CN107907501A - 一种恒定低温超连续综合光谱的冻存全血分析方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种恒定低温超连续综合光谱的冻存全血分析方法，该方法是在冻存全血分析仪器上实现的。冻存全血分析方法包括积分球低温恒温、初始定标、恒低温超连续光谱采集、测试结果分析四个步骤，适用于海关对冻存全血的检测、识别、建库、溯源及保护。本发明的有益效果是，本发明的有益效果是，采用了电动阀门控制流量和液氮泵控制液速的方式，实现内腔的低温恒温控制，从而保证了测试环境的统一性，从而提高了冻存全血样品超连续透过率谱测试的重复性和一致性，可消除常规方法由于样品升温过程引起的偏差，从而有效提高不同种属全血的识别率。

Description

一种恒定低温超连续综合光谱的冻存全血分析方法

技术领域

本发明涉及一种激光光谱分析方法，尤其涉及一种采用恒定低温激光超连续综合光谱技术的全血分析方法，适用于人与动物冻存全血样品的测试、建库及甄别,属于光电成像领域。

背景技术

在进出口领域，各国对血液制品的进出口大都采取严格控制的措施。由于人与动物的血液成分中含有物种的遗传特性等重要的生物信息，因此对其的进出口管制非常严格，需要特制的仪器设备进行检测。

由于血液制品的特殊性，因此对测试设备的要求是非接触式，以免血液外露造成的变性和对测试人员的危害。现有的血液检测设备大都基于流式细胞术，需要对血样进行抽样、稀释等操作，对检测环境要求高，只能用于精细检测，不适合海关快速通关高速检测的需要。此外，目前国际上血液制品的进出口遵循冻存管保存、通关、运输的规定，即全血、血清等制品必须保存在零下40-80 度的环境下进行进出口，所以海关检测的是固态血液的制品。这样，市面上的生物医学设备无法胜任。目前，我国的法律规定禁止人的血液制品出口，允许部分动物血液制品出口，因为，为了防止不法人员将人血混入动物血中进行出口，必须一种能快速区别人与动物冻速血液制品的仪器和方法。

面对这一需求，本发明提出一种采用恒定低温激光超连续综合光谱技术的全血分析方法，根据恒定低温下，人与动物冻存全血的超连续透过率光谱差异，进行快速检测、建库与识别，方便海关进出口检测检疫部门进行冻存血液制品的溯源、鉴别及保护。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用恒定低温激光超连续综合光谱技术的全血分析方法，可获取人与动物冻存全血的激光超连续透过率光谱，用于海关对冻存全血的检测、识别、建库、溯源及保护。

本发明是这样来实现的：

本发明提出的采用恒定低温激光超连续综合光谱技术的冻存全血分析方法，是在冻存全血分析上实现的，该冻存全血分析仪由机身和装配在机身内的内部组件组成；内部组件主要包括树莓派、超连续谱光纤激光器、光谱仪、样品室、液氮泵、液氮瓶、直流稳压电源、触摸屏以及辅助部件；

其中机身除了容纳这些内部组件外，还有机身USB接口、键盘接口、鼠标接口和市电开关；辅助部件包括USB供电器、若干USB线、一分二USB 线、HDMI线、串口数据线、发射光纤和接收光纤；

超连续谱光纤激光器通过激光器光纤输出端口输出可见至中红外的超连续谱激光至发射光纤，发射光纤另一端联接积分球光纤输入端，用以对积分球进行照明；积分球内壁涂覆有白色哑光均光材料，可对进入的光线多次漫反射进行匀光；积分球光纤输出端与光谱仪的光谱仪光纤接口通过接收光纤联接，将积分球的出射光引入光谱仪进行分析；

样品室包括样品架、积分球与低温探头三部分；其中样品架为透明石英玻璃材质，内部用以放置冻存管，冻存管内部装有冷冻全血样品；低温探头安装在积分球内，用以实时探测积分球内的温度；

