虫群体所需的实际水平)。通过将丁醚脲的浓缩原液(如储备溶液或制剂)加入含有鱼的封闭物中来达到浓度。根据对含有鱼的封闭物的体积和储备溶液的浓度的了解，本领域技术人员能够确定应该添加多少丁醚脲。

在应用过程中丁醚脲的浓度取决于治疗的方式和持续时间以及被治疗的鱼的年龄和状况。通常的浸没时间范围为约15分钟至约4小时，特别是约30分钟至约1小时。可将丁醚脲溶解或悬浮于含有鱼和寄生虫的周围水中。该浴可含有本领域已知用于制备水性溶液的进一步常用赋形剂，例如稳定剂、消泡剂、粘度调节剂、粘合剂和增粘剂。

这种施用方法非常简单且省力，并且具有丁醚脲可能能够直接作用于主要为鱼外部的寄生虫例如海虱的附加优点。

用于浴应用或用于处理生境的丁醚脲可以任何合适的形式如粉末、颗粒、溶液、乳剂、微乳剂/纳米乳剂、乳油、悬浮液、纳米悬浮液或悬浮浓缩剂、片剂或简单纯丁醚脲本身进行制备或配制。使用者可使用以稀释或未稀释形式的这些制剂。最合适的形式是本领域技术人员已知的，并且可取决于施用的具体情况，例如稀释程度、组合物的稳定性等。

用于通过浴处理施用于鱼的丁醚脲制剂可为液体形式，并且可以任何合适的方式进行制备。例如，根据需要，制剂可通过在环境温度下在搅拌下在包含溶剂和/或任何另外试剂(如增溶剂和/或赋形剂)的预混物中溶解丁醚脲来制备。在通过浴处理用于施用的示例制剂中，丁醚脲制剂可通过将丁醚脲溶解在包含丙酮和/或Pharmasolve作为溶剂和Kolliphor EL作为增溶剂的预混物中来制备。

还能够使用半固体制剂用于浴处理。悬浮或溶解于油性或脂肪基质中的活性物质被洗掉。释放可通过佐剂、活性物质的浓度和形式的选择来控制。包含活性物质的硬脂的熔体也适合于使用。

丁醚脲制剂可用于水溶性包装，例如在包含聚乙烯醇的袋中。在这种情况下，使用者不暴露于活性物质或其制剂。在实践中，还能够使用例如其中活性物质包含在易于溶于水的膜基质中或者在施用期间它由其扩散的膜中的那些应用形式。

饲料

鱼可经口治疗，例如经由饲料内治疗，其中将组合物加入提供给鱼的饲料中。

提及“鱼食”、“鱼饲料”和“饲料组合物”指示专门适于经口施用于鱼的物质。特别地，食物物质包含以液体、薄片、颗粒或丸粒形式的脂肪、营养素、蛋白质、维生素、矿物质和碳水化合物中的至少一种，其能够与丁醚脲或丁醚脲组合物吸附或混合。优选地，鱼食包括丁醚脲和玉米淀粉、预胶化玉米淀粉、蛋白质、营养素、植物油和/或鱼油中的至少一种。

用于经口施用的丁醚脲的制剂可采取例如作为饲料添加剂与饲料均匀混合的粉末、预混物、颗粒、溶液、乳剂、微乳剂/纳米乳剂、乳油、悬浮液、纳米悬浮液或悬浮浓缩物的形式，或者以丸粒的形式施用的粉末、预混剂、颗粒、溶液、乳剂、微乳剂/纳米乳剂、乳油、悬浮液、纳米悬浮液或悬浮浓缩物，丸粒的外壳可由例如完全覆盖活性物质的鱼饲料组合物组成。

可通过将合适量的丁醚脲或其盐加入鱼饲料产品中来制备含有丁醚脲的鱼饲料。可在造粒之前将丁醚脲掺入饲料混合物内。可替代地，鱼饲料的丸粒或颗粒可用丁醚脲涂布。例如，商购可得的鱼丸粒或颗粒可用含有丁醚脲和一种或多种合适赋形剂的预混物涂布，所述赋形剂例如淀粉、热解法二氧化硅微晶纤维素、乳糖等等。另外，可存在通常的防腐剂。

饲料丸粒可通过干涂法用预混物涂布。为此，将预混物与丸粒混合，使得它均匀地分布到丸粒上；优选地，然后将鱼油或植物油加入混合物中以涂布含药丸粒。在可替代方案中，预混物首先与鱼油或植物油混合，然后将其与丸粒混合以将其分散到它们上，并且将另外的鱼油或植物油加入涂布的丸粒中，并且混合直到丸粒被彻底涂布。在进一步的替代方案中，预混物首先分散在一些鱼油或植物油中，然后将所述分散体喷雾到丸粒上，以在真空涂布系统下将其分散在它们上且混合直到丸粒被彻底涂布。

