CN107669659B - 一种叶酸受体靶向的载底物纳米微泡的制备方法 - Google Patents

一种叶酸受体靶向的载底物纳米微泡的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种叶酸受体靶向的载底物纳米微泡，该载底物纳米微泡由核心模板和外壳构成，核心模板为CdSe/ZnS量子点‑腔肠荧光素复合物和/或腔肠荧光素；外壳为叶酸交联聚乙二醇聚乳酸羟基乙酸聚合物。本发明还公开了该载底物纳米微泡的制备方法。本发明的载底物纳米微泡具有靶向释放、延缓降解、保持CdSe/ZnS量子点‑腔肠荧光素复合物和/或腔肠荧光素在体内的活性的优点。

Description

一种叶酸受体靶向的载底物纳米微泡的制备方法
技术领域
本发明涉及药物活性保护剂领域及靶向药物载体合成领域，具体涉及一种叶酸受体靶向的载底物纳米微泡及其制备方法。
背景技术
光动力治疗(Photodynamic Therapy，PDT)是继手术、化疗、放疗后治疗肿瘤的一种新方法。在皮肤癌、乳腺癌等浅表组织肿瘤取得良好的治疗效果。目前，光动力治疗主要使用激光发射器作为外部光源，激发由静脉注入并分布于肿瘤组织的光敏剂（Photosensitizer，PS）从而引发光动力反应( Photodaynamic Reaction，PDR) 产生细胞毒剂-活性氧 (Reactive Oxygen Species，ROS)，导致肿瘤细胞坏死和/或凋亡，并破坏肿瘤周围新生血管，进而杀伤肿瘤组织。
由于光动力治疗中所使用的外源性激光穿透力较弱，无法作用于深部组织引发光动力反应，因此，光动力治疗在肝癌等深部组织的治疗中受到限制。
在生物系统中的酶催化发光被称为生物发光。这是一个在细菌，藻类、昆虫等均普遍存在的现象。生物发光通常来源于酶（如荧光素酶）催化底物（如荧光素）发生氧化反应，释放光量子。基于这一原理，近年来，研究者们开始了生物发光系统在光动力治疗肝癌等深部组织中的研究，也就是通过将酶与底物递送至肿瘤处，进行发光，提供光源。然而，底物进入体内后容易被迅速降解，无法保证活性。
另外，光动力治疗在肝癌的靶向性也是亟待解决的一难题，由于现有的光动力治疗鲜有涉及肝脏等深部组织的研究，借鉴于光动力治疗运用于其他浅表组织，其靶向性主要依靠于肿瘤组织对光敏剂的滞留效应这一被动靶向效应，以及操控光源的靶向照射。这种特异性较低的被动靶向，易造成正常组织的损伤，阻碍了光动力治疗的进一步运用，因此，如何保证底物的靶向性，也是一个难题。
发明内容
针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种叶酸受体靶向的载底物纳米微泡，该载底物纳米微泡具有靶向释放和延缓降解的优点，保持CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和/或腔肠荧光素在体内的活性。
为达到以上目的，本发明采取的技术方案是：一种叶酸受体靶向的载底物纳米微泡，所述载底物纳米微泡由核心模板和外壳构成，所述核心模板为CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和/或腔肠荧光素；所述外壳为叶酸交联聚乙二醇聚乳酸羟基乙酸聚合物。
进一步地，当所述核心模板含有CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物时，所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物由CdSe/ZnS量子点与肠腔荧光素共价偶联而成。
本发明还提供了一种如上所述的叶酸受体靶向的载底物纳米微泡的制备方法，其包括如下步骤：
S1：制备所述叶酸交联聚乙二醇聚乳酸羟基乙酸聚合物，并使其形成所述外壳；
S2：当所述核心模板为腔肠荧光素时，将所述核心模板载入所述外壳中，完成所述载底物纳米微泡的制备；
当所述核心模板为CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物时，制备所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物，并使其形成所述核心模板，将所述核心模板载入所述外壳中，完成所述载底物纳米微泡的制备；
当所述核心模板为CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和腔肠荧光素时，制备所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物，并使所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和所述腔肠荧光素形成所述核心模板，将所述核心模板载入所述外壳中，完成所述载底物纳米微泡的制备。
