CN107805639A - 控制大蒜蒜瓣宽度性状的17个基因及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及分子育种技术领域，具体而言，涉及一种控制大蒜蒜瓣宽度性状的17个基因及其应用。本发明所提供的17个控制大蒜蒜瓣宽度性状的基因可应用于葱属植物的育种及性状改善，并可帮助本领域技术人员深入了解大蒜蒜瓣宽度性状的调控机制。

Description

控制大蒜蒜瓣宽度性状的17个基因及其应用

技术领域

本发明涉及分子育种技术领域，具体而言，涉及一种控制大蒜蒜瓣宽度性状的17个基因及其应用。

背景技术

大蒜(Allium sativum L.)属百合科葱属植物，起源于中亚地区，4000多年前就已经开始种植,具有食用、保健、药用的功效，长期以来深受人们的喜爱具有药食两用的功效；通常大蒜也特指该植物的球形鳞茎。大蒜的食用部分主要是白色的肉质鳞茎，它含胡萝卜素很少，但含有较丰富的蛋白质、碳水化合物、硫、多种维生素及微量元素，其中微量元素硒含量较高。一些有效成分(例如维生素、含硫化合物、硒等)具有抗氧化活性，是氧自由基清除剂，可以溶解人体内合成的亚硝胺，对癌症和心血管疾病具有预防与治疗作用。大蒜中含有抗氧化物质，它来自食源性蔬菜，安全性高，在食品中具有广阔的应用前景。

在我国，大蒜拥有世界上最大的种植面积，约为世界总种植面积的多。品种资源丰富，南北方均有栽培，产量占世界总产量的1/4多，因此，大蒜是我国重要的出口创汇蔬菜之一。我国是世界上重要的大蒜贸易国，在大蒜贸易方面起着举足轻重的作用。由于我国大蒜种质资源众多,再加上不同大蒜栽培地区生态环境迥异，因此不同地区的栽培品种一般具有显著的区域适应性，形成了形态各异的生态型，产生了地方名优大蒜品种，如山东苍山大蒜、山东金乡大蒜、陕西蔡家坡蒜等，并在此基础上形成了许多知名大蒜产区。

大蒜具有非常大的基因组(16Gb)，致使对大蒜中的遗传和基因组资源的研究非常困难，大蒜中各重要农艺性状遗传和分子调控机制，仍未解析。大蒜鳞茎是一种变态的腋芽器官，目前还没有大蒜鳞茎的瓣宽控制相关基因被报道。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明涉及分离的核酸片段，其选自下列组的序列之一：

a)、核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1～17所示的核酸片段中的一个或多个；

b)、在严格条件下能够与a)所述核苷酸序列杂交的核苷酸序列；

c)、与a)或b)所述序列互补的核苷酸序列。

本发明所提供的17个控制大蒜蒜瓣宽度性状的基因可应用于葱属植物的育种及性状改善，并可帮助本领域技术人员深入了解大蒜蒜瓣宽度性状的调控机制。

本发明所请求保护的核酸片段基因还包括与核苷酸序列SEQ ID NO：1～17所示的核酸片段中的一个或多个高度同源，并且具有同样的调控葱属植物鳞茎的瓣宽功能的高度同源的等价体序列。

所述高度同源的功能等价体序列包括在严格条件下能够与具有SEQ ID NO：1～17中任一项所示的序列的DNA杂交的DNA序列。本发明中使用的“严格条件”是公知的，包括诸如在含400mM NaCl、40mM PIPES(pH6.4)和1mM EDTA的杂交液中于60℃杂交12～16小时，然后在65℃下用含0.1％SDS、和0.1％SSC的洗涤液洗涤15～60分钟。

功能等价体序列还包括与SEQ ID NO：1～17中任一项所示序列有至少90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性，且具有调控葱属植物鳞茎的瓣宽功能的基因序列，可以从任何植物中分离获得。其中，序列同一性的百分比可以通过公知的生物信息学算法来获得，包括Myers和Miller算法(Bioinformatics，4(1)：11-17，1988)、Needleman-Wunsch全局比对法(J.Mol.Biol.，48(3)：443-53，1970)、Smith-Waterman局部比对法(J.Mol.Biol.，147：195-197，1981)、Pearson和Lipman相似性搜索法(PNAS，85(8)：2444-2448，1988)、Karlin和Altschul的算法(Altschul等，J.Mol.Biol.，215(3)：403-410，1990；PNAS，90：5873-5877，1993)。这对于本领域技术人员来说是熟悉的。

本发明还涉及一种表达载体，其包含如上所述的核酸片段。

本发明还涉及一种宿主细胞，其被如上所述的表达载体所转化。

本发明所提供的核酸片段可被插入质粒、粘粒、酵母人工染色体、细菌人工染色体或其他适合转化进宿主细胞中的任何载体中。优选的宿主细胞是细菌细胞，尤其是用于克隆或储存多核苷酸、或用于转化植物细胞的细菌细胞，例如大肠杆菌、农杆菌、根瘤土壤杆菌和毛根土壤杆菌。

如上所述的核酸片段在调控葱属植物鳞茎的瓣宽中的应用。

优选的，如上所述的应用，包括：将所述核酸片段通过转基因方法转入葱属植物，或沉默a)中所述的核苷酸序列对应的基因以调控葱属植物鳞茎的瓣宽。

优选的，如上所述的应用，所述转基因方法具体包括：

(1)构建如上所述的表达载体；

(2)将步骤(1)获得的表达载体直接导入葱属植物细胞；或通过如上所述的宿主细胞介导导入葱属植物细胞；

(3)再生出转基因植物；和

(4)选择出转基因植物；并且

(5)任选地，增殖步骤(4)获得的植物以获得后代。

本发明的转基因方法使用植物生物技术领域技术人员已知的转化方法制备。任何方法可被用于将重组表达载体转化进植物细胞中，以产生本发明的转基因植物。转化方法可包括直接和间接的转化方法。合适的直接方法包括脂质体介导的转化、使用基因枪导入、电穿孔、以及花粉管通道法等。

优选的，如上所述的应用，所述沉默a)中所述的核苷酸序列对应的基因的方法所采用的技术包括：

Cre/loxP或CRISPR/Cas9介导的基因敲除技术，siRNA、反义核酸技术或植物病毒载体介导的基因沉默技术。

优选的，如上所述的应用，所述葱属植物为洋葱组植物、葱组植物或长齿组植物；

更优选的，所述洋葱组植物为洋葱A.cepa L.；

更优选的，所述葱组植物为葱A.fistulosum L.；

更优选的，所述长齿组植物为大蒜Allium sativum L.。

因此本发明提供的核酸片段序列尤其适用于上述植物的细胞，但不排除在其它物种中也具有调控葱属植物鳞茎的瓣宽的作用。

具体实施方式

全基因组关联分析(Genome-wide association study；GWAS)是一种鉴定复杂性状基因的有力工具，但其应用受限于研究物种参考基因组序列的需求。本发明提出一种方法，即转录组参考的关联分析技术(transcriptome-referenced association study，TRAS)，其使用由单分子实时测序产生的转录组作为参考序列来评估基因序列和基因表达的种群变异。当两个评分都与性状相关时，候选基因被鉴定，并且它们的潜在相互作用通过表达数量性状基因座分析来确定。在下面的实施例中，通过应用这种方法描述102个地方品种的大蒜鳞茎性状特点，我们确定了17个与大蒜蒜瓣宽度性状相关的基因。TRAS作为独立于参考基因组的关联研究的有效工具，将关联研究的适用性扩展到广泛的物种。