液氮泵安装在样品室外，并通过入口与出口与积分球相通，形成一循环通道；液氮瓶与入口相连，内装满液氮，具有电动阀门，打开此阀门可排出液氮进入循环通道；

直流稳压电源将输入的市电转换成直流电，并分成四路输出；第一路用以提供液氮泵所需的直流电源；第二路用以提供低温探头所需电源；第三路用对超连续谱光纤激光器进行供电；第四路用以提供USB供电器所需的直流电压； USB供电器有USB接口丙、USB接口乙、USB接口甲三个5V输出供电端口，其中光谱仪USB口通过一分二USB线分别与USB接口丙及机身USB接口相连，当仪器工作时，USB接口丙输出5V直流电压通过光谱仪USB口给光谱仪供电；当仪器不工作时，USB接口丙无输出，此时，光谱仪USB口可通过机身USB接口连接外部计算机，进行离线调试；USB接口乙通过USB线与树莓派USB接口丙相连，用以对树莓派供电；USB接口甲通过USB线与触摸屏 USB接口相连，用以对触摸屏供电；

树莓派HDMI接口通过HDMI线与触摸屏的触摸屏HDMI接口相连，用以对触摸屏提供显示；树莓派串口与光谱仪串口通过串口数据线连接，用以进行通讯；树莓派具有三个控制口，其一连接液氮泵，通过泵的抽运速度的变化来控制液氮在循环通道的流速；其二连接液氮瓶的电动阀门，用以控制循环通道液氮的流量；其三连接低温探头，用以设定恒定低温的温度，并实时接收低温探头测量的积分球内的温度；键盘接口通过USB线与树莓派USB接口乙相连，外部键盘插入键盘接口可在树莓派中进行键盘输入；鼠标接口通过USB 线与树莓派USB接口甲相连，外部鼠标插入鼠标接口可在树莓派中进行鼠标操作；树莓派装有主控软件，用户可以通过外部键鼠或对触摸屏进行触摸操作进行软件的操作，进行人机交互；

本发明提出的时域分辨超连续综合光谱的冻存全血分析方法包括以下步骤：

(1)积分球低温恒温

用户将样品架放入样品室，打开机身的市电开关，此时，直流稳压电源产生输出，使得树莓派、超连续谱光纤激光器、光谱仪、样品室、触摸屏、低温探头以及液氮泵都通电处于工作状态；

树莓派通电启动主控软件，用户点击操作主控软件的低温恒温按钮，主控软件产生响应，设定恒定低温温度值T给低温探头同时接收其回传的积分球的实时测量温度；同时打开液氮瓶的电动阀门，使液氮进入循环通道，并进入积分球，通过改变电动阀门的开闭大小，调节液氮的流量；同时主控软件发出指令控制液氮泵的抽运速度以调节液氮在循环通道的流速；这样通过进入积分球的液氮的流量和流速达到控温的目的，当主控软件接收低温探头回传的积分球的实时测量温度等于T时，提示用户进行下一步操作；

(2)初始定标

用户点击操作主控软件的初始定标按钮，主控软件产生响应，设定光谱仪的采集积分时间A；超连续谱光纤激光器进入积分球的光线经多次漫反射进行匀光；由于样品架为透明石英玻璃材质，因此，对光线基本无吸收；主控软件启动光谱仪对积分球的出射光按积分时间A进行光谱采集，得到基准光谱并存入树莓派内部的存储器；

(3)恒低温超连续光谱采集

用户取出样品架，将处于低温状态的装有冷冻全血样品的冻存管放入样品架，然后将样品架放入样品室，用户点击操作主控软件的开始测试按钮；此时超连续谱光纤激光器进入积分球的光线经多次漫反射进行匀光后，入射进入全血样品的光将会产生吸收、透射、反射、再发射等多种综合效应，再沿各个方向射向积分球的器壁，经漫反射后又有部分光射向全血样品，经多次反复后，经积分球积分球光纤输出端通过接收光纤引入光谱仪；主控软件启动光谱仪按积分时间A进行恒低温超连续光谱采集，并存入树莓派内部的传感器；由于在测试的时间内，全血样品与积分球设定的恒定低温度值无差异，因此全血样品处于恒温过程，其测试光谱将不受常规方法样品升温的影响，提高了测试稳定性和一致性；