进一步地，S2中，当所述核心模板含有CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物时，所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物的制备方法如下：
在戊二醛中加入1～3ml的缓冲溶液，并加入8～12μl CdSe/ZnS量子点，在氩气环境中搅拌1.5～2.5h后，分离提纯并除去戊二醛；加入1～3mg腔肠荧光素，继续在氩气环境中搅拌反应9～11h后，分离提纯除去腔肠荧光素，得到所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物。
进一步地，所述缓冲溶液为硼酸盐缓冲溶液或柠檬酸盐缓冲溶液。
进一步地，所述缓冲溶液的pH值为7.2～7.6。
进一步地，S2中将所述核心模板载入所述外壳的制备方法如下：
S21：将所述核心模板与水混合形成内水相，将内水相加入到所述外壳浓度为0～0.050g/ml的二氯甲烷中，得到初乳液；
S22：将所述外壳与水混合形成外水相，利用SPG膜乳化器将初乳液分散到外水相中，得到复乳液；
S23：将复乳液转移至磁力搅拌器中，搅拌使二氯甲烷挥发，搅拌速率为80～120rpm/min，搅拌温度为30～50℃，搅拌时间为8～10h；
S24：将复乳液转移至离心机中，在3～5℃、2500～3500g条件下离心收集沉淀，干燥。
进一步地，内水相采用注射器匀速加入到二氯甲烷中。
进一步地，SPG膜乳化器压力舱内压力为45～55kPa,初乳液匀速通过SPG膜分散到外水相中。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
（1）本发明为CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和/或腔肠荧光素包裹了一层外壳，可以提高对CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和/或腔肠荧光素的保护，防止其在达到肝脏等深部组织前被降解，保证了生物活性和稳定性。
（2）本发明外壳表面修饰有叶酸，可与肝癌细胞高表达的叶酸受体实现主动靶向，定位准确；同时，该外壳可以起到待CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和/或腔肠荧光素富集后，进行集中激发和释放的作用，该外壳作为一层脂质膜，更易于穿透组织及细胞膜。
（3）本发明制备的载底物纳米微泡具有包封率稳定，粒径均一，产率高，合成加工方法简单，无生物毒性。
附图说明
图1为本发明实施例提供的核心模板为CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物时的载底物纳米微泡结构示意图。
具体实施方式
以下结合附图及实施例对本发明作进一步详细说明。
载底物纳米微泡实施例1：
参见图1所示，本发明提供一种叶酸受体靶向的载底物纳米微泡，所述载底物纳米微泡由核心模板和外壳构成，所述核心模板为CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和/或腔肠荧光素，当所述核心模板含有CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物时，所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物由CdSe/ZnS量子点与肠腔荧光素共价偶联而成；所述外壳为叶酸交联聚乙二醇聚乳酸羟基乙酸聚合物。
采用CdSe/ZnS量子点与腔肠荧光素偶联复合，CdSe/ZnS量子点可以起到起到转换波长的作用，吸收波长450～480nm左右的蓝光并立即转化为650nm左右的红光，也即生物发光共振能量转移效应（Bioluminescence Resonance Energy Transfer）。。
本发明为CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和/或腔肠荧光素包裹了一层外壳，可以提高对CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和/或腔肠荧光素活性的保护，防止其在达到肝脏等深部组织前被降解，保证了生物活性和稳定性；同时，该外壳可以起到待CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和/或腔肠荧光素富集后，进行集中激发和释放的作用；外壳表面修饰有叶酸，可与肝癌细胞高表达的叶酸受体实现主动靶向，定位准确，然后通过超声靶向爆破技术集中释放，可产生足够强度的生物光用于激发光敏剂，实现药物靶向递送；该外壳作为一层脂质膜，无生物毒性，更易于穿透组织及细胞膜。