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1

一、方法

1.植物材料，实验设计和表型测量

我们收集了92个中国地方品种和10个海外品种，总共102个大蒜地方品种于2014年9月种植于中国农业科学院麻类研究所实验田。田间试验采取随机的完全区块设计，每块两个重复。每个重复种植一个品种的36瓣大蒜，分三行，每行间隔10cm，两个重复之间间隔20cm。2015年收获成熟的大蒜，取三行中间的30株。然后，风干表面，用游标卡尺测量它们的宽度。

2.PacBio单分子实时测序文库构建及测序

本发明从102个大蒜地方品种中选取地方品种——阳溪，做单分子测序。使用Clontech SMARTer cDNA合成试剂盒(Clontech Laboratories，Mountain View，CA，USA)和oligo dT引物，将约1μg发育鳞茎的总RNA用于逆转录合成全长cDNA。反应重复三次。使用AMPure PB beads(Pacific Biosciences，Menlo Park，CA，USA)纯化PCR产物。使用BluePippin系统对获得的dsDNA进行大小选择并随后进行再扩增。最后，将产物纯化并经受Iso-Seq SMRTBell文库制备(https://pacbio.secure.force.com/SamplePrep)以产生三个文库(1-2kb，2-3kb和3-6kb)，使用P6-C4chemistry试剂盒在PacBio RSII平台上将这三个文库测序。

3.PacBio测序数据分析

利用SMRT分析软件对测序数据进行处理(http://pacificbiosciences.github.com/DevNet/)。从亚读数文件产生的环化测序读数利用如下程序得来：最小长度300；max_drop_fraction,0.8；min_passes,1；min_predicted_accuracy,0.8。根据是否具有polyA尾和最小测序长度300两个参数，把产生的环化测序读数分为全长和非全长。在默认设置下，全长和非全长环化序列都属于同类型的簇。把那些非冗余且没有末端的序列定义为转录本。因为PacBio读数相较于更短测序读数的二代测序有较高的核苷酸错误，所以利用proovread软件基于阳溪大蒜的Illumina RNA测序数据纠正。冗余的序列放到CD-HIT中。

4.转录组的注释

我们使用Coding Potential Calculator来根据转录组的质量、完整性以及与当前数据库的相似序列的开放阅读框比对等检测转录本的编码潜能。那些没有蛋白质编码潜能的被分为长链非编码RNA(lncRNA)，其余的如以前研究一样进行七个公共数据库的注释。每个转录本的编码序列(CDS)利用BLAST搜索在NCBI非冗余蛋白序列数据库和SwissProt蛋白数据库预测功能，以及进行ESTscan程序。

5.Illumina RNA测序文库构建及测序

为表征群体SNPs(单核苷酸)和GE(基因表达)变异，所有102个品种都进行Illumina RNA测序。利用试剂盒【UltraTM RNA Library Prep Kit for(New England BioLabs,Ipswich,MA,USA)】把每个个体的总RNA构建成片段长度为250bp(±25bp)的cDNA组成的混合片段文库。然后，使用Illumina测序平台(HiSeqTM2500)结合HiSeq PE Cluster Kit v4cBot进行测序。最后，筛选过滤原始数据(rawreads)，得到可分析数据(clean reads)。

6.表达分析

为了量化102个品种的转录本的表达量，每个品种的所有clean Illumina reads通过Bowtie 2比对到PacBio测序得到的转录本。使用RSEM，通过评估测得的每百万碱基转录本序列的每千碱基片段的期望值来分析每个样品的每个转录本的表达水平。使用R语言包中的加权基因共表达网络分析(WGCNA)对102种基因型中的转录物进行共表达分析，并将在群体中显示共表达的转录本分配到一个模块。最小模块大小被设置为30个转录本，并且如果它们具有不小于25％的相似性，则模块被合并。然后，估计各模块的特征值，并基于Pearson相关因子分析模块与性状的相关性，识别与性状相关的共表达模块。

7.群体SNP检测和系统发育分析

为了鉴定来自102个地方品种的SNP，通过使用Picard中的Samtools，将每个样品的所有Illumina读数与参照转录组进行比对。删除没有独特位置的读数后，使用GATK软件来进行群体的SNP调用；这个过程要求SNP质量≥40。为了排除不正确比对导致的SNP调用错误，只保留高质量的SNP(覆盖深度≥2，次要等位基因频率≥0.05，缺失基因型频率≤0.5)。利用TreeBest(http://treesoft.sourceforge.net/treebest.shtml)构建了一个基于个体的邻接树，以明确102个地方种群之间的系统发育关系，并在Figtree(http：//tree.bio.ed.ac.uk/software/figtree/)中可视化。

8.识别性状候选转录本

为CW(瓣宽)的候选转录本，我们进行了全转录组范围的分析以检测与性状相关的可能基因位点。在包含102个样品的联合小组中，采取混合线性模型，使用总共19,912个高质量SNP对CW进行关联分析。建议性(1/N)P值阈值被设置控制来错误率，结果是P值阈值5×10^-5。为了验证建议位点与性状之间的关联性，计算了与建议位点相关的转录物的表达与性状表型之间的Pearson相关性；在P<0.05时假设显着相关性。在序列和表达水平上都与性状相关的转录本被定义为性状的候选转录本。

9.eQTL分析检测潜在相互作用

将基因表达水平变化与基因型相联系的eQTL已经被证实可以检测基因的相互作用。为确定候选转录本的相互关系，采用混合线性模型对TRAS(转录组参考的关联分析)的102个当地品种进行eQTL分析。在我们的eQTL分析中，将19,912个SNP定义为基因型，并将候选转录本的表达定义为表型。显着(0.05/N)P值阈值被设置为2.5×10^-6的来控制错误率。如果一个转录本定位于另一个转录本的的eQTL中，我们认为这两个转录本可能相互作用。

二、结果

1.三代测序(Pacific Biosciences)获得发育中的瓣的转录组数据

当地品种阳溪总共有36,321个转录本，共计5448万个碱基。转录本长度120bp至4803bp，平均1500bp。检测PloyA和PloyT，发现70％为全长转录本。31125个转录本有功能注释，287个没有注释，4909个为lncRNA(长链非编码RNA)。

2.性状，序列和基因表达的种群变异

102个品种的瓣型特征的变异数，瓣宽为3.7倍。

为了对102个地方品种的基因型进行序列和表达分析，我们对群体中发育鳞茎的转录组进行了测序，并获得了大约60.5亿个clean read，每个地方品种的平均读数为5930万。这些序列比对到参考转录组(三代测序)，覆盖率为51.3％～80.2％.这些比对读数进一步用于对基因序列(SNP)和基因表达(GE)中的变异进行评分。从8,245转录本中识别出来55,012个SNPs，说明在这个102品种中77％的转录本是保守的。过滤后，从5,408个转录本获得19,912个高质量的SNP，其中一半位于编码序列区域内，剩余的SNP位于3'和5'非编码区。基于SNP基因型的系统发育分析将102个大蒜地方品种分为三个不同的组。有趣的是，来自中国的地方品种呈现出明显的地理分布。我们还对GE进行了量化，并在瓣扩张阶段对每个地方品种的全基因组表达谱进行了表征。基于加权基因的共表达网络分析，36,321个转录本涉及46个共表达模型(CEMs),每个模型包含的基因范围从37-7,132个。

