CN107648662A - 生物矿化纳米复合抗生素涂层钛金属板表面的制备方法 - Google Patents

生物矿化纳米复合抗生素涂层钛金属板表面的制备方法 Download PDF

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Abstract

生物矿化纳米复合抗生素涂层钛金属板表面的制备方法。本发明涉及利用生物矿化法在钛金属板表面形成纳米羟基磷灰石，对钛金属板进行抗生素负载的方法；首先对钛金属板预处理后，将制备的纳米羟基磷灰石溶液和已经选用的抗生素通过生物矿化法，进而通过共同沉淀法在钛金属涂层中负载抗生素；所述预处理是通过对钛金属板表面进行打磨，然后依次丙酮、乙醇溶液中进行超声清洗，干燥；所述生物矿化：是一种利用制备纳米羟基磷灰石溶液，使生物分子来组装无机结构的高度自主调控的过程，共同沉淀法：将预处理的钛金属板浸入已经制备纳米羟基磷灰石溶液与抗生素组成的混合溶液中，在模拟人体温度37℃温箱，自然矿化24小时后提取上清液后即得生物矿化纳米复合抗生素涂层钛金属板。

Description

生物矿化纳米复合抗生素涂层钛金属板表面的制备方法
技术领域
本发明属于生物医用材料技术领域，涉及利用生物矿化法在钛金属板表面形成纳米羟基磷灰石，对钛金属板进行抗生素负载的方法；具体为一种生物矿化纳米复合抗生素涂层钛金属板表面的制备方法。
背景技术
在骨科临床上,具统计术后的金属固定板被感染率为2-5％。目前国内外对钛金属植入感染尚无通过有效抑制细菌粘附及细菌生物膜形的办法。抗生素的预防应用并不能显著减少细菌定植在假体周围。经国家专利局网站查询检索，没有发现有能解决此问题的专利技术方案。
发明内容：本发明的目的在于提供一种制作过程简单，成本低廉，钛金属板零感染率的生物矿化纳米复合抗生素涂层钛金属板表面的制备方法。本发明的目的是这样实现的：一种生物矿化纳米复合抗生素涂层钛金属板表面的制备方法，其特征在于：首先对钛金属板预处理后，将制备的纳米羟基磷灰石溶液和已经选用的抗生素通过生物矿化法，进而通过共同沉淀法在钛金属涂层中负载抗生素；所述预处理是通过对钛金属板表面进行打磨，然后依次丙酮、乙醇溶液中进行超声清洗，干燥；所述生物矿化：是一种利用制备纳米羟基磷灰石溶液，使生物分子来组装无机结构的高度自主调控的过程，共同沉淀法：将预处理的钛金属板浸入已经制备纳米羟基磷灰石溶液与抗生素组成的混合溶液中，在模拟人体温度37℃温箱，自然矿化24小时后提取上清液后即得生物矿化纳米复合抗生素涂层钛金属板。
钛金属接骨板4.0cm×1.cm大小，0.5cm厚，依次用500-1000目金相砂纸进行打磨，然后放在10-15mol/L丙酮、70％-75％乙醇、超声清洗，干燥备用；n-HA的制备：氯化钙2.3-2.5mmol/L，磷酸二氢钾2.3-2.5mmol/L，氯化钠135-141mmol/L，氯化钾3-4mmol/L，碳酸氢钠3.8-4.2mmol/L，逐步称重后加入100ml氯化钠超声磁力搅拌，注最后加入氯化钙，溶液调节PH7.0-7.4，无菌真空滤器过滤制备矿化溶液，0°冰柜储存，随时备用；样品热处理：在真空马弗炉中室温至400-600℃，速率为1-5℃/min；保温2-4h，关闭电源，然后随炉降温，庆大霉素加载：n-HA溶液分别与庆大霉素5-10ug/ml；溶液混合通过物理气相沉积，涂层钛板表面，浸泡在聚苯乙烯细胞培养板，室温36.5-37°培养箱内矿化24小时后，去除上清液，无菌环境自然室温晾干24小时后，将负载n-HA抗生素钛板氯化钠溶液冲洗3次后，应用氯化钠溶液促进释放，假体抗生素体外释放试验:将制备好的假体放到有3ml氯化钠溶液培养皿中，然后在不同时间点对氯化钠溶液进行庆大霉素浓度测定，每次取样后重新更换3ml，氯化钠浸泡，分别在1h，24h，48h，72h，120h，196h，216h，240h用取样器吸取50ug置TDxFLx的样品盒中进行药物浓度的测定。庆大霉素药物浓度测定：吸取药样标本或标准溶液或质控试液50ug，指样品盒中，放入全自动荧光偏振免疫分析仪中，自动检测，用标准试剂盒做药液标准曲线，用标准曲线中的各自浓度的偏振误差值(PERR)和均方根误差值(RMSE)的大小判定标准曲线的合格与否，当PERR在-2-2，RMSE≤1时，视标准曲线合格，可用于药品标本测定。
