CN107522825B - 基于温度响应性液体弹珠的三维细胞培养器及构筑和使用方法 - Google Patents

基于温度响应性液体弹珠的三维细胞培养器及构筑和使用方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107522825B
CN107522825B CN201710625843.4A CN201710625843A CN107522825B CN 107522825 B CN107522825 B CN 107522825B CN 201710625843 A CN201710625843 A CN 201710625843A CN 107522825 B CN107522825 B CN 107522825B
Authority
CN
China
Prior art keywords
temperature
cell culture
nano
pnipam
sensitive polymer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201710625843.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107522825A (zh
Inventor
陈芳
陈闯
陈助国
马晓燕
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Northwest University of Technology
Original Assignee
Northwest University of Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Northwest University of Technology filed Critical Northwest University of Technology
Priority to CN201710625843.4A priority Critical patent/CN107522825B/zh
Publication of CN107522825A publication Critical patent/CN107522825A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107522825B publication Critical patent/CN107522825B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F292/00—Macromolecular compounds obtained by polymerising monomers on to inorganic materials
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/02—Membranes; Filters
    • C12M25/04—Membranes; Filters in combination with well or multiwell plates, i.e. culture inserts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2513/00—3D culture

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明涉及一种基于温度响应性液体弹珠的三维细胞培养器及构筑和使用方法，结合了液体弹珠的三维细胞培养器，将温度敏感性的共聚物修饰的不同种类颗粒作为温度响应颗粒，在其上滴加不同的细胞培养液，形成具有对不同温度响应行为的液体弹珠，从而可以作为三维细胞培养器。将在生物医学细胞培养领域具有广阔的应用前景。本发明的优点在于：三维细胞培养器制备方法快速，易批量生产；液体弹珠的球形培养器赋予细胞黏附、增殖的良好三维模板，采用控制温度的方法，可以实现复杂细胞层结构的培养及无损伤性脱附的过程，且液体弹珠具有优异的稳定性和气体通过性，能够有效地保证细胞的存活。