3.瓣宽相关的候选转录本

通过本发明，我们发现：

(1)17个大蒜基因的DNA序列与蒜瓣宽度性状相关联，是该性状的候选基因，这17个基因名称列于表1。它们与蒜瓣宽度性状的相关性P值均小于阈值(5×10^-5)，具体见表1

表1大蒜中17个蒜瓣宽度控制性状候选基因

(2)通过基因表达与性状的相关性分析，发现这17个基因的表达值与蒜瓣宽度的相关性P值均小于阈值0.05(表1)，进一步证实了这17个基因为候选基因。

(3)根据功能注释，8个基因为蛋白编码基因,分别是ASTG1209编码alpha-1,4glucan phosphorylase L-1isozyme，ASTG1416编码transcriptional regulationactivity蛋白，ASTG2795和ASTG3334编码uncharacterized protein，ASTG34822编码F-box/kelch-repeat protein，ASTG3501编码ATP-dependent DNA helicase，ASTG4365编码ATP-dependent zinc metalloprotease FtsH，ASTG9068编码pre-mRNA-processingfactor 39；其它9个基因均为长链非编码RNA。

(4)互作分析发现，17个基因中的14个存在互作，组成了一个复杂的调控网络。具体见表2。

表2

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 中国农业科学院麻类研究所

<120> 控制大蒜蒜瓣宽度性状的17个基因及其应用

<160> 17

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 2485

<212> DNA

<213> Allium sativum L.

<400> 1

aacgtgtgag aagtgagaaa ccacttacaa ctcttttctc gtcgccgatc aaaatttgcc 60

ctaattaatg atctatcatc cctaatttct cctccttctg cgctgttgtc atcccctttc 120

cctttcccat cttctctcca catacatgtt caatccaccc tgtaacaagc ttcgacgagg 180

agggcggttc ttccgtaatt ggtgggcggc ccggcagcct ctattcaatt ttttcagcat 240

gcagtttcgt tcgatctgga aatccaaatt acttatgcta tggttggtat aaccactcct 300

tgcttacttc atgacgtctc atcaggtatt aatcccgcta gagcaaatga tgtttacttt 360

catgttctgg ttcgtctatt ctcaaccgcc gataggtatg aaacttttgt cgatcacttt 420

aacttatgcc gatgggcctg ctccgcaatt atatcattca tgtatgatgg gttttccttc 480

aactgcaacg atgataatga ttcatctatg taaaacgggt ctttttatct caccatcgac 540

ttggggagta tgataagggt gctttcggag aaataatctt ctgaagaaaa aggtatttgc 600

cttctccatt ttcaataaca attttcaact aagaaatata ttgtcaatga cttccttgca 660

aaagcaaaaa gaaaactgtt tttatgcttt taattcatgg acagtttggt taaaaaccat 720

actctaaaca aggtggtcaa actgcatctc aatatggttt aaatgcatca aaaacgtatt 780

ttgtaaagtc catgagttaa catcctagcg ttttagagca gtgaccaaaa taaagataaa 840

attattttct gccgagacaa ttgacagttg gctaagatga ttatttagtt cccatttttc 900

aaagtgcaaa tgctttgcca atcttctgct aaacaatttg aattaaattt tgtttatttt 960

agtatagttc aaatcaaggt actaaattcc gtccggcatg ccggaatacc ggcgtttccg 1020

ttccgtttcc ggcatggacc ggaccggaat atcgtcaaaa ttccgtttcg gatctagcaa 1080

agaagaaaat cgaaaaataa gctggcggta tgaaaactga atagaaggaa attgaaattt 1140

tcggaattac ctggagtaaa caatcaattt cgaacagctt atcaaaatcg aatttggatt 1200

gagtttctag attaatcgat ctcgaccatt cgatacttat ttttcttcat tgaaatttgg 1260

tgaattcgga aatgatatgg tactgcttgc tgaagaaaga aggcagccaa gaaatggaag 1320

aggaagaagt aacgtgttgt ttagttgtgg ggtttttaat tggattgggc cgttgtgtgg 1380

gctaataatg ctgaaacaca atagtttatt aaataactta cgtaagatat attcaaaaaa 1440

ataaactttg gattatttat atgcagttaa aatcgattct gcatcaataa tatactcttt 1500

agactgtagt attggcataa actttgtgta aaatcatttt gtaggcttga atatttatta 1560

gttgtaaaaa atataacata atttatgaac cggaactaaa gcggaatttc cggaatatcc 1620

ggaacggaac cggaattcca aaattatgtg aacaccggaa cggaaacgga aagcggaact 1680

ttgaaccttg gttcaaataa ttgtatattt aagtacaact cacattttct ttatccattc 1740

acactaatta agttatgtaa tcaaaatgaa tttcatattt gtttgcagtc gaaatcagca 1800

ttagactgga tgttcacttg taatatgtct atcatcttgc ctttgattgt ttacttttat 1860

tatgatcggt ctaataatta acatgctcta gctttaatgt ataggcaaat ttcaaaacaa 1920

acatgtcagt aactatatat tgcaccttgc tgtcactgtc cactaattag tgaacttttg 1980

gtgtaattgt ctgttaataa ttttagttta taaaagctgc aacatatgat caaatggaaa 2040

gaaacactaa atatgttgtg agaatataaa agctgtagca tatgatgtcc ctattcgtgg 2100

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<210> 2

<211> 609

<212> DNA

<213> Allium sativum L.

<400> 2

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gatgacttga gacactttgc ggtaccatcg tttacaccaa cggccttctt gttctaagag 420

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ctggaatcaa catgaagcgt tcggattgag taaaggaagc tttattgttt gagttgagtg 540

cttaattcct tgaatatgta aactggaaaa agaaaaaaaa gtaaaatatg tattaggaat 600

tggtgtatt 609

<210> 3

<211> 2122

<212> DNA

<213> Allium sativum L.

