CN107805281A - 大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法，该提取方法通过采用添加有诱导剂和铁磁性金属盐的饲料投喂大鲵，诱导大鲵肝脏产生大量的金属硫蛋白，并且将大鲵肝脏桨液置于电磁场中搅拌，有利于金属硫蛋白的分离；分离提纯前对所述大鲵肝脏缓冲液进行加热处理，能够去除杂蛋白；经过两次离心分离处理后，再二价铜离子螯合琼脂糖的亲和层析柱对所述金属硫蛋白粗提液进行层析，能有效去除与金属硫蛋白结构分子量相近的β2微球蛋白，不仅降低费用，而且提高金属硫蛋白的纯度。
Description
技术领域
本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法。
背景技术
1957年Marghes和Vallee在研究金属生物学作用时，从动物器官分离出一种新蛋白质，它含有丰富的巯基，能螯合大量的金属离子，此物质称为金属硫蛋白(简称MT)。金属硫蛋白是一种重要、奇异，生理功能强的活性物质，被誉为生命的守护神之一。
目前，国内市场上常见的金属硫蛋白主要是从兔肝中提取，有关兔肝金属硫蛋白的提取技术通常采用肌肉或腹腔注射方法诱导刺激机体，在肝脏中产生大量金属硫蛋白，该方法注射操作烦锁，提取成本高、收率低、品质纯度差等弊端；另外，采用兔肝提取金属硫蛋白，由于金属硫蛋白原料需求特别，且生产工艺复杂，生产量存在着严重的不足、资源有限，从而使其应用和研究受到限制。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的旨在提供大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法。
本发明提供的大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法，通过以下步骤实现：
步骤1，将诱导剂和铁磁性金属盐加入饲料，并采用所述饲料对大鲵诱导培养；
步骤2，采用缓冲液对大鲵肝脏进行匀浆处理，制得浆液，将所述桨液置于电磁场中进行搅拌，获得大鲵肝脏桨液；
步骤3，调节所述大鲵肝脏桨液的pH值，然后对所述大鲵肝脏桨液进行加热处理去除杂蛋白，获得金属硫蛋白提取液，对所述金属硫蛋白提取液进行至少两次离心分离，获得金属硫蛋白粗品；
步骤4，采用二价铜离子螯合琼脂糖的亲和层析柱对所述金属硫蛋白粗品进行层析，然后进行真空冷冻干燥，获得金属硫蛋白。
上述方案中，所述步骤1具体为：将诱导剂和铁磁性金属盐混合于饲料中，采用所述饲料连续投喂大鲵6-2天，每天投喂1-3次。
上述方案中，所述诱导剂为乙酸镉或硫酸镉中至少一种，所述诱导剂添加的剂量为大鲵体重的20-120mg/kg，所述铁磁性金属盐为四氧化三铁，所述铁磁性金属盐添加的剂量为20mg。
上述方案中，所述步骤2具体为：切取并粉碎大鲵肝脏，将缓冲液加入所述大鲵肝脏中，制得浆液，将所述桨液置于超声波中震荡1-2h后，再将所述桨液放置到电磁场中搅拌20-30min，获得大鲵肝脏桨液。
上述方案中，所述缓冲液的组分为pH值为8.6浓度为0.01mol/L的Tris-Hcl800ml，无水乙醇1000ml，氯仿80ml。
上述方案中，所述超声波的工作频率为300-500赫兹，电磁场的感应强度为3000-4000Gs。
上述方案中，所述步骤3具体为：采用氢氧化钠溶液调节所述大鲵肝脏桨液的pH值至7.0-9.0，然后在25-55℃下提取1-4h，获得溶液，最后将所述溶液在60-80℃下加热10-40min去除杂蛋白，获得金属硫蛋白提取液，将所述金属硫蛋白提取液静置24h后在4℃下以8000r/min的转速离心分离12-24min，取上层清液为一次分离液；向所述一次分离液加入无水乙醇并混合均匀，将混合均匀的所述一次分离液在-20℃下静置24h后在4℃下以8000r/min的转速再次离心分离12-24min，去除上层清液，获得二次分离沉淀物；采用pH值为8.6浓度为0.02mol/L的Tris-Hcl的洗脱液溶解所述二次分离沉淀物，获得金属硫蛋白粗品