钛金属接骨板4.0cm×1.5cm大小，0.5cm厚，依次用500-1000目金相砂纸进行打磨，然后放在10-15mol/L丙酮、70％-75％乙醇、超声清洗，干燥备用；n-HA的制备：氯化钙2.1-2.5mmol/L，磷酸二氢钾2.1-2.5mmol/L，氯化钠138-141mmol/L，氯化钾3-4mmol/L，碳酸氢钠3.5-4.2mmol/L，逐步称重后加入100ml氯化钠超声磁力搅拌，注最后加入氯化钙，溶液调节PH7.0-7.4，无菌真空滤器过滤制备矿化溶液，0°冰柜储存，随时备用；样品热处理：在真空马弗炉中室温至400-600℃，速率为1-5℃/min；保温2-4h，关闭电源，然后随炉降温，万古霉素加载：n-HA溶液分别与万古霉素5-10ug/ml；溶液混合通过物理气相沉积涂层钛板表面，浸泡在聚苯乙烯细胞培养板，室温37°培养箱内矿化24小时后，去除上清液，无菌环境自然室温晾干24小时后，将负载n-HA抗生素钛板氯化钠溶液冲洗3次后，应用氯化钠溶液促进释放，假体抗生素体外释放试验:将制备好的假体放到有3ml氯化钠溶液培养皿中，然后在不同时间点对氯化钠溶液进行万古霉素浓度测定，每次取样后重新更换3ml，氯化钠浸泡，分别在1h，24h，48h，72h，120h，196h，216h，240h用取样器吸取50ug置TDxFLx的样品盒中进行药物浓度的测定；万古霉素药物浓度测定：吸取药样标本或标准溶液或质控试液50ug，指样品盒中，放入全自动荧光偏振免疫分析仪中，自动检测，用万古霉素试剂盒做药液标准曲线，用标准曲线中的各自浓度的偏振误差值(PERR)和均方根误差值(RMSE)的大小判定标准曲线的合格与否，当PERR在-2-2，RMSE≤1时，视标准曲线合格，可用于药品标本测定。
钛金属板接骨板4.0cm×1.5cm大小，0.5cm厚，依次用500目金相砂纸进行打磨，然后放在10mol/L丙酮、70％乙醇、超声清洗，干燥备用；n-HA的制备：氯化钙2.3mmol/L，磷酸二氢钾2.3mmol/L，氯化钠135mmol/L，氯化钾3mmol/L，碳酸氢钠3.8mmol/L，逐步称重后加入100ml氯化钠超声磁力搅拌，注最后加入氯化钙，溶液调节PH7.0，无菌真空滤器过滤制备矿化溶液，0°冰柜储存，随时备用；样品热处理：在真空马弗炉中室温至400℃，速率为1℃/min；保温2h，关闭电源，然后随炉降温；庆大霉素加载：n-HA溶液分别与庆大霉素5ug/ml，溶液混合通过物理气相沉积，涂层钛板表面，浸泡在聚苯乙烯细胞培养板，室温36.5°培养箱内矿化24小时后，去除上清液，无菌环境自然室温晾干24小时后；将负载n-HA抗生素钛板氯化钠溶液冲洗3次后，应用氯化钠溶液促进释放，假体抗生素体外释放试验:将制备好的假体放到有3ml氯化钠溶液培养皿中，然后在不同时间点对氯化钠溶液进行庆大霉素浓度测定，每次取样后重新更换3ml，氯化钠浸泡，分别在1h，24h，48h，72h，120h，196h，216h，240h用取样器吸取50ug置TDxFLx的样品盒中进行药物浓度的测定。庆大霉素药物浓度测定：吸取药样标本或标准溶液或质控试液50ug，指样品盒中，放入全自动荧光偏振免疫分析仪中，自动检测，用庆大霉素标准试剂盒做药液标准曲线，用标准曲线中的各自浓度的偏振误差值(PERR)和均方根误差值(RMSE)的大小判定标准曲线的合格与否，当PERR在-2.0，RMSE0.1时，视标准曲线合格，可用于药品标本测定。
钛金属板接骨板4.0cm×1.5cm大小，0.5cm厚，依次用1000目金相砂纸进行打磨，然后放在15mol/L丙酮、75％乙醇、超声清洗，干燥备用；n-HA的制备：氯化钙2.5mmol/L，磷酸二氢钾2.5mmol/L，氯化钠141mmol/L，氯化钾4mmol/L，碳酸氢钠4.2mmol/L，逐步称重后加入100ml氯化钠超声磁力搅拌，注最后加入氯化钙，溶液调节PH7.4，无菌真空滤器过滤制备矿化溶液，0°冰柜储存，随时备用；样品热处理：在真空马弗炉中室温至600℃，速率为5℃/min；保温4h，关闭电源，然后随炉降温，庆大霉素加载：n-HA溶液分别与庆大霉素10ug/ml；溶液混合通过物理气相沉积，涂层钛板表面，浸泡在聚苯乙烯细胞培养板，室温37°培养箱内矿化24小时后，去除上清液，无菌环境自然室温晾干24小时后，将负载n-HA抗生素钛板氯化钠溶液冲洗3次后，应用氯化钠溶液促进释放，假体抗生素体外释放试验:将制备好的假体放到有3ml氯化钠溶液培养皿中，然后在不同时间点对氯化钠溶液进行庆大霉素浓度测定，每次取样后重新更换3ml，氯化钠浸泡，分别在1h，24h，48h，72h，120h，196h，216h，240h用取样器吸取50ug置TDxFLx的样品盒中进行药物浓度的测定。庆大霉素药物浓度测定：吸取药样标本或标准溶液或质控试液50ug，指样品盒中，放入全自动荧光偏振免疫分析仪中，自动检测，用庆大霉素试剂盒做药液标准曲线，用标准曲线中的各自浓度的偏振误差值(PERR)和均方根误差值(RMSE)的大小判定标准曲线的合格与否，当PERR在2.0，RMSE0.99时，视标准曲线合格，可用于药品标本测定。