(4)测试结果分析

用户点击操作主控软件的结果分析按钮，主控软件产生响应，将第三步获得的恒低温超连续光谱数据除以第二步获得的基准光谱，获得超连续透过率光谱，对其进行主成分分析、时域变化曲线拟合，得到其时域分辨超连续谱特征向量；与基础数据库的大量已知种属的样品的特征向量进行模式识别计算、聚类分析后，得出该全血样品的种属。

本发明的有益效果是，采用了电动阀门控制流量和液氮泵控制液速的方式，实现内腔的低温恒温控制，从而保证了测试环境的统一性，从而提高了冻存全血样品超连续透过率谱测试的重复性和一致性，可消除常规方法由于样品升温过程引起的偏差，从而有效提高不同种属全血的识别率。

附图说明

图1为本发明系统结构示意图，图中：1——机身；2——USB接口丙；3 ——USB接口乙；4——USB接口甲；5——机身USB接口；6——键盘接口； 7——鼠标接口；8——市电开关；9——直流稳压电源；10——USB供电器； 11——超连续谱光纤激光器；12——激光器光纤输出端口；13——发射光纤； 14——积分球光纤输入端；15——积分球光纤输出端；16——样品室；17——样品架；18——冻存管；19——全血样品；20——积分球；21——液氮泵；22 ——接收光纤；23——光谱仪光纤接口；24——光谱仪；25——光谱仪串口； 26——光谱仪USB口；27——串口数据线；28——树莓派串口；29——树莓派控制口；30——树莓派USB接口甲；31——树莓派USB接口乙；32——树莓派HDMI接口；33——树莓派USB接口丙；34——触摸屏；35——HDMI 线；36——触摸屏HDMI接口；37——触摸屏USB接口；38——一分二USB 线；39——USB线；40——树莓派；41——电动阀门42——出口；43——低温探头；44——入口；45——液氮瓶。

注：USB，即Universal Serial Bus，通用串行总线；HDMI，即High DefinitionMultimedia Interface，高清晰度多媒体接口。

具体实施方式

本发明具体实施方式如图1所示。

本发明提出的采用恒定低温激光超连续综合光谱技术的冻存全血分析方法，是在冻存全血分析上实现的，该冻存全血分析仪由机身1和装配在机身1 内的内部组件组成；内部组件主要包括树莓派40、超连续谱光纤激光器11、光谱仪24、样品室16、液氮泵21、液氮瓶45、直流稳压电源9、触摸屏34 以及辅助部件；

其中机身1除了容纳这些内部组件外，还有机身USB接口5、键盘接口6、鼠标接口7和市电开关8；辅助部件包括USB供电器10、若干USB线39、一分二USB线38、HDMI线35、串口数据线27、发射光纤13和接收光纤22；

超连续谱光纤激光器11通过激光器光纤输出端口12输出可见至中红外 (本实施例为400至1700纳米)的超连续谱激光至发射光纤13，发射光纤13 另一端联接积分球光纤输入端14，用以对积分球20进行照明；积分球20内壁涂覆有白色哑光均光材料，可对进入的光线多次漫反射进行匀光；积分球光纤输出端15与光谱仪24的光谱仪光纤接口23通过接收光纤22联接，将积分球 20的出射光引入光谱仪24(本实施例光谱仪的检测光谱范围为400至1700纳米)进行分析；

样品室16包括样品架17、积分球20与低温探头43三部分；其中样品架 17为透明石英玻璃材质，内部用以放置冻存管18，冻存管18内部装有冷冻全血样品19；低温探头43安装在积分球20内，用以实时探测积分球20内的温度；

液氮泵21安装在样品室16外，并通过入口44与出口42与积分球20相通，形成一循环通道；液氮瓶45与入口44相连，内装满液氮，具有电动阀门 41，打开此阀门可排出液氮进入循环通道；