上述方案中，所述无水乙醇与所述一次分离液的体积比为1:2。
上述方案中，所述步骤4具体为：采用二价铜离子螯合琼脂糖的亲和层析柱对所述金属硫蛋白粗品进行层析，层析速度为10ml/min，收集吸收峰波长为272-282nm的层析液，获得金属硫蛋白层析液，最后进行真空冷冻干燥，获得金属硫蛋白。
与现有技术相比，本发明提出了大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法，该提取方法通过采用添加有诱导剂和铁磁性金属盐的饲料投喂大鲵，诱导大鲵肝脏产生大量的金属硫蛋白，并且将大鲵肝脏桨液置于电磁场中搅拌，有利于金属硫蛋白的分离；分离提纯前对所述大鲵肝脏缓冲液进行加热处理，能够去除杂蛋白；经过两次离心分离处理后，再采用二价铜离子螯合琼脂糖的亲和层析柱对所述金属硫蛋白粗提液进行层析，能有效去除与金属硫蛋白结构分子量相近的β2微球蛋白，不仅降低费用，而且提高金属硫蛋白的纯度。
附图说明
图1为本发明实施例提供的大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法的流程图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明实施例提供大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法，如图1所示，该方法通过以下步骤实现：
步骤1，将诱导剂和铁磁性金属盐加入饲料，并采用所述饲料对大鲵诱导培养；
具体为：将诱导剂和铁磁性金属盐混合于饲料中，采用所述饲料连续投喂大鲵6-2天，每天投喂1-3次；
其中，所述诱导剂为乙酸镉或硫酸镉中至少一种，所述诱导剂添加的剂量为大鲵体重的20-120mg/kg，所述铁磁性金属盐为四氧化三铁，所述铁磁性金属盐添加的剂量为20mg。
步骤2，采用缓冲液对大鲵肝脏进行匀浆处理，制得浆液，将所述桨液置于电磁场中进行搅拌，获得大鲵肝脏桨液；
具体为：切取并粉碎大鲵肝脏，将缓冲液加入所述大鲵肝脏中，制得浆液，将所述桨液置于超声波中震荡1-2h后，再将所述桨液放置到电磁场中搅拌20-30min，获得大鲵肝脏桨液。
其中，所述缓冲液的组分为pH值为8.6浓度为0.01mol/L的Tris-Hcl800ml，Tris即三羟甲基氨基甲烷，无水乙醇1000ml，氯仿80ml。
所述超声波的工作频率为300-500赫兹，电磁场的感应强度为3000-4000Gs。
步骤3，调节所述大鲵肝脏桨液的pH值，然后对所述大鲵肝脏桨液进行加热处理去除杂蛋白，获得金属硫蛋白提取液，对所述金属硫蛋白提取液进行至少两次离心分离，获得金属硫蛋白粗品；
具体为，采用氢氧化钠溶液调节所述大鲵肝脏桨液的pH值至7.0-9.0，然后在25-55℃下提取1-4h，获得溶液，最后将所述溶液在60-80℃下加热10-40min去除杂蛋白，获得金属硫蛋白提取液，将所述金属硫蛋白提取液静置24h后在4℃下以8000r/min的转速离心分离12-24min，取上层清液为一次分离液；向所述一次分离液加入无水乙醇并混合均匀，将混合均匀的所述一次分离液在-20℃下静置24h后在4℃下以8000r/min的转速再次离心分离12-24min，去除上层清液，获得二次分离沉淀物；采用pH值为8.6浓度为0.02mol/L的Tris-Hcl的洗脱液溶解所述二次分离沉淀物，获得金属硫蛋白粗品。
其中，所述无水乙醇与所述一次分离液的体积比为1:2。
步骤4，采用二价铜离子螯合琼脂糖的亲和层析柱对所述金属硫蛋白粗品进行层析，然后进行真空冷冻干燥，获得金属硫蛋白。
具体为，采用由二价铜离子螯合琼脂糖的亲和层析柱对所述金属硫蛋白粗品进行层析，层析速度为10ml/min，收集吸收峰波长为272-282nm的层析液，获得金属硫蛋白层析液，最后进行真空冷冻干燥，获得金属硫蛋白。