钛金属接骨板4.0cm×1.5cm大小，0.5cm厚，依次用500目金相砂纸进行打磨，然后放在10mol/L丙酮、70％％乙醇、超声清洗，干燥备用；n-HA的制备：氯化钙2.1mmol/L，磷酸二氢钾2.1mmol/L，氯化钠138mmol/L，氯化钾3mmol/L，碳酸氢钠3.5mmol/L，逐步称重后加入100ml氯化钠超声磁力搅拌，注最后加入氯化钙，溶液调节PH7.0，无菌真空滤器过滤制备矿化溶液，0°冰柜储存，随时备用；样品热处理：在真空马弗炉中室温至400℃，速率为1℃/min；保温2，关闭电源，然后随炉降温，万古霉素加载：n-HA溶液分别与万古霉素5ug/ml；溶液混合通过物理气相沉积涂层钛板表面，浸泡在聚苯乙烯细胞培养板，室温37°培养箱内矿化24小时后，去除上清液，无菌环境自然室温晾干24小时后，将负载n-HA抗生素钛板氯化钠溶液冲洗3次后，应用氯化钠溶液促进释放，假体抗生素体外释放试验:将制备好的假体放到有3ml氯化钠溶液培养皿中，然后在不同时间点对氯化钠溶液进行万古霉素浓度测定，每次取样后重新更换3ml，氯化钠浸泡，分别在1h，24h，48h，72h，120h，196h，216h，240h用取样器吸取50ug置TDxFLx的样品盒中进行药物浓度的测定。万古霉素药物浓度测定：吸取药样标本或标准溶液或质控试液50ug，指样品盒中，放入全自动荧光偏振免疫分析仪中，自动检测，用万古霉素标准试剂盒做药液标准曲线，用标准曲线中的各自浓度的偏振误差值(PERR)和均方根误差值(RMSE)的大小判定标准曲线的合格与否，当PERR在-2.0，0.1时，视标准曲线合格，可用于药品标本测定。
钛金属接骨板4.0cm×1.5cm大小，0.5cm厚，依次用1000目金相砂纸进行打磨，然后放在15mol/L丙酮、75％乙醇、超声清洗，干燥备用；n-HA的制备：氯化钙2.5mmol/L，磷酸二氢钾2.5mmol/L，氯化钠141mmol/L，氯化钾4mmol/L，碳酸氢钠4.2mmol/L，逐步称重后加入100ml氯化钠超声磁力搅拌，注最后加入氯化钙，溶液调节PH7.4，无菌真空滤器过滤制备矿化溶液，0°冰柜储存，随时备用；样品热处理：在真空马弗炉中室温至600℃，速率为5℃/min；保温4h，关闭电源，然后随炉降温，万古霉素加载：n-HA溶液分别与万古霉素10ug/ml；溶液混合通过物理气相沉积涂层钛板表面，浸泡在聚苯乙烯细胞培养板，室温37°培养箱内矿化24小时后，去除上清液，无菌环境自然室温晾干24小时后，将负载n-HA抗生素钛板氯化钠溶液冲洗3次后，应用氯化钠溶液促进释放，假体抗生素体外释放试验:将制备好的假体放到有3ml氯化钠溶液培养皿中，然后在不同时间点对氯化钠溶液进行万古霉素浓度测定，每次取样后重新更换3ml，氯化钠浸泡，分别在1h，24h，48h，72h，120h，196h，216h，240h用取样器吸取50ug置TDxFLx的样品盒中进行药物浓度的测定；万古霉素药物浓度测定：吸取药样标本或标准溶液或质控试液50ug，指样品盒中，放入全自动荧光偏振免疫分析仪中，自动检测，用万古霉素标剂盒做药液标准曲线，用标准曲线中的各自浓度的偏振误差值(PERR)和均方根误差值(RMSE)的大小判定标准曲线的合格与否，当PERR在2.0，RMSE0.99时，视标准曲线合格，可用于药品标本测定。本发明具有以下优点：1、本发明利用纳米羟基磷灰石溶液配备与抗生素混合制备成混合溶液，利用生物矿化及共同沉淀技术将钛金属浸入制备的溶液中，将抗生素加入溶液，逐渐与羟基磷灰石矿化结晶，对药物的负载、释放过程进行检测；2、通过共同沉淀法将制备的纳米羟基磷灰石溶液与抗生素矿化涂层与钛金属表面，行程负载抗生素的钛金属涂层。用于预防骨科植入物导致的感染。通过控制药物的吸附和释放，从而促进植入物与骨折的愈合，最终达到骨科植入物的长期功能有效。
附图说明:图1体外释放药物浓度释放特性测试图表。
纵轴：浓度/微克毫升，横轴：天/小时。
此图的数据表明，本试验的体外释放药物浓度起效速度快,，在1h时就达到了最低抑菌浓度的范围(MIC 0.25μg·mL-1)。随时间的延长，药物能较长时间维持在稳定的治疗药物浓度范围5～10μg·mL-1。
对体外释放庆大霉素药物进行监测,，发现体外释放药物浓度在8d内比较稳定,，而药物浓度能够保持在5.0μg·mL-1以上,，符合治疗药物浓度设定。体外释放庆大霉素药物浓度合格。测试结果还说明，哈尔滨市第五医院与哈尔滨工业大学材料学院共同研制的羟基磷灰石复合庆大霉素涂层具有良好释放特性,，控制释放速度稳定。
具体实施方式:
首先对钛金属板预处理后，将制备的纳米羟基磷灰石溶液和已经选用的抗生素庆大霉素或者万古霉素通过生物矿化法，进而通过共同沉淀法在钛金属涂层中负载抗生素；所述预处理是通过对钛金属板表面进行打磨，然后依次丙酮、乙醇溶液中进行超声清洗，干燥；所述生物矿化：是一种利用制备纳米羟基磷灰石溶液，使生物分子来组装无机结构的高度自主调控的过程，共同沉淀法：将预处理的钛金属板浸入已经制备纳米羟基磷灰石溶液与抗生素组成的混合溶液中，在模拟人体温度37℃温箱，自然矿化24小时后提取上清液后即得生物矿化纳米复合抗生素涂层钛金属板。