制备方法实施例1：
本发明提供了叶酸受体靶向的载底物纳米微泡的制备方法，该方法在制备所述载底物纳米微泡中，具有包封率稳定、粒径均一、产率高、合成加工方法简单的优点，其包括如下步骤：
S1：制备所述叶酸交联聚乙二醇聚乳酸羟基乙酸聚合物，并使其形成所述外壳；
S2：当所述核心模板为腔肠荧光素时，将所述核心模板载入所述外壳中，完成所述载底物纳米微泡的制备；
当所述核心模板为CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物时，制备所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物，并使其形成所述核心模板，将所述核心模板载入所述外壳中，完成所述载底物纳米微泡的制备；
当所述核心模板为CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和腔肠荧光素时，制备所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物，并使所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和所述腔肠荧光素形成所述核心模板，将所述核心模板载入所述外壳中，完成所述载底物纳米微泡的制备。
制备方法实施例2：
本实施例与制备方法实施例1的区别在于，在步骤S1中，外壳采用分子量为25KD、表面带羧基的聚乳酸/羟基乙酸（50:50，记为PLGA-COOH）为载体，双氨基的聚乙二醇（分子量为3.5KD，记为NH2-PEG-NH2）为连接物，叶酸（记为FA）为特异性的靶向配体。采用五步法制备叶酸靶向的聚乙二醇聚乳酸/羟基乙酸聚合物（记为PLGA-PEG-FA）：
第一步：合成PLGA-NHS：PLGA-COOH和N-羟基琥珀酰亚胺（记为NHS）偶联活化羧基。
取0.04MM的PLGA-COOH溶解在4ml二氯甲烷中，取0.4MM的NHS和0.3MM的二环己基碳二亚胺溶解在2ml二氯甲烷中，二者混合，放置在摇床中慢速摇匀过夜，加入80ml冰甲醇和乙醚混合溶液（甲醇和乙醚体积比为1:1）摇匀，4℃静置过夜，见有大量沉淀出现时，离心收集沉淀，真空干燥，即可得到PLGA-NHS。
第二步：合成单氨基保护的NH2-PEG-NH-BOC：NH2-PEG-NH2与二碳酸二叔丁酯（记为BOC）反应。
取NH2-PEG-NH2溶解在pH为7.40～7.50的碳酸氢钠溶液中，终浓度为1mg/ml；取二碳酸二叔丁酯溶解在10ml二甲基亚砜，终浓度为0.1mg/ml。按NH2-PEG-NH2与二碳酸二叔丁酯质量比为5:1混合，室温搅拌反应过夜，二碳酸二叔丁酯后上层析柱15Q分离纯化，得到NH2-PEG-NH-BOC。
第三步：合成PLGA-PEG-NH-BOC：NH2-PEG-NH-BOC与PLGA-NHS偶联反应。
取0.02MM的PLGA-NHS溶解在20ml的二氯甲烷中，以此加入0.05MM的NH2-PEG-NH-BOC和0.4MM 的N,N-二异丙基乙胺，放置在摇床中慢速摇匀过夜，加入80ml冰甲醇和乙醚混合溶液（甲醇和乙醚体积比为1:1），4℃静置过夜，见有大量沉淀出现时，离心收集沉淀，真空干燥，即可得到PLGA-PEG-NH-BOC。
第四步：合成PLGA-PEG-NH2：三氟乙酸（记为TFA）置换PLGA-PEG-NH-BOC中的BOC。
取250mg的PLGA-PEG-NH-BOC溶解在25ml100%三氟乙酸，脱保护30min后加入50倍双蒸水终止反应，终止反应后的脱保护溶液上反相纯化，得到PLGA-PEG-NH2单体；再加入5倍体积的冰甲醇和乙醚混合溶液（甲醇和乙醚体积比为1:1），4℃静置过夜，见有大量沉淀出现时，离心收集沉淀，真空干燥，即可得到PLGA-PEG-NH2干粉。
第五步：PLGA-PEG-FA：PLGA-PEG-NH2与叶酸（记为FA）偶联。
分别取100ml的PLGA-PEG-NH2和叶酸溶解于50ml 100%的二甲亚砜，终浓度2mg/ml。二者混匀后加入6MM的二环己基碳二亚胺，放置在摇床中慢速摇匀过夜， 加入5倍体积的冰甲醇和乙醚混合溶液（甲醇和乙醚体积比为1:1），4℃静置过夜，见有大量沉淀出现时，离心收集沉淀，真空干燥，即可得到PLGA-PEG-FA。
制备方法实施例3：
