CN107475077A - 一种快速去除植物叶盘上附着液体的装置及方法 - Google Patents
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Abstract
本发明是一种快速去除植物叶盘上附着液体的装置和方法。该装置包括：滤孔支架（8）、滤孔隔离条（7）、六个滤孔（1‑6），六个滤孔均布于滤孔支架（8）上，横向两排的滤孔间设置有滤孔隔离条（7）。利用该装置通过一定的方法快速去除植物叶盘上附着液体，相比于传统的将无菌滤纸平铺于培养皿中，叶盘取出后直接置于最上层滤纸，去除附着液体的方法，本发明解决了上层滤纸被液体渗透后易污染下层滤纸，不但浪费滤纸还容易污染的问题；同时，利用各滤纸接力去除叶盘上附着的液体还节约了时间，适用于规模化叶盘法的植物遗传转化。
Description
技术领域
本发明涉及一种快速去除植物叶盘上附着液体的装置及方法。
背景技术
现代分子生物学和植物组织培养技术的发展，为植物基因的遗传转化奠定了基础。目前应用最普遍的植物基因遗传转化方法主要有农杆菌介导法和DNA 直接转入法。最常用的农杆菌介导法有3 种：整株感染法、叶盘法和原生质体法。其中叶盘法可以直接利用植物的子叶、芽等进行转化，是双子叶植物较为常用的简单有效的方法。[钟育海，申艮宝.植物基因的遗传转化方法 [J]. 安徽农学通报,2010，16(11):65-66]。
由农杆菌介导的叶盘法的植物转基因过程中，需要将叶盘放入农杆菌液让其浸入叶片伤口，然后去除附着在盘上的菌液，共培养2-4天；之后将完成共培养叶盘清洗干净，去除附着在叶盘上的液体，再将叶盘转移至选择培养基上选择培养，使转化细胞再生植株。在上述的共培养和选择培养之前均需要去除附着在叶盘上的液体，若去除不干净则在共培养和选择培养过程中极易发生农杆菌污染，使前续试验半途而废。
传统的方法是将无菌滤纸平铺于培养皿中，将叶盘取出置于最上层滤纸，去除附着液体。该方法存在的主要问题是上层滤纸的液体会渗入到下层滤纸，不仅去除附着液体消耗时间长，还浪费滤纸，不适用于规模化叶盘法的植物遗传转化；此外如果涉及到同时操作不同基因的遗传转化则可能会出现交叉污染。本发明开发了一种快速去除叶盘上附着液体的装置及方法，能有效解决遗传转化共培养和选择培养过程中的农杆菌污染和不同基因同时进行遗传转化的交叉污染。
发明内容
本发明的目的在于提供一种快速去除叶盘上附着液体的装置及方法，为根癌农杆菌介导的叶盘法的规模遗传转化提供技术支持。
本发明技术方案为：
一种快速去除叶盘上附着液体的装置包括：滤孔支架、滤孔隔离条、六个滤孔，六个滤孔均布于滤孔支架上，横向两排的滤孔间有滤孔隔离条。
所述的滤孔支架为长方形，长30cm，宽23cm，高12cm。
所述的滤孔隔离条宽3cm。
所述的滤孔1-6的直径为10cm。
基于此装置，快速去除叶盘上附着液体的方法按以下步骤进行：
步骤一：将直径12cm的圆形滤纸对折两次与本发明的快速去除叶盘上附着液体的装置一起进行高压灭菌，并在烘箱中烤干备用；
步骤二：在超净工作台中，将烘干的滤纸打开呈中空圆锥体分别放入六个滤孔上，编号滤纸1-6；
步骤三：用镊子将放入农杆菌液或清洗液中的完成侵染或完成共培养的叶盘取出，分别放置40个左右叶盘到滤纸1和4中；
步骤四：待滤纸1和4被叶盘上附着的液体浸润后，分别将叶盘转移至滤纸2和5中，丢弃滤纸1和4；
步骤五：待滤纸2和5被叶盘上附着的液体浸润后，分别将叶盘转移至滤纸3和6中，丢弃滤纸2和5；
步骤六：之后叶盘上几乎无液体附着，将滤纸3和6中的叶盘分别平铺到共培养基上进行共培养或选择培养基上进行选择培养，丢弃滤纸3和6；
步骤七：用酒精灯外焰对滤孔支架和滤孔进行高温消毒，冷却后重复步骤二至步骤六；
由于涉及到同时操作不同基因的遗传转化可能会出现交叉污染，本发明设计的快速去除叶盘上附着液体的装置上有滤孔1-6和滤孔隔离条，可以将滤孔1-3和滤孔2-6用隔离条区别开，分别用作两组进行试验，最后分别放入培养基中培养，不易混淆。