例1、钛金属板接骨板4.0cm×1.5cm大小，0.5cm厚，依次用500目金相砂纸进行打磨，然后放在10mol/L丙酮、70％乙醇、超声清洗，干燥备用；n-HA的制备：氯化钙2.3mmol/L，磷酸二氢钾2.3mmol/L，氯化钠135mmol/L，氯化钾3mmol/L，碳酸氢钠3.8mmol/L，逐步称重后加入100ml氯化钠超声磁力搅拌，注最后加入氯化钙，溶液调节PH7.0，无菌真空滤器过滤制备矿化溶液，0°冰柜储存，随时备用；样品热处理：在真空马弗炉中室温至400℃，速率为1℃/min；保温2h，关闭电源，然后随炉降温；庆大霉素加载：n-HA溶液分别与庆大霉素5ug/ml，溶液混合通过物理气相沉积，涂层钛板表面，浸泡在聚苯乙烯细胞培养板，室温36.5°培养箱内矿化24小时后，去除上清液，无菌环境自然室温晾干24小时后；将负载n-HA抗生素钛板氯化钠溶液冲洗3次后，应用氯化钠溶液促进释放，假体抗生素体外释放试验:将制备好的假体放到有3ml氯化钠溶液培养皿中，然后在不同时间点对氯化钠溶液进行庆大霉素浓度测定，每次取样后重新更换3ml，氯化钠浸泡，分别在1h，24h，48h，72h，120h，196h，216h，240h用取样器吸取50ug置TDxFLx的样品盒中进行药物浓度的测定。庆大霉素药物浓度测定：吸取药样标本或标准溶液或质控试液50ug，指样品盒中，放入全自动荧光偏振免疫分析仪中，自动检测，用庆大霉素标准试剂盒做药液标准曲线，用标准曲线中的各自浓度的偏振误差值(PERR)和均方根误差值(RMSE)的大小判定标准曲线的合格与否，当PERR在-2.0，RMSE0.1时，视标准曲线合格，可用于药品标本测定。
例2、钛金属板接骨板4.0cm×1.5cm大小，0.5cm厚，依次用1000目金相砂纸进行打磨，然后放在15mol/L丙酮、75％乙醇、超声清洗，干燥备用；n-HA的制备：氯化钙2.5mmol/L，磷酸二氢钾2.5mmol/L，氯化钠141mmol/L，氯化钾4mmol/L，碳酸氢钠4.2mmol/L，逐步称重后加入100ml氯化钠超声磁力搅拌，注最后加入氯化钙，溶液调节PH7.4，无菌真空滤器过滤制备矿化溶液，0°冰柜储存，随时备用；样品热处理：在真空马弗炉中室温至600℃，速率为5℃/min；保温4h，关闭电源，然后随炉降温，庆大霉素加载：n-HA溶液分别与庆大霉素10ug/ml；溶液混合通过物理气相沉积，涂层钛板表面，浸泡在聚苯乙烯细胞培养板，室温37°培养箱内矿化24小时后，去除上清液，无菌环境自然室温晾干24小时后，将负载n-HA抗生素钛板氯化钠溶液冲洗3次后，应用氯化钠溶液促进释放，假体抗生素体外释放试验:将制备好的假体放到有3ml氯化钠溶液培养皿中，然后在不同时间点对氯化钠溶液进行庆大霉素浓度测定，每次取样后重新更换3ml，氯化钠浸泡，分别在1h，24h，48h，72h，120h，196h，216h，240h用取样器吸取50ug置TDxFLx的样品盒中进行药物浓度的测定。庆大霉素药物浓度测定：吸取药样标本或标准溶液或质控试液50ug，指样品盒中，放入全自动荧光偏振免疫分析仪中，自动检测，用庆大霉素试剂盒做药液标准曲线，用标准曲线中的各自浓度的偏振误差值(PERR)和均方根误差值(RMSE)的大小判定标准曲线的合格与否，当PERR在2.0，RMSE0.99时，视标准曲线合格，可用于药品标本测定。
例3、钛金属板接骨板4.0cm×1.5cm大小，0.5cm厚，依次用700目金相砂纸进行打磨，然后放在12mol/L丙酮、72％乙醇、超声清洗，干燥备用；n-HA的制备：氯化钙2.4mmol/L，磷酸二氢钾2.4mmol/L，氯化钠137mmol/L，氯化钾3.5mmol/L，碳酸氢钠4.0mmol/L，逐步称重后加入100ml氯化钠超声磁力搅拌，注最后加入氯化钙，溶液调节PH7.2，无菌真空滤器过滤制备矿化溶液，0°冰柜储存，随时备用；样品热处理：在真空马弗炉中室温至500℃，速率为2℃/min；保温3h，关闭电源，然后随炉降温，庆大霉素加载：n-HA溶液分别与庆大霉素7ug/ml；溶液混合通过物理气相沉积，涂层钛板表面，浸泡在聚苯乙烯细胞培养板，室温37°培养箱内矿化24小时后，去除上清液，无菌环境自然室温晾干24小时后，将负载n-HA抗生素钛板氯化钠溶液冲洗3次后，应用氯化钠溶液促进释放，假体抗生素体外释放试验:将制备好的假体放到有3ml氯化钠溶液培养皿中，然后在不同时间点对氯化钠溶液进行庆大霉素浓度测定，每次取样后重新更换3ml，氯化钠浸泡，分别在1h，24h，48h，72h，120h，196h，216h，240h用取样器吸取50ug置TDxFLx的样品盒中进行药物浓度的测定。庆大霉素药物浓度测定：吸取药样标本或标准溶液或质控试液50ug，指样品盒中，放入全自动荧光偏振免疫分析仪中，自动检测，用庆大霉素试剂盒做药液标准曲线，用标准曲线中的各自浓度的偏振误差值(PERR)和均方根误差值(RMSE)的大小判定标准曲线的合格与否，当PERR在-1.0，RMSE0.5时，视标准曲线合格，可用于药品标本测定。
