CN107760779A - 肺动脉高压相关的突变型bmp9基因及其应用 - Google Patents

肺动脉高压相关的突变型bmp9基因及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了肺动脉高压相关的突变型BMP9基因及其应用，涉及肺动脉高压疾病领域。本发明的研究利用全基因组测序和全外显子组测序，在全世界第一次发现BMP9基因的罕见遗传变异在PAH患者中显著富集，BMP9基因发生突变，会使PAH发生风险上升17.5倍(P＝5.2E‑11)。该结果显示，突变型BMP9基因或其相应的突变型BMP9蛋白可作为肺动脉高压的生物标志物，用于诊断患者是否患有肺动脉高压，或者用于评估患者患肺动脉高压的风险；或者用于孕前预警，指示突变型BMP9基因携带者后代患有肺动脉高压的风险；其也可作为与肺动脉高压相关药物的靶点，为治疗或预防肺动脉高压疾病提供一种全新的思路和手段。

Description

肺动脉高压相关的突变型BMP9基因及其应用
技术领域
本发明涉及肺动脉高压疾病领域，具体而言，涉及肺动脉高压相关的突变型BMP9基因及其应用。
背景技术
肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)是一类以肺动脉压力进行性升高、肺血管阻力逐渐增加为主要特征的心血管疾病，最终导致右心衰竭及死亡。PAH可以在任何年龄发病，症状隐匿，诊断棘手。PAH的病理机制很不清楚，患者预后恶劣，中位生存时间仅为2.8年，5年生存率仅为21％。PAH已经成为我国重要的公共健康问题，给社会和家庭带来沉重的负担。
遗传变异是影响PAH发生的重要因素。目前已经发现7个PAH致病基因，分别是骨形成蛋白受体2(Bone Morphogenetic Protein Receptor 2，BMPR2)、骨形成蛋白受体1B(BMPR1B)、Smad蛋白9(SMAD9)、小窝蛋白1(CAV1)、钾离子通道蛋白3(KCNK3)、活化素受体类激酶1(ACVRL1/ALK1)、血管细胞粘附分子(Endoglin，ENG)。BMPR2是目前已知最主要的肺动脉高压致病基因。西方人群中，约有20％-40％的特发性肺动脉高压(idiopathicpulmonary arterial hypertension，IPAH)携带BMPR2突变(Am J Respir Crit Care Med,2010,181(8):851-861)。中国人群，IPAH携带BMPR2的突变比例为15％(The Europeanrespiratory journal 2012:39(3):597-603)。另外的6个基因(ALK1、ENG和BMPR1B、SMAD9、CAV1、KCNK3)在患者中突变频率较低，总共可以解释约3％-5％的IPAH患者病因。
遗传变异与PAH临床表型、预后及药物治疗反应密切相关。以BMPR2基因为例，携带BMPR2突变基因的PAH患者较非携带患者而言，血流运动学状态更差(平均肺动脉压高、心指数低、肺血管阻力大、混合静脉氧饱和度低)，从确诊到死亡或者肺移植的时间更短(Circulation Cardiovascular genetics 2012:5(5):511-518，American journal ofrespiratory and critical care medicine 2008:177(12):1377-1383)。基因突变也影响了患者的治疗效果和反应。无论是成人还是儿童，BMPR2突变携带者对于急性肺血管扩张试验的阳性比例均显著低于无突变患者，对钙离子通道抑制剂的治疗反应性更差(Circulation 2006:113(21):2509-2515)。
鉴于遗传变异在肺动脉高压发生发展中的重要作用，目前多个国际指南已经明确建议对PAH患者进行基因检测。遗传检测可以协助临床明确病因，为患者疾病诊断、危险分层提供重要支持。致病性遗传变异也是临床治疗的理想靶点。但是，现已知的致病基因远不解释PAH患者的遗传病因，60％-80％的IPAH患者的病因完全未知。
因此，发现更多新的PAH致病基因和修饰基因，明确致病性遗传变异位点功能，是进行遗传检测、研发全新的靶向治疗药物的前提，对于扩大认知范围、加深对PAH遗传机制的认识至关重要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种肺动脉高压的生物标志物。
本发明的另一目的在于提供一种检测上述肺动脉高压的生物标志物的试剂。
本发明的另一目的在于提供一种检测上述肺动脉高压的生物标志物的试剂盒。
本发明的另一目的在于提供一种筛选用于治疗或预防肺动脉高压的药物的方法。
本发明的另一目的在于提供一种用于治疗或预防肺动脉高压的药物。
本发明的另一目的在于提供一种用于检测肺动脉高压的基因芯片。
本发明是这样实现的：
一种肺动脉高压的生物标志物，其包括：突变型BMP9基因或突变型BMP9蛋白；
其中，突变型BMP9基因相对于正常BMP9基因具有以下突变位点中的任意一种：c.G1263A、c.G1267A、c.G1057A、c.A958T、c.C405A、c.844_845del、c.881delA、c.G3A、c.1062delC、c.G1120C、c.T455C、c.T614A、c.T590C、c.G325T、c.A776G以及c.G948T；
其中，突变型BMP9蛋白相对于正常BMP9蛋白具有以下突变位点中的任意一种：p.M421I、p.V423M、p.A353T、p.S320C、p.F135L、p.S282fs、p.E294fs(、p.M1I、p.Y354X、p.A374P、p.L152P、p.L205X、p.I197T、p.V109L、p.N259S以及p.R316S；
其中，正常BMP9基因的编码序列如SEQ ID NO.1所示，正常BMP9蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
检测上述肺动脉高压的生物标志物的试剂。
一种检测上述肺动脉高压的生物标志物的试剂盒，其包括上述的试剂。
一种筛选用于治疗或预防肺动脉高压的药物的方法，其包括：
将能够表达突变型BMP9基因的动物模型在施用候选试剂的条件下饲养；
将上述能够表达突变型BMP9基因的动物模型在不施用上述候选试剂的条件下饲养；
确定上述能够表达突变型BMP9基因的动物模型在施用上述候选试剂和不施用上述候选试剂的情况下的肺动脉压力、肺血管阻力以及动物死亡率变化；
其中施用上述候选试剂条件下的肺动脉压力、肺血管阻力以及动物死亡率低于不施用上述候选试剂条件的肺动脉压力、肺血管阻力以及动物死亡率，是上述候选试剂作为用于治疗或预防肺动脉高压的药物的指示；