Description

基于温度响应性液体弹珠的三维细胞培养器及构筑和使用 方法
技术领域
本发明属于胶体与界面科学领域，涉及一种基于温度响应性液体弹珠的三维细胞培养器及构筑和使用方法，该弹珠的球形培养器赋予细胞黏附、增殖的良好三维模板，采用控制温度的方法，可以实现复杂细胞层结构的培养及无损伤性脱附的过程，且液体弹珠具有优异的稳定性和气体通过性，能够有效地保证细胞的存活。
背景技术
传统的细胞回收方法主要有酶解法和机械法，但两种方法均在某种程度上损伤膜蛋白造成细胞功能缺失，为此发展非酶解非机械方式将细胞与培养机制分离的的技术是目前的研究热点。近年来，采用温敏型聚合物PNIPAM可有效的替代传统的方法进行细胞回收，该方法称之为细胞片层技术Cell Sheet Engineering(CST)。具有显著的优点使其受到研究者的广泛青睐，首先其相变温度接近于人体温度，且此方法仅通过控制细胞培养温度，就能实现细胞包含膜蛋白和粘附蛋白的共同脱离，且保护了细胞间连接蛋白不受破坏。
PNIPAm是一类典型的可用于修饰细胞培养基的温度敏感性聚合物。其主要工作原理原理主要利用其温敏行为，在温度高于PNIPAm的最低临界温度时进行细胞培养，PNIPAm显示出疏水性，细胞在其表面附着、扩张和增殖。当温度降低至32℃以下，PNIPAm表面变为亲水性，在表面和培养细胞间形成水化层，只利用温度变化特性使得粘附在培养皿表面的细胞层状分离。避免了蛋白酶的消化作用产生细胞破损。截止目前已经发展了大量的关于PNIPAm及其共聚物在二维表面修饰细胞培养基获得细胞片层的技术，但CST细胞片层技术还停留在传统二维细胞培养层面上，该方法缺乏由细胞基质构成的立体支架，无法形成细胞生长、分化所需的整体微环境，且缺乏体内微环境中特异性生长因子及分化因子，因而附在底物平面上生长的细胞只能呈二维伸展，对于如何实现细胞层技术的3维细胞培养是一项巨大的挑战。
液体弹珠是由颗粒包裹微量液体构成的复杂液滴体系，它将传统的微量液滴移动的液-固界面转变为新的固-固界面，大大降低了接触角滞后效应，可简便的实现微量液滴的操控。近年来已在微反应器，细胞培养，微量液体传输等领域显示出较大的应用潜力。之所以适用于细胞培养，得益于其壳层的类似多孔膜的结构，能使O2和CO2能在膜界面处进行自由交换，保证细胞生长的条件；疏水的颗粒界面提供的非粘性表面使得细胞都悬浮在培养液中，受限的液体体积促进了其界面与细胞的充分接触，从而有益于细胞的聚集和生长，打破了细胞贴壁生长的二维增殖。
发明内容
要解决的技术问题
为了避免现有技术的不足之处，本发明提出一种基于温度响应性液体弹珠的三维细胞培养器及构筑和使用方法。
技术方案
一种基于温度响应性液体弹珠的三维细胞培养器，其特征在于包括温敏聚合物修饰的无机微纳米颗粒和细胞培养液；将温敏聚合物修饰的无机微纳米颗粒包覆细胞培养液，得到三维细胞培养器。
所述无机微纳米颗粒为纳米二氧化硅、纳米四氧化三铁、或氧化石墨烯。
所述温敏聚合物为聚N-异丙基丙烯酰胺PNIPAM均聚物，或聚N-异丙基丙烯酰胺与聚丙烯酸的共聚物PNIPAM/PAA。
一种构筑所述三维细胞培养器的方法，其特征在于步骤如下：
步骤1：以化学接枝法制备温敏聚合物修饰的无机微纳米颗粒；
当无机微纳米颗粒为纳米二氧化硅时，采用3-氨基丙基三乙氧基硅烷和2-溴异丁酰溴与SiO2反应，得到SiO2-Br引发剂，再用表面引发原子转移自由基聚合的方式将温敏聚合物接到SiO2表面，获得温敏聚合物修饰的纳米二氧化硅颗粒；
当无机微纳米颗粒为纳米四氧化三铁时，将硅烷偶联剂2-(4-氯磺酰苯基)乙基三氯硅烷枝到Fe3O4表面，再用表面引发原子转移自由基聚合的方式将温敏聚合物接枝到Fe3O4表面，获得温敏聚合物修饰的纳米四氧化三铁颗粒；
当无机微纳米颗粒为氧化石墨烯，采用N，N’-羰基二咪唑(CDI)和二甲醇胺的方式活化氧化石墨烯，再与2-氯丙酰氯反应，获得GO-Cl引发剂，再将温敏聚合物通过表面引发自由基聚合的方式接到GO表面，获得温敏聚合物修饰的氧化石墨烯颗粒；
