CN107505252A - 一种用于质谱流式细胞技术的新型Barcoding 89Y试剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于质谱流式细胞技术的新型Barcoding 89Y试剂，包括如下步骤制备得到：步骤一、一管X8polymer中加入39～195μL L buffer，吹打均匀使X8polymer充分溶解，后加入1～5μL 100mM氯化钇(III)六水合物溶液，混匀后孵育；步骤二、孵育结束后，将全部溶液转移至3kd超滤管，离心；弃上清，收集超滤管内液体于离心管中，取40～200μL L buffer清洗超滤管并将液体全部收集至离心管中，充分混匀后即得到所述Barcoding 89Y试剂。可以对细胞进行标记从而加大流式通量的筛选工作，扩展了适用于质谱流式细胞仪的barcoding通道。
Description
技术领域
本发明涉及细胞生物学技术领域，具体涉及一种用于质谱流式细胞技术的新型Barcoding 89Y试剂。
背景技术
Barcoding技术是在传统荧光流式技术中的一个重要应用，其原理是利用多个标签对细胞进行标记，根据不同组合种类来区分标记物，使流式可以进行加大通量的筛选工作。Barcoding技术具有很多优点：降低抗体损耗，缩短样品收集时间，减少样品转移过程中的交叉污染，消除染色过程中样品间(管与管之间)差异，除去细胞二聚体和细胞碎片等等。
质谱流式诞生后，这一项技术得到了更大的发展。质谱流式细胞仪可以提供更多的通道用于Barcording标记，因此可以做到更高的通量。目前质谱流式技术中应用Barcoding试剂仅有以下几种：102Pd，104Pd，105Pd，106Pd，108Pd，110Pd。随着质谱流式技术的发展越来越迅速，国内外对应用于该技术的Barcoding试剂种类需求也越来越大，以扩展适用于质谱流式细胞仪的Barcoding通道。而国内对于Barcoding试剂的相关研发产品很少。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于质谱流式细胞技术的新型Barcoding 89Y试剂，以解决现有技术的不足。
本发明采用以下技术方案：
一种用于质谱流式细胞技术的新型Barcoding 89Y试剂，包括如下步骤制备得到：
步骤一、一管X8 polymer中加入39～195μL L buffer，吹打均匀使X8 polymer充分溶解，后加入1～5μL 100mM氯化钇(III)六水合物溶液，混匀后孵育；
步骤二、孵育结束后，将全部溶液转移至3kd超滤管，离心；弃上清，收集超滤管内液体于离心管中，取40～200μL L buffer清洗超滤管并将液体全部收集至离心管中，充分混匀后即得到所述Barcoding 89Y试剂。
进一步地，步骤一中100mM氯化钇(III)六水合物溶液用1N盐酸溶液配制。
进一步地，步骤一于37℃孵育30min。
进一步地，步骤二于室温下12000g离心25min。
进一步地，步骤二得到的Barcoding 89Y试剂于4℃保存。
本发明的有益效果：
本发明开发出新型适用于质谱流式细胞仪的Barcoding 89Y试剂，可以对细胞进行标记从而加大流式通量的筛选工作，扩展了适用于质谱流式细胞仪的barcoding通道。
附图说明
图1为实施例1效果实验结果图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明做更进一步地解释。下列实施例仅用于说明本发明，但并不用来限定本发明的实施范围。
一种用于质谱流式细胞技术的新型Barcoding 89Y试剂，包括如下步骤制备得到：
步骤一、一管X8 polymer中加入39～195μL L buffer，吹打均匀使X8 polymer充分溶解，后加入1～5μL 100mM氯化钇(III)六水合物溶液，混匀后于37℃孵育30min；其中，100mM氯化钇(III)六水合物溶液用1N盐酸溶液配制；
步骤二、孵育结束后，将全部溶液转移至3kd超滤管，于室温下12000g离心25min；弃上清，收集超滤管内液体于离心管中，取40～200μL L buffer清洗超滤管并将液体全部收集至离心管中，充分混匀后即得到所述Barcoding 89Y试剂，所得Barcoding 89Y试剂于4℃保存。
实施例1
1、准备试剂：