其中，突变型BMP9基因相对于正常BMP9基因具有以下突变位点中的至少一种：c.G1263A、c.G1267A、c.G1057A、c.A958T、c.C405A、c.844_845del、c.881delA、c.G3A、c.1062delC、c.G1120C、c.T455C、c.T614A、c.T590C、c.G325T、c.A776G以及c.G948T，其中，正常BMP9基因的编码序列如SEQ ID NO.1所示。
一种用于治疗或预防肺动脉高压的药物，上述药物以患有肺动脉高压患者体内的突变型BMP9基因或突变型BMP9蛋白为靶点；
其中，突变型BMP9基因相对于正常BMP9基因具有以下突变位点中的任意一种：c.G1263A、c.G1267A、c.G1057A、c.A958T、c.C405A、c.844_845del、c.881delA、c.G3A、c.1062delC、c.G1120C、c.T455C、c.T614A、c.T590C、c.G325T、c.A776G以及c.G948T；
其中，突变型BMP9蛋白相对于正常BMP9蛋白具有以下突变位点中的任意一种：p.M421I、p.V423M、p.A353T、p.S320C、p.F135L、p.S282fs、p.E294fs、p.M1I、p.Y354X、p.A374P、p.L152P、p.L205X、p.I197T、p.V109L、p.N259S以及p.R316S；
其中，正常BMP9基因的编码序列如SEQ ID NO.1所示，正常BMP9蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
一种用于检测肺动脉高压的基因芯片，该基因芯片上含有与突变型BMP9基因的编码序列(coding sequence，CDS)特异性结合的探针，突变型BMP9基因的编码序列相对于正常BMP9基因的编码序列具有以下突变位点中的任意一种：c.G1263A、c.G1267A、c.G1057A、c.A958T、c.C405A、c.844_845del、c.881delA、c.G3A、c.1062delC、c.G1120C、c.T455C、c.T614A、c.T590C、c.G325T、c.A776G以及c.G948T；
上述探针与突变型BMP9基因特异性结合的区域涵盖选自以下位置中的任意一种：相对于正常BMP9基因的编码序列的第1263位、第1267位、第1057位、第958位、第405位、第844和845位、第881位、第3位、第1062位、第1120位、第455位、第614位、第590位、第325位、第776位以及第948位；
正常BMP9基因的编码序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明具有以下有益效果：
本发明利用全基因组测序和全外显子组测序，在全世界第一次发现BMP9基因的罕见遗传变异在PAH患者中显著富集，BMP9基因发生突变，会使PAH发生风险上升17.5倍(P＝5.2E-11)。由此，相对于正常BMP9基因(SEQ ID NO.1)具有以下突变位点中的任意一种：c.G1263A、c.G1267A、c.G1057A、c.A958T、c.C405A、c.844_845del、c.881delA、c.G3A、c.1062delC、c.G1120C、c.T455C、c.T614A、c.T590C、c.G325T、c.A776G以及c.G948T的突变型BMP9基因或其相应的相对于正常BMP9蛋白(SEQ ID NO.2)具有以下突变位点中的任意一种：p.M421I、p.V423M、p.A353T、p.S320C、p.F135L、p.S282fs、p.E294fs、p.M1I、p.Y354X、p.A374P、p.L152P、p.L205X、p.I197T、p.V109L、p.N259S以及p.R316S的突变型BMP9蛋白可作为一种全新的肺动脉高压的生物标志物，用于诊断患者是否患有肺动脉高压，或者用于评估患者患肺动脉高压的风险；或者用于孕前预警，指示突变型BMP9基因携带者后代患有肺动脉高压的风险。
同时本发明提供的筛选用于治疗或预防肺动脉高压的药物的方法和用于治疗或预防肺动脉高压的药物为筛选出治疗或预防肺动脉高压药物以治疗肺动脉高压提供了一种全新的思路和手段。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明实施例2提供的携带有发生在外显子2上的c.G1263A(p.M421I)突变的IPAH患者的BMP9基因部分测序结果；
图2为本发明实施例2提供的携带发生在外显子2上的c.G1267A(p.V423M)突变的IPAH患者的BMP9基因部分测序结果；
图3为本发明实施例2提供的携带发生在外显子2上的c.G1057A(p.A353T)突变的IPAH患者的BMP9基因部分测序结果；
图4为本发明实施例2提供的携带发生在外显子2上的c.A958T(p.S320C)突变的IPAH患者的BMP9基因部分测序结果；
图5为本发明实施例2提供的携带发生在外显子2上的c.C405A(p.F135L)突变的IPAH患者的BMP9基因部分测序结果；
图6为本发明实施例2提供的携带发生在外显子2上的c.844_845del(p.S282fs)突变的IPAH患者的BMP9基因部分测序结果；
图7为本发明实施例2提供的携带发生在外显子2上的c.881delA(p.E294fs)突变的IPAH患者的BMP9基因部分测序结果；
图8为本发明实施例2提供的携带发生在外显子1上的c.G3A(p.M1I)突变的IPAH患者的BMP9基因部分测序结果；
图9为本发明实施例2提供的携带发生在外显子2上的c.1062delC(p.Y354X)突变的IPAH患者的BMP9基因部分测序结果；
图10为本发明实施例2提供的携带发生在外显子2上的c.G1120C(p.A374P)突变的IPAH患者的BMP9基因部分测序结果；
图11为本发明实施例2提供的携带发生在外显子2上的c.T455C(p.L152P)突变的IPAH患者的BMP9基因部分测序结果；
图12为本发明实施例2提供的携带发生在外显子2上的c.T614A(p.L205X)突变的IPAH患者的BMP9基因部分测序结果；
图13为本发明实施例2提供的携带发生在外显子2上的c.T590C(p.I197T)突变的IPAH患者的BMP9基因部分测序结果；
图14为本发明实施例2提供的携带发生在外显子1上的c.G325T(p.V109L)突变的IPAH患者的BMP9基因部分测序结果；
