CN107641650B

CN107641650B - Nr1h3在急性髓系白血病精准靶向检测及预后评估中的应用

Info

Publication number: CN107641650B
Application number: CN201710736747.7A
Authority: CN
Inventors: 石金龙; 付林; 王卫东; 付华平
Original assignee: Chinese PLA General Hospital
Current assignee: Chinese PLA General Hospital
Priority date: 2017-08-24
Filing date: 2017-08-24
Publication date: 2020-05-08
Anticipated expiration: 2037-08-24
Also published as: CN107641650A

Abstract

本发明涉及一种NR1H3在急性髓系白血病精准靶向检测及预后评估中的应用，本发明通过计算机算法及生物学实验验证，NR1H3基因是血液系统恶性肿瘤、白血病、特别是急性髓系白血病的独立危险因素，可以用于单独或与其他标记物一起在疾病精准分层诊断和预后评估中发挥重大作用，也可为临床治疗提供决策支持，为选择或确定治疗方案提供依据。

Description

NR1H3在急性髓系白血病精准靶向检测及预后评估中的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及血液系统恶性肿瘤、白血病，特别是急性髓系白血病相关的基因检测，急性髓系白血病的危险度分层或临床预后评估，特别是涉及成人急性髓系白血病的基因检测、基因芯片和试剂盒。

背景技术

一直以来，癌症都是仅次于心血管疾病的主要致死因素，有预计表明，癌症终将会超过心血管疾病，成为人类的第一大致死因素。因此，现代医学一直致力于癌症治疗和诊断相关的科学研究。

血液包括红细胞、白细胞、血小板，其中，红细胞的主要功能是携带及运输氧气、白细胞的主要功能是免疫防御、血小板的主要功能是在受伤后协助血液凝结。在血液中任何细胞的异常情况均可能导致血液系统恶性肿瘤，即白血病的产生。白血病是一类造血干细胞恶性增殖性的疾病，其起因于增殖失控、分化障碍、凋亡受阻等机制，导致克隆性白血病细胞在骨髓和其他造血组织中大量增殖累积，并浸润其他非造血组织和器官，同时抑制正常造血功能。常见白血病的主要种类包括：急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性髓系白血病、慢性髓系白血病等。

急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia)是髓系造血干/祖细胞恶性疾病，是一种异质性极强的恶性血液病，发病率约占成人急性白血病的80％，其主要特征为骨髓与外周血中原始和幼稚髓系细胞异常增生。

急性髓系白血病一个最重要的特点是预后具有高度的异质性。在美国国立综合癌症网络(NationalComprehensive Cancer Network,NCCN)的危险度分层指南中，约有一半以上的急性髓系白血病被分在中危组。因此，现代医学亟需找到用于急性髓系白血病危险度分层和临床预后评估的有效标志物。

虽然，现有技术中公开了急性髓系白血病的一些致病相关的基因突变，这些基因突变可能作为患者危险度分层和临床预后评估的标志物，但仍需通过大量的计算机算法及生物学实验才能验证。

例如，现有技术WHITMAN S P,MAHARRY K,RADMACHERM D,et al.FLT3internaltandem duplication associates with adverse outcome and gene-and microRNA-expression signatures in patients 60years of age or older with primarycytogenetically normal acute myeloid leukemia:a Cancer and Leukemia Group Bstudy[J].Blood,2010,116(18):3622-6公开了将携带FLT3-ITD基因的正常核型急性髓系白血病患者定义为高危组，现有技术DOHNER K,SCHLENK R F,HABDANK M,etal.Mutantnucleophosmin(NPM1)predicts favorable prognosis in younger adultswith acute myeloid leukemia and normal cytogenetics:interaction with othergene mutation[J].Blood,2005,106(12):3740-6公开了将携带NPM1突变的患者定义为相对较低的危险度和较好预后，现有技术PASTORE F,KLING D,HOSTER E,etal.Long-termfollow-up of cytogenetically normal CEBPA-mutated AML[J].Journal ofhematology&oncology,2014,7公开了将携带CEBPA双突变的患者定义为相对较低的危险度和较好预后。现有技术CN104508143A公开了用于诊断、预测、治疗和处理急性髓系白血病的方法，该方法分析从所述患者分离的遗传样品是否存在细胞遗传学异常，以及在基因FLT3、NPMI、DNMT3A、NRAS、CEBPA、TET2、WTI、IDHI、IDH2、KIT、RUNXI、MLL-PTD、ASXLI、PHF6、KRAS、PTEN、P53、HRAS和EZH2中的至少一者中是否存在突变，用于预测患有急性髓系白血病患者的生存率。

