CN107616188A - 一种除去表面上的芽孢菌的孢子的方法 - Google Patents

一种除去表面上的芽孢菌的孢子的方法 Download PDF

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Abstract

本说明书公开了用于除去芽孢菌的孢子的酸性含水组合物，其包含从约100ppm至约2000ppm溶解的二氧化氯以及具有润湿效应和孢子溶解效应的表面活性剂系统；本发明还公开了一种除去表面上的芽孢菌的孢子的方法。

Description

一种除去表面上的芽孢菌的孢子的方法
本申请是申请日2014年2月19日、申请号201410055961.2、发明名称为“用于除去芽孢菌的孢子的酸性含水组合物”的发明专利申请的分案申请。
发明领域
本发明涉及适于有效抑制细菌的孢子形式的二氧化氯的新组合物。
发明背景
二氧化氯是熟知的杀菌剂且从1950年起就被用于水清洁和水处理。因为二氧化氯是一种强氧化剂，所以它是众所周知的不稳定化合物。二氧化氯通常在水溶液中在储存期间被认为不稳定，故而许多公开的技术建议了如何在使用时制备二氧化氯的系统和装置。一种通常的应用是将亚氯酸钠溶液与强酸溶液例如包含氢氯酸的溶液混合以即刻制备适用的二氧化氯制剂。WO2007/079287(CDG Technology Inc.)公开了稳定稀释的二氧化氯溶液以延长产品储存期限的方法。WO2009/058530(Ecolab)公开了显示低浓度的二氧化氯以及阴离子型表面活性剂的组合物，其显示了灭活球虫寄生虫(coccidian parasite)的效能。
美国专利申请2009/0028965(Clinimax Limited)公开了一种多组分的组合物，其能够在使用时产生二氧化氯溶液。得到的组合物除了稀释的二氧化氯外，还包括作为清洁剂的十二烷基硫酸钠且该组合物的pH保持在约5.0。即使据该文件所说显示了有希望的结果，相关的化合物及其他二氧化氯释放的产物似乎在卫生保健环境场所的测试中对艰难梭菌(Clostridium difficile)的孢子具有有限的效应，见SD Goldenberg等人，Journal ofHospital Infection，2012，第82卷，第64-67页。该问题也被S.Ali等人在Journal ofHospital Infection，2011，第79卷，第78-79页中确认，其中报道了市场上的杀孢子制剂难以满意地除去表面上的孢子，即使它们在孢子悬浮液试管中进行测试时似乎符合杀孢子要求。显然，既缺乏有效的杀菌剂，也缺乏测试方法学去确认抗与来自艰难梭菌的孢子及类似的病理学孢子形成的微生物有关的表面的效力。
因此，强烈需要提供适于有效抑制有毒细菌的有毒孢子形式的孢子(例如在医院环境中的表面上的艰难梭菌)的合适的稳定且稀释的二氧化氯溶液。有益地，这样的消毒溶液对于储存和处理应是安全的，同时便于向暴露的表面施用；而且当抵制二氧化氯的腐蚀性和考虑到通常的卫生学限制时，在人口密集的医院环境中也不需要任何重新布置来确定特定的清洁区域。
发明内容
最笼统而言，本发明涉及用于除去芽孢菌(spore forming bacteria)的孢子的酸性含水组合物，其包含从约100至约2000ppm溶解的二氧化氯，具有润湿效应和孢子溶解效应的表面活性剂系统。本发明的组合物的二氧化氯的浓度范围的其他代表性实例为约100至约1600ppm，约100至约1000ppm，以及约500至约1000ppm。本发明的组合物中二氧化氯的合适的浓度的实例为约100ppm、约200ppm、约300ppm、约400ppm、约500ppm、约600ppm、约700ppm、约800ppm、约900ppm、约1000ppm、约1100ppm、约1200ppm、约1300ppm、约1400ppm、约1500ppm和约1600ppm。在这方面，术语“约”代表了由于组合物产品中二氧化氯的浓度从它们的生产至它们的使用中可能轻微减少的事实。所述组合物通常具有约1至约4的pH。所述组合物创造性地适于除去细菌特别是梭菌属的菌种的孢子，例如在由玻璃、木头、金属和各种塑料材料制得的物体的表面上，特别是在医院环境中的表面上的艰难梭菌。所述组合物特别适于除去附着在通过常规杀菌剂难以到达的腔、或微腔或其他不规则表面结构上的孢子。所述组合物还适于最小化杀菌过程中的环境影响，同时最大化它们的杀菌能力，哪怕是在低于10分钟的短接触时间内。本发明上下文中的术语除去表示孢子被破坏，并且不能存活至复制。