<400> 3

cactttcaca gtcaccaccg atgcctcagc tacagcaatt ggagcggttc ttgctcaaca 60

cgagcaccct atcgccttct tcagtctcaa gcttcctcca catcttcaaa aagcttcagc 120

atattcaagg gagatgttcg ctatcacttc ggcaatcaag aaatggcgtc actatctcct 180

tgggcgcccc tttcagatct tcaccgacca ccagagcctt cgagagctcg cttcccaatc 240

gattcaaact ccagagcagc aaaaatggct cacgaagctt ctaggcttcg atttcactat 300

tcagtacaag ccggggaagc aaaatgttgt tgcagatggt ctctctcgat tcaccaagga 360

agccacgatg caggcgatct caggcccaac gttctccgtc attgccgaca tcaaatccgc 420

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gtaccaccaa catcaacgcc cattgcgact gctacacatc attccctaca ctatcatcat 240

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tcattcccca tcccacaacc cacttaccca acaactgttg aacctgcgat ctcttctcaa 360

tttgcttcca ccattaccaa atcatcaact gcatcggctg acgaaagaat gacctacaaa 420

catgtgacgc caaacgatat ctcaactgcc cctaatcact aggatttgaa tcatcacaga 480

gctgcaggaa cgctagagca aagagaaaga tactgctaca gagtaaacgg tctacaaatt 540

tggctcacca ttcaataacc aaatgccggc tgtgcacaca tggtaatgga ccagccagaa 600

acatcaatag ctgtacgaga ctttgtgcga gacatgtgca actaatagtc aaattgaatc 660

tacaaattgc tgaacaccga aaacgagtct gccatctcaa tcgagcgtca agacatcacc 720

acttgaagca taaaactgcc aaattgttac ttacaggtgg catagaaata caacatgttc 780

gttgtccacc caattctttt ccactggttg aaaattttga caaacgacgg ctgtcaaatt 840

caaccaccac cgaacattcg gaaccagttg aagcaccaag tcaccctcaa tgtgcaggaa 900

gaagtatgga gc 912

<210> 5

<211> 995

<212> DNA

<213> Allium sativum L.

<400> 5

gatcaacact tgcacatact ccattatctc tccttcaact gaaccatcca tcaatggaga 60

aaccaataac agctccaaga tcatcaagct gccccggtgt ttcattcgaa ataaagccac 120

aaacccttca agcaatggag aatgtcccca ccaacagtca gaaaggaaga tgggtctggc 180

ttccatgggc ccaaaactca tccttccgtg ttgttccttt acccgatcgt cttgctagaa 240

gaaccagtag tatggccagt agccattttt gcgacctaga caatgaagaa gaagaactag 300

aagaacaaca agaagaagtt gatgttgaaa agcaagatga acaagctgtg catattgaaa 360

agccttccaa atctaagagc aaccaatctc gtttatcggt tattttactc gatcaaggtc 420

tattcacagt atacaagcgc cttttcattg tgtgtttcat ggtcaacata ctaatgcttg 480

ttcttgccat cacaaaccac ttctcttatg caaagaaaag acctgccttg ttctgcatgg 540

caaatattct ggcactgacc ttgtgcagaa gcgaagcatt tcttcgtgtg gtgttttggc 600

tcactgtgaa actcttcagt ggaagctacg ttcctctttt cattaaaaca gccataactt 660

ctcttttaca atcactcgga ggaatacaca gtagctgtgg cttatcttca gttgcatggt 720

tactttacgt tttagttcaa acgctaaatg atcgggaaaa cacttccaca gagatcattg 780

ctgtttcttc ctctattctt tcacttatct gtctttcctg cattgctgcc tttcctctca 840

tccgtcatct tcatcacaat gtctttgaga ggactcacag gtttgcggga tggtcagcat 900

tgctgctact gtgggccttc ataatcctga aaaccggcta cgacccgaaa tccaaatcct 960

acaacaacct caacatatca accctcataa agcac 995

<210> 6

<211> 952

<212> DNA

<213> Allium sativum L.

<400> 6

ttttaattga aaacgatttt gattcaaatc gaatttgggt tcctggtggt tgaagaggac 60

gcgtgctact tcggtggagt cgcgatttct ggtgattacg aaagggtttg acttcagtgg 120

ttttcggttg agctagggat tcggtgttct gcactagtct ggcttttggt ttttggtcga 180

gtggcaaagg acaatttgca gtgggaggaa cggagtgttg aggtggaact gcgaattggg 240

tttgcgatgg ggatggctcg atcaactgtg aagggtctgg ttggtttcag tcgtttcgaa 300

ggtactgcgg tgtattcggt gacttgtgag gtgaggaaag gcttgaggac aggtttgtga 360

tttgcatgaa tgatgaagat ggattgttga ggtgcggttt tgtctgtgag aaggggtttc 420

aaactgggtt tgtgtgactg aagagagtgg attgacggtt ggttgaggac gaactggtgt 480

tgaactgtct ttggaaagca atggtttgtt attgacggtg gggactgttt tgtggagttt 540

tgtggaatga actgtatatg gataatgaag gcaatgggca atggaggttg gtgagggaat 600

tgttgttgta tttgtgtgga cgtgggatga cagggagttt ggcaagtggt tgttgaaact 660

tgcgctggct agtggtggtt ttgtggaggg gagatgaggg ctgttcacat gagcatgcag 720

tggactggtg aagttggctg ttcggaattg gatggtgaag tttgcaagta gagatttgtt 780

aaaggatatg tgagggatgg acttgcagtg aacgtgatgg aagtgtgttt tgattgtgag 840

ggcagaagct gtatggattt tgtaagaatt ggtatgaaga atagatggcg gaagagaaaa 900

tttttaattt ttaatttttt tattcaatta ttgtaaagaa ggaaagagtt tg 952

<210> 7

<211> 954

<212> DNA

<213> Allium sativum L.

<400> 7

atttttgtaa ggctatataa aagccatact ggttcatgaa taaattatct gctttgctgt 60

ttcgtatatc atttaagagt ttcagaaaac taacatttgg tatcagagcg aaatgtcaac 120

ctcagagaag tttgtgcaac cctccattcc gaagtttgac ggccattatg attattggtc 180

aatgacgatg gaaaattttc tgaggagcaa ggagatgtgg agtttggtgg acgaaggaat 240

ccctgcagcg gcaattggaa caacggcagc gagtgaagca cagagaaaga ccgtggaaga 300

agccaagctg agggatctaa aggtcaagaa tttcctgttc caagcaattg atagagaaat 360

tctggaaaca attctggaca agaggacatc aaaggcaatt tgggactcaa tgaaacagaa 420

atatcaaggg tccacgaagg tgaaaagggc acaacttcaa gcattaagaa gggaatttga 480

gttgcttgcc atgaaagaag gagaaaaggt agatagcttc ttggggcgaa ccttggcaat 540

tgtgaacaag atgaagacaa atggtgagac actggagcaa agtacagtag ttagtaaggt 600

actcagatca ttgactgcaa aatttaatta tgtcgtttgt tcaatagaag agtcaaacga 660

tttaagtact ttgagcattg atgaattgca tggaagtcta tttgtccatg aacaaaggat 720

gcagggatac caagaggagg aacatgtgtt gaaagtggca caggatgata gatcaggcag 780

aggaagggga cgaaacatgt ttaggggagg acgtggtaga ggtagaggaa gacaacccct 840

aaataaagca ctcattgaat gttacaattg tcacaagtta ggacattttc aatccgagtg 900

tcctgactgg gaaaagaaag ctaattatgc tgaattggaa gaagaagagc tctt 954

<210> 8

<211> 677

<212> DNA

<213> Allium sativum L.