例4、钛金属板接骨板4.0cm×1.5cm大小，0.5cm厚，依次用900目金相砂纸进行打磨，然后放在14mol/L丙酮、74％乙醇、超声清洗，干燥备用；n-HA的制备：氯化钙2.5mmol/L，磷酸二氢钾2.5mmol/L，氯化钠139mmol/L，氯化钾3.8mmol/L，碳酸氢钠4.1mmol/L，逐步称重后加入100ml氯化钠超声磁力搅拌，注最后加入氯化钙，溶液调节PH7.3，无菌真空滤器过滤制备矿化溶液，0°冰柜储存，随时备用；样品热处理：在真空马弗炉中室温至580℃，速率为4℃/min；保温3.5h，关闭电源，然后随炉降温，庆大霉素加载：n-HA溶液分别与庆大霉素9ug/ml；溶液混合通过物理气相沉积，涂层钛板表面，浸泡在聚苯乙烯细胞培养板，室温37°培养箱内矿化24小时后，去除上清液，无菌环境自然室温晾干24小时后，将负载n-HA抗生素钛板氯化钠溶液冲洗3次后，应用氯化钠溶液促进释放，假体抗生素体外释放试验:将制备好的假体放到有3ml氯化钠溶液培养皿中，然后在不同时间点对氯化钠溶液进行庆大霉素浓度测定，每次取样后重新更换3ml，氯化钠浸泡，分别在1h，24h，48h，72h，120h，196h，216h，240h用取样器吸取50ug置TDxFLx的样品盒中进行药物浓度的测定。庆大霉素药物浓度测定：吸取药样标本或标准溶液或质控试液50ug，指样品盒中，放入全自动荧光偏振免疫分析仪中，自动检测，用庆大霉素试剂盒做药液标准曲线，用标准曲线中的各自浓度的偏振误差值(PERR)和均方根误差值(RMSE)的大小判定标准曲线的合格与否，当PERR在-1.5，RMSE0.8时，视标准曲线合格，可用于药品标本测定。
例5、钛金属接骨板4.0cm×1.5cm大小，0.5cm厚，依次用500目金相砂纸进行打磨，然后放在10mol/L丙酮、70％％乙醇、超声清洗，干燥备用；n-HA的制备：氯化钙2.1mmol/L，磷酸二氢钾2.1mmol/L，氯化钠138mmol/L，氯化钾3mmol/L，碳酸氢钠3.5mmol/L，逐步称重后加入100ml氯化钠超声磁力搅拌，注最后加入氯化钙，溶液调节PH7.0，无菌真空滤器过滤制备矿化溶液，0°冰柜储存，随时备用；样品热处理：在真空马弗炉中室温至400℃，速率为1℃/min；保温2h，关闭电源，然后随炉降温，万古霉素加载：n-HA溶液分别与万古霉素5ug/ml；溶液混合通过物理气相沉积涂层钛板表面，浸泡在聚苯乙烯细胞培养板，室温37°培养箱内矿化24小时后，去除上清液，无菌环境自然室温晾干24小时后，将负载n-HA抗生素钛板氯化钠溶液冲洗3次后，应用氯化钠溶液促进释放，假体抗生素体外释放试验:将制备好的假体放到有3ml氯化钠溶液培养皿中，然后在不同时间点对氯化钠溶液进行万古霉素浓度测定，每次取样后重新更换3ml，氯化钠浸泡，分别在1h，24h，48h，72h，120h，196h，216h，240h用取样器吸取50ug置TDxFLx的样品盒中进行药物浓度的测定。万古霉素药物浓度测定：吸取药样标本或标准溶液或质控试液50ug，指样品盒中，放入全自动荧光偏振免疫分析仪中，自动检测，用万古霉素标准试剂盒做药液标准曲线，用标准曲线中的各自浓度的偏振误差值(PERR)和均方根误差值(RMSE)的大小判定标准曲线的合格与否，当PERR在-2.0，RMSE 0.1时，视标准曲线合格，可用于药品标本测定。
例6、钛金属接骨板4.0cm×1.5cm大小，0.5cm厚，依次用1000目金相砂纸进行打磨，然后放在15mol/L丙酮、75％乙醇、超声清洗，干燥备用；n-HA的制备：氯化钙2.5mmol/L，磷酸二氢钾2.5mmol/L，氯化钠141mmol/L，氯化钾4mmol/L，碳酸氢钠4.2mmol/L，逐步称重后加入100ml氯化钠超声磁力搅拌，注最后加入氯化钙，溶液调节PH7.4，无菌真空滤器过滤制备矿化溶液，0°冰柜储存，随时备用；样品热处理：在真空马弗炉中室温至600℃，速率为5℃/min；保温4h，关闭电源，然后随炉降温，万古霉素加载：n-HA溶液分别与万古霉素10ug/ml；溶液混合通过物理气相沉积涂层钛板表面，浸泡在聚苯乙烯细胞培养板，室温37°培养箱内矿化24小时后，去除上清液，无菌环境自然室温晾干24小时后，将负载n-HA抗生素钛板氯化钠溶液冲洗3次后，应用氯化钠溶液促进释放，假体抗生素体外释放试验:将制备好的假体放到有3ml氯化钠溶液培养皿中，然后在不同时间点对氯化钠溶液进行万古霉素浓度测定，每次取样后重新更换3ml，氯化钠浸泡，分别在1h，24h，48h，72h，120h，196h，216h，240h用取样器吸取50ug置TDxFLx的样品盒中进行药物浓度的测定；万古霉素药物浓度测定：吸取药样标本或标准溶液或质控试液50ug，指样品盒中，放入全自动荧光偏振免疫分析仪中，自动检测，用万古霉素标剂盒做药液标准曲线，用标准曲线中的各自浓度的偏振误差值(PERR)和均方根误差值(RMSE)的大小判定标准曲线的合格与否，当PERR在2.0，RMSE0.99时，视标准曲线合格，可用于药品标本测定。