本发明实施例提出了大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法，该提取方法通过采用添加有诱导剂和铁磁性金属盐的饲料投喂大鲵，诱导大鲵肝脏产生大量的金属硫蛋白，并且将大鲵肝脏桨液置于电磁场中搅拌，有利于金属硫蛋白的分离；分离提纯前对所述大鲵肝脏缓冲液进行加热处理，能够去除杂蛋白；经过两次离心分离处理后，再采用二价铜离子螯合琼脂糖的亲和层析柱对所述金属硫蛋白粗提液进行层析，能有效去除与金属硫蛋白结构分子量相近的β2微球蛋白，不仅降低费用，而且提高金属硫蛋白的纯度。
实施例1
本发明实施例1提供大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法，该方法通过以下步骤实现：
步骤1，将诱导剂和铁磁性金属盐加入饲料，并采用所述饲料对大鲵诱导培养；
具体为：饲喂体重为3.5kg的大鲵，将250mg乙酸镉和20mg四氧化三铁混合于饲料中，连续投喂大鲵10天，每天投喂3次；
步骤2，采用缓冲液对大鲵肝脏进行匀浆处理，制得浆液，将所述桨液置于电磁场中进行搅拌，获得大鲵肝脏桨液；
具体为：切取并粉碎大鲵肝脏，将缓冲液加入所述大鲵肝脏中，制得浆液，将所述桨液置于超声波中震荡1-2h后，再将所述桨液放置到电磁场中搅拌20-30min，获得大鲵肝脏桨液。
其中，所述缓冲液的组分为pH值为8.6浓度为0.01mol/L的Tris-Hcl800ml，无水乙醇1000ml，氯仿80ml；
所述超声波的工作频率为300-500赫兹，电磁场的感应强度为3000-4000Gs。
步骤3，调节所述大鲵肝脏桨液的pH值，然后对所述大鲵肝脏桨液进行加热处理去除杂蛋白，获得金属硫蛋白提取液，对所述金属硫蛋白提取液进行至少两次离心分离，获得金属硫蛋白粗品；
具体为，采用氢氧化钠溶液调节所述大鲵肝脏桨液的pH值至7.0-9.0，然后在40℃下提取3h，获得溶液，最后将所述溶液在70℃下加热30min去除杂蛋白，获得金属硫蛋白提取液，将所述金属硫蛋白提取液静置24h后在4℃下以8000r/min的转速离心分离18min，取上层清液为一次分离液；向所述一次分离液加入无水乙醇并混合均匀，所述无水乙醇与所述一次分离液的体积比为1:2，将混合均匀的所述一次分离液在-20℃下静置24h后在4℃下以8000r/min的转速再次离心分离18min，去除上层清液，获得二次分离沉淀物；采用pH值为8.6浓度为0.02mol/L的Tris-Hcl的洗脱液溶解所述二次分离沉淀物，获得金属硫蛋白粗品。
步骤4，采用二价铜离子螯合琼脂糖的亲和层析柱对所述金属硫蛋白粗品进行层析，然后进行真空冷冻干燥，获得金属硫蛋白。
具体为，采用二价铜离子螯合琼脂糖的亲和层析柱对所述金属硫蛋白粗品进行层析，层析速度为10ml/min，收集吸收峰波长为272-282nm的层析液，获得金属硫蛋白层析液，最后进行真空冷冻干燥，获得金属硫蛋白，所述葡聚糖和亚氨基二乙酸的体积比为2:1。
实施例2
本发明实施例2提供大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法，该方法通过以下步骤实现：
步骤1，将诱导剂和铁磁性金属盐加入饲料，并采用所述饲料对大鲵诱导培养；
具体为：饲喂体重为3.0kg的大鲵，将200mg乙酸镉和20mg四氧化三铁混合于饲料中，连续投喂大鲵11天，每天投喂3次；
步骤2，采用缓冲液对大鲵肝脏进行匀浆处理，制得浆液，将所述桨液置于电磁场中进行搅拌，获得大鲵肝脏桨液；
具体为：切取并粉碎大鲵肝脏，将缓冲液加入所述大鲵肝脏中，制得浆液，将所述桨液置于超声波中震荡1.5h后，再将所述桨液放置到电磁场中搅拌25min，获得大鲵肝脏桨液。
其中，所述缓冲液的组分为pH值为8.6浓度为0.01mol/L的Tris-Hcl800ml，无水乙醇1000ml，氯仿80ml；
所述超声波的工作频率为300-500赫兹，电磁场的感应强度为3000-4000Gs。
步骤3，调节所述大鲵肝脏桨液的pH值，然后对所述大鲵肝脏桨液进行加热处理去除杂蛋白，获得金属硫蛋白提取液，对所述金属硫蛋白提取液进行至少两次离心分离，获得金属硫蛋白粗品；