综上，在现代医学领域的精准治疗强烈需求的驱动下，亟待找到有效的急性髓系白血病患者预后标志物来确定此类患者治疗的强度，以实现精准的个体化治疗，避免一部分预后良好的患者治疗强度过大，带来众多不必要的并发症，同样也避免另一部分预后不良的患者治疗强度不足，最终导致白血病复发。这些标志物的发现和验证将为更加有效的治疗急性髓系白血病及预后评估提供帮助。

发明内容

本发明的目的是提供一种敏感性高，通用性好，特异性强的标志物，来检测成人(<60岁)急性髓系白血病细胞或组织样品，来辅助判断成人急性髓系白血病患者的危险度分层或临床预后评估或为临床治疗提供决策支持，是基于以下的考虑：(1)基因突变不能覆盖所有的急性髓系白血病，而基因表达可以覆盖所有的急性髓系白血病患者；(2)急性髓系白血病发生、发展的分子机理目前仍不清楚，寻求新的临床预后标志物有助于理解急性髓系白血病的发病机理，并且能为急性髓系白血病的精准靶向治疗奠定基础。

本发明人发现NR1H3高表达的急性髓系白血病患者具有较高的危险度分层和较差的临床预后，NR1H3低表达的急性髓系白血病患者具有较低的危险度分层和较好的临床预后。因此，本发明提供NR1H3作为标志物，用来诊断成人急性髓系白血病患病与否或患病风险度或检测成人急性髓系白血病危险度分层或成人急性髓系白血病预后评估或为临床治疗提供决策支持，其敏感性高，通用性好，特异性强，因此能用来制备用于诊断成人急性髓系白血病患病与否或成人急性髓系白血病危险度分层或临床预后评估或为临床治疗提供决策支持的基因芯片或试剂盒，帮助诊断是否患有成人急性髓系白血病或成人急性髓系白血病患者的危险度分层或临床预后评估或为临床治疗提供决策支持。在本发明中“成人”指年龄小于60岁的成人。

一方面，本发明提供一种用于诊断成人急性髓系白血病患病与否或患病风险度或检测成人急性髓系白血病危险度分层或成人急性髓系白血病预后评估或为临床治疗提供决策支持的试剂盒。

在一个优选的技术方案中，所述试剂盒中包含NR1H3基因的检测物。

在一个更优选的技术方案中，所述的NR1H3基因的检测物为NR1H3基因的引物对和/或探针，所述的引物对和/或探针的序列为以下任一项所示：(1)SEQ ID NO：2和SEQ IDNO：3；(2)SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5；(3)SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7；(4)SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9；(5)SEQ ID NO：10或其互补序列；(6)SEQ ID NO：11或其互补序列；(7)SEQ IDNO：12或其互补序列。

在一个更优选的技术方案中，本发明所提供的试剂盒还包括实现如下功能的模块：

(1)在成人急性髓系白血病患者的样本组中检测NR1H3基因的表达量，取样本组表达量中位值，将患者分为NR1H3基因低表达组和NR1H3基因高表达组；

(2)将NR1H3基因低表达组定义为急性髓系白血病预后低风险组，将NR1H3基因高表达组定义为急性髓系白血病预后中高风险组。

第二方面，本发明提供一种用于诊断成人急性髓系白血病患病与否或患病风险度或用于检测成人急性髓系白血病危险度分层或成人急性髓系白血病预后评估或为临床治疗提供决策支持的芯片。

在一个优选的技术方案中，所述芯片固定有NR1H3基因的检测物。

在一个更优选的技术方案中，本发明所提供的芯片还包括实现如下功能的模块：

第三方面，本发明还提供一种核酸或者核酸组合物，特征在于：(1)所述的核酸或者核酸组合物为NR1H3基因的检测物，其序列为以下任一项所示：1)SEQ ID NO：2和SEQ IDNO：3；2)SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5；3)SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7；4)SEQ ID NO：8和SEQID NO：9；或，(2)其为NR1H3基因的探针：1)序列为SEQ ID NO：10或其互补序列；2)SEQ IDNO：11或其互补序列；3)SEQ ID NO：12或其互补序列。

