CN107661493A - 非全包型牛血清白蛋白‑羟基磷灰石纳米粒子加压震动包裹制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及到的是非全包型牛血清白蛋白‑羟基磷灰石纳米粒子加压震动包裹制备工艺，包括以下步骤：步骤1：将牛血清白蛋白‑羟基磷灰石纳米粒子干燥、风干成粉末备用；步骤2：将牛血清白蛋白‑羟基磷灰石纳米粒子粉末分散均匀，平铺在平整光洁且表面强度足够、且四周有围圈的圆形平面上，再将另一个平整光洁且硬度足够的圆形表面压在牛血清白蛋白‑羟基磷灰石纳米粒子粉末上进行预加压，2个圆形平面面积相等，上表面嵌入下表面围圈中；然后进行震动，边震动边加压到需要的压力，然后逐滴在牛血清白蛋白‑羟基磷灰石纳米粒子粉末周围滴加高分子聚合物溶液，润湿即可，常温下保持通风至挥发完毕。
Description
技术领域
本发明涉及到的是非全包型牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子加压震动包裹制备工艺。
背景技术
药物缓释系统是制药领域的一个重要研究方向,它作为药物制剂学科的前沿课题受到制药界的广泛关注。羟基磷灰石是一类多孔性的无机材料,由于其具有优良的生物相容性以及与蛋白质分子的高亲和性 ,已被广泛用于蛋白缓释药物载体。近年来采用多种方法合成的羟基磷灰石纳米粒子具有溶解度较高、表面能较大、生物活性好等优点。以羟基磷灰石纳米粒子为载体，吸附血清白蛋白并考察了影响其吸附的因素，同时研究了羟基磷灰石纳米粒子-牛血清白蛋白复合体系的体外释放规律，从而为羟基磷灰石纳米粒子作为蛋白药物缓释载体提供了理论依据。
合成纳米尺寸的羟基磷灰石粒子并对其进行表征，研究了牛血清白蛋白作为模式蛋白对羟基磷灰石纳米粒子的吸附量，探索了影响其吸附的因素同时测定了羟基磷灰石纳米粒子-牛血清白蛋白复合物的体外释放度。实验结果表明:羟基磷灰石纳米粒子能够作为蛋白类缓释药物的载体。
研究发现，药物的释放行为可通过在微球外表面，修饰高分子聚合物包覆层的亲疏水性和厚度控制。如PEG-PLA的亲疏水性因二者分子量的不同而不同，因此可以通过使用具有不同分子量的PEG-PLA包覆层控制药物的释放行为。
但是聚合物包覆层控制药物的释放行为受到聚合物浓度、分子量、包覆层厚度等多种因素的影响，因此，实验室中需要找到一种可以快速调整聚合物包覆层控制药物的释放速度的方法，以利于研究在不同药物释放速度下，牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子的性质。
发明内容
有鉴于此，为了解决上述问题，本发明提供一种非全包型牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子加压震动包裹制备工艺。
非全包型牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子加压震动包裹制备工艺，包括以下步骤：
步骤1：将牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子干燥、风干成粉末备用；
步骤2：将牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子粉末分散均匀，平铺在平整光洁且表面强度足够、且四周有围圈的圆形平面上，再将另一个平整光洁且硬度足够的圆形表面压在牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子粉末上进行预加压，2个圆形平面面积相等，上表面嵌入下表面围圈中；然后进行震动，边震动边加压到需要的压力，然后逐滴在牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子粉末周围滴加高分子聚合物溶液，润湿即可，常温下保持通风至挥发完毕。
进一步的，在步骤2中，第一次高分子聚合物溶液挥发完毕后，重复滴加高分子聚合物溶液至包覆完成。
进一步的，加压平面选用钻石、陶瓷或者玻璃制作，但不能采用硬质合金制作。
进一步的，加压平面莫氏硬度大于6.0。
高分子聚合物包覆层是致密且表面多孔结构，其释放内部药物的速度与其包裹时使用溶液的浓度（分子量）和包裹层厚度有关。为了得到不同释放速度的包裹层，传统技术需要调整溶液分子量或者多次反复实行包裹。每得到一次不同释放速度的包裹层，都必须进行一次完整的从载药微粒到外层包裹的工艺。而且不符合要求（释放速度）的实验品只能丢弃，浪费时间和药品。而且包裹时溶液的添加剂是有毒的（氯仿），采用多次包裹来调节包裹层厚度的工艺，对实验者不安全。采用本申请的加压控制释放速度的工艺以后，只需在步骤2中调节加压压力大小，即可快速调节包裹层释放速度。当需要配置不同释放速度的包裹层时，只需要制作一批步骤4中的牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子粉末，然后在步骤2中采用不同的加压压力，统一只包裹一次高分子聚合物溶液（此时溶液只使用一次）即可制作出不同释放速度的包裹层。
