CN107475234A - 一种高产纳豆激酶的液态培养基 - Google Patents

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严永敏
曾建
彭琬昕
杜凤移
崔恒林
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    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
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Abstract

本发明公开了一种高产纳豆激酶的液态培养基，属于生物技术领域。发酵培养基包括以下组分：红芸豆粉4.0％，葡萄糖4％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.05‑0.2％，磷酸二氢钾0.05‑0.2％，PH值7.0‑7.4。与现有技术相比，该培养基组分简单，来源丰富，成本低廉，发酵纳豆激酶单位酶活力高，制作工艺简单，发酵液纳豆激酶活性达到33160u/ml。

Description

一种高产纳豆激酶的液态培养基
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种高产纳豆激酶的液态培养基。
背景技术
血栓性疾病是中老年人群的高发病，已成为致死和致残的主要原因之一。截止到2016年，我国60岁以上老年人口为2.2亿人，占总人口的16.1％，中国已进入老龄化社会。此外，随着生活水平的提高，更多高脂高糖高胆固醇的食物被纳入餐桌，不良的饮食搭配更加剧了血栓性疾病的发生。目前，溶解血栓是治疗这一类疾病的重要手段，当今用于临床治疗的药物包括链激酶、尿激酶、组织型纤溶酶原激活剂、单链尿激酶型血纤溶酶原活剂、化学修饰的血纤溶酶一链激酶激活剂复合物等，但是这些药物都存在明显不足：价格昂贵、药物半衰期短、全身性出血副作用等，因此，开发新型溶血栓药物已成为当前重要研究课题之一。
纳豆激酶(Nattokinase，NK)是枯草芽孢杆菌发酵过程中形成的一种丝氨酸蛋白酶，具有溶解血栓、降低血粘度，改善血液循环，软化和增加血管弹性等作用。纳豆激酶可以刺激血管内皮细胞产生组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)，t-PA将纤溶酶原激活为纤溶酶，溶解纤维蛋白从而直接溶解血栓；纳豆激酶同时将人体内的尿激酶原激活为尿激酶，尿激酶与t-PA一同激活纤溶酶原，达到间接溶解血栓的目的。并且纳豆激酶只溶解血栓的主体物质纤维蛋白，不水解血浆纤维蛋白原，因此没有引发出血的危险。
多年来发酵生产含有纳豆激酶食品的培养基的多为固体发酵，而固态发酵工艺具有易感染杂菌，散热难和回收难的缺陷，不能满足相关药品与保健品的生产要求；目前工业化生产纳豆激酶的主要方式为液态发酵，而液态发酵方面的研究也多集中于优良菌种的选育、发酵工艺的优化与产物的分离纯化，对液态培养基成分筛选的研究较少，因此筛选出来源丰富，组分简单，成本低廉，纳豆激酶单位酶活力高，制作工艺简单的液态培养基具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种枯草芽孢杆菌液态发酵培养基，该液态发酵培养基组分简单，来源丰富，成本低廉，发酵纳豆激酶单位酶活力高，制作工艺简单。
本发明的技术方案为：
一种高产纳豆激酶液态发酵培养基，含有以下组分：红芸豆粉4.0-10.0％，葡萄糖3.0-8.0％，氯化钠1.0-3.0.0％，磷酸氢二钾0.05-0.2％，磷酸二氢钾0.05-0.2％，PH值7.0-7.4，均为w/v。
优选的培养基组成为：红芸豆粉4.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。
用于验证上述培养基的枯草芽孢杆菌菌株Bacillus subtilis subsp.UJS-1，现保藏于中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.14434，保藏日期为2017年07月17日，建议的分类命名为：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。
本发明提供的液态发酵培养基组分简单，来源丰富，成本低廉，发酵纳豆激酶单位酶活力高，制作工艺简单。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明
本发明用于验证实施例培养基的枯草芽孢杆菌菌株Bacillus subtilissubsp.UJS-1，现保藏于中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.14434，保藏日期为2017年07月17日，建议的分类命名为：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。
实施例1
培养基组成为：红芸豆粉4.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。
用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilissubsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法(参考谢平会等，2010，纤维蛋白平板法测定保健食品中纳豆激酶活力)测得发酵液纳豆激酶酶活性为33160u/ml。
实施例2
培养基组成为：红芸豆粉5.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。
用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilissubsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为29170u/ml。
实施例3
培养基组成为：红芸豆粉6.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。
用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilissubsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为26720u/ml。
实施例4
培养基组成为：红芸豆粉4.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，PH值7.0，均为w/v。
用上述成分配比配成的培养基进行草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为22060u/ml
对比例
培养基组成为：黄豆粉4.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。
用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilissubsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为9830u/ml。

Claims (3)

1.一种高产纳豆激酶液态发酵培养基，其特征在于含有以下组分：红芸豆粉4.0-10.0％，葡萄糖3.0-8.0％，氯化钠1.0-3.0％，磷酸氢二钾0.05-0.2％，磷酸二氢钾0.05-0.2％，PH值7.0-7.4，均为w/v。
2.根据权利要求1所述的一种高产纳豆激酶液态发酵培养基，其特征在于优选的培养基组成为：红芸豆粉4.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，其中吐温-80为v/v，均为w/v。
3.利用权利要求1或2所述的一种高产纳豆激酶液态发酵培养基的纳豆激酶高产菌株，保藏编号为CGMCC No.14434，建议的分类命名为：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。
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