在向鱼饲料添加活性成分之后，基于鱼饲料的整个重量，丸粒或颗粒包含例如0.1-10g/kg饲料，优选0.5-5g/kg饲料或0.1-10％(w/w)，优选0.25-7.5％(w/w)，且特别是0.5-5％(w/w)丁醚脲。

丁醚脲可根据任何合适的治疗方案施用。例如，可将丁醚脲每天施用于受试者鱼一段时间，优选3至13天，更优选5至9天，且特别是7天。

鱼可用对应于2-15mg/kg鱼，3-12mg/kg更特别是4-10mg/kg鱼的剂量进行治疗。

腹膜内注射

用丁醚脲的治疗也可肠胃外进行；例如，治疗可包括将丁醚脲的液体或悬浮液制剂注射到待治疗的鱼内。

腹膜内注射涉及将制剂注射到鱼的内脏表面上。因此，所注射制剂的作用且特别是毒性难以预测，并且与通过其他手段施用或与施用于不同动物相比，当通过腹膜内注射将组合物递送至鱼时，可不同。

然而，丁醚脲的水溶性非常低，并且已发现为约0.06mg/ml。因此，如果将丁醚脲以用于腹膜内注射的水性溶液形式制备，则由于丁醚脲在水中的低溶解度，丁醚脲的浓度非常低，所以它递送弱性能。

为了解决这个问题，丁醚脲可以包含纳米颗粒悬浮液的水性制剂的形式用于腹膜内注射或其他施用途径。然而，包含悬浮液或乳剂的制剂存在缺点。例如，在其中微粒丁醚脲分散在连续油相中的油包水型乳剂中，丁醚脲颗粒在生产、贮存和使用过程中可沉淀，导致不均匀产品。此外，乳剂的不透明度可掩盖沉淀的程度。

可替代地，可使用合适的溶剂来配制丁醚脲。因为丁醚脲不溶于水，所以可使用极性溶剂如DMSO，但已发现，如果借助于腹膜内注射施用，则极性溶剂可对鱼有毒。因此，为了基本上减少或消除极性溶剂的毒性作用，如果制剂要通过腹膜内注射施用，则还必须在制剂中包括进一步的试剂如增溶剂或亲水性聚合物。

作为极性溶剂的替代物，目前已惊讶地发现亲水性聚合物对于腹膜内注射于鱼无毒，并且适合于溶解杀寄生虫剂。因此，丁醚脲制剂可使用亲水性聚合物产生，而无需任何另外的试剂，且特别是无需极性溶剂或增溶剂，如果制剂要通过腹膜内注射施用，这可能是有利的，因为它避免了极性溶剂的毒性作用的可能性。

用于腹膜内注射于鱼的丁醚脲制剂可根据任何合适的方案施用。例如，在鲑科鱼的情况下，一个治疗时间表包括在转移到海之前在初始淡水阶段过程中治疗鱼。另外或可替代地，治疗可在鱼已在海上的同时执行。

用于腹膜内注射于鱼的丁醚脲制剂可以任何合适的方式制备。例如，根据需要，可通过在室温下在搅拌下将丁醚脲溶解于包含溶剂和/或任何其他试剂(如赋形剂)的预混物中来制备制剂。

一般地，可注射到鱼内的丁醚脲制剂的总体积为约0.01-2ml，例如0.05ml或0.1ml。可注射到鱼内的丁醚脲的总量优选为0.2至120mg/kg鱼生物质、0.5至100mg/kg或1至75mg/kg鱼生物质，例如5-50或10-30mg/kg鱼生物量。因此，用于通过腹膜内注射治疗鱼类寄生虫的丁醚脲制剂一般包含以约或至少10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100mg/ml的量的丁醚脲。

在一个例子中，用于通过腹膜内注射治疗鱼中的寄生虫例如海虱的丁醚脲制剂包含：丁醚脲；非水极性溶剂，其可为DMSO；增溶剂，其可为Cremophor EL；和赋形剂，其可为丙二醇。在该示例制剂中，丁醚脲可以10-300mg/ml，例如20-250、30-200、40-150、50-120、70-115、80-110、85-105，最优选90-100mg/ml，例如约90mg/ml或约100mg/ml的量存在。

在另一个例子中，用于腹膜内注射的丁醚脲制剂包含：丁醚脲；和亲水性聚合物，其可为以按重量计至多50％、60％、70％、80％、90％或100％的量的PEG或PEG衍生物，例如PEG300或PEG400。该制剂优选还包括稳定剂，其可为以0.1-0.5％，或0.2-0.4％，最优选约0.3％的量的柠檬酸。在该示例制剂中，丁醚脲可以10-150mg/ml，例如15-120、20-100、25-90或30-80mg/ml的量存在。

在另一个例子中，用于腹膜内注射的丁醚脲制剂包含：丁醚脲；非水极性溶剂，其可为DMSO；增溶剂，其可为Cremophor EL；和亲水性聚合物，其可为PEG或PEG衍生物，例如PEG300或PEG400。在该示例制剂中，丁醚脲可以10-300mg/ml，例如20-250、30-200、40-150、50-120、70-115、80-110、85-105，最优选90-100mg/ml，例如约90mg/ml或约100mg/ml的量存在。