<400> 8

cagaaagaga aatgggttgc aagccatcaa aagagtctca agtggcaact ggaaacattg 60

tgcacaccgc cccaagtctt cggaaaaaga aatcaaacgc ctccagaaat aaagaaactg 120

aagaaatcgg cagcacgata accccattac ccactgacaa ggccaacgat gtgacgacga 180

caaatgacgc aaatgtcaag actgcagaag acgaagatga taataaggag aaagtagaag 240

aggtggcacg agaggaaaag gaatttgaaa aggaaagggt cgaagagatt agaaacgtca 300

gtgtcatgga tgtgcaagaa aacaataaca aggaagggga atcggaaaaa agtaggaacg 360

ttattgctcc ggattcaccg gatctatttt tctcaacaag gaaggaagag gtgccggtag 420

aaattttgac ggtgccttta gtggaaaaat cggcagcaga taatatgcca gcgagtgatc 480

tttcggttga aaagttcaaa gtggaccatc aggagatgaa agaagaaaat gaagcaaatg 540

atgtgaaaga cacgaagaac acacaagaca atgatgatat caaggagaga aaagaagaga 600

agggattagg aagaaaaacg atagaagaga ttaagaatgt taaagttcag ggtgcgcaag 660

agaacaataa caaagag 677

<210> 9

<211> 926

<212> DNA

<213> Allium sativum L.

<400> 9

acttttcctt tcatctgcat ccaacttttc tttatttttc ttagaaacaa attacatcca 60

aattgaagca gcgaccaatg tgaaggtcac tcaaatctaa aacaaagcat agataaagtt 120

caaggcacac gctctacagt tattacattg atttggggct tatggataat cggggaagat 180

gtgtttgaga attcagggat tgtagaggtg tatcaatttc agaatatctt tgagttattt 240

gacagtttga gttttaattt atatgtgact taaagccagt tctgatcatt gacaaaggat 300

tatgatgatt caaggagaaa atccacaaca gctaaaccaa aaacacagac gattgcaaca 360

aaacaacaga aagaaaggaa agcttttgca ctgagttgtg tgtttttcct ttcaaattat 420

agcattttga atgatcaaat tgtacatgct tatgttaatc ctcagttaat cgtaagtaga 480

actggacagt taatcgaagc aggtctgtgt ctactttact gagtcctaga gttaactttt 540

ttgttttcaa tattgcttga aaattgcggt ttttgcttac ttaaaaagac aataaaatat 600

gaaaaagggg tatcatttac attatttatg ctaacagtgt ataataaata ttcaagattg 660

tatttcatcg atatgtttgc agtatcttaa ttatgagttt agaactcagt taatcctaag 720

tagaactgga cagttaatcg aagtaggtct gtgtctactt tactgagtgc tagagttaac 780

ttttttgttt tcaatattgc ttgaaaattg cggtttttgc ttacttaaaa agacaataaa 840

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attgtatttc atcgatatgt ttgcag 926

<210> 10

<211> 1149

<212> DNA

<213> Allium sativum L.

<400> 10

tatcaaatct tcctatggtt gcctgttagc tctctaatac gatttaagct tgtatgcaga 60

gcatggcatg ctttgattgg tagttatgat tttatcgaag aacatctaca tcatcatcgc 120

aacgatccta gtctgaagaa taaaaatcat tatctagtcg taggcgagga ctcatccacc 180

agttattcct taatttcaac tgacagtttt caagtgtcaa acatatgcgt gcaacaagac 240

tgttttgacc tacatgaata cctccctctt acaaaggatg atatagtgag ctataacgga 300

atcatttgtc tgaatcttat ccacattaaa gaagaacata gtatttgtat ttgtaaccct 360

gcaaccaaac aattgagaat gcttccacaa tcgcctgcac ttggactaga aacagaacat 420

aattccctcc tattaaccat gttagggttt ggttttgatg ttgaaaccaa tgactataaa 480

gcagtgacta tttgcaggaa caatcacggt aattttgaaa ttgttgaggt atatagcttg 540

agtactgatt cttggagaag tgtaacgact actattccat tgcgaggcta ccggaggaat 600

cctggagtac cttttaacaa tggaacttgt ttcttctggt acgaaacaga ttttgtatgt 660

gaggctattt gttgctttaa ctttagctct cgaaagttcc attctgtatc ttttcccaat 720

gcaattaacc tttcctttaa cattaatgcg atcgttttag atgataaaat tgcatgtgtt 780

ttcaatacaa ttcaccgtca aacacaaatt tgggtgtttg atggatatgg aagtgcaaat 840

gagtcttggg ttaaacttta tacgattgat ccccttccgg caatagagtg gagagtacgg 900

gtgatatggc tttccatgaa tgggaaccat cttttcttca ggaaaaagga aaagggtcat 960

atgggcggaa tccgtaacgt aattaccgga gtgaagcgca gatacaatgt ggtcaccaaa 1020

gaagtaaagt atttatctac aacagagata cataaagagc ctttggtgga atacaaggaa 1080

agcctgctgc ctgttgggaa aatgaaatgg tgagtggata aaaagaaatg ataaccaatc 1140

gaacctgca 1149

<210> 11

<211> 1949

<212> DNA

<213> Allium sativum L.

<400> 11

atattggcga ggaacaaatc ttcaatactg aattagatga ggtaaaaact tatttggact 60

gcaggtatct ttcagcttcg gaagcaagtt ggagaatatt taagtttgat atacaatatc 120

gtactccatc cgtggaaaga ttaatgtatc atttgccagg gaacatactg tatatttcaa 180

tgatgcagat gatttgacaa cgatcagtcg taggtgtaat ataaaaagaa ctatgtttac 240

caaatggttt catacaaacc aaaactgtcc tgaagctagg gagttgactt acatagagtt 300

tccgacaaaa tgggtgtggg acaaagatat taaagtgtgg aaaaagaggc aaaagggaga 360

catgattggc agaatttatt atgctcaccc tacctcaggt gaaagatttt acctacatat 420

gctgttaaat gttgtcaaag gggcaaaaag ctatgaagaa ataaaaccgg ttgatggagt 480

ggtaatggat tgctttaaat ctgcatgtct tgccaaaggg ctgttagaag atgatagtga 540

atgggatcaa gcaatcaatg acacaagttt atgggcttca ccttccgcac ttagagaaat 600

gtttgttaca atgcttctat tttgtgaaat ttcaaatcca gagcttctat ggaataacca 660

ttggcaaaag ctagctgaag atgtaagttg gcacacaatg aatgagcaca acatgtcatc 720

ttcaaccaac tttgacattg aggtgaaatc tcacaccctt atgaaaattg aacatattct 780

aaataaaaat ggcaggtcat taaaggagtt ttggtccatg ccgacaaaca attacatgca 840

cctgcatact acgtccaatg cattgctttt acatgaagaa ggatatgata ctaccatgat 900

ggaagataaa ctgcacaaca tgctgccact attaaatgaa gatcagaggc atgtgtttga 960

tgaggttcat ctcgctgtgc gtggtgcgaa aggtggattt tttttttgtc tacggaagtg 1020

gaggtatagg taaaacattc ctttggcgaa cagtgataaa tagtttaaga cgtgaaggct 1080

gtattgtctt agcggttgcc tcctcgggaa ttgcttcgtt gcttcttcca ggtggtagga 1140

cagcacattc taaatttaaa attccaataa acgttgatga cttctctact tgcaatattc 1200

ccaagcaatc atgcttagtt gatttactaa ggcaaacgga tctaatcatt tgggatgagg 1260

ctcctatggt ccatcgccat gctttagagg cttttgaaaa gagtttaagt gatatagttt 1320

caaatatttc acaatattct gatgacaaat tgtttggcgg gaagactgta cttctaggag 1380

gtgactttcg tcaaacacta cctgttgttc ccaagggaag tagacagatg atttttagtt 1440

catccataaa ccagtcactg ttatggatcg cctgtaaagt ttacaccttg aaaaaaaaac 1500

atgcgtttac gtacatgtaa tcaaactaca gaagaaataa gtacaataag ttcattttct 1560

aagtggatac tagatgttgg agagggaaag ctgcctgtta tctccaagac tgctgatcat 1620

gatccgacat tcattaaaat ccctgatgat tatctgttac caagttctaa aaatttaaat 1680

aaaagatatt gttgacaata tatatccaca tgtatttaat agcatgatta caactgatta 1740

ttttaaagaa cggtgcatct tagctccgac caatgaatca gtggaggaaa ttaacagtta 1800

tgtaattggt atttttggag gagaagtgag aaattactta agtgcagatt cagcgaccga 1860

aatctctgat gcaacagaag accataatgc aatgtaccct acagagtttc tgaacacact 1920

aaaaatatct ggacttccaa accatgaac 1949

<210> 12

<211> 773

<212> DNA

<213> Allium sativum L.