例7、钛金属接骨板4.0cm×1.5cm大小，0.5cm厚，依次用700目金相砂纸进行打磨，然后放在12mol/L丙酮、72％％乙醇、超声清洗，干燥备用；n-HA的制备：氯化钙2.3mmol/L，磷酸二氢钾2.3mmol/L，氯化钠139mmol/L，氯化钾3.5mmol/L，碳酸氢钠3.8mmol/L，逐步称重后加入100ml氯化钠超声磁力搅拌，注最后加入氯化钙，溶液调节PH7.2，无菌真空滤器过滤制备矿化溶液，0°冰柜储存，随时备用；样品热处理：在真空马弗炉中室温至500℃，速率为2℃/min；保温3h，关闭电源，然后随炉降温，万古霉素加载：n-HA溶液分别与万古霉素6ug/ml；溶液混合通过物理气相沉积涂层钛板表面，浸泡在聚苯乙烯细胞培养板，室温37°培养箱内矿化24小时后，去除上清液，无菌环境自然室温晾干24小时后，将负载n-HA抗生素钛板氯化钠溶液冲洗3次后，应用氯化钠溶液促进释放，假体抗生素体外释放试验:将制备好的假体放到有3ml氯化钠溶液培养皿中，然后在不同时间点对氯化钠溶液进行万古霉素浓度测定，每次取样后重新更换3ml，氯化钠浸泡，分别在1h，24h，48h，72h，120h，196h，216h，240h用取样器吸取50ug置TDxFLx的样品盒中进行药物浓度的测定。万古霉素药物浓度测定：吸取药样标本或标准溶液或质控试液50ug，指样品盒中，放入全自动荧光偏振免疫分析仪中，自动检测，用万古霉素标准试剂盒做药液标准曲线，用标准曲线中的各自浓度的偏振误差值(PERR)和均方根误差值(RMSE)的大小判定标准曲线的合格与否，当PERR在1.0，RMSE 0.5时，视标准曲线合格，可用于药品标本测定。
例8、钛金属接骨板4.0cm×1.5cm大小，0.5cm厚，依次用900目金相砂纸进行打磨，然后放在14mol/L丙酮、74％％乙醇、超声清洗，干燥备用；n-HA的制备：氯化钙2.4mmol/L，磷酸二氢钾2.4mmol/L，氯化钠140mmol/L，氯化钾4.0mmol/L，碳酸氢钠4.0mmol/L，逐步称重后加入100ml氯化钠超声磁力搅拌，注最后加入氯化钙，溶液调节PH7.3，无菌真空滤器过滤制备矿化溶液，0°冰柜储存，随时备用；样品热处理：在真空马弗炉中室温至550℃，速率为4℃/min；保温3.5h，关闭电源，然后随炉降温，万古霉素加载：n-HA溶液分别与万古霉素8ug/ml；溶液混合通过物理气相沉积涂层钛板表面，浸泡在聚苯乙烯细胞培养板，室温37°培养箱内矿化24小时后，去除上清液，无菌环境自然室温晾干24小时后，将负载n-HA抗生素钛板氯化钠溶液冲洗3次后，应用氯化钠溶液促进释放，假体抗生素体外释放试验:将制备好的假体放到有3ml氯化钠溶液培养皿中，然后在不同时间点对氯化钠溶液进行万古霉素浓度测定，每次取样后重新更换3ml，氯化钠浸泡，分别在1h，24h，48h，72h，120h，196h，216h，240h用取样器吸取50ug置TDxFLx的样品盒中进行药物浓度的测定。万古霉素药物浓度测定：吸取药样标本或标准溶液或质控试液50ug，指样品盒中，放入全自动荧光偏振免疫分析仪中，自动检测，用万古霉素标准试剂盒做药液标准曲线，用标准曲线中的各自浓度的偏振误差值(PERR)和均方根误差值(RMSE)的大小判定标准曲线的合格与否，当PERR在1.5，RMSE 0.8时，视标准曲线合格，可用于药品标本测定。

Claims (7)

1.一种生物矿化纳米复合抗生素涂层钛金属板表面的制备方法，其特征在于：首先对钛金属板预处理后，将制备的纳米羟基磷灰石溶液和已经选用的抗生素通过生物矿化法，进而通过共同沉淀法在钛金属涂层中负载抗生素；所述预处理是通过对钛金属板表面进行打磨，然后依次丙酮、乙醇溶液中进行超声清洗，干燥；所述生物矿化：是一种利用制备纳米羟基磷灰石溶液，使生物分子来组装无机结构的高度自主调控的过程，共同沉淀法：将预处理的钛金属板浸入已经制备纳米羟基磷灰石溶液与抗生素组成的混合溶液中，在模拟人体温度37℃温箱，自然矿化24小时后提取上清液后即得生物矿化纳米复合抗生素涂层钛金属板。
2.根据权利要求1所述的一种生物矿化纳米复合抗生素涂层钛金属板表面的制备方法，其特征在于：钛金属接骨板4.0cm×1.cm大小，0.5cm厚，依次用500-1000目金相砂纸进行打磨，然后放在10-15mol/L丙酮、70％-75％乙醇、超声清洗，干燥备用；n-HA的制备：氯化钙2.3-2.5mmol/L，磷酸二氢钾2.3-2.5mmol/L，氯化钠135-141mmol/L，氯化钾3-4mmol/L，碳酸氢钠3.8-4.2mmol/L，逐步称重后加入100ml氯化钠超声磁力搅拌，注最后加入氯化钙，溶液调节PH7.0-7.4，无菌真空滤器过滤制备矿化溶液，0°冰柜储存，随时备用；样品热处理：在真空马弗炉中室温至400-600℃，速率为1-5℃/min；保温2-4h，关闭电源，然后随炉降温，庆大霉素加载：n-HA溶液分别与庆大霉素5-10ug/ml；溶液混合通过物理气相沉积，涂层钛板表面，浸泡在聚苯乙烯细胞培养板，室温36.5-37°培养箱内矿化24小时后，去除上清液，无菌环境自然室温晾干24小时后，将负载n-HA抗生素钛板氯化钠溶液冲洗3次后，应用氯化钠溶液促进释放，假体抗生素体外释放试验:将制备好的假体放到有3ml氯化钠溶液培养皿中，然后在不同时间点对氯化钠溶液进行庆大霉素浓度测定，每次取样后重新更换3ml，氯化钠浸泡，分别在1h，24h，48h，72h，120h，196h，216h，240h用取样器吸取50ug置TDxFLx的样品盒中进行药物浓度的测定。