高分子聚合物包覆牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子以后，牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子结构为球状，其在加压以后，互相之间紧密结合，表面互相之间重叠，重叠的程度和加压压力基本呈线性关系。当浸润在高分子聚合物溶液内后，微球未重叠的表面包裹上高分子聚合物层，重叠的表面未包裹到。风干以后，形成表面高低不平，局部包裹高分子聚合物层、局部未包裹高分子聚合物层的微球。该微球的药物释放速度和高分子聚合物层溶液分子量及微球表面包裹程度有关。当高分子聚合物层溶液分子量不变只，药物释放速度只与加压压力（微球表面在加压时，互相之间重叠的程度）有关。因此通过本技术方案，实验室里可以快速调整高分子聚合物包覆层控制药物的释放速度以利于研究在不同药物释放速度下，牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子的性质。
纳米粒子粉末手工是无法分散均匀的，总是局部比较厚，局部比较薄，此时如果直接加压到预定值，容易导致粉末比较厚的地区受压力大，粉末比较薄的地区受压力小，同一批制作出来的粒子外表面产生不同的包裹度（其在加压以后，互相之间紧密结合，表面互相之间重叠，重叠的程度和加压压力基本呈线性关系），对控制产品质量不利。边震动边加压到需要的压力，由于震动的作用，纳米粒子粉末会趋向分散，而且这种分散是随机的、均匀的。可以将加压之前局部比较厚，局部比较薄的粉末调整到分散均匀（厚度一致）的状态，此时再加压到预定压力，就避免了在局部比较厚，局部比较薄的情况下加压。此时制作出来的每个纳米粒子受压比较均匀，同一批制作出来的粒子外表面包裹度一致，有利于控制产品质量。围圈用于防止震动时粉末从加压平台上散落。
附图说明
图1是本发明的结构示意图。
具体实施方式
1.羟基磷灰石纳米粒子合成
羟基磷灰石纳米粒子按文献（Narasaraju T S B , Phebe D E. Some physico-chemi-cal aspect s of hydroxylapatite[J] . Journal of Materi-al Science ,1996 , 31 (1) : 1-21.）在水相中合成。Ca (NO3 ) 2和 N H4 H2 PO4溶液的p H 值均用氨水调至 10 以上，再将 2 种溶液按照钙磷计量比为 1. 67 混合，反应结束经离心、沉淀，用去离子水洗涤至p H 值为7，再用正丁醇洗涤 ,沉淀在80 ℃烘干 ,并在 500 ℃ 钙化 5 h。
2.蛋白吸附
精密称取 20mg羟基磷灰石纳米粒子置于5ml 蛋白溶液中，在室温下搅拌1 h。离心后，用分光光度法测定上清液中蛋白溶液的含量，从而测定蛋白吸附量。
将牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子粉末风干后分散均匀，平铺在平整光洁且表面强度足够、且四周有围圈的圆形平面上，再将另一个平整光洁且硬度足够的圆形表面压在牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子粉末上进行预加压，2个圆形平面面积相等，上表面嵌入下表面围圈中；然后进行震动，边震动边加压到需要的压力，然后逐滴在牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子粉末周围滴加高分子聚合物溶液，润湿即可，常温下保持通风至溶液挥发完毕。
如图1，内核1为牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子，PEG和PLA-PEG包裹层2因为包裹时互相之间紧密挤压，从而在包裹层2表面造成深浅不一的缺口21。且单个纳米牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子表面有些局部包裹有PEG和PLA-PEG包覆层2、有些局部22未包裹PEG和PLA-PEG包覆层2。
Claims (4)
1.非全包型牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子加压震动包裹制备工艺，包括以下步骤：
步骤1：将牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子干燥、风干成粉末备用；
步骤2：将牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子粉末分散均匀，平铺在平整光洁且表面强度足够的平面上，再将另一个平整光洁且硬度足够的表面压在牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子粉末上进行加压，调整好加压压力，然后逐滴在牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子粉末周围滴加高分子聚合物溶液，润湿即可，常温下保持通风至挥发完毕。
2.如权利要求1所述的非全包型牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子加压震动包裹制备工艺，其特征为：在步骤2中，第一次高分子聚合物溶液挥发完毕后，重复滴加高分子聚合物溶液至包覆完成。
3.如权利要求2所述的非全包型牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子加压震动包裹制备工艺，其特征为：加压平面选用钻石、陶瓷或者玻璃制作，但不能采用硬质合金制作。
4.如权利要求3所述的非全包型牛血清白蛋白-羟基磷灰石纳米粒子加压震动包裹制备工艺，其特征为：加压平面莫氏硬度大于6.0。
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