<400> 12

tatgtattga tgaatttcta agaaaacaat gtcgcagaaa gcattaaaca aagaaggaat 60

caaataacaa cgaaataatt aagaacactc atgaagtgtg ggaatgtgac atgacagatt 120

tttacctcca acatggttaa tctccaaatt tcaagtttag ggtgactaaa atatattttc 180

tattatgctg acttagatat tgtcaggatt atgatgcaat aactgatcaa atacatacca 240

gatcgaggcg gtaaacaaca ctagatctcg aaccaccatt gtgtatctta ggatttttcg 300

ctctgctatc tactgctgcc ttggaaatag tatgaaactc cagcgatgcc caatgcgctt 360

taacttatca aatattccct gattacatgg aaaaatccct ttaggttact ttaattccat 420

tcttgattac atggaagcac ttgggctaga gatgcatatg agacaaagta cttagctatg 480

gatggttaag tcacatctct gtttaatctt catattgatt gaaatccccg gactctctcc 540

aaacacatta tagaggctgt tttcactaca tgggatatat ttgccttagc taggtatagg 600

ttacactttt agattgtaat tttagtattg taccaaaaaa agaagttacc aaactaaaaa 660

tcagtttatc ttataaaagc aagtttaggt gagtataatc agttcttatt ttcaagtttg 720

aagcaggaac ttttaagtgt tattggaagc ttcacttgtt atttcgtcta ggc 773

<210> 13

<211> 1069

<212> DNA

<213> Allium sativum L.

<400> 13

gtagttcttc cttttcaatt ttttttccat cctccgtgat cttaattacc ttccttctct 60

attatgcctc tccacttctc ttttccaact attgatttgt tgatttggtg atcttaaaaa 120

agcgccacct attgatttgt tgattttccg ctctgcccat gtcatctatc ccccttacca 180

ctaatcacct tccccaactt tggatatgtt aattcctctt tttgtcattt ccttgcacta 240

atcggaaaaa gaagaagctt ttagtttgcc caggatgtat aataataata caggatatcg 300

acagtgaaga tcaaaatttt cgaaatttca aactacttaa tgggattctt ctacttctac 360

tagggaatcg aactttcttt ggaagctctg ttatgattca acctcaccca aatcaggtac 420

tatggatttc ttaaaacaag gtgcaccaga ttgtatgggc aatgaattta tctacttata 480

ctgaaagaag gcattagtga accgaaaata aattctcaag catcatgatt tatggtcaga 540

ataaataaaa tagaaggtat ctattagctg gtttggtagc aacctgaaat cacaagaatc 600

taacatgaac atgatgaatg tccacagaat tgttggctca tgacattctt atgtcctaca 660

accctgcctt aaatttgctt taaaactttg ttgtctatgc tgcgggggag gtagtgagaa 720

gtttgatttt tctctatcga tgcatcttgc taaatagaaa agctaacaag gaggcagttt 780

taacaactct tgcaaggaaa gcaacagaca tccaactaga agatatttgg caaaacaccg 840

tctttactgt tcaaatctat ccttattttt acttcaacat ttttttgacc taccaaaatt 900

gcttgcttaa gaataaatat ttttagaagg attgttctga caacatcaaa ttattttttg 960

ccatagtatt ggtcttcagt gtatgctgga tttgatattt tattgtttcc tacaagccat 1020

gtgattgatg tcttgaacca tattactact tgagaaaaac aaaatttcc 1069

<210> 14

<211> 1709

<212> DNA

<213> Allium sativum L.

<400> 14

tggatattat agttccatac ctttaatctt acttctttgg aaatacatgt gatatgatat 60

gagcctttaa ttgttttatc ctatgttatt aacaagtgct gaaccagtat gattcaactc 120

tggattcaaa tctacttgaa tccaaaatta acttatgttt aaatctgtgt tggattgaat 180

tgtaatatcc attactatta tcagctagcg gtggacatgg atcagctgat ccattcattc 240

ctgtccaaaa caatataatt tggctatcct tgtcaactac ataaagatat aaaaatcata 300

tgaattaact tttgtgaata tacaatctta acatgtcccc attggtatgc ctgaaataaa 360

ctttccaatc ctatgtatgc ttttttgtgt gaagacatta atgatgtgaa tttatatgca 420

taatgaaggg ttcgacgatt gggctgtgtg tccatagacg agttccaact gttggacatc 480

atcctcaatt gtctatttat ttccagttga actttgctga tagaaaaaaa atgcgtatga 540

aatataattg ctggttaact aatttttttg attcttatgg tagcttaata gcggtatagc 600

gccttggaaa ggagcgaagc cgttcaagtc attgatggat gtcacgaaat attttagcag 660

tttgtttatg aatttcgtca ctgccggaaa agcaatacag tttgagatac ctccagaaaa 720

ttatctaata atcactgtga gtttatttta gttgttttga ttctgtgttt tgaaatatga 780

atggttgaga gttgatgaag aatgaaaaat atactcaaaa aattgggaat actgaatgga 840

actgaggtaa gattgaagga tctcaacatt ataggaggta aatgaatttc catggctgca 900

aacagtgagg atgtgtgagt aaaaagatgt gtatttaagg agtatgttaa atgaggaagc 960

ctggaaaaaa ccgcaacttc ctgttggtaa gactatttaa aaatccatgc aatatttgtt 1020

gatgtatgga gttgaaaagt gaactgtgtg gattaaaagc aaattgtgaa gcactgttgt 1080

atgttggcaa aagaggttaa acttggctaa aagataagtt attaaccttt catatctctt 1140

taaaatggca aaacaatact tatttttatt aggagtaaac aaagaagcta tatgaacagt 1200

taaattctat tctttgtatc tattatgcat atatagactt gcagtgtgct gacacaaatt 1260

tagtttacat gcattagctg accaaagaga actagataca agttttccag ctcaaattgg 1320

ttccatggcc atttcagtca tttagcttct tgtagttgtt atgtcataag ttgcatggca 1380

agtgtttgtc atttttatcc caatgattgg catttgtaat tggtgtcagg tacatatttt 1440

atcattatcc catttgcact tagatatgct tttagattat atatggatgt acatgcagtg 1500

ataatgcaat ggtgcagtgg tgatggtctt cgacttgtgt gtttggacaa tgaatgtgtg 1560

gagtagagat cggatgggta gcatggttgt ggaagtttga tggaggagag cggttggttg 1620

ggttttattg tagactttaa atttgaacta tgttttattt tttgttaact caaattgaca 1680

tcaatatgaa attgaaaaca tatgcattg 1709

<210> 15

<211> 1494

<212> DNA

<213> Allium sativum L.