步骤2：将细胞培养基中加入10％的小牛血清，与抗生素溶液混合后，加入NaHCO3后得到细胞培养液，其中抗生素溶液为100U/ml青霉素溶液、NaHCO3浓度为0.05mol/L、pH9.6；
步骤3：将30μL-150μL的细胞培养液为内相置于无机微纳米颗粒上，滚动后制备成温度响应性液体弹珠为三维细胞培养器。
步骤1中：当无机微纳米颗粒为纳米二氧化硅时，温敏聚合物为聚N-异丙基丙烯酰胺PNIPAM均聚物时，采用3-氨基丙基三乙氧基硅烷和2-溴异丁酰溴与SiO2反应，得到SiO2-Br引发剂，再用表面引发原子转移自由基聚合的方式将PNIPAm接到SiO2表面，获得表面接枝率为40％的SiO2@PNIPAm。
步骤1中：当无机微纳米颗粒为纳米二氧化硅时，温敏聚合物为聚N-异丙基丙烯酰胺与聚丙烯酸的共聚物PNIPAm/PAA时，采用3-氨基丙基三乙氧基硅烷和2-溴异丁酰溴与SiO2反应，得到SiO2-Br引发剂，再将PNIPAm、PAA单体通过接枝表面引发原子转移自由基聚合的方式接枝到SiO2表面，获得表面接枝率为的40％的SiO2@PNIPAM/PAA粒子。
步骤1中：当温敏聚合物为纳米四氧化三铁时，将硅烷偶联剂2-(4-氯磺酰苯基)乙基三氯硅烷(CTCS)接枝到Fe3O4表面，再用表面引发原子转移自由基聚合的方式将PNIPAM/PEG共聚物接枝到Fe3O4表面，获得表面接枝率30％的Fe3O4@PNIPAm/PAA粒子。
步骤1中：当无机微纳米颗粒为氧化石墨烯，温敏聚合物为聚N-异丙基丙烯酰胺与聚乙烯醇的共聚物PNIPAM/PAA时，首先采用采用N，N’-羰基二咪唑(CDI)和二甲醇胺的方式活化氧化石墨烯，再与2-氯丙酰氯反应，获得GO-Cl引发剂，再将PNIPAM和PAA单体通过表面引发自由基聚合的方式接到GO表面，获得表面接枝率达35％的GO@PNIPAm/PEG。
一种利用所述三维细胞培养器进行细胞培养的方法，其特征在于：将三维细胞培养器置于多孔培养板，在温度为36℃-37℃，湿度为50RH％-80％RH环境下生长，细胞培养2-7天后，将其置于低于室温环境中，获得所培养细胞的三维生长体。
所述室温为10-25℃。
有益效果
本发明提出的一种基于温度响应性液体弹珠的三维细胞培养器及构筑和使用方法，结合了液体弹珠的三维细胞培养器，将温度敏感性的共聚物修饰的不同种类颗粒作为温度响应颗粒，在其上滴加不同的细胞培养液，形成具有对不同温度响应行为的液体弹珠，从而可以作为三维细胞培养器。将在生物医学细胞培养领域具有广阔的应用前景。
与现有细胞培养技术相比，本发明的优点在于：(1)本发明所述的基于温度响应性液体弹珠的三维细胞培养器制备方法快速，易批量生产；(2)液体弹珠的球形培养器赋予细胞黏附、增殖的良好三维模板，采用控制温度的方法，可以实现复杂细胞层结构的培养及无损伤性脱附的过程，且液体弹珠具有优异的稳定性和气体通过性，能够有效地保证细胞的存活。
附图说明
图1：制作液体弹珠的三维细胞培养器示意图
图2：液体弹珠的三维细胞培养器数码照片
图3：液体弹珠三维细胞培养器进行三维细胞培养示意图
具体实施方式
现结合实施例、附图对本发明作进一步描述：
实例1
(1)杂化颗粒的制备
当无机微纳米颗粒为纳米二氧化硅时，温敏聚合物为聚N-异丙基丙烯酰胺PNIPAM均聚物时，采用3-氨基丙基三乙氧基硅烷和2-溴异丁酰溴与SiO2反应，得到SiO2-Br引发剂，再用表面引发原子转移自由基聚合的方式将PNIPAm接到SiO2表面，获得表面接枝率为40％的SiO2@PNIPAm。
(2)液体弹珠三维细胞培养器的构筑
以Hep G2(每100μL约104)细胞培养液为(DMEM培养基(Gibco)、10％小牛血清，及青霉素溶液100U，NaHCO3缓冲溶液)的混合液作为细胞培养液，置于5℃条件下暂时保存。将合成的温敏杂化颗粒散布在塑料基板上，用微量进样器滴加150μL的细胞培养溶液，然后用微量进样器带动液滴滚动，使液滴表面充分包裹纳米颗粒形成液体弹珠，即温敏三维细胞培养器。
