CN107475261B

CN107475261B - 一种烟草干旱响应基因NtTIFY及其克隆方法与应用

Info

Publication number: CN107475261B
Application number: CN201710803407.1A
Authority: CN
Inventors: 谢贺; 白戈; 姚恒; 杨大海; 肖炳光; 李永平; 杨爱国; 童文杰; 张谊寒
Original assignee: Yunnan Academy of Tobacco Agricultural Sciences
Current assignee: Yunnan Academy of Tobacco Agricultural Sciences
Priority date: 2017-09-08
Filing date: 2017-09-08
Publication date: 2019-10-08
Anticipated expiration: 2037-09-08
Also published as: CN107475261A

Abstract

本发明公开了一种烟草干旱响应基因NtTIFY及其克隆方法与应用。所述NtTIFY基因编码一种烟草响应多肽，所述多肽包括的氨基酸序列如SEQ ID：No.2所示；所述NtTIFY基因包含的核苷酸序列如SEQ ID：No.1所示。抑制该基因表达能提高烟草对干旱胁迫的适应性，因此NtTIFY在烟草抗旱领域具有广阔的应用前景。

Description

一种烟草干旱响应基因NtTIFY及其克隆方法与应用

技术领域

本发明属于遗传工程技术领域，进一步属于涉及烟草抗旱响应的相关基因，具体涉及一种烟草干旱响应基因NtTIFY及其克隆方法与应用。

背景技术

干旱严重影响作物的生长发育、产量及品质。提高植物的抗旱能力已经成为现代植物研究工作中的关键问题之一。抗旱机理的研究是抗旱育种的基础，也是育种的关键因素之一。经历了几十年的努力，对植物抗旱的研究已从抗旱指标的表观因素分析，进入到分子及基因水平的探索。

近年来，随着全球气候变暖，干旱已成为我国作物生产中频繁发生的自然灾害。烟草作为中国重要的经济作物，在整个生育期对水分的要求很高。中国大部分烟区处于干旱、半干旱环境中，而且优质烟区多位于丘陵山区，常因土壤干旱而影响烟株的生长发育，导致烟叶的产量和品质降低，干旱已成为制约我国烟叶产量与品质提高的主要限制因子之一。因此，加强烟草抗旱基因资源的挖掘和利用，对于烟草抗旱新品种培育，实现烟草农业可持续发展具有重大意义。

自20世纪80年代以来，国内外学者在干旱对烟草生长、发育、代谢的影响等方面做了大量研究，取得了一些重要进展。归纳起来主要有以下几个方面:第一，干旱对烟草生理的影响，主要表现在: (1)干旱胁迫影响了叶绿素的合成，促进了叶绿素的分解，从而影响了叶片的光合效率； (2)干旱胁迫导致植株氮素代谢关键酶-硝酸还原酶(NR) 的活性降低，而蛋白水解酶活性增强引起脯氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺和缬氨酸等大量积累；(3)干旱胁迫导致叶片膜脂过氧化作用增强，膜透性增加，丙二醛(MDA)含量升高，出现电解质外渗。抗氧化保护酶SOD、POD、CAT等酶活性显著下降。第二，干旱对烟草生长发育的影响，主要表现在: (1) 干旱胁迫降低了种子的萌发和幼苗的成活；(2) 抑制了根系的生长，从而影响了矿质营养的吸收；(3) 干旱胁迫导致植株矮小，节间短，叶片小，易早衰。这些研究较好地阐明了干旱对烟草生长、发育及代谢影响的生理生化基础，但缺乏对烟草抗旱分子遗传机理的研究。

近年来，随着分子生物学和基因组学研究的深入，发现茉莉酸（JA）参与到植物抗旱过程。向干旱胁迫的大豆外施50 μmol/L的茉莉酸甲酯能够提高大豆的抗旱性。经JA处理后，SOD、POD、CAT等酶活性升高，膜脂过氧化性增高。JAZ家族是TIFY蛋白家族中的亚家族，该家族在JA信号转导中起到重要的作用。JAZ蛋白有转录抑制子的功能，而非JAZ蛋白的TIFY蛋白也有报道有抑制转录的作用；其中，TIFY家族基因OsJAZ能够通过JA途径调控OsbHLH148的表达，而在水稻中超过量表达OsbHLH148基因能够增强水稻的抗旱性。

