CN107549199A - 含香菇多糖和极细链格孢激活蛋白的高效杀菌组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了含香菇多糖和极细链格孢激活蛋白的高效杀菌组合物，该组合物包括有效成分香菇多糖和有效成分极细链格孢激活蛋白，两者的质量比为2:1~1:10，其杀菌组合物中有效成分的总质量百分含量为5%~50%。本发明杀菌组合物可制成可湿性粉剂和水分散粒剂。本发明杀菌组合物有显著的增效协同作用，能够减少农药使用量、提高防治效果、低毒低残留、安全环保、对环境友好、对作物安全。本发明用于防治番茄、马铃薯、西瓜上的病毒病、晚疫病、枯萎病。

Description

含香菇多糖和极细链格孢激活蛋白的高效杀菌组合物

技术领域

本发明属于农药技术领域，具体涉及一种含有有效成分香菇多糖与有效成分极细链格孢激活蛋白的杀菌组合物及其防治农作物病害的应用。

背景技术

香菇多糖，英文通用名称为fungous proteoglycan，化学名称为β-（1→3）（1→6）-D-葡萄糖，分子式为（C₄₂H₇₀O₃₅）n。香菇多糖属植物诱抗素，抑制病毒的主要组分系食用菌菌体代谢所产生的蛋白多糖。

极细链格孢激活蛋白是经极细链格孢菌发酵、提取的一种具有生物活性的、单一、稳定的蛋白质。当接触到植物器官表面后，可以与植物细胞膜上的受体蛋白结合，引起植物体内一系列相关酶活性增加和基因表达量的增强，激发植物体内的一系列代谢调控，促进植物根茎叶生长、提高叶绿素含量，提高作物产量。

目前对于真菌引起的一些植物病害中，特别是病毒病、晚疫病和枯萎病，大量化学药剂的使用，已经明显产生抗性。目前将生物农药的活性成分进行复配，一方面能够有效延缓病害抗性的产生，明显提高防效；另一方面大大降低农药的使用量，降低使用成本，同时还可扩大杀菌谱，提高杀菌效率。

发明人通过大量室内生测和田间药效试验，发现香菇多糖和极细链格孢激活蛋白以一定比例混配后使用，防效提高、持效期延长，用药量减少、使用成本降低，毒性降低、残留量减少，保障了食品安全和环境安全。大量试验证实香菇多糖和极细链格孢激活蛋白复配后具有很强的增效作用，并且两者复配的研究，迄今为止，尚未见相关报道。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种能够延缓抗性产生、降低用药量、对环境安全、防效好的含有香菇多糖与极细链格孢激活蛋白的杀菌组合物。

本发明的技术方案是：

一种含有香菇多糖与极细链格孢激活蛋白的杀菌组合物及其应用，其特征在于：所述杀菌组合物含有有效成分香菇多糖和有效成分极细链格孢激活蛋白，两者的质量比为2:1~1:10。

所述的杀菌组合物，其特征在于：有效成分香菇多糖和有效成分极细链格孢激活蛋白，两者的质量比优选为1:1~1:5。

所述的杀菌组合物，其特征在于：杀菌组合物中有效成分的总质量百分含量为5%~50%。

香菇多糖与极细链格孢激活蛋白所组成的质量比为2:1~1:10。通常组合物中有效成分的总质量百分含量为5%~50%，较佳的为10%~30%。

本发明所述的杀菌组合物，可加工成可湿性粉剂和水分散粒剂。

以上所述的杀菌组合物为可湿性粉剂时，制剂中包含如下组分：香菇多糖1%~6%、极细链格孢激活蛋白1%~45%、分散剂5%~9%、湿润剂3%~8%、填料补充余量。

该杀菌组合物可湿性粉剂具体加工步骤为：按照上述配方将有效成分香菇多糖、极细链格孢激活蛋白、分散剂、湿润剂、填料混合，在混合缸中混合均匀，经气流粉碎机粉碎后再混合均匀，即可制成本发明所述的可湿性粉剂。