第四方面，本发明还提供一种组合物，所述的组合物为MAP7、CPNE3、CPT1A、NR1H3和/或TSEN34基因的检测物组成的组。

进一步的，本发明还提供NR1H3基因的检测物的用途，所述检测物的用途是：

(1)制备用于诊断成人急性髓系白血病患病与否或患病风险度或检测成人急性髓系白血病危险度分层或成人急性髓系白血病预后评估或为临床治疗提供决策支持的产品；

或，(2)制备用于诊断成人急性髓系白血病患病与否或患病风险度或检测成人急性髓系白血病危险度分层或成人急性髓系白血病预后评估或为临床治疗提供决策支持的芯片；

或，(3)制备用于诊断成人急性髓系白血病患病与否或患病风险度或检测成人急性髓系白血病危险度分层或成人急性髓系白血病预后评估或为临床治疗提供决策支持的试剂盒；

或，(4)制备用于诊断成人急性髓系白血病患病与否或患病风险度或检测成人急性髓系白血病危险度分层或成人急性髓系白血病预后评估或为临床治疗提供决策支持的检测物、制剂或药物。

本发明所提供的NR1H3基因的检测物的用途，包含如下所示的核酸或者核酸组合物的用途：1)SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3；2)SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5；3)SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7；4)SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9；5)SEQ ID NO：10或其互补序列；6)SEQ IDNO：11或其互补序列；7)SEQ ID NO：12或其互补序列。

在很多方面能利用成人急性髓系白血病细胞或组织中NR1H3表达高低的检测和鉴定信息。例如，NR1H3基因表达谱(或个体基因)允许筛选抑制成人急性髓系白血病表达谱或将不良预后谱转变成更好的预后谱的药物候选物。