因此，本发明旨在提供一种基因水平上的烟草干旱响应基因，以增强烟草植株的抗旱性。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种烟草干旱响应基因NtTIFY，所述基因编码一种烟草响应多肽，所述多肽包含的氨基酸序列如SEQ ID：No.2所示。

本发明的第二目的在于提供所述烟草干旱响应基因NtTIFY包含的核苷酸序列如SEQ ID：No.1所示。

本发明的第三目的在于提供一种烟草干旱响应基因NtTIFY的克隆方法，所述方法包括以下步骤：

（1）烟草叶片cDNA合成：提取烟草叶片总RNA，反转录得到第一链cDNA；

（2）NtTIFY 基因的PCR扩增：以烟草叶片cDNA为模板，根据NtTIFY 基因序列设计引物，进行PCR扩增，回收和纯化PCR扩增产物，并测序。

本发明的第四目的在于提供一种烟草干旱响应基因NtTIFY的应用，即抑制所述NtTIFY基因的表达，

或对NtTIFY基因进行基因修饰、或基因编辑、或化学诱变、或物理诱变，使烟株表现为干旱不敏感。

本发明的第五目的在于提供一种含有所述烟草干旱响应基因NtTIFY的重组载体。

本发明的第六目的在于提供一种含有所述烟草干旱响应基因NtTIFY的表达盒。

本发明的第七目的在于提供一种含有所述烟草干旱响应基因NtTIFY的转基因细胞系。

本发明的第八目的在于提供一种含有权利所述烟草干旱响应基因NtTIFY的重组菌。

附图说明

图1烟草叶片中NtTIFY基因响应干旱胁迫柱状图；

图2 NtTIFY的PCR产物电泳图；

图中，M-分子量标记；1-PCR产物。

图3 NtTIFY的RNAi 片段PCR产物电泳图；

图中，M-分子量标记；1-RNAi 片段PCR产物。

图4 pDONR-Zeocin载体图；

图5 NtTIFY基因植物表达载体PB2GW7图；

图6 NtTIFY基因植物RNAi干扰载体pHellsgate12图；

图7 转NtTIFY基因过表达载体的烟草株系表达水平柱状图；

图中，野生型-K326（对照）；OE-1-NtTIFY基因过表达烟草株系。

图8 转NtTIFY基因RNAi敲除载体的烟草株系表达水平柱状图；

图中，野生型-K326（对照）；RNAi-1-NtTIFY基因RNAi干扰表达烟草株系。

图9 NtTIFY基因过量表达及RNAi敲除的烟草植株对干旱胁迫处理的生长表型。

图中，野生型-K326（对照）；OE-1-NtTIFY基因过表达烟草株系；RNAi-1-NtTIFY基因RNAi干扰表达烟草株系。

具体实施方式

下面结合附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。

本发明所述的一种烟草干旱响应基因NtTIFY编码一种烟草响应多肽，所述多肽包含的氨基酸序列如SEQ ID：No.2所示。所述多肽还可能为由SEQ ID No：2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加而形成，且具有响应干旱功能的衍生多肽。所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加是指不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

本发明所述植物抗旱基因NtTIFY包含的核苷酸序列如SEQ ID：No.1所示。或者在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID No：1限定的DNA序列杂交的核苷酸序列；或者与序列表中SEQ ID No：1限定的DNA序列具有70％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA序列。

本发明所述的烟草干旱响应基因NtTIFY的克隆方法包括以下步骤：

作为本发明的一种优选，所述引物为

正向引物：5’-ATGGGCCTTTCACAGTATCCAAC-3’；

反向引物：5’-TCACATAGGACAAGTATCTTC-3’。

本发明所述烟草干旱响应基因NtTIFY的应用为在烟草植株体内抑制所述NtTIFY基因的表达，可增强烟草的抗旱性。抑制NtTIFY基因表达的方法包括植物病毒载体介导基因沉默，或农杆菌介导转化RNAi载体，或优化修改基因编码匡，或优化基因启动子。本发明所述的抑制基因表达的方法并不限于上述几种方法，只要能抑制NtTIFY表达即可。

