CN107496988B - 一种冻干牙骨粉材料及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种冻干牙骨粉材料及其制备方法，方法包括以下步骤：称取恒牙，并对恒牙进行清洗和消毒；对恒牙进行除菌处理，然后加入还原剂并搅拌0.1‑10小时后，浸泡1‑48小时；滤去溶液，然后进行漂洗得到材料A；将上述料A进行除菌处理，然后过滤得到固体物，再进行漂洗得到材料B；对材料B进行碎化处理，得到材料C；将材料C加入至酸溶液中搅拌后，浸泡1‑48小时；滤去溶液然后漂洗得到材料D；将材料D浸泡于醇溶液中；将制备好的材料D进行冷冻干燥，得到冻干牙骨粉材料。本发明的产品具有良好的生物相容性，且有利于营养物质和代谢产物的运输及血管化的完成，有利于诱导成骨因子和骨组织构建，同自体骨同步生长。

Description

一种冻干牙骨粉材料及其制备方法
技术领域
本发明涉及医用材料领域，尤其涉及一种冻干牙骨粉材料及其制备方法。
背景技术
美国的Urist发现，经过脱钙处理的骨基质能够诱导成骨，之后提出了含有骨形态发生蛋白(BMP)的骨诱导修复理论。此后，国内外陆续开发出一系列来源于生物体的成骨材料，包括自体骨材料和同种异体骨。自体骨有无排异、良好的骨诱导活性等众多优点，是植骨材料的金标准，但也有多个弊端—会给患者带来二次创伤、导致供骨区的功能缺失，且患者体质和年龄受限。同种异体骨来源相对充足，使用方便，但易引起免疫排斥反应而导致术后恢复失败。随着科技的发展及对BMP的深入研究，现已能在体外成功表达BMP。纯的BMP也有骨诱导的作用，但植入体内易被稀释及被蛋白酶分解，与骨形成周期不一致。目前市场上也有各种与BMP混合的复合物，BMP—羟基磷灰石，BMP—胶原，等。但会出现体内不降解、诱导成骨不明显等问题，临床应用依然受限。所以，寻找天然的载体与天然的BMP结合是一项非常关键的技术。
脱钙牙基质是一种富含骨形态发生蛋白、胶原及其他蛋白多糖的复合物，是一种新型的具有骨诱导作用的生物活性材料，能与载体形成缓释系统，生理性释放骨形态发生蛋白并诱导间充质细胞分化成为软骨细胞和成骨细胞，同时提供矿化所需基质和间充质细胞粘附的基层。具有骨诱导活性、免疫排斥反应低、与骨形成周期同步降解的优点。当材料植入机体后，其所含骨诱导因子BMP通过与间充质细胞中的受体与信号分子结合进行信号转导，在植入区局部发出基因调控信号，诱导间充质细胞分化成为软骨细胞及骨细胞。后经过软骨基质沉淀，血管长入，骨髓及骨髓腔分化形成等过程，最终诱导新骨形成。
骨组织工程支架的加工方法目前主要有粒子析出法、相分离法、高压气体发泡法、静电纺丝技术、三维打印技术、致孔剂法等。上述方法都可以制备出较高孔隙率的多孔支架，但上述方法单一使用时皆存在着不同的缺陷及限制条件。如粒子析出法存在着孔洞连通通道不规则、过小、不可控等缺点，不利于细胞迁移；致孔剂法存在着致孔剂残留形成细胞毒性；相分离和高压气体发泡法制备的支架孔洞过小或孔洞不连通不利于细胞粘附及生长；静电纺丝技术制备的支架力学性能较低。
因此，现有技术还有待于改进和发展。
发明内容
鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种冻干牙骨粉材料及其制备方法，旨在解决现有技术中骨组织制备方法均存在不足的问题。
本发明的技术方案如下：
一种冻干牙骨粉材料的制备方法，其中，包括以下步骤：
步骤(1)、称取恒牙，并对恒牙进行清洗和消毒；