在本发明的一个具体实施方案中，提供一种检测成人急性髓系白血病细胞或组织中NR1H3基因表达高低的方法，特征在于，使用NR1H3基因的引物。

附图说明

图1所示是NR1H3基因在AML和正常人的CD34+细胞中的差异表达。

图2所示是NR1H3基因在全部AML患者组织样品中的预后分析。

其中，图2A所示是在全部AML患者中对NR1H3基因表达水平进行总生存率分析。纵坐标是总生存率，横坐标是生存时间(月)。

其中，图2B所示是在全部AML患者中对NR1H3基因表达水平进行无事件生存率分析。纵坐标是无事件生存率，横坐标是生存时间(月)。

图3所示是NR1H3基因在全部AML患者NCCN中危组中的预后分析。

其中，图3A所示是在全部AML患者NCCN中危组中对NR1H3基因表达水平进行总生存率分析。纵坐标是总生存率，横坐标是生存时间(月)。

其中，图3B所示是在全部AML患者NCCN中危组中对NR1H3基因表达水平进行无事件生存率分析。纵坐标是无事件生存率，横坐标是生存时间(月)。

图4所示是NR1H3基因在全部CN-AML患者中的预后分析。

其中，图4A所示是在全部CN-AML患者中对NR1H3基因表达水平进行总生存率分析。纵坐标是总生存率，横坐标是生存时间(月)。

其中，图4B所示是在全部CN-AML患者中对NR1H3基因表达水平进行无事件生存率分析。纵坐标是无事件生存率，横坐标是生存时间(月)。

图5所示是NR1H3基因在全部CN-AML患者ELN中危-I组中的预后分析。

其中，图5A所示是在全部CN-AML患者ELN中危-I组中对NR1H3基因表达水平进行总生存率分析。纵坐标是总生存率，横坐标是生存时间(月)。

其中，图5B所示是在全部CN-AML患者ELN中危-I组中对NR1H3基因表达水平进行无事件生存率分析。纵坐标是无事件生存率，横坐标是生存时间(月)。

图6所示是NR1H3基因在成人AML患者组织样品中的预后分析。

其中，6A所示是在成人AML患者中对NR1H3基因表达水平进行总生存率分析。纵坐标是总生存率，横坐标是生存时间(月)。

其中，6B所示是在成人AML患者中对NR1H3基因表达水平进行无事件生存率分析。纵坐标是无事件生存率，横坐标是生存时间(月)。

图7所示是NR1H3基因在成人AML患者NCCN中危组组织样品中的预后分析。

其中，图7A所示是在成人AML患者NCCN中危组中对NR1H3基因表达水平进行总生存率分析。纵坐标是总生存率，横坐标是生存时间(月)。

其中，图7B所示是在成人AML患者NCCN中危组中对NR1H3基因表达水平进行无事件生存率分析。纵坐标是无事件生存率，横坐标是生存时间(月)。

图8所示是NR1H3基因在成人CN-AML患者中的预后分析。

其中，图8A所示是在成人CN-AML患者中对NR1H3基因表达水平进行总生存率分析。纵坐标是总生存率，横坐标是生存时间(月)。

其中，图8B所示是在成人CN-AML患者中对NR1H3基因表达水平进行无事件生存率分析。纵坐标是无事件生存率，横坐标是生存时间(月)。

图9所示是NR1H3基因在成人CN-AML患者ELN中危-I组中的预后分析。

其中，图9A所示是在成人CN-AML患者ELN中危-I组中对NR1H3基因表达水平进行总生存率分析。纵坐标是总生存率，横坐标是生存时间(月)。

其中，图9B所示是在成人CN-AML患者ELN中危-I组中对NR1H3基因表达水平进行无事件生存率分析。纵坐标是无事件生存率，横坐标是生存时间(月)。

具体实施方式

实施例1 NR1H3基因在AML和正常人的CD34+细胞中的差异表达

数据集：利用IlluminaBeadChip Arrays(HT12v3)芯片的77例AML患者数据。

1、采集AML患者的骨髓组织，对每份组织样本筛选CD34+细胞，共获得46例AML患者CD34+细胞。

2、采集健康供者的骨髓组织，对每份组织样本筛选CD34+细胞，作为阴性对照，共获得31例正常人的CD34+细胞。

3、利用IlluminaBeadChip Arrays(HT12v3)芯片检测NR1H3基因在46例AML患者的CD34+细胞和31例健康供者的CD34+细胞中的表达水平，结果见图1。

结果：NR1H3基因在46例AML患者的CD34+细胞中的表达均值为9.266，NR1H3基因在31例健康供者的CD34+细胞中的表达均值为8.168，P＜0.001。上述结果显示，NR1H3在AML患者样本中显著高表达，可以用于AML的诊断和检测。

实施例2筛选与成人急性髓系白血病诊断及预后评估相关的基因

数据集：利用Affymetrix Human Genome U133Plus 2.0Array芯片获得具有随访信息的344例急性髓系白血病(AML)的全基因组表达谱数据。

以Affymetrix Human Genome U133Plus 2.0Array芯片作为筛选对象，该芯片中共有344例成人急性髓系白血病患者的基因的表达谱实验数据。通过R语言进行分析整合，寻找与急性髓系白血病诊断及预后评估相关的基因。

以整个患者样本群体的基因表达中位值为基础，将成人急性髓系白血病患者样本分成两组，将高于中位值的患者定义为该基因高表达的群体，将低于中位值的患者定义为该基因低表达的群体，比较这两组成人急性髓系白血病患者的总体生存率和无事件发生生存率。经统计，如果P值小于0.05，则认为该基因与成人急性髓系白血病患者的预后相关。通过比较分析，得到如下与成人急性髓系白血病患者的预后相关的几组基因，MAP7、CPNE3、CPT1A、NR1H3及TSEN34。

实施例3总RNA的提取

1、采集患者骨髓5ml，置于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中抗凝，加入FicoII-Hypaque淋巴细胞分离液，应用密度梯度离心法提取单个核细胞。

2、裂解细胞：向收集的细胞沉淀中加入1ml的QIAZOL试剂，振荡器震荡混匀，室温作用15分钟以上使其充分裂解。若加入QIAZOL试剂后不能立刻提取RNA，可将其放入-20℃保存，短期内可用。

3、按照氯仿:QIAZOL体积比为1:4的比例，加入约300μl氯仿，上下颠倒混匀1分钟，室温静置5-10分钟，低温离心：4℃，12600rpm离心10分钟。

4、离心完毕后，EP管内液体分三层，上层为含有RNA的上清液，中下层为DNA和蛋白质。然后，将上清液转移至新的EP管中，并加入等体积的异丙醇，上下颠倒混匀，低温静置10分钟，离心：4℃，12600rpm离心15分钟。

5、弃上清，白色沉淀即为RNA，加入1ml的75％乙醇(DEPC水配制)，轻轻颠倒混匀，常温离心：8000rpm离心5分钟。

6、溶解RNA：去上清，并将EP管倒扣于吸水纸上，吸干管口。再于离心机上空甩几秒，用加样枪将剩余的酒精全部吸出，风干3-5分钟。加入一定体积的无核酸酶的水溶解RNA。

