CN107837397A - Pedf基因在治疗急性药物性肝损伤中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了PEDF基因在治疗急性药物性肝损伤中的应用。本发明首次确定了PEDF基因和急性药物性肝损伤的关系，PEDF基因敲除可以加剧对乙酰氨基酚诱导的肝损伤。这表明PEDF基因在对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤中的功能，主要体现在PEDF具有改善肝损伤的作用。针对PEDF基因的上述功能，PEDF可作为药物，用于预防、缓解或/和治疗对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤；PEDF可作为药物靶点，用于筛选预防、缓解或/和治疗对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤的药物；PEDF也可以作为基因治疗中的靶基因，用于设计和制备预防、缓解或/和治疗对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤的药物和/或生物学制剂。
Description
技术领域
本发明涉及已知基因的功能与应用研究技术领域，具体地，涉及PEDF基因在治疗急性药物性肝损伤中的应用。
背景技术
急性肝损伤是指在较短时间内迅速发生的肝细胞损伤，在临床上较为常见。导致急性肝损伤的因素诸多，主要包括病毒感染、药物或化学毒物等。其中，由药物毒性导致的药物性肝损伤随着临床用药种类的增多和患者自行改变服药剂量概率的增高，其发病几率也相应增高。
对乙酰氨基酚是临床常用的解热镇痛药，临床上用量过大会导致严重的药物性肝损伤，严重者可导致肝功能衰竭，造成死亡。在西方发达国家，对乙酰氨基酚引起的肝损伤已经取代病毒性肝炎成为最常见的导致急性肝功能衰竭的因素，并且，在需要肝脏移植治疗的肝功能衰竭患者中，由对乙酰氨基酚引起的比例高居第二位。对于对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤，目前临床上尚缺乏较为有效的治疗手段，因此，寻找具有改善对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤的治疗药物或靶点具有十分重要的意义。
目前研究证实，氧化应激是对乙酰氨基酚过量服用导致急性药物性肝损伤的主要生物学机制。对乙酰氨基酚在正常服用剂量下，大部分与3-磷酸腺苷-5-磷酸硫酸酯和二磷酸尿苷葡萄糖醛酸结合而被排出体外，少部分被细胞色素P450氧化生成乙酰苯亚胺醌后与还原型谷胱甘肽或谷胱甘肽转移酶结合而被清除。但是对乙酰氨基酚在过量情况下，被细胞色素P450大量氧化而生成过量的乙酰苯亚胺醌，超过了肝脏的清除能力，导致还原型谷胱甘肽和谷胱甘肽转移酶耗尽，使得肝脏清除氧自由基能力减弱。同时，过量的乙酰苯亚胺醌与胞内蛋白质共价键结合，引起氧化应激，生成大量的活性氧簇，引起脂质氧化反应，最终导致肝细胞大量变性坏死。
PEDF又称Serpin f1，是分泌性糖蛋白，属丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族成员，其在人体组织中广泛分布，尤其在肝脏和脂肪中表达丰富。其主要的生理功能包括抑制血管生成、调控脂代谢、抗氧化、抗炎、抗肿瘤、营养神经和神经保护等。但是，PEDF是否参与对乙酰氨基酚诱导急性药物性肝损伤，是否是对乙酰氨基酚诱导急性药物性肝损伤病理过程中的关键分子，目前还不清楚。
发明内容
本发明的目的在于确定PEDF表达与对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤的关系，提供PEDF在制备预防、缓解或/和治疗对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤药物中的应用。
本发明的另一个目的是提供PEDF基因在作为筛选预防、缓解或/和治疗对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤药物的药物靶标中的应用。
本发明的再一个目的是提供PEDF作为基因治疗中的靶基因，用于设计和制备预防、缓解或/和治疗对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤药物和/或生物学制剂中的应用。
为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：