具体为，采用氢氧化钠溶液调节所述大鲵肝脏桨液的pH值至7.0-9.0，然后在25℃下提取4h，获得溶液，最后将所述溶液在60℃下加热30min去除杂蛋白，获得金属硫蛋白提取液，将所述金属硫蛋白提取液静置24h后在4℃下以8000r/min的转速离心分离12min，取上层清液为一次分离液；向所述一次分离液加入无水乙醇并混合均匀，所述无水乙醇与所述一次分离液的体积比为1:2，将混合均匀的所述一次分离液在-20℃下静置24h后在4℃下以8000r/min的转速再次离心分离24min，去除上层清液，获得二次分离沉淀物；采用pH值为8.6浓度为0.02mol/L的Tris-Hcl的洗脱液溶解所述二次分离沉淀物，获得金属硫蛋白粗品。
步骤4，采用二价铜离子螯合琼脂糖的亲和层析柱对所述金属硫蛋白粗品进行层析，然后进行真空冷冻干燥，获得金属硫蛋白。
具体为，采用二价铜离子螯合琼脂糖的亲和层析柱对所述金属硫蛋白粗品进行层析，层析速度为10ml/min，收集吸收峰波长为272-282nm的层析液，获得金属硫蛋白层析液，最后进行真空冷冻干燥，获得金属硫蛋白，所述葡聚糖和亚氨基二乙酸的体积比为2:1。
实施例3
本发明实施例3提供大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法，该方法通过以下步骤实现：
步骤1，将诱导剂和铁磁性金属盐加入饲料，并采用所述饲料对大鲵诱导培养；
具体为：饲喂体重为2.6kg的大鲵，将220mg乙酸镉和20mg四氧化三铁混合于饲料中，连续投喂大鲵12天，每天投喂3次；
步骤2，采用缓冲液对大鲵肝脏进行匀浆处理，制得浆液，将所述桨液置于电磁场中进行搅拌，获得大鲵肝脏桨液；
具体为：切取并粉碎大鲵肝脏，将缓冲液加入所述大鲵肝脏中，制得浆液，将所述桨液置于超声波中震荡1h后，再将所述桨液放置到电磁场中搅拌30min，获得大鲵肝脏桨液。
其中，所述缓冲液的组分为pH值为8.6浓度为0.01mol/L的Tris-Hcl800ml，无水乙醇1000ml，氯仿80ml；
所述超声波的工作频率为300-500赫兹，电磁场的感应强度为3000-4000Gs。
步骤3，调节所述大鲵肝脏桨液的pH值，然后对所述大鲵肝脏桨液进行加热处理去除杂蛋白，获得金属硫蛋白提取液，对所述金属硫蛋白提取液进行至少两次离心分离，获得金属硫蛋白粗品；
具体为，采用氢氧化钠溶液调节所述大鲵肝脏桨液的pH值至7.0-9.0，然后在55℃下提取2.5h，获得溶液，最后将所述溶液在80℃下加热30min去除杂蛋白，获得金属硫蛋白提取液，将所述金属硫蛋白提取液静置24h后在4℃下以8000r/min的转速离心分离24min，取上层清液为一次分离液；向所述一次分离液加入无水乙醇并混合均匀，所述无水乙醇与所述一次分离液的体积比为1:2，将混合均匀的所述一次分离液在-20℃下静置24h后在4℃下以8000r/min的转速再次离心分离12min，去除上层清液，获得二次分离沉淀物；采用pH值为8.6浓度为0.02mol/L的Tris-Hcl的洗脱液溶解所述二次分离沉淀物，获得金属硫蛋白粗品。
步骤4，采用二价铜离子螯合琼脂糖的亲和层析柱对所述金属硫蛋白粗品进行层析，然后进行真空冷冻干燥，获得金属硫蛋白。
具体为，采用二价铜离子螯合琼脂糖的亲和层析柱对所述金属硫蛋白粗品进行层析，层析速度为10ml/min，收集吸收峰波长为272-282nm的层析液，获得金属硫蛋白层析液，最后进行真空冷冻干燥，获得金属硫蛋白，所述葡聚糖和亚氨基二乙酸的体积比为2:1。
实施例4
本发明实施例4提供大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法，该方法通过以下步骤实现：
步骤1，将诱导剂和铁磁性金属盐加入饲料，并采用所述饲料对大鲵诱导培养；
具体为：饲喂体重为2.2kg的大鲵，将180mg乙酸镉和20mg四氧化三铁混合于饲料中，连续投喂大鲵6天，每天投喂3次；
步骤2，采用缓冲液对大鲵肝脏进行匀浆处理，制得浆液，将所述桨液置于电磁场中进行搅拌，获得大鲵肝脏桨液；
具体为：切取并粉碎大鲵肝脏，将缓冲液加入所述大鲵肝脏中，制得浆液，将所述桨液置于超声波中震荡1h后，再将所述桨液放置到电磁场中搅拌20min，获得大鲵肝脏桨液。