本实施例与制备方法实施例1的区别在于，在步骤S2中，当所述核心模板含有CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物时，所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物利用戊二醛交联法制备：
在戊二醛中加入1ml的缓冲溶液，并加入8μl CdSe/ZnS量子点，在氩气环境中搅拌2.5h后，分离提纯并除去戊二醛；加入2mg腔肠荧光素，继续在氩气环境中搅拌反应11h后，分离提纯除去腔肠荧光素，得到所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物，其中，所述缓冲溶液为pH值为7.4的硼酸盐缓冲溶液或柠檬酸盐缓冲溶液。
制备方法实施例4：
本实施例与制备方法实施例1的区别在于，在步骤S2中，当所述核心模板含有CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物时，所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物利用戊二醛交联法制备：
在戊二醛中加入2ml的缓冲溶液，并加入10μl CdSe/ZnS量子点，在氩气环境中搅拌1.5h后，分离提纯并除去戊二醛；加入1mg腔肠荧光素，继续在氩气环境中搅拌反应10h后，分离提纯除去腔肠荧光素，得到所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物，其中，所述缓冲溶液为pH值为7.2的硼酸盐缓冲溶液或柠檬酸盐缓冲溶液。
制备方法实施例5：
本实施例与制备方法实施例1的区别在于，在步骤S2中，当所述核心模板含有CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物时，所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物利用戊二醛交联法制备：
在戊二醛中加入3ml的缓冲溶液，并加入12μl CdSe/ZnS量子点，在氩气环境中搅拌2h后，分离提纯并除去戊二醛；加入4mg腔肠荧光素，继续在氩气环境中搅拌反应9h后，分离提纯除去腔肠荧光素，得到所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物，其中，所述缓冲溶液为pH值为7.6的硼酸盐缓冲溶液或柠檬酸盐缓冲溶液。
制备方法实施例6：
本实施例与制备方法实施例1的区别在于，在步骤S2中，采用超声乳化法结合微膜乳化器，将所述核心模板载入所述外壳以制备所述载底物纳米微泡。所述核心模板为CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物或腔肠荧光素或CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和腔肠荧光素的混合物。
S21：将上述制备的所述核心模板与水混合形成内水相，将内水相通过注射器匀速加入到二氯甲烷中，也就是此时所述外壳浓度为0g/ml的二氯甲烷，得到稳定的初乳液；
S22：将上述制备的所述外壳与水混合形成外水相，利用SPG膜乳化器将初乳液分散到外水相中，得到复乳液；在这一过程中，保证SPG膜乳化器压力舱内压力为45kPa，初乳液匀速通过SPG膜分散到外水相中；
S23：当外水相逐渐出现乳白色浑浊乳液直到不再加深后，将复乳液转移至磁力搅拌器中，搅拌使二氯甲烷挥发，搅拌速率为80rpm/min，搅拌温度为30℃，搅拌时间为8h；
S24：将复乳液转移至离心机中，在3℃、2500g条件下离心收集沉淀，蒸馏水洗涤多次后，真空冷冻干燥，使水和二氯甲烷完全升华，获得干燥的白色粉末状所述载底物纳米微泡。
制备方法实施例7：
本实施例与制备方法实施例1的区别在于，在步骤S2中，采用超声乳化法结合微膜乳化器，将所述核心模板载入所述外壳以制备所述载底物纳米微泡。所述核心模板为CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物，或腔肠荧光素，或CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和腔肠荧光素的混合物。
S21：将上述制备的所述核心模板与水混合形成内水相，将内水相通过注射器匀速加入到所述外壳浓度为0.050g/ml的二氯甲烷中，得到稳定的初乳液；
S22：将上述制备的所述外壳与水混合形成外水相，利用SPG膜乳化器将初乳液分散到外水相中，得到复乳液；在这一过程中，保证SPG膜乳化器压力舱内压力为50kPa，初乳液匀速通过SPG膜分散到外水相中；