在又一个例子中，用于腹膜内注射的丁醚脲制剂包含：丁醚脲；非水极性溶剂，其可为DMSO；和亲水性聚合物，其可为PEG或PEG衍生物，例如PEG300或PEG400。在该示例制剂中，丁醚脲可以10-300mg/ml，例如20-250、30-200、40-150、50-120、70-115、80-110、85-105，最优选90-100mg/ml，例如约90mg/ml或约100mg/ml的量存在。

极性溶剂

为了避免疑问，如本文使用的，术语“极性溶剂”不涵盖使用水作为溶剂，并且为了清楚起见，极性溶剂因此可被称为“非水极性溶剂”。如果溶剂分子具有正电荷和负电荷的永久分离，或者正电荷和负电荷的中心不重合，则溶剂视为极性溶剂。极性溶剂具有高介电常数，例如，介电常数在约15.0以上的溶剂一般被视为极性溶剂。

因为丁醚脲在水中具有低溶解度，所以丁醚脲制剂，特别是用于腹膜内注射的制剂优选是非水性的，并且在制剂生产期间不添加水。然而，如本领域技术人员应了解的，尽管如此，例如由于从大气中吸收，少量的水可能不可避免地存在于制剂中。优选地，用于腹膜内注射的丁醚脲制剂是非水性制剂，并且含有至多4％、3％或2％，优选至多1.5％、1％或0.5％的水。在本文上下文中，术语“非水性”指至多包括仅非常少量的水的制剂，所述水并非加入制剂中，而是可例如源自大气。例如，已知一些非水极性溶剂如DMSO在某些条件下是吸湿性的，并且因此可造成少量的水积聚在制剂中或在制剂生产之前的溶剂中。为了清楚的目的，优选的丁醚脲制剂不包含除由于吸附而可能存在于组成成分试剂中的水外的水。

可在丁醚脲制剂(例如用于腹膜内注射的丁醚脲制剂)中单独或组合使用的极性溶剂的例子包括丙酮、四甘醇、乙酸乙酯、DMF、DMA、DMSO、NMP、乙醇、异丙醇、甘油、乙二醇、二甘醇、1-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、乙腈和甲醇。特别地，极性溶剂可为极性非质子溶剂，例如DMF、DMA或DMSO。

一般地，当极性溶剂是极性非质子溶剂如DMSO时，用于腹膜内注射的丁醚脲制剂包含约5-40％(w/w)的极性溶剂。优选地，这样的制剂包含小于35％、小于30％、小于25％或小于20％(w/w)的极性溶剂，例如7-35％、10-30％、12-25％或15-20％(w/w)的极性溶剂，例如约5％、10％、15％、20％或25％(w/w)的极性溶剂。

用于通过其他途径施用于鱼，例如用于通过浴处理施用的丁醚脲制剂可包含超过40％的极性溶剂，例如至多50％、60％、70％、80％、90％或100％的极性溶剂。

在一些实施例中，丁醚脲可溶解于极性溶剂和增溶剂例如丙酮或DMSO和Kolliphor EL的组合中。然后可将所得到的液体与水混合。

增溶剂

用于通过腹膜内注射治疗鱼类寄生虫例如海虱的丁醚脲制剂可特别包含增溶剂。

在本文上下文中，术语“增溶剂”指能够增加丁醚脲的溶解度的任何物质，例如当它用于极性溶剂、极性溶剂与赋形剂的混合物或极性溶剂与亲水性聚合物的混合物中时。增溶剂可为两亲分子或表面活性剂，并且可为阳离子、阴离子或非离子的，非聚合或聚合的。

增溶是其中通过在加入增溶剂后形成胶束结构来增加化合物的溶解度的过程。术语增溶几乎唯一地用于水性体系。在水性药物制剂中，例如，增溶剂通常用于促进难溶性化合物的溶解。增溶剂可用于制备水性丁醚脲制剂，例如用于浴处理。

另一方面，在非水性制剂中，例如优选通过腹膜内注射施用的那些制剂中，增溶剂加入是主要为了在水性介质中(而不是在制剂本身中)使用产品期间具有功能。虽然增溶过程在水性体系中得到充分描述，但在非水性体系本身中的增溶了解较少。基本上，除非增溶剂在如上所述的水性介质中的使用期间具有功能，否则不存在向非水性制剂中加入增溶剂的明确合理的理由。因此，在非水性制剂例如上文关于用于腹膜内注射的丁醚脲制剂描述的那些制剂中，将不考虑增溶剂的使用。目前已惊讶地并且有利地发现，可产生包含非水极性溶剂的适合于腹膜内注射的丁醚脲制剂，并且如果还包括增溶剂，则制剂中所需的非水极性溶剂的水平可降低至毒性水平以下。