步骤(2)、对恒牙进行除菌处理，然后加入还原剂并搅拌0.1-10小时后，浸泡1-48小时；滤去溶液，然后进行漂洗得到材料A；
步骤(3)、将上述材料A进行除菌处理，然后过滤得到固体物，再进行漂洗得到材料B；
步骤(4)、对材料B进行碎化处理，得到粒径为1-1000μm的材料C；
步骤(5)、将材料C加入至酸溶液中搅拌0.1-10小时后，浸泡1-48小时；滤去溶液然后漂洗得到材料D；
步骤(6)、将材料D浸泡于醇溶液中，贮存备用；
步骤(7)、将步骤(6)制备好的材料D进行冷冻干燥，在冷冻干燥的冻干程序段，温度设置为25-85℃并持续5-48小时，得到冻干牙骨粉材料。
所述的冻干牙骨粉材料的制备方法，其中，所述步骤(7)之后还包括：
步骤(8)、将冻干牙骨粉材料进行真空密封包装，并经辐照灭菌，得到成品。
所述的冻干牙骨粉材料的制备方法，其中，所述步骤(1)中采用的消毒液为对氯间二甲基苯酚、过氧乙酸、苯扎溴铵、次氯酸钠、环氧乙烷、福尔马林或甲醛。
所述的冻干牙骨粉材料的制备方法，其中，步骤(2)中的除菌处理采用次氯酸钙、硝酸钙、氢氧化钙、氯化钙、草酸钙、碳酸氢钙、磷酸二氢钙、葡萄糖酸钙或乙酸钙。
所述的冻干牙骨粉材料的制备方法，其中，步骤(3)中的除菌处理采用二甲苯、二乙烷、丙酮、环己酮、三氯甲烷、四氯化碳、二氯乙烷或它们的混合物。
所述的冻干牙骨粉材料的制备方法，其中，步骤(5)中的酸溶液为甲酸、乙酸、硫酸、高氯酸、盐酸、冰醋酸、磷酸、硝酸、氢氟酸或它们的混合物。
所述的冻干牙骨粉材料的制备方法，其中，步骤(2)中的还原剂为氢化铝锂、硼氢化钾、氯化锌、硼氢化钠、氯化锂、硼氢化锂、亚硫酸钠或碘化氢。
所述的冻干牙骨粉材料的制备方法，其中，所述恒牙为人牙、猪牙、犬牙、羊牙、牛牙、兔牙、鼠牙或马牙。
所述的冻干牙骨粉材料的制备方法，其中，所述冻干牙骨粉材料的表面分布有多个微孔，所述微孔的孔径为0.1-10μm。
一种冻干牙骨粉材料，其中，采用如上任一项所述的制备方法制成。
有益效果：本发明采用冷冻干燥技术和相分离致孔技术，良好的生物相容性，无任何身体排斥；且有利于成骨细胞、生长因子等所需的营养物质和代谢产物的运输及血管化的完成，有利于诱导成骨因子和骨组织构建，同自体骨同步生长。
具体实施方式
本发明提供一种冻干牙骨粉材料及其制备方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明一种冻干牙骨粉材料的制备方法，其包括以下步骤：
步骤(1)、称取恒牙，并对恒牙进行清洗和消毒；
步骤(2)、对恒牙进行除菌处理，然后加入还原剂并搅拌0.1-10小时后，浸泡1-48小时；滤去溶液，然后进行漂洗得到材料A；
步骤(3)、将上述材料A进行除菌处理，然后过滤得到固体物，再进行漂洗得到材料B；
步骤(4)、对材料B进行碎化处理，得到粒径为1-1000μm的材料C；
步骤(5)、将材料C加入至酸溶液中搅拌0.1-10小时后，浸泡1-48小时；滤去溶液然后漂洗得到材料D；
步骤(6)、将材料D浸泡于醇溶液中，贮存备用；
步骤(7)、将步骤(6)制备好的材料D进行冷冻干燥，在冷冻干燥的冻干程序段，温度设置为25-85℃并持续5-48小时，得到冻干牙骨粉材料。
本发明采用真空冷冻干燥技术和相分离结合的制备方法，运用组织工程的手段，制备出诱导活性冻干牙骨粉材料。该冻干牙骨粉材料对骨缺损进行修复和治疗，可最大程度发挥脱钙牙基质材料的高活性骨诱导作用，同时有效改善材料的储存条件。冻干后的牙骨粉材料孔隙率增加，呈三维多孔构型，有利于骨细胞的长入、粘附、增殖和分化，提高骨修复效果。