以上所述的杀菌组合物为水分散粒剂时，制剂中包含如下组分：香菇多糖1%~6%、极细链格孢激活蛋白1%~45%、分散剂5%~9%、湿润剂3%~8%、崩解剂4%~6%、填料补充余量。

该杀菌组合物水分散粒剂具体加工步骤为：按照上述配方将有效成分香菇多糖、极细链格孢激活蛋白、分散剂、润湿剂、崩解剂、填料混合均匀，用超微气流粉碎机粉碎，经捏合，然后加入流化床造粒干燥机中进行造粒、干燥、筛分后，即可制成本发明所述的水分散粒剂。

所述的分散剂选自：烷基萘磺酸盐、双（烷基）萘磺酸盐甲醛缩合物、萘磺酸甲醛缩合物、芳基酚聚氧乙烯丁二酸酯磺酸盐、辛基酚聚氧乙烯基醚硫酸盐、聚羧酸盐、木质素磺酸盐、对甲氧基脂肪酰胺基苯磺酸、烷基酚聚氧乙烯醚甲醛缩合物硫酸盐、烷基苯磺酸钙盐、萘磺酸甲醛缩合物钠盐、烷基酚聚氧乙烯醚、脂肪胺聚氧乙烯醚、脂肪酸聚氧乙烯酯、酯聚氧乙烯醚中的一种或多种。

所述的润湿剂选自：十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、拉开粉X、润湿渗透剂F、皂角粉、蚕沙、无患子粉中的一种或多种。

所述的崩解剂选自：膨润土、硫酸铵、柠檬酸、尿素、氯化铝、丁二酸、碳酸氢钠中的一种或多种。

所述的填料选自：高岭土、硅藻土、膨润土、凹凸棒土、白炭黑、淀粉、轻质碳酸钙中的一种或多种。

本发明的杀菌组合物具有防治番茄、马铃薯、西瓜上的病毒病、晚疫病、枯萎病等病害的用途。

本发明的杀菌组合物具有以下优势：第一，该组合物在一定配比范围内协同增效作用表现显著，不但能提高防病效果，降低用药量，同时又能扩大杀菌谱；第二，延缓抗性的发生；第三，化学农药和生物农药复配，提高安全性，对环境友好。因此，该杀菌组合物具有较好的经济效益和环境效益，具有较大的推广应用价值。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进一步的说明，实施例中的百分比均为质量百分比，但本发明并不局限于此。

实施应用例一：香菇多糖与极细链格孢激活蛋白复配的室内毒力测定试验

毒力测定实施例1 对番茄病毒病的室内毒力测定试验

试验对象：番茄病毒病

试验方法：参照生测标准方法NY/T 1156.6-2006。取病毒病感染植株的叶片，放入研钵体内，加入等量的1/15mol磷酸缓冲液，充分磨碎后过滤，加300目金刚沙，制成病组织悬浮液。

将药剂均匀喷洒于番茄正反两面至全部润湿，药液自然风干，5天以后再喷药1次，备用。试验设不含药剂的处理（含相同助剂的水溶液）作空白对照。第二次喷药后48小时接种。把棉球在制备的病组织汁液中浸蘸一下，用镊子夹住棉球在接种番茄的叶面沿叶脉方向轻轻擦2次，每株接种上部叶片3片。

根据对照发病情况，接种后30天按下列9级分级标准调查结果，计算病情指数及病指减退率。

0级：无病

1级： 主枝生长点少量叶片有厥叶或黄花现象，植株生长正常

3级：主枝及部分侧枝生长点叶片有厥叶或黄花现象，植株略有矮化

5级：所有生长点叶片有厥叶或黄花现象，植株明显矮化

7级：上部大部分叶片有厥叶或黄花现象，植株明显矮化

9级：上部所有叶片有厥叶或黄花现象，植株明显矮化或死亡

根据调查数据，按下列公式计算各处理的病情指数和病指减退率

病情指数=[Σ（各级病叶数×相对级数值）/（调查总叶数×9）]×100

病指减退率（%）=（对照区病情指数-处理区病情指数）/对照区病情指数×100

防治效果（%）=[1-（空白对照区施药前病情指数×药剂处理区施药后病情指数/空白对照区施药后病情指数×药剂处理区施药前病情指数）]