各种增溶剂可用于制剂中，并且例如，增溶剂可选自Handbook ofpharmaceutical additives,M.Ash和I.Ash,Gower publishing limited,1996，第900-903或874-880页中分别给出的增溶剂或乳化剂列表。合适的增溶剂包括例如：聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯，例如聚山梨醇酯20(Tween 20)、聚山梨醇酯21、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯61、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80(Tween 80)、聚山梨醇酯81、聚山梨醇酯85和聚山梨醇酯120；聚氧乙烯蓖麻油衍生物，例如聚氧乙烯5蓖麻油、聚氧乙烯9蓖麻油、聚氧乙烯15蓖麻油、聚氧乙烯35蓖麻油(Cremophore EL)、聚氧乙烯40蓖麻油、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、聚氧乙烯60蓖麻油、聚氧乙烯60氢化蓖麻油、聚氧乙烯100蓖麻油、聚氧乙烯100氢化蓖麻油、聚氧乙烯200蓖麻油和聚氧乙烯200氢化蓖麻油；泊洛沙姆(聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物)，例如泊洛沙姆124、泊洛沙姆188、泊洛沙姆237、泊洛沙姆338和泊洛沙姆407；聚氧乙烯烷基醚，例如聚西托醇1000、聚氧乙烯6鲸蜡硬脂醚、聚氧乙烯20鲸蜡硬脂醚、聚氧乙烯25鲸蜡硬脂醚、聚氧乙烯2鲸蜡醚、聚氧乙烯10鲸蜡醚、聚氧乙烯20鲸蜡醚、聚氧乙烯4月桂醚、聚氧乙烯9月桂醚、聚氧乙烯23月桂醚、聚氧乙烯2油基醚、聚氧乙烯10油基醚、聚氧乙烯20油基醚、聚氧乙烯2硬脂醚、聚氧乙烯10硬脂醚、聚氧乙烯21硬脂醚和聚氧乙烯100硬脂醚；聚氧甘油酯，例如辛酰己酰聚氧甘油酯、月桂酰聚氧甘油酯、亚油酰聚氧甘油酯、油酰聚氧甘油酯和硬脂酰聚氧甘油酯；和脱水山梨糖醇脂肪酸酯，如脱水山梨糖醇二异硬脂酸酯、脱水山梨糖醇二油酸酯、脱水山梨糖醇单异硬脂酸酯、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、脱水山梨糖醇单油酸酯(Span 80)、脱水山梨糖醇单棕榈酸酯、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、脱水山梨糖醇倍半异硬脂酸酯、脱水山梨糖醇倍半油酸酯、脱水山梨糖醇倍半硬脂酸酯、脱水山梨糖醇三异硬脂酸酯、脱水山梨糖醇三油酸酯和脱水山梨糖醇三硬脂酸酯；聚乙二醇15羟基硬脂酸酯；鲸蜡硬脂醇和鲸蜡醇。

已发现特别适用于制备丁醚脲制剂的增溶剂包括例如Tween、Brij C10、Kolliphor HS15、Kolliphor EL或Cremophor RH40。尤其优选的增溶剂包括Tween 80和Cremophor EL。

当丁醚脲制剂包含增溶剂时，增溶剂一般以约5-60％(w/w)的量使用。优选地，制剂包含10-55％(w/w)的增溶剂，更优选15-50％(w/w)的增溶剂，例如约25、30、35、40、45、50或55％(w/w)增溶剂。丁醚脲制剂可包含两种或更多种不同增溶剂的混合物。

当制剂包含Cremophor EL作为增溶剂时，它优选以30-60％，例如约35、40、45、50或55％的量存在于制剂中。

亲水性聚合物

用于通过腹膜内注射治疗鱼类寄生虫例如海虱的丁醚脲制剂可特别包含亲水性聚合物。

亲水性聚合物含有极性或荷电官能团，使得它们可溶于水和/或极性溶剂。在丁醚脲制剂中可使用不同的亲水性聚合物，任选与非水极性溶剂和/或增溶剂组合，或在不存在任何其他溶剂或增溶剂的情况下。用于鱼的腹膜内注射的丁醚脲制剂可包含亲水性聚合物以及任选的极性溶剂。

亲水性聚合物可为能够氢键合的聚合物。

优选地，亲水性聚合物具有50-2000，例如100-1800、或150-1600的平均分子量。

亲水性聚合物可为聚烷氧基化醇，或聚烷氧基化醇的衍生物。优选地，亲水性聚合物是聚烷氧基化二醇或聚烷氧基化二醇的衍生物。例如，亲水性聚合物可为聚亚烷基二醇或聚亚烷基二醇的衍生物。