本发明所采用的真空冷冻干燥技术是将真空技术、冷冻技术和干燥技术结合的一种综合性技术；其应用在本发明的牙骨粉冻干技术中具有如下特点：制品在升华干燥过程中，其物理结构不变，化学结构变化也很小，制品仍然保持原有的固体结构和形态；在升华干燥工程中，固体冰晶升华成水蒸气后在制品中留下孔隙，形成特有的海绵状多孔性结构，具有理想的速溶性和近乎完全的复水性；真空冷冻干燥过程在极低的温度和高真空的条件下进行干燥加工，生物材料的热变性小，可以最大限度地保证材料的生物活性；经真空冷冻干燥处理的制品，脱水彻底，适合长期保存。且由于干燥过程中是在真空条件下进行的，故不易氧化。另外，由于冻干后的固体物质由于微小的冰晶体的升华而呈现多孔结构，并保持原先冻结时的体积，加水后极易溶解而复原，制品在升华过程中温度保持在较低温度状态下(一般低于-25℃)，因而十分有利于胶原等活性物质的保持。
具体地，在所述步骤(1)中，先称取恒牙，并对恒牙进行清洗和消毒。
其中的恒牙可以是人牙、猪牙、犬牙、羊牙、牛牙、兔牙、鼠牙或马牙。本发明优选的是，采用人牙制备所述冻干牙骨粉材料。其生物相容性更好，且无任何身体排斥。
其中的清洗可以多次，例如清洗三次，清洗完后滤去水分，再加入消毒液进行消毒。其中的消毒液浓度优选为0.5-10mol/L，在消毒液中浸泡0.5-10小时(常温)。然后滤去溶液后，利用纯化水浸泡1-10小时，反复3-8次，从而将消毒液洗净。
其中的消毒液为对氯间二甲基苯酚、过氧乙酸、苯扎溴铵、次氯酸钠、环氧乙烷、福尔马林或甲醛。可以是上述消毒液中的一种或几种混合物。
在所述步骤(2)中，对恒牙进行除菌处理，然后进行还原处理，最后进行漂洗得到材料A。
步骤(2)中的除菌处理采用次氯酸钙、硝酸钙、氢氧化钙、氯化钙、草酸钙、碳酸氢钙、磷酸二氢钙、葡萄糖酸钙或乙酸钙。即除菌所用的除菌液采用上述材料中的一种或几种混合物。上述除菌液均是采用钙盐溶液，其除菌效果较好，且不会破坏材料特性。除菌液的浓度优选为0.1-5mol/L。除菌处理是将恒牙浸泡于除菌液中，且在浸泡过程中进行搅拌，共浸泡0.1-10小时。
然后加入还原剂进行还原处理，其中的还原剂优选为氢化铝锂、硼氢化钾、氯化锌、硼氢化钠、氯化锂、硼氢化锂、亚硫酸钠或碘化氢。即还原所用的还原剂采用上述材料中的一种或几种混合物。具体是将恒牙加入到还原剂中进行浸泡，具体可以先搅拌0.1-10小时，然后浸泡1-48小时，使还原过程更充分。
还原处理后，进行过滤处理，滤去溶液，然后进行漂洗，例如注入纯化水(无菌)漂洗1-10次，每次0.1-10小时，从而得到干净的材料A。
在所述步骤(3)中，将上述材料A进行除菌处理，然后进行过滤，最后进行漂洗，从而得到材料B。
步骤(3)中的除菌处理采用二甲苯、二乙烷、丙酮、环己酮、三氯甲烷、四氯化碳、二氯乙烷或它们的混合物。即除菌所用的除菌液采用上述材料中的一种或几种混合物。上述除菌液均是采用有机溶剂。除菌处理是将恒牙浸泡于除菌液中，且在浸泡过程中进行搅拌，共浸泡0.1-10小时。
然后过滤得到固体物，例如清洗三次，得到最终的固体物。
对于得到的固体物再进行漂洗，例如注入纯化水(无菌)漂洗1-10次，每次0.1-10小时，从而得到干净的材料B。
在步骤(4)中，对材料B进行碎化处理，得到材料C。