为了这些目的，所述组合物包含具有对孢子发挥合适的强氧化攻击的能力的有效量的二氧化氯，以及表面活性剂系统(所述表面活性剂系统包含通过支持二氧化氯的杀菌能力具有不同补充效果的表面活性剂)，并且以相对低的浓度。因此，本发明的组合物包含至少一种具有促进所述组合物的润湿效应的能力的表面活性剂和至少一种促进孢子溶解效应的表面活性剂。
在本文中，“润湿效应”表示所述组合物能够易于适用于向所述表面施用并促进所述表面形成粘合的膜。在本发明的含义中，“润湿效应”促成所述二氧化氯组合物适当地分布至所述表面的腔中，以能够适当抵消在溶解的二氧化氯和孢子间的接触。
并且，在本发明的全文中，“溶解效应”表示所述组合物能降低或除去所述孢子对所述表面的附着。所述“溶解效应”涉及所述组合物的“总体清洁(general detergency)”效应，其包括从表面除去孢子、促成孢子与二氧化氯接触以及使孢子易于受到化学的氧化攻击。
此外，在上下文中，表面活性剂促成“润湿效应”的表述不排除其也具有一定的“溶解效应”，且反之亦然。其预期的含义是至少一种表面活性剂对润湿效应比溶解效应具有更显著的贡献，且至少一种表面活性剂对溶解效应比润湿效应具有更显著的贡献。
此外，大体上，为符合有效提供润湿效应和溶解效应的需要，在特定列举的含有二氧化氯的组合物中，所述表面活性剂系统包含两种或多种对于在约1至约4的酸性pH下的氧化稳定的烃离子表面活性剂，其中至少两种表面活性剂在烃链长度上不同。合适的不同的一个实例是至少四个碳原子。
本文中定义的“烃离子表面活性剂“，它们在酸性pH下为离子的且它们包含直链或支链的烃链。所述烃链可以为饱和或不饱和的，且因此被称为直链或支链烷基、烯基或炔基。所述烃链还可被促成或改善任何表面活性或导致稳定的基团取代。所述烃链还可被一个或多个杂原子间隔，如通过烷氧链所示例的。在离子型表面活性剂的情况下，本领域普通技术人员会对什么表示烃链有清楚的理解，并理解当基于相同的化学结构提供所述离子基团时，不同商标的基于烃离子表面活性剂的表面活性剂可能链长度不同。
在本文中，“稳定“表示所述表面活性剂在约1-4的酸性pH下基本不降解且它们不易于被二氧化氯氧化，即为”二氧化氯稳定的“。在其他情况下，稳定表示在航运和储存期间对化学降解也实质上稳定，而且对于溶液中的任何物理不稳定形式也是稳定的，例如沉淀、浑浊或任何其他影响表面活性剂功能的现象，或者所述组合物的任何一般的视觉外观。
在一个总的方面，根据本发明的所述具有二氧化氯的组合物包括表面活性剂系统，其包含两种或多种在酸性pH下对氧化稳定的烃离子表面活性剂，其中至少两种表面活性剂具有不同链长的烃链，以提供具有所述的期望特征的表面活性剂系统。
在一方面，根据本发明的所述组合物涉及用于除去芽孢菌的孢子的具有从约1至约4的pH的酸性含水组合物，其包括从约100ppm至约2000ppm溶解的二氧化氯，具有润湿效应和孢子溶解效应的表面活性剂系统，其中所述表面活性剂系统包含至少两种对约1至约4的pH的氧化稳定的烃离子表面活性剂，其中所述至少两种表面活性剂在烃链长度上具有至少四个碳原子的不同。
在一方面，所述组合物中两种或多种表面活性剂以从约0.01至约2％的量存在，示例为0.02至约2％(v/v)、约0.1至约1％(v/v)。
在一方面，两种或多种表面活性剂为pH在从约1至约4的范围内的阳离子型表面活性剂。