直流稳压电源9将输入的市电转换成直流电，并分成四路输出；第一路用以提供液氮泵21所需的直流电源；第二路用以提供低温探头43所需电源；第三路用对超连续谱光纤激光器11进行供电；第四路用以提供USB供电器10 所需的直流电压；USB供电器10有USB接口丙2、USB接口乙3、USB接口甲4三个5V输出供电端口，其中光谱仪USB口26通过一分二USB线38分别与USB接口丙2及机身USB接口5相连，当仪器工作时，USB接口丙2输出5V直流电压通过光谱仪USB口26给光谱仪24供电；当仪器不工作时， USB接口丙2无输出，此时，光谱仪USB口26可通过机身USB接口5连接外部计算机，进行离线调试；USB接口乙3通过USB线39与树莓派40的树莓派USB接口丙33相连，用以对树莓派40供电；USB接口甲4通过USB线 39与触摸屏USB接口37相连，用以对触摸屏34供电；

树莓派40的树莓派HDMI接口32通过HDMI线35与触摸屏34的触摸屏HDMI接口36相连，用以对触摸屏34提供显示；树莓派40的树莓派串口 28与光谱仪24的光谱仪串口25通过串口数据线27连接，用以进行通讯；树莓派40具有三个控制口29，其一连接液氮泵21，通过泵的抽运速度的变化来控制液氮在循环通道的流速；其二连接液氮瓶45的电动阀门41，用以控制循环通道液氮的流量；其三连接低温探头43，用以设定恒定低温的温度，并实时接收低温探头43测量的积分球20内的温度；键盘接口6通过USB线39与树莓派USB接口乙31相连，外部键盘插入键盘接口6可在树莓派40中进行键盘输入；鼠标接口7通过USB线39与树莓派USB接口甲30相连，外部鼠标插入鼠标接口7可在树莓派40中进行鼠标操作；树莓派40装有主控软件，用户可以通过外部键鼠或对触摸屏34进行触摸操作进行软件的操作，进行人机交互；

本发明提出的时域分辨超连续综合光谱的冻存全血分析方法包括以下步骤：

(1)积分球低温恒温

用户将样品架17放入样品室16，打开机身1的市电开关8，此时，直流稳压电源9产生输出，使得树莓派40、超连续谱光纤激光器11、光谱仪24、样品室16、触摸屏34、低温探头43以及液氮泵21都通电处于工作状态；

树莓派40通电启动主控软件，用户点击操作主控软件的低温恒温按钮，主控软件产生响应，设定恒定低温温度值T(本实施例为零下40度)给低温探头43同时接收其回传的积分球20的实时测量温度；同时打开液氮瓶45的电动阀门41，使液氮进入循环通道，并进入积分球20，通过改变电动阀门41 的开闭大小，调节液氮的流量；同时主控软件发出指令控制液氮泵21的抽运速度以调节液氮在循环通道的流速；这样通过进入积分球20的液氮的流量和流速达到控温的目的，当主控软件接收低温探头43回传的积分球20的实时测量温度等于T时，提示用户进行下一步操作；

(2)初始定标

用户点击操作主控软件的初始定标按钮，主控软件产生响应，设定光谱仪24的采集积分时间A(本实施例为200毫秒)；超连续谱光纤激光器11进入积分球20的光线经多次漫反射进行匀光；由于样品架17为透明石英玻璃材质，因此，对光线基本无吸收；主控软件启动光谱仪24对积分球20的出射光按积分时间A进行光谱采集，得到基准光谱并存入树莓派40内部的存储器；

(3)恒低温超连续光谱采集

用户取出样品架17，将处于低温状态(本实施例为零下40度)的装有冷冻全血样品19的冻存管18放入样品架17，然后将样品架17放入样品室16，用户点击操作主控软件的开始测试按钮；此时超连续谱光纤激光器11进入积分球20的光线经多次漫反射进行匀光后，入射进入全血样品19的光将会产生吸收、透射、反射、再发射等多种综合效应，再沿各个方向射向积分球20的器壁，经漫反射后又有部分光射向全血样品19，经多次反复后，经积分球20 积分球光纤输出端15通过接收光纤22引入光谱仪24；主控软件启动光谱仪 24按积分时间A进行恒低温超连续光谱采集，并存入树莓派40内部的传感器；由于在测试的时间内，全血样品19与积分球20设定的恒定低温度值无差异，因此全血样品19处于恒温过程，其测试光谱将不受常规方法样品升温的影响，提高了测试稳定性和一致性；