本发明通过研究首次确定了PEDF基因的表达和对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤的关系，具体关系如下： 1、PEDF基因缺失显著降低对乙酰氨基酚诱导后的小鼠存活率；2、PEDF基因缺失显著加剧对乙酰氨基酚诱导后的小鼠肝脏变性坏死；3、PEDF基因缺失显著升高对乙酰氨基酚诱导后的小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶含量；4、PEDF基因缺失显著升高对乙酰氨基酚诱导后的小鼠肝组织超氧化物阴离子水平；5、PEDF重组蛋白处理显著降低对乙酰氨基酚诱导后的小鼠肝组织超氧化物阴离子水平。
由以上结果可知，在对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤中，PEDF敲除可导致更严重的肝细胞变性坏死，显著升高血清中肝损伤标志物水平，并产生更多的活性氧簇，降低存活率，而给予PEDF重组蛋白，则可以显著降低对乙酰氨基酚诱导后的小鼠肝组织超氧化物阴离子水平。因此，PEDF具有改善对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤的作用，为研究防治对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤的新靶点和新策略提供了理论依据和临床基础。
所以，本发明要求保护PEDF在制备预防、缓解或/和治疗对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤药物中的应用。所述的药物包括有效量的PEDF重组蛋白，以及药学上可接受的辅料。
本发明还要求保护PEDF基因在作为筛选预防、缓解或/和治疗对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤药物的药物靶标中的应用。
本发明进一步要求保护PEDF作为基因治疗中的靶基因，用于设计和制备预防、缓解或/和治疗对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤药物和/或生物学制剂中的应用。
所述的药物和/或生物制剂，包含PEDF激活剂。
所述的对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤为对乙酰氨基酚服用过量造成的以肝细胞坏死、中央静脉淤血、血清谷丙转氨酶含量升高、血清谷草转氨酶含量升高为特征的肝损伤及其造成的肝功能衰竭。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明首次确定了PEDF与对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤的关系，因此，PEDF可作为药物、药物靶点或基因治疗中的靶基因，应用于对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤的预防、缓解或/和治疗，能够为对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤的防治提供新的策略。此外，PEDF和对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤关系的确定，将为进一步的研究对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤的病因病机和相应的防治策略提供新的方向。
附图说明
图1是同窝雌性PEDF(-/-)小鼠、PEDF(+/-)小鼠及PEDF(+/+)小鼠的存活率图，结果显示PEDF基因缺失显著降低对乙酰氨基酚诱导后的小鼠存活率。（p=0.2850为WT和Heter比较；p=0.2850为WT和Homo比较）
图2是同窝雄性PEDF(-/-)小鼠和PEDF(+/-)小鼠分别给予对乙酰氨基酚或溶剂对照处理后6小时的肝脏大体图片，结果显示PEDF敲除小鼠在对乙酰氨基酚诱导后产生更严重的肝脏病变。
图3是同窝雄性PEDF(-/-)小鼠和PEDF(+/-)小鼠分别给予对乙酰氨基酚或溶剂对照处理后6小时的肝脏HE染色图片（100×），结果显示PEDF敲除小鼠在对乙酰氨基酚诱导后产生更严重的肝细胞变性坏死。