在一方面，根据本发明的组合物包含两种或多种阳离子型表面活性剂，其包括在低pH及二氧化氯存在下稳定的氧化胺。适用于本发明的氧化胺包括烷基二(低级烷基)胺氧化物，其中所述烷基可具有6-20个碳原子，优选8-18个碳原子，并可具有饱和或不饱和的直链或支链。所述低级烷基具有1至7个碳原子。实例包括C-8和C-12氧化胺，且在一方面所述组合物包括一种为C-8氧化胺的表面活性剂和一种为C-12氧化胺的表面活性剂。这样的表面活性剂的实例包括辛基二甲基胺氧化物和十二烷基二甲基胺氧化物。
可选的氧化胺包括烷基(二羟基低级烷基)氧化胺，其中所述烷基基团可具有6-20个碳原子，优选8-18个碳原子，并可具有饱和或不饱和的直链或支链。所述低级烷基具有1到7个碳原子。
还可选的氧化胺包括具有6-20个，优选6-12个碳原子的烷基的烷基吗啉氧化物。
在本发明的一方面，所述组合物包含从约100至约2000ppm的二氧化氯，从约0.1至约2(v/v)％的具有不同链长的烃链的两种阳离子型表面活性剂以建立润湿效应和溶解效应，如上文所讨论，所述阳离子型表面活性剂可在所述组合物中以相等的量或大约相等的量存在。所述阳离子型表面活性剂可在链长上具有四个或更多个碳原子的差别。
在一方面，所述组合物包含从约100至约1600ppm二氧化氯，且表面活性剂的量为约0.2％(v/v)，其包含基本相同量的辛基二甲基胺氧化物和十二烷基二甲基胺氧化物。
在本发明的一方面，所述组合物包括两种或多种表面活性剂，其为阴离子型表面活性剂，在从约1至约4的pH范围内稳定。选择所述阴离子型表面活性剂用以促进润湿效应和溶解效应。
在本发明的一方面，所述组合物包含从约100至约1600ppm的二氧化氯，从约0.1至约1(v/v)％的具有不同链长的烃链的两种阴离子型表面活性剂以建立润湿效应和溶解效应，如上文所讨论，所述阴离子型表面活性剂可在所述组合物中以相等的量或大约相等的量存在。所述阴离子型表面活性剂可在链长上具有四个或更多个碳原子的差别。
在本发明的一方面，所述两种或多种阴离子型表面活性剂选自可溶性的烷基硫酸盐、烷基磺酸盐、烷基芳基磺酸盐(烷基苯磺酸盐)和芳基磺酸盐，其在烷基链中具有从6至25个碳原子或在烷基链中具有8至19个碳原子。
在一方面，所述阴离子型表面活性剂为在烷基链中具有6至19个碳原子的烷基-二苯醚-二磺酸盐或烷基-苯基/二苯基-磺酸盐的钠盐。阴离子型表面活性剂的实例为烷基二苯醚二磺酸盐和/或烷基(磺基苯氧基)苯磺酸盐。一个实例是如以商标Dowfax 3B2由Dow化学公司出售的产品中所包括的癸基(磺基苯氧基)-二钠盐。一个实例是如以商标Dowfax8390由Dow化学公司出售的产品中所包括的单-和双十六烷基二磺酸化的二苯醚二钠盐。
在一方面，本发明涉及除去表面上的芽孢菌的孢子的方法，其通过将所述表面与一种组合物接触，所述组合物包含有效量的二氧化氯和两种或多种在表面活性剂系统中的表面活性剂，其中至少一种表面活性剂促成润湿效应以安全且紧密地将所述组合物分配至表面的所有部分，而至少一种表面活性剂应促成所述孢子的溶解效应，其在直接或间接的意义上影响所述孢子表面以使得所述孢子更易于受到所述二氧化氯的作用。在本文中，有效量表示本说明书中参考的任何浓度或浓度范围。仍在本文中，所述至少两种表面活性剂可选自本说明书先前部分中所概述的并可与其中任何示例的组合物使用。特别地，至少两种表面活性剂应在烃链长度中具有显著性差异，其表示从2至12个碳基团的差异。示例的差异是4个碳基团。此外，在本文中，接触表面包括本发明的组合物向所述表面的任何施用或应用，为了或具有充分覆盖污染的表面或者充分覆盖被认为有被孢子污染的风险的表面的目的。所述方法的一个特别优选的用途是除去来自梭菌属(特别是艰难梭菌)的孢子。
在所描述的方法的一方面，除去表面上的芽孢菌涉及在有限的接触时间，例如10分钟或更少，或者例如9分钟、8分钟、7分钟、6分钟、5分钟、4分钟、3分钟、2分钟、1分钟或更少，或者例如30秒或更少的接触时间内将如前述公开的足够量的任意组合物接触所述表面。