S23：当外水相逐渐出现乳白色浑浊乳液直到不再加深后，将复乳液转移至磁力搅拌器中，搅拌使二氯甲烷挥发，搅拌速率为110rpm/min，搅拌温度为40℃，搅拌时间为10h；
S24：将复乳液转移至离心机中，在4℃、3000g条件下离心收集沉淀，蒸馏水洗涤多次后，真空冷冻干燥，使水和二氯甲烷完全升华，获得干燥的白色粉末状所述载底物纳米微泡。
制备方法实施例8：
本实施例与制备方法实施例1的区别在于，在步骤S2中，采用超声乳化法结合微膜乳化器，将所述核心模板载入所述外壳以制备所述载底物纳米微泡。所述核心模板为CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物，或腔肠荧光素，或CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和腔肠荧光素的混合物。
S21：将上述制备的所述核心模板与水混合形成内水相，将内水相通过注射器匀速加入到所述外壳浓度为0.025g/ml的二氯甲烷中，得到稳定的初乳液；
S22：将上述制备的所述外壳与水混合形成外水相，利用SPG膜乳化器将初乳液分散到外水相中，得到复乳液；在这一过程中，保证SPG膜乳化器压力舱内压力为55kPa，初乳液匀速通过SPG膜分散到外水相中；
S23：当外水相逐渐出现乳白色浑浊乳液直到不再加深后，将复乳液转移至磁力搅拌器中，搅拌使二氯甲烷挥发，搅拌速率为100rpm/min，搅拌温度为40℃，搅拌时间为9h；
S24：将复乳液转移至离心机中，在4℃、3000g条件下离心收集沉淀，蒸馏水洗涤多次后，真空冷冻干燥，使水和二氯甲烷完全升华，获得干燥的白色粉末状所述载底物纳米微泡。
制备方法实施例9：
本实施例与制备方法实施例1的区别在于，在步骤S2中，采用超声乳化法结合微膜乳化器，将所述核心模板载入所述外壳以制备所述载底物纳米微泡。所述核心模板为CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物，或腔肠荧光素，或CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和腔肠荧光素的混合物。
S21：将上述制备的所述核心模板与水混合形成内水相，将内水相通过注射器匀速加入到所述外壳浓度为0.030g/ml的二氯甲烷中，得到稳定的初乳液；
S22：将上述制备的所述外壳与水混合形成外水相，利用SPG膜乳化器将初乳液分散到外水相中，得到复乳液；在这一过程中，保证SPG膜乳化器压力舱内压力为52kPa，初乳液匀速通过SPG膜分散到外水相中；
S23：当外水相逐渐出现乳白色浑浊乳液直到不再加深后，将复乳液转移至磁力搅拌器中，搅拌使二氯甲烷挥发，搅拌速率为120rpm/min，搅拌温度为50℃，搅拌时间为9h；
S24：将复乳液转移至离心机中，在5℃、3000g条件下离心收集沉淀，蒸馏水洗涤多次后，真空冷冻干燥，使水和二氯甲烷完全升华，获得干燥的白色粉末状所述载底物纳米微泡。
制备方法实施例10：
本实施例与制备方法实施例1的区别在于，在步骤S2中，采用超声乳化法结合微膜乳化器，将所述核心模板载入所述外壳以制备载底物纳米微泡。所述核心模板为CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物，或腔肠荧光素，或CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和腔肠荧光素的混合物。
S21：将上述制备的所述核心模板与水混合形成内水相，将内水相通过注射器匀速加入到所述外壳浓度为0.025g/ml的二氯甲烷中，得到稳定的初乳液；
S22：将上述制备的所述外壳与水混合形成外水相，利用SPG膜乳化器将初乳液分散到外水相中，得到复乳液；在这一过程中，保证SPG膜乳化器压力舱内压力为48kPa，初乳液匀速通过SPG膜分散到外水相中；
S23：当外水相逐渐出现乳白色浑浊乳液直到不再加深后，将复乳液转移至磁力搅拌器中，搅拌使二氯甲烷挥发，搅拌速率为100rpm/min，搅拌温度为47℃，搅拌时间为8h；
S24：将复乳液转移至离心机中，在4℃、3200g条件下离心收集沉淀，蒸馏水洗涤多次后，真空冷冻干燥，使水和二氯甲烷完全升华，获得干燥的白色粉末状所述载底物纳米微泡。
制备方法实施例11：
本实施例与制备方法实施例1的区别在于，在步骤S2中，采用超声乳化法结合微膜乳化器，将所述核心模板载入所述外壳以制备所述载底物纳米微泡。所述核心模板为CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物，或腔肠荧光素，或CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和腔肠荧光素的混合物。