本发明解决了上层滤纸被液体渗透后易污染下层滤纸，不但浪费滤纸还容易污染的问题；同时，利用滤纸1-3和滤纸2-6接力去除叶盘上附着的液体可同时操作完成80个叶盘的附着液体的去除，适用于规模化叶盘法的植物遗传转化。
通过实际操作证实本发明可以解决易污染、浪费滤纸和耗费时间的问题，为根癌农杆菌介导的规模化叶盘法的植物遗传转化提供技术支持。实际应用表明，本装置完全达到设计要求。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这个附图获得其他的附图。
图 1 为本发明的快速去除叶盘上附着液体装置的结构示意图（俯视图）。
图 2 为本发明的快速去除叶盘上附着液体的使用状态图（滤孔4-6放入中空的圆锥体滤纸）。图中：1－滤孔1，2－滤孔2，3－滤孔3，4－滤孔4，5－滤孔5，6-滤孔6，7-滤孔隔离条，8-滤孔支架。
具体实施方式
下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。
如图 1 所示，本发明的快速去除叶盘上附着液体的装置由滤孔1-6、滤孔隔离条7和滤孔支架8构成，六个滤孔均布于滤孔支架上，横向两排1-3和4-6的滤孔间有滤孔隔离条7。
将经两次对折的圆形滤纸打开，呈中空圆锥体状，放入滤孔1-6中，如图2所示。所述的滤孔支架8为长方形，长30cm，宽23cm，高12cm；滤孔隔离条宽3cm，滤孔1-6的直径为10cm。
本装置由不锈钢制成（不限于不锈钢，可高压灭菌即可）。
快速去除叶盘上附着液体的方法如下：
步骤一：将直径12cm的圆形滤纸对折两次与本发明的快速去除叶盘上附着液体的装置一起进行高压灭菌，并在烘箱中烤干备用；步骤二：在超净工作台中，将烘干的滤纸打开，呈中空圆锥体状分别放入六个滤孔1-6上，编号滤纸1-6；
步骤三：用镊子将放入农杆菌液或清洗液中的完成侵染或完成共培养的叶盘取出，分别放置40个左右叶盘到滤纸1和4中；
步骤四：待滤纸1和4被叶盘上附着的液体浸润后，分别将叶盘转移至滤纸2和5中，丢弃滤纸1和4；
步骤五：待滤纸2和5被叶盘上附着的液体浸润后，分别将叶盘转移至滤纸3和6中，丢弃滤纸2和5；
步骤六：之后叶盘上几乎无液体附着，将滤纸3和6中的叶盘分别平铺到共培养基上进行共培养或选择培养基上进行选择培养，丢弃滤纸3和6；
步骤七：用酒精灯外焰对滤孔支架和滤孔进行高温消毒，冷却后重复步骤二至步骤六。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (5)
1.一种快速去除植物叶盘上附着液体的装置，其特征在于：该装置包括：滤孔支架（8）、滤孔隔离条（7）、六个滤孔（1-6），六个滤孔均布于滤孔支架（8）上，横向两排的滤孔间设置有滤孔隔离条（7）。
2.据权利要求1所述的快速去除植物叶盘上附着液体的装置，其特征在于：所述的滤孔支架(8)为长方形，长30cm，宽23cm，高12cm。
3.根据权利要求1所述的快速去除植物叶盘上附着液体的装置，其特征在于：所述的滤孔隔离条（7）宽3cm。
4.根据权利要求1所述的快速去除植物叶盘上附着液体的装置，其特征在于：所述的滤孔（1-6）的直径为10cm。
5.一种快速去除植物叶盘上附着液体的方法，其特征在于：用权利要求1所述的快速去除植物叶盘上附着液体的装置，按以下步骤进行：
步骤一：将直径12cm的圆形滤纸对折两次与快速去除叶盘上附着液体的装置一起进行高压灭菌，并在烘箱中烤干备用； 步骤二：在超净工作台中，将烘干的滤纸打开，呈中空圆锥体状分别放入六个滤孔1-6上，编号滤纸1-6；
步骤三：用镊子将放入农杆菌液或清洗液中的完成侵染或完成共培养的叶盘取出，分别放置40个左右叶盘到滤纸1和4中；
步骤四：待滤纸1和4被叶盘上附着的液体浸润后，分别将叶盘转移至滤纸2和5中，丢弃滤纸1和4；
步骤五：待滤纸2和5被叶盘上附着的液体浸润后，分别将叶盘转移至滤纸3和6中，丢弃滤纸2和5；
步骤六：之后叶盘上几乎无液体附着，将滤纸3和6中的叶盘分别平铺到共培养基上进行共培养或选择培养基上进行选择培养，丢弃滤纸3和6；
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