7、紫外分光光度计检测RNA浓度。提取得到的RNA放-20℃保存，一个月内可用；置于-80℃则可保存相对较长时间。

实验操作中，与RNA提取及检测有关的微量移液器、Tip枪尖、EP管等均需经过无RNase处理。

实施例4 RNA反转录

1、按照表1配制反转录体系，总反应体积为25μl(总RNA量为1μg)。以下操作均在冰上进行：

表1反转录体系的配制

2、将以上各反应组分配制到0.2ml的PCR反应管中后，放入PCR仪中进行逆转录反应，程序为37℃，2h；4℃，forever。反应结束后得到的产物即为cDNA，将反应产物取出后放于-20℃保存待用。

为验证NR1H3基因的表达，采用4对不同的PCR引物进行实时荧光定量PCR，分别为实施例5-8。

实施例5实时荧光定量PCR检测-引物对1

1、按照表2配制实时荧光定量PCR反应混合物。

表2实时荧光定量PCR反应混合物的配制

2、反应管中先配制2倍体积的2×SYBR GreenⅠ，不含RNA酶的纯水，模板cDNA以及ROXⅡ混合物，混匀后分装至两个0.2ml的PCR反应管中，再分别加入目的基因NR1H3基因(SEQ ID NO：1)的上下游引物对：

引物对1：

5’-CGTCCACTCAGAGCAAGTGT(SEQ ID NO：2)

3’-ACAAGAAAGTTGGGCATTCGTG(SEQ ID NO：3)

与内参GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶，glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase)的引物，轻轻混匀。其中，NR1H3基因引物委托生工生物工程(上海)股份有限公司合成。本发明的实时荧光定量PCR中主要采用SYBR Green I进行检测，SYBRGreen I是一种荧光染料，可以和任意的双链DNA结合，通过荧光信号的收集，反映模板拷贝数的多少。

3、将反应管放入实时荧光定量PCR仪中进行PCR扩增，反应程序为95℃，1分钟；95℃，5s；60℃，20s；一共40个循环。然后95℃，1分钟；60℃，1分钟，95℃，30s。荧光收集点在60℃，反应结束后取出PCR产物，PCR产物大小与预期一致。

4、将获得数据进行统计分析，以GAPDH作为内参照。

实施例6实时荧光定量PCR检测-引物对2组

1、按照表3配制实时荧光定量PCR反应混合物。

表3实时荧光定量PCR反应混合物的配制

引物对2：

5’-ATGAAACTGGTGAGCCTCCG(SEQ ID NO：4)

3’-CAAGAAAGTTGGGCATTCGTG(SEQ ID NO：5)

4、将获得数据进行统计分析，以GAPDH作为内参照。

实施例7实时荧光定量PCR检测-引物对3

1、按照表4配制实时荧光定量PCR反应混合物。

表4实时荧光定量PCR反应混合物的配制

引物对3：

5’-AGTCACGGTGATGCTTCTGG(SEQ ID NO：6)

3’-CAAGAAAGTTGGGCATTCGTGC(SEQ ID NO：7)

4、将获得数据进行统计分析，以GAPDH作为内参照。

实施例8实时荧光定量PCR检测-引物对4

1、按照表5配制实时荧光定量PCR反应混合物。

表5实时荧光定量PCR反应混合物的配制

引物对4：

5’-TTTCTGACCGGCTTCGAGTC(SEQ ID NO：8)

3’-ACAAGAAAGTTGGGCATTCGTGC(SEQ ID NO：9)

4、将获得数据进行统计分析，以GAPDH作为内参照。

实施例9 NR1H3基因表达水平与成人急性髓系白血病患者(剔除M3)和NCCN中危组成人急性髓系白血病患者(剔除M3)的生存分析曲线

说明：M3为早幼粒细胞白血病，是一种特殊类型的急性髓系白血病。

实验方法：

1、采集成人急性髓系白血病患者(剔除M3)骨髓组织样本，共获得329例骨髓组织样本。

2、检测NR1H3基因表达水平，并按照NR1H3基因表达中位值将其分为NR1H3基因低表达组和NR1H3基因高表达组，其中，NR1H3基因低表达组数据为165例，NR1H3基因高表达组数据为164例。

3、比较NR1H3基因低表达组和NR1H3基因高表达组的总生存率和无事件发生生存率，结果如图2A和2B。

实验结果：

其中，图2A是在全部AML患者中对NR1H3基因表达水平进行总生存率分析，纵坐标是总生存率，横坐标是生存时间(月)。图2B是在全部AML患者中对NR1H3基因表达水平进行无事件发生生存率分析，纵坐标是无事件发生生存率，横坐标是生存时间(月)。

实验结果显示，NR1H3基因低表达组的总生存率和无事件发生生存率均显著高于NR1H3基因高表达组。因此，NR1H3基因的表达水平可以用于提示急性髓系白血病的预后水平。

实验方法：

1、采集NCCN中危组成人急性髓系白血病患者(剔除M3)骨髓组织样本，共获得173例骨髓组织样本。

2、按照NR1H3基因表达水平的中位值，将其分为NR1H3基因低表达组和NR1H3基因高表达组，其中，NR1H3基因低表达组数据为87例，NR1H3基因高表达组数据为86例。

3、比较NR1H3基因低表达组和NR1H3基因高表达组的总生存率和无事件发生生存率，结果如图3A和3B。

实验结果：

其中，图3A所示是在全部AML患者NCCN中危组中对NR1H3表达水平进行总生存率分析，纵坐标是总生存率，横坐标是生存时间(月)。图3B所示是在全部AML患者NCCN中危组中对NR1H3基因表达水平进行无事件发生生存率分析，纵坐标是无事件发生生存率，横坐标是生存时间(月)。

实施例10 NR1H3基因表达水平与成人正常核型急性髓系白血病(CN-AML)患者(剔除M3)和ELN中危-I组成人正常核型急性髓系白血病患者(剔除M3)的生存分析曲线

说明：ELN，即European Leukmia Net，欧洲白血病网；CN-AML，即正常核型急性髓系白血病。

实验方法：

1、采集正常核型急性髓系白血病患者(剔除M3)骨髓组织样本，共获得156例骨髓组织样本。

2、检测NR1H3基因表达水平，并按照NR1H3基因表达中位值将其分为NR1H3基因低表达组和NR1H3基因高表达组，其中，NR1H3基因低表达组数据为78例，NR1H3基因高表达组数据为78例。

3、比较NR1H3基因低表达组和NR1H3基因高表达组的总生存率和无事件发生生存率，结果如图4A和4B。

实验结果：

其中，图4A是在全部CN-AML患者中对NR1H3表达水平进行总生存率分析。纵坐标是总生存率，横坐标是生存时间(月)。图4B是在全部CN-AML患者中对NR1H3表达水平进行无事件发生生存率分析。纵坐标是无事件发生生存率，横坐标是生存时间(月)。

实验方法：

1、采集ELN中危-I组成人正常核型急性髓系白血病患者(剔除M3)骨髓组织样本，共获得121例骨髓组织样本。

2、检测NR1H3基因表达水平，并按照NR1H3基因表达中位值将其分为NR1H3基因低表达组和NR1H3基因高表达组，其中，NR1H3基因低表达组数据为61例，NR1H3基因高表达组数据为60例。

3、比较NR1H3基因低表达组和NR1H3基因高表达组的总生存率和无事件发生生存率，结果如图5A和5B。

实验结果：

其中，图5A是在全部CN-AML患者ELN中危-I组中对NR1H3表达水平进行总生存率分析。纵坐标是总生存率，横坐标是生存时间(月)。图5B所示是在全部CN-AML患者ELN中危-I组中对NR1H3表达水平进行无事件发生生存率分析。纵坐标是无事件发生生存率，横坐标是生存时间(月)。

实施例11 NR1H3基因表达水平与成人急性髓系白血病患者(＜60岁)(剔除M3)和NCCN中危组成人急性髓系白血病患者(＜60岁)(剔除M3)的生存分析曲线

实验方法：

1、采集成人急性髓系白血病患者(＜60岁，剔除M3)骨髓组织样本，共获得272例骨髓组织样本。

2、检测NR1H3基因表达水平，并按照NR1H3基因表达中位值将其分为NR1H3基因低表达组和NR1H3基因高表达组，其中，NR1H3基因低表达组数据为136例，NR1H3基因高表达组数据为136例。

3、比较NR1H3基因低表达组和NR1H3基因高表达组的总生存率和无事件发生生存率，结果如图6A和6B。

实验结果：

其中，6A是在成人AML患者中对NR1H3基因表达水平进行总生存率分析。纵坐标是总生存率，横坐标是生存时间(月)。6B是在成人AML患者中对NR1H3基因表达水平进行无事件发生生存率分析。纵坐标是无事件发生生存率，横坐标是生存时间(月)。