合适的亲水性聚合物特别包括PEG和PEG衍生物以及PPG和PPG衍生物。

可使用的PEG衍生物的例子包括：单功能PEG，例如聚(乙二醇)甲基醚；同双功能PEG，例如聚(乙二醇)二甲醚、聚(乙二醇)二缩水甘油醚、或聚(乙二醇)双(羧甲基)醚；异双功能PEG，例如聚(乙二醇)四氢糠基醚；多臂PEG或星形PEG，例如三羟甲基丙烷乙氧基化物或甘油乙氧基化物。

可使用的PPG衍生物的例子包括：单功能PPG，例如聚(丙二醇)单丁醚；和同双功能PPG，例如聚(丙二醇)二缩水甘油醚。

亲水性聚合物可为聚醚，例如甘油丙氧基化物。

优选地，亲水性聚合物是PEG或PEG衍生物。例如，亲水性聚合物可为具有200至1000的分子量的PEG。优选地，亲水性聚合物是PEG 300、PEG 400或PEG 600。

亲水性聚合物可包含两种或更多种亲水性聚合物的组合。

优选地，特别当通过腹膜内注射施用时，亲水性聚合物对鱼无毒。

丁醚脲制剂可包含亲水性聚合物作为唯一的溶剂。在这种情况下，亲水性聚合物可以按重量计5-100％的量存在于制剂中。

亲水性聚合物可与另一种溶剂(例如非水极性溶剂)组合存在于丁醚脲制剂中。在这种情况下，亲水性聚合物可以按重量计5-95％、10-90、15-85、20-80、25-75、30-70、35-65、40-60、45-65或50-60％的量存在于制剂中。

赋形剂

用于治疗鱼类寄生虫例如海虱的丁醚脲制剂可包含赋形剂。在本文上下文中，术语“赋形剂”用于指加入制剂中的任何惰性无毒物质，例如作为稀释剂，以允许将丁醚脲制剂制备成所需的稠度、形式或浓度。

任何合适的赋形剂均可用于丁醚脲制剂中，并且制剂可包含一种赋形剂或赋形剂的组合。例如，赋形剂或赋形剂混合物可选自但不限于Handbook of pharmaceuticaladditives,M.Ash和I.Ash,Gower publishing limited,1996，第862-863或903-904页中分别给出的载体/媒介物或溶剂的列表。适用于丁醚脲制剂中的赋形剂包括例如极性的低分子量物质如丙二醇、丁二醇、碳酸丙烯酯、乙醇、异丙醇、甘油、丁醇和乳酸乙酯。

用于丁醚脲制剂中的赋形剂可包括一种或多种极性油。极性油含有给予分子偶极矩的杂原子，并且当与非极性油例如矿物油相比较时，这提供了具有独特溶解性的物质。可适用于丁醚脲制剂的极性油包括例如：脂肪醇，例如肉豆蔻醇、油醇和硬脂醇；酯，例如肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯和油酸乙酯；甘油三酯，例如三辛酸甘油酯、中链甘油三酯和三油酸甘油酯；以及椰子油。

一般地，丁醚脲制剂可包含约5-70％(w/w)的赋形剂。优选地，赋形剂中的一种或组合以10-60％(w/w)、20-55％(w/w)或30-50％(w/w)，例如约35、37.5、40、42.5或45％(w/w)的总量包括在制剂中。

稳定剂

用于治疗鱼类寄生虫例如海虱的丁醚脲制剂可包括稳定剂。稳定剂可为pH控制剂，例如柠檬酸。如本领域技术人员应了解的，术语“pH”仅对水性介质有意义。然而，一些公开的丁醚脲制剂，特别是用于鱼的腹膜内注射的丁醚脲制剂，可为非水性制剂。因此，在本文上下文中，术语“pH控制剂”、“pH调节剂”和类似术语用于指任何物质，当在水性溶液中使用时，所述物质潜在地能够控制pH，例如缓冲和/或调节pH。已惊讶地发现这些试剂增加了丁醚脲在非水性制剂中的化学稳定性。

pH控制剂可以高达约3体积％，例如0.05-2.0体积％、或0.1-1.0体积％的量包括在丁醚脲制剂中。优选地，pH控制剂可以约0.1、0.2、0.3、0.4或0.5体积％的量包括在制剂中，并且最优选可以0.3体积％的量包括。

其可为pH控制剂的不同稳定剂可用于制剂中。例如，用于制剂中的pH控制剂可选自但不限于在Handbook of pharmaceutical additives,M.Ash和I.Ash,Gowerpublishing limited,1996，第896页中给出的pH控制剂的列表。具体地，已发现用于制剂中的合适的pH控制剂包括例如有机酸如柠檬酸、乙酸、己二酸、盐酸、N-羟基琥珀酸、乳酸、苹果酸、草酸、丙酸、蓖麻油酸、琥珀酸和酒石酸。