具体地，用机械方法，去除材料B中残余牙髓内组织，并将得到的牙本质用机械力进行碎化处理，得到粒径(直径)为1-1000μm大小的材料C。经过碎化处理后，有利于后续的冷冻干燥，可干燥更充分，且更易形成表面的微孔结构。
在所述步骤(5)中，将材料C加入至酸溶液中搅拌，并浸泡，然后过滤漂洗得到材料D。
其中的酸溶液为甲酸、乙酸、硫酸、高氯酸、盐酸、冰醋酸、磷酸、硝酸、氢氟酸或它们的混合物。即将材料C加入至上述酸溶液中的一种或几种混合物中，然后搅拌0.1-10小时，再进行浸泡处理，浸泡时间优选为1-48小时。其中的酸溶液浓度优选为0.1-5mol/L。上述条件下，将使得到的最终产品相容性更好。
然后过滤除去溶液，再注入纯化水漂洗1-10次，每次0.1-10小时，从而得到材料D。
在所述步骤(6)中，将材料D浸泡于醇溶液中，贮存备用。
例如将材料D浸泡于乙醇中，贮存备用。所述乙醇可以是75％乙醇。
在所述步骤(7)中，进行冷冻干燥，得到冻干牙骨粉材料。
具体地，将材料D放入真空冷冻干燥机中，真空度设置为0-55Pa；设置冻干程序段，加热至25-85℃，持续5-48小时，得到多孔、高孔隙率的骨诱导活性牙骨粉材料，即本发明的冻干牙骨粉材料。设置所述冻干程序段可以实现相分离致孔，从而使产品良好的生物相容性，无任何身体排斥。
所述的冻干牙骨粉材料的制备方法，其中，所述步骤(7)之后还包括：
步骤(8)、将冻干牙骨粉材料进行真空密封包装，并经辐照灭菌，得到成品。
经步骤(7)干燥后的冷冻牙骨粉材料含水量应≤5％(质量百分比)，然后真空密封包装，经60Co辐照灭菌，得到所需的成品。
所述冻干牙骨粉材料的表面分布有多个微孔(如均匀分布)，所述微孔的孔径为0.1-10μm，优选为1-5μm。所述冻干牙骨粉材料中，孔隙率为50-95％。粒径为1-1000μm，优选为5-30μm。
本发明还提供一种冻干牙骨粉材料，其中，采用如上任一项所述的制备方法制成。
实施例1
步骤(1)、称取新鲜的恒牙(人牙)，清洗三次，滤去水分后，加入2mol/L消毒液(过氧乙酸)，常温下浸泡4小时，滤去溶液后，纯化水浸泡2小时，反复5次，即反复过滤浸泡5次；
步骤(2)、将步骤(1)中的恒牙加入到3mol/L碳酸氢钙溶液中进行过滤除菌，即在碳酸氢钙溶液浸泡，浸泡过程中加以搅拌，共浸泡4小时；再加入7mol/L还原剂氯化锌中，继续搅拌4小时后，再浸泡24小时；滤去溶液，然后注入纯化水漂洗5次，每次20min，得到材料A；
步骤(3)、将上述材料A加入二甲苯和二乙烷的混合液(二者质量比可以为1:1，后续实施例中的混合液组成也可以是1:1)中过滤除菌，即加入到上述混合液中浸泡，浸泡过程中加以搅拌，共浸泡2小时；再清洗三次，滤去溶液得到固体物；再注入纯化水(无菌)漂洗5次，每次20min，得到材料B；
步骤(4)、用机械方法去除材料B中残余牙髓内组织，并将牙本质用机械力进行碎化处理，得到粒径为100-500μm大小的材料C；
步骤(5)、用1.5mol/L乙酸溶液浸泡材料C，具体是先搅拌6小时，然后浸泡24小时；再滤去溶液，再注入纯化水漂洗6次，每次20min，得到材料D；
步骤(6)、将材料D浸泡于75％酒精中，常温条件下贮存备用；
步骤(7)、将步骤(6)制备好的材料D放入真空冷冻干燥机中，真空度设置为0-55Pa；设置冻干程序段，加热至45℃，持续48小时，得到多孔、高孔隙率的骨诱导活性牙骨粉材料，即冻干牙骨粉材料；
步骤(8)、将冻干牙骨粉材料进行真空密封包装，并经60Co辐照灭菌，得到成品。