图15为本发明实施例2提供的携带发生在外显子2上的c.A776G(p.N259S)突变的IPAH患者的BMP9基因部分测序结果；
图16为本发明实施例2提供的携带发生在外显子2上的c.G948T(p.R316S)突变的IPAH患者的BMP9基因部分测序结果。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的肺动脉高压相关的突变型BMP9基因及其应用进行具体说明。
第一方面，本发明提供了一种肺动脉高压的生物标志物，其包括：突变型BMP9基因或突变型BMP9蛋白；
其中，突变型BMP9基因相对于正常BMP9基因具有以下突变位点中的任意一种：c.G1263A、c.G1267A、c.G1057A、c.A958T、c.C405A、c.844_845del、c.881delA、c.G3A、c.1062delC、c.G1120C、c.T455C、c.T614A、c.T590C、c.G325T、c.A776G以及c.G948T；
其中，突变型BMP9蛋白相对于正常BMP9蛋白具有以下突变位点中的任意一种：p.M421I、p.V423M、p.A353T、p.S320C、p.F135L、p.S282fs、p.E294fs、p.M1I、p.Y354X、p.A374P、p.L152P、p.L205X、p.I197T、p.V109L、p.N259S以及p.R316S。
其中，正常BMP9基因的编码序列(coding sequence，CDS)如SEQ ID NO.1所示，正常BMP9蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
其中，基因突变c.G1263A可理解为：与SEQ ID NO.1所示的正常BMP9基因的编码序列相比，突变型BMP9基因的编码序列在第1263位由碱基G突变为碱基A，该位点对应于基因组上的Chr10:g.48413605位置，如表2所示。其他类似基因突变位点的表示方式如未作特殊说明外，按此理解方式进行理解。
基因突变c.844_845del可理解为：突变型BMP9基因的编码序列缺失SEQ ID NO.1所示的正常BMP9基因的编码序列的第844-845位核苷酸。
基因突变c.881delA可理解为：突变型BMP9基因的编码序列缺失SEQ ID NO.1所示的正常BMP9基因的编码序列的第881位腺嘌呤(A)。
基因突变c.1062delC可以理解为：突变型BMP9基因的编码序列缺失SEQ ID NO.1所示的正常BMP9基因的编码序列的第1062位胞嘧啶(C)。
蛋白突变p.M421I可理解为：与SEQ ID NO.2所示的正常BMP9蛋白的相比，突变型BMP9蛋白由第421位的氨基酸残基M突变为I。其他类似蛋白突变位点的表示方式如未作特殊说明外，按此理解方式进行理解。
蛋白突变p.S282fs可理解为：与SEQ ID NO.2所示的正常BMP9蛋白的相比，突变型BMP9蛋白的第282位氨基酸发生移码突变。
蛋白突变p.E294fs可理解为：与SEQ ID NO.2所示的正常BMP9蛋白的相比，突变型BMP9蛋白的第294位氨基酸发生移码突变。
蛋白突变p.Y354X可理解为：与SEQ ID NO.2所示的正常BMP9蛋白的相比，突变型BMP9蛋白在第354位氨基酸提前终止。
蛋白突变p.L205X可理解为：与SEQ ID NO.2所示的正常BMP9蛋白的相比，突变型BMP9蛋白在第205位氨基酸提前终止。
本发明以269例IPAH患者作为研究对象，进行了全基因组测序(whole genomesequencing，WGS)或者全外显子组测序(whole exome sequencing，WES)，以1884名中国正常对照的全外显子组测序(WES)数据，以及公共数据库GenomeAD的8624例东亚人全外显子组测序数据作为对照，利用全基因组测序和全外显子组测序分析，在全世界第一次发现BMP9基因的罕见遗传变异在PAH患者中显著富集(enrichment)，BMP9基因发生突变，会使PAH发生风险上升17.5倍(P＝5.2E-11)。由此确定BMP9基因是一个全新的PAH致病基因。
基于此，相对于正常BMP9基因(SEQ ID NO.1)具有以下突变位点中的任意一种：c.G1263A、c.G1267A、c.G1057A、c.A958T、c.C405A、c.844_845del、c.881delA、c.G3A、c.1062delC、c.G1120C、c.T455C、c.T614A、c.T590C、c.G325T、c.A776G以及c.G948T的突变型BMP9基因或其相应的相对于正常BMP9蛋白(SEQ ID NO.2)具有以下突变位点中的任意一种：p.M421I、p.V423M、p.A353T、p.S320C、p.F135L、p.S282fs、p.E294fs、p.M1I、p.Y354X、p.A374P、p.L152P、p.L205X、p.I197T、p.V109L、p.N259S以及p.R316S的突变型BMP9蛋白可作为一种全新的肺动脉高压的生物标志物，用于诊断患者是否患有肺动脉高压，或者用于评估患者患肺动脉高压的风险；或者用于孕前预警，指示突变型BMP9基因携带者后代患有肺动脉高压的风险。
第二方面，本发明提供了检测上述肺动脉高压的生物标志物的试剂。
进一步地，在本发明本方面的一些实施方案中，上述试剂含有用于检测上述突变型BMP9基因的引物对。
进一步地，在本发明本方面的一些实施方案中，上述引物对选自如下的一组或两组：SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4；以及SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6。
进一步地，在本发明本方面的一些实施方案中，上述试剂含有用于检测突变型BMP9蛋白的特异性抗体。
第三方面，本发明提供了一种检测上述肺动脉高压的生物标志物的试剂盒，其包括第二方面上述的试剂。
第四方面，本发明提供了一种筛选用于治疗或预防肺动脉高压的药物的方法，其包括：
将能够表达突变型BMP9基因的动物模型在施用候选试剂的条件下饲养；
将上述能够表达突变型BMP9基因的动物模型在不施用上述候选试剂的条件下饲养；
确定上述能够表达突变型BMP9基因的动物模型在施用上述候选试剂和不施用上述候选试剂的情况下的肺动脉压力、肺血管阻力以及动物死亡率变化；
其中施用上述候选试剂条件下的肺动脉压力、肺血管阻力以及动物死亡率低于不施用上述候选试剂条件的肺动脉压力、肺血管阻力以及动物死亡率，是上述候选试剂作为用于治疗或预防肺动脉高压的药物的指示；