<400> 15

ttgtatctca tggtctttgg ctcaacattt atgatgctcc tactgagctt gccaagcctt 60

tgacaaagaa caagatgtac aactgtacat aatgcgctaa tggtataagt tcgaatcaca 120

tatttgatgt tacatgaact gattttgcat tctttgttgc actgttgggt gcaggtatgt 180

ggatgttgtg atgactattc ctaaaggaac attgttccca tgtgtggaat gaacttggca 240

tttgactgtg agcttattgg acatgcaatg tattttggtc tgataggtga tggatagcca 300

attgggcatt acgatgatat gtgggatggt tggtgtgata agctgcagta gtgaagttca 360

tattctgttc catctctttg catggtaatg aaaagaccca tcacataaat tcagttaaaa 420

tgaaggcaaa agaaagagtc tccttcaaca aggatgtcac catgaaattc ccaaggatat 480

ctctgagtgt actaaagata cttgttctag ccagcgtaat aatgtgcagt attcacatat 540

gttacatgtg tacaaaccta acaaaaattc aagccatgct ttccatactg aaaatcaaaa 600

tgctaaaaag acattgcccc agcctccagt acatagcaca aggtgagctt ccctacgttc 660

attttcctga accagccaag tacagcagga atgaatgtgc atgcacacct gttcgtctct 720

ttgttgtagt aactatacaa agatctggaa gcggatggtt tgagactttg ctaaacagtc 780

atattaacat tagctccaat ggagaggtat tctataacga agatagatgg aaaaatattt 840

ctgttatatt caagacactg gacgaagttt acaatcttga ttggaataat agtgcttcaa 900

aaactgaatg cactgcttct gttggcttta aatggatggt taaccagggt cttatgtatc 960

attacgaaga aatatcaaac tacttgatca gaagaggagt ttctgtcata tttctgttta 1020

gaagaaatag actcaggcag ttgatctctc tactggccaa tacacatgac aaacatgcta 1080

aacaacttaa tgggactcat aaagcccatg tctactccca atatgaggct gatatcctgg 1140

caaactataa gcctgtaatt gaggttaaat cgttgatcag aaggctgaga caactgcatg 1200

actgggctag agatgcattt gaacatctga aaagcacacg gcatattgtc ctgtactatg 1260

aagatctcat tcaaaaccgc actaagatga aggagataat agagtttctt aaggtgccgg 1320

aaagaaacct agttagtcgc cgtgttaaga tacacacaaa accattatct cacttagttc 1380

aaaactgggt tgaagttcaa catgcaatta ggggatctga gtacgagagt tacttaaatc 1440

atgattatta agtgcgatca gtttgtccct tttattgatc atatttcctg cttg 1494

<210> 16

<211> 3116

<212> DNA

<213> Allium sativum L.