(3)细胞的培养
将上述构筑的细胞培养器内，在温度为36.5℃，二氧化碳5％，湿度为60RH％条件下进行培养，过程中采用微量进样器补充细胞培养基，经天2天后,将其置于20℃条件下2h，三维Hep G2生长体可从壳层脱落，从而获得类球形的三维细胞体。
实例2
(1)杂化颗粒的制备
当无机微纳米颗粒为纳米二氧化硅时，温敏聚合物为聚N-异丙基丙烯酰胺与聚丙烯酸的共聚物PNIPAm/PAA时，采用3-氨基丙基三乙氧基硅烷和2-溴异丁酰溴与SiO2反应，得到SiO2-Br引发剂，再将PNIPAm、PAA单体通过接枝表面引发原子转移自由基聚合的方式接枝到SiO2表面，获得表面接枝率为的40％的SiO2@PNIPAM/PAA粒子。
(2)液体弹珠三维细胞培养器的构筑
以Hep G2(每100μL约104)细胞培养液为(DMEM培养基(Gibco)、10％小牛血清，及青霉素溶液100U，NaHCO3缓冲溶液)的混合液作为细胞培养液，置于5℃条件下暂时保存。将合成的温敏杂化颗粒散布在塑料基板上，用微量进样器滴加150μL的细胞培养溶液，然后用微量进样器带动液滴滚动，使液滴表面充分包裹纳米颗粒形成液体弹珠，即温敏三维细胞培养器。
(3)细胞的培养
将上述构筑的细胞培养器内，在温度为36.5℃，二氧化碳5％，湿度为60RH％条件下进行培养，过程中采用微量进样器补充细胞培养基，经天4天后,将其置于20℃条件下2h，三维Hep G2生长体可从壳层脱落，从而获得类球形的三维细胞体。
实例3
(1)杂化颗粒的制备
当温敏聚合物为纳米四氧化三铁时，将硅烷偶联剂2-(4-氯磺酰苯基)乙基三氯硅烷(CTCS)接枝到Fe3O4表面，再用表面引发原子转移自由基聚合的方式将PNIPAM/PEG共聚物接枝到Fe3O4表面，获得表面接枝率30％的Fe3O4@PNIPAm/PAA粒子。
(2)液体弹珠三维细胞培养器的构筑
以Hep G2(每100μL约104)细胞培养液为(DMEM培养基(Gibco)、10％小牛血清，及青霉素溶液100U，NaHCO3缓冲溶液)的混合液作为细胞培养液，置于5℃条件下暂时保存。将合成的温敏杂化颗粒散布在塑料基板上，用微量进样器滴加120μL的细胞培养溶液，然后用微量进样器带动液滴滚动，使液滴表面充分包裹纳米颗粒形成液体弹珠，即温敏三维细胞培养器。
(3)细胞的培养
将上述构筑的细胞培养器内，在温度为36.5℃，二氧化碳5％，湿度为60RH％条件下进行培养，过程中采用微量进样器补充细胞培养基，经天6天后,将其置于20℃条件下2h，三维Hep G2生长体可从壳层脱落，从而获得类球形的三维细胞体。
实例4
(1)杂化颗粒的制备
当无机微纳米颗粒为氧化氧化石墨烯，温敏聚合物为聚N-异丙基丙烯酰胺与聚乙烯醇的共聚物PNIPAM/PAA时，首先采用采用N，N’-羰基二咪唑(CDI)和二甲醇胺的方式活化氧化氧化石墨烯，再与2-氯丙酰氯反应，获得GO-Cl引发剂，再将PNIPAM和PAA单体通过表面引发自由基聚合的方式接到GO表面，获得表面接枝率达35％的GO@PNIPAm/PEG；
(2)液体弹珠三维细胞培养器的构筑
以Hep G2(每100μL约104)细胞培养液为(DMEM培养基(Gibco)、10％小牛血清，及青霉素溶液100U，NaHCO3缓冲溶液)的混合液作为细胞培养液，置于5℃条件下暂时保存。将合成的温敏杂化颗粒散布在塑料基板上，用微量进样器滴加120μL的细胞培养溶液，然后用微量进样器带动液滴滚动，使液滴表面充分包裹纳米颗粒形成液体弹珠，即温敏三维细胞培养器。
(3)细胞的培养
将上述构筑的细胞培养器内，在温度为36.5℃，二氧化碳5％，湿度为60RH％条件下进行培养，过程中采用微量进样器补充细胞培养基，经天7天后,将其置于20℃条件下2h，三维Hep G2生长体可从壳层脱落，从而获得类球形的三维细胞体。