S21：将上述制备的所述核心模板与水混合形成内水相，将内水相通过注射器匀速加入到所述外壳浓度为0.015g/ml的二氯甲烷中，得到稳定的初乳液；
S22：将上述制备的所述外壳与水混合形成外水相，利用SPG膜乳化器将初乳液分散到外水相中，得到复乳液；在这一过程中，保证SPG膜乳化器压力舱内压力为48kPa，初乳液匀速通过SPG膜分散到外水相中；
S23：当外水相逐渐出现乳白色浑浊乳液直到不再加深后，将复乳液转移至磁力搅拌器中，搅拌使二氯甲烷挥发，搅拌速率为90rpm/min，搅拌温度为38℃，搅拌时间为8h；
S24：将复乳液转移至离心机中，在4℃、2700g条件下离心收集沉淀，蒸馏水洗涤多次后，真空冷冻干燥，使水和二氯甲烷完全升华，获得干燥的白色粉末状所述载底物纳米微泡。
本发明不局限于上述实施方式，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围之内。本说明书中未作详细描述的内容属于本领域专业技术人员公知的现有技术。

Claims (7)

1.一种叶酸受体靶向的载底物纳米微泡的制备方法，其特征在于：所述载底物纳米微泡由核心模板和外壳构成，所述核心模板为CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和/或腔肠荧光素；所述外壳为叶酸交联聚乙二醇聚乳酸羟基乙酸聚合物；其制备方法包括如下步骤：
S1：制备所述叶酸交联聚乙二醇聚乳酸羟基乙酸聚合物，并使其形成所述外壳；
S2：当所述核心模板为腔肠荧光素时，将所述核心模板载入所述外壳中，完成所述载底物纳米微泡的制备；
当所述核心模板为CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物时，制备所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物，并使其形成所述核心模板，将所述核心模板载入所述外壳中，完成所述载底物纳米微泡的制备；
当所述核心模板为CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和腔肠荧光素时，制备所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物，并使所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物和所述腔肠荧光素形成所述核心模板，将所述核心模板载入所述外壳中，完成所述载底物纳米微泡的制备。
2.如权利要求1所述的叶酸受体靶向的载底物纳米微泡的制备方法，其特征在于：S2中，当所述核心模板含有CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物时，所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物的制备方法如下：
在戊二醛中加入1～3ml的缓冲溶液，并加入8～12μl CdSe/ZnS量子点，在氩气环境中搅拌1.5～2.5h后，分离提纯并除去戊二醛；加入1～3mg腔肠荧光素，继续在氩气环境中搅拌反应9～11h后，分离提纯除去腔肠荧光素，得到所述CdSe/ZnS量子点-腔肠荧光素复合物。
3.如权利要求2所述的叶酸受体靶向的载底物纳米微泡的制备方法，其特征在于：所述缓冲溶液为硼酸盐缓冲溶液或柠檬酸盐缓冲溶液。
4.如权利要求2所述的叶酸受体靶向的载底物纳米微泡的制备方法，其特征在于：所述缓冲溶液的pH值为7.2～7.6。
5.如权利要求1所述的叶酸受体靶向的载底物纳米微泡的制备方法，其特征在于：S2中将所述核心模板载入所述外壳的制备方法如下：
S21：将所述核心模板与水混合形成内水相，将内水相加入到所述外壳浓度为0～0.050g/ml的二氯甲烷中，得到初乳液；
S22：将所述外壳与水混合形成外水相，利用SPG膜乳化器将初乳液分散到外水相中，得到复乳液；
S23：将复乳液转移至磁力搅拌器中，搅拌使二氯甲烷挥发，搅拌速率为80～120rpm/min，搅拌温度为30～50℃，搅拌时间为8～10h；
S24：将复乳液转移至离心机中，在3～5℃、2500～3500g条件下离心收集沉淀，干燥。
6.如权利要求5所述的叶酸受体靶向的载底物纳米微泡的制备方法，其特征在于：内水相采用注射器匀速加入到二氯甲烷中。
7.如权利要求5所述的叶酸受体靶向的载底物纳米微泡的制备方法，其特征在于：SPG膜乳化器压力舱内压力为45～55kPa,初乳液匀速通过SPG膜分散到外水相中。
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