<400> 16

cccaaatcaa cccaatccta gctccattca aatgtctaat cgacctccta aattatcctg 60

acttcgtatt tcatcccaaa aatgtcacta tcttcctatt ccacgtttct ctctagtccc 120

gtcttaactc cgaagcacaa aaagcaaaag tttcctcgcc gtccaaccta ttgccgccag 180

tccgataaag acgacgaaag caagagccac ctccataacg attcaaaatc caatctaaat 240

ctacttcatt tatccataac ccttacagtc ctctcctcct ccctccccgc gcaagcgaaa 300

accaaagtta aagataccaa gaaacgctct tcgaagaagt tggaagcact ttcatacgag 360

gaactaaaat cgtggtccag tcacctaccc gtgataggag accggatacc ttacactgaa 420

ttgatcaagt taaaacaaga aggccagctg aaacacattg ttaagctgcc tacagtgagt 480

ttgaagagtc ggcctgaccc agttctcatt gttttagagg attcacgtgt tttaaaaaca 540

gtgttgccaa ccttggatag agattctaaa ttttgggagg cttgggatgg tttgaacttg 600

aattccattt gcattaatgc ttacacgcct ccggtcaaga aaccagagat gccaaagcct 660

tatttaggtg tgttgggaag cgtgccaaaa tttttgttta gttttttaaa gaagaaacca 720

aagtcaaaac gtttattgga gattgagaat gaaaggagga tgcttgcgat ggagaggaag 780

gcagagatgg caagaatgag gaaggacagg gagttaatgg agaagaattt gagagcacag 840

aaaaagatgg aggatagaaa gagaaggtta gaagatagga aagttaagta cgaacaatca 900

cttagagaag caaggcggaa ttataaagat atggcttcaa tgtgggcgaa tttagcaagg 960

gatcagaatg tggcgactgc gatggggctt gtgatatttt tcgtgtttta tagaactgtt 1020

gtattgagtt atagaaaaca aatgaaggac tatgaagata ggctgaaaat tgagaaagcg 1080

gatgcagagg aaaggaagaa gatgagggaa ctggaaagag agatgattgg aatggaaggc 1140

agtgaagatg aaattgaagg gaaagaaggg gaccaaaatg cttatatgaa gatggcaaaa 1200

cagtttatgc agtcgggcgc caaggtcagg cgagccccaa ataagaggtt gccacagtat 1260

atggagagag gaaatgatgt gaaatttaaa gatgttgctg gtcttgggaa tattagattg 1320

gagcttgagg agattgttaa gttttttacg cttggggaga tgtataagag acgcggagta 1380

aaaattccag gtggaatact tctctgtggg cctcccggtg tgggaaagac tttattggca 1440

aaagctgtag ctggtgaggc tggagtgaac tttttctcca tttctgcatc acaatttgtg 1500

gaaatatatg ttggtgttgg tgcatctcgt gttcgagcat tgtaccaaga agcaagagag 1560

aatgctccct ctgttgtatt tattgatgaa atcgatgctg ttggaagaga gcgtgggttg 1620

atcaaaggtt ctggcgggca agaacgagat gctacactca atcagttact agtatgctta 1680

gatgggtttg aaggaagagg tgatgtcata acaatcgctg caactaatag accagatata 1740

cttgatccag cgctagtaag accaggacgt tttgatagaa aaatttatat ccctaaacct 1800

agtgtcaaag gacgtgtgga gattttaaag gtgcatgctc agaaaaagcc tatggctgat 1860

gatatagatt atatggctgt tgccagtatg actgagggaa tggttggtgc tgaattggcc 1920

aatataatcg aaattgctgc tataaatatg atgagggaag gaagatctga gattacaact 1980

gatgatctat tgcaagctgc acaaattgaa gaaaggggga tgcttgataa aaaggagagg 2040

agtcccgagt tgtggagtag gcttgctcta aatgaagctg ctatggctgt tgttgccgtt 2100

aattttcctg acttgaagaa cattgagttt atcactattg cacctcgagc tggaagagaa 2160

ttaggttatg tgcgtgcgaa gatggaccac attaaatttc aagaaggaat gcttagccgg 2220

caatcgctcc ttgattacat cactgttcaa atagcacctc gagctgcaga tgaaatttgg 2280

tatggtgaag atcagttgag cacaatttgg caagaaacag cagataacgc tagatcagct 2340

gcgcgtatct ttgttctcgg cggactttca gaaaagaatt atggattatc tgtcttttgg 2400

gttatagatc gaataaatga cgttgataca gaggcattga ctgttctgaa caattgctat 2460

gagagagcta aaaaaatttt gggacgtaat aagagtttaa tggatgcatt ggttgaccaa 2520

cttgttgaaa agaaaagtgt caccaagaag gagttcttta gtctagttga ggaaaaaggt 2580

caacttgagc ctatgccgcc aagcattatc gatatcagga atgctaagcg cttggagttt 2640

caagagatga tgatgtcccg gaaatagacg aacttagttt tttatttcta aagccactag 2700

aattctgtca attgatagac caagcagtgt agctgctaga atcagtgttc tttttgctgg 2760

gtagtctcag atccattgag aaagtatgat catcctttgt tcttaaaggt ggcaaggaat 2820

attagtacct gatacccaat tccatacctc tcctcaaggc taattttgat caatatactg 2880

agaatttttg acatatccta aagcattgcc attgctgtaa gttattacca aatatgcgat 2940

agatgcatca ttttttatct tgtaatttgt cgcaacttgt aaaatatgtt tagtaataaa 3000

caacagtcgg tgtttccttt tcttttacag caaatctatg gtcaagtgtg tgcacgtgcg 3060

tgcattccca tgtgtgttat taatggtgta ttttaacttt gttttgaagt tcagac 3116

<210> 17

<211> 2023

<212> DNA

<213> Allium sativum L.

<400> 17

gaactaccat ctaagttaat aatacaggaa atgatggatt ttgttactgt gcgaagctgg 60

cctgggcaga tgcagaaact agattctata attgccaact tactgattcc taggtcgtat 120

gtttcccaag tcctgagctt gaatgattgt gaagagatct caaatttata tttacagtat 180

gtagacctct atggcactat tggtgaaatt cgaaaggcct ggttacgtca ttggaaactt 240

tttccacata taacggaacc ttctgttgaa aatagtttta ctggcattag aaataggccc 300

gtgatcgatg atgtgtctga attacatcaa gattgcagag acaatggagc gatgccaact 360

acagaagtta aacctaactg ttcggttggt gccggatgta ttgaaggaac taaggatact 420

gcattgaatg ataacacagg aacagaggaa catgtagatg gtgtggatgc tgtggaaaag 480

ctttcttttc cagaaaatgt tgacagaaac atggaaatta ctgaaacaac aagaaagcaa 540

attataaatg ataatttcac ggtagaggat gtgattgtag attctgatga tgtgaaacac 600

aatgtaatat taaatgttat tgaatctgtc gaaatccaac ctgaaatcca acccgatgat 660

gtcgaaatcc aacccgaaga tttcgaaagg cctggttaca ttcagattcc acccgtacat 720

aaaaattcca tgactaatgt ttcaggtaat gacgagcatg gtaatttaac tcagaagttg 780

aattctaatg ctggagagaa tataattata gatgagggca tcaacaatga aatttctgac 840

acacgtgttc ctgatgaggt tgatacaaaa ctttctacac ctcaaggtca aggtcaaatt 900

agcccactga attcagtttg taactcaaca tcccaagaat ctcagtcagc cacacaatta 960

tatgaaaaca caaacaccca acagccttta cctttcggcg cttcagattc tcaggatgca 1020

acttgttatg ttccaacttc tgaatcccaa caatgggaaa taagccctca actgcagctt 1080

gcacaactat attcgtatca gcaggctagt aatgatccat tccaaaatgt gcagccacaa 1140

gcatatgcat acacacaatc acaaactggt gtatcaaatc caatacaggg gcaaacaaac 1200

attcaagggt tgtcgagtga aatgtcgcaa tgttatcagc aacagcaata ctattatcta 1260

cagcaacaac agaatcatca attgcataat tcacatcagc atcaacaagt tttatatatg 1320

caggcccagc agcaccagca gctatatcag cagcaacagc aacattatta ttctcagcag 1380

cagcatataa ttcagcaacc acactttcag cagttaaagc aatgcgaaca gcaacaaatg 1440

cttcaacaac atcaacaaca ttttttgttg caaatgcagc agcaagttct tcaacttcag 1500

cagcagcagc agttgcagct gcaacagcta caacatcaga tgccaactca gaaacatcag 1560

cagatgccag ctcagataaa tcagcagttg atagcacagc agcaacaaca tcatcatcag 1620

ctgccagtac agcagcagtt gcttgctcaa gcacatcagc atactaatgc acctgacaca 1680

agcggcaatt tggttcagaa tagcttggat acacaaaagc gttcaagcaa ccacaatggg 1740

atagactacg aagagtgagc agttacatca cagggtttag acaaggaaga tgaagaatca 1800

gtggagaaga cgaagagagg ctgggaaaac aaggttaagg atggagagtt tgcagtaaag 1860

aaaaggggga agaagacatg gatgaattca aagagaatag aaacagagag aaatttgctt 1920

aaaactcttt catacatttt tccttacaca ctatctatat atagccgagc tctaacaact 1980

tttgacagct ggcatactct atacctattt aacaaccttg cat 2023

Claims (10)

1.分离的核酸片段，其选自下列组的序列之一：

a)、核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1～17所示的核酸片段中的一个或多个；

b)、在严格条件下能够与a)所述核苷酸序列杂交的核苷酸序列；

c)、与a)或b)所述序列互补的核苷酸序列。

2.一种表达载体，其包含权利要求1所述的核酸片段。

3.一种宿主细胞，其被权利要求2所述的表达载体所转化。

4.根据权利要求3所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括：农杆菌。

5.权利要求1所述的核酸片段在调控葱属植物鳞茎的瓣宽中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，包括：将所述核酸片段通过转基因方法转入葱属植物，或沉默a)中所述的核苷酸序列对应的基因以调控葱属植物鳞茎的瓣宽。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述转基因方法具体包括：

(1)构建权利要求2所述的表达载体；

(2)将步骤(1)获得的表达载体直接导入葱属植物细胞；或通过权利要求3或4所述的宿主细胞介导导入葱属植物细胞；

(3)再生出转基因植物；和

(4)选择出转基因植物；并且

(5)任选地，增殖步骤(4)获得的植物以获得后代。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述直接导入葱属植物的方法包括：基因枪介导转化法、花粉管通道法或脂质体转化法。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述沉默a)中所述的核苷酸序列对应的基因的方法所采用的技术包括：

Cre/loxP或CRISPR/Cas9介导的基因敲除技术，siRNA、反义核酸技术或植物病毒载体介导的基因沉默技术。

10.根据权利要求5～9任一项所述的应用，其特征在于，所述葱属植物为洋葱组植物、葱组植物或长齿组植物；

更优选的，所述洋葱组植物为洋葱A.cepa L.；

更优选的，所述葱组植物为葱A.fistulosum L.；

更优选的，所述长齿组植物为大蒜Allium sativum L.。