Claims (6)

1.一种基于温度响应性液体弹珠的三维细胞培养器的构筑方法，其特征在于：所述三维细胞培养器包括温敏聚合物修饰的无机微纳米颗粒和细胞培养液；将温敏聚合物修饰的无机微纳米颗粒包覆细胞培养液，得到三维细胞培养器；
所述构筑方法的步骤如下：
步骤1：以化学接枝法制备温敏聚合物修饰的无机微纳米颗粒；所述无机微纳米颗粒为纳米二氧化硅、纳米四氧化三铁或氧化石墨烯；
当无机微纳米颗粒为纳米二氧化硅时，采用3-氨基丙基三乙氧基硅烷和2-溴异丁酰溴与SiO2反应，得到SiO2-Br引发剂，再用表面引发原子转移自由基聚合的方式将温敏聚合物接到SiO2表面，获得温敏聚合物修饰的纳米二氧化硅颗粒；
当无机微纳米颗粒为纳米四氧化三铁时，将硅烷偶联剂2-(4-氯磺酰苯基)乙基三氯硅烷枝到Fe3O4表面，再用表面引发原子转移自由基聚合的方式将温敏聚合物接枝到Fe3O4表面，获得温敏聚合物修饰的纳米四氧化三铁颗粒；
当无机微纳米颗粒为氧化石墨烯，采用N，N’-羰基二咪唑(CDI)和二甲醇胺的方式活化氧化石墨烯，再与2-氯丙酰氯反应，获得GO-Cl引发剂，再将温敏聚合物通过表面引发自由基聚合的方式接到GO表面，获得温敏聚合物修饰的氧化石墨烯颗粒；
步骤2：将细胞培养基中加入10％的小牛血清，与抗生素溶液混合后，加入NaHCO3后得到细胞培养液，其中抗生素溶液为100U/ml青霉素溶液、NaHCO3浓度为0.05mol/L、pH9.6；
步骤3：将30μL-150μL的细胞培养液为内相置于无机微纳米颗粒上，滚动后制备成温度响应性液体弹珠为三维细胞培养器。
2.根据权利要求1所述基于温度响应性液体弹珠的三维细胞培养器的构筑方法，其特征在于：所述温敏聚合物为聚N-异丙基丙烯酰胺PNIPAm均聚物，或聚N-异丙基丙烯酰胺与聚丙烯酸的共聚物PNIPAm/PAA。
3.根据权利要求1所述基于温度响应性液体弹珠的三维细胞培养器的构筑方法，其特征在于：步骤1中：当无机微纳米颗粒为纳米二氧化硅时，温敏聚合物为聚N-异丙基丙烯酰胺PNIPAm均聚物时，采用3-氨基丙基三乙氧基硅烷和2-溴异丁酰溴与SiO2反应，得到SiO2-Br引发剂，再用表面引发原子转移自由基聚合的方式将PNIPAm接到SiO2表面，获得表面接枝率为40％的SiO2@PNIPAm。
4.根据权利要求1所述基于温度响应性液体弹珠的三维细胞培养器的构筑方法，其特征在于：步骤1中：当无机微纳米颗粒为纳米二氧化硅时，温敏聚合物为聚N-异丙基丙烯酰胺与聚丙烯酸的共聚物PNIPAm/PAA时，采用3-氨基丙基三乙氧基硅烷和2-溴异丁酰溴与SiO2反应，得到SiO2-Br引发剂，再将PNIPAm、PAA单体通过接枝表面引发原子转移自由基聚合的方式接枝到SiO2表面，获得表面接枝率为的40％的SiO2@PNIPAm/PAA粒子。
5.一种利用权利要求1中所述三维细胞培养器进行细胞培养的方法，其特征在于：将三维细胞培养器置于多孔培养板，在温度为36℃-37℃，湿度为50RH％-80％RH环境下生长，细胞培养2-7天后，将其置于低于室温环境中，获得所培养细胞的三维生长体。
6.根据权利要求5所述方法，其特征在于：所述室温为10-25℃。
CN201710625843.4A 2017-07-27 2017-07-27 基于温度响应性液体弹珠的三维细胞培养器及构筑和使用方法 Active CN107522825B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710625843.4A CN107522825B (zh) 2017-07-27 2017-07-27 基于温度响应性液体弹珠的三维细胞培养器及构筑和使用方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710625843.4A CN107522825B (zh) 2017-07-27 2017-07-27 基于温度响应性液体弹珠的三维细胞培养器及构筑和使用方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107522825A CN107522825A (zh) 2017-12-29
CN107522825B true CN107522825B (zh) 2019-12-27