还可以利用基因修饰的方法修饰NtTIFY基因；或将NtTIFY进行基因编辑；或将该基因进行化学诱变、物理诱变，使得植物表现出干旱不敏感的现象。

本发明的NtTIFY基因在构建到植物表达载体中时，在其转录起始核苷酸前可加上任何一种抑制转录启动子。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所使用的载体进行加工，如加入植物可选择性标记(GUS基因、萤光素酶基因等)或具有抗性的抗生素标记物(庆大霉素，卡那霉素等)。被转化的植物宿主既可以是单子叶植物，也可以是双子叶植物，如：烟草、水稻、小麦、玉米、黄瓜、番茄、杨树、草坪草或苜宿等。

含有本发明所述NtTIFY基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系和重组菌等基因工程产品均属于本发明的保护范围。

本发明所述的NtTIFY编码的多肽是可能是植物茉莉酸响应途径中的关键因子，所以调控NtTIFY的表达能够调节植物对干旱的抗性。因此，所述的干旱响应基因NtTIFY在植物抗旱领域具有广阔的应用前景，为农作物尤其是烟草抗旱育种提供基因与技术的支持，其经济效益潜力巨大。

下面将结合具体实施例，对本发明进行进一步的说明。

实施例1：干旱响应基因NtTIFY的发现

K326种子经24℃水培萌发后，在温度为24-26°C、湿度为60%、光暗交替周期为12h/12h的光照培养室中培养。待幼苗长至四叶一心(约14天)时，整株取出，吸干水分，空气干燥干旱迫处理实验。处理的时间分别为0.5、1、2、4、8、16、24小时；以未做干旱胁迫处理的烟草幼苗作为对照组，进行芯片检测。结果如图1所示：在干旱处理的情况下，NtTIFY基因表达量下调，表明该基因受干旱调控。

实施例2：克隆NtTIFY基因

以烟草叶片cDNA为模板，根据烟草基因组数据库信息设计引物，进行NtTIFY基因的PCR扩增，得到PCR扩增产物。设计引物如下所示：

正向引物：5’- ATGGCATCATCGGAGATGGTG -3’；

反向引物：5’- CTAGAATTGCTCAGTTTTCACTG -3’。

PCR反应体系和扩增条件如表1所示。

表1 PCR反应体系与扩增条件

将扩增获得的PCR产物在0.8%的琼脂糖凝胶电泳，凝胶电泳结果如图2所示。电泳结束后，采用Qiagen公司PCR产物纯化试剂盒，按照产品说明回收纯化所述的PCR产物，并送Invitrogen测序，验证序列结果。

实施例3: 构建过表达和RNAi干扰重组载体

（1）以实施例2中NtTIFY全长片段为模板，用含有gateway接头序列的引物进行PCR扩增，扩增产物经PCR产物纯化后，经过BP反应插入到invitrogen公司pDONR-Zeocin（图 4）载体中。将构建好的BP反应载体通过LR反应将NtTIFY片段置换到PB2GW7（图 5）载体中。gateway反应引物序列如下：

NtTIFY_F：5’-GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTGCATGGCATCATCGGAGATGGTG -3’；

NtTIFY_R：5’-GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTCCTAGAATTGCTCAGTTTTCACTG-3’。

以实施例2中NtTIFY全长片段为模板，用含有gateway接头序列的RNAi干扰载体引物进行PCR扩增，扩增产物经PCR产物纯化后，经过BP反应插入到invitrogen公司pDONR-Zeocin（图4）载体中。将构建好的BP反应载体通过LR反应将RNAi干扰载体片段置换到pHellsgate12（图 6）载体中。gateway反应引物序列如下：

NtTIFY_RNAi F：GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTGCGCTGGCACTACTACTATGGATTTGT

NtTIFY_RNAi R：GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTCAATCTCCAGAAATAATAGGCTGAGG

（2）PCR反应均采用Phusion高保真聚合酶进行PCR克隆。

PCR反应体系与条件与实施例2相同。

（3）BP反应：

（a）在200 μL离心管中准备8 μL的反应体系，包括：1-7 μL的attB-PCR产物（约15~ 150 ng，浓度≥10 ng/μL）、1 μL的pDONR载体（150 ng/μL）和适量的TE缓冲液（pH 8.0），在室温下混匀；