实施例2
步骤(1)、称取新鲜的恒牙(猪牙)，清洗三次，滤去水分后，加入0.5mol/L消毒液(次氯酸钠)，常温下浸泡10小时，滤去溶液后，纯化水浸泡1小时，反复8次，即反复过滤浸泡8次；
步骤(2)、将步骤(1)中的恒牙加入到5mol/L草酸钙溶液中进行过滤除菌，即在草酸钙溶液浸泡，浸泡过程中加以搅拌，共浸泡0.1小时；再加入2mol/L还原剂硼氢化钠中，继续搅拌10小时后，再浸泡1小时；滤去溶液，然后注入纯化水漂洗1次，每次10小时，得到材料A；
步骤(3)、将上述材料A加入丙酮和环己酮的混合液中过滤除菌，即加入到上述混合液中浸泡，浸泡过程中加以搅拌，共浸泡10小时；再清洗三次，滤去溶液得到固体物；再注入纯化水(无菌)漂洗10次，每次0.1小时，得到材料B；
步骤(4)、用机械方法去除材料B中残余牙髓内组织，并将牙本质用机械力进行碎化处理，得到粒径为200-600μm大小的材料C；
步骤(5)、用0.1mol/L甲酸溶液浸泡材料C，具体是先搅拌0.1小时，然后浸泡48小时；再滤去溶液，再注入纯化水漂洗1次，每次10小时，得到材料D；
步骤(6)、将材料D浸泡于75％酒精中，常温条件下贮存备用；
步骤(7)、将步骤(6)制备好的材料D放入真空冷冻干燥机中，真空度设置为0-55Pa；设置冻干程序段，加热至45℃，持续48小时，得到多孔、高孔隙率的骨诱导活性牙骨粉材料，即冻干牙骨粉材料；
步骤(8)、将冻干牙骨粉材料进行真空密封包装，并经60Co辐照灭菌，得到成品。
实施例3
步骤(1)、称取新鲜的恒牙(羊牙)，清洗三次，滤去水分后，加入10mol/L消毒液(过氧乙酸)，常温下浸泡0.5小时，滤去溶液后，纯化水浸泡10小时，反复3次，即反复过滤浸泡3次；
步骤(2)、将步骤(1)中的恒牙加入到0.1mol/L磷酸二氢钙溶液中进行过滤除菌，即在磷酸二氢钙溶液浸泡，浸泡过程中加以搅拌，共浸泡10小时；再加入15mol/L还原剂氯化锂中，继续搅拌0.1小时后，再浸泡48小时；滤去溶液，然后注入纯化水漂洗10次，每次10min，得到材料A；
步骤(3)、将上述材料A加入三氯甲烷和四氯化碳的混合液中过滤除菌，即加入到上述混合液中浸泡，浸泡过程中加以搅拌，共浸泡0.1小时；再清洗三次，滤去溶液得到固体物；再注入纯化水(无菌)漂洗1次，每次10小时，得到材料B；
步骤(4)、用机械方法去除材料B中残余牙髓内组织，并将牙本质用机械力进行碎化处理，得到粒径为100-500μm大小的材料C；
步骤(5)、用5mol/L冰醋酸溶液浸泡材料C，具体是先搅拌10小时，然后浸泡1小时；再滤去溶液，再注入纯化水漂洗10次，每次0.1小时，得到材料D；
步骤(6)、将材料D浸泡于75％酒精中，常温条件下贮存备用；
步骤(7)、将步骤(6)制备好的材料D放入真空冷冻干燥机中，真空度设置为0-55Pa；设置冻干程序段，加热至45℃，持续48小时，得到多孔、高孔隙率的骨诱导活性牙骨粉材料，即冻干牙骨粉材料；
步骤(8)、将冻干牙骨粉材料进行真空密封包装，并经60Co辐照灭菌，得到成品。
实施例4
步骤(1)、称取新鲜的恒牙(牛牙)，清洗三次，滤去水分后，加入4mol/L消毒液(环氧乙烷)，常温下浸泡8小时，滤去溶液后，纯化水浸泡5小时，反复6次，即反复过滤浸泡6次；
步骤(2)、将步骤(1)中的恒牙加入到4mol/L葡萄糖酸钙溶液中进行过滤除菌，即在葡萄糖酸钙溶液浸泡，浸泡过程中加以搅拌，共浸泡8小时；再加入10mol/L还原剂亚硫酸钠中，继续搅拌5小时后，再浸泡36小时；滤去溶液，然后注入纯化水漂洗3次，每次3小时，得到材料A；