不受限于任何特别的理论，本发明包含二氧化氯及与具有互补效应的所述不同的表面活性剂的系统的组合，本发明对于除去与表面有关的孢子显得是必需的。除了将所述组合物分布至所述表面的所有部分的充分润湿效应外，还通过消除所述孢子与表面之间的粘附获得清洁效果。此外，本发明的所述组合物似乎具有直接针对孢子表面的溶解效应，其导致孢子的完整性缺失并使它们易于受到二氧化氯的氧化攻击，同时增强了二氧化氯的氧化攻击。
在下述举例说明部分，用本发明的组合物和方法概述了实验，其证实了在非常严格的条件下，在设计为超过临床环境中甚至在流行病学中遇到的正常条件的污染水平的表面上除去孢子的效能。
发明详述及具体实施方式
实施例1
二氧化氯组合物的制备
二氧化氯由于其爆炸性通常不能被作为气体储存，但其通常在水中高度可溶。然而二氧化氯极易挥发且在无显著损失地制备、运输和储存浓缩的二氧化氯溶液中尚有问题。在本发明的上下文中，可根据如EPA Guidelines Manual Alternative Disinfectantsand Oxidant,1999年4月,第4章，二氧化氯，第4-1至4-41页中概述的协议制备含水二氧化氯组合物。
为了制备本发明的具有从100至2000ppm溶解的二氧化氯的组合物，通过混合9％(w/v)HCl和7％(w/v)NaClO2(亚氯酸钠)产生二氧化氯，其快速反应以形成在强酸性环境中的二氧化氯ClO2和NaCl。
通过将300ml 9％(w/v)HCl与300ml 7％(w/v)NaClO2(亚氯酸钠)混合，用4.4升高纯水(Millipore Milli-Q)稀释，来制备5升包含大约1600ppm二氧化氯的原型储备液。
为了中和制备时与根据下述实施例实验时的表面之间的浓度减少，储备液用故意过剩约10-20％的二氧化氯制备。为此原因，在实验期间实例溶液的浓度值在100-1600ppm变化应被认为是微不足道的并可从它们标明的浓度值上升20％，例如10-20％变化。
实施例2A
从储备液制备用于实验的溶液，通过将
1800mL储备液
1.8mL Macat(RTM)AO-8(大约30％辛基二甲基胺氧化物)
1.8mL Macat(RTM)AO-12(大约30％十二烷基二甲基胺氧化物)
与大约1600ppm二氧化氯混合为pH大约为1的实验溶液，其包括约0.1％(v/v)至约0.1％(v/v)AO-12。
实施例2B
由根据实施例1制备的储备液与实施例2的阳离子型表面活性剂生产具有不同浓度的二氧化氯的多种实验溶液。
用含有约0.1％(v/v)AO-8和0.1％(v/v)AO12的MilliQ-水将来自实施例2中的溶液的等分溶液进一步稀释2、4、8、16倍。实验溶液的最终批次含有1600、800、400、200和100ppm ClO2及总量0.2％(v/v)的表面活性剂。
实施例3
从储备液制备用于实验的第二溶液，其通过将1000ml储备液与1mL DOWFAX(RTM)3B2(约38％苯磺酸,癸基(磺基苯氧基)-,二钠盐和约8％苯磺酸,氧基双(癸基)-,二钠盐和1mL DOWFAX(RTM)8390(38.5％％单-和双十六烷基二磺酸化的二苯醚二钠盐)混合至实验溶液pH约1，包含约1600ppm二氧化氯。
实施例4
在本实施例中，概述了是否本发明的组合物对于表面上的芽孢菌显示除去能力的方法。本实施例还与传统的抗菌剂比较并确认它们相对无效。
除去在表面上的艰难梭菌的孢子
方法与材料
孢子悬浮液
将艰难梭菌孢子PCR核糖核酸型(PCR Ribotype)023(ECDC/Cardiff命名法)从冷冻的样品转移至具有苛求厌氧琼脂(FAAAP)的平板上，在厌氧菌条件下培养2天。将培养基转移至环境条件中并允许艰难梭菌菌落形成孢子。收集所述孢子并溶解在无菌水中(反渗透(RO))，用乙醇震动(alcohol shock)(70％)、洗涤、离心并作为孢子悬浮液收集。与在悬浮液中的约80％的孢子相比，在室( chamber)中计数孢子，达2.4x108个孢子(即：在实验表面上的孢子)。