实测毒力指数(ATI)＝(标准药剂EC50/供试药剂EC50)×100

混剂理论毒力指数(TTI)＝药剂A毒力指数×A药剂在混剂中所占的百分数(%)+药剂B的毒力指数×B药剂在混剂中所占的百分数(%)

共毒系数(CTC)＝[混剂实测毒力指数(ATI)/混剂理论毒力指数(TTI)]×100

复配制剂的共毒系数CTC≥120表现为增效作用，80＜CTC＜120表现为相加作用，CTC≤80表现为拮抗作用。室内毒力测定试验结果，详见表1。

由表1可知，香菇多糖与极细链格孢激活蛋白在配比为2:1~1:10之间时，共毒系数都在120以上，对番茄病毒病具有增效作用，尤其在1:1~1:5之间时，共毒系数在160以上。

毒力测定实施例2 对马铃薯晚疫病的室内毒力测定试验

试验对象：马铃薯晚疫病菌( Phytophtora infestans（Mont.）de Bary)

试验方法：参照生测标准方法NY/T 1156.2-2006，采用含药培养基法：取各单剂和混剂系列浓度的药液3mL，加入冷却至45℃的27mL的PDA培养基中，制成所需要终浓度的含药培养基平板。然后，从培养7天的马铃薯晚疫病菌菌落边缘制取6mm直径菌丝块，移至各系列含药培养基上，菌丝面朝下，每个处理重复4次。处理完毕，置于25℃的恒温生化培养箱中培养，4天后测量菌落直径，计算生长抑制率。通过抑制率的机率值和系列浓度的对数值之间的线性回归分析，求出各个药剂的EC₅₀值，用孙云沛法计算混剂的共毒系数（CTC），以此来评价供试药剂对病菌的活性。

生长抑制率(I)%=[空白对照菌落增长直径(D₀)-药剂处理菌落增长直径(D₁)/ 空白对照菌落增长直径(D₀)]×100

实测毒力指数(ATI)＝(标准药剂EC₅₀/供试药剂EC₅₀)×100

混剂理论毒力指数(TTI)＝药剂A的毒力指数×A药剂在混剂中所占的百分数(%)+药剂B的毒力指数×B药剂在混剂中所占的百分数(%)

共毒系数(CTC)＝[混剂实测毒力指数(ATI)/混剂理论毒力指数(TTI)]×100

复配制剂的共毒系数CTC≥120表现为增效作用，80＜CTC＜120表现为相加作用，CTC≤80表现为拮抗作用。室内毒力测定试验结果，详见表2。

由表2可知，香菇多糖和极细链格孢激活蛋白在配比为2:1~1:10之间时，共毒系数都在120以上，对马铃薯晚疫病具有增效作用，尤其在1:1~1:5之间时，共毒系数在160以上。

毒力测定实施例3 对西瓜枯萎病的室内毒力测定试验

试验对象：西瓜枯萎病

试验方法：参照生测标准方法NY/T 1156.2-2006，采用含药培养基法：取各单剂和混剂系列浓度的药液3mL，加入冷却至45℃的27mL的PDA培养基中，制成所需要终浓度的含药培养基平板。然后，从培养7天的病菌菌落边缘制取6mm直径菌丝块，移至各系列含药培养基上，菌丝面朝下，每个处理重复4次。处理完毕，置于25℃的恒温生化培养箱中培养，4天后测量菌落直径，计算生长抑制率。通过抑制率的机率值和系列浓度的对数值之间的线性回归分析，求出各个药剂的EC₅₀值，用孙云沛法计算混剂的共毒系数（CTC），以此来评价供试药剂对病菌的活性。

生长抑制率(I)%=[空白对照菌落增长直径(D₀)-药剂处理菌落增长直径(D₁)]/ 空白对照菌落增长直径(D₀)×100

实测毒力指数(ATI)＝(标准药剂EC50/供试药剂EC50)×100

混剂理论毒力指数(TTI)＝药剂A毒力指数×A药剂在混剂中所占的百分数(%)+药剂B的毒力指数×B药剂在混剂中所占的百分数(%)