其中，突变型BMP9基因相对于正常BMP9基因具有以下突变位点中的至少一种：c.G1263A、c.G1267A、c.G1057A、c.A958T、c.C405A、c.844_845del、c.881delA、c.G3A、c.1062delC、c.G1120C、c.T455C、c.T614A、c.T590C、c.G325T、c.A776G以及c.G948T。
其中，正常BMP9基因的编码序列如SEQ ID NO.1所示。
进一步地，在本发明本方面一些实施方案中，上述动物模型为小鼠、大鼠、兔或猴。
本发明提供的筛选用于治疗或预防肺动脉高压的药物的方法和用于治疗或预防肺动脉高压的药物为筛选出治疗或预防肺动脉高压药物以治疗肺动脉高压提供了一种全新的思路和手段。
第五方面，本发明提供了一种用于治疗或预防肺动脉高压的药物，该药物以患有肺动脉高压患者体内的突变型BMP9基因或突变型BMP9蛋白为靶点；
其中，突变型BMP9基因相对于正常BMP9基因具有以下突变位点中的任意一种：c.G1263A、c.G1267A、c.G1057A、c.A958T、c.C405A、c.844_845del、c.881delA、c.G3A、c.1062delC、c.G1120C、c.T455C、c.T614A、c.T590C、c.G325T、c.A776G以及c.G948T；
其中，突变型BMP9蛋白相对于正常BMP9蛋白(SEQ ID NO.2)具有以下突变位点中的任意一种：p.M421I、p.V423M、p.A353T、p.S320C、p.F135L、p.S282fs、p.E294fs、p.M1I、p.Y354X、p.A374P、p.L152P、p.L205X、p.I197T、p.V109L、p.N259S以及p.R316S。
其中，正常BMP9基因的编码序列如SEQ ID NO.1所示，正常BMP9蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
第六方面，本发明提供了一种用于检测肺动脉高压的基因芯片，上述基因芯片上含有与突变型BMP9基因的编码序列特异性结合的探针，突变型BMP9基因的编码序列相对于正常BMP9基因的编码序列具有以下突变位点中的任意一种：c.G1263A、c.G1267A、c.G1057A、c.A958T、c.C405A、c.844_845del、c.881delA、c.G3A、c.1062delC、c.G1120C、c.T455C、c.T614A、c.T590C、c.G325T、c.A776G以及c.G948T；
上述探针与突变型BMP9基因的编码序列特异性结合的区域涵盖选自以下位置中的任意一种：相对于BMP9基因的编码序列的第1263位、第1267位、第1057位、第958位、第405位、第844和845位、第881位、第3位、第1062位、第1120位、第455位、第614位、第590位、第325位、第776位以及第948位。
正常BMP9基因的编码序列如SEQ ID NO.1所示。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
研究人群
患者组：从同济大学附属上海市肺科医院和中国医学科学院阜外医院入选肺动脉高压患者。所有患者均接受右心导管检查，PAH的诊断标准为：静息时，海平面状态下右心导管测量肺动脉平均压(mPAP)≥25mmHg，同时肺毛细血管楔压(PCWP)≤15mmHg。排除所有已知引起PAH的继发因素后，病人确诊为特发性PAH。最终入选269名IPAH患者。
对照组1：从北京诺禾致源科技股份有限公司入选1884例健康对照。病例组和对照组均为中国汉族人，且无血缘关系。从患者和对照的外周血白细胞提取基因组DNA。
对照组2：从公共数据库GnomeAD(http://gnomad.broadinstitute.org)获得8624例东亚人全外显子组测序数据。
研究方法：
269名IPAH患者，43人使用Illumina HiSeq X系统进行全基因组测序(Wholegenome sequencing)，226人Illumina Hiseq 4500系统结合Agilent V6捕获试剂盒进行全外显子组测序。入选位于外显子区或外显子-内含子剪接区、影响蛋白编码、经生物信息学软件预测有害、等位基因频率极低(MAF<0.5％)的罕见变异，具体标准如下：
SNP的入排标准
1)仅保留外显子区与2bp以内的splicing位点；
2)仅保留missense，stopgain；
3)去除千人频率大于0.001、人类外显子组整合数据库东亚人群(ExAC_EAS)频率大于0.001、且诺禾内部数据库频率大于0.01的位点；
4)仅保留SIFT，Polyphen，MutationTaster，CADD四个软件中有预测分值的，超过两个以上软件预测有害的位点；
5)仅保留gerp++2的分值大于2的位点；
6)仅保留非重复区的点(即非GenomicSuperdup和Repeat区的点)。
Indel的入排标准：
1)仅保留外显子区与2bp以内的splicing位点；
2)仅保留移码突变；
3)去除千人频率大于0.001、ExAC_EAS频率大于0.001、且诺禾内部数据库频率大于0.01的位点；
4)仅保留非重复区的点(即非GenomicSuperdup和Repeat区的点)；
在全部的269名患者和1884名中国健康对照中，用卡方检验比较患者和正常对照之间的基因型频率差异，用Bonferroni correction对于差异显著的基因进行统计学校正，用GenomeAD数据库验证并确定遗传变异的危害性，计算危险等位基因的相对危险度(Oddsratio，OR)和95％可信区间。
实验结果：
1.BMP9基因的罕见变异与IPAH紧密相关。
结果见表1，经过关联分析，发现在269个IPAH患者中，突变频率最高的三个基因是BMPR2、BMP9和ACVRL1。269名患者中，66人携带BMPR2突变(24.5％)，17人携带BMP9突变(5.4％)，20人携带ACVRL1基因突变(6.0％)。BMPR2和ACVRL1是已知的IPAH致病基因，BMP9是本发明首次发现的IPAH致病基因。
与1884名中国健康对照相比，携带BMP9基因突变，使PAH发病风险上升17.5倍(95％CI＝6.9-50.2，原始P＝5.2E-11，Bonferroni correction矫正后P＝7.1E-7)。
与8624名GnomeAD数据库中的亚洲人比较，携带BMP9基因突变，使PAH发病风险上升20.8倍(95％CI＝10.6-39.9，原始P＝3.7E-15，Bonferroni correction矫正后P＝5.1E-11)。