Family

ID=60680303

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710625843.4A Active CN107522825B (zh) 2017-07-27 2017-07-27 基于温度响应性液体弹珠的三维细胞培养器及构筑和使用方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107522825B (zh)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108164656A (zh) * 2018-01-29 2018-06-15 中国石油大学(华东) 一种水凝胶及其制备方法和应用
CN109225175B (zh) * 2018-08-21 2021-07-20 江苏大学 一种磁性复合微球及其制备方法和应用
CN108796657B (zh) * 2018-08-30 2020-06-05 浙江理工大学 一种高弹温敏性变电阻聚氨酯纤维及其制备方法
CN110808137B (zh) * 2019-11-13 2021-08-17 山东师范大学 一种磁性富集材料、水体细菌检测试剂盒及应用
CN112018379B (zh) * 2020-08-25 2021-07-27 湖北工程学院 一种含有温敏材料的氧化铁复合氧化石墨烯纳米材料及其制备方法和应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1911455A (zh) * 2006-08-15 2007-02-14 天津工业大学 一种细胞培养和脱附用的智能膜及其制备方法
CN102250373A (zh) * 2011-05-27 2011-11-23 天津工业大学 一种微纳米拓扑智能膜及其制备方法
CN102399693A (zh) * 2011-10-25 2012-04-04 广东工业大学 一种仿真三维细胞培养器及培养方法
WO2016208777A1 (ja) * 2015-06-26 2016-12-29 国立研究開発法人国立循環器病研究センター 細胞培養器

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1911455A (zh) * 2006-08-15 2007-02-14 天津工业大学 一种细胞培养和脱附用的智能膜及其制备方法
CN102250373A (zh) * 2011-05-27 2011-11-23 天津工业大学 一种微纳米拓扑智能膜及其制备方法
CN102399693A (zh) * 2011-10-25 2012-04-04 广东工业大学 一种仿真三维细胞培养器及培养方法
WO2016208777A1 (ja) * 2015-06-26 2016-12-29 国立研究開発法人国立循環器病研究センター 細胞培養器

Also Published As

Publication number Publication date
CN107522825A (zh) 2017-12-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107522825B (zh) 基于温度响应性液体弹珠的三维细胞培养器及构筑和使用方法
Liu et al. Advances on methods and easy separated support materials for enzymes immobilization
Bao et al. Recent progress in hollow silica: Template synthesis, morphologies and applications
Li et al. Fabrication of graphene oxide decorated with Fe 3 O 4@ SiO 2 for immobilization of cellulase
CN106621835B (zh) 一种载银埃洛石-聚乙烯醇超滤膜及其制备与应用
Wang et al. Facile fabrication of flowerlike natural nanotube/layered double hydroxide composites as effective carrier for lysozyme immobilization
US20110151543A1 (en) Cell separation method using hydrophobic solid supports
JP2012528576A5 (zh)
CN112254851B (zh) Alk-Ti3C2/PDMS柔性压阻传感器的制备方法
CN104851844B (zh) 一种防水氧阻隔层及其制备方法和应用
Rychecký et al. Spheroid cultivation of HT-29 carcinoma cell line in liquid marbles
CN101148324B (zh) 基于ito玻璃基底的细胞培养芯片的制备方法及其应用
Yang et al. pH-sensitive magnetic ion exchanger for protein separation
Xiao et al. Immobilization and characterization of naringinase from Aspergillus aculeatus onto magnetic Fe3O4 nanoparticles
CN104987513B (zh) 一种糖响应的磁性杂化纳米粒子的制备方法
Türkmen et al. PHEMA based composite cryogels with loaded hydrophobic beads for lysozyme purification
Zhang et al. Carbonic anhydrase membranes for carbon capture and storage
Ai et al. Fabrication of boehmite/alginate hybrid beads for efficient enzyme immobilization
Biagini et al. Designs and methodologies to recreate in vitro human gut microbiota models
Altıntaş et al. Monosize magnetic hydrophobic beads for lysozyme purification under magnetic field
CN105838013B (zh) 一种基于甲基乙烯基醚马来酸共聚物及壳聚糖pH敏感复合纳米凝胶及其制备方法
JPH01141594A (ja) 磁気性膜カプセルおよびその使用
CN102516463B (zh) 一种纳米球形聚电解质刷的制备方法
Gao et al. Technology of fermentation coupling with foam separation for improving the production of nisin using a κ-carrageenan with loofa sponges matrix and an hourglass-shaped column
JP2018029488A (ja) 環状培養容器、細胞培養システム、及び細胞培養方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant