CN107619831B - 大麦HvSTT1基因在提高植物耐盐性方面的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种植物基因的应用，特别涉及一种大麦HvSTT1基因在提高植物耐盐性方面的应用，属于植物基因工程技术领域。一种大麦HvSTT1基因，该基因的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。本发明所涉及的大麦HvSTT1基因，来源于栽培大麦Golden Promise。本发明首次证明了HvSTT1基因干涉后能够显著提升大麦的耐盐性，减少盐胁迫下植株地上部钠离子的积累，增加地下部钾离子的含量，维持植物的正常生长。综上，通过降低大麦中HvSTT1的表达量，甚至把HvSTT1基因敲除，可以提高大麦的耐盐性，以增加大麦在盐碱地上的产量。

Description

大麦HvSTT1基因在提高植物耐盐性方面的应用

技术领域

本发明涉及一种植物基因的应用，特别涉及一种大麦HvSTT1基因在提高植物耐盐性方面的应用，属于植物基因工程技术领域。

背景技术

土壤盐害是严重抑制作物生长和生产的非生物逆境。目前，全球有各种盐渍土约9.5亿公顷，占全球陆地面积的10％，广泛分布于100多个国家和地区。而且，由于土壤的次生盐渍化，全球盐渍化面积还在迅速增加，带来的经济损失和生态危害愈演愈烈。来自世界粮农组织(FAO)的统计表明，全世界灌溉土地约有一半遭受不同程度盐渍化危害，每年约有1000万公顷的土地因土壤的次生盐渍化而废弃。在我国，盐渍化的土地面积已达23.3万平方公里，在分布上不仅有东进西延的趋势，而且盐渍化面积也在不断扩大。盐渍土的改良和利用仍将是21世纪我国农业可持续发展所必须面对的课题，而增强作物耐盐性对于拓展粮食生产区域和提高作物品种的产量潜力具有重要的现实意义。

利用基因工程技术将植物特定基因进行过表达或者干涉，以提高植物某方面特性，从而开发高效的转基因作物新品种是一项具有广阔应用前景的技术。已有研究表明，利用转基因技术在提高作物耐盐性方面已经取得了较大的进展。Lee等将拟南芥中的AtDBF2基因过表达后显著提高了其耐盐性(Lee et al,P.N.A.S,1999,96(10):5873.)。Dubouzet等发现在拟南芥中过表达水稻OsDREB1A基因能显著增强拟南芥对各种非生物胁迫的耐性，包括耐盐性(Dubouzet et al.Plant Journal,2003,33(4):751.)。

高亲和K⁺转运蛋白(HKT)是一个超蛋白家族，广泛存在于植物、酵母、细菌以及真菌中。HKT蛋白每个基序有2个跨膜区域(M1和M2)和1个孔状区域(pore loop,P-loop)组成，其中第一个P-loop对离子的选择性至关重要，据此可分成两种类型：类型I，第一个P-loop中含有丝氨酸(Serine)，丝氨酸是Na⁺特异性载体，已被报道的水稻OsHKT1；5(Kobayashiet al.Plant Journal,2017,91:657-670.),小麦TaHKT1；5-D(Byrt et al.PlantJournal,2014,80(3):516-26.)、TmHKT1；5-A(Munns et al.Nature Biotechnology,2012,30(4):360.)等都属于该亚家族；类型II，第一个P-loop中含有甘氨酸(Glycine)，是K⁺选择性载体，已报道的有大麦HvHKT2；1(Mian et al.Plant Journal,2011,68(3):468-479.)和水稻OsHKT2；4(Lan et al.P.N.A.S,2010,107(15):7089-94.)等，为Na⁺、K⁺共转运或Na⁺/K⁺的单一运转体(Hauser&Horie,Plant,Cell and Environment,2010,33:552-565.)。本发明将大麦中克隆得到的HKT1；5类转运蛋白命名为STT1(Salt Transporter forTranslocation 1)，HvSTT1与水稻OsHKT1；5和小麦TaHKT1；5-D、TmHKT1；5-A同源，蛋白相似性分别为66％、85％和85％，在盐胁迫下其表达水平显著上调，但是HvSTT1基因功能尚未明确，相关转基因研究仍未开展，干涉或超表达后转基因植株能否正常生长发育、耐盐性能否得到提升，均属未知。

发明内容

本发明的目的在于提供一种大麦HvSTT1基因在提高植物耐盐性方面的应用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种大麦HvSTT1基因，该基因的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。本发明所涉及的大麦HvSTT1基因，来源于栽培大麦Golden Promise。

一种由所述的基因编码的大麦HvSTT1蛋白，该蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No:2所示。

一种所述的大麦HvSTT1基因启动子，该启动子的核苷酸序列如SEQ ID No:3所示。

一种大麦HvSTT1基因在提高大麦耐盐性中的应用。本发明通过分离、克隆大麦HvSTT1基因编码序列(coding sequence)后，构建其干涉载体和过表达载体，然后转化大麦Golden Promise，并对转基因大麦和对照进行耐盐性评价。实验证明，HvSTT1对大麦耐盐性表现为负调控作用，降低该基因的表达可以显著提高大麦耐盐性。

基因来源、克隆与载体构建：以大麦Golden Promise幼苗(播后10天)总RNA为模板，反转录(Reverse Transcription)成cDNA，以cDNA为模板，分别在其5’UTR和3’UTR设计特异性引物，进行PCR反应，扩增得到本发明的HvSTT1基因全长。上游引物为HvSTT1-cDNA-F(SEQ ID NO:4)，下游引物为HvSTT1-cDNA-R(SEQ ID NO:5)。通过TA克隆将基因装载入pEASY-T1载体，测序无误后，连接到pBract214过表达载体中。再根据HvSTT1基因编码序列设计合成HvSTT1基因干涉序列，所用引物为HvSTT1-RNAi-F(SEQ ID NO:6)和HvSTT1-RNAi-R(SEQ ID NO:7)，将得到的HvSTT1基因干涉序列与pANDA干涉载体连接。以Golden Promise幼苗(播后10天)总DNA为模板，分别在HvSTT1基因起始密码子前3kb处和前50bp处设计特异性引物，进行PCR反应，扩增得到本发明的HvSTT1基因启动子。引物分别为

HvSTT1-promoter-F(SEQ ID NO:8)和HvSTT1-promoter-R(SEQ ID NO:9)。通过TA克隆将启动子序列装载入pEASY-T1载体，测序得到实际启动子序列。

基因转化：携带有本发明HvSTT1基因的表达载体导入农杆菌菌株Agl1，阳性重组菌落鉴定正确后，通过农杆菌介导大麦幼胚遗传转化，在含潮霉素的固体培养基上筛选阳性愈伤组织直至长出转化苗，移栽后繁种获得足够多的转基因种子，用于耐盐性鉴定分析。

转基因后代耐盐性验证：HvSTT1干涉和过表达转基因大麦植株发芽7天后鉴定阳性苗，同对照Golden Promise幼苗植株一同水培1周后，在营养液中加和不加200mM氯化钠(加氯化钠为处理，不加氯化钠为对照)，盐处理7天，幼苗洗净擦干后称取鲜重，烘干后称取干重，并测定幼苗中钠离子含量。结果表明，HvSTT1干涉植株生物量显著高于对照，地上部钠离子积累显著下降，地下部钾离子含量显著升高，耐盐性得到显著提高，而HvSTT1过表达植株则表现相反，耐盐性表现比对照更差。

本发明的有益效果是：

1、本发明首次发现干涉和过表达HvSTT1基因不会导致转基因后代的非正常死亡，后代植株均可以正常生长、发育，开花、结实。此外，本发明首次证明了HvSTT1基因干涉后能够显著提升大麦的耐盐性，减少盐胁迫下植株地上部钠离子的积累，增加地下部钾离子的含量，维持植物的正常生长。综上，通过降低大麦中HvSTT1的表达量，甚至把HvSTT1基因敲除，可以提高大麦的耐盐性，以增加大麦在盐碱地上的产量，并提高滨海地区盐碱地的利用，该基因对大麦耐盐性的负调控作用使得该基因的利用更加方便，只需干涉该基因，避免了过表达带来的一些负面效应(如过表达部位随机，表达量随机，大量增加某一基因的表达会影响其他基因功能等)；

2、HvSTT1来自于大麦基因组内部，通过干涉技术降低其基因表达量，或敲除该基因，可以在提升大麦耐盐性的同时，不会造成转基因生物的生态安全问题，环境友好，风险较低，区别于植物异源表达来自于细菌或昆虫的抗病、抗虫基因。

附图说明

图1表达载体pBract214(A)和pANDA(B)的T-DNA区图谱。LB，T-DNA的左边界；RB，T-DNA的右边界；Hpy，潮霉素抗性基因；35S，花椰菜花叶病毒启动子；Ubi，玉米Ubiquitin 1启动子；NOS、Poly A，基因表达的终止子；HvSTT1，本发明所述基因的cDNA全长序列；HvSTT1-RNAi，本发明所述基因的干涉片段序列；attR1、attR2，Gateway重组克隆中LR重组酶的两个结合位点；

图2HvSTT1转基因株系和对照株系水培盐处理表型图。(A)(B)为盐处理组(200mM氯化钠处理7天)，(C)(D)为对照组(未加氯化钠)。b1，b2，b3分别为WT阴、RNAi和OX植株根部放大图。WT，野生型Golden Promise；WT阴，转基因阴性大麦；RNAi，转基因干涉大麦；OX，转基因过表达大麦；

图3HvSTT1转基因株系和对照株系水培盐处理7天后钠和钾元素含量。(A)为地上部钠元素含量，(B)为地下部钾元素含量。WT，野生型Golden Promise；WT阴，转基因阴性大麦；RNAi，转基因干涉大麦；OX，转基因过表达大麦。

具体实施方式

下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。

在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。

以下实施例涉及的引物序列见表1。

表1

实施例1、HvSTT1编码基因的克隆

Golden Promise种子经3％(v/v)H₂O₂表面消毒20分钟后，蒸馏水冲洗3次，播于潮湿的双层滤纸上，20℃生长室内发芽7天(14小时光照/10小时黑暗)。剪取幼嫩叶片，置于研钵中添加液氮磨碎，参照植物RNA提取试剂盒(Takara，9769)抽提组织总RNA，并反转录得到第一链cDNA(Takara反转录试剂盒RR037A)，以该cDNA为模板，用引物HvSTT1-cDNA-F(SEQID NO:4)和HvSTT1-cDNA-R(SEQ ID NO:5)进行PCR扩增。50μL反应体系为：

Transgen HiFi体系	μL
		10×Buffer II	5
dNTP	4
		Primer F/R	1/1
HiFi Taq	1
		dd H<sub>2</sub>O	37
cDNA	1

反应程序为：95℃5min，94℃30s，61℃30s，72℃100s，72℃10min，35循环。扩增得到1.8kb左右的片段，参照说明将基因TA克隆装载入pEASY-T1载体(Transgen)，测序后表明，HvSTT1全长1533bp，具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。再以上述cDNA为模板，用引物HvSTT1-RNAi-F(SEQ ID NO:6)和HvSTT1-RNAi-R(SEQ ID NO:7)PCR扩增HvSTT1干涉片段序列。

实施例2、HvSTT1基因上游启动子的克隆

将实施例1中发芽的Golden Promise大麦幼苗另取一部分用CTAB法提取DNA，以该DNA为模板，用引物HvSTT1-promoter-F(SEQ ID NO:8)和HvSTT1-promoter-R(SEQ ID NO:9)进行PCR扩增。50μL反应体系为：

Transgen HiFi体系	μL
		10×Buffer II	5
dNTP	4
		Primer F/R	1/1
HiFi Taq	1
		dd H<sub>2</sub>O	37
DNA	1

反应程序为：95℃5min，94℃30s，61℃30s，72℃180s，72℃10min，35循环。扩增得到3kb左右的片段，参照说明将扩增得到的片段TA克隆装载入pEASY-T1载体(Transgen)，测序后表明，HvSTT1上游启动子具有序列表中序列3的核苷酸序列。

实施例3、HvSTT1基因提升植物耐盐性的应用

1)HvSTT1干涉和过表达载体的构建

将HvSTT1的全长编码序列克隆至pBract214载体，将HvSTT1干涉片段序列克隆至pANDA载体。具体方法如下：将实施例1中扩增得到的全长片段和干涉片段分别与课题组已有的pANDA和pBract214质粒载体按照说明书，用Gateway克隆技术进行重组反应(GatewayBP反应和LR反应试剂盒，Invitrogen)，得到pANDA-HvSTT1和pBract214-HvSTT1重组载体。重组载体进行测序和多酶切鉴定后，表明过表达和干涉载体分别构建成功。

2)pANDA-HvSTT1和pBract214-HvSTT1的大麦遗传转化

将重组载体pANDA-HvSTT1和pBract214-HvSTT1利用电击法转入农杆菌Agl1感受态，在含有卡那霉素的YEB固体培养基上挑取阳性单菌落，利用实施例1中PCR反应进行重组菌的鉴定验证。通过农杆菌介导大麦幼胚遗传转化，在含潮霉素的固体培养基上筛选阳性愈伤组织直至长出转化苗，得到的转化苗通过实施例2中的方法提取DNA用于阳性鉴定。鉴定所用的PCR引物一条来自载体，一条来自基因，从而确保转基因的可靠性。HvSTT1干涉转化苗的鉴定引物分别为RNAi-F(SEQ ID NO:10)和RNAi-R(SEQ ID NO:11),HvSTT1过表达转化苗的鉴定引物分别为OX-F(SEQ ID NO:12)和OX-R(SEQ ID NO:13)。50μL反应体系为：

Transgen HiFi体系	μL
		10×Buffer II	5
dNTP	4
		Primer F/R	1/1
HiFi Taq	1
		dd H<sub>2</sub>O	37
DNA	1

反应程序为：95℃5min，94℃30s，61℃30s，72℃45s，72℃10min，35循环。PCR产物跑胶后在400bp处有明显条带的则为阳性。将鉴定到的阳性苗移栽后繁种一代，获得足够多的转基因种子用于耐盐性鉴定分析。

3)HvSTT1转基因植株的耐盐性鉴定

将鉴定到的阳性HvSTT1干涉和过表达转基因植株和对照植株于生长室中水培1周左右(22℃，光周期为10小时光照/14小时黑暗，相对湿度70％)至幼苗两叶一心期，每3天更换营养液。培养液配方为:Ca(NO₃)₂ 1.5mM，Mg(SO₄)0.75mM，(NH₄)H₂PO₄ 0.5mM，KCl 1.5mM，FeSO₄ 50μM，Na₂-EDTA 50μM，MnSO₄ 10μM，CuSO₄ 1.5μM，ZnSO₄ 2μM，H₃BO₃ 50μM，(NH₄)₆Mo₇O₂₄0.075μM，pH 6.0。1周后，营养液中加和不加200mM氯化钠(加氯化钠为处理，不加氯化钠为对照)，盐处理7天后，拍照记录表型，再取出幼苗，用蒸馏水洗两次，再用吸水纸吸去表面水分，将地上部与地下部用剪刀分离，分别置于离心管，120℃杀青1小时后，80℃烘干过夜，然后称取干重。利用ICP-OES技术测定幼苗组织中钠、钾离子含量(Inductively CoupledPlasma Optical Emission Spectrometer,Optima 8000DV,PerkinElmer,USA)。

实验结果表明，在没有盐处理条件下，所有植株生长正常，转基因和野生型植株均没有表现出明显差异，而在盐处理条件下，HvSTT1干涉植株生物量显著高于过表达和野生型植株，植株生长虽变缓，但没有出现过表达和野生型植株的严重萎蔫枯萎现象，且根系更健壮分支较多。HvSTT1干涉植株的地上部钠离子积累显著低于过表达和野生型植株，地下部钾离子含量显著高于过表达和野生型植株。因此，在大麦中降低HvSTT1基因的表达量使得其耐盐性得到显著提高。而HvSTT1过表达植株则表现相反，耐盐性表现比对照更差，另一方面证明了HvSTT1基因对大麦耐盐性的负调控作用。由离子含量数据可推测，HvSTT1蛋白的生理功能可能是转运Na⁺运输至地上部并间接减少地下部K⁺的积累。

综上所述，HvSTT1对大麦耐盐性表现为负调控作用，降低该基因的表达可以显著提高大麦耐盐性。

以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。

序列表

<110> 浙江大学

<120> 大麦HvSTT1基因在提高植物耐盐性方面的应用

<130> ZJDX-SQF003

<160> 13

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1533

<212> DNA

<213> 大麦HvSTT1 cDNA(Hordeum vulgare)

<400> 1

atgggttctt tgcatgtctc cggcagtacc actactcaac atagcagggt tcagagggct 60

taccaactct tgtttttcca tgtgcacccg ttctggcccc agctcctcta ctttgtgtcc 120

atctcctttt tcggcttcgt catgctgaga gccctcccca tgaagaccag catgcccacg 180

gacctagacc tgatcttcac gtcggtgtcg gcgacgacgg tgtcgagcat gcaggcggtg 240

gagatggagt ccttctccaa cccccagctc ctcctcctaa ccctcctcat gcttcttggt 300

ggcgaggtgt tcactagcat gcttggcatg tacttcacct acgtcaagtc caagaaaaaa 360

gaagcacaag caccacatga tgatggtgcc aaagtgaaac cagcaccatc tagcctagag 420

ctcacggccg ctagcatctg catggacgac ggcactgcac aggaccgtat ggagcaaggg 480

ttcaaggacc agccccgtta cggccgggcc ttcctcacca ggttgctcct gttcatagtg 540

gtcggctatc acgcggtggt gcacctggcc ggttactccc tgatgctggt ctacctgagc 600

gtcgtgtccg gcgcgaggac ggtgctcgcc ggcaagggga tcagcatgca caccttctcc 660

gtcttcacca tcgtctcgac gttcgcaaac tgcggcttca tgccgaacaa cgaagggatg 720

gcctccttcc ggtccttccc gggactcctc ctactcgtca tgccccacgt cctcctcgga 780

aacacgctct tccccgtctt cctcaggctg gcgatctggg ctctccagcg gttcaccaag 840

aggcctgaac tcggtgagct gcggagcatc ggctacgacc acctcctgac gagccggcat 900

acaaggttct tggctttcac cgtggccgtg ttcgtgctgg cgcagctgtc gctcttctgc 960

gccatggagt ggggctccga cgggctgcgc gggctcaccg ccgcgcaaaa gctcgtcgcg 1020

gctctcttca tgtcggtcaa ctcgaggcac gccggcgaga tggtcgtgga cctctccacc 1080

gtgtcgtcgg ccgtcgtggt ggtctacatg gtcatgatgt acctaccacc ttatactaca 1140

tttctaccag tggaagacag taaccaacaa gtgggaacag atcagaaaag gacaagcata 1200

tggcacaagc ttctcatgtc gcccctctcg tgcatagcca tcttcatcgt cgtcgtgtgc 1260

atcaccgaga gacggcagat ctccgatgac ccactcaact tcaacgtcct caacatcgcc 1320

gtcgaggtta tcagtgcgta cggcaacgtg gggttcagca cggggtacag ctgcggccgg 1380

caggtgacgc ccgacggcag ctgcagggac gcgtgggttg gcttctccgg gaagtggagc 1440

agggaaggga agctcgccct catagccgtc atgttctacg gcaggctcaa gaagttcagc 1500

atgcatggcg gccaggcatg gaggatagta tag 1533

<210> 2

<211> 510

<212> PRT

<213> 大麦HvSTT1(Hordeum vulgare)

<400> 2

Met Gly Ser Leu His Val Ser Gly Ser Thr Thr Thr Gln His Ser Arg

1 5 10 15

Val Gln Arg Ala Tyr Gln Leu Leu Phe Phe His Val His Pro Phe Trp

20 25 30

Pro Gln Leu Leu Tyr Phe Val Ser Ile Ser Phe Phe Gly Phe Val Met

35 40 45

Leu Arg Ala Leu Pro Met Lys Thr Ser Met Pro Thr Asp Leu Asp Leu

50 55 60

Ile Phe Thr Ser Val Ser Ala Thr Thr Val Ser Ser Met Gln Ala Val

65 70 75 80

Glu Met Glu Ser Phe Ser Asn Pro Gln Leu Leu Leu Leu Thr Leu Leu

85 90 95

Met Leu Leu Gly Gly Glu Val Phe Thr Ser Met Leu Gly Met Tyr Phe

100 105 110

Thr Tyr Val Lys Ser Lys Lys Lys Glu Ala Gln Ala Pro His Asp Asp

115 120 125

Gly Ala Lys Val Lys Pro Ala Pro Ser Ser Leu Glu Leu Thr Ala Ala

130 135 140

Ser Ile Cys Met Asp Asp Gly Thr Ala Gln Asp Arg Met Glu Gln Gly

145 150 155 160

Phe Lys Asp Gln Pro Arg Tyr Gly Arg Ala Phe Leu Thr Arg Leu Leu

165 170 175

Leu Phe Ile Val Val Gly Tyr His Ala Val Val His Leu Ala Gly Tyr

180 185 190

Ser Leu Met Leu Val Tyr Leu Ser Val Val Ser Gly Ala Arg Thr Val

195 200 205

Leu Ala Gly Lys Gly Ile Ser Met His Thr Phe Ser Val Phe Thr Ile

210 215 220

Val Ser Thr Phe Ala Asn Cys Gly Phe Met Pro Asn Asn Glu Gly Met

225 230 235 240

Ala Ser Phe Arg Ser Phe Pro Gly Leu Leu Leu Leu Val Met Pro His

245 250 255

Val Leu Leu Gly Asn Thr Leu Phe Pro Val Phe Leu Arg Leu Ala Ile

260 265 270

Trp Ala Leu Gln Arg Phe Thr Lys Arg Pro Glu Leu Gly Glu Leu Arg

275 280 285

Ser Ile Gly Tyr Asp His Leu Leu Thr Ser Arg His Thr Arg Phe Leu

290 295 300

Ala Phe Thr Val Ala Val Phe Val Leu Ala Gln Leu Ser Leu Phe Cys

305 310 315 320

Ala Met Glu Trp Gly Ser Asp Gly Leu Arg Gly Leu Thr Ala Ala Gln

325 330 335

Lys Leu Val Ala Ala Leu Phe Met Ser Val Asn Ser Arg His Ala Gly

340 345 350

Glu Met Val Val Asp Leu Ser Thr Val Ser Ser Ala Val Val Val Val

355 360 365

Tyr Met Val Met Met Tyr Leu Pro Pro Tyr Thr Thr Phe Leu Pro Val

370 375 380

Glu Asp Ser Asn Gln Gln Val Gly Thr Asp Gln Lys Arg Thr Ser Ile

385 390 395 400

Trp His Lys Leu Leu Met Ser Pro Leu Ser Cys Ile Ala Ile Phe Ile

405 410 415

Val Val Val Cys Ile Thr Glu Arg Arg Gln Ile Ser Asp Asp Pro Leu

420 425 430

Asn Phe Asn Val Leu Asn Ile Ala Val Glu Val Ile Ser Ala Tyr Gly

435 440 445

Asn Val Gly Phe Ser Thr Gly Tyr Ser Cys Gly Arg Gln Val Thr Pro

450 455 460

Asp Gly Ser Cys Arg Asp Ala Trp Val Gly Phe Ser Gly Lys Trp Ser

465 470 475 480

Arg Glu Gly Lys Leu Ala Leu Ile Ala Val Met Phe Tyr Gly Arg Leu

485 490 495

Lys Lys Phe Ser Met His Gly Gly Gln Ala Trp Arg Ile Val

500 505 510

<210> 3

<211> 2907

<212> DNA

<213> 大麦HvSTT1 上游启动子(Hordeum vulgare)

<400> 3

ccgtgttgtt caccataata gcagatatgt tggcagtcct tattggctgg gctaaacaaa 60

atgtccaagt aggaggactt ttctcatacc ttgtagaggg gggagtgtcc atattacaat 120

acatgaacga cacaatcatc ttcatggaac acgatatcgc aaaagctacg aatatgaagc 180

ttgtactttg attatttgaa cagttgtcta gacaaaaaat aaaatttaac aaaagccaat 240

ttctgctttg ggagagcaaa tgaggaataa tatgcttaca tgcaactatt cggatgtgaa 300

atgggatcat tattgtttaa ttacctaggg attcccattc ataatagaag tttgacaaat 360

aaggaatgga aatgtattga agatagattc aaaaaagatt aagttgttgg aaggttaaac 420

taatgtctta tggaggtcgg cttgtgttga aaaattcggt tttgacaagc ttgccgatgt 480

ttcttctatc tatctttgaa gtactagtag gtgtacgaaa aatactaaac ttctatcgat 540

ctcgtttctt ctggcaatgt gatgaggcta agaagaaata gcaaggtggg gtattatttg 600

tagacccaaa gatcaagggg gtctagggat tgagaattta gaagtgaaga atagatgcct 660

gcttagcaag tggatatata agttatctac tgagactgaa gggacgtgga tacaaatctt 720

gaggaataag tacttatagt gcaagacatt ggcccatgtt ataggtagac ctaatggctc 780

aactttttgg aaggggttaa tgaacatgaa ggtaagcttt ttccagcggg tgaagtttat 840

agttgaaaat ggtaccacga tcagatttta ggaggacaca tggcttgggg atacgcctct 900

agctttacaa tacccttccc tatataacat ataacgtaag gaagattatg ttgccacagt 960

attacatcca gtacctctta atatccaatt caggcggtta ctagtgggag tacgttggaa 1020

ttcctggctg catttggtca gagattgatg gatgttcaac tttctgacca ggcaaataat 1080

attccctaga aatgatctat gaatggtatg tttttagtga agtccatgta catggattta 1140

attgactttg ggcctctttt cagatcattt catatttgaa aaaaataagg tggcgcttag 1200

aatcaaaata ttcatgtggc ttctacacaa aggagtagta ttaaccaaat ataatttgat 1260

aaagcggaga tgggtaggca gtctagatat tgctattgcg aataaaatga aacaataaga 1320

caccattttc tcgactgtcc actagcaaag ctattacgac gcactgttca tatagccttc 1380

aatattaatc catcaacgag cattaatatg ttatttggga cgtggctcgg tgaagtagac 1440

gtaactatag ggaattatat atggattgga ataagtgcaa tattttgggt tatatggaac 1500

actagaaacg atatgatttt taatggcatg aacttcaaca attttttgca ggttatctac 1560

agggccacaa cttggatccg tatgtggtcg ttactcactc atgcagactc caggagcata 1620

tggttattgg gtgcaaccga tggaagacgg tcgcacgggt tatcttcagc ctatttggat 1680

gacgagctaa taataggcta gatgtatagg catcgtaccc tacttttggt ttcgctgaat 1740

atggcagtct gttatctttt ttacacactt cttttatttg ctcacttcct gagcccgccg 1800

tggatctata actttgtttt tggacctatt taataatatg gctgcatgca tcgattgatg 1860

cagtgacagg ggctgcgttc ctccttttcc aaaagaacta actagtctta aaaatatggt 1920

gagacatatt gtgctaggtg atcatctctt gtcttttctt aaataaaaaa agaaaatctc 1980

tccttcacat catcatttat cctatgtggc acttctaaaa caacaccatt atacatgtgg 2040

caccgcaagc cacgcttgtc gcagcagagc caaccccgcg cgaggagggg aggggggggg 2100

ggctaagctg ctttcacgtg gacccaactc actcatcgtg cgccgggcaa cgggcggagc 2160

gtcccatgga gccgccctat gactggcaag gcacccgggt atgggtcgtc agggcagttt 2220

gcacgtgcca tattatatgg tgtatactcc ctccgttcct aaatagtata tgtctttgta 2280

taggtttcat tataagacta cgtaaggatg catataaaga tactttagaa tgtagattca 2340

cttattttat ttcgcatgta gtcatagtga aatctttaaa aagatttata tttagaaacc 2400

gatcgggtaa taaatatgcg attagttgtt tgtatatggt aagtccatac cccatgtgaa 2460

aaaatataaa tcatgcgatg cgtgtatgtg tcattccttc agccacttgt cagtcgtagc 2520

gaggccctgt agatttcact tgctatttgc atcggtgagc gatatagacg tggaacttat 2580

cactagattc cattgttgtt tctcccagaa gtctgctctg gtagctaatt ttcgccataa 2640

gatatgcctt ccatgagccc gttgtgcgct agcttttgca attgcacttc gtaatcaaca 2700

caataattat ggtacacctc ccagtacact tgtgctatcc cctgcgcaac ttgccagtct 2760

caagtggcca agctacacca gaacatagta cagcacatgc tgcaccccca caccccagcg 2820

ccccttttct cgtgtataaa tggcccagta gtttctgatt gcctccaaca gaagaagcca 2880

acaactctcc acactactca attggga 2907

<210> 4

<211> 28

<212> DNA

<213> HvSTT1-cDNA-F

<400> 4

agccaacaac tctccacact actcaatt 28

<210> 5

<211> 28

<212> DNA

<213> HvSTT1-cDNA-R

<400> 5

ttctctctcc tcttctcttt tctctaac 28

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> HvSTT1-RNAi-F

<400> 6

tttgcatgtc tccggcagta 20

<210> 7

<211> 19

<212> DNA

<213> HvSTT1-RNAi-R

<400> 7

gacgtgaaga tcaggtcta 19

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> HvSTT1-promoter-F

<400> 8

ccgtgttgtt caccataata 20

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> HvSTT1-promoter-R

<400> 9

tcccaattga gtagtgtgga 20

<210> 10

<211> 18

<212> DNA

<213> RNAi-F

<400> 10

tccgtgggca tgctggtc 18

<210> 11

<211> 21

<212> DNA

<213> RNAi-R

<400> 11

gtcgtcggtg aacaggtatg g 21

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> OX-F

<400> 12

ttagccctgc cttcatacgc 20

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> OX-R

<400> 13

gtgaacacct cgccaccaag 20

Claims (1)

1.一种提高大麦耐盐性的方法，其特征在于：降低大麦HvSTT1基因的表达，所述大麦HvSTT1基因的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。