步骤(3)、将上述材料A加入四氯化碳和二氯乙烷的混合液中过滤除菌，即加入到上述混合液中浸泡，浸泡过程中加以搅拌，共浸泡5小时；再清洗三次，滤去溶液得到固体物；再注入纯化水(无菌)漂洗7次，每次15min，得到材料B；
步骤(4)、用机械方法去除材料B中残余牙髓内组织，并将牙本质用机械力进行碎化处理，得到粒径为600-800μm大小的材料C；
步骤(5)、用3mol/L氢氟酸溶液浸泡材料C，具体是先搅拌4小时，然后浸泡12小时；再滤去溶液，再注入纯化水漂洗3次，每次30min，得到材料D；
步骤(6)、将材料D浸泡于75％酒精中，常温条件下贮存备用；
步骤(7)、将步骤(6)制备好的材料D放入真空冷冻干燥机中，真空度设置为0-55Pa；设置冻干程序段，加热至45℃，持续48小时，得到多孔、高孔隙率的骨诱导活性牙骨粉材料，即冻干牙骨粉材料；
步骤(8)、将冻干牙骨粉材料进行真空密封包装，并经60Co辐照灭菌，得到成品。
实施例5
步骤(1)、称取新鲜的恒牙(马牙)，清洗三次，滤去水分后，加入7mol/L消毒液(对氯间二甲基苯酚)，常温下浸泡3小时，滤去溶液后，纯化水浸泡4小时，反复4次，即反复过滤浸泡4次；
步骤(2)、将步骤(1)中的恒牙加入到2mol/L乙酸钙溶液中进行过滤除菌，即在乙酸钙溶液浸泡，浸泡过程中加以搅拌，共浸泡2小时；再加入12mol/L还原剂硼氢化钾中，继续搅拌7小时后，再浸泡4小时；滤去溶液，然后注入纯化水漂洗8次，每次40min，得到材料A；
步骤(3)、将上述材料A加入丙酮和环己酮的混合液中过滤除菌，即加入到上述混合液中浸泡，浸泡过程中加以搅拌，共浸泡9小时；再清洗三次，滤去溶液得到固体物；再注入纯化水(无菌)漂洗3次，每次5小时，得到材料B；
步骤(4)、用机械方法去除材料B中残余牙髓内组织，并将牙本质用机械力进行碎化处理，得到粒径为200-400μm大小的材料C；
步骤(5)、用2.5mol/L磷酸溶液浸泡材料C，具体是先搅拌8小时，然后浸泡12小时；再滤去溶液，再注入纯化水漂洗5次，每次6小时，得到材料D；
步骤(6)、将材料D浸泡于75％酒精中，常温条件下贮存备用；
步骤(7)、将步骤(6)制备好的材料D放入真空冷冻干燥机中，真空度设置为0-55Pa；设置冻干程序段，加热至45℃，持续48小时，得到多孔、高孔隙率的骨诱导活性牙骨粉材料，即冻干牙骨粉材料；
步骤(8)：将冻干牙骨粉材料进行真空密封包装，并经60Co辐照灭菌，得到成品。
实施例6
步骤(1)、称取新鲜的恒牙(兔牙)，清洗三次，滤去水分后，加入1mol/L消毒液(福尔马林)，常温下浸泡8小时，滤去溶液后，纯化水浸泡5小时，反复3次，即反复过滤浸泡3次；
步骤(2)、将步骤(1)中的恒牙加入到0.8mol/L氢氧化钙溶液中进行过滤除菌，即在氢氧化钙溶液浸泡，浸泡过程中加以搅拌，共浸泡8小时；再加入5mol/L还原剂碘化氢中，继续搅拌3小时后，再浸泡45小时；滤去溶液，然后注入纯化水漂洗2次，每次8小时，得到材料A；
步骤(3)、将上述材料A加入二乙烷和四氯化碳的混合液中过滤除菌，即加入到上述混合液中浸泡，浸泡过程中加以搅拌，共浸泡9小时；再清洗三次，滤去溶液得到固体物；再注入纯化水(无菌)漂洗4次，每次7小时，得到材料B；
步骤(4)、用机械方法去除材料B中残余牙髓内组织，并将牙本质用机械力进行碎化处理，得到粒径为300-400μm大小的材料C；
步骤(5)、用4.5mol/L盐酸溶液浸泡材料C，具体是先搅拌3小时，然后浸泡30小时；再滤去溶液，再注入纯化水漂洗4次，每次5小时，得到材料D；
步骤(6)、将材料D浸泡于75％酒精中，常温条件下贮存备用；
步骤(7)、将步骤(6)制备好的材料D放入真空冷冻干燥机中，真空度设置为0-55Pa；设置冻干程序段，加热至45℃，持续48小时，得到多孔、高孔隙率的骨诱导活性牙骨粉材料，即冻干牙骨粉材料；
步骤(8)、将冻干牙骨粉材料进行真空密封包装，并经60Co辐照灭菌，得到成品。
综上所述，本发明采用冷冻干燥技术和相分离致孔技术，良好的生物相容性，无任何身体排斥；且有利于成骨细胞、生长因子等所需的营养物质和代谢产物的运输及血管化的完成，有利于诱导成骨因子和骨组织构建，同自体骨同步生长。
应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (7)

1.一种冻干牙骨粉材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤(1)、称取恒牙，并对恒牙进行清洗和消毒；
步骤(2)、对恒牙进行除菌处理，然后加入还原剂并搅拌0.1-10小时后，浸泡1-48小时；滤去溶液，然后进行漂洗得到材料A；
步骤(3)、将上述材料A进行除菌处理，然后过滤得到固体物，再进行漂洗得到材料B；
步骤(4)、对材料B进行碎化处理，得到粒径为1-1000μm的材料C；
步骤(5)、将材料C加入至酸溶液中搅拌0.1-10小时后，浸泡1-48小时；滤去溶液然后漂洗得到材料D；
步骤(6)、将材料D浸泡于醇溶液中，贮存备用；
步骤(7)、将步骤(6)制备好的材料D进行冷冻干燥，在冷冻干燥的冻干程序段，温度设置为25-85℃并持续5-48小时，得到冻干牙骨粉材料；
所述步骤(7)之后还包括：
步骤(8)、将冻干牙骨粉材料进行真空密封包装，并经辐照灭菌，得到成品；
步骤(2)中的还原剂为氢化铝锂、硼氢化钾、氯化锌、硼氢化钠、氯化锂、硼氢化锂、亚硫酸钠或碘化氢；
步骤(2)中的除菌处理采用次氯酸钙、硝酸钙、氢氧化钙、氯化钙、草酸钙、碳酸氢钙、磷酸二氢钙、葡萄糖酸钙或乙酸钙，除菌液的浓度为0.1-5mol/L。
2.根据权利要求1所述的冻干牙骨粉材料的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中采用的消毒液为对氯间二甲基苯酚、过氧乙酸、苯扎溴铵、次氯酸钠、环氧乙烷或甲醛。
3.根据权利要求1所述的冻干牙骨粉材料的制备方法，其特征在于，步骤(3)中的除菌处理采用二甲苯、二乙烷、丙酮、环己酮、三氯甲烷、四氯化碳、二氯乙烷或它们的混合物。
4.根据权利要求1所述的冻干牙骨粉材料的制备方法，其特征在于，步骤(5)中的酸溶液为甲酸、乙酸、硫酸、高氯酸、盐酸、磷酸、硝酸、氢氟酸或它们的混合物。
5.根据权利要求1所述的冻干牙骨粉材料的制备方法，其特征在于，所述恒牙为人牙、猪牙、犬牙、羊牙、牛牙、兔牙、鼠牙或马牙。
6.根据权利要求1所述的冻干牙骨粉材料的制备方法，其特征在于，所述冻干牙骨粉材料的表面分布有多个微孔，所述微孔的孔径为0.1-10μm。
7.一种冻干牙骨粉材料，其特征在于，采用如权利要求1～6任一项所述的制备方法制成。
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