庆大霉素药物浓度测定：吸取药样标本或标准溶液或质控试液50ug，指样品盒中，放入全自动荧光偏振免疫分析仪中，自动检测，用标准试剂盒做药液标准曲线，用标准曲线中的各自浓度的偏振误差值(PERR)和均方根误差值(RMSE)的大小判定标准曲线的合格与否，当PERR在-2-2，RMSE≤1时，视标准曲线合格，可用于药品标本测定。
3.根据权利要求1所述的一种生物矿化纳米复合抗生素涂层钛金属板表面的制备方法，其特征在于：钛金属接骨板4.0cm×1.5cm大小，0.5cm厚，依次用500-1000目金相砂纸进行打磨，然后放在10-15mol/L丙酮、70％-75％乙醇、超声清洗，干燥备用；n-HA的制备：氯化钙2.1-2.5mmol/L，磷酸二氢钾2.1-2.5mmol/L，氯化钠138-141mmol/L，氯化钾3-4mmol/L，碳酸氢钠3.5-4.2mmol/L，逐步称重后加入100ml氯化钠超声磁力搅拌，注最后加入氯化钙，溶液调节PH7.0-7.4，无菌真空滤器过滤制备矿化溶液，0°冰柜储存，随时备用；样品热处理：在真空马弗炉中室温至400-600℃，速率为1-5℃/min；保温2-4h，关闭电源，然后随炉降温，万古霉素加载：n-HA溶液分别与万古霉素5-10ug/ml；溶液混合通过物理气相沉积涂层钛板表面，浸泡在聚苯乙烯细胞培养板，室温37°培养箱内矿化24小时后，去除上清液，无菌环境自然室温晾干24小时后，将负载n-HA抗生素钛板氯化钠溶液冲洗3次后，应用氯化钠溶液促进释放，假体抗生素体外释放试验:将制备好的假体放到有3ml氯化钠溶液培养皿中，然后在不同时间点对氯化钠溶液进行万古霉素浓度测定，每次取样后重新更换3ml，氯化钠浸泡，分别在1h，24h，48h，72h，120h，196h，216h，240h用取样器吸取50ug置TDxFLx的样品盒中进行药物浓度的测定；万古霉素药物浓度测定：吸取药样标本或标准溶液或质控试液50ug，指样品盒中，放入全自动荧光偏振免疫分析仪中，自动检测，用万古霉素试剂盒做药液标准曲线，用标准曲线中的各自浓度的偏振误差值(PERR)和均方根误差值(RMSE)的大小判定标准曲线的合格与否，当PERR在-2-2，RMSE≤1时，视标准曲线合格，可用于药品标本测定。
4.一种生物矿化纳米复合抗生素涂层钛金属表面的制备方法，其特征在于：钛金属板接骨板4.0cm×1.5cm大小，0.5cm厚，依次用500目金相砂纸进行打磨，然后放在10mol/L丙酮、70％乙醇、超声清洗，干燥备用；n-HA的制备：氯化钙2.3mmol/L，磷酸二氢钾2.3mmol/L，氯化钠135mmol/L，氯化钾3mmol/L，碳酸氢钠3.8mmol/L，逐步称重后加入100ml氯化钠超声磁力搅拌，注最后加入氯化钙，溶液调节PH7.0，无菌真空滤器过滤制备矿化溶液，0°冰柜储存，随时备用；样品热处理：在真空马弗炉中室温至400℃，速率为1℃/min；保温2h，关闭电源，然后随炉降温；庆大霉素加载：n-HA溶液分别与庆大霉素5ug/ml，溶液混合通过物理气相沉积，涂层钛板表面，浸泡在聚苯乙烯细胞培养板，室温36.5°培养箱内矿化24小时后，去除上清液，无菌环境自然室温晾干24小时后；将负载n-HA抗生素钛板氯化钠溶液冲洗3次后，应用氯化钠溶液促进释放，假体抗生素体外释放试验:将制备好的假体放到有3ml氯化钠溶液培养皿中，然后在不同时间点对氯化钠溶液进行庆大霉素浓度测定，每次取样后重新更换3ml，氯化钠浸泡，分别在1h，24h，48h，72h，120h，196h，216h，240h用取样器吸取50ug置TDxFLx的样品盒中进行药物浓度的测定。庆大霉素药物浓度测定：吸取药样标本或标准溶液或质控试液50ug，指样品盒中，放入全自动荧光偏振免疫分析仪中，自动检测，用庆大霉素标准试剂盒做药液标准曲线，用标准曲线中的各自浓度的偏振误差值(PERR)和均方根误差值(RMSE)的大小判定标准曲线的合格与否，当PERR在-2.0，RMSE0.1时，视标准曲线合格，可用于药品标本测定。