其中，所述缓冲液的组分为pH值为8.6浓度为0.01mol/L的Tris-Hcl800ml，无水乙醇1000ml，氯仿80ml；
所述超声波的工作频率为300-500赫兹，电磁场的感应强度为3000-4000Gs。
步骤3，调节所述大鲵肝脏桨液的pH值，然后对所述大鲵肝脏桨液进行加热处理去除杂蛋白，获得金属硫蛋白提取液，对所述金属硫蛋白提取液进行至少两次离心分离，获得金属硫蛋白粗品；
具体为，采用氢氧化钠溶液调节所述大鲵肝脏桨液的pH值至7.0-9.0，然后在40℃下提取3h，获得溶液，最后将所述溶液在70℃下加热30min去除杂蛋白，获得金属硫蛋白提取液，将所述金属硫蛋白提取液静置24h后在4℃下以8000r/min的转速离心分离18min，取上层清液为一次分离液；向所述一次分离液加入无水乙醇并混合均匀，所述无水乙醇与所述一次分离液的体积比为1:2，将混合均匀的所述一次分离液在-20℃下静置24h后在4℃下以8000r/min的转速再次离心分离18min，去除上层清液，获得二次分离沉淀物；采用pH值为8.6浓度为0.02mol/L的Tris-Hcl的洗脱液溶解所述二次分离沉淀物，获得金属硫蛋白粗品。
步骤4，采用二价铜离子螯合琼脂糖的亲和层析柱对所述金属硫蛋白粗品进行层析，然后进行真空冷冻干燥，获得金属硫蛋白。
具体为，采用二价铜离子螯合琼脂糖的亲和层析柱对所述金属硫蛋白粗品进行层析，层析速度为10ml/min，收集吸收峰波长为272-282nm的层析液，获得金属硫蛋白层析液，最后进行真空冷冻干燥，获得金属硫蛋白，所述葡聚糖和亚氨基二乙酸的体积比为2:1。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法，其特征在于，该方法通过以下步骤实现：
步骤1，将诱导剂和铁磁性金属盐加入饲料，并采用所述饲料对大鲵诱导培养；
步骤2，采用缓冲液对大鲵肝脏进行匀浆处理，制得浆液，将所述桨液置于电磁场中进行搅拌，获得大鲵肝脏桨液；
步骤3，调节所述大鲵肝脏桨液的pH值，然后对所述大鲵肝脏桨液进行加热处理去除杂蛋白，获得金属硫蛋白提取液，对所述金属硫蛋白提取液进行至少两次离心分离，获得金属硫蛋白粗品；
步骤4，采用二价铜离子螯合琼脂糖的亲和层析柱对所述金属硫蛋白粗品进行层析，然后进行真空冷冻干燥，获得金属硫蛋白。
2.根据权利要求1所述的大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法，其特征在于，所述步骤1具体为：将诱导剂和铁磁性金属盐混合于饲料中，采用所述饲料连续投喂大鲵6-2天，每天投喂1-3次。
3.根据权利要求2所述的大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法，其特征在于，所述诱导剂为乙酸隔或硫酸隔中至少一种，所述诱导剂添加的剂量为大鲵体重的20-120mg/kg，所述铁磁性金属盐为四氧化三铁，所述铁磁性金属盐添加的剂量为20mg。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法，其特征在于，所述步骤2具体为：切取并粉碎大鲵肝脏，将缓冲液加入所述大鲵肝脏中，制得浆液，将所述桨液置于超声波中震荡1-2h后，再将所述桨液放置到电磁场中搅拌20-30min，获得大鲵肝脏桨液。
5.根据权利要求4所述的大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法，其特征在于，所述缓冲液的组分为pH值为8.6浓度为0.01mol/L的Tris-Hcl 800ml，无水乙醇1000ml，氯仿80ml。
6.根据权利要求5所述的大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法，其特征在于，所述超声波的工作频率为300-500赫兹，电磁场的感应强度为3000-4000Gs。