综上所述，本发明第一次发现，BMP9基因的罕见变异与IPAH发病风险紧密相关。
表1 BMP9基因突变与PAH的关联分析
2 BMP9罕见变异位点的序列信息
正常人的BMP9基因CDS序列如SEQ ID NO.1所示(正常BMP9基因的编码序列中，第1-346位于外显子1，第347-1290位于外显子2.)。其编码的正常的BMP9蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
269名IPAH患者中，共有17名患者携带16种BMP9罕见变异。其中，BMP9基因突变c.G1267A为两个IPAH患者共有，其他15种突变均只有一名患者携带。这16种突变在BMP9基因的编码序列撒会给你(SEQ ID NO.1)的位置分别是：c.G1263A、c.G1267A、c.G1057A、c.A958T、c.C405A、c.844_845del、c.881delA、c.G3A、c.1062delC、c.G1120C、c.T455C、c.T614A、c.T590C、c.G325T、c.A776G以及c.G948T。
相对于正常人BMP9蛋白序列(如SEQ ID NO.2所示)而言，上述各基因突变位点导致相应的BMP9蛋白发生的突变分别是：p.M421I、p.V423M、p.A353T、p.S320C、p.F135L、p.S282fs、p.E294fs、p.M1I、p.Y354X、p.A374P、p.L152P、p.L205X、p.I197T、p.V109L、p.N259S以及p.R316S。
16种突变均在正常人中极为罕见。只有两个变异在公共数据库中被报道过，其中N259S(rs140271276)在人类外显子组整合数据库(ExAC)数据库中频率为0.0004，A374P(rs782251800)在ExAC数据库中频率为0.000008。这两个变异在1884个中国对照中完全没有出现。其他14种变异，在3大健康对照数据库，包括千人基因组中国人数据库、人类外显子组整合数据库东亚人群(ExAC_EAS)以及诺禾中华基因组数据库中均无一人携带。
16种突变均导致BMP9蛋白发生显著改变，且位于BMP9的序列保守区，在进化上高度同源。经生物信息学分析，所有突变均高度致病。经生物信息学分析，所有突变均高度致病，具体信息见表2。
表2 16种BMP9突变的致病性分析
注：
*：参考基因组序列为hg19。
#：使用四个生物信息软件评估突变对蛋白的功能的影响和致病性，SIFT,Polyphen2_HDIV,MutationTaster三个软件给出的是定性分析，D(Deleteriou)代表严重影响蛋白功能，P(Probably Damaging)代表可能影响蛋白功能，T(Tolerant)代表对蛋白功能影响较弱。CADD predicitons给出的是定量分析，分数越高表示突变对蛋白功能影响越大，致病性越强。一般认为CADD predicitons大于10即认为该突变有显著的的致病性。
##：gerp++gt2对突变位点在进化上的保守性给出定量评估，分数越高，保守性越强，发生突变后对蛋白的影响越大，致病性越强。
NA：对于三个插入删失型突变(c.844_845del、c.881delA、c.1062delC)，5个生物信息软件未给出评分；对于无义突变c.T614A，两个生物信息软件(SIFT,Polyphen2_HDIV)未给出评分。这些突变都明确造成蛋白截断，导致功能丧失。
实施例2
检测实施例1中携带16种BMP9基因变异的16名IPAH患者携带血液中的BMP9基因组序列，BMP9有2个外显子，可用PCR方法扩增外显子序列，并用Sanger测序法检测扩增产物序列。
1试剂：
(1)人血基因组DNA纯化试剂盒DP318-02(天根生化科技，北京，中国)；
(2)10％SDS：10.0g SDS溶于90ml水中，调pH7.2，加水定容至100ml；
(3)TE：10mM Tris-HCl(pH 8.0),1mM EDTA-Na2(pH 8.0)；
(4)50X TAE电泳缓冲液：242.0g Tris-HCl，27.5ml冰乙酸，100ml 0.5mM EDTA-Na2，终体积1升；
(5)制性内切酶均购自美国New England Biolabs公司；
(6)所用引物均购自北京奥科生物公司。
2仪器及设备：
(1)PCR仪：DNA engine美国Bio-Rad公司；
(2)冷冻离心机：RC-5C美国SORVALL公司；
(3)天平：JA5003上海天平仪器厂；
(4)凝胶电泳槽：北京六一仪器厂。
3操作步骤：
3.1使用血基因组DNA纯化试剂盒(DP318-02)从4ml外周血中提取基因组DNA，所有步骤均按照说明书进行。
3.2聚合酶链式反应－Sanger测序法对三个罕见变异进行基因分型，具体如下：
3.2.1 PCR扩增目的片段：对BMP9基因的两个外显子区域进行PCR扩增的引物、退火温度(Tm)及产物长度见表3。
表3
编号 Primer名称 序列(5'to3') 碱基数
1 BMP9-E1-F GGACGGTTCCTTCAGAGCA(SEQ ID NO.3) 19
2 BMP9-E1-R CTGCACTGCCTGATAGGGAA(SEQ ID NO.4) 20
3 BMP9-E2-F CTCTTCTGTCTAAACCCTGA(SEQ ID NO.5) 20
4 BMP9-E2-R CATGCAGATTGAATCAGTCC(SEQ ID NO.6) 20
表中：BMP9-E1-F和BMP9-E1-R为用于扩增BMP9基因外显子1的上下游引物，BMP9-E2-F和BMP9-E2-R为用于扩增BMP9基因外显子1的上下游引物。
PCR反应体系如下：
选用相应引物对分别扩增BMP9基因外显子1序列和外显子2序列。
PCR反应条件如下：
3.2.3对扩增产物进行Sanger测序，16名IPAH患者的BMP9基因外显子测序结果如图1-图16所示。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国医学科学院阜外医院
<120> 肺动脉高压相关的突变型BMP9基因及其应用
<160> 6
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1290
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
atgtgtcctg gggcactgtg ggtggccctg cccctgctgt ccctgctggc tggctcccta 60
caggggaagc cactgcagag ctggggacga gggtctgctg ggggaaacgc ccacagccca 120