5.根据权利要求1所述的一种生物矿化纳米复合抗生素涂层钛金属板表面的制备方法，其特征在于：钛金属板接骨板4.0cm×1.5cm大小，0.5cm厚，依次用1000目金相砂纸进行打磨，然后放在15mol/L丙酮、75％乙醇、超声清洗，干燥备用；n-HA的制备：氯化钙2.5mmol/L，磷酸二氢钾2.5mmol/L，氯化钠141mmol/L，氯化钾4mmol/L，碳酸氢钠4.2mmol/L，逐步称重后加入100ml氯化钠超声磁力搅拌，注最后加入氯化钙，溶液调节PH7.4，无菌真空滤器过滤制备矿化溶液，0°冰柜储存，随时备用；样品热处理：在真空马弗炉中室温至600℃，速率为5℃/min；保温4h，关闭电源，然后随炉降温，庆大霉素加载：n-HA溶液分别与庆大霉素10ug/ml；溶液混合通过物理气相沉积，涂层钛板表面，浸泡在聚苯乙烯细胞培养板，室温37°培养箱内矿化24小时后，去除上清液，无菌环境自然室温晾干24小时后，将负载n-HA抗生素钛板氯化钠溶液冲洗3次后，应用氯化钠溶液促进释放，假体抗生素体外释放试验:将制备好的假体放到有3ml氯化钠溶液培养皿中，然后在不同时间点对氯化钠溶液进行庆大霉素浓度测定，每次取样后重新更换3ml，氯化钠浸泡，分别在1h，24h，48h，72h，120h，196h，216h，240h用取样器吸取50ug置TDxFLx的样品盒中进行药物浓度的测定。庆大霉素药物浓度测定：吸取药样标本或标准溶液或质控试液50ug，指样品盒中，放入全自动荧光偏振免疫分析仪中，自动检测，用庆大霉素试剂盒做药液标准曲线，用标准曲线中的各自浓度的偏振误差值(PERR)和均方根误差值(RMSE)的大小判定标准曲线的合格与否，当PERR在2.0，RMSE0.99时，视标准曲线合格，可用于药品标本测定。
6.根据权利要求1所述的一种生物矿化纳米复合抗生素涂层钛金属板表面的制备方法，其特征在于：钛金属接骨板4.0cm×1.5cm大小，0.5cm厚，依次用500目金相砂纸进行打磨，然后放在10mol/L丙酮、70％％乙醇、超声清洗，干燥备用；n-HA的制备：氯化钙2.1mmol/L，磷酸二氢钾2.1mmol/L，氯化钠138mmol/L，氯化钾3mmol/L，碳酸氢钠3.5mmol/L，逐步称重后加入100ml氯化钠超声磁力搅拌，注最后加入氯化钙，溶液调节PH7.0，无菌真空滤器过滤制备矿化溶液，0°冰柜储存，随时备用；样品热处理：在真空马弗炉中室温至400℃，速率为1℃/min；保温2h，关闭电源，然后随炉降温，万古霉素加载：n-HA溶液分别与万古霉素5ug/ml；溶液混合通过物理气相沉积涂层钛板表面，浸泡在聚苯乙烯细胞培养板，室温37°培养箱内矿化24小时后，去除上清液，无菌环境自然室温晾干24小时后，将负载n-HA抗生素钛板氯化钠溶液冲洗3次后，应用氯化钠溶液促进释放，假体抗生素体外释放试验:将制备好的假体放到有3ml氯化钠溶液培养皿中，然后在不同时间点对氯化钠溶液进行万古霉素浓度测定，每次取样后重新更换3ml，氯化钠浸泡，分别在1h，24h，48h，72h，120h，196h，216h，240h用取样器吸取50ug置TDxFLx的样品盒中进行药物浓度的测定。万古霉素药物浓度测定：吸取药样标本或标准溶液或质控试液50ug，指样品盒中，放入全自动荧光偏振免疫分析仪中，自动检测，用万古霉素标准试剂盒做药液标准曲线，用标准曲线中的各自浓度的偏振误差值(PERR)和均方根误差值(RMSE)的大小判定标准曲线的合格与否，当PERR在-2.0，0.1时，视标准曲线合格，可用于药品标本测定。
7.根据权利要求1所述的一种生物矿化纳米复合抗生素涂层钛金属板表面的制备方法，其特征在于：钛金属接骨板4.0cm×1.5cm大小，0.5cm厚，依次用1000目金相砂纸进行打磨，然后放在15mol/L丙酮、75％乙醇、超声清洗，干燥备用；n-HA的制备：氯化钙2.5mmol/L，磷酸二氢钾2.5mmol/L，氯化钠141mmol/L，氯化钾4mmol/L，碳酸氢钠4.2mmol/L，逐步称重后加入100ml氯化钠超声磁力搅拌，注最后加入氯化钙，溶液调节PH7.4，无菌真空滤器过滤制备矿化溶液，0°冰柜储存，随时备用；样品热处理：在真空马弗炉中室温至600℃，速率为5℃/min；保温4h，关闭电源，然后随炉降温，万古霉素加载：n-HA溶液分别与万古霉素10ug/ml；溶液混合通过物理气相沉积涂层钛板表面，浸泡在聚苯乙烯细胞培养板，室温37°培养箱内矿化24小时后，去除上清液，无菌环境自然室温晾干24小时后，将负载n-HA抗生素钛板氯化钠溶液冲洗3次后，应用氯化钠溶液促进释放，假体抗生素体外释放试验:将制备好的假体放到有3ml氯化钠溶液培养皿中，然后在不同时间点对氯化钠溶液进行万古霉素浓度测定，每次取样后重新更换3ml，氯化钠浸泡，分别在1h，24h，48h，72h，120h，196h，216h，240h用取样器吸取50ug置TDxFLx的样品盒中进行药物浓度的测定；万古霉素药物浓度测定：吸取药样标本或标准溶液或质控试液50ug，指样品盒中，放入全自动荧光偏振免疫分析仪中，自动检测，用万古霉素标剂盒做药液标准曲线，用标准曲线中的各自浓度的偏振误差值(PERR)和均方根误差值(RMSE)的大小判定标准曲线的合格与否，当PERR在2.0，RMSE0.99时，视标准曲线合格，可用于药品标本测定。
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