7.根据权利要求6所述的大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法，其特征在于，所述步骤3具体为：采用氢氧化钠溶液调节所述大鲵肝脏桨液的pH值至7.0-9.0，然后在25-55℃下提取1-4h，获得溶液，最后将所述溶液在60-80℃下加热10-40min去除杂蛋白，获得金属硫蛋白提取液，将所述金属硫蛋白提取液静置24h后在4℃下以8000r/min的转速离心分离12-24min，取上层清液为一次分离液；向所述一次分离液加入无水乙醇并混合均匀，将混合均匀的所述一次分离液在-20℃下静置24h后在4℃下以8000r/min的转速再次离心分离12-24min，去除上层清液，获得二次分离沉淀物；采用pH值为8.6浓度为0.02mol/L的Tris-Hcl的洗脱液溶解所述二次分离沉淀物，获得金属硫蛋白粗品。
8.根据权利要求7所述的大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法，其特征在于，所述无水乙醇与所述一次分离液的体积比为1:2。
9.根据权利要求8所述的大鲵肝中金属硫蛋白的电磁提取方法，其特征在于，所述步骤4具体为：采用二价铜离子螯合琼脂糖的亲和层析柱对所述金属硫蛋白粗品进行层析，层析速度为10ml/min，收集吸收峰波长为272-282nm的层析液，获得金属硫蛋白层析液，最后进行真空冷冻干燥，获得金属硫蛋白。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101525383A (zh) * | 2009-04-07 | 2009-09-09 | 湖北天峡鲟业有限公司 | 鲟鱼肝金属硫蛋白的诱导提取纯方法 |
| CN105713084A (zh) * | 2014-11-11 | 2016-06-29 | 司马承帝 | 制造具有氧化还原活性的低金属化金属硫蛋白的方法及含有该金属硫蛋白的医药组合物 |
| CN106554412A (zh) * | 2015-09-30 | 2017-04-05 | 广西正五海洋产业股份有限公司 | 一种以鱼加工后的下脚料为原料提取金属硫蛋白的方法 |
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2017
- 2017-10-10 CN CN201710937025.8A patent/CN107805281A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101525383A (zh) * | 2009-04-07 | 2009-09-09 | 湖北天峡鲟业有限公司 | 鲟鱼肝金属硫蛋白的诱导提取纯方法 |
| CN105713084A (zh) * | 2014-11-11 | 2016-06-29 | 司马承帝 | 制造具有氧化还原活性的低金属化金属硫蛋白的方法及含有该金属硫蛋白的医药组合物 |
| CN106554412A (zh) * | 2015-09-30 | 2017-04-05 | 广西正五海洋产业股份有限公司 | 一种以鱼加工后的下脚料为原料提取金属硫蛋白的方法 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| 任宏伟等: "鲫鱼金属硫蛋白的提纯及性质研究", 《生物化学与生物物理进展》 * |
| 姚俊杰等: "《大鲵养殖实用技术指导》", 30 September 2014, 中国农业科学技术出版社 * |
| 方允中等: "《自由基生物学的理论与应用》", 31 July 2002, 科学出版社 * |
| 李华等: "鲤鱼主要组织中金属硫蛋白提取工艺的研究", 《食品工业科技》 * |
| 王翔等: "金属硫蛋白(MT)分离纯化技术进展", 《微纳电子技术》 * |
| 王莹等: "金属硫蛋白提取工艺的研究进展", 《中国动物保健》 * |
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