琼脂平板
在实验中，除去滤液的对照，苛求厌氧琼脂(FAAAP)中加入牛磺胆酸盐(1g/l)，其中使用对于艰难梭菌有选择性的琼脂平板。
表面的制备
在制备中，0.1ml的孢子悬浮液被转移至显微镜载玻片、黄铜或铜的无菌板。当所述孢子悬浮液已干燥，加入0.2ml下述溶液：
根据实施例2A制得的溶液
Virkon 1％
乙醇70％
无菌RO水。
在与所述溶液接触10分钟后，将镜片(Glasses)和平板各自转移至500ml的玻璃烧瓶中以稀释并中断杀菌。将烧瓶在200rpm旋转20分钟。
培养
从各自旋转的烧瓶中转移0.1ml至琼脂平板(培养物1)。将样品在试管中分两步稀释1/10。从每个试管转移0.1ml至琼脂平板(培养物2和3)。
过滤烧瓶中的溶液并用3x 100ml缓冲的胨水(PENAL)冲洗。过滤分为两步。首先，过滤1ml，接着剩余体积的溶液在烧瓶中(约249ml)。在琼脂平板上培养过滤物(filter)(培养物4和5)。
在两遍中，从滤液收集40ml样品。离心这些并弃去上清液，小丸再次悬浮在0.1ml0.85％NaCl溶液中。将全部体积转移至琼脂平板。
为评价是否有活力的孢子仍留在镜片和平板的表面上，用湿润的棉尖涂片(全部依照“双S”形状涂片)。将该尖在2ml预先还原的(pre-reduced)PY肉汤中培养，其在几个重复步骤中被稀释到1/10并在琼脂平板(0.2ml/板)上培养(培养物6-9)。
所有的培养物平板在厌氧菌条件下在36℃培养2天。
结果例示在下文表1中。
在表1中，说明了对于三种不同表面(玻璃、青铜、铜)的培养物1-9的结果，配有四种不同实验溶液。括号中的结果指的是烧瓶中CFUs(菌落形成单位)的总量，即：经实验溶液处理已存活的和在烧瓶旋转期间从表面除去(displace)的孢子的量。表1还说明了在未稀释的PY肉汤中CFU的量，涉及存活在实验溶液处理中但在烧瓶旋转期间仍粘附在所述表面的孢子的量。
表1证明涉及实施例2的实验溶液对于除去艰难梭菌的孢子具有极佳的能力。还值得注意的是实施例2A的实验溶液具有除去粘附至表面且因此难以除去或较少受传统消除试剂影响的孢子的能力
除表1的结果外，已证实在从滤液取得的样品的培养基中发现没有生长。
表1
实施例5
根据实施例4制备具有孢子悬浮液的无菌显微镜载玻片(玻璃表面)。
将实施例2B中制备的含1600、800、400、200和100ppm ClO2及总量0.2％(v/v)的表面活性剂施用至根据实施例4的玻璃表面。
以与实施例4中相同的方法处理玻璃载玻片并吸收样品和以与实施例4中相同的方式培养。
对于含1600、800、400、200和100ppm ClO2的溶液的结果显示在表2中。该结果以与表1中相同的方式表示。
显然，与传统试剂(例如乙醇和Virkon)相比，具有如100ppm这么低浓度的二氧化氯的本发明的化合物对于除去艰难梭菌的孢子具有改善的效能。结果还表明本发明的化合物具有在不同类型的表面上发挥其作用的能力。
除表2的结果外，已证实在从滤液取得的样品的培养基中发现没有生长。
表2
实施例6
设计实施例6以评价用于在表面上除去艰难梭菌的孢子的与二氧化氯组合的不同类型与组合的表面活性剂。使用下述实验溶液：
无菌RO水
乙醇70％
溶液LC1包含：1600ppm二氧化氯
溶液LC1_12包含：1600ppm二氧化氯和0.2％(v/v)RD1及RD2
溶液LC1_34包含：1600ppm二氧化氯和0.2％(v/v)RD3及RD4
溶液LC2包含：800ppm二氧化氯
溶液LC2_1包含：800ppm二氧化氯和0.2％(v/v)RD1
溶液LC2_2包含：800ppm二氧化氯和0.2％(v/v)RD2
溶液LC2_3包含：800ppm二氧化氯和0.2％(v/v)RD3
溶液LC2_4包含：800ppm二氧化氯和0.2％(v/v)RD3