a、盐酸(AR级，10011018，国药集团化学试剂有限公司)，
b、氯化钇(III)六水合物(204919，Sigma)，
c、X8 polymer、L buffer(X8 Multimetal Labeling Kit—40 Rxn，201300，Fluidigm)，
d、磷酸盐缓冲液(pH7.4，Gibco)，
e、104Pd试剂(S00114,Fluidigm)。
2、用双蒸水配制1N盐酸溶液。
3、用1N盐酸溶液配制100mM氯化钇(III)六水合物溶液，充分混匀。
4、取出一管X8polymer，加入97.5μL L buffer，吹打均匀使X8polymer充分溶解。
5、步骤4中再加入2.5μL 100mM氯化钇(III)六水合物溶液，混匀后放在37℃孵育30min。
6、孵育结束后，将全部溶液转移至3kd超滤管，于室温下12000g离心25min。弃上清，收集超滤管内液体于1.5ml离心管中，取100μL L buffer清洗超滤管并将液体全部收集至1.5ml离心管中，充分混匀后得到Barcoding 89Y试剂，保存于4℃备用。
7、本发明经测试，可以用于Barcoding实验，能在质谱流式中对细胞进行有效分群。为了能更好地阐述这一效果，特设计以下效果实验，实验步骤和结果如下：
(1)、用800μL磷酸盐缓冲液重悬8x106个人外周血单个核细胞(PBMC)，平均分成A，B，C，D四组，每组200μL。
(2)、A组不添加任何试剂，作为空白对照；B组添加1μL步骤6得到的Barcoding 89Y试剂，充分混匀；C组添加0.4μL 104Pd试剂，充分混匀；D组同时加入1μL步骤6得到的Barcoding 89Y试剂和0.4μL104Pd试剂，充分混匀。均置于冰上孵育30min。
(3)、各组分别加入1ml磷酸盐缓冲液清洗细胞，800g/5min，重复清洗1遍。
(4)、各组分别加入1ml去离子水清洗细胞，800g/5min，重复清洗1遍。
(5)、各组细胞分别用1ml去离子水混匀后，打开质谱流式细胞仪(Helios)上机，并对数据进行分析，结果如图1所示。结果说明：A组不添加任何试剂，作为空白对照(a、c、e)；B组单独染色Barcoding 89Y(b)；C组单独染色104Pd(d)；D组同时加入Barcoding 89Y和104Pd(f)；对比六张图可知，Barcoding 89Y可以对细胞进行有效分群。具体如下：比较图a和图b，可以看到所有细胞全部被Barcoding 89Y染色，效果良好。比较图c和图d，可以看到所有细胞全部被104Pd染色，效果良好。综合a、b、c、d四张图，得出结论，Barcoding 89Y能够用来单独标记细胞，进行细胞编码，并达到和104Pd类似的结果。比较图e和图f，当同时用Barcoding 89Y和104Pd对细胞进行标记时，所有细胞全部被Barcoding 89Y和104Pd染色，说明两者能够很好的混合使用，进一步说明Barcoding 89Y可以用于barcoding技术。
Claims (5)
1.一种用于质谱流式细胞技术的新型Barcoding 89Y试剂，其特征在于，包括如下步骤制备得到：
步骤一、一管X8polymer中加入39～195μL L buffer，吹打均匀使X8polymer充分溶解，后加入1～5μL 100mM氯化钇(III)六水合物溶液，混匀后孵育；
步骤二、孵育结束后，将全部溶液转移至3kd超滤管，离心；弃上清，收集超滤管内液体于离心管中，取40～200μL L buffer清洗超滤管并将液体全部收集至离心管中，充分混匀后即得到所述Barcoding 89Y试剂。
2.根据权利要求1所述的用于质谱流式细胞技术的新型Barcoding 89Y试剂，其特征在于，步骤一中100mM氯化钇(III)六水合物溶液用1N盐酸溶液配制。
3.根据权利要求1所述的用于质谱流式细胞技术的新型Barcoding 89Y试剂，其特征在于，步骤一于37℃孵育30min。
4.根据权利要求1所述的用于质谱流式细胞技术的新型Barcoding 89Y试剂，其特征在于，步骤二于室温下12000g离心25min。
5.根据权利要求1所述的用于质谱流式细胞技术的新型Barcoding 89Y试剂，其特征在于，步骤二得到的Barcoding 89Y试剂于4℃保存。
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