ctgggggtgc ctggaggtgg gctgcctgag cacaccttca acctgaagat gtttctggag 180
aacgtgaagg tggatttcct gcgcagcctt aacctgagtg gggtcccttc gcaggacaaa 240
accagggtgg agccgccgca gtacatgatt gacctgtaca acaggtacac gtccgataag 300
tcgactacgc cagcgtccaa cattgtgcgg agcttcagca tggaagatgc catctccata 360
actgccacag aggacttccc cttccagaag cacatcttgc tcttcaacat ctccattcct 420
aggcatgagc agatcaccag agctgagctc cgactctatg tctcctgtca aaatcacgtg 480
gacccctctc atgacctgaa aggaagcgtg gtcatttatg atgttctgga tggaacagat 540
gcctgggata gtgctacaga gaccaagacc ttcctggtgt cccaggacat tcaggatgag 600
ggctgggaga ccttggaagt gtccagcgcc gtgaagcgct gggtccggtc cgactccacc 660
aagagcaaaa ataagctgga agtgactgtg gagagccaca ggaagggctg cgacacgctg 720
gacatcagtg tccccccagg ttccagaaac ctgcccttct ttgttgtctt ctccaatgac 780
cacagcagtg ggaccaagga gaccaggctg gagctgaggg agatgatcag ccatgaacaa 840
gagagcgtgc tcaagaagct gtccaaggac ggctccacag aggcaggtga gagcagtcac 900
gaggaggaca cggatggcca cgtggctgcg gggtcgactt tagccaggcg gaaaaggagc 960
gccggggctg gcagccactg tcaaaagacc tccctgcggg taaacttcga ggacatcggc 1020
tgggacagct ggatcattgc acccaaggag tatgaagcct acgagtgtaa gggcggctgc 1080
ttcttcccct tggctgacga tgtgacgccg acgaaacacg ctatcgtgca gaccctggtg 1140
catctcaagt tccccacaaa ggtgggcaag gcctgctgtg tgcccaccaa actgagcccc 1200
atctccgtcc tctacaagga tgacatgggg gtgcccaccc tcaagtacca ttacgagggc 1260
atgagcgtgg cagagtgtgg gtgcaggtag 1290
<210> 2
<211> 429
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Met Cys Pro Gly Ala Leu Trp Val Ala Leu Pro Leu Leu Ser Leu Leu
1 5 10 15
Ala Gly Ser Leu Gln Gly Lys Pro Leu Gln Ser Trp Gly Arg Gly Ser
20 25 30
Ala Gly Gly Asn Ala His Ser Pro Leu Gly Val Pro Gly Gly Gly Leu
35 40 45
Pro Glu His Thr Phe Asn Leu Lys Met Phe Leu Glu Asn Val Lys Val
50 55 60
Asp Phe Leu Arg Ser Leu Asn Leu Ser Gly Val Pro Ser Gln Asp Lys
65 70 75 80
Thr Arg Val Glu Pro Pro Gln Tyr Met Ile Asp Leu Tyr Asn Arg Tyr
85 90 95
Thr Ser Asp Lys Ser Thr Thr Pro Ala Ser Asn Ile Val Arg Ser Phe
100 105 110
Ser Met Glu Asp Ala Ile Ser Ile Thr Ala Thr Glu Asp Phe Pro Phe
115 120 125
Gln Lys His Ile Leu Leu Phe Asn Ile Ser Ile Pro Arg His Glu Gln
130 135 140
Ile Thr Arg Ala Glu Leu Arg Leu Tyr Val Ser Cys Gln Asn His Val
145 150 155 160
Asp Pro Ser His Asp Leu Lys Gly Ser Val Val Ile Tyr Asp Val Leu
165 170 175
Asp Gly Thr Asp Ala Trp Asp Ser Ala Thr Glu Thr Lys Thr Phe Leu
180 185 190
Val Ser Gln Asp Ile Gln Asp Glu Gly Trp Glu Thr Leu Glu Val Ser
195 200 205
Ser Ala Val Lys Arg Trp Val Arg Ser Asp Ser Thr Lys Ser Lys Asn
210 215 220
Lys Leu Glu Val Thr Val Glu Ser His Arg Lys Gly Cys Asp Thr Leu
225 230 235 240
Asp Ile Ser Val Pro Pro Gly Ser Arg Asn Leu Pro Phe Phe Val Val
245 250 255
Phe Ser Asn Asp His Ser Ser Gly Thr Lys Glu Thr Arg Leu Glu Leu
260 265 270
Arg Glu Met Ile Ser His Glu Gln Glu Ser Val Leu Lys Lys Leu Ser
275 280 285