溶液LC2_12包含：800ppm二氧化氯和0.2％(v/v)RD1及RD2
溶液LC2_34包含1600ppm二氧化氯和0.2％(v/v)RD3及RD4
根据实施例2、2A和3制备溶液。RD1和RD2分别表示商标名为DOWFAX3B2和DOWFAX8390的实施例3的阴离子型表面活性剂。RD3和R4表示商标名为AO-8Macat和AO-12Macat的实施例2A的阳离子型表面活性剂。
制备孢子悬浮液并根据实施例4计数。
Ribotype 25；8.0x109孢子/mL(8.0x108孢子，在玻璃表面上)，大约80％孢子在悬浮液中。
通过转移0.1ml的孢子溶液至显微镜载玻片上来制备玻璃表面。在干燥该悬浮液后，将0.2ml的实验溶液加至载玻片上，持续1至10分钟的施用时间。随后，分别将玻璃表面置于含有250ml 0.85％NaCl溶液的500ml玻璃烧瓶中，并以200rpm旋转20分钟。
在观察到的CFUs中，培养物的结果示于表3中，还用括号说明了烧瓶中CFUs的数目以及未稀释的PY肉汤中的CFUs的数目，其分别表示从表面分离的存活孢子数和在旋转期间未从表面分离的存活的孢子数。
除表3的结果外，已证实在从滤液取得的样品的培养基中发现没有生长。表3证明当与包含单独一种表面活性剂的溶液比较时，合用两种具有不同互补特征的表面活性剂改善了除去孢子的效能。
表3
实施例7
实施例7概述了不同的接触本发明的二氧化氯溶液的实验。制备孢子悬浮液并根据实施例4计数。
Ribotype 25；9.6x108孢子/mL(9.6x107孢子，在玻璃表面上)，大约80％孢子在悬浮液中。
通过转移0.1ml的孢子溶液至显微镜载玻片上来制备玻璃表面。在干燥该悬浮液后，将0.2ml的实验溶液加至载玻片上，持续1至10分钟的施用时间。随后，分别将玻璃表面置于含有250ml 0.85％NaCl溶液的500ml玻璃烧瓶中，并以200rpm旋转20分钟。
实验溶液为：
无菌RO水10min
乙醇70％10min
二氧化氯1600 1min
二氧化氯1600 2min
二氧化氯1600 3min
二氧化氯1600 4min
二氧化氯1600 5min
二氧化氯1600 6min
二氧化氯1600 7min
二氧化氯1600 8min
二氧化氯1600 9min
二氧化氯1600 10min
根据实施例2B制备包含二氧化氯的实验溶液，其包含1600ppm二氧化氯以及0.2％(v/v)阳离子表面活性剂，所述阳离子表面活性剂包含等量的辛基二甲基胺氧化物和十二烷基二甲基胺氧化物。
在旋转后，用实施例4中的操作和琼脂平板处理和培养烧瓶的内容物。
在观察到的CFUs中，培养物的结果示于表4中，还用括号说明了烧瓶中CFUs的数目以及未稀释的PY肉汤中的CFUs的数目，其分别表示从表面分离的存活孢子数和在旋转期间未从表面分离的存活的孢子数。
除表4的结果外，已证实在从滤液取得的样品的培养基中发现没有生长。
表4的结果指示了实验溶液还在非常短的接触时间对严重孢子污染的表面高度有效。还在短如1分钟或更少的接触时间提供了允许二氧化氯产生除去孢子效果的合适的效能。
基于孢子悬浮液的重复实验(Ribotype 25:4,8x108孢子/mL(4.8x107，在玻璃表面上)，约80％孢子在悬浮液中)在与相同的实验溶液接触的短如15秒的时间显示了效能。
表4
实施例8
实施例8概述了采用根据实施例2A制得的具有不同的表面活性剂浓度的800和1600ppm的二氧化氯溶液的实验。制备孢子悬浮液并根据实施例4计数。
Ribotype 25；8.0x108孢子/mL(8.0x107孢子，在玻璃表面上)，大约80％孢子在悬浮液中。
通过转移0.1ml的孢子溶液至显微镜载玻片上来制备玻璃表面。在干燥该悬浮液后，将0.2ml的实验溶液加至载玻片上，持续2分钟的施用时间。随后，各自将玻璃表面置于含有250ml 0.85％NaCl溶液的500ml玻璃烧瓶中，并以200rpm旋转20分钟。