（b）将BP Clonase™ II酶混合物在冰上静置2 min融化，轻轻震荡2次，混匀待用；

（C）向（1）准备的样品中加入2 μL的BP Clonase™ II酶混合物，轻轻地将体系混匀；

（d）将BP Clonase™ II酶混合物放回到-20°C或者-80°C保存；

（e）将反应体系放在25°C温浴1 h；

（f）向反应体系中加入1 μL的蛋白酶K溶液，轻轻震荡，然后将样品放在37°C温浴10 min，以便终止BP反应；

（g）将混合液转化大肠杆菌后，取转化菌液涂在含Zeacin抗性的LB平板上，挑取菌落至含相应抗生素培养基溶液中摇菌培养，确认后提取阳性克隆的质粒备用。

（4）LR反应：

（a）在200 μL离心管中准备8 μL的反应物，包括：1-7 μL获得的pDONR-Zeocin质粒（50-150 ng）、1 μL的目的载体（150 ng/μl）和适量的TE缓冲液（pH 8.0），在室温下混匀；

（b）将LR Clonase™ II酶混合物静置在冰上2 min融化，轻轻震荡2次以混匀；

（c）加入2 μL 的LR Clonase™ II酶混合物，轻轻震荡将体系混匀；

（d）将LR Clonase™ II酶混合物放回到-20°C 或者-80°C冰箱保存；

（e）将反应体系放在 25°C温浴反应1 h；

（f）向反应体系中加入1 μL的蛋白酶K溶液以终止LR反应，轻轻震荡后，将样品放在37°C 静置10 min；得到PB2GW7重组载体。

（g）将LR反应产物转化大肠杆菌后涂板、筛选阳性克隆、提取质粒，然后进行酵母双杂和农杆菌转化等实验。

实施例3：农杆菌介导的烟草转化及转基因植株的鉴定

（1）冻融法转化农杆菌

将1 μg（200 ng/μL）pHellsgate12重组载体加入到100 μL感受态农杆菌LBA4404中，混匀后在冰上静置5 min，放入液氮中冷冻5 min，然后从液氮中取出，放入37℃水浴锅中水浴5 min，再在冰上静置5 min后，加入500 μL LB溶液，在28℃、充分震荡条件下恢复培养4 h，最后将菌液均匀涂抹于选择性平板培养基上，28℃下培养48 h。

PB2GW7重组载体的转化方法同上。

（2）叶盘法转化烟草品种K326。

具体方法如下:

(a) 无菌条件下，将烟草种子放入EP管中用无菌水冲洗2-3次；

(b) 于75%的酒精中浸泡30-60 s；

(c) 再用0.1%的升汞处理5 min，最后用无菌水冲洗5次；

(d) 播种于MS培养基上，培养在云南烟草农业科学研究院组织培养室中，暗培养4天, 25℃光照培养20-30天。

(e ) 待烟草苗长至3-5cm时（20-30天），取顶芽放于MS+BA 0.2 mg/L（壮芽，使其快速成长）培养基上，继代培养。

(f) 继代培养14天后（有小叶片即可），取叶片，大小1cm×1cm，切去叶柄，叶片表面及叶边缘划伤，放入MS+ BA1.0 mg/L pH 6.0-6.5的预培养培养基上，正面朝下紧贴培养基放置，于黑暗条件下预培养2-3天。

(g) 然后取出预培养的叶片或茎段，放入侵染液中进行侵染。侵染前一天晚上，摇菌农杆菌2瓶。将2 mL离心管装满菌液，4000 r/min离心5min，用悬菌液清洗两次。以1:10比例（10 mL悬菌液放1管1.5 mL菌体）放入悬菌液，加入As 25mg/L（40mL中加40 μL As）不断摇晃侵染液，使其与叶片及茎段切口处充分接触，10min后，取出，放于灭过菌的干燥滤纸上吸干菌液；

其中，农杆菌侵染液的制备方法如下：

1) 取-80℃冰箱保存的已被转化的农杆菌，划平板培养，LB固体平板中加入50mg/L spec和50mg/L Rif；

2) 挑取单菌斑到含50mg/L spec和50mg/L Rif的5mL LB液体培养基中，放入摇床中28℃、200 r/min培养过夜（12-16h）；

3) 保存菌种，750 μL菌液加入灭过菌的甘油250 μL，-80℃冰箱保存备用。

4) 摇菌，LB液体培养基10 mL加spec（所需浓度50mg/L）10 μL、Rif（所需浓度50mg/L）10 μL及菌液10 μL，28℃、200r/min过夜培养（12-16h）。