实验方法：

1、采集NCCN中危组成人急性髓系白血病患者(＜60岁，剔除M3)骨髓组织样本，共获得135例骨髓组织样本。

2、检测NR1H3基因表达水平，并按照NR1H3基因表达中位值将其分为NR1H3基因低表达组和NR1H3基因高表达组，其中，NR1H3基因低表达组数据为68例，NR1H3基因高表达组数据为67例。

3、比较NR1H3基因低表达组和NR1H3基因高表达组的总生存率和无事件发生生存率，结果如图7A和7B。

实验结果：

其中，图7A所示是在成人AML患者NCCN中危组中对NR1H3基因表达水平进行总生存率分析。纵坐标是总生存率，横坐标是生存时间(月)。图7B所示是在成人AML患者NCCN中危组中对NR1H3表达水平进行无事件发生生存率分析。纵坐标是无事件发生生存率，横坐标是生存时间(月)。

实施例12 NR1H3基因表达水平与成人正常核型急性髓系白血病患者(＜60岁，剔除M3)和ELN中危-I组成人正常核型急性髓系白血病患者的生存分析曲线

实验方法：

1、采集成人正常核型急性髓系白血病患者(＜60岁，剔除M3)骨髓组织样本，共获得129例骨髓组织样本。

2、检测NR1H3基因表达水平，并按照NR1H3基因表达中位值将其分为NR1H3基因低表达组和NR1H3基因高表达组，其中，NR1H3基因低表达组数据为65例，NR1H3基因高表达组数据为64例。

3、比较NR1H3基因低表达组和NR1H3基因高表达组的总生存率和无事件发生生存率，结果如图8A和8B。

实验结果：

其中，图8A是在成人CN-AML患者中对NR1H3基因表达水平进行总生存率分析。纵坐标是总生存率，横坐标是生存时间(月)。图8B是在成人CN-AML患者中对NR1H3基因表达水平进行无事件发生生存率分析。纵坐标是无事件发生生存率，横坐标是生存时间(月)。

实验方法：

1、采集ELN中危-I组成人正常核型急性髓系白血病患者(＜60岁，剔除M3)骨髓组织样本，共获得99例骨髓组织样本。

2、检测NR1H3基因表达水平，并按照NR1H3基因表达中位值将其分为NR1H3基因低表达组和NR1H3基因高表达组，其中，NR1H3基因低表达组数据为50例，NR1H3基因高表达组数据为49例。

3、比较NR1H3基因低表达组和NR1H3基因高表达组的总生存率和无事件发生生存率，结果如图9A和9B。

实验结果：

其中，图9A所示是在成人CN-AML患者ELN中危-I组中对NR1H3基因表达水平进行总生存率分析。纵坐标是总生存率，横坐标是生存时间(月)。图9B所示是在成人CN-AML患者ELN中危-I组中对NR1H3基因表达水平进行无事件发生生存率分析。纵坐标是无事件发生生存率，横坐标是生存时间(月)。

因此，NR1H3基因高表达可以作为预后标志物进一步细化全部AML及相应NCCN中危、CN-AML、CN-AML的ELN中危-I患者的危险度分层和预后评估，同时还可以针对成人AML及相应NCCN中危、CN-AML、CN-AML的ELN中危-I患者的危险度分层和预后评估。