共毒系数(CTC)＝[混剂实测毒力指数(ATI)/混剂理论毒力指数(TTI)]×100

复配制剂的共毒系数CTC≥120表现为增效作用，80＜CTC＜120表现为相加作用，CTC≤80表现为拮抗作用。室内毒力测定试验结果，详见表3。

由表3可知，香菇多糖和极细链格孢激活蛋白在配比为2:1~1:10之间时，共毒系数都在120以上，对西瓜枯萎病具有增效作用，尤其在1:1~1:5之间时，共毒系数在170以上。

实施应用例二：香菇多糖和极细链格孢激活蛋白复配产品制剂实施例（以下含量均为折百百分含量），但本发明不局限于以下实施例中的比例范围。

制剂实施例1 5%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白可湿性粉剂

香菇多糖1%、极细链格孢激活蛋白4%、木质素磺酸盐（分散剂）6%、十二烷基硫酸钠（润湿剂）4%、膨润土（载体）加至100%，制得5%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白可湿性粉剂。

制剂实施例2 28%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白可湿性粉剂

香菇多糖4%、极细链格孢激活蛋白24%、芳基酚聚氧乙烯丁二酸酯磺酸盐（分散剂）8%、十二烷基硫酸钠（润湿剂）6%、高岭土（载体）加至100%，制得28%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白可湿性粉剂。

制剂实施例3 9%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白可湿性粉剂

香菇多糖6%、极细链格孢激活蛋白3%、烷基酚聚氧乙烯醚甲醛缩合物硫酸盐（分散剂）9%、皂角粉（润湿剂）7%、白炭黑（载体）加至100%，制得9%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白可湿性粉剂。

制剂实施例4 22%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白可湿性粉剂

香菇多糖2%、极细链格孢激活蛋白20%、对甲氧基脂肪酰胺基苯磺酸（分散剂）6%、无患子粉（润湿剂）4%、轻质碳酸钙（载体）加至100%，制得22%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白可湿性粉剂。

制剂实施例5 18%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白可湿性粉剂

香菇多糖2%、极细链格孢激活蛋白16%、烷基苯磺酸钙盐（分散剂）6%、蚕沙（润湿剂）6%、凹凸棒土（载体）加至100%，制得18%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白可湿性粉剂。

制剂实施例6 12%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白可湿性粉剂

香菇多糖3%、极细链格孢激活蛋白9%、烷基酚聚氧乙烯醚（分散剂）5%、拉开粉（润湿剂）3%、硅藻土（载体）加至100%，制得12%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白可湿性粉剂。

制剂实施例7 48%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白水分散粒剂

香菇多糖6%、极细链格孢激活蛋白42%、烷基萘磺酸盐（分散剂）8%、润湿渗透剂（润湿剂）8%、硫酸铵（崩解剂）4%、高岭土加至100%，制得48%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白水分散粒剂。

制剂实施例8 10%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白水分散粒剂

香菇多糖5%、极细链格孢激活蛋白5%、酯聚氧乙烯醚（分散剂）6%、十二烷基苯磺酸钠（润湿剂）8%、氯化铝（崩解剂）4%、白炭黑加至100%，制得10%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白水分散粒剂。

制剂实施例9 6%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白水分散粒剂

香菇多糖2%、极细链格孢激活蛋白4%、辛基酚聚氧乙烯基醚硫酸盐（分散剂）6%、蚕沙（润湿剂）4%、尿素（崩解剂）5%、轻质碳酸钙加至100%，制得6%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白水分散粒剂。

制剂实施例10 24%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白水分散粒剂

香菇多糖4%、极细链格孢激活蛋白20%、聚羧酸盐（分散剂）7%、无患子粉（润湿剂）5%、碳酸氢钠（崩解剂）5%、膨润土加至100%，制得24%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白水分散粒剂。

制剂实施例11 20%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白水分散粒剂

香菇多糖2%、极细链格孢激活蛋白18%、萘磺酸甲醛缩合物钠盐（分散剂）8%、十二烷基硫酸钠（润湿剂）4%、柠檬酸（崩解剂）4%、凹凸棒土加至100%，制得20%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白水分散粒剂。

制剂实施例12 50%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白水分散粒剂

香菇多糖5%、极细链格孢激活蛋白45%、脂肪酸聚氧乙烯酯（分散剂）6%、皂角粉（润湿剂）5%、膨润土（崩解剂）6%、硅藻土加至100%，制得50%香菇多糖•极细链格孢激活蛋白水分散粒剂。

实施应用例三：香菇多糖与极细链格孢激活蛋白复配的田间药效试验

田间应用实施例1 防治番茄病毒病的田间药效试验

试验地点：本试验安排在咸阳市杨凌区，选取病毒病常年发病较重的菜园。

试验方法：参照《农药田间药效试验准则 第8部分：杀菌剂防治番茄病毒病 NY/T1464.8-2007》，试验药剂、空白对照的小区处理采用随机排列，每个小区40~60株，每处理4次重复，以等量清水处理作为空白对照。试验药剂及用量见表4，施用方法为喷雾，直至叶片的正反面均匀喷湿。在番茄病毒病发病初期开始施药，整个生育期施药3次，施药间隔期7~10天。

调查和统计方法：每小区随机5点取样，每点调查6株，保护地小区不足30株者应全区调查，以株为单位记录调查总株数、各级病株数。通常施药前调查病情基数，下次施药前及末次施药后7天~14天调查防治效果，记录施药次数、每次施药日期及作物生育期。

分级方法：

0级：无症状；

1级：明脉、轻花叶；

3级：心叶及中部叶片花叶；

5级：心叶及中部叶片花叶，少数叶片畸形，皱缩或植株轻度矮化；

7级：重花叶，多数叶片畸形，皱缩或植株矮化；

9级：重花叶，叶片明显畸形、线叶，植株严重矮化，甚至死亡。

药效计量方法：

病情指数=[Σ（各级病叶数×相对级数值）/（调查总叶数×9）]×100

防治效果（%）=[1-（空白对照区施药前病情指数×药剂处理区施药后病情指数/空白对照区施药后病情指数×药剂处理区施药前病情指数）]×100

从表4中可知，本发明实施例杀菌组合物香菇多糖和极细链格孢激活蛋白在防治番茄病毒病均有显著提高，在末次药后7天，最高防效达96.38%，最低防效为92.01%；而香菇多糖、极细链格孢激活蛋白单剂的防效分别为73.68%和74.74%。田间试验结果充分表明，香菇多糖和极细链格孢激活蛋白复配对番茄病毒病具有明显的协同增效作用，在本试验用药量范围内，对番茄安全，无不良影响，且在有效成分用药量减少的情况，防效大幅度提高。由此可见，本发明组合物具有降低用药量、提高防效、降低成本、减少残留、安全环保的优势。

田间应用实施例2 防治马铃薯晚疫病的田间药效试验

试验地点：本试验安排在榆林市定边县，选取番茄晚疫病常年发病较重的地块。

试验方法：参照《农药田间药效试验准则（一）杀菌剂防治马铃薯晚疫病GB/T17980.34－2000》，试验药剂、空白对照的小区处理采用随机排列，小区面积40m²，每处理4次重复，以等量清水处理作为空白对照。试验药剂及用量见表5，施用方法为喷雾，直至叶片的正反面均匀喷湿。在马铃薯晚疫病发病初期开始施药，整个生育期施药3次，施药间隔期7~10天。

调查和统计方法：每小区对角线五点取样，每点取2-3株，查全部叶片。施药前调查病情基数，最后一次调查在末次施药后10~14天进行。

分级方法：

0级：无病斑；

1级：病斑面积占整个叶面积的5%以下；

3级：病斑面积占整个叶面积的6%~10%；

5级：病斑面积占整个叶面积的11%~20%；

7级：病斑面积占整个叶面积的21%~50%；

9级：病斑面积占整个叶面积的50%以上。

药效计量方法：

病情指数=[Σ（各级病叶数×相对级数值）/（调查总叶数×9）]×100

防治效果（%）=[1-（空白对照区施药前病情指数×药剂处理区施药后病情指数/空白对照区施药后病情指数×药剂处理区施药前病情指数）]×100

从表5中可知，本发明实施例杀菌组合物香菇多糖和极细链格孢激活蛋白在防治马铃薯晚疫病上均有显著提高，在末次药后10天，最高防效达95.84%，最低防效为91.88%；而香菇多糖、极细链格孢激活蛋白单剂的防效分别为71.84%和72.56%。田间试验结果充分表明，香菇多糖和极细链格孢激活蛋白复配对马铃薯晚疫病具有明显的协同增效作用，在本试验用药量范围内，对马铃薯安全，无不良影响，且在有效成分用药量减少的情况，防效大幅度提高。由此可见，本发明组合物具有降低用药量、提高防效、降低成本、减少残留、安全环保的优势。

田间应用实施例3 防治西瓜枯萎病的田间药效试验

试验地点：本试验安排在渭南市蒲城县，选取西瓜枯萎病常年发病较重的地块。

试验方法：参照《农药田间药效试验准则（二）第113部分：杀菌剂防治瓜类枯萎病GB/T17980.113－2004》，试验药剂、空白对照的小区处理采用随机排列，小区面积30m²，每处理4次重复，以等量清水处理作为空白对照。试验药剂及用量见表6，施用方法为喷雾，在西瓜枯萎病发病初期开始施药，整个生育期施药2次，施药间隔期7~14天。

调查和统计方法：调查小区中所有植株是否有枯萎病的典型症状，记录枯萎病发病株数及调查总株数。在施药前调查病情基数，下次施药前及末次施药后7d~14d调查防治效果。

药效计量方法：

病株率（%）=（病株数/调查总株数）×100

防治效果（%）=（空白对照区病株率-处理区病株率/空白对照区病株率）×100

从表6中可知，本发明实施例杀菌组合物香菇多糖和极细链格孢激活蛋白在防治西瓜枯萎病上均有显著提高，在末次药后14天，最高防效达96.78%，最低防效为92.07%；而香菇多糖、极细链格孢激活蛋白单剂的防效分别为82.40%和79.44%。田间试验结果充分表明，香菇多糖和极细链格孢激活蛋白复配对西瓜枯萎病具有明显的防治效果，在本试验用药量范围内，对西瓜安全，无不良影响，且在有效成分用药量减少的情况，防效大幅度提高。由此可见，本发明组合物具有降低用药量、提高防效、降低成本、减少残留、安全环保的优势。

综上所述，本发明所述的杀菌组合物香菇多糖和极细链格孢激活蛋白复配，对番茄病毒病、马铃薯晚疫病、西瓜枯萎病有较好的防治效果。其活性和杀菌效果不是各组分活性的简单叠加，与现有的单一制剂相比，除具有显著的杀菌效果外，而且有显著的增效作用，对作物安全性好，符合农药制剂的安全性要求。

Claims (5)

1.含香菇多糖和极细链格孢激活蛋白的高效杀菌组合物，其特征在于：所述杀菌组合物含有有效成分香菇多糖和有效成分极细链格孢激活蛋白，两者的质量比为2:1~1:10。

2.根据权利要求1所述的杀菌组合物，其特征在于：有效成分香菇多糖和有效成分极细链格孢激活蛋白，两者的质量比优选为1:1~1:5。

3.根据权利要求1至3中任一项所述的杀菌组合物，其特征在于：杀菌组合物中有效成分的总质量百分含量为5%~50%。

4.根据权利要求4所述的杀菌组合物，其特征在于：组合物可制成可湿性粉剂和水分散粒剂。

5.根据权利要求5所述的杀菌组合物具有防治番茄、马铃薯、西瓜上的病毒病、晚疫病、枯萎病等病害的用途。