5) 当菌液浓度达到OD₆₀₀=1.5左右时，取2mL菌液加入到离心管中，4000 r/min离心5min；

6) 倒掉上清液，吸1mL新的MS液体培养基，重悬农杆菌，4000 r/min离心5min。

7) 重复步骤（6）1次；

8) 用1mL的MS液体培养基重悬菌后，再加入到40mL的MS的液体培养基中（含40 μL25mg/L的As），即为侵染液。放置2h以上，再侵染。

200 mL悬菌液的配制如下：

20×大量元素 10 mL

200×有机元素 1ml

200×铁盐 1mL

200×微量元素 1mL

蔗糖5.6g

(h) 将叶片及茎段放回到预培养基上，28℃黑暗条件下共培养2-3天，至叶片切口周围有微菌斑形成；

(i) 洗菌，取出共培养的烟草叶片及茎段，用添加500 mg/L Cef的无菌水冲洗5次，第一次放置于摇床摇30 min，后面每次5 min，以洗去外植体表面的农杆菌；

(j) 取出后，用滤纸吸干，转移到烟草诱芽培养基上，过表达载体诱芽培养基为MS+ BA 1.0 mg/L +Bar 50mg/L + Cef 500 mg/L pH 5.8；RNAi干扰载体诱芽培养基为MS+BA 1.0 mg/L +Kan 50mg/L + Cef 500 mg/L pH 5.8过2周观察，如果发现不长菌，则降低Cef浓度。如果长菌，则继续保持Cef浓度。

(k) 每2周更换1次培养基，直至长出不定芽（一般情况为2周）。切下再生的小苗（1cm 左右），

过表达载体诱芽培养基为MS+ BA 1.0 mg/L +Bar 50mg/L + Cef 500 mg/L pH5.8；RNAi干扰载体诱芽培养基为MS+ BA 1.0 mg/L +Kan 50mg/L + Cef 500 mg/L pH 5.8过2周观察，如果发现不长菌，则降低Cef浓度。如果长菌，则继续保持Cef浓度。

(l) 至小苗长至2 cm长时（有小芽即可），转接入生根培养基MS+ NAA 0.2-0.1mg/L上，(24±1)℃、12h 光照、1500 lx 培养3周左右即可长出粗壮根系。

(m) 待根生长至2-3cm。苗高7-10cm左右时，移出三角瓶洗去根部培养基，移栽于花盆中，温室培养。

（3）得到稳定的转基因株系

采用Qiagen公司DNA提取试剂盒，提取转基因烟草幼苗的基因组DNA，设计Basta及NPTII抗性基因引物进行PCR扩增，筛选阳性植株,检测到25株阳性植株。

引物为：

Basta F：ACAAGCACGGTCAACTTCC；

Basta R：ACTCGGCCGTCCAGTCGTA；

NPTII F：tctggacgaagagcatcagg；

NPTII R：atgaatccagaaaagcggcc。

提取野生型植株和25株转NtTIFY基因T0代植株的总RNA, 进行Real time-PCR分析，内参基因为26s，分析不同株系的表达情况。选取表达量最高及最低植株（图7和8）。单株收取种子分别播种，用Basta及Kan抗生素筛选Tl代植株的分离情况，如此重复直至T3代获得遗传稳定的转基因株系。

NtTIFY qRT引物

NtTIFY_qRT_F：5’-ATGACGATATTCTACGGCGG-3’；

NtTIFY_qRT_R：5’-TAAGTGAAGCTCGTCTCGCA-3’。

26s内参基因引物

26s_F：5’-GAAGAAGGTCCCAAGGGTTC-3’；

26s_R：5’-TCTCCCTTTAACACCAACGG-3’。

实施例4：转基因烟株抗旱性测定

将野生型烟草K326植株和1个转基因系OE-1转基因及RNAi-1敲除转基因烟草种子均匀播于含营养土的小盆中，置于光照培养室中培养。待幼苗长至5-6片叶时(30天)，停止浇水1周，观察植株生长情况，并记录相关数据。烟草植株经干旱处理1周后，NtTIFY RNAi干扰烟草生长状况明显优于野生型烟草植株，而NtTIFY转基因过表达植株叶片萎焉(图9)。表明NtTIFY RNAi干扰的转基因烟草对干旱胁迫表现出较好的抗性。

由此可见，NtTIFY基因在烟草抗旱方面将有着广阔的应用前景。

序列表

<110> 云南省烟草农业科学研究院

<120> 一种烟草干旱响应基因NtTIFY及其克隆方法与应用

<130> 2017

<160> 2

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 618

<212> DNA

<213> Nicotiana spp.