Lys Asp Gly Ser Thr Glu Ala Gly Glu Ser Ser His Glu Glu Asp Thr
290 295 300
Asp Gly His Val Ala Ala Gly Ser Thr Leu Ala Arg Arg Lys Arg Ser
305 310 315 320
Ala Gly Ala Gly Ser His Cys Gln Lys Thr Ser Leu Arg Val Asn Phe
325 330 335
Glu Asp Ile Gly Trp Asp Ser Trp Ile Ile Ala Pro Lys Glu Tyr Glu
340 345 350
Ala Tyr Glu Cys Lys Gly Gly Cys Phe Phe Pro Leu Ala Asp Asp Val
355 360 365
Thr Pro Thr Lys His Ala Ile Val Gln Thr Leu Val His Leu Lys Phe
370 375 380
Pro Thr Lys Val Gly Lys Ala Cys Cys Val Pro Thr Lys Leu Ser Pro
385 390 395 400
Ile Ser Val Leu Tyr Lys Asp Asp Met Gly Val Pro Thr Leu Lys Tyr
405 410 415
His Tyr Glu Gly Met Ser Val Ala Glu Cys Gly Cys Arg
420 425
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
ggacggttcc ttcagagca 19
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
ctgcactgcc tgatagggaa 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
ctcttctgtc taaaccctga 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
catgcagatt gaatcagtcc 20

Claims (10)

1.一种肺动脉高压的生物标志物，其特征在于，其包括：突变型BMP9基因或突变型BMP9蛋白；
其中，突变型BMP9基因相对于正常BMP9基因具有以下突变位点中的任意一种：c.G1263A、c.G1267A、c.G1057A、c.A958T、c.C405A、c.844_845del、c.881delA、c.G3A、c.1062delC、c.G1120C、c.T455C、c.T614A、c.T590C、c.G325T、c.A776G以及c.G948T；
其中，突变型BMP9蛋白相对于正常BMP9蛋白具有以下突变位点中的任意一种：p.M421I、p.V423M、p.A353T、p.S320C、p.F135L、p.S282fs、p.E294fs、p.M1I、p.Y354X、p.A374P、p.L152P、p.L205X、p.I197T、p.V109L、p.N259S以及p.R316S；
其中，正常BMP9基因的编码序列如SEQ ID NO.1所示，正常BMP9蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.检测权利要求1所述的肺动脉高压的生物标志物的试剂。
3.根据权利要求2所述的试剂，其特征在于，所述试剂含有用于检测所述突变型BMP9基因的引物对。
4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，所述引物对选自如下的一组或两组：SEQID NO.3和SEQ ID NO.4；以及SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6。
5.根据权利要求2所述的试剂，其特征在于，所述试剂含有用于检测突变型BMP9蛋白的特异性抗体。
6.一种检测如权利要求1所述的肺动脉高压的生物标志物的试剂盒，其特征在于，其包括权利要求2-5中任一项所述的试剂。
7.一种筛选用于治疗或预防肺动脉高压的药物的方法，其特征在于，其包括：
将能够表达突变型BMP9基因的动物模型在施用候选试剂的条件下饲养；
将所述能够表达突变型BMP9基因的动物模型在不施用所述候选试剂的条件下饲养；
确定所述能够表达突变型BMP9基因的动物模型在施用所述候选试剂和不施用所述候选试剂的情况下的肺动脉压力、肺血管阻力以及动物死亡率变化；
其中施用所述候选试剂条件下的肺动脉压力、肺血管阻力以及动物死亡率低于不施用所述候选试剂条件的肺动脉压力、肺血管阻力以及动物死亡率，是所述候选试剂作为用于治疗或预防肺动脉高压的药物的指示；
其中，突变型BMP9基因相对于正常BMP9基因具有以下突变位点中的至少一种：c.G1263A、c.G1267A、c.G1057A、c.A958T、c.C405A、c.844_845del、c.881delA、c.G3A、c.1062delC、c.G1120C、c.T455C、c.T614A、c.T590C、c.G325T、c.A776G以及c.G948T；
其中，正常BMP9基因的编码序列如SEQ ID NO.1所示。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述动物模型为小鼠、大鼠、兔或猴。
9.一种用于治疗或预防肺动脉高压的药物，其特征在于，所述药物以患有肺动脉高压患者体内的突变型BMP9基因或突变型BMP9蛋白为靶点；
其中，突变型BMP9基因相对于正常BMP9基因具有以下突变位点中的任意一种：c.G1263A、c.G1267A、c.G1057A、c.A958T、c.C405A、c.844_845del、c.881delA、c.G3A、c.1062delC、c.G1120C、c.T455C、c.T614A、c.T590C、c.G325T、c.A776G以及c.G948T；
其中，突变型BMP9蛋白相对于正常BMP9蛋白具有以下突变位点中的任意一种：p.M421I、p.V423M、p.A353T、p.S320C、p.F135L、p.S282fs、p.E294fs、p.M1I、p.Y354X、p.A374P、p.L152P、p.L205X、p.I197T、p.V109L、p.N259S以及p.R316S；
其中，正常BMP9基因的编码序列如SEQ ID NO.1所示，正常BMP9蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