上述实施例只是为了详细说明本发明，而不是在任何方面限制本发明的保护范围。

序列表

<110> 中国人民解放军总医院

<120> NR1H3在急性髓系白血病精准靶向检测及预后评估中的应用

<130> 20170714

<160> 12

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1293

<212> DNA/RNA

<213> human

<400> 1

gttcgttgca acaaattgat gagcaatgct tttttataat gccaactttg tacaaaaaag 60

ttggcatgtc cttgtggctg ggggcccctg tgcctgacat tcctcctgac tctgcggtgg 120

agctgtggaa gccaggcgca caggatgcaa gcagccaggc ccagggaggc agcagctgca 180

tcctcagaga ggaagccagg atgccccact ctgctggggg tactgcaggg gtggggctgg 240

aggctgcaga gcccacagcc ctgctcacca gggcagagcc cccttcagaa cccacagaga 300

tccgtccaca aaagcggaaa aaggggccag cccccaaaat gctggggaac gagctatgca 360

gtgtgtgtgg ggacaaggcc tcgggcttcc actacaatgt tctgagctgc gagggctgca 420

agggattctt ccgccgcagc gtcatcaagg gagcgcacta catctgccac agtggcggcc 480

actgccccat ggacacctac atgcgtcgca agtgccagga gtgtcggctt cgcaaatgcc 540

gtcaggctgg catgcgggag gagtgtgtcc tgtcagaaga acagatccgc ctgaagaaac 600

tgaagcggca agaggaggaa caggctcatg ccacatcctt gccccccagg gcttcctcac 660

ccccccaaat cctgccccag ctcagcccgg aacaactggg catgatcgag aagctcgtcg 720

ctgcccagca acagtgtaac cggcgctcct tttctgaccg gcttcgagtc acggtgatgc 780

ttctggagac atctcggagg tacaaccctg ggagtgagag tatcaccttc ctcaaggatt 840

tcagttataa ccgggaagac tttgccaaag cagggctgca agtggaattc atcaacccca 900

tcttcgagtt ctccagggcc atgaatgagc tgcaactcaa tgatgccgag tttgccttgc 960

tcattgctat cagcatcttc tctgcagacc ggcccaacgt gcaggaccag ctccaggtag 1020

agaggctgca gcacacatat gtggaagccc tgcatgccta cgtctccatc caccatcccc 1080

atgaccgact gatgttccca cggatgctaa tgaaactggt gagcctccgg accctgagca 1140

gcgtccactc agagcaagtg tttgcactgc gtctgcagga caaaaagctc ccaccgctgc 1200

tctctgagat ctgggatgtg cacgaatgcc caactttctt gtacaaagtt ggcattataa 1260

gaaagcattg cttatcaatt tgttgcaacg aac 1293

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

cgtccactca gagcaagtgt 20

<210> 3

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

acaagaaagt tgggcattcg tg 22

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

atgaaactgg tgagcctccg 20

<210> 5

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

caagaaagtt gggcattcgt g 21

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

agtcacggtg atgcttctgg 20

<210> 7

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

caagaaagtt gggcattcgt gc 22

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

tttctgaccg gcttcgagtc 20

<210> 9

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

acaagaaagt tgggcattcg tgc 23

<210> 10

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

agaggaggaa caggctcatg ccacatcctt 30

<210> 11

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

tgatgccgag tttgccttgc tcattgctat 30

<210> 12

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

agccctgcat gcctacgtct ccatccacca 30

Claims

1.NR1H3基因的检测物的用途，其特征在于：所述用途是：

（1）制备用于检测成人急性髓系白血病危险度分层或成人急性髓系白血病预后评估的产品；

或，（2）制备用于检测成人急性髓系白血病危险度分层或成人急性髓系白血病预后评估的芯片；

或，（3）制备用于检测成人急性髓系白血病危险度分层或成人急性髓系白血病预后评估的试剂盒；

或，（4）制备用于检测成人急性髓系白血病危险度分层或成人急性髓系白血病预后评估的检测物、制剂或药物。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的NR1H3基因的检测物为NR1H3基因的引物对和/或探针，其序列为以下任一项所示：

（1）SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3；

（2）SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5；

（3）SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7；

（4）SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9；

（5）SEQ ID NO：10或其互补序列；

（6）SEQ ID NO：11或其互补序列；

（7）SEQ ID NO：12或其互补序列。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述试剂盒还包括实现如下功能的模块：

（1）在成人急性髓系白血病患者的样本组中检测NR1H3基因的表达量，取样本组表达量中位值，将患者分为NR1H3基因低表达组和NR1H3基因高表达组；

（2）将NR1H3基因低表达组定义为急性髓系白血病预后低风险组，将NR1H3基因高表达组定义为急性髓系白血病预后中高风险组。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述芯片还包括实现如下功能的模块：

5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的NR1H3基因的检测物包含核酸或者核酸组合物，所述的核酸或者核酸组合物为：

（1）其为NR1H3基因的检测物，其序列为以下任一项所示：

1）SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3；

2）SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5；

3）SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7；

4）SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9；

或，（2）其为NR1H3基因的探针，其序列为以下任一项所示：

1）序列为SEQ ID NO：10或其互补序列；

2）序列为SEQ ID NO：11或其互补序列；

3）序列为SEQ ID NO：12或其互补序列。