<400> 1

atggcatcat cggagatggt ggattccggt agattcgccg ccgccgtcgg tcagaaatca 60

catttctctc agacatgtaa tttgttgagc caatacttga aagagaagaa aggttccttt 120

ggagatctca gccttggtat tcaccgcgct ggcactacta ctatggattt gttgccaatg 180

attgagaaat ctggtgagtc aaaccctcag aaatcaatgt atctgtttcc tcaaactgaa 240

gcaaaatctg aaccggagaa agcgcagatg acgatattct acggcggtca agttattgtg 300

tttaatgatt ttccggcaga taaagctaag gaaatcatgc ttatggctag ttgtaccaaa 360

ggaaacaaca acagtactac tcagattcaa aaaacagctg aatctgcttc agatttggtg 420

cctcagccta ttatttctgg agatttacca attgcgagac gagcttcact tactcggttt 480

ttggagaaaa gaaaagatag gctgactgca aaagcacctt accaattaag caacccaaat 540

aaacaggtag cagtttctga aaacaaggcg tggttggaat tgggtgctca atttccagtg 600

aaaactgagc aattctag 618

<210> 2

<211> 205

<212> PRT

<213> Nicotiana spp.

<400> 2

Met Ala Ser Ser Glu Met Val Asp Ser Gly Arg Phe Ala Ala Ala Val

1 5 10 15

Gly Gln Lys Ser His Phe Ser Gln Thr Cys Asn Leu Leu Ser Gln Tyr

20 25 30

Leu Lys Glu Lys Lys Gly Ser Phe Gly Asp Leu Ser Leu Gly Ile His

35 40 45

Arg Ala Gly Thr Thr Thr Met Asp Leu Leu Pro Met Ile Glu Lys Ser

50 55 60

Gly Glu Ser Asn Pro Gln Lys Ser Met Tyr Leu Phe Pro Gln Thr Glu

65 70 75 80

Ala Lys Ser Glu Pro Glu Lys Ala Gln Met Thr Ile Phe Tyr Gly Gly

85 90 95

Gln Val Ile Val Phe Asn Asp Phe Pro Ala Asp Lys Ala Lys Glu Ile

100 105 110

Met Leu Met Ala Ser Cys Thr Lys Gly Asn Asn Asn Ser Thr Thr Gln

115 120 125

Ile Gln Lys Thr Ala Glu Ser Ala Ser Asp Leu Val Pro Gln Pro Ile

130 135 140

Ile Ser Gly Asp Leu Pro Ile Ala Arg Arg Ala Ser Leu Thr Arg Phe

145 150 155 160

Leu Glu Lys Arg Lys Asp Arg Leu Thr Ala Lys Ala Pro Tyr Gln Leu

165 170 175

Ser Asn Pro Asn Lys Gln Val Ala Val Ser Glu Asn Lys Ala Trp Leu

180 185 190

Glu Leu Gly Ala Gln Phe Pro Val Lys Thr Glu Gln Phe

195 200 205

Claims

1.一种烟草干旱响应基因NtTIFY的应用，其特征在于在烟草植株体内抑制所述烟草干旱响应基因NtTIFY的表达可增强烟草的抗旱性，所述抗旱基因NtTIFY的核苷酸序列如SEQID:No.1所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于抑制所述烟草干旱响应基因NtTIFY表达的方法为由RNA介导的基因干扰方法。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于抑制所述烟草干旱响应基因NtTIFY表达过程中使用含有所述烟草干旱响应基因NtTIFY的重组载体。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于抑制所述烟草干旱响应基因NtTIFY表达过程中使用含有所述烟草干旱响应基因NtTIFY的表达盒。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于抑制所述烟草干旱响应基因NtTIFY表达过程中使用含有所述烟草干旱响应基因NtTIFY的转基因细胞系。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于抑制所述烟草干旱响应基因NtTIFY表达过程中使用含有所述烟草干旱响应基因NtTIFY的重组菌。