其他试剂

用于治疗鱼类寄生虫例如海虱的丁醚脲制剂可包括另外的试剂。

例如，当丁醚脲制剂特别是用于腹膜内注射的液体时，制剂可包含冰点降低剂。合适的冰点降低剂包括例如丙二醇和乙醇。

另外或可替代地，液体丁醚脲制剂可包含防腐剂。可使用任何合适的防腐剂或防腐剂的组合，包括例如氯丁醇、苯甲醇、对羟基苯甲酸盐(例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯)、山梨酸、苯氧基乙醇或硫柳汞。防腐剂可以0.001％至2.5％(w/v)，例如0.002至1.5％(w/v)的量包含于制剂中。

组合制剂

丁醚脲可单独用于治疗鱼类寄生虫例如海虱。可替代地，丁醚脲可连同一种或多种另外的活性剂一起用于组合制剂中。除非另有说明，否则提及“另外的活性剂”指其他抗寄生虫化合物或产品、抗原、佐剂、灭活或杀死的病毒或细菌等等，其提供可用于治疗鱼中的寄生虫，尤其是海虱的治疗有效量的所述试剂。

可有效治疗鱼类寄生虫例如海虱，并且可连同丁醚脲一起用于组合产品中的合适的另外的活性剂包括另外的杀寄生虫剂。术语“杀寄生虫剂”指能够耗尽寄生虫群体的任何物质，例如通过杀死或预防寄生虫的生长或繁殖，或者以其他方式导致寄生虫从宿主鱼中丧失或去除。该物质可靶向广泛范围的寄生虫，或可为对小群寄生虫例如个别类型的寄生虫特异性的。优选地，另外的活性剂是有效用于治疗鱼中的海虱的试剂。

一种或多种另外的杀寄生虫剂可在乙酰胆碱酯酶(AchE)抑制剂、GABA门控氯化物通道拮抗剂、GABA门控氯化物通道抑制剂、钠通道调节剂、烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)激动剂、烟碱乙酰胆碱受体(aAChR)变构激活剂、氯化物通道激活剂、保幼激素模拟物、弦音感觉(chordontonal)器官调节剂、线粒体ATP合酶抑制剂、经由质子梯度破坏的氧化磷酸化解偶联剂、烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)通道阻滞剂、几丁质生物合成的抑制剂、0型和1型、蜕皮干扰剂、蜕皮激素受体激动剂、章鱼胺受体激动剂、线粒体复合物III电子传递抑制剂、线粒体复合物I电子传递抑制剂、电压依赖性钠通道阻滞剂、乙酰辅酶A羧化酶抑制剂、线粒体复合物II电子传递抑制剂、兰尼碱受体调节剂、微管蛋白结合剂、乙酰胆碱酯酶(AChE)模拟物、氧化磷酸化的解偶联剂。

例如，一种或多种另外的杀寄生虫剂可为：钠通道调节剂，其可为拟除虫菊酯，例如溴氰菊酯，或噁二嗪，例如茚虫威；氯化物通道调节剂，其可为阿维菌素，例如依马菌素或伊维菌素，或者可为大环内酯如莫昔克丁、或米尔倍霉素例如米尔倍霉素肟；神经毒素，其可为新烟碱例如烯啶虫胺、或三嗪例如灭蝇胺；吡啶，例如吡蚜酮；或苯甲酰脲，其可为几丁质合成抑制剂。可连同丁醚脲一起用于组合产品中的几丁质合成抑制剂可为例如双三氟虫脲、氟啶脲、氟环脲、氟虫脲、氟铃脲、敌草胺、多氟脲、噻嗪酮、除虫脲、啶蜱脲、虱螨脲和氟苯脲。优选的几丁质合成抑制剂包括除虫脲、虱螨脲和氟铃脲。

可连同丁醚脲一起存在于组合制剂中的一种或多种另外的活性剂可以游离形式或以任何活性形式，例如以任何兽医学可接受的盐的形式存在。

包含丁醚脲和另外的活性剂的合适组合处理可例如通过下述执行：最初用所述另外的活性剂处理鱼，特别是鲑鱼，并且其后，例如在用所述另外的活性剂处理结束后1周至3个月或更多，优选3至5个月或更多，更优选6个月或更多，并且特别是8至12个月，用如上所述的丁醚脲执行处理。根据该组合处理的一个优选实施例，第一处理是用氟铃脲或特别是虱螨脲或针对海虱具有长期保护的另一种活性成分(例如甲氨基阿维菌素苯甲酸盐)的饲料内处理，其在鲑鱼发育的淡水阶段结束时或在其海水阶段开始时发生。

包含丁醚脲和另外的活性剂的可替代组合处理可例如通过下述执行：最初用丁醚脲根据如上所述的饲料内方法和方案处理鱼，特别是鲑鱼，并且其后，例如在丁醚脲饲料内处理结束后3个月，优选5个月，更优选6个月，且特别是9个月，执行用另外的活性剂的处理；所述第二处理可为浴处理、饲料内处理或优选通过将另外的活性剂注射到鱼的处理。根据该组合处理的一个优选实施例，用丁醚脲的饲料内处理在鲑鱼发育的淡水阶段结束时或在其海水阶段开始时发生。