图4是同窝雄性PEDF(-/-)小鼠和PEDF(+/-)小鼠分别给予对乙酰氨基酚或溶剂对照处理后6小时的血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶含量图，结果显示PEDF敲除小鼠在对乙酰氨基酚诱导后显著升高了血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平。（**，0.001<p<0.01；*，0.01<p<0.05）
图5是同窝雄性PEDF(-/-)小鼠和PEDF(+/-)小鼠分别给予对乙酰氨基酚或溶剂对照处理后6小时的肝组织DHE染色图（400×），结果显示PEDF敲除小鼠在对乙酰氨基酚诱导后产生了更多的超氧化物阴离子。
图6是对照组、模型组、实验组动物分别给予对乙酰氨基酚或溶剂对照处理后6小时的肝组织DHE染色图(400×)，结果显示PEDF重组蛋白处理显著降低对乙酰氨基酚诱导后的小鼠肝组织超氧化物阴离子水平。
图 1至图6中，WT代表PEDF(+/+)小鼠，Heter代表PEDF(+/-)小鼠，Homo代表PEDF(-/-)小鼠，PBS为对照溶剂，APAP为对乙酰氨基酚。
具体实施方式
下面结合说明书附图和具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实验用动物及饲养：PEDF(-/-)小鼠为C57BL/6J背景，由美国OklahomaUniversity的马建兴教授课题组构建，并由中山大学中山医学院高国全教授课题组友情赠送。本发明所用基因敲除动物均在中山大学疾病模式动物中心进行扩繁，扩繁方式为雄性PEDF(+/-)和雌性PEDF(+/-)交配扩繁，于3周时剪鼠尾鉴定并分笼。本发明实验动物选用同窝雄性PEDF(-/-)小鼠和PEDF(+/-)小鼠，各14-16只；同窝雌性PEDF(-/-)小鼠、PEDF(+/-)小鼠及野生型小鼠，各7-8只。在重组蛋白给药实验中，所用实验动物为雄性C57BL/6J小鼠，20只，购于中山大学实验动物中心。动物饲养期间自由饮水摄食，每12小时交替照明，温度21±2℃，湿度40%-70%。
关键动物实验及终末组织取材
同窝雄性PEDF(-/-)小鼠和PEDF(+/-)小鼠，分别分为溶剂对照组（各6-8只）和对乙酰氨基酚诱导组（各6-8只）。实验开始前动物禁食不禁水12小时。12小时后，分别给予腹腔注射500mg/kg对乙酰氨基酚或对照溶剂。6小时后，腹腔注射1%戊巴比妥钠，80mg/kg，待小鼠麻醉后，摘眼球取血，静置2小时后，3000rpm离心5分钟，取上清，用于后续血清学指标检测。取血后将小鼠仰卧位固定于解剖板上，75%消毒酒精表面消毒。用手术剪剪开小鼠腹腔至胸腔，暴露心脏，剪开右心耳，于左心室进针灌注PBS至血液流净。剪下肝脏组织，于PBS中漂洗至无血渍。数码相机进行肝脏大体拍照后，取部分组织于4%多聚甲醛中固定，用于后续病理检测。
另取雄性C57BL/6J小鼠20只，分为对照组、模型组和实验组，各6-8只。实验开始前动物禁食不禁水12小时。12小时后，模型组和实验组分别腹腔注射PBS或PEDF重组蛋白（50mg/kg）。2小时后，模型组和实验组给予腹腔注射500mg/kg对乙酰氨基酚，对照组给予对照溶剂。6小时后，腹腔注射1%戊巴比妥钠，80mg/kg，待小鼠麻醉后，用手术剪剪开小鼠腹腔至胸腔，暴露心脏，剪开右心耳，于左心室进针灌注PBS至血液流净。剪下肝脏组织，于PBS中漂洗至无血渍，取部分组织于4%多聚甲醛中固定，用于后续病理检测。
病理组织处理
石蜡切片：取小鼠肝脏，于PBS中漂洗至无血渍，4%多聚甲醛中固定过夜；PBS洗3次，每次10分钟；25%乙醇、50%乙醇、75%乙醇、90%乙醇、无水乙醇（Ⅰ）、无水乙醇（Ⅱ）梯度脱水，各30分钟；二甲苯（Ⅰ）、二甲苯（Ⅱ）各15分钟；石蜡（Ⅰ）、石蜡（Ⅱ）各60分钟；脱水后，心脏平放于石蜡中包埋；徕卡石蜡切片机切片，片厚10μm。
冰冻切片：取小鼠肝脏，于PBS中漂洗至无血渍，4%多聚甲醛中固定过夜；PBS洗3次，每次30分钟；15%蔗糖溶液、20%蔗糖溶液、30%蔗糖溶液梯度脱水，分别至组织沉降至底；脱水后，肝脏组织平放于包埋盒中，OCT包埋；转移至-80℃冰箱中过夜；徕卡冰冻切片机切片，片厚5μm。
实施例1
对乙酰氨基酚诱导后小鼠存活率测定
同窝雌性PEDF(-/-)小鼠、PEDF(+/-)小鼠及PEDF(+/+)小鼠，各7～8只。实验开始前动物禁食不禁水12小时。12小时后，分别给予腹腔注射750 mg/kg的对乙酰氨基酚溶液，每6小时记录一次动物存活情况，直至注射后42小时。制作存活率曲线，显著性分析采用Log-Rank检验。