实验溶液为：
无菌RO水
乙醇70％
LC1A_2包含1600ppm二氧化氯
LC1B_2包含1600ppm二氧化氯和2％(v/v)RD3以及RD4
LC1C_2包含1600ppm二氧化氯和0.02％(v/v)RD3以及RD4
LC1E_2包含1600ppm二氧化氯和0.2％(v/v)RD3以及RD4
LC2A_2包含800ppm二氧化氯
LC2B_2包含800ppm二氧化氯和2％(v/v)RD3以及RD4
LC2C_2包含800ppm二氧化氯和0.02％(v/v)RD3以及RD4
LC2E_2包含800ppm二氧化氯和0.2％(v/v)RD3以及RD4
RD3和R4表示Macat(RTM)AO-8和Macat(RTM)AO-12的实施例2A的阳离子型表面活性剂。
在旋转后，用实施例4中的操作和琼脂平板处理和培养烧瓶的内容物。
在观察到的CFUs中，培养物的结果示于表5中，还用括号说明了烧瓶中CFUs的数目以及未稀释的PY肉汤中的CFUs的数目，其分别表示从表面分离的存活孢子数和在旋转期间未从表面分离的存活的孢子数。
除表5的结果外，已证实在从滤液取得的样品的培养基中发现没有生长。
表5说明在二氧化氯的实验强度(800和1600ppm)中，与更高和更低浓度的表面活性剂相比，浓度为0.2％(v/v)的二氧化氯溶液对于除去表面上的孢子具有更有益的表现。其结果也证实了本发明的表面活性剂帮助二氧化氯发挥其消除功能的效能。
表5

Claims (11)

1.一种用于除去表面上的梭菌属芽孢菌的孢子的方法，包括将所述表面与足够量的具有从约1至约4的pH的酸性含水组合物接触，所述组合物包含从约100ppm至约2000ppm溶解的二氧化氯，具有润湿效应和孢子溶解效应的表面活性剂系统，其中所述表面活性剂系统包含至少两种在所述酸性pH对氧化稳定的烃离子表面活性剂，其中所述至少两种表面活性剂在烃链长度上具有至少四个碳原子的不同。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述两种或多种表面活性剂以从约0.01至约2％(v/v)的量存在。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述两种或多种表面活性剂为在从约1至约4的pH范围内的阳离子型表面活性剂。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述两种或多种表面活性剂为具有6-18个碳原子的烷基的氧化胺。
5.根据权利要求4所述的方法，其中一种表面活性剂为C-8氧化胺且一种表面活性剂为C-12氧化胺。
6.根据权利要求5所述的方法，其中一种表面活性剂为辛基二甲基胺氧化物且一种表面活性剂为十二烷基二甲基胺氧化物。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述表面活性剂的量为约0.2％(v/v)且包含基本相同量的辛基二甲基胺氧化物和十二烷基二甲基胺氧化物。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述两种或多种表面活性剂为在从约1至约4的pH范围内的阴离子型表面活性剂。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述两种或多种阴离子型表面活性剂选自具有7至25个碳原子的烷基硫酸盐、烷基磺酸盐、烷基芳基磺酸盐和芳基磺酸盐的可溶性盐。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述表面活性剂为在烷基链中具有12至19个碳原子的烷基-二苯醚-二磺酸盐。
11.根据权利要求1所述的方法，其中所述芽孢菌为艰难梭菌。
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