(4)测试结果分析

用户点击操作主控软件的结果分析按钮，主控软件产生响应，将第三步获得的恒低温超连续光谱数据除以第二步获得的基准光谱，获得超连续透过率光谱，对其进行主成分分析、时域变化曲线拟合，得到其时域分辨超连续谱特征向量；与基础数据库的大量已知种属的样品的特征向量进行模式识别计算、聚类分析后，得出该全血样品19的种属。

Claims (1)

1.一种恒定低温超连续综合光谱的冻存全血分析方法，该方法是在冻存全血分析仪器上实现的，所述仪器由由机身(1)和装配在机身(1)内的内部组件组成；内部组件主要包括树莓派(40)、超连续谱光纤激光器(11)、光谱仪(24)、样品室(16)、液氮泵(21)、液氮瓶(45)、直流稳压电源(9)、触摸屏(34)以及辅助部件；其特征在于冻存全血分析方法包括以下步骤：

1)积分球低温恒温

用户将样品架放入样品室，打开机身的市电开关，此时，直流稳压电源产生输出，使得树莓派、超连续谱光纤激光器、光谱仪、样品室、触摸屏、低温探头以及液氮泵都通电处于工作状态；

树莓派通电启动主控软件，用户点击操作主控软件的低温恒温按钮，主控软件产生响应，设定恒定低温温度值T给低温探头同时接收其回传的积分球的实时测量温度；同时打开液氮瓶的电动阀门，使液氮进入循环通道，并进入积分球，通过改变电动阀门的开闭大小，调节液氮的流量；同时主控软件发出指令控制液氮泵的抽运速度以调节液氮在循环通道的流速；这样通过进入积分球的液氮的流量和流速达到控温的目的，当主控软件接收低温探头回传的积分球的实时测量温度等于T时，提示用户进行下一步操作；

2)初始定标

用户点击操作主控软件的初始定标按钮，主控软件产生响应，设定光谱仪的采集积分时间A；超连续谱光纤激光器进入积分球的光线经多次漫反射进行匀光；由于样品架为透明石英玻璃材质，因此，对光线基本无吸收；主控软件启动光谱仪对积分球的出射光按积分时间A进行光谱采集，得到基准光谱并存入树莓派内部的存储器；

3)恒低温超连续光谱采集

用户取出样品架，将处于低温状态的装有冷冻全血样品的冻存管放入样品架，然后将样品架放入样品室，用户点击操作主控软件的开始测试按钮；此时超连续谱光纤激光器进入积分球的光线经多次漫反射进行匀光后，入射进入全血样品的光将会产生吸收、透射、反射、再发射等多种综合效应，再沿各个方向射向积分球的器壁，经漫反射后又有部分光射向全血样品，经多次反复后，经积分球积分球光纤输出端通过接收光纤引入光谱仪；主控软件启动光谱仪按积分时间A进行恒低温超连续光谱采集，并存入树莓派内部的传感器；由于在测试的时间内，全血样品与积分球设定的恒定低温度值无差异，因此全血样品处于恒温过程，其测试光谱将不受常规方法样品升温的影响，提高了测试稳定性和一致性；

4)测试结果分析

用户点击操作主控软件的结果分析按钮，主控软件产生响应，将第三步获得的恒低温超连续光谱数据除以第二步获得的基准光谱，获得超连续透过率光谱，对其进行主成分分析、时域变化曲线拟合，得到其时域分辨超连续谱特征向量；与基础数据库的大量已知种属的样品的特征向量进行模式识别计算、聚类分析后，得出该全血样品的种属。