进一步的可替代的组合处理包括首先用另外的活性剂处理鱼，特别是鲑鱼，并且其后，例如其后1小时至2个月，优选其后1小时至1个月，或特别是其后1周至1个月，执行如上所述的丁醚脲饲料内处理。根据该组合处理的一个优选实施例，用另外的活性剂的处理是浴处理、饲料内处理或可注射处理，其在海水阶段开始时发生，例如在将鱼释放到海水之后1小时至3个月，优选6小时至2个月，且特别是12小时至1个月。

药物试剂盒

本发明还提供了包含填充有本发明制剂的一个或多个容器的药物包装或试剂盒。在试剂盒中另外提供的是以由管理药物的制造、使用或销售的政府机构规定形式的通知，以及药物的使用说明书。

实例

现在将在下述实例中更详细地解释本发明，所述实例证实治疗窗的发现，在所述治疗窗中丁醚脲可用于有效地杀死鱼类寄生虫例如海虱，但对靶标鱼无毒。

用于鲑疮痂鱼虱桡足幼体和成体前期的生物测定(Lesa测定)用于测试丁醚脲用于治疗鱼类寄生虫，且特别是海虱的潜力。

实例1-对海虱的作用

测试丁醚脲制剂通过在环境温度下在搅拌下在溶剂(丙酮，1.5ml)和增溶剂(Kolliphor EL，1ml)的预混物中溶解250mg丁醚脲来制备。然后将该原液在盐水中稀释至适当浓度。

测试了20ppb、0.5ppm和2ppm的丁醚脲浓度。

还制备了对照制剂，其仅包含与测试制剂相同比率的溶剂(丙酮)和增溶剂(Kolliphor EL)。还使用了盐水对照。

然后对桡足幼体和成体前/成体鲑鱼虱(鲑疮痂鱼虱)进行生物测定实验。

生物测定涉及将海虱暴露于含有特定浓度丁醚脲或对照制剂的海水1小时。1小时暴露后，将虱子转移到改良的6孔板中并且在盐水中洗涤两次。然后温育平板，并且监测死亡和存活的虱子数目直到暴露后96小时。实验温度维持在8-10℃下。

表1中显示了不同浓度的丁醚脲对虱子的作用。

表1

	阶段	死亡/总计	％死亡
				丁醚脲20ppb	桡足幼体	11/23	48％
丁醚脲0.5ppm	桡足幼体	10/13	77％
				丁醚脲2.0ppm	桡足幼体	20/20	100％
安慰剂	成体前/成体	0/5	0
				丁醚脲2.0ppm	成体前/成体	5/5	100％

丁醚脲能够在海虱生命周期的不同阶段高效地杀死海虱的事实是令人惊讶的，并且提供了超过用于鱼类寄生虫例如海虱的许多目前可用治疗的显著优点。

实例2-对鱼的毒性(浴处理)

丁醚脲先前据报道对鱼有毒。测试了大西洋鲑鱼用丁醚脲的浴处理的作用。

鉴于0.5ppm的丁醚脲浓度已被发现对海虱有毒的事实(参见上文)，测试大于该水平的浓度对鱼的毒性作用。具体地，测试海水中2ppm和5ppm的丁醚脲浓度。

在关于丁醚脲毒性的测试中，使平均重量为32.8克的六条大西洋鲑鱼/组适应12℃，然后放入封闭和充氧的处理容器中，并且用相关浓度的丁醚脲(2ppm或5ppm)或对照制剂进行处理。鱼在槽中保持1小时。处理之后，将鱼从处理容器中移出至观察槽并且观察至少三天。

在暴露后1小时并且有规律地直到暴露后至少72小时观察到丁醚脲处理对鱼的作用。发现丁醚脲的浓度无一对鱼诱导任何死亡率或毒性作用。

实例3-对鱼的毒性(腹膜内注射)

测试了罗非鱼(吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus))用丁醚脲的注射治疗的作用。

在PEG 400(85％)/DMSO(15％)中配制浓度为25mg/ml的丁醚脲。还制备了不含丁醚脲的相同制剂。在29℃下的淡水中饲养的平均重量为158克的罗非鱼分成10条鱼的三组。每组注射0.05ml的相关制剂或PBS对照。观察对鱼的作用共处理后五天，并且结果显示于表2中。

表2

用丁醚脲处理后5天，90％的经处理鱼存活且健康。在用相同制剂(但不含丁醚脲)处理的组中，观察到完全相同比例的鱼是健康的。这指示观察到的低水平的死亡率不是由于丁醚脲。