高剂量的对乙酰氨基酚诱导急性药物性肝损伤后，可导致肝功能衰竭，进而导致死亡。存活率的测定可以反映出动物对对乙酰氨基酚的耐受能力。图1是对乙酰氨基酚诱导后各组动物的生存曲线，结果表明，PEDF基因缺失显著降低对乙酰氨基酚诱导后的小鼠存活率。
实施例2
小鼠肝脏病理学检测
肝脏石蜡切片HE染色，主要步骤为：60℃烘烤30分钟→二甲苯（Ⅰ）10分钟→二甲苯（Ⅱ）10分钟→无水乙醇（Ⅰ）3分钟→无水乙醇（Ⅱ）3分钟→95%乙醇（Ⅰ）1分钟→70%乙醇1分钟→蒸馏水2分钟→苏木素液5-10分钟→流水洗去苏木素1-3秒钟→1%盐酸酒精1-2秒钟→流水冲洗20分钟→蒸馏水过洗1-2秒钟→0.5%伊红2分钟→蒸馏水稍洗1～2秒钟→95%乙醇（Ⅱ）2～3秒钟→无水乙醇（Ⅲ）3～5秒钟→无水乙醇（Ⅳ）5～10秒钟→二甲苯（Ⅰ）2分钟→二甲苯（Ⅱ）2分钟→中性树胶封片观察拍照，100×。
正常的肝组织病理切片肝小叶结构清晰，肝细胞轮廓清楚，无明显细胞变性，中央静脉结构正常，无淤血。对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤小鼠的肝组织病理切片，结构破坏，肝细胞水样变性，中央静脉淤血。图2是肝脏大体图片。图3是肝脏组织HE染色图片。结果表明，PEDF敲除小鼠在对乙酰氨基酚诱导后产生更严重的肝脏病变。
实施例3
小鼠血清学指标检测
取血清，采用商业化试剂盒（南京建成，C009-2;南京建成，C010-2）对血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平进行测定。统计分析软件采用SPSS 19.0，分析方法采用单因素方差分析。
转氨酶是人体代谢过程中必不可少的“催化剂”，主要存在于肝细胞内，当肝细胞受损时，肝细胞中的转氨酶会被释放到血液中，造成血中转氨酶水平增高，因此，通过检测血中转氨酶水平可以间接反映肝脏受损情况。图4是同窝雄性PEDF(-/-)小鼠和PEDF(+/-)小鼠分别给予对乙酰氨基酚或溶剂对照处理后6小时的血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶含量图，结果显示PEDF敲除小鼠在对乙酰氨基酚诱导后显著升高了血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平。
实施例4
小鼠肝脏超氧化物阴离子检测
肝脏冰冻切片DHE染色，主要步骤为：新鲜冰冻切片复温→37℃，DHE染液避光孵育30分钟→PBS中洗涤3次，每次5分钟→室温，DAPI染液避光染核10分钟→PBS中洗涤3次，每次5分钟→抗荧光淬灭剂封片→蔡司AxioScan.Z1全自动玻片扫描系统采集图像，400×。
氧化应激是对乙酰氨基酚诱导急性药物性肝损伤的重要生物学机制。过量的对乙酰氨基酚被细胞色素P450大量氧化而生成过量的乙酰苯亚胺醌，过量的乙酰苯亚胺醌与胞内蛋白质共价键结合，引起氧化应激，生成大量的活性氧簇，引起脂质氧化反应，最终导致肝细胞大量变性坏死。
DHE是一种最常用的超氧化物阴离子荧光探针，其穿透细胞膜进入胞浆后，可被胞内的超氧化物阴离子氧化，进而和RNA或DNA结合产生红色荧光。当细胞内的超氧化物阴离子水平较高时，产生的红色荧光就越强，反之则越弱，因此，通过比较荧光强度可以间接反映出胞内超氧化物阴离子的水平。图5是同窝雄性PEDF(-/-)小鼠和PEDF(+/-)小鼠分别给予对乙酰氨基酚或溶剂对照处理后6小时的肝组织DHE染色图，结果表明PEDF敲除小鼠在对乙酰氨基酚诱导后产生了更多的超氧化物阴离子。图6是对照组、模型组、实验组动物分别给予对乙酰氨基酚或溶剂对照处理后6小时的肝组织DHE染色图，结果显示PEDF重组蛋白处理显著降低对乙酰氨基酚诱导后的小鼠肝组织超氧化物阴离子水平。
Claims (6)
1.PEDF在制备预防、缓解或/和治疗对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物包括有效量的PEDF重组蛋白，以及药学上可接受的辅料。
3.PEDF基因在作为筛选预防、缓解或/和治疗对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤药物的药物靶标中的应用。
4.PEDF基因作为基因治疗中的靶基因，用于设计和制备预防、缓解或/和治疗对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤药物和/或生物学制剂中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的药物和/或生物制剂包含PEDF激活剂。