10.一种用于检测肺动脉高压的基因芯片，其特征在于，所述基因芯片上含有与突变型BMP9基因的编码序列特异性结合的探针，突变型BMP9基因的编码序列相对于正常BMP9基因的编码序列具有以下突变位点中的任意一种：c.G1263A、c.G1267A、c.G1057A、c.A958T、c.C405A、c.844_845del、c.881delA、c.G3A、c.1062delC、c.G1120C、c.T455C、c.T614A、c.T590C、c.G325T、c.A776G以及c.G948T；
所述探针与突变型BMP9基因的编码序列特异性结合的区域涵盖选自以下位置中的任意一种：相对于正常BMP9基因的编码序列的第1263位、第1267位、第1057位、第958位、第405位、第844和845位、第881位、第3位、第1062位、第1120位、第455位、第614位、第590位、第325位、第776位以及第948位；
正常BMP9基因的编码序列如SEQ ID NO.1所示。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109266679A (zh) * 2018-10-12 2019-01-25 中国医学科学院阜外医院 一种bmpr2基因突变大鼠的制备方法及应用
CN109663128A (zh) * 2018-11-21 2019-04-23 中国农业大学 一种肺动脉高压标志物及其作为治疗靶点的应用
CN109797212A (zh) * 2019-01-30 2019-05-24 中国人民解放军总医院 一种检测肺动脉高压的致病/易感基因的方法
CN112957535A (zh) * 2021-02-01 2021-06-15 华东医院 调节环状rna制备人造血管移植物的方法及其在制造治疗肺动脉高压的生物材料中的应用
WO2022035260A1 (ko) * 2020-08-13 2022-02-17 주식회사 나이벡 이소골 형성 부작용 경감으로 치료효과가 증진된 골형성 단백질-9, 10의 변이체 및 이를 포함하는 약학적 조성물
US11572396B2 (en) 2014-07-10 2023-02-07 Cambridge Enterprise Limited Therapeutic use of bone morphogenetic proteins

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104650214A (zh) * 2015-02-15 2015-05-27 北京市心肺血管疾病研究所 肺动脉高压致病基因acvrl1突变位点及其应用
WO2016193872A3 (en) * 2015-06-05 2017-03-30 Novartis Ag Antibodies targeting bone morphogenetic protein 9 (bmp9) and methods therefor
CN106661094A (zh) * 2014-07-10 2017-05-10 剑桥企业有限公司 骨形态发生蛋白的治疗用途

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106661094A (zh) * 2014-07-10 2017-05-10 剑桥企业有限公司 骨形态发生蛋白的治疗用途
CN104650214A (zh) * 2015-02-15 2015-05-27 北京市心肺血管疾病研究所 肺动脉高压致病基因acvrl1突变位点及其应用
WO2016193872A3 (en) * 2015-06-05 2017-03-30 Novartis Ag Antibodies targeting bone morphogenetic protein 9 (bmp9) and methods therefor

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WANG G等: "Early onset severe pulmonary arterial hypertension with "two-hit" digenic mutations in both BMPR2 and KCNA5 genes", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF CARDIOLOGY》 *
WANG G等: "Novel homozygous BMP9 nonsense mutation causes pulmonary arterial hypertension：a case report", 《BMC PULMONARY MEDICINE》 *
郝岗平: "《生物化学与分子生物学》", 31 December 2016, 中国医药科技出版社 *
陈志南: "《中华医学百科全书.生物药物学》", 30 June 2017, 中国协和医科大学出版社 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11572396B2 (en) 2014-07-10 2023-02-07 Cambridge Enterprise Limited Therapeutic use of bone morphogenetic proteins
CN109266679A (zh) * 2018-10-12 2019-01-25 中国医学科学院阜外医院 一种bmpr2基因突变大鼠的制备方法及应用
CN109663128A (zh) * 2018-11-21 2019-04-23 中国农业大学 一种肺动脉高压标志物及其作为治疗靶点的应用
CN109797212A (zh) * 2019-01-30 2019-05-24 中国人民解放军总医院 一种检测肺动脉高压的致病/易感基因的方法
WO2022035260A1 (ko) * 2020-08-13 2022-02-17 주식회사 나이벡 이소골 형성 부작용 경감으로 치료효과가 증진된 골형성 단백질-9, 10의 변이체 및 이를 포함하는 약학적 조성물
CN112957535A (zh) * 2021-02-01 2021-06-15 华东医院 调节环状rna制备人造血管移植物的方法及其在制造治疗肺动脉高压的生物材料中的应用

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