实例4-海虱感染的大西洋鲑鱼的处理

测试了丁醚脲用于处理鱼类寄生虫。具体地，调查了海虱侵扰的大西洋鲑鱼(大西洋鲑)的浴处理的作用。

使大西洋鲑鱼适应12℃的海水。在转移到海水后，用海虱桡足幼体(鲑疮痂鱼虱)攻击鱼。当附着的虱子已达到成体阶段时，计数附着的雌性海虱的数目。

然后用2ppm的丁醚脲通过浴将鱼处理60分钟。用缺乏丁醚脲的制剂处理的被感染的鱼用作对照组。

处理后三天，计数附着的雌性海虱的数目。成体雌性海虱的数目在经处理的组中减少了56％。

在经处理的鱼中不存在丁醚脲的毒性作用。

这些结果明确证实存在治疗窗，在所述治疗窗中丁醚脲可用于有效地杀死鱼类寄生虫包括海虱，但对宿主鱼无毒性作用。

具体地，丁醚脲可用于处理含有鱼类寄生虫例如海虱的鱼群。具体地，已令人惊讶地发现，能够使用丁醚脲来处理鱼类寄生虫，而对鱼没有任何毒性作用。以这种方式，丁醚脲可用于处理鱼类寄生虫例如海虱。

为了解决各种问题并且推进现有技术，本公开内容的整体通过举例说明显示了不同实施例，在所述实施例中可实践请求保护的本发明，并且提供用于治疗鱼类寄生虫且特别是海虱的丁醚脲或其兽医学可接受的盐。本公开内容的优点和特征仅是实施例的代表性示例，并且不是详尽的和/或排他的。它们仅被呈现以帮助理解和教导请求保护的特征。应理解本公开内容的优点、实施例、实例、功能、特征和/或其他方面不应视为对由权利要求限定的本公开内容的限制或对权利要求的等价物的限制，并且可利用其他实施例并且可作出修改而不脱离本公开内容的范围和/或精神。不同实施例可适当地包含下述、由下述组成、或基本上由下述组成：所公开的元素、组分、特征、份、步骤、装置等的不同组合。另外，本公开内容包括当前未请求保护的但在未来可请求保护的其他发明。

Claims (27)

1.用于治疗鱼类寄生虫的丁醚脲或其兽医学可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐，其中所述鱼类寄生虫是海虱。

3.根据权利要求2所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐，其中所述海虱是鱼虱科。

4.根据权利要求3所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐，其中所述海虱是对鱼虱属、疮痂鱼虱属或鱼虱属。

5.根据权利要求2-4中任一项所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐，其中所述海虱为桡足幼体或成体期前海虱。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐，其中所述鱼是鲑科或慈鲷科。

7.根据权利要求6所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐，其中所述鱼是鲑属或大麻哈鱼属。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐，其中寄生有效量的所述丁醚脲或丁醚脲盐存在于兽医学可接受的制剂中。

9.根据权利要求8所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐，其中所述制剂包含亲水性聚合物。

10.根据权利要求9所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐，其中所述亲水性聚合物包含聚(乙二醇)或聚(丙二醇)或其衍生物。

11.根据权利要求8-10中任一项所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐，其中所述制剂包含非水极性溶剂。

12.根据权利要求11所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐，其中所述非水极性溶剂包含DMSO、NMP、四甘醇、丙酮或DMF之一或组合。

13.根据权利要求8-12中任一项所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐，其中所述制剂包含增溶剂。

14.根据权利要求13所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐，其中所述增溶剂包含Cremophor EL、Tween、Brij C10、Kolliphor HS15或Cremophor RH40之一或组合。

15.根据权利要求8-14中任一项所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐，其中所述制剂适合于将所述丁醚脲或丁醚脲盐在含有所述鱼的水中分散至0.05-5ppm的最终浓度。

16.根据权利要求8-14中任一项所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐，其中所述丁醚脲或丁醚脲盐为含药鱼饲料的形式。

17.根据权利要求16所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐，其中所述含药鱼饲料为鱼饲料颗粒或丸粒的形式，所述鱼饲料颗粒或丸粒具有包含所述丁醚脲或丁醚脲盐的涂层。

18.根据权利要求8-14中任一项所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐，其中所述丁醚脲或丁醚脲盐被配制用于腹膜内注射。

19.根据权利要求18所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐，其中所述丁醚脲或丁醚脲盐以10-100mg/ml的量存在于所述制剂中。

20.根据权利要求8-19中任一项所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐，其中所述制剂包含与另外的活性剂组合的所述丁醚脲或丁醚脲盐。

21.根据权利要求20所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐，其中所述另外的活性剂是能够治疗鱼类寄生虫的试剂。

22.一种治疗鱼类寄生虫的方法，其中所述方法包括将丁醚脲或其兽医学可接受的盐施用于所述鱼。

23.根据权利要求22所述的方法，其中所述鱼类寄生虫是海虱。

24.一种组合物，其包含丁醚脲或其兽医学可接受的盐和鱼饲料。

25.丁醚脲或其兽医学可接受的盐在治疗鱼类寄生虫中的用途。

26.根据权利要求25所述的用途，其中所述鱼类寄生虫是海虱。

27.基本如本文所述的丁醚脲或其兽医学可接受的盐的用途。