6.根据权利要求1至5任一项所述的应用，其特征在于，所述的对乙酰氨基酚诱导的急性药物性肝损伤为对乙酰氨基酚服用过量造成的以肝细胞坏死、中央静脉淤血、血清谷丙转氨酶含量升高、血清谷草转氨酶含量升高为特征的肝损伤及其造成的肝功能衰竭。
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|---|---|
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111920953A (zh) * | 2020-08-04 | 2020-11-13 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | Saa抑制剂在制备治疗急性肝损伤、急性肝衰竭或慢加急性肝衰竭的药物中的应用 |
| CN114651785A (zh) * | 2022-03-28 | 2022-06-24 | 中山大学 | 一种基于PEDF/ApoE双基因敲除的非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型构建方法及应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20130040899A1 (en) * | 2011-08-09 | 2013-02-14 | Mackay Memorial Hospital | Use of PEDF-Derived Polypeptides for Treating Liver Cirrhosis |
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Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20130040899A1 (en) * | 2011-08-09 | 2013-02-14 | Mackay Memorial Hospital | Use of PEDF-Derived Polypeptides for Treating Liver Cirrhosis |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| S.-I.YAMAGISHI等: "Pathophysiological Role of Pigment Epithelium-Derived Factor (PEDF) in Hepatic Disorders", 《CURRENT MEDICINAL CHEMISTRY》 * |
| SHOU-CHUAN SHIH等: "Pigment Epithelium Derived Factor Peptide Protects Murine Hepatocytes from Carbon Tetrachloride-Induced Injury", 《PLOS ONE》 * |
| TSUNG-CHUAN HO等: "Pigment Epithelium-Derived Factor Is an Intrinsic Antifibrosis Factor Targeting Hepatic Stellate Cells", 《THE AMERICAN JOURNAL OF PATHOLOGY》 * |
| 张均田 等: "《现代药理实验方法 2版》", 31 July 2012, 中国协和医科大学出版社 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111920953A (zh) * | 2020-08-04 | 2020-11-13 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | Saa抑制剂在制备治疗急性肝损伤、急性肝衰竭或慢加急性肝衰竭的药物中的应用 |
| CN114651785A (zh) * | 2022-03-28 | 2022-06-24 | 中山大学 | 一种基于PEDF/ApoE双基因